PENGHAMBATAN EKSTRAK ETANOL, FRAKSI N-HEKSAN DAN ETIL ASETAT

DAUN TIN (Ficus carica L) TERHADAP α-AMYLASE SECARA IN-VITRO

In-Vitro Study of α-Amylase Inhibition Of Tin Leaves (Ficus Carica L) Ethanol Ekstract, N-
Hexane And Ethyl Acetate Fraction

1)
Siska Megawati,2)Oktariani Pramiastuti,3 ) Agung Nur Cahyanta
1)
Mahasiswa Program Studi Farmasi Sarjana (S-1)
2,3)
Dosen Program Studi Farmasi Sarjana (S-1)
Fakultas Ilmu Kesehatan
Universitas Bhamada Slawi
Email: siska.megawati16@gmail.com

ABSTRAK
Diabetes mellitus (DM) merupakan penyakit gangguan metabolisme kronis,ditandai
dengan tingginya kadar glukosa dalam darah (hiperglikemia) yang disebabkan karena penurunan
sekresi insulin. Pengobatan yang penting untuk Diabetes Mellitus (DM) tipe 2 adalah
mengendalikan kadar glukosa darah. Enzim alfa amylase di dalam tubuh berperan memecah
karbohidrat menjadi amylum. Pengendalian enzim amylase tersebut sangat diperlukan pada kasus
diabetes. Salah satu tanaman yang memiliki efek hiperglikemia adalah daun tin (Ficus carica L).
Tujuan dari penelitian ini yaitu untuk mengetahui aktivitas penghambatan enzim alfa amylase oleh
ekstrak etanol dan fraksi n-heksan, dan fraksi etil asetat dari daun tin (Ficus carica L.) secara in
vitro menggunakan metode spektrofotometri UV-Vis dengan inhibitor standar akarbose sebagai
pembanding. Akarbose dapat menunda hidrolisis karbohidrat dan disakarisa, absorbsi gula dan
menghambat metabolisme sukrosa menjadi glukosa dan fruktosa. Dari hasil pengujian yang telah
dilakukan, diketahui bahwa daun tin (Ficus carica L) mengandung senyawa metabolit sekunder
meliputi flavonoid, alkaloid, tannin dan steroid atau triterpenoid. Sementara itu hasil pengujian
penghambatan enzim alfa amylase oleh ekstrak etanol dan fraksi diperoleh nilai IC50 berturut-turut
sebesar 138,96 µg/mL, 117,78 µg/mL,dan 147,50 µg/mL. Berdasarkan hasil tersebut, dapat
disimpulkan bahwa ekstrak etanol, fraksi n-heksan dan fraksi etil asetat daun tin (Ficus carica L)
memiliki aktivitas penghambatan enzim alfa amylase dengan kategori sedang.
Kata kunci: Diabetes mellitus, Enzim α-amylase, Daun Tin,IC50, In-vitro

ABSTRACT
Diabetes mellitus (DM) is a chronic metabolic disorder, characterized by high levels of
glucose in the blood (hyperglycemia) caused by decreased secretion insulin.An important treatment
for type 2 diabetes is controlling blood glucose levels. Alpha amylase enzyme in the body plays a
role in breaking down carbohydrates into strach. Control of the amylase enzyme is needed in
diabetes cases. One of the plants that have a hyperglycemic effect is Tin (Ficus carica L). This
study aimed to determine the inhibitory activity of the alpha amylase enzyme by ethanol extract and
n-hexane, ethyl acetate fractions from Tin (Ficus carica L) leaves in vitro using UV-Vis
spectrophotometri method with a standard inhibitor of acarbose as a comparison. Acarbose can
delay the hydrolysis of carbohydrates and disaccharides, absorption of sugar and inhibit the
metabolism of sucrose into glucose and fructose. The result showed that Tin leaves contained
secondary metabolites including flavonoids, alkaloids, tannins, and steroids or triterpenoids.
Meanwhile, the results of the alpha amylase inhibition test by ethanol extract and fractions
obtained IC50 values of, 138,96 µg/mL, 117,78 µg/mL,dan 147,50 µg/mL. Based on these results, it
can be concluded that the ethanol extract and n-hexane, ethyl acetate fractions from Tin leaves
have moderate activity in inhibiting the alpha amylase enzyme.
Keywords: Diabetes mellitus, Enzym α-amylase, Tin leaves, IC50, In-vitro

PENDAHULUAN Selain itu, juga terdapat kandungan flavonoid,

Sebagian besar masyarakat di Indonesia
menggunakan obat tradisional dari tanaman
dalam mengobati berbagai macam penyakit,
salah satunya adalah diabetes mellitus.
Penggunaan tanaman obat secara tradisional
pada umumnya dinilai memiliki efek samping
yang lebih rendah tingkat bahayanya
dibandingkan dengan obat – obatan sintetik
atau kimiawi serta relatif lebih ekonomis
(Pujiyanto & Raharja, 2019).
Diabetes mellitus (DM) merupakan
gangguan metabolisme kronis yang ditandai
oleh hiperglikemia dengan abnormalitas
metabolisme karbohidrat lemak dan protein
sebagai akibat dari resistensi terhadap aksi
insulin, sekresi insulin tidak mencukupi atau
keduanya(Berryman,2000). Upaya menanggula
ngi diabetes mellitus (DM) salah satunya
dengan cara menghambat kerja enzim alfa
amylase untuk menghidrolisis karbohidrat
sehingga dapat mengurangi absorbsi glukosa
(Alagesan,K et al., 2012). Penghambatan
terhadap enzim alfa amylase diketahui akan
menunda dan memperpanjang waktu
pencernaan karbohidrat, sehingga terjadi
penurunan laju absorbsi glukosa serta
mengahambat peningkatan kadar plasma
glukosa postpandrial (De Sales et al., 2012).
Tanaman tin (Ficus carica L) termasuk
salah satu contoh tanaman yang tumbuh di
daerah tropis dan sub tropis. Tanaman ini sudah
banyak dibudidayakan sebab secara empiris
dipercaya banyak digunakan mengobati
berbagai penyakit. Selain bagian buah bagian
lain yang dimanfaatkan untuk pengobatan
adalah bagian daunnya yang secara empiris
dipercaya dapat menurunkan kadar gula dalam
darah (Agustina, 2017).
Menurut Joseph dan Raj (2011)
kandungan gizi dari tin antara lain serat,
vitamin A, C, kalsium, magnesium dan
potassium yang sangat diperlukan oleh tubuh.
fenolik, terpenoid, saponin dan beberapa
senyawa biokatif seperti arabinose, ß-amirin,
glikosida, ß-sitosterol. Senyawa golongan
flavonoid memiliki aktivitas sebagai inhibitor
enzim alfa amylase melalui ikatan hidrogen
membentuk sistem π-terkonjugasi dengan situs
aktif enzim.
Penelitian mengenai daun tin sebagai
antidiabetes sebelumnya pernah dilakukan oleh
beberapa peneliti. Menurut penelitian yang
dilakukan oleh Wijaya (2017), menunjukkan
bahwa ekstrak etanol dari daun Tin dengan
dosis 200 mg/KgBB dapat memengaruhi
penurunan kadar gula dan kolesterol dalam
darah mencit putih yang diinduksi Aloksan.
Penelitian lainnya juga menunjukkan ada
pengaruh pemberian teh daun tin terhadap
kadar gula darah pada penderita diabetes
mellitus (Zakaria, Amin,&Zakariya Yahya,
2019).
Penelitian yang telah dilakukan oleh
peneliti sebelumnya adalah menggunakan
metode secara in-vivo. Oleh karena itu, perlu
dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai
mekanisme spesisik ekstrak daun tin pada
penurunan kadar gula darah terutama terhadap
penghambatan enzim α-amylase secara in-vitro
yang ditunjukkan melalui nilai IC50.
Berdasarkan uraian diatas maka peneliti
tertarik untuk melakukan penelitian tentang Uji
Aktivitas Enzim Alfa Amylase Ekstrak Etanol,
Fraksi N-Heksan dan Etil Asetat Daun Tin
(Ficus carica L) secara In-Vitro Menggunakan
Metode Spektrofotometri UV-Vis.
METODE PENELITIAN
Waktu dan Lokasi penelitian
Penelitian ini dilakukan di
Laboratorium Bahan Alam dan Laboratorium
Instrumen Fakultas Farmasi Universitas
Bhamada Slawi selama 6 bulan.
Alat dan Bahan
Alat yang digunakan pada penelitian ini
adalah Spektrofotometer (Shimadzu UV 1280),
bejana maserasi, rotary evaporator (Biobase),
neraca analitik, oven, grinder simplisia,
penangas air, moisture balance, mikropipet, alat
– alat gelas merk pyrex, inkubator (Memmert
IN55), stopwatch, krush, desikator, tanur, pipa
kapiler mikro, lampu UV 254 dan 366 nm,
chamber dan kuvet disposable.
Bahan yang digunakan pada penelitian ini
adalah daun tin (Ficus carica L), etanol 70%
(teknis), larutan amylum manihot 5% (Merck),
larutan iodine 0,5 %, larutan dapar fosfat pH
7,0, larutan DMSO (dimetilsulfoksida), enzim
alfa amylase (Sigma-Aldrich), akarbose
(Sigma), H2SO4 pekat, HCl 2N, FeCl3 1%,
aquadest, pereaksi Lieberman Bouchard,
pereaksi Mayer, pereaksi Dragendorf,
lempeng KLT Silika Gel GF254, metanol, etil
asetat, n-hexane, kloroform, n-butanol, asam
acetat, baku pembanding quercetin.
Determinasi Tanaman
Determinasi tanaman dilakukan di
Laboratorium Bahan Alam Universitas
Bhamada Slawi untuk memastikan bahwa
tumbuhan yang digunakan untuk penelitian
adalah tanaman tin (Ficus carica L).
Pembuatan Simplisia Daun Tin
Pembuatan simplisia diawali dengan
pengumpulan daun tin yang diperoleh dari
petani di daerah Ponorogo Jawa Timur. Bagian
yang digunakan dalam penelitian ini adalah
daun kremah yang telah diperoleh dibersihkan
dari kotoran yang melekat dengan cara dicuci
dengan air mengalir. Setelah itu dikeringkan
dengan cara diangin-anginkan pada tempat
yang tidak terkena sinar matahari atau
dikeringkan dengan oven pada suhu 40ºC.
Setelah itu disortasi kembali dan dibuat serbuk
dengan menggunakan ayakan nomor 40 Mesh.
Pembuatan Ekstrak
Ditimbang daun tin yang sudah menjadi
serbuk sebanyak 1kg, kemudian diekstraksi
dengan menggunakan metode maserasi, dengan
cara merendam simplisia kering daun kremah
dalam 6 L pelarut etanol 70% selama 5 hari
dengan sesekali dilakukan pengadukan.
Selanjutnya sari yang diperoleh diuapkan
dengan menggunakan rotary evaporator
dibawah titik didih hingga diperoleh ekstrak
yang kental.
Pembuatan Fraksinasi Cair – Cair
Ekstrak kental etanol 70 % daun tin
difraksinasi dalam corong pisah mulai dari
pelarut n-heksan dan etil asetat. Ekstrak kental
etanol daun tin ditimbang sebanyak 20 gram
diencerkan terlebih dahulu menggunakan etanol
70% sebanyak 75 mL aduk sampai homogen
dalam beakerglas. Kemudian dimasukkan
kedalam corong pisah, tambahkan pelarut n-
heksan sebanyak 75 mL kocok kemudian
didiamkan sampai terlihat batas pisah antara
kedua pelarut, setelah terpisah fraksi n-heksan
dikeluarkan dari corong pisah. Sisa fraksi etanol
ditambah lagi dengan n-heksan diulang dua kali
dengan cara yang sama, lapisan n-heksan yang
terbentuk selama 3 kali fraksinasi digabungkan
dan disebut fraksi n-heksan. Selanjutnya bagian
etanol dari sisa proses fraksi n-heksan
kemudian difraksinasi lebih lanjut dengan etil
asetat dan diulang sampai 3 kali fraksinasi
dengan cara yang sama, kemudian didapatkan
fraksi etil asetat masing - masing hasil
fraksinasi dikentalkan dengan rotary
evaporator (Rani, 2020).
Uji Mutu Ekstrak
Uji mutu ekstrak terdiri dari beberapa
parameter meliputi :
a. Parameter Spesifik
Parameter spesifik dengan melihat
secara organoleptis dilakukan untuk uji
pendahuluan awal yang sederhana dan
dilakukan secara objektif melalui pengamatan
dengan panca indera terhadap bentuk, warna,
bau dan rasa dari ekstrak (Saifudin,Viesa &
Hilwan.,2011).
b. Parameter Non Spesifik
1) Pengujian Kadar Air
Pengujian kadar air dilakukan dengan
menggunakan alat digital Moisture Balance
dengan sampel yang digunakan sebanyak 1
gram sampel (Saifudin et al, 2011).
2) Pengujian Kadar Abu Total
Pengujian kadar abu total dilakukan
dengan cara menimbang sebanyak 2 gram
ekstrak daun tin dimasukkan dalam krus
porselin yang telah dipijarkan dan ditara,
kemudian diratakan. Krus dipijarkan perlahan
– lahan dalam tanur dengan menaikkan suhu
hingga ± 600°C selama ± 6 jam atau sampai
arang habis. Selanjutnya didinginkan dalam
desikator dan ditimbang hingga diperoleh bobot
konstan(Depkes RI,2000).
Skrining Fitokimia
Skrining fitokimia bertujuan untuk
mengetahui kandungan senyawa yang terdapat
pada ekstrak etanol daun tin. Skrining fitokimia
yang dilakukan meliputi pemeriksaan senyawa
golongan flavonoid, alkaloida, fenol, steroid
triterpenoid, saponin dan tannin.
Pengujian Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak
Daun Tin
Pengujian kualitatif senyawa metabolit
sekunder yang berikutnya yaitu pengujian
dengan metode kromatografi lapis tipis.
Senyawa metabolit sekunder yang akan diuji
secara KLT meliputi flavonoid, alkaloid,
saponin, tanin, fenol dan terpenoid.
Pembuatan Larutan Uji
Pembuatan larutan dapar fosfat
Pembuatan larutan dapar fosfat 0,01 M pH 7,0
dapat dilakukan dengan cara menimbang 5,99
gram natrium dihidrogen fosfat dan dilarutkan
dalam 500 mL air suling (larutan A).
Kemudian sebanyak 8,52 gram natrium
hidrogen fosfat ditimbang dan dilarutkan dalam
600 mL air suling (larutan B). Dari larutan A
diambil 255 mL dan dari larutan B diambil
245 mL, lalu dicampurkan kedua larutan
tersebut dan kemudian dicek pH sampai
mencapai 7,0 (Depkes RI, 1995).
Penyiapan sampel
Penyiapan sampel dilakukan dengan
melarutkan sebanyak 25,0 mg ekstrak
etanol,fraksi n-heksan dan fraksi etil asetat
masing-masing ekstrak dilarutkan dengan 1 mL
DMSO dan larutan dapar fosfat pH 7 sampai 25
mL sehingga diperoleh konsentrasi 1000µg/mL,
kemudian dibuat seri konsentrasi larutan sampel
uji ekstrak.
Pembuatan enzim α-amilase
Pembuatan larutan enzim α-amilasedilakukan
dengan menimbang sebanyak (0,5128 U/mL)
3,246 mg α-amilase dan dilarutkan dalam 100
mL dapar fosfat pH 7,0 (Wirasti et al., 2021).
Pembuatan larutan amilum
Pembuatan larutan amilum 0,5% dilakukan
dengan melarutkan 500 mg amylum dalam 100
mL aquadest kemudian dipanaskan sampai
larut (Depkes RI,1995).
Pembuatan larutan iodine
Pembuatan larutan iodin 0,5% dilakukan
dengan melarutkan 0,75 gram kalium iodida
dan 0,5 gram iodine dalam 100 mL aquadest
kemudian dipanaskan sampai larut (Depkes
RI,1995).
Uji AktivitasEnzim Alfa Amylase
Menurut Mugiyanto (2017), pengujian
aktivitas enzim α-amylase ekstrak etanol daun
tin secara in vitro dapat dilakukan dengan
tahapan berikut:
Pengujian blanko
Pengujian blanko dapat diukur
dengan mengambil 1000 µL dapar fosfat pH
7,0, kemudian diinkubasi selama 10 menit
pada suhu 37oC. Kemudian pada sampel
ditambahkan 500 µL amilum 0,5%, lalu
diinkubasi kembali selama 15 menit pada
suhu 37oC. Setelah masa inkubasi selesai,
maka ditambahkan 10 µL iodine 0,5%.
Absorbansinya diukur dengan spektrofoto
meter UV-Vis pada panjang gelombang 598,5
nm.
Pengujian kontrol blanko
Pengujian kontrol blanko dapat
dilakukandengan pembuatan kontrol blanko.
Kontrol blanko dibuat dengan mengambil
1000 µL dapar fosfat pH 7, kemudian
diinkubasi selama 10 menit pada suhu 37oC.
Kemudian pada sampel ditambahkan 500 µL
amilum 0,5%, lalu inkubasi kembali selama
15 menit pada suhu 37oC. Setelah masa
inkubasi selesai maka ditambahkan 10 µL
dapar fosfat pH 7,0. Absorbansinya diukur
dengan spektrofotometer UV-Vis pada
panjang gelombang 598,5 nm.
Pengujian Sampel ditambahkan 30 µL larutan dapar fosfat pH 7.
Larutan sampel (ekstrak,fraksi n- Larutan kemudian diukur absorbansinya
heksan dan etil asetat) 500 µL dengan dengan spektofotometer UV-Vis pada panjang
berbagai seri konsentrasi (60, 80, 100 & gelombang 598,5 nm.
200μg/mL). Tabel 1. Sistem Reaksi Pengujian Aktivitas
Ditambahkan dengan 500 µL enzim amylase, Enzim α-Amylase (Mugiyanto, 2017)
kemudian campuran diinkubasi selama 10
menit pada suhu 37°C. Selanjutnya
ditambahkan 500 µL larutan amylum 0,5 %
pada sampel dan diinkubasi kembali selama
15 menit pada suhu 37°C. Setelah masa
inkubasi selesai, ditambahkan 30 µL larutan
iodine 0,5 %. Larutan kemudian diukur
absorbansinya dengan spektofotometer UV-
Vis pada panjang gelombang 598,5 nm.
Pengujian Kontrol Sampel
Pengujian kontrol sampel dilakukan
dengan mengambil 500 µL sampel dengan
berbagai konsentrasi dan 500 µL dapar fosfat Analisis Data
pH 7,0, kemudian diinkubasi selama 10 Analisis data dilakukan dengan cara
menit pada suhu 37oC. Selanjutnya ke dalam menghitung persentase inhibisi α-amilase. Data
sampel ditambahkan 500 µL dapar fosfat pH yang diperoleh dari hasil pengukuran
7,0. Lalu diinkubasi kembali selama 15 menit absorbansi dapat dihitung % penghambatan
pada suhu 37oC, setelah masa inkubasi menggunakan persamaan pada rumus:
selesai, ditambahkan 10 µL iodine 0,5%. Lalu
diukur dengan spektrofotometer UV-Vis pada
panjang gelombang 598,5 nm. % Inhibisi = x 100%
Pengujian Kontrol Positif
Larutan akarbose 500 µL dengan Keterangan:
berbagai konsentrasi ditambahkan dengan 500 C = Absorbansi kontrol (Blanko – Kontrol blanko)
S = Absorbansi sampel (Sampel – kontrol sampel)
µL enzim α-amylase. Kemudian campuran
diinkubasi selama 10 menit pada suhu 37°C. Menghitung IC50 dengan menggunakan
Selanjutnya ditambahkan 500 µL larutan persamaan regresi linier dengan sumbu x
amylum 0,5 % dan diinkubasi kembali (sebagai konsentrasi sampel) dan sumbu y
selama 15 menit pada suhu 37°C. Setelah (sebagai % inhibisi). Dari persamaan regresi :
masa inkubasi selesai, ditambahkan 30 µL y = bx+ a kemudian dapat dihitung nilai IC50
larutan iodine 0,5 %. Larutan kemudian dengan menggunakan rumus:
diukur absorbansinya dengan spektofotometer
UV-Vis pada panjang gelombang 598,5 nm.
Selanjutnya dianalisis kuantitaif dengan uji One
Way Analisis of Variance (ANOVA)
Pengujian Kontrol Negatif
menggunakan program Statistical Package for
Larutan sampel 500 µL dengan
the Sosial Sciences (SPSS) untuk melihat
konsentrasi 60, 80,100 dan 200 µg/ml
ditambahkan dengan 1000 µL larutan dapar perbedaan persen inhibisi antar konsentrasi
fosfat pH 7. Kemudian diinkubasi selama 10 ekstrak etanol, fraksi n-heksan dan frakasi etil
menit pada suhu 37°C. Selanjutnya asetat.
ditambahkan 500 µL Amylum 0,5 % dan
diinkubasi kembali selama 15 menit pada
suhu 37°C. Setelah masa inkubasi selesai,
HASIL DAN PEMBAHASAN Tabel 2.Hasil Uji Parameter Ekstrak
Bahan utama yang digunakan pada Etanol Daun Tin
penelitian ini adalah bagian daun yang
diperoleh dari petani daun tin di daerah
Ponorogo Jawa Timur. Daun segar yang
digunakan diambil dari daun muda nomor 3-4
dari ujung. Daun segar dilakukan sortasi basah
yaitu memisahkan kotoran yang ikut pada saat
pasca panen. Selanjutnya dicuci dengan air
mengalir untuk menghilangkan debu dan
kotoran yang menempel. Daun yang sudah
dicuci bersih kemudian ditiriskan sampai kering
Berdasarkan hasil skrining fitokimia
dan dikeringkan dibawah sinar matahari atau
menunjukkan ekstrak etanol daun Tin (Ficus
dengan oven pada suhu 40º C. Tujuan dari
carica L) diketahui positif mengandung
proses pengeringan untuk menurunkan
flavonoid, alkaloid, fenol, steroid, triterenoid,
kandungan air dalam suatu simplisia.
terpenoid dan tanin (Tabel 3).
Pengeringan suatu bahan yang terlalu lama dan
Tabel 3. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak
suhunya yang tinggi juga dapat menurunkan
Etanol Daun Tin
mutu karena dapat merusak komponen- Kandungan Hasil Warna
komponen yang terdapat didalamnya (Purwanti, Metabolit Uji
Yuliana & Sari., 2018). Lalu setelah kering
simplisia disortasi kering untuk dipisahkan dari Flavonoid + Hijau Kehitaman
kotoran ataupun bahan – bahan asing dan
mengurangi jumlah pengotor yang ikut terbawa Endapan putih
selama proses pengeringan . Daun kemudian (Mayer)& larutan
Alkaloid +
warna
dihaluskan dengan blender dan diayak dengan merah(Dragendorf)
ayakan nomor mesh 40. Proses penghalusan Fenol + Warna hitam
bertujuan agar ketika proses maserasi, kontak
Steroid & Warna hijau
antara sampel dan pelarut bisa lebih besar Triterpenoid
+
sehingga proses maserasi akan berjalan dengan Warna merah
Terpenoid +
optimal (Esiyati, 2020).
Saponin - Busa tidak stabil
Simplisia daun tin diekstraksi dengan
menggunakan metode maserasi. Maserasi Tanin + Warna biru tua
merupakan metode ekstraksi dengan proses Proses fraksinasi dilakukan dengan
perendaman bahan dengan pelarut yang sesuai metode ekstraksi cair – cair. Metode ini ( partisi
dengan senyawa aktif yang akan diambil cair – cair ) merupakan proses pemisahan zat
dengan pemanasan rendah atau tanpa adanya yang terlarut dalam dua fase pelarut yang tidak
proses pemanasan. Faktor – faktor yang saling campur. Metode ekstraksi cair – cair
mempengaruhi ekstraksi antara lain waktu, dapat digunakan untuk melihat perbedaan
suhu, jenis pelarut, perbandingan bahan dan kelarutan dimana komponen kimia akan
pelarut, dan ukuran partikel (Chairunnisa, terpisah ke dalam dua fase sesuai dengan
Wartini & Suhendra., 2019). tingkat kepolarannya (Budiarti , 2016). Tujuan
Uji mutu ekstrak terdiri dari beberapa dilakukan fraksinasi adalah untuk memisahkan
parameter meliputi : (a) parameter spesifik (b) senyawa berdasarkan kepolarannya. Senyawa
parameter non spesifik. Tujuan dari uji mutu senyawa yang bersifat polar akan masuk ke
ekstrak adalah untuk menjamin standar mutu dalam pelarut polar, begitu pula senyawa
dan keamanan dari suatu ekstrak tanaman obat senyawa yang bersifat non polar akan masuk ke
(Tabel 2). dalam pelarut non polar . Oleh karena itu
fraksinasi dilakukan dengan menggunakan dua
pelarut yang berbeda tingkat kepolarnnya yaitu
n-heksana (non polar) dan etil asetat ( semi
polar) (Sutomo ,2021).
Selanjutnya, dilakukan pengujian
ekstrak etanol, fraksi n-heksan dan fraksi etil
asetat daun tin menggunakan metode
kromatografi lapis tipis (KLT). Kromatografi
lapis tipis merupakan salah satu metode
dengan teknik yang sederhana, hemat biaya,
dan mudah dioperasikan dalam fitokimia dan
biokimia dengan banyak aplikasi yang Gambar 2. Profil KLT Alkaloid
digunakan dalam pengembangan obat baru
dan berbagai jenis formulasi dari tanaman
obat (Rosamah, 2019). Pada pengerjaan
kromatografi lapis tipis, digunakan fase
gerak berupa pelarut organik dengan
berbagai perbandingan. Dengan demikian,
dapat dilihat pemisahan yang baik dari
ekstrak etanol, fraksi n-heksan dan fraksi etil
asetat daun tin (Rahmawati, Prayoga &
Musyirna.,2019). Berikut hasil pengujian
KLT ekstrak etanol, fraksi n-heksan
dan fraksi etil asetat daun tin (Gambar
1 s.d 6)

Gambar 3. Profil KLT Saponin

Gambar 1. Profil KLT Flavonoid

Gambar 4. Profil KLT Tanin


Gambar 5. Profil KLT Terpenoid
Gambar 6. Profil KLT Fenol
Uji aktivitas enzim alfa amylase
bertujuan untuk mengetahui aktivitas ekstrak
etanol, fraksi n-hekasan dan fraksi etil asetat
daun tin (Ficus carica L) terhadap enzim α-
amylase. Amylase adalah enzim yang berfungsi
memutus ikatan glikosidik untuk
menghidrolisis pati menghasilkan dekstrin dan
oligosakarida. Jenis amylase ada tiga yaitu, α-
amylase, β- amylase, dan γ-amylase. Amylase
yang sering digunakan pada hidrolisis pati
adalah α-amylase (Sundarram & Murthy,
2014). Enzim α-amylase berperan penting
dalam sistem pencernaan dan langkah awal
dalam pemecahan karbohidarat. Enzim ini
merupakan endoamilase yang membelah
ikatan α-1,4 glikosidik rantai amilosa atau
amilopektin untuk menghasilkan produk
dengan konfigurasi alfa (Ainezzahira et al.,
2019).
Metode yang digunakan dalam
penelitian ini yaitu metode secara in-vitro,
yang mana pada proses ini larutan iodin yang
pada dasarnya berwarna kuning kecoklatan
akan membentuk senyawa kompleks yang
berwarna biru apabila bereaksi dengan pati.
Prinsip dari pengujian ini adanya pemecahan
oleh substrat untuk menghasilkan produk
berwarna yang diukur absorbansinya pada
panjang gelombang yang telah ditentukan
(Pujiyanto & Raharja, 2019). Ekstrak yang
paling aktif berupa ekstrak yang menunjukkan
% inhibisi yang dapat menghambat enzim α-
amilase 50%.
Pengujian sampel diawali dengan
menghitung % inhibisi dari masing-masing
konsentrasi ekstrak etanol, fraksi n-heksan
dan fraksi etil asetat daun tin daun dengan
pembanding yaitu akarbosa. Nilai % inhibisi
menunjukkan kemampuan ekstrak etanol,
fraksi n-heksan dan fraksi etil asetat dalam
konsentrasi tertentu dapat menghambat
aktivitas enzim α-amilase. Hasil data
pengamatan antara konsentrasi masing-
masing ekstrak etanol, fraksi n-heksan dan
fraksi etilasetat dan pembanding (Akarbosa)
dapat dilihat pada tabel 4.
Tabel 4. Hasil Uji aktivitas Enzim Alfa
Amylase
Ekstrak yang paling aktif yaitu ekstrak
yang menunjukkan % inhibisi yang paling
besar. Dilihat dari hasil perbandingan antara
sampel ekstrak etanol, fraksi n-heksan dan etil
asetat daun tin dengan pembanding dapat
dikatakan bahwa ekstrak etanol, fraksi n-heksan
dan etil asetat daun tin mempunyai aktivitas
inhibitor α-amilase sehingga mampu untuk
menghambat kerja enzim α-amilase.
 Aktivitas inhibitor α-amilase ekstrak
etanol, fraksi n-heksan dan etil asetat daun tin
lebih baik dari akarbosa, karena dilihat dari
nilai persen inhibisi ekstrak etanol, fraksi n-
heksan dan etil asetat pada konsentrasi 200
μg/mL mempunyai nilai persen inhibisi yang
lebih besar secara berturut – turut yaitu 74,01%;
69,97% dan 79,69% dibanding akarbosa pada
konsentrasi 200 μg/mL yang mempunyai nilai
persen inhibisi 67,75%. Hal ini menunjukkan
bahwa dengan peningkatan konsentrasi uji Gambar 9. Kurva Sampel Fraksi N-Heksan
maka semakin besar nilai % inhibisi yang
diperoleh. Dimana dengan semakin besarnya
nilai % inhibisi maka akan semakin berpotensi
sebagai antidiabetes. Menurut Pujiyanto &
Raharja( 2019), data persen (%)inhibisi berpola
linier dimana semakin tinggi konsentrasi
sampel yang digunakan maka semakin tinggi
aktivitas penghambatan enzim.
Persamaan regresi linier yang
didapatkan dari tabel 4 dari baku pembanding
akarbose sampel ekstrak etanol, fraksi n-heksan Gambar 10. Kurva Sampel Fraksi Etil
dan fraksi etil asetat secara berturut –turut Asetat
diperoleh R2 sebesar 0,992, 0988, 0,984 dan Nilai IC50 yang diperoleh dari baku
0,979. Dapat dilihat pada gambar kurva baku 7 pembanding akarbose, ekstrak etanol, fraksi
s.d 10. n-heksan dan fraksi etil asetat secara berturut
– turut sebesar 138,22, 138,96, 117,78, dan
147,50 µg/mL. Nilai IC 50 merupakan nilai
konsentrasi dari suatu senyawa atau ekstrak
yang memiliki aktivitas penghambatan
terhadap enzim alfa amylase sebesar 50%.
IC50 diperoleh dari suatu persamaan regresi
linier yang menyatakan hubungan antara
konsentrasi sampel sebagai variabel 𝑥 dengan
% penghambatan sebagai variabel 𝑦.
Semakin kecil nilai IC50, maka aktivitas
Gambar 7. Kurva Pembanding Akarbose penghambatan senyawa atau ekstrak semakin
baik (Chang, 2019).
Berdasarkan nilai IC50, kategori
aktivitas penghambatan dari suatu senyawa
dapat dibagi menjadi sangat kuat (<50
μg/mL), kuat (50-100 μg/mL), sedang (100-
250 μg/mL), lemah (250 -500 μg/mL) dan
tidak aktif (>500 μg/mL) (Rahmawati ,
Prayoga & Musyirna., 2019). Dari hasil
penelitian ini baik sampel maupun baku
pembanding akarbose didapatkan nilai IC50
dengan kategori sedang (100 – 250 μg/mL)
Gambar 8. Kurva Sampel Ekstrak Etanol seperti pada gambar 11.
Daun Tin

Gambar 11. Hasil Nilai IC 50 Uji Aktivitas
Enzim Alfa Amylase
Mekanisme kerja enzim α-amilase
terdiri dari dua tahap, yaitu : tahap pertama
degradasi amilosa menjadi maltosa dan
maltotriosa yang terjadi secara acak. Tahap
kedua terjadi pembentukan glukosa dan
maltosa sebagai hasil akhir dan tidak acak.
Keduanya merupakan kerja enzim α-amylase
pada molekul amilosa. Pada molekul
amilopektin kerja α-amylase akan
menghasilkan glukosa, maltosa dan satu seri
α-limit dekstrin, serta oligosakarida yang
terdiri dari empat atau lebih glukosa yang
mengandung ikatan α-1,6-glikosidik (Ariandi,
2016).
Mekanisme akarbose berupa
penundaan hidrolisis karbohidrat dan
disakarida, absorbsi glukosa dan
mengahambat metabolisme sukrosa menjadi
glukosa dan fruktosa . Akarbose merupakan
obat untuk terapi diabetes melitus tipe 2
dengan yang bekerja dengan cara
menghambat enzim alfa amylase dengan
menunda pencernaan karbohidrat, mengurangi
absorsi glukosa sehingga mencegah naiknya
glukosa plasma post prandial
(Afsari,Kusmiyati & Merta 2016). Selain itu
akarbose merupakan penghambat α-
glukosidase (AGI – Alpha Glucosidase
Inhibitor) yang paling efekif menghambat
enzim α-glukosidase (Yasmin, 2016).
Menurut Fadillah (2014), adanya
kandungan senyawa metabolit sekunder
berupa flavonoid dan triterpenoid pada daun
tin yang menyerupai insulin sangat berguna
untuk penderita DM sebagai pengontrol
kadar gula darah dalam tubuh. Flavonoid
mampu menahan laju absorbsi glukosa darah
dari saluran cerna menuju pembuluh darah
sehingga mampu menahan laju peningkatan
kadar glukosa darah. Flavonoid juga berperan
sebagai inhibitor non kompetitif pada enzim
sehingga menurunkan efektivitas enzim pada
proses enzimatik.
Mekanisme aksi senyawa triterpenoid
sebagai antidiabetes adalah merangsang
pengeluaran insulin dan membantu
penyerapan glukosa dengan cara merangsang
GLUT-4 di dalam sel. Triterpenoid yang
berfungsi sebagai penyuplai kadar insulin
dalam tubuh dan membantu pankreas untuk
menambah asupan insulin maka dapat
meningkatkan jumlah insulin yang dibutuhkan
oleh tubuh untuk mengikat kadar gula dalam
darah sehingga dapat menurunkan kadar gula
darah dan jumlah kebutuhan insulin yang
diperlukan (Zakaria, Amin, Zakariya Yahya,
2019).
Analisis data secara statistik dengan
uji One Way ANOVA dilakukan untuk
mengetahui ada tidaknya perbedaan data
persentase inhibisi untuk tiap kelompok
eksperimen. Berdasarkan output Annova
diketahui nilai signifikan ekstrak etanol,
fraksi n-heksan dan fraksi etil asetat sebesar
0,001<0,05 sehingga dapat disimpulkan
bahwa rata – rata kelompok eksperimen
tersebut “BERBEDA” secara signifikan.
KESIMPULAN
Ekstrak etanol, fraksi n-heksan dan
fraksi etil asetat daun tin (Ficus carica L)
memiliki aktivitas penghambatan terhadap
enzim alfa amylase secara in-vitro. Nilai
aktivitas penghambatan (IC50) yang didapat
pada ekstrak etanol, fraksi n-heksan dan fraksi
etil asetat daun tin secara berturut – turut
sebesar 138,96, 117,78, dan 147,50 µg/mL
termasuk kategori sedang.
SARAN
Perlu dilakukan pengujian akivitas
enzim dengan metode lain seperti Elisa
Reader.Perlu dilakukan identifikasi senyawa
spesifik pada metabolit sekunder yang
terdapat pada fraksi n-heksan dan fraksi etil
ekstrak etanol daun tin (Ficus carica L), serta
disarankan untuk menggunakan enzim yang
lebih spesifik yakni enzim α-glukosidase.
UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih kepada Ibu apt. Oktariani
Pramiastuti, M.Sc.,Bapak apt Agung Nur
Cahyanta,M.Farm selaku dosen pembimbing
untuk penelitian ini serta seluruh civitas
akademik Program Studi S1 Farmasi
Unuversitas Bhamada Slawi.
DAFTAR PUSTAKA
Afsari, R. K. dan I. W. M. (2016). Pengaruh
Pemberian Ekstrak Daun Sirih Merah
(Piper Crocatum) Terhadap Penurunan
Kadar Gula Darah Mencit (Mus
musculus). Tropis, Jurnal Biologi, 16(1),
49–55.
Agustina, E. (2017). Uji Aktivitas Senyawa
Antioksidan Dari Ekstrak Daun Tiin (
Ficus Carica Linn ) Dengan Pelarut Air ,.
1(1), 38–47.
Ainezzahira, Multri, H. D., Kiyat, W. El,
Nacing, N., & Dari, D. W. (2019).
Pemanfaatan Enzim Αlpha-amilase pada
Modifikasi Pati Singkong Sebagai
Substitusi Gelatin Produk Marsmallow.
Jurnal Agroindustri Halal, 5(2), 220–227.
Alagesan, K., Raghupathi, P. K., &
Sankarnarayanan, S. (2012). Amylase
inhibitors: Potential source of anti-diabetic
drug discovery from medicinal plants. Int
J. Pharm. Biol. Sci., 3(2), 1407–1412.
Ariandi. (2016). Pengenalan Enzim Amilase
(Alpha-Amylase) Dan Reaksi
Enzimatisnya Menghidrolisis Amilosa Pati
Menjadi Glukosa. April, 74–82.
https://doi.org/ISSN 2087-7889 Vol 07 No
1 overview. International Journal of
Berryman, L. Y. (2000). Pharmacotherapy
Handbook. 2nd Edition. In The Annals of
Pharmacotherapy (Vol. 34, Issue 12).
https://doi.org/10.1345/aph.10237
Budiarti, A., Ulfah, M., & Oktania, F. A.
(2016). Aktivitas Antioksidan Fraksi
Kloroform Ekstrak Etanol Daun Sirsak
(Annona muricata L.) dan Identifikasi
Kandungan Senyawa Kimianya. Prosiding
SNST Ke-5 Fakultas Teknik Universitas
Wahid Hasyim Semarang, 2006, 7–12.
Chairunnisa, S., Wartini, N. M., & Suhendra, L.
(2019). Pengaruh Suhu dan Waktu
Maserasi terhadap Karakteristik Ekstrak
Daun Bidara (Ziziphus mauritiana L.)
sebagai Sumber Saponin. Jurnal Rekayasa
Dan Manajemen Agroindustri, 7(4), 551.
https://doi.org/10.24843/jrma.2019.v07.i0
4.p07
Chang, M. J. V. (2019). Uji Aktivitas
Penghambat Enzim Alfa-Amilase Oleh
Ekstra Air Daun Sambiloto (Andrographis
paniculata). Journal of Chemical
Information and Modeling, 53(9), 1689–
1699.
Departemen Kesehatan Republik
Indonesia.(1995).Farmakope Indonesia
Edisi IV.Jakarta : Depkes RI.
Departemen Kesehatan Republik
Indonesia.(2000). Parameter Standar
Umum Ekstrak Tanaman Obat.Jakarta :
Depkes RI.
De Sales, P. M., de Souza, P. M., Simeoni, L.
A., Magalhães, P. de O., & Silveira, D.
(2012). α-amylase inhibitors: A review of
raw material and isolated compounds from
plant source. Journal of Pharmacy and
Pharmaceutical Sciences, 15(1), 141–183.
https://doi.org/10.18433/j35s3k
Esiyati, L. (2020). Ekstraksi Simplisia Daun
Senggani (Melastoma Malabathricum L.)
Menggunakan Pelarut Metanol.
Fadillah, R. U. (2014). Antidiabetic Effect of
Morinda Citrifolia L. As A Treatment of
Diabetes Mellitus. J Majority, 3(7), 107–
112.
Joseph, B., & Justin Raj, S. (2011).
Pharmacognostic and phytochemical
properties of Ficus carica linn - An
PharmTech Research, 3(1), 8–12.
Mugiyanto, E., Partomuan, S., & Setyahadi, S.
(2017). Identifikasi Senyawa Aktif Fraksi
Etanol Daun Sirsak (Annona Muricata
Linn.) Sebagai Inhibitor Α-Amylase.
Jurnal Para Pemikir, 6, 131–138.
Pujiyanto, S., & Raharja, B. (2019). Aktivitas
Inhibitor α -Amilase Ekstrak Etanol
Tanaman Brotowali ( Tinospora crispa L
.) α -Amilase Activity Extract Ethanol Of
Brotowali Plant ( Tinospora crispa L .).
21(2).
Purwanti, N. U., Yuliana, S., & Sari, N. (2018).
Pengaruh Cara Pengeringan Simplisia
 Daun Pandan (Pandanus Amaryllifolius)
Terhadap Aktivitas Penangkal. Jurnal
Farmasi Medica/Pharmacy Medical
Journal (PMJ), 1(2), 63–72.
https://doi.org/10.35799/pmj.1.2.2018.216
44
Rahmawati, N., Prayoga, H. N., & Nst, M. R.
(2019). Isolasi Dan Uji Aktivitas
Antioksidan Senyawa Metabolit Sekunder
Dari Fraksi N- Butanol Daun Tin ( Ficus
carica L .). 8(September).
Rani, S. (2020). Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi
Dari Ekstrak Etanol Daun Tin (Ficus
carica L.) Terhadap Bacillus cereus Dan
Escherichia coli. 20–35.
Rosamah, E. (2019). Tipis, Kromatografi Lapis
Sederahana, Metode Kimia, Analisis
Berkayu, Tumbuha.
Sundarram, A., & Murthy, T. P. K. (2014). α -
Amylase Production and Applications : A
Review. Journal of Applied &
Environmental Microbiology, 2(4), 166–
175. https://doi.org/10.12691/jaem-2-4-10
Sutomo. (2021). Identifikasi Potensi Senyawa
Antioksidan Dari Fraksi Etil Asetat Daun
Mundar ( Garcinia Forbesii King .) Asal
Kalimantan Selatan. 6(April).
Wijaya, Zudan Ady. (2017). Antidiabetes
Ekstrak Etanol Daun Tin ( Ficus Carica L
) Pada Mencit ( Mus Musculus ) Yang
Diinduksi Aloksan. Antidiabetes Ekstrak
Etanol Daun Tin (Ficus Carica L) Pada
Mencit (Mus Musculus) Yang Diinduksi
Aloksan, 1, 1–9.
Wirasti, Titi Lestari & Isyti'aroh.
(2021).Penghambatan Ekstrak Daun
Kremah ( Alternanthera sessilis )
Terhadap Enzim α -amilase secara In-
Vitro .In-vitro Study of α -Amylase
Inhibition of Kremah Leaves Extract (
Alternanthera sessilis ). 18(1), 68–74.
Yasmin. (2016). Uji Aktivitas Antidiabetes
Ekstrak Teh Hitam Dan Teh Hijau Secara
in Vitro Menggunakan Metode Inhibisi.
Zakaria, Amin, Zakariya Yahya, H. N. (2019).
Pengaruh Pemberian Teh Daun Tin
Terhadap Kadar Gula Darah Pada
Penderita Diabetes Mellitus. Ilmu
Kesehatan, 7(2), 357–365.