JURNAL MIPA 8 (3) 76-80 (di isi oleh Redaktur)

dapat diakses melaluihttp://ejournal.unsrat.ac.id/index.php/jmuo

Review: Penetapan Kadar Senyawa Tanin Menggunakan High

Performance Liquid Chromatography (HPLC).
Hanna Salwa Putri*, Indang Dewata*, Desy Kurniawati*,
a
Pascasarjana Pendidikan Kimia, FMIPA, UNP, Padang

KATA KUNCI ABSTRAK

Tanin Tannin adalah salah satu senyawa aktif metabolit sekunder yang
High performance liquid memiliki banyak manfaat diantaranya seperti sebagai astringen, anti diare,
chromatography antibakteri dan antioksidan. Ada dua jenis senyawa tannin, yaitu tannin
terkondensasi dan tannin terhidrolisis. Tanin dapat didefinisikan sebagai
senyawa polifenol dengan berat molekul yang sangat besar yaitu lebih dari
1000 g/mol serta dapat membentuk senyawa kompleks dengan protein.
Struktur senyawa tanin terdiri dari cincin benzene (C6) yang berikatan
dengan gugur]s hidroksil (-OH). Metode untuk penetapan kadar tanin dapat
menggunakan berbagai macam instrumen salah satunya adalah High
Performance Liquid Chromatography (HPLC).
KEYWORDS ABSTRACT
Tanins Tannin is one of the active compounds of secondary metabolites which has
High performance liquid many benefits such as an astringent, anti-diarrhea, antibacterial and
chromatography antioxidant. There are two types of tannin, condensed tannins and hydrolyzed
tannins. Tannins can be defined as polyphenolic compounds with a very large
molecular weight of more than 1000 g/mol and can form complex compounds
with proteins. The structure of the tannin compound consists of a benzene ring
bonded to a hydroxyl group. The method for determining the level of tannins
can use a variety of instruments, one of which is the High Performance Liquid
Chromatography (HPLC).

1. Pendahuluan berfungsi sebagai antioksidan biologis (Malangngi

Tannin adalah salah satu senyawa aktif
metabolit sekunder yang memiliki banyak manfaat
diantaranya seperti sebagai astringen, anti diare,
antibakteri dan antioksidan. Ada dua jenis senyawa
tannin, yaitu tannin terkondensasi dan tannin
terhidrolisis (Makatamba dkk, 2020). Dalam kulit
delima putih terdapat tannin yang umumnya relatif
polar sampai semipolar sehingga untuk
mengisolasinya diperlukan pelarut yang polar atau
semipolar (Cuong dkk, 2019). Tannin memiliki
peranan biologis yang kompleks mulai dari pengendap
protein hingga pengkhelat logam. Tannin juga dapat
dkk, 2012).
Tanin diketahui merupakan senyawa aktif
metabolit sekunder yang mempunyai beberapa khasiat
yaitu sebagai astringen, anti diare, anti bakteri dan
antioksidan. Tanin merupakan komponen zat organik
yang sangat kompleks, terdiri dari senyawa fenolik
yang sukar dipisahkan dan sukar mengkristal,
mengendapkan protein dari larutannya dan
bersenyawa (Desmiaty dkk, 2008).
Tanin dapat didefinisikan sebagai senyawa
polifenol dengan berat molekul yang sangat besar aitu

*Corresponding author: Jurusan Pascasarjana Pendidikan Kimia, FMIPA Universitas Negeri Padang, Padang.
Email address: hannaslw99@gmail.com
Published by FMIPA UNSRAT (2022)
77 JURNAL MIPA UNSRAT ONLINE 5 (2) 76-80
lebih dari 1000 g/mol serta dapat membentuk senyawa
kompleks dengan protein.
\
Gambar 1. Struktur Tanin
Dari gambar 1 terlihat bahwa struktur senyawa
tanin terdiri dari cincin benzene (C6) yang berikatan
dengan gugur hidroksil (-OH) (Noer dkk, 2018).
High Performance Liquid Chromatography
(HPLC) adalah metode pemisahan dengan resolusi
tinggi yang dapat mengidentifikasi serta menetapkan
secara kuantitatif bahan dalam jumlah yang sangat
kecil (Romsiah dkk, 2022).
2. Metode
Penelitian ini adalah jenis penelitian kualitatif
dengan metode penelitan kepustakaan. Penelitan ini
tidak terjun langsung ke lapangan karena data-data
yang diperoleh berasal dari sumber pustaka berupa
artikel dengan kata kunci yaitu analisis tanin, delima
dan HPLC. Data dikumpulkan dari berbagai sumber di
internet dan perpustakaan. Teknik analisis data yaitu
analisis konten, dimana isi/konten dari data-data yang
terkumpul dibaca, dicatat, dan dianalisis sehingga
diperoleh suatu konsep.
3. Hasil dan Pembahasan
HPLC adalah kependekan dari High Performance
Liquid Chromatography. Pada HPLC sistem
kromatografi yang digunakan adalah cair-padat, fase
bergerak (mobile phase) berupa cairan yaitu pelarut
dan fase diam (stationary phase) berupa padatan yaitu
absorban yang terdapat dalam kolom analitik
(Murningsih dan Chairul, 2000).
Prinsip kerja HPLC yaitu pemisahan suatu
senyawa yang dialirkan fase gerak cair melewati
kolom menuju detektor. Senyawa akan terpisah dalam
kolom akibat perbedaan kepolaran dan kekuatan
interaksi analit dalam fase gerak dan fase gerak (Putri,
2018). HPLC bekerja dengan menekan larutan sampel
ke dalam fase diam (kolom) dengan diberikan tekanan
tinggi. Pada kolom ini, berbagai komponen akan
terpisah dan membentuk peak-peak tersendiri yang
terpisah. Jarak antar peak ini disebut dengan resolusi.
Nilai resolusi merupakan komponen terpenting karena
menunjukkan interaksi dari fase diam dan fase gerak
(Fauzi, 2018).
Pada sistem HPLC data yang dihasilkan adalah
waktu retensi dan luas area dari komponen-komponen
sampel. Analisa kuantitatif pada HPLC dilakukan
denganc ara membandingkan luas puncak standar
senyawa murni dengan sampel, sedangkan analisa
kualitatif pada HPLC dilakukan dengan cara mencari
kesamaan komponen kapsaisin sampel dengan standar
(Kusuma dkk, 2016).
Instrumentasi HPLC hampir bisa memisahkan
seluruh jenis campuran komponen analit, karena
banyaknya fasa diam yang tersedia dan selektivitas
yang baik dapat ditingkatkan melalui fase gerak yang
digunakan. Instrumentasi HPLC pada umumnya
menggunakan dua jenis fase berdasarkan fase gerak
dan fase diam yaitu fase normal dan fase terbalik. Fase
normal dimana keadaan fase diam lebih polar daripada
fase gerak, kemampuan elusi meningkat dengan
meningkatnya polaritas pelarut. Sementara untuk fase
terbalik dimana keadaan fase diam kurang polar
dibandingkan fase gerak, kemampuan elusi menurun
dengan meningkatnya polaritas pelarut (Gandjar dan
Rohman, 2014).
1) Fase diam pada HPLC
HPLC pada umumnya menggunakan fase diam
berisikan silica yang dimodifikasi secara kimiawi,
silica yang tidak dimodifikasi atau polimer-polimer
stiren dan divinil benzene. Permukaan silica memiliki
sifat polar dan sedikit asam dikarenakan terdapat
residu gugus (Si-OH). Salah satu jenis silica yang
dimodifikasi adalah oktadesil silica (ODS atau C18)
yang merupakan fase diam yang paling banyak
digunakan karena mampu memisahkan senyawa-
senyawa dengan kepolaran rendah, sedang, maupun
tinggi (Gandjar dan Rohman, 2014).
2) Fase gerak pada HPLC
Fase gerak pada sistem HPLC merupakan suatu
perubah yang dapat mempengaruhi proses pemisahan.
Fase gerak atau eluen umumnya terdiri atas campuran
pelarut yang dapat bercampur dimana secara
keseluruhan berperan dalam daya elusi atau resolusi.
Daya elusi dan resolusi ini ditentukan oleh polaritas
keseluruhan pelarut, polaritas fase diam, dan sifat
komponen-komponen sampel. Bagian yang perlu
diperhatikan dalam pemilihan fase gerak yaitu fase
gerak harus mampu berinteraksi dengan fase diam
yang sesuai untuk memisahkan senyawa dari suatu
campuran secepat dan seefisien mungkin. Umumnya,
pemilihan fase gerak dalam pengujian harus
memenuhi kriteria viskositas, transparansi UV, titik
didih, kemurnian, sifat inert dan toksisitas (Sherri,
2008).
Perangkat Instrumen HPLC
Perangkat dasar instrument HPLC terdiri dari
beberapa rangkaian alat antara lain, microprossesor,
pompa yang bertekanan tinggi untuk memompakan
pelarut, injector, kolom analitik, detektor, recorder
atau data prosesor yang masing-masing memiliki
fungsi berbeda. Berikut perangkat instrumen HPLC
dikutip dari Murningsih dan Chairul (2000).
1. Microprossesor Control
 JURNAL MIPA UNSRAT ONLINE xx (x) xx
Merupakan mikro komputer, suatu bagian yang
sangat penting untuk mengontrol atau membuat
program mengatur kecepatan aliran pelarut (flow rate)
sebagaimana diinginkan, mengatur tekanan (pressure),
mengatur komposisi pelarut, mengatur suhu injector
dan jumlah sampel yang akan diinjeksikan bila
menggunakan “automatic injection”, mengatur suhu
oven termasuk suhu kolom, mengatur panjang
gelombang pada detektor dan memprogram waktu
analisa yang diperlukan.
2. Pompa
Alat yang dibutuhkan untuk memompa pelarut
dari reservoar ke kolom dengan tekanan paling sedikit
100 arm (1500 psi) dan paling tinggi 400 arm (6000
psi) sesuai dengan besar aliran (flow rate berkisar
antara 0,5-2 ml/min), tipe dari kolom, ukuran
adsorban dalam kolom dan panjang kolom yang
digunakan. Pompa akan bekerja memompakan pelarut
secara terus menerus dengan kecepatan aliran yang
tetap, sambil membawa sampel dari injector melewati
kolom analitik terus ke detektor akhirnya ke
pembuangan.
3. Injektor
Injektor adalah alat untuk memasukkan sampel
ke dalam kolom yang dapat dilakukan secara otomatis
ataupun manual. Bila alat HPLC dilengkapi dengan
“automatic sample injector” maka pemasukan sampel
dapat dilakukan secara otomatis yaitu dengan
memprogram pada “microprossesor control” jumlah
sampel (μL) dengan jumlah macam sampel (misalnya
ada 10 macam sampel yang berbeda) yang akan
dianalisa. Bisa juga dilakukan secara manual dengan
cara menggunakan jarum suntik khusus, diukur
volume tertentu biasanya antara 10-20 μL. Injektor
harus mampu bekerja pada tekanan 470 arm dengan
kesalahan kurang dari 0,2% dan dapat ditempatkan
dalam suatu oven agar temperatur injektor dapat
terkontrol. Untuk sistem ini biasanya temperatur yang
digunakan lebih kurang 150°C.
4. Kolom
Pemisahan sampel dari komponen-komponen
lainnya terjadi di dalam kolom, oleh karena itu kolom
memiliki peranan sangat penting pada HPLC.
Spesifikasi kolom yang biasa digunakan untuk
pemisahan analitik yaitu berdiameter 2-4 mm (Aulia,
2016).
Kolom berisikan fase diam, fase diam pada
HPLC merupakan suatu lapisan film cair yang terikat
pada basis partikel silica. Lapisan film ini terikat
bertujuan untuk mencegah terjadinya kemungkinan
kebocoran cairan pada fase diam di dalam kolom.
Terdapat kolom penjaga (guard column) pada HPLC
yang berfungsi untuk memperpanjang waktu
penggunaan kolom dengan cara mencegah ikatan kuat
yang terjadi secara irreversible antara pertikel,
kontaminan dari pelarut serta komponen pada sampel
dengan fase diam (Skoog dkk, 2007).
5. Detektor
78
Detektor memiliki fungsi untuk mendeteksi
atau mengidentifikasi adanya komponen cuplikan
yang ada pada eluat dan mengukur jumlahnya.
Detektor pada HPLC dibedakan menjadi 2 jenis yaitu
detektor universal (mampu mendeteksi zat secara
umum, tidak bersifat spesifik dan selektif) seperti
detektor bias dan detektor spektrometri massa, dan
golongan detektor spesifik yang hanya akan
mendeteksi analit secara spesifik dan selektif, seperti
UV-VIS, detektor fluoresensi dan elektrokimia
(Synder dkk, 2010).
6. Recorder dan Data Processing
Recorder adalah alat yang paling sederhana
untuk mencatat setiap sinyal yang muncul pada
detektor untuk diubah kedalam bentuk kurva atau
lebih dikenal dengan kromatogram. Tinggi rendahnya
kurva didasarkan pada pulsa listrik yang diterima
rekorder dari detektor dan tergantung pada sensitivitas
detektor yang digunakan. Kadang-kadang rekorder
digabungkan dengan suatu sistem komputer untuk
analisa data atau data prosesor dalam bentuk kompak
yang dikenal sebagai “data prossesor”.
7. Wadah Fase Gerak
Wadah fase gerak yang akan digunakan harus
bersih dan lembam (inert). Wadah ini umumnya dapat
menampung fase gerak antara 1 sampai 2 liter pelarut.
Sebelum dipakai, fase gerak harus dilakukan tahap
degassing (penghilangan gas), jika terdapat gas pada
fase gerak akan terkumpul dengan komponen lain
terutama di pompa dan detektor sehingga dapat
mengganggu proses analisis (Gandjar dan Rohman,
2007).
Uji Kadar Tanin
Panjang Gelombang dan Waktu Retensi
Panjang gelombang maksimum tannin menurut
Pratama dkk (2019) 649,9 nm, namun untuk berbagai
kondisi yang berbeda panjang gelombang dari tannin
dapat berbeda. Waktu retensi dinyatakan sebagai
lamanya waktu analisis sampel, dimana pada fase
terbalik zat yang lebih polar akan terelusi lebih dulu
dan memiliki waktu retensi yang lebih cepat
disbanding zat non polar (Putra, 2004).
Kondisi Sistem HPLC pada Berbagai Penetapan
Kadar Tanin
Berbagai komposisi fase gerak yang berbeda
digunakan dalam penelitian penetapan kadar tannin.
Pada penetapan kadar tannin didalam ekstrak kulit
buah delima (Wahid, 2020) fase diam yang digunakan
adalah kolom C-18 (250x4.6 mm) dan fase geraknya
adalah asam fosfat 0,55% (v/v). Komposisi ini
memberikan hasil yang optimum dimana waktu
retensi dari tannin adalah 16,518 menit dengan data
kromatogram sebagai berikut:
79 JURNAL MIPA UNSRAT ONLINE 5 (2) 76-80
etanol 70% 70°C yang memiliki jumlah serbuk hasil
evaporasi yang paling banyak, terlihat bahwa
kromatrogram aquades 100°C hanya memiliki satu
puncak pada waktu retensi 1,3 menit dan pada
kromatogram etanol 30% 70°C dan etanol 70% 70°C
memiliki beberapa puncak yang menandakan ekstrak
tersebut belum murni, terlihat waktu retensi pada 1,3
menit.

Gambar 2. Waktu retensi tanin

Hasil dari penetapan kadar tanin dalam ekstrak
kulit delima diperoleh sebesar 2,01%. Penetapan kadar
tanin dari hasil luas area yang diperoleh dari HPLC
disajikan pada gambar berikut:

Gambar 3. Hasil Penetapan Kadar Tanin dengan HPLC Gambar 5. Kromatogram

Diperoleh kadar hasil
taninuji HPLC tanin
dari masing-masing
(Wahid, 2020).
kromatogram yaitu 0,424%, 0,0122% dan 0,0123%
Pada penetapan kadar tanin dalam daun stevia dan menandakan kadar tanin paling tinggi yaitu
(Setiawan dan Asrilya, 2020) digunakan fase diam ekstrak akuades 100°C.
C18 dan fase geraknya yaitu sistem pelarut asetonitril
dan aquabider (80:20) (v/v). sampel dielusi pada
4. Kesimpulan
panjang gelombang 280 nm. Penentuan kadar tanin
Kondisi dan jenis sampel dalam penetapan
diukur dengan menggunakan asam tanat kurva standar
kadar tanin menggunakan HPLC dipengaruhi oleh
(%). Kurva standar asam tanat dapat dilihat pada beberapa aspek penting dan mempengaruhi hasil
gambar berikut: analisis.

Daftar Pustaka
Aulia, S. S., Sopyan, I., Muchtaridi. 2016. Penetapan
Kadar Simvastatin Menggunakan Kromatografi
Cair Kinerja Tinggi (KCKT): Review.
Farmaka.
Cuong, D. X., Hoan, N. X., Dong, D. H., Van Thanh,
N., Ha, H. T., Tuyen, D. T. T., Chinh, D. X.
2019. Tannins: Extraction from Plants. Tannins-
Structural Properties, Biological Properties and
Gambar 4. Kurva Standar Asam Tanat untuk HPLC Current Knowledge.

Hasil pengukuran kadar tanin pada ekstrak

stebia dengan HPLC dapat dilihat pada kromatogram
HPLC ekstrak stevia pada gambar 4 menunjukkan
kromatogram aquades 100°C, etanol 30% 70°C dan
 JURNAL MIPA UNSRAT ONLINE xx (x) xx 80
Desmiaty, Y., Ratih, H., Dewi, M. A., Agustin, R. HPLC sebagai Gula Pereduksi dalam
2008. Penentuan Jumlah Tanin Total pada Daun Pembuatan Sukrosa.
Jati Belanda (Guazuma ulmifolia Lamk) dan Sherri, T. 2008. Determination of Melamine and
Daun Sambang Darah (Excoecaria bicolor Cyanuric Acid Residues in Infant Formula
Hassk) Secara Kolorimetri dengan Pereaksi Using LC-MS/MS. Laboratory Information
Biru Prusia. Ortocarpus, 106-109. Bulletin (LIB) no. 4421 vol.24.
Fauzi, L. C. 2018. Penetapan Kadar Zat Aktif Dalam Skoog, D. A., Holler, F. J., dan Crouch, S. P. 2007.
Sediaan Tablet Aspirin Menggunakan Principle of Instrumental Analysis 6thed.
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT). Thomson Brooks/Cole, Canada.
ACADEMIA: Accelerating the World’s Snyder, L., Kirkland, J., dan Dolan, J. 2010.
Research. Introduction to Modern Liquid
Gandjar, I. G., dan Rohman, A. 2007. Kimia Farmasi Chromatography 3rd Edition. John Wiley and
Analisis. Pustaka Pelajar, Yogyakarta. Sons. Inc, New Jersey.
Gandjar, I. G., dan Rohman, A. 2014. Kimia Farmasi Wahid, R. A. H. 2020. Analisis Kualitatif dan
Analisis. Pustaka Pelajar, Yogyakarta. Kuantitatif Tanin Ekstrak Kulit Buah Delima
Kusuma, A. S., Rosalina, G. 2016. Analisis Kadar Putih (Punica Granatum L.) Menggunakan
Kapsaisin Dari Ekstrak “Bon Cabe” Dengan Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
Menggunakan Kromatografi Cair Kinerja (KCKT). Indonesian Journal of Pharmacy and
Tinggi (KCKT). Farmaka. Natural Product.
Makatamba, V., Fatimawali., Rundengan, G. 2020.
Analisis Senyawa Tannin dan Aktifitas
Antibakteri Fraksi Buah Sirih (Piper betle L)
Terhadap Streptococcus mutans. Jurnal MIPA
9(2) 75-80.
Malangngi, l. P., Sangi, M. S., Paendong, J. E. 2012.
Penentuan Kadar Tanin dan Uji Aktioksidan
Ekstrak Biji Buah Alpukat (Persea americana
Mill). Jurnal MIPA UNSRAT ONLINE 1 (1) 5-
10.
Murningsih, T. dan Chairul. 2000. Mengenal HPLC:
Peranannya Dalam Analisa dan Proses Isolasi
Bahan Kimia. Berita Biologi Volume 5, Nomor
2.
Noer, S., Pratiwi, R. D., Gresinta, E. 2018. Penetapam
Kadar Senyawa Fitokimia (Tanin, Saponin dan
Flavonoid Sebagai Kuersetin) Pada Ekstrak
Daun Inggu (Ruta angustifolia L.). Eksakta:
Jurnal Ilmu-ilmu MIPA. 2503-2364.
Pratama, M., Razak, R., Rosalina, V. S. 2019. Analisis
Kadar Tanin Total Ekstrak Etanol Bungan
Cengkeh (Syzygium aromaticum L.)
Menggunakan Metode Spektrofotomentri UV-
VIS. Jurnal Fitofarmaka Indonesia. 368-373.
Putra, E.D. 2004. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
dalam Bidang Farmasi.
https://dupakdosen.usu.ac.id/bitstream/handle/1
23456789/3616/farmasi-effendy2.pdf?
sequence=1 (diakses pada 05 Desember 2022).
Putri, A. F. 2018. Penentuan Kadar Asam Benzoat
Pada Saus Cabai Menggunakan Kromatografi
Cair Kinerja Tinggi.
Romsiah, Ayu, J. G., Fatoni, A. 2022. Penetapan Kadar
Senyawa S-ALLYL CYSTEINE (SAC) Pada
Ekstrak Solo Black Garlic Secara Kromatografi
Cair Kinerja Tinggi. Journal of Pharmaceutical
and Sciences (JPS). 2656-3088.
Setiawan, C., Asrilya, N. J. 2020. Preparasi dan
Karakterisasi Senyawa Tanin dari Daun Stevia
(Stevia Rebaudiana) Menggunakan Instrumen