Kloning

Kloning
• Kloning adalah metode untuk mengopy genetik
(sangat sama).
• Domba Dolly dikembangkan pada tahun 1996.
 DNA kloning
• Mengopi bagian dari DNA.
Molekular kloning
• Kloning adalah Teknik pada molecular biologi untuk
membuat beberapa copy DNA yang banyak dan
identik dari DNA.
• Pada kloning, sebuah gene dimasukan pada bagian
circular DNA yang disebut dengan plasmid.
• Plasmid dimasukkan ke dalam bakteri melalui
proses yang disebut dengan tranformasi.
• Bakteri membawa plasmid.
• Bakteri yang mengandung plasmid yang tepat akan
menggunakan plasmid atau DNA untuk ekspresi
gen atau membuat protein.
 Kloning DNA

• Kloning DNA adalah untuk membuat beberapa DNA yang

memiliki persamaan yang identik dari bagian dari DNA
• Prosedurnya melalui “cut and paste”.
• Perlunya mengkopi DNA untuk melakukan eksperimen atay
membentuk plasmid baru.
• Insulin pada manusia diekspresikan pada bakteri E.coli
untuk membuat insulin yang digunakan untuk penderita
diabetes.
Langkah Pada Kloning DNA
• Memotong plasmid DNA dan mengkopi gene DNA.
• Prosesnya menggunakan restriction enzim dan
ligase DNA.
• Pemilihan antibiotik untuk mengidentifikasi bakteri
yang mengandung plasmid.
• Plasmid yang dibawa oleh bakteri dan digunakan
untuk menghasilkan protein.
Amplifikasi dari Rekombinan DNA
• Penemuan dari restriction enzim berfungsi untuk
mengontrol pada rekombinan DNA.
 Cutting and Pasting DNA
• Restriction enzim adalah enzim yang digunakan untuk
memotong DNA pada target sequence yang spesifik
dan memotong dua bagian DNA pada sisi yang tepat.
•

• Restriction Enzyme memotong DNA secara asimetris,

memotong DNA dan menghasilkan bagian single strand
DNA yang disebut dengan sticky end.
Cutting and Pasting DNA
 Transformasi

• Bakteri dicampur dengan DNA.

• Bacteria diberikan pemanasan yang mengakibatkan
plasmid menembus membrane dan dinding sel.
• Plasmid menggunakan resisten antibiotik.
Transformasi
 Transformasi
• Bacteria yang tidak mengandung plasmid akan
mati.
• Bacteria yang mengandung plasmid akan
berkembang biang dan membentuk kelas-kelas
yang identik.
• Plasmid yang mengandung bacteria dinamakan
dengan koloni.
• Beberapa koloni dicek dan diidentifikasi
menggunakan PCR
• Koloni yang mengandung plasmid yang baik akan
berkembang dang digunakan untuk menghasilkan
protein.
Transformasi
 Pentingnya mengecek koloni
• Ketika kita memotong dan menempelkan DNA, ada
beberapa kemungkinan.
Pentingnya mengecek koloni
 Pentingnya mengecek koloni
• Untuk mengekspresikan DNA untuk membuat
protein.
• Gen harus pada arah yang tepat pada sisi promotor
atau sequence control yang mengarah pada
ekspresi gen.
 Review
• Apakah yang dimaksud dengan blund end dan
sticky end.
• Jelaskan dengan Bahasa kalian apakah yang
dimaksud dengan cloning?