Vitalitas dan Perkiraan Usia-Luka Pada Patologi Forensik: Ulasan dan Prospek Masa

Depan

Abstrak

Menentukan usia luka merupakan tantangan dalam patologi forensik, tetapi dapat
berkontribusi dalam rekonstruksi TKP dan mengarah pada penangkapan tersangka. Sarjana
forensik cenderung fokus mengevaluasi vitalitas luka dan menentukan waktu yang berlalu
sejak luka itu muncul. Kemajuan terbaru dalam teknik forensik, khususnya analisis tinggi,
telah memungkinkan evaluasi bahan pada tingkat seluler dan molekuler, serta secara
simultan memberikan penilaian terhadap beberapa penanda. Makalah ini memberikan
pembaruan tentang estimasi usia luka pada patologi forensik, merangkum literatur terbaru,
dan mempertimbangkan informasi tambahan yang berguna sebagai masing-masing
penanda. Akhirnya, di masa depan dapat digunakan untuk memperkirakan usia luka pada
praktek forensic dengan harapan memberikan sesuatu yang berguna untuk studi lebih
lanjut.

Pendahuluan

Menentukan usia luka merupakan tantangan dalam patologi forensik, tetapi dapat
berkontribusi pada rekonstruksi TKP dan mengarah pada penangkapan tersangka. Ahli
patologi forensik harus mengidentifikasi: waktu dan urutan cedera dalam kasus yang
melibatkan beberapa trauma oleh pelaku karena terdapat perbedaan hukuman sesuai dengan
tingkat keparahan cedera. Dalam kasus kematian dengan kekerasan, fokus yang utama
pada (1) apakah cedera yang muncul saat individu masih hidup atau selama agonal atau
periode postmortem, dan (2) berapa lama korban selamat setelah luka itu ditimbulkan.

Setelah menimbulkan luka, serangkaian reaksi vital (misalnya perdarahan, infiltrasi

sel inflamasi, pembentukan jaringan granulasi) harus dipertimbangan untuk memperoleh
bukti yang meyakinkan tentang cedera antemortem. Reaksi antemortem ini secara kolektif
disebut "vitalitas", yang terkait dengan apakah korban masih hidup pada saat trauma dan
berapa lama sebelum kematian korban, trauma munvul. Vitalitas luka bisa dievaluasi
menggunakan morfologi, sitologi, dan teknik biologi molekuler. Sejumlah biomarker
terlibat dalam reaksi vital dilaporkan meningkatkan akurasi estimasi usia luka.

Namun, diyakini secara luas bahwa tidak ada parameter atau metode tetap yang
menghasilkan data karena non-spesifisitas, pengulangan yang buruk, dan kinerja biomarker
diagnostik yang tidak memadai dan keterbatasan teknik yang digunakan. Karena itu,
kriteria yang sistematis dan spesifik untuk mengidentifikasi sangat diperlukan serta teknik
yang lebih maju harus diterapkan untuk menghasilkan data dengan peningkatan akurasi dan
objektivitas. Karena perkiraan usia luka adalah masalah yang rumit dan multifaktorial —
mirip dengan prakiraan cuaca — penggunaan kombinasi dari beberapa parameter dapat
mengurangi kesalahan dalam estimasi usia luka.

Kendala lainnya adalah ketersediaan, dan permasalahan etika yang tidak dapat
diabaikan, menggunakan spesimen manusia dengan waktu kematian yang diketahui. Oleh
karena itu, penelitian pada hewan sangat penting, tetapi penerapan hasil untuk manusia
memiliki kekurangan bukti pendukung yang pasti. Dengan demikian, masalah tentang cara
mentransfer hasil yang diperoleh pada model hewan untuk manusia dan bagaimana
memanfaatkan secara efektif sejumlah besar data yang dihasilkan untuk menentukan waktu
cedera tetap belum terselesaikan.

Menimbang bahwa sarjana forensik Cina membuat kemajuan besar dalam

meningkatkan estimasi usia luka dalam beberapa tahun terakhir, artikel dari China berbasis
data Infrastruktur Pengetahuan Nasional (CNKI) (database paling berpengaruh di China)
layak menjadi perhatian. Oleh karena itu, dilakukan pencarian sistematis terkait studi
tentang estimasi usia luka melalui PubMed dan CNKI dengan strategi pencarian utama,
yaitu [(estimasi usia luka) ATAU (penentuan usia luka) ATAU (evaluasi usia luka) ATAU
(perjalanan waktu luka) ATAU (waktu terjadinya luka) ATAU (penuaan luka)] DAN
[(kedokteran forensik) ATAU (hukum pengobatan) ATAU (yurisprudensi pengobatan
medis)]. Pencarian ini — yang mana disaring dengan memuat teks lengkap, bahasa Inggris,
dan tanggal publikasi hingga 12 Desember 2016 pada pencarian pertama — menghasilkan
total 643 artikel dari PubMed. Di antara mereka, 337 artikel muncul selama periode
20102016, yang menyumbang lebih dari 50% dari semua artikel PubMed. Di CNKI, 188
artikel ditemukan hingga tanggal 31 Desember 2016, dengan 64 artikel muncul sejak 2010,
yang menyumbang lebih dari sepertiga dari semua artikel CNKI . Selain itu, Kondo dkk.
telah melakukan ulasan tentang patologi molekuler dari penyembuhan luka dan merangkum
artikel sebelumnya di tahun 2010. Dengan demikian, berdasarkan dua poin penting
tersebut, hasil pencarian dari 2010 hingga 2016 disaring dan ditinjau. Informasi tambahan
yang berguna diperoleh dengan mengevaluasi penanda yang berharga untuk analisis, dan
prospek masa depan untuk estimasi usia luka dalam praktek forensik, diharpakan dapat
memberikan data yang berguna untuk studi lebih lanjut

Jaringan umum pada Luka

Dikarenakan frekuensi pemeriksaan dalam praktek forensic yang cukup sering pada kulit,
otot rangka, dan jaringan otak di sekitar luka yang ditimbulkan dengan trauma dan
umumnya melibatkan sayatan atau memar. Sebagai contoh, karena kerusakan otak sering
terlibat dalam kasus kematian yang kejam dan biasanya berakibat fatal, banyak penelitian
berfokus memperkirakan usia luka dalam kasus-kasus yang melibatkan kerusakan otak.
Otot rangka dan kulit juga telah menjadi subjek studi eksperimental dan investigasi besar
baru-baru ini.

Artikel yang kami ulas pada dasarnya bersifat eksperimental dan studi investigasi.
Umumnya, dalam studi eksperimental, waktu setelah luka dimana sampel diambil sudah
ditentukan sebelumnya, sedangkan dalam studi investigasi sejumlah specimen dikumpulkan
pada beberapa titik waktu setelah luka. Studi dalam ulasan kami terutama melibatkan
hewan dan spesimen otopsi, meskipun beberapa sampel berasal dari subjek manusia yang
hidup.

Eksperimen hewan memiliki keuntungan dalam kontrol, yang meningkatkan

reproduktifitas dan keandalan hasil. Mereka juga memfasilitasi penyelidikan dari proses
perbaikan luka, yang merupakan dasar respon fisiologis dan mirip pada manusia dan
hewan. Waktu setelah cedera juga dapat dikontrol. Sejauh mana hasilnya berlaku untuk
manusia, bagaimanapun, masih belum jelas, yang menunjukkan bahwa penanda dengan
tingkat urutan homologi yang tinggi harus digunakan karena mereka cenderung
menampilkan fungsi yang mirip selama perbaikan luka. Model hewan juga memungkinkan
untuk menggunakan sampel manusia sebagai standar kalibrasi untuk data hewan untuk
meningkatkan akurasi perkiraan waktu cedera dalam praktik forensic.

Spesimen otopsi adalah sampel yang paling akurat dan realistis, terutama jika usia
luka diketahui. Namun, ketersediaan sampel ini terbatas karena informasi yang hilang dan
tidak mencukupi untuk dokumentasi. Selain itu, bahkan ketika sampel luka dengan usia
yang diketahui dikumpulkan, waktu di mana luka terjadi dapat bervariasi secara luas dan,
dalam beberapa kasus, tidak ditentukan selama periode tertentu. Selain itu, perubahan
postmortem (misalnya pembusukan, dekomposisi, pengeringan), usia individu, lokasi luka,
waktu kelangsungan hidup dan riwayat klinis (untuk menyebutkan hanya beberapa dari
faktor) harus dipertimbangkan. Dalam keadaan ini, pembusukan ex vivo yang terkontrol
harus diterapkan . Selain itu, kontrol ketat terhadap koleksi kriteria meningkatkan
reliabilitas hasil.

Sampel dari subjek manusia yang hidup diperoleh terutama dari pasien dengan
penyakit kulit dan penyakit yang membutuhkan reseksi bedah, serta pasien yang dirujuk ke
dokter forensik. Sampel ini memiliki catatan waktu yang akurat dan biasanya disimpan
hingga waktu tertentu. Dengan demikian, mereka menawarkan dua perbedaan keuntungan:
asal usul manusia mereka dan akurasi data waktu mereka. Sampel seperti itu biasanya
bukan dari orang sehat dan pelestarian in vitro menekan reaksi vital. Terkadang, usia luka
harus ditentukan pada subjek hidup karena penilaian cedera makroskopik tidak memadai
untuk tujuan medikolegal. Masalah etika yang terkait dengan penggunaan jaringan dari
donor hidup juga penting. Memang, penggunaan manusia dalam penelitian harus mendapat
persetujuan dari komite etika lokal. Selain itu, sebagai sampel dari cedera yang diderita
oleh subjek manusia hidup harus diperoleh dengan cara non-invasif (swabbing), sehingga
ukuran sampel sering tidak memadai, menyebabkan hasil tidak dapat diandalkan, dan
terkadang memberikan hasil negatif palsu.

Metode untuk Estimasi Usia-Luka Analis Morfologi

Berbagai metode digunakan untuk menentukan usia luka. Analisis morfologi memiliki
sejarah Panjang sebagai metode yang paling umum digunakan karena sifat visual atau sifat
intuitif, objektivitas, serta kemampuan untuk mengevaluasi penanda lokalisasi. Pengamatan
visual (perubahan warna) memar juga sudah lama menjadi alat investigasi untuk
menentukan usia memar. Hal oni memberikan banyak informasi berguna tentang penuaan
luka dan masih tak tergantikan. Upaya telah dilakukan untuk menentukan usia memar
berdasarkan warnanya, pada inspeksi secara visual, tetapi metode ini telah terbukti terlalu
bervariasi untuk digunakan secara praktis karena waktu penampilan dan warna memar
dipengaruhi oleh kedalaman, lokasi, dan warna kulit, dan faktor lain. Jadi, harus ada
pendekatan terhadap permasalahan ini menggunakan penyelidikan eksperimental ilmiah,
jadi kami fokus pada teknik molekuler.

Potensi penggunaan banyak penanda temporal dalam patologi forensic telah

dieksplorasi. Meskipun evaluasi histologis konvensional (misalnya dengan hematoxylin-
eosin dan pewarnaan Berlin blue) dapat mendeteksi perubahan 6 jam setelah cedera, namun
aplikasi praktisnya terbatas. Studi imunohistokimia dan imunofluoresensi, yang berguna
untuk memperkirakan usia luka tahap awal, memungkinkan (1) lokalisasi faktor jaringan
sebagai indikasi tahap respon dan (2) penentuan fase aktivasi sel individu. Data ini
memungkinkan evaluasi hubungan antara morfologi dengan fungsi dan mendekati interval
dari usia luka ditentukan oleh tes sitokin dan molekul adhesi. Sebuah tekinik pewarnaan
imunofluoresensi multiple memungkinkan deteksi tiga atau empat penanda secara
bersamaan dan memfasilitasi analisis kualitatif dan analisis kuantitatif jaringan. Sebagai
persentase neutrofil polimorfonuklear, sel mononuklear, dan sel fibroblastik di zona cedera
dilaporkan berubah dari waktu ke waktu, dan mungkin memiliki potensi penggunaan dalam
memperkirakan usia luka. Beberapa penelitian telah melaporkan korelasi positif antara
tahap awal luka dan level penanda — bahkan sejak tahun 1998 ketika Dressler dkk.
mengamati reaksi imunohistokimia yang sangat positif untuk P-selectin 3 menit setelah
pembuatan luka. Temuan di atas akan berguna dalam studi masa depan. Khususnya, jarak
sel inflamasi bermigrasi dari wadah bebas — yang belum dipelajari karena keterbatasan
teknik pengukuran - secara teoritis terkait dengan tahap awal cedera.
 Hasil uji imunohistokimia kuantitatif dilaporkan tidak akurat atau stabil dan
mungkin dipengaruhi oleh keterampilan operator, seperti definisi subjektif standar positif.
Masalah seperti ini membatasi aplikasi klinis imunohistokimia. Sistem pemindaian irisan
digital secara otomatis menghilangkan faktor subjektif dengan mengidentifikasi dan
memeriksa area sampel yang berbeda, dan memudahkan penyelidikan jarak antara sel
inflamasi dan pembuluh darah bebas. Kombinasi dari sistem pemindaian irisan digital dan
teknik pewarnaan imunofluoresensi ganda memungkinkan pengujian otomatis tiga atau
empat penanda secara bersamaan dan karenanya harus diselidiki lebih lanjut.

Analisis Biologi Molekuler

Umumnya, selama menit atau jam pertama setelah timbulnya luka, analisis histologis tidak
dapat menentukan apakah luka dipertahankan sebelum atau setelah kematian. Namun,
setelah terjadi luka, tingkat sitokin mRNA dan enzim biasanya berubah lebih cepat dari
tingkat protein dan histomorfologi. Karenanya, tes berdasarkan mRNA cocok untuk
memperkirakan usia luka tahap awal. Meskipun RNA kurang stabil daripada protein, telah
terdeteksi dalam pengawetan sampel yang lama. Total RNA dengan kualitas dan kuantitas
yang memadai dapat diperoleh dengan menggunakan pewarna biologis yang berusia
beberapa bulan, bahkan tahun. Dengan demikian tingkat sitokin inflamasi mRNA dan
faktor penyembuhan luka diuji menggunakan Real-time Polymerase Chain Reaction (PCR)
untuk mengevaluasi usia luka. Karena real-time PCR (qPCR) adalah metode yang sangat
sensitif untuk mendeteksi bahkan sedikit perubahan dalam ekspresi gen di antara sampel,
sangat penting untuk berhati-hati di setiap langkah, termasuk analisis data. Normalisasi data
dengan menggunakan referensi gen adalah langkah penting untuk analisis yang akurat
dalam mendeteksi variasi eksperimental yang tak terhindarkan, terutama disparitas dalam
jumlah pemuatan sampel. Hal ini merupakan suatu permasalahan, bahwa ekspresi beberapa
gen rumah tangga diregulasi setelah cedera, dan penting untuk mengidentifikasi gen rumah
tangga yang diekspresikan secara stabil setelah cedera untuk normalisasi yang efektif.

Saat ini, metode tinggi (misalnya analisi chip gen, sekuensing tinggi, real-time
PCR, 384 sistem Microplate) memungkinkan analisis lusinan untuk ratusan gen secara
bersamaan, yang tidak hanya mengurangi biaya pengujian tetapi juga menghasilkan hasil
dengan pengulangan yang tinggi dan stabilitas. Metode ini, yang memungkinkan
identifikasi penanda yang digunakan untuk memperkirakan usia luka, kemungkinan akan
digunakan untuk mendeteksi ekspresi diferensial mRNA setelah cedera dan memainkan
peran penting dalam penyelidikan masa depan.

Vitalitas luka dan kadar protein juga dapat dievaluasi menggunakan Western
blotting dan enzim- yang berhubungan dengan uji imunosorben, yang lebih sensitive
daripada imunohistokimia. Selain itu, sebaliknya untuk genomik dan transkriptomik,
proteomik dapat memberikan wawasan tentang peristiwa transduksi sinyal yang secara
langsung mempengaruhi proses biokimia kehidupan. Perbandingan hasil antara
laboratorium, bagaimanapun, terhambat oleh kerumitan prosedur dan kesulitan dalam
mengendalikan kondisi. Microarray protein adalah pemeriksaan tinggi dengan metode
sensitive yang memungkinkan analisis simultan dari beberapa analit protein dalam satu
sampel.

Metode Lain

Mao dkk. menggunakan spektroskopi impedansi listrik untuk mengembangkan alat baru
yang cepat untuk memperkirakan usia luka. Zhang dkk. menggunakan tag isobarik untuk
kuantifikasi relatif dan absolut dalam hubungannya dengan masa kromatografi cair-
spektrometri/massa spektrometri untuk mengidentifikasi protein yang diekspresikan secara
berbeda sebagai biomarker yang andal dari cedera aksonal difus. Metode-metode ini belum
sering digunakan dalam hukum pengobatan tetapi memberikan janji untuk masa depan.

Masing-masing metode memiliki kelebihan dan kekurangan. Ekstravasasi sel darah

merah, yang diperiksa dengan histologi konvensional, dianggap sebagai tanda reaksi vital.
Karena itu juga bisa muncul postmortem, bagaimanapun, bukan penanda vitalitas luka yang
dapat diandalkan. Karena itu, kombinasi parameter morfologi dan molekuler harus
digunakan untuk mengurangi kesalahan saat menentukan waktu di mana luka itu
ditimbulkan. Analisis dengan hasil tinggi, baik pada mRNA atau tingkat protein,
merupakan kemajuan metodologis yang penting.

Biomarker untuk Usia Luka

Cedera Kulit dan Otot Skeletal

Penyembuhan luka merupakan proses kompleks yang terjadi pada respon terhadap cedera
jaringan, termasuk kulit dan otot tisu. Penyembuhan luka terdiri dari fase inflamasi,
proliferatif, dan fase pematangan, yang melibatkan interaksi antara berbagai jenis sel dan
faktor terlarut. Selama fase inflamasi, berbagai kemo-kin dilepaskan di tempat cedera,
menyebabkan perekrutan sel-sel inflamasi, seperti neutrofil, dan makrofag. Pada tahap
proliferasi, re-epitelisasi di kulit, dan granulasi jaringan yang baru terbentuk mulai
menutupi area luka hingga perbaikan jaringan selesai. Di otot rangka, sel satelit, populasi
sel otot induk postnatal, mulai berkembang dan mengalami diferensiasi menjadi miosit.
Mereka kemudian menyatu satu sama lain atau myofibres yang rusak memperbaiki cedera
otot dan jaringan fibrotik.

Infiltrasi oleh sel-sel inflamasi merupakan indicator perbaikan jaringan. Ahli

patologi forensik, tidak seperti ahli patologi umum, cenderung fokus pada memetakan
kemunculan dan hilangnya sel secara kronologis atau zat inflamasi yang disekresikan
selama proses inflamasi. Fenomena ini — mis. proporsi sel positif, tingkat fibrosis jaringan,
dan jarak antara sel inflamasi dan pembuluh bebas — dipengaruhi oleh tingkat cedera, yang
mempengaruhi keakuratan penentuan usia luka. Oleh karena itu, perlu membuat model
dengan tingkat cedera yang berbeda dan menilai parameter yang terlibat dalam
penyembuhan luka untuk menentukan waktu yang tepat dari cedera.

Tingkat mRNA dan protein yang terlibat dalam perbaikan jaringan (misalnya adhesi
molekul, sitokin, kemokin, faktor pertumbuhan) telah diselidiki secara ekstensif. Pada
konteks medikolegal, efek pembusukan pada mRNA dan protein yang menarik merupakan
pertimbangan penting. Beberapa studi menunjukkan bahwa tingkat arginino-suksinat liase
mRNA stabil selama 18 jam postmortem, menunjukkan bahwa sodium yang ebrikata
dengan transporter asam amino netral (SNAT2) stabil selama 48 jam postmortem, dan
protein terkait mikrotubulus 1A/1B-rantai ringan 3 (LC3)-II dan protein sequestosom 1
(p62) stabil selama 4 hari postmortem. Sebaliknya, reseptor cannabinoid tipe-2 mRNA
terdegradasi secara signifikan pada 3 jam postmortem, dan matriks metaloproteinase-2 dan
penghambat jaringan mRNA metalloproteinase-2 secara signifikan terdegradasi pada 12
jam postmortem. Degradasi RNA dan protein yang disebabkan oleh efek postmortem —
terutama pembusukan, dekomposisi, dan pengeringan - tidak bisa dihindari setelah
kematian. Oleh karena itu, perubahan postmortem harus diperhitungkan saat memilih
penanda (yaitu mereka yang levelnya tetap stabil untuk beberapa saat setelah kematian).
Selain itu, kelompok kontrol diperlukan untuk mencegah efek perancu dari interval
postmortem. Perbedaan musim dalam faktor lingkungan juga harus dipertimbangkan.

Penyembuhan luka, merupakan proses yang kompleks, dipengaruhi oleh faktor

eksternal dan internal. Oleh karena itu, tidak ada parameter tunggal yang cukup untuk
memperkirakan usia luka. Penggunaan kombinasi parameter dapat mengurangi kesalahan.
Meskipun penelitian baru-baru ini berfokus pada tingkat ekspresi beberapa penanda, garis
dasar tingkat ekspresi, yang berbeda dari tingkat relatifnya, telah diabaikan. Ekspresi kadar
biomarker harus dinormalisasi ke kelompok kontrol. Ontologi gen dan analisis jalur
memungkinkan identifikasi gen yang diekspresikan secara berbeda, dan gen yang
produknya berfungsi dalam jalur yang sama cenderung memiliki pola ekspresi yang sama.
Dengan demikian, banyak penanda dengan pola ekspresi yang berbeda mungkin diperlukan
untuk mengevaluasi waktu cedera secara akurat.

Selain itu, faktor apa pun dapat dideteksi hanya dalam proporsi kasus pada titik
waktu tertentu setelah luka. Dengan demikian, penanda yang ideal menunjukkan minimal
variabilitas dalam-kelompok atau homogenitas tinggi. Zhu dkk. melaporkan bahwa
pengujian tingkat mRNA beberapa gen referensi sangat penting dalam memperoleh data
yang akurat dan mengurangi variabilitas dalam-grup. Mereka juga berspekulasi bahwa
adenilat/ elemen kaya uridilat di wilayah 3'-tidak diterjemahkan terkait dengan stabilitas
mRNA, dan mRNA tanpa elemen kaya adenilat/uri-dilat menunjukkan nilai variabilitas
yang rendah pada urutan antar individu. Oleh karena itu, struktur dan fungsi penanda
penting dalam menentukan homogenitas penanda.

Tingkat metabolisme adalah indikator langsung dan akurat dari keadaan

patofisiologi suatu organisme. Metabolomik, yang melibatkan pengujian semua berat
molekul biokimia rendah, digunakan untuk mendiagnosis penyakit, menyelidiki mekanisme
patogen, dan menentukan prognosis. Profil metabolik berguna untuk memperkirakan
interval waktu postmortem, tetapi kesesuaiannya untuk menentukan usia luka tidak jelas.
Oleh karena itu, menilai perubahan faktor pada berbagai tingkat penyembuhan luka dapat
memungkinkan identifikasi biomarker yang akan memungkinkan kita untuk menentukan
waktu cedera.

Frekuensi otopsi forensik pada individu diabetes meningkat. Ji dkk. menyelidiki

tingkat ekspresi reseptor untuk produk akhir glikasi lanjut selama penyembuhan luka
diabetes di tikus. Hasil mereka menunjukkan bahwa proses perbaikan luka diabetes berbeda
dengan luka normal, penelitian ini menunjukkan bahwa parameter yang digunakan untuk
menilai usia luka normal mungkin tidak berlaku untuk penderita luka diabetes. Selain
gangguan penyembuhan luka pada penderita diabetes, beberapa penelitian menunjukkan
bahwa penyembuhan pada pasien dengan penyakit pembuluh darah perifer sulit dan
tertunda pada mereka dengan imunosupresi. Oleh karena itu, perlu untuk mengeksplorasi
parameter lain dalam menentukan usia luka pada mereka dengan berbagai keadaan
penyakit (dibandingkan dengan keadaan sehat) yang mempengaruhi penyembuhan luka.

Studi yang melibatkan sampel kulit dan otot rangka dilakukan setelah 2010
diringkas dalam Tabel 1. Jelas dari Tabel 1 bahwa biomarker lebih sering dieksplorasi di
tingkat morfologi dan genetic daripada di tingkat protein. Selanjutnya, reaktivitas histologis
positif dari biomarker umumnya diamati setelah 24 jam, sedangkan perubahan mRNA dan
protein umumnya terdeteksi 12 jam setelah cedera, mengandalkan sensitivitas metode yang
tinggi. Tampaknya tes berdasarkan mRNA dan protein cocok untuk memperkirakan usia
tahap awal luka, sedangkan histologi secara luas dianggap sebagai metode yang dapat
diandalkan untuk mengevaluasi luka stadium lanjut.

Cedera Otak

Sistem saraf pusat (SSP) sangat sensitif terhadap dampak kerusakan mekanik, iskemik, dan
faktor toksik. Jaringan saraf yang rusak melepaskan berbagai zat yang berpotensi sebagai
penanda sejak cedera terjadi. Peradangan pada SSP setelah trauma mirip dengan kulit yang
rusak dan otot rangka, sedangkan reaksi lokal (termasuk migrasi sel glial) khusus untuk
SSP. Kerusakan otak tidak dapat diubah karena neuron tidak dapat diperbarui.
 Cedera otak mekanik sering dikaitkan dengan perdarahan intrakranial, termasuk
epidural, perdarahan subdural, subarachnoid, dan parenkim otak. Hematom-toxylin-eosin
dan pewarnaan imunohistokimia digunakan untuk mengevaluasi usia perdarahan.

Cedera white matter aksonal difus adalah salah satu konsekuensi paling parah dari
cedera otak traumatis dan berhubungan dengan angka kematian yang tinggi. Meskipun
sejumlah besar penelitian mekanisme patofisiologis cedera aksonal difus, diagnosis dininya
cukup bermasalah. Penggunaan prekursor b-amiloid, yang mentranslokasi dari sel saraf
tubuh ke akson perifer melalui mekanisme transpor cepat, dapat dideteksi di lokasi cedera
jika aksonnya terganggu. Prekursor b-Amyloid dilaporkan spesifik, sebagai penanda
kerusakan aksonal yang sangat sensitif.

Pada saat cedera, umum untuk mengamati kebocoran sel darah inflamasi dari yang
jaringan rusak dan aktivasi mikroglial setelah mekanisme stimulasi. Selain itu,
pertumbuhan yang kuat dan propagasi astrosit reaktif menunjukkan bahwa mereka
memiliki peran penting dalam penyembuhan luka. Dinamika gliosit dan sel inflamasi (mis
zat yang mereka lepaskan) telah umum digunakan untuk mengetahui luka otak. Pada tahun
2007, Takamiya dkk. menyarankan bahwa ekspresi bergantung waktu dari 27 sitokin pada
luka serebral dapat membantu memperkirakan usia luka. Sejak 2010, lebih banyak
biomarker tingkat ekspresi telah disurvei oleh beragam teknik untuk penanggalan luka.
Penanda yang digunakan untuk memperkirakan usia luka di otak ditunjukkan pada Tabel 2.

Analisis Data dan Applikasi

Metode yang digunakan untuk mengekstrak informasi yang berguna dari data yang
diperoleh dengan beragam teknik untuk evaluasi usia luka itu penting. Sebagian besar studi
hanya memperkirakan waktu cedera menggunakan indicator pola ekspresi, yang dapat
memberikan hasil bimodal atau multimodal, yang bertentangan untuk usia luka. Untuk
alasan ini, Sun et al. mengembangkan up-regulation/tanpa perubahan/ model down-
regulation yang terdiri dari empat mRNA, yang menghasilkan rentang yang lebih sempit
untuk usia luka. Yagi dkk. menggunakan imunohistokimia untuk mengevaluasi cluster
diferensiasi (CD)-14, Ekspresi CD32B, dan CD68 pada luka kulit manusia, yang
menunjukkan spesifisitas yang lebih besar dan mengurangi rentang usia luka dibandingkan
dengan penilaian menggunakan satu penanda. Selain itu, untuk estimasi usia luka yang
akurat, van de Goot et al. dan Fronczek dkk. mengembangkan sistem penilaian probabilitas
untuk analisis morfologi berbagai indikator. Meskipun metode ini menghasilkan banyak
informasi dan saran kegunaan estimasi usia luka menggunakan penanda multiple, evaluasi
akurat dari waktu cedera terhambat oleh pengaruh skill operator dan banyak faktor yang
terlibat dalam perbaikan jaringan yang cedera.

Memperkirakan waktu luka dengan demikian dipengaruhi oleh variasi individu,

tingkat kerusakan, interval postmortem, dan kondisi penyimpanan sampel. Pemodelan
matematika telah berkontribusi pada analisis sistem kompleks lainnya (misalnya cuaca,
ekonomi) dan dengan demikian juga dapat diterapkan untuk menentukan usia luka dalam
pengaturan forensik.

Permasalahan dan Pandangan Kedepan

Estimasi usia luka telah menjadi fokus penelitian dalam beberapa dekade terakhir.
Menentukan usia luka, khususnya pada tahap awal, sangat tergantung pada pengalaman
dari ahli patologi. Semakin lama seseorang terlibat dalam latihan forensic, semakin besar
pengetahuan tentang berbagai faktor yang mempengaruhi perkiraan usia luka, termasuk
usia dan jenis kelamin almarhum, penyebab kematian, serta keparahan cedera. Bahkan ahli
patologi forensic yang paling berpengalaman , bagaimanapun, akan menyambut baik
pengembangan model hewan dengan luka yang memperhitungkan umur orang yang
meninggal, luasnya kerusakan, usia luka, interval postmortem, musim yang berbeda dengan
perubahan lingkungannya , dan kondisi penyimpanan. Karena informasi tentang sampel
otopsi sering tidak ada atau tidak cukup, model hewan, dengan kondisi standar dan
terkontrol, dan informasi dari sampel kulit diperlukan untuk mendapatkan hasil yang dapat
diandalkan.

Penggunaan beberapa penanda memungkinkan keakuratan dalam penentuan usia

luka yang dapat diandalkan. Perkembangan dalam teknik, khususnya analisis dengan hasil
tinggi, telah memungkinkan analisis simultan dari beberapa mRNA dan protein dalam satu
sampel. Dengan demikian, banyak penanda penyembuhan luka telah diselidiki. Selain itu,
metode untuk menyaring penanda yang sesuai diperlukan. Kombinasi morfologi dan teknik
molekuler — termasuk genomik, proteomik, dan metabolomik — kemungkinan akan
diperlukan untuk mencapai kesimpulan yang objektif.

Sejauh mana hasil dapat diterapkan pada manusia dan berguna untuk
memperkirakan usia luka harus dinilai. Pemodelan matematika telah memberikan panduan
untuk masalah kompleks seperti prakiraan cuaca, meskipun tidak jelas bagaimana faktor-
faktor yang mempengaruhi mereka dapat berinteraksi dengan faktor munculnya luka.
Metcalf dkk. mengembangkan model matematika untuk mengevaluasi interval waktu
postmortem dan memperoleh hasil yang menjanjikan. Karena perkiraan usia luka
dipengaruhi oleh faktor yang beragam, model matematika apa pun harus berdasarkan data
dari studi hewan skala besar, menggunakan hasil dari sampel otopsi manusia untuk
kalibrasi.

Kesimpulan

Jelas bahwa kemajuan dalam estimasi usia luka telah dibuat selama beberapa tahun
terakhir. Dengan kemajuan teknologi, akses data menjadi lebih mudah, dan banyak
parameter tergantung waktu telah dieksplorasi. Meskipun kombinasi dari beberapa penanda
telah menerima perhatian kritis yang cukup besar, belum ada sistem atau model yang
diusulkan untuk digunakan sebagai penanda seperti untuk penuaan luka. Tantangan saat ini
adalah bagaimana menganalisis dan memanfaatkan data yang telah diperoleh dan
menerapkan hasilnya.