BAB II

PEMBAHASAN

2.1 Sejarah dan Pengertian Insulin

2.1.1 Sejarah Insulin

Sejak insulin ditemukan pada tahun 1921, telah menjadi salah satu yang paling
menyeluruh dipelajari molekul dalam sejarah ilmu pengetahuan.
Diabetes telah diakui sebagai kondisi medis yang berbeda untuk setidaknya 3.500
tahun, tapi penyebabnya adalah misteri sampai awal abad ini. Pada awal 1920-an, peneliti
diduga kuat bahwa diabetes disebabkan oleh kerusakan dalam sistem pencernaan yang
berhubungan dengan kelenjar pankreas, organ kecil yang duduk di atas hati.
Pada saat itu, satu-satunya cara untuk diabetes "kontrol" adalah melalui diet rendah
karbohidrat dan gula, dan tinggi lemak dan protein. Alih-alih mati tak lama setelah diagnosis,
diet ini memungkinkan penderita diabetes untuk hidup - tapi hanya selama sekitar satu tahun.
Persis apa yang salah, atau hilang, dalam metabolisme jalur gula penderita diabetes
tidak diketahui sampai sekelompok peneliti Kanada dimurnikan insulin pada tahun 1921 dan
membuktikan bahwa diabetes merupakan penyakit kekurangan insulin.
Seperti kebanyakan penemuan ilmiah utama, dasar bagi penemuan insulin, telah
diletakkan oleh beberapa orang lain sebelum peneliti Kanada terisolasi. Pada tahun 1889, dua
peneliti Eropa, Minkowski dan von Mering, menemukan bahwa ketika kelenjar pankreas
telah dihapus dari anjing, mereka mengembangkan semua gejala diabetes dan meninggal
segera setelah itu. Minkowski dan von Mering mengusulkan bahwa pankreas sangat penting
untuk metabolisme gula.
Kemudian peneliti mempersempit pencarian ke pulau Langerhans-kelompok sel
khusus dalam pankreas. Pada tahun 1910, Sharpey-Shafer dari Edinburgh menyarankan kimia
tunggal hilang dari pankreas pada orang diabetes. Ia mengusulkan memanggil kimia ini
"insulin," dan kemudian peneliti Kanada berhasil membawanya atas saran.
Sementara itu, ilmuwan Amerika EL Scott setengah berhasil mengekstraksi insulin
dengan alkohol. RC Paulesco, Rumania seorang, membuat ekstrak dari pankreas yang
menurunkan glukosa darah anjing. Beberapa Paulesco klaim adalah orang pertama yang
menemukan insulin.
Terobosan terbesar datang pada tahun 1921 ketika Frederick Banting dan Charles
Best melakukan serangkaian percobaan satu musim panas di laboratorium JJ R. Macleod di
Universitas Toronto. Seperti Minkowski dan von Mering, mereka menunjukkan bahwa
menghapus pankreas dari anjing membuat mereka diabetes.
 Kemudian mereka pergi langkah lebih lanjut dan susah payah mengambil cairan dari
Islets anjing sehat 'Langerhans, disuntikkan ke anjing diabetes dan dikembalikan ke normal -
selama mereka memiliki extract.With bantuan rekan ahli biokimia bernama JB Collip,
mereka kemudian mampu mengekstrak formula cukup murni insulin dari pankreas sapi dari
rumah pemotongan hewan.
Pada bulan Januari 1922, seorang remaja diabetes di rumah sakit Toronto bernama
Leonard Thompson menjadi orang pertama yang menerima suntikan insulin. Dia meningkat
secara dramatis, dan berita tentang insulin menyebar ke seluruh dunia seperti api. Untuk
pekerjaan mereka, Banting dan Macleod menerima Hadiah Nobel dalam Kedokteran pada
tahun berikutnya, pada tahun 1923. Banting berbagi bagiannya dari hadiah uang dengan Best,
dan Macleod berbagi dengan Collip.
The University of Toronto segera memberi perusahaan farmasi lisensi untuk
memproduksi insulin bebas royalti. Pada awal 1923, sekitar satu tahun setelah injeksi tes
pertama, insulin menjadi tersedia secara luas, dan menyelamatkan hidup orang banyak.
Insulin adalah salah satu protein pertama yang mengkristal dalam bentuk murni, pada
tahun 1926. Bentuk kristal memungkinkan peneliti untuk mempelajari struktur dengan teknik
yang disebut x-ray kristalografi dan perkiraan bentuk tiga dimensi. Mengetahui bentuk
molekul membantu memahami cara kerjanya dalam tubuh dan sejak itu para ilmuwan telah
mencoba untuk memilah-milah bagaimana insulin bertindak dan apa molekul lain mungkin
berinteraksi dengan.
Pada tahun 1955, insulin menjadi protein pertama yang sepenuhnya diurutkan.
Pekerjaan yang menghasilkan Hadiah Nobel 1959 untuk Frederick Sanger. Melalui kerja
Sanger kita sekarang tahu bahwa semua protein manusia memiliki urutan yang unik dari
salah satu atau semua dari 20 jenis asam amino. Asam-asam amino dirangkai menjadi rantai
yang disebut peptida, agak seperti huruf menggabungkan ke dalam kata-kata panjang.
Banyak protein memiliki lebih dari satu rantai, bergabung bersama dengan cara
tertentu. Insulin manusia memiliki dua peptida. The Sebuah rantai (untuk asam) memiliki 21
asam amino dan rantai B (untuk dasar) memiliki 30 asam amino. Dua rantai yang
dihubungkan oleh dua jembatan disulfida, obligasi terbentuk antara atom belerang dalam
asam amino yang sistin. Rantai A juga memiliki sebuah jembatan disulfida internal yang
ketiga. Jembatan disulfida memegang molekul bersama-sama. Tanpa mereka, protein
mungkin tidak akan aktif dalam tubuh.
Setelah urutan protein yang dikenal, adalah mungkin, dalam teori, untuk menciptakan
itu sintetis. Bahkan, insulin adalah protein pertama yang secara kimia disintesis di
laboratorium, pada tahun 1963. Namun para peneliti tidak dapat menghasilkan banyak.
Selama 60 tahun setelah kelompok insulin terisolasi Banting, penderita diabetes
mengandalkan hormon dimurnikan dari hewan, terutama sapi dan babi. Hewan insulin
bekerja dengan baik secara keseluruhan, namun tidak sama persis dengan hormon manusia
dan kadang-kadang menyebabkan reaksi yang merugikan, misalnya, ruam kulit. Pada tahun
1978 insulin menjadi protein manusia pertama yang diproduksi melalui bioteknologi. Sebuah
tim peneliti dari City of Hope National Medical Center dan perusahaan bioteknologi
Genentech masih muda berhasil mensintesis insulin manusia di laboratorium menggunakan
proses yang bisa menghasilkan jumlah besar.
Tim dimasukkan gen untuk insulin manusia ke dalam DNA bakteri, dan
menggunakan bakteri sebagai miniatur pabrik untuk membuat rantai A dan B protein secara
terpisah. Pada tahap kedua, proses kimia menggabungkannya. Hasilnya adalah insulin
manusia, tanpa masalah insulin hewan kadang-kadang menyebabkan. Humulin, sebagai
produk komersial disebut, merevolusi pengobatan diabetes ketika menjadi tersedia secara
luas pada awal tahun 1980. Hari ini, hampir semua orang diabetes menggunakan insulin
rekombinan manusia bukan hewan insulin.

Para peneliti diabetes awal tidak tahu betapa beruntungnya mereka. Ternyata urutan
asam amino insulin hampir persis sama pada spesies hewan yang berbeda, sehingga insulin
dari sapi dan babi juga bekerja pada manusia. Struktur dasar insulin - dua rantai peptida
dengan tiga jembatan disulfida - dikonservasi dalam semua hampir 100 spesies yang berbeda
diselidiki sejauh ini.
Melihat enzim secara lebih rinci, urutan babi (babi) insulin dan insulin manusia
hampir identik, tetapi tidak benar - itu berbeda dengan satu asam amino. Bovine (sapi) insulin
yang berbeda dengan tiga asam amino dari manusia. Inilah sebabnya mengapa orang mampu
menggunakan insulin dari sapi di tahun 1920, meskipun mereka tidak tahu pada saat itu.
Pada tahun 1996 Food and Drug Administration telah menyetujui insulin manusia
diubah disebut Humalog, yang khusus dikembangkan untuk menjadi aktif sangat cepat
setelah injeksi.
Apa yang berikutnya untuk insulin? Para ilmuwan tidak yakin, tapi satu hal yang
pasti: Beyond nilai terkenal untuk penderita diabetes, insulin juga telah berada di garis depan
ilmu pengetahuan selama lebih dari 60 tahun.

2.1.2 Pengertian Insulin

Insulin adalah hormon utama yang mengendalikan glukosa dari darah ke dalam
sebagian besar sel (terutama sel otot dan lemak, tetapi tidak pada sel sistem saraf pusat). Oleh
karena itu, kekurangan insulin atau kekurangpekaan reseptor-reseptor memainkan peran
sentral dalam segala bentuk diabetes mellitus.
Sebagian besar karbohidrat dalam makanan akan diubah dalam waktu beberapa jam
ke dalam bentuk gula monosakarida yang merupakan karbohidrat utama yang ditemukan
dalam darah dan digunakan oleh tubuh sebagai bahan bakar. Insulin dilepaskan ke dalam
darah oleh sel beta (β-sel) yang berada di pankreas, sebagai respons atas kenaikan tingkat
gula darah, biasanya setelah makan. Insulin digunakan oleh sekitar dua pertiga dari sel-sel
tubuh yang menyerap glukosa dari darah untuk digunakan sel-sel sebagai bahan bakar, untuk
konversi ke molekul lain yang diperlukan, atau untuk penyimpanan.
Insulin juga merupakan sinyal kontrol utama untuk konversi dari glukosa ke glycogen
untuk penyimpanan internal dalam hati dan sel otot.
 Tingkatan insulin yang lebih tinggi menaikkan anabolic (rangkaian jalur metabolisme
untuk membangun molekul dari unit yang lebih kecil), seperti proses pertumbuhan sel dan
duplikasi, sintesa protein, lemak dan penyimpanan. Insulin adalah sinyal utama dalam
mengkonversi banyak bidirectional proses metabolisme dari catabolic (rangkaian jalur
metabolisme untuk membongkar molekul-molekul ke dalam bentuk unit yang lebih kecil dan
melepaskan energi) ke anabolic, dan sebaliknya. Secara khusus, tingkatan insulin yang lebih
rendah berguna sebagai pemicu masuk keluarnya ketosis (fase metabolik pembakaran lemak).
Jika jumlah insulin yang tersedia tidak cukup, jika sel buruk untuk merespon efek dari
insulin (kekurangpekaan atau perlawanan terhadap insulin), atau jika insulin cacat/defective,
maka gula tidak akan diserap dengan baik oleh orang-orang sel-sel tubuh yang
memerlukannya dan tidak akan disimpan dengan baik di hati dan otot. Efek selanjutnya
adalah tingkat gula darah yang tetap tinggi , miskin sintesis protein, dan lainnya kekacauan
metabolisme lainnya, seperti acidosis yaitu meningkatnya keasaman (konsentrasi ion
hidrogen) dalam darah.

2.2 Fungsi Insulin

Insulin berperan dalam penggunaan glukosa oleh sel tubuh untuk pembentukan
energi. Apabila tidak ada insulin maka sel tidak dapat menggunakan glukosa sehingga proses
metabolisme menjadi terganggu.
Proses yang terjadi yaitu karbohidrat dimetabolisme oleh tubuh untuk menghasilkan
glukosa, glukosa tersebut selanjutnya diabsorbsi di saluran pencernaan menuju ke aliran
darah untuk dioksidasi di otot skelet sehingga menghasilkan energi.
Glukosa juga disimpan dalam hati dalam bentuk glikogen kemudian diubah dalam
jaringan adiposa menjadi lemak dan trigliserida. Insulin memfasilitasi proses tersebut. Insulin
akan meningkatkan pengikatan glukosa oleh jaringan, meningkatkan level glikogen dalam
hati, mengurangi pemecahan glikogen (glikogenolisis) di hati, meningkatkan sintesis asam
lemak, menurunkan pemecahan asam lemak menjadi badan keton, dan membantu
penggabungan asam amino menjadi protein.
Insulin termasuk hormon polipeptida yang awalnya diekstraksi dari pankreas babi
maupun sapi, tetapi kini telah dapat disintesis dengan teknologi rekombinan DNA
menggunakan E.coli. Susunan asam amino insulin manusia berbeda dengan susunan insulin
hewani. Insulin rekombinan dibuat sesuai dengan susunan insulin manusia sehingga disebut
sebagai human insulin.
Insulin diproduksi oleh sel beta di dalam pankreas dan digunakan untuk mengontrol
kadar glukosa dalam darah. Sekresi insulin terdiri dari 2 komponen. Komponen pertama
yaitu: sekresi insulin basal kira-kira 1 unit/jam dan terjadi diantara waktu makan, waktu
malam hari dan keadaan puasa. Komponen kedua yaitu: sekresi insulin prandial yang
menghasilkan kadar insulin 5-10 kali lebih besar dari kadar insulin basal dan diproduksi
secara pulsatif dalam waktu 0,5-1 jam sesudah makan dan mencapai puncak dalam 30-45
menit, kemudian menurun dengan cepat mengikuti penurunan kadar glukosa basal.
Kemampuan sekresi insulin prandial berkaitan erat dengan kemampuan ambilan glukosa oleh
jaringan perifer.
Fungsi insulin:
 Membantu pembakaran dan penyerapan glukosa oleh sel badan
 Mengimbangkan paras glukosa didalam darah dan mencegah kencing manis.
 Membantu sel menyimpan tenaga dalam bentuk glukosa didalam hati
 Membantu proses penyimpanan glukosa berlebihan dalam bentuk lemak didalam hati.
Insulin sampai saat ini dikelompokkan menjadi beberapa jenis antara lain:
1. Kerja cepat (rapid acting)
Contoh: Actrapid, Humulin R,Reguler Insulin (Crystal Zinc Insulin) Bentuknya
larutan jernih, efek puncak 2-4 jam setelah penyuntikan, durasi kerja sampai 6 jam.
Merupakan satu-satunya insulin yang dapat dipergunakan secara intra vena. Bisa dicampur
dengan insulin kerja menengah atau insulin kerja panjang.
2. Kerja menengah (intermediate acting)
Contoh: Insulatard, Monotard, Humulin N, NPH, Insulin Lente Dengan menambah
protamin (NPH / Neutral Protamin Hagedom) atau zinc (pada insulin lente), maka bentuknya
menjadi suspensi yang akan memperlambat absorpsi sehingga efek menjadi lebih panjang.
Bentuk NPH tidak imunogenik karena protamin bukanlah protein.
3. Kerja panjang (long acting)
Contoh: Insulin Glargine, Insulin Ultralente, PZI Insulin bentuk ini diperlukan untuk
tujuan mempertahankan insulin basal yang konstan. Semua jenis insulin yang beredar saat ini
sudah sangat murni, sebab apabila tidak murni akan memicu imunogenitas, resistensi,
lipoatrofi atau lipohipertrofi.
Cara pemberian insulin ada beberapa macam: a) intra vena: bekerja sangat cepat yakni
dalam 2-5 menit akan terjadi penurunan glukosa darah, b) intramuskuler: penyerapannya
lebih cepat 2 kali lipat daripada subkutan, c) subkutan: penyerapanya tergantung lokasi
penyuntikan, pemijatan, kedalaman, konsentrasi. Lokasi abdomen lebih cepat dari paha
maupun lengan. Jenis insulin human lebih cepat dari insulin animal, insulin analog lebih
cepat dari insulin human.
Insulin diberikan subkutan dengan tujuan mempertahankan kadar gula darah dalam batas
normal sepanjang hari yakni 80-120 mg% saat puasa dan 80-160 mg% setelah makan. Untuk
pasien usia diatas 60 tahun batas ini lebih tinggi yaitu puasa kurang dari 150 mg% dan kurang
dari 200 mg% setelah makan. Karena kadar gula darah memang naik turun sepanjang hari,
maka sesekali kadar ini mungkin lebih dari 180 mg% (10 mmol/liter), tetapi kadar lembah
(through) dalam sehari harus diusahakan tidak lebih rendah dari 70 mg% (4 mmol/liter).
Insulin sebaiknya disuntikkan di tempat yang berbeda, tetapi paling baik dibawah kulit perut.
Dosis dan frekuensi penyuntikan ditentukan berdasarkan kebutuhan setiap pasien
akan insulin. Untuk tujuan pengobatan, dosis insulin dinyatakan dalam unit (U). Setiap unit
 merupakan jumlah yang diperlukan untuk menurunkan kadar gula darah kelinci sebanyak 45
mg% dalam bioassay. Sediaan homogen human insulin mengandung 25-30 IU/mg.
(netdoctor.co.uk/bun)
2.3 Pembuatan Insulin Manusia Oleh Bakteri

1. Tahap pertama dalam membuat bakteria yang bisa menghasilkan insulin adalah dengan
mengisolasi plasmid pada bakteri tersebut yang akan direkayasa. Plasmid adalah materi
genetik berupa DNA yang terdapat pada bakteria namun tidak tergantung pada kromosom
karena tidak berada di dalam kromosom.
2. Kemudian plasmid tersebut dipotong dengan menggunakan enzim di tempat tertentu
sebagai calon tempat gen baru yang nantinya dapat membuat insulin.
3. Gen yang dapat mengatur sekresi (pembuatan) insulin diambil dari kromosom yang
berasal dari sel manusia.
4. Gen yang telah dipotong dari kromosom sel manusia itu kemudian ‘direkatkan’ di
plasmid tadi tepatnya di tempat bolong yang tersedia setelah dipotong tadi.
5. Plasmid yang sudah disisipi gen manusia itu kemudian dimasukkan kembali ke dalam
bakteria.
6. Bakteria yang telah mengandung gen manusia itu selanjutnya berkembang biak dan
menghasilkan insulin yang dibutuhkan. Dengan begitu diharapkan insulin dapat
diproduksi dalam jumlah yang tidak terbatas di pabrik-pabrik.
7. Insulin bervariasi dari satu organisme ke organisme lainnya, namun hal ini tidak
membedakan aktivitasnya. Pada mulanya sumber insulin untuk penggunaan klinis pada
manusia diperoleh dari pancreas sapi atau babi. Insulin yang diperoleh dari sumber –
sumber tersebut efektif bagi manusia karena indentik dengan insulin manusia. Insulin
pada manusia, babi, dan sapi mempunyai perbedaan dalam susunan asam aminonya, tapi
aktivitasnya tetap sama.

Perbedaan susunan asam amino pada insulin manusia, babi (pork), dan sapi (beef)

Spesies A8 A10 B28 B29 B30

Manusia Thr Ile Pro Lys Thr
Babi Thr Ile Pro Lys Ala
Sapi Ala Val Pro Lys Ala

Insulin manusia dan insulin babi hanya beda 1 asam amino yaitu pada B30, sedangkan
insulin manusia dan insulin sapi beda 3 asam amino yaitu pada A8, A10, dan B30 sehingga
pemakaian insulin babi kurang imunogenik dibandingkan insulin sapi. Tapi masalahnya, 1
babi yang diekstraksi insulinnya hanya cukup untuk 1 orang selama 3 hari padahal saat ini
ada ± 60 juta orang di dunia yang menderita diabetes tergantung insulin dan diduga
meningkat 5-6 % per tahunnya. Maka dari itu sekarang banyak dikembangkan teknologi
rekombinan untuk mendapatkan insulin.
 Salah satu sumber insulin yang sudah tidak asing lagi digunakan dalam dunia
kedokteran adalah insulin babi. Untuk menghasilkan 1 pound insulin didapatkan dari 60 ribu
ekor babi serta diperkirakan mampu mengobati pasien diabetes sebanyak 750-1.000 orang
selama setahun . Jika produksi babi pertahun sebanyak 85 juta maka insulin yang mampu
dihasilkan selama setahun adalah 1.400 pound. Jumlah tersebut dapat mengobati pasien
sebanyak 1, 050 juta sampai 1,4 juta pertahunnya. Jumlah yang cukup spektakuler. Saat ini
ada alternatif lain pengganti insulin seperti Humulin. Humulin merupakan produk insulin
manusia pertama yang dipasarkan perusahaan farmasi Amerika serikat, Eli Lily pada tahun
1982. Walaupun lebih sedikit mahal, ternyata cukup diminati oleh pasien untuk mengganti
hormon insulin babi. Namun, teknologi rekayasa genetika juga telah banyak berperan dalam
produksi insulin, dimana bakteri di rekayasa sedemikian rupa sehingga mamapu
memproduksi insulin. Dengan demikian insulin yang beredar pada dunia pengobatan
merupakan gabungan dari insulin babi dan insulin dari bakteri.