MAKALAH

‘’PEWARNAAN SEDERHANA’’

Disusun Oleh :

Nama : Lindra Yunita Warbal

NIM : PO714211232089
Kelas : C – RPL Maluku Tenggara

POLTEKKES KEMENKES MAKASSAR

PROGRAM STUDI KEBIDANAN
TAHUN 2023
 BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang
Mikroorganisme yang ada di alam ini mempunyai morfologi, struktur dan
sifat-sifat yang khas, termasuk bakteri. Bakteri yang hidup hampir tidak berwarna dan
kontras dengan air, dimana sel-sel bakteri tersebut disuspensikan. Salah satu cara
untuk melihat dan mengamati bentuk sel bakteri dalam keadaan hidup sangat sulit,
sehingga untuk diidentifikasi ialah dengan metode pewarnaan atau pewarnaan sel
bekteri, sehingga sel dapat terlihat jelas dan mudah diamati. Hal tersebut juga
berfungsi untuk mengetahui sifat fisiologisnya yaitu mengetahui reaksi dinding sel
bakteri melalui serangkaian pewarnaan. Oleh karena itu teknik pewarnaan sel bakteri
ini merupakan salahsatu cara yang paling utama dalam penelitian-penelitian
mikrobiologi.
Mikroba sulit dilihat dengan cahaya karena tidak mengadsorbsi atau
membiaskan cahaya. Alasan inilah yang menyebabkan zat warna digunakan untuk
mewarnai mikroorganisme. Zat warna mengadsorbsi dan membiaskan cahaya
sehingga kontras mikroba dengan sekelilingnya dapat ditingkatkan. Penggunaan zat
warna memungkinkan pengamatan strukur seperti spora, flagela, dan bahan inklusi
yng mengandung zat pati dan granula fosfat.
Melihat dan mengamati bakteri dalam keadaan hidup sangat sulit, kerena
selain bakteri itu tidak berwarna juga transparan dan sangat kecil. Untuk mengatasi
hal tersebut maka dikembangkan suatu teknik pewarnaan sel bekteri, sehingga sel
dapat terlihat jelas dan mudah diamati. Oleh karena itu teknik pewarnaan sel bakteri
ini merupakan salahsatu cara yang paling utama dalam penelitian-penelitian
mikrobiologi;

B. Rumusan Masalah
a. Apa yang dimaksud dengan pewarnaan?
b. Apa pewarnaan sederhana itu?
c. Bagaimana bentuk bakteri pada pewarnaan sederhana?
d. Apa pewarnaan negatif itu?
e. Bagaimana bentuk dan struktur bakteri pada pewarnaan negatif?
 f. Apa pewarnaan kapsul itu?
g. Bagaimana bentuk dan struktur bakteri pada pewarnaan kapsul?

C. Tujuan
a. Untuk mengetahui pengertian pewarnaan bakteri
b. Untuk mengetahui kerja pewarnaan bakteri
c. Untuk mengetahui bentuk dan struktur dari masing – masing pewarnaan

D. Manfaat
a. Agar mahasiswa mampu mengetahui jenis – jenis pewarnaan bakteri
b. Agar mahasiswa mampu mengetahui bentuk dan struktur bakteri
c. Agar mahasiswa mampu membedakan bentuk dan struktur bakteri
 BAB II
PEMBAHASAN
A. Pewarnaan Sederhana

Pewarnaan sederhana yaitu pewarnaan dengan menggunakan satumacam zat warna

dengan tujuan hanya untuk melihat bentuk sel bakteri dan untuk mengetahui
morfologi dan susunan selnya . pewarnaan ini dapat menggunakan pewarnaan basa
pasda umumnya antara lain kristal violet , metylen blue , karbol , fuchsin , dan
safranin (lay ,1994).
Pewarnaan sederhana merupakan teknik pewarnaan yang paling banyak digunakan.
Disebut sederhana karena hanya menggunakan satu jenis zat warna untuk mewarnai
organisme tersebut. Kebanyakan bakteri mudah bereaksi dengan pewarnaan-
pewarnaan sederhana karena sitoplasamanya bersifat basofilik (suka dengan basa).
Zat-zat warna yang digunakan untuk pewarnaan sederhana umumnya bersifat alkolin.
Dengan pewarnaan sederhana dapat mengetahui bentuk dan rangkaian sel-sel bakteri.
Pewarna basa yang biasa digunakan untuk pewarnaan sederhana ialah metilen biru,
kristal violet, dan karbol fuehsin yang mana pewarnaan sederhana ini dibagi lagi
menjadi dua jenis pewarnaan.
Berbagai macam tipe morfologi bakteri (kokus, basil, spirilum, dan sebagainya) dapat
dibedakan dengan menggunakan pewarna sederhana, yaitu mewarnai sel-sel bakteri
hanya digunakan satu macam zat warna saja. Kebanyakan bakteri mudah bereaksi
dengan pewarna-pewarna sederhana karena sitoplasmanya bersifat basofilik (suka
akan basa) sedangkan zat-zat warna yang digunakan untuk pewarnaan sederhana
umumnya bersifat alkalin (komponen kromoforiknya bermuatan positif).
Tujuan pewarnaan sederhana ini adalah untuk melihat bentuk sel
Alat dan bahan yang di butuhkan pada saat pewarnaan sederhana yaitu :
Alat Bahan
1. Gelas preparat 1. Bakteri Escherichia coli
2. Jarum ose 2. Bakteri bacillus subtilis
3. Labeling 3. Aquades
4. Mikroskop 4. Methylen blue
5. Bunsen 5. Tissue
6. Pipet 6. Alkohol
 7. Tabung 7. Air mengalir
8. Rak tabung

Cara kerja :
1. Bersihkan preparat glass dengan alkohol 70% kemudian di fiksasi di atas bunsen
2. Beri label pada bagian bawah preparat glass
3. Pijarkan jarum ose kemudian dicelupkan ke aquades dan teteskan 3 ose aquades
pada preparat glass menggunakan jarum ose
4. Pijarkan lagi jarum ose dan diambil bakteri dari media dengan cara aseptik lalu
diratakkan di atas preparat glass
5. Keringkan
6. Teteskan larutan zat warna methylen blue sebanyak 1 atau 2 tetes
7. Keringkan selama 1 menit
8. Cuci dengan air mengalir
9. Keringkan preparat dengan dianginkan, dan
10. Amati dibawah mikroskop karakteristik dan bentuk bakteri

Hasil pengamatan
a. Bakteri Escherichia coli

Gambar di atas merupakan bakteri E. coli yang dilihat di bawah mikroskop cahaya
dengan pembesaran 40x. Berwarna Ungu . Bentuk E. coli tampak seperti batang
(basil) pendek yang membentuk koloni yang tersusun seperti rantai yang memanjang.
 b. Bakteri Bacillus Subtilis

B. Pewarnaan Negatif
Tujuan pewarnaan negatif adalah untuk mempelajari penggunaan prosedur pewarnaan
negatif untuk mengamati morfologi organisme yang sukar diwarnai oleh pewarna
sederhana. Bakteri tidak diwarnai, tapi mewarnai latar belakang. Ditujukan untuk
bakteri yang sulit diwarnai, seperti spirochaeta.
Pewarnaan negatif, metode ini bukan untuk mewarnai bakteri tetapi mewarnai latar
belakangnya menjadi hitam gelap. Pada pewarnaan ini mikroorganisme kelihatan
transparan (tembus pandang). Teknik ini berguna untuk menentukan morfologi dan
ukuran sel. Pada pewarnaan ini olesan tidak mengalami pemanasan atau perlakuan
yang keras dengan bahan-bahan kimia, maka terjadinya penyusutan dan salah satu
bentuk agar kurang sehingga penentuan sel dapat diperoleh dengan lebih tepat.
Metode ini menggunakan cat nigrosin atau tinta cina.
Pewarnaan negatif memerlukan pewarna asam seperti eosin atau negrosin.pewarna
asam memiliki negatif charge kromogen,tidak akan menembus atau berpenetrasi ke
dalam sel karena negative charge pada permukaan bakteri. oleh karena itu, sel tidak
berwarna mudah dilihat dengan latar belakang berwarna.

Alat dan bahan

Alat Bahan
1. Gelas preparat 1. Bakteri Escherichia coli
2. Jarum ose 2. Bakteri bacillus subtilis
3. Labeling 3. Aquades
4. Mikroskop 4. Nigrosin / tinta india
5. Bunsen 5. Tissue
 6. Pipet 6. Alkohol
7. Tabung
8. Rak tabung

Cara kerja :
1. Bersihkan glass preparat menggunakan tissu dan alkohol
2. Beri label pada glass preparat bagian tepi bawah
3. Tetesi nigrosin pada bagian tepi
4. Letakkan masing – masing bakteri (e coli dan bacillus) di atas nigrosin dengan
cara aseptik
5. Buat apusan satu arah menggunakan glass preparat lain yg telah dibersihkan
6. Keringkan dengan cara fiksasi
7. Amati menggunakan mikroskop

Hasil pengamatan
a. Bacillus subtilis

Perbesaran 400

Berwarna Kuning

Berbentuk coccus

b. E coli
C. Pewarnaan Kapsul
Pewarnaan diferensial merupakan teknik pewarnaan yang menampilkan perbedaan di
antara sel-sel mikroba atau bagian-bagian sel mikroba. Teknik pewarnaan ini
menggunakan tidak hanya satu jenis larutan zat warna, berbeda dengan teknik
pewarnaan sederhana (pewarnaan tunggal) yang hanya menggunakan satu jenis zat
warna saja. Pewarnaan diferensial banyak jenisnya, antara lain ialah pewarnaan gram,
pewarnaan spora, pewarnaan tahan asam, pewarnaan giemsa, pewarnaan kapsul, dan
pewarnaan flagel.
Pewarnaan ini menggunakan larutan kristal violet panas, lalu larutan tembaga sulfat
sebagai pembilasan menghasilkan warna biru pucat pada kapsul, karena jika
pembilasan dengan air dapat melarutkan kapsul. Garam tembaga juga memberi warna
pada latar belakang yang berwana biru gelap.
fungsi kapsul pada sel bakteri :
 Sebagai makanan cadangan
 Mencegah kekeringan
 Mencegah fagositosis
 Menunjukkan virulensi
 Kapsul sulit diwarnai karena adaya afinitas( daya serap) terhadap cat sangat
kecil

Alat dan bahan

Alat Bahan
1. Gelas preparat 1. Bakteri Escherichia coli
2. Jarum ose 2. Bakteri bacillus subtilis
3. Labeling 3. Aquades
4. Mikroskop 4. Nigrosin / tinta india
5. Bunsen 5. Methylen blue
6. Pipet 6. Tissue
7. Tabung 7. Alkohol
8. Rak tabung

Cara Kerja :
1. Bersihkan glass preparat menggunakan tissu dan alkohol
2. Beri label pada glass preparat bagian tepi bawah
3. Tetesi nigrosin pada bagian tepi
4. Letakkan masing – masing bakteri (e coli dan bacillus) di atas nigrosin dengan
cara aseptik
5. Buat apusan satu arah menggunakan glass preparat lain yg telah dibersihkan
6. Keringkan dengan cara fiksasi
7. Tetesi dengan methylen blue dan diamkan selama 1 menit (keringkan dengan
fiksasi)
8. Amati dengan mikroskop

Hasil pengamatan :

Kapsul : bentuk kompak dan pasti

Lendir : bentuk tidak beraturan
Hasil bakteri seperti yang terdapat pada gambar ialah terdapat sel-sel bakteri yang
bewarna dan kapsul tampak kosong disekitar tubuh bakteri (mengelilingi bakteri), dan
sekitar kapsul berwarna gelap. Saat pengamatan bakteri ini relatif sukar karena
apabila methylen blue terlalu pekat, maka akan mengganggu proses pengamatan
bakteri.
Kapsul dari berbagai spesies tidak dapat diwarnai dengan pewarnaan sederhana atau
pewarnaan Gram. Karena, kapsul dari berbagi spesies berbeda susunan zat-zatnya,
maka tidak semua kapsul dapat diperlihatkan dalam pewarnaan yang sama. Misalnya,
kapsul tidak memiliki afinitas yang besar terhadap bahan-bahan zat warna yang
bersifat basa.
 BAB III

PENUTUP

A. Kesimpulan
Dari percobaan pewarnaan yang dilakukan dapat ditarik kesimpulan :
1. Pewarnaan bakteri dipengaruhi faktor-faktor antara lain fiksasi, pelunturan
warna, substrat, intensifikasi pewarnaan dan penggunaan zat warna penutup
2. Pewarnaan sederhana digunakan untuk melihat bentuk dan struktur sel bakteri
dengan menggunakan satu jenis pewarna seperti safranin atau kristal violet.
3. Macam-macam pewarnaan anatara lain : pewarnaan sederhana, pewarnaan
negatif, pewarnaan gram dan perwarnaan kapsul.
4. Larutan zat warna yang digunakan pada percobaan perwarnaan antara lain :
 Methylen blue
 Nigrosin
 Zat warna utama (violet kristal)
 Mordan (larutan Iodin)
 Pencuci / peluntur zat warna (alcohol / aseton) / safranin
 Zat warna kedua / cat penutup (safranin)
B. Saran
Diharapkan kepada para praktikum untuk menjaga kebersihan lingkungan sekitar.
Baik alat maupun benda yang kita gunakan untuk praktikum dan benda yang kita
gunakan di tubuh kita.
 DAFTAR PUSTAKA

 http://apikdewefppundip2011.wordpress.com/2012/06/29/laporan-resmi-praktikum-
mikrobiologi/
 http://id.wikipedia.org/wiki/Pewarnaan_Gram
 http://arfiyahtrimeirina.blogspot.com/2012/01/laporan-praktikum-mikrobiologi_8802.html
 http://mikrolaborat.blogspot.com/2011/10/laporan-pewarnaan-bakteri.htm l
 http://ratihkuspriyadani.blogspot.com/2010/11/laporan-praktikum-mikrobiologi-
umum.html
 http://itatrie.blogspot.com/2012/10/laporan-mikrobiologi-pewarnaan.htm l
 http://aguskrisnoblog.wordpress.com/2011/01/12/macam-macam-teknik-pewarnaan-
bakteri/
 http://adesahy.blogspot.com/2011/09/pewarnaan-kapsul-burr-gins.htm l