Kelompok 5

Dosen Pengampu:
Apt. Etin Permanasari, S.Si.,M.Eng, Ph.D
Teknik Isolasi Sampel DNA
Kromosom
PRINSIP

Prinsip isolasi DNA adalah

mendapatkan DNA murni yang
tidak tercampur dengan
komponen sel lainnya seperti
protein dan karbohidrat
 Cara Kerja
Pertama
1. Bakteri ditumbuhkan pada medium LB,digojog pada suhu 37C,selama 1 malam.
2. 15 ml kultur disentrifugasi 3000 rpm 15 menit, pada suhu 4C.
3. Supernatan dibuang, pada pelet ditambahkan 750 µl buffer lisis( 100mM Tris HCl
pH 8,100mMCl,50 mM EDTA,2% SDS ), lalu divortek.
4. 10 µl ( 10 mg/ml) Proteinase-K ditambahkan.
5. Diinkubasi pada suhu 55 C selama 30 menit.
6. Disentrifugasi dengan kecepatan 3.000 rpm, selama 15 menit, pada suhu 40 C.
7. Dipindahkan supernatannya pada tabung eppendorf 1,5 ml.
8. Kemudian ditambahkan 700 µl phenol, digojog pelan.
9. Disentrifugasi 12000 rpm selama 10 menit, lapisan atas dipindahkan dalam tabung
eppendorf 1,5 ml.
10. Ditambahkan etanol dingin, perbandingan 1:1 (v/v), dicampur pelan-pelan sehingga
timbul benang-benang halus DNA.
11. Benang-benang halus DNA diambil dan dicuci dengan etanol 70%
12. Disentrifugasi 12000 rpm, 10 menit,supernatan dibuang, pelet dikeringkan.
13. Ditambahkan TE, hingga volume 200 ml
Cara Kerja Ke Dua

L a n g k a h ke d u a a d a l a h
m e l a k u k a n p ro s e d u r
d i g e s t i k ro m o s o m
dengan Eco RI
 Tahapan menganalisa DNA

Pelisisa Purfikas Presipitasi

n i Ekstrak DNA
Memecahkan Memurnikan diendapkan
dinding dan DNA dari dan murni dari
membran sel kontaminasi segala
kontaminasi
HASIL

kromosom
 Kesimpulan
Berdasarkan hasil dan pembahasan sebelumnya dapat diambil kesimpulan bahwa :

1. Hasil dalam isolasi DNA kromosom bakteri didapat hasil berupa terbentuknya endapan dan

supernatan setelah sentrifugasi selama dua tahap yang menandakan terpisahnya DNA dengan sel dan

remukan sel.

2. Isolasi DNA memiliki beberapa tahapan, yaitu isolasi sel,lisis dinding dan membran sel,ekstraksi

dalam larutan,purifikasi,dan presipitasi.

 Daftar Pustaka
Kasriati Heruningsih. 2013. Laporan Biologi Molekuler Isolasi DNA Kromosom Bakteri. Purwokerto.
Universitas Jendral Soedirman

Hidayah Murtiyaningsih. 2017.ISOLASI DNA GENOM DAN IDENTIFIKASI KEKERABATANGENETIK

NANAS MENGGUNAKAN RAPD (RANDOM AMPLIFIEDPOLIMORFIC DNA. Volume 15(1).
http://jurnal.unmuhjember.ac.id/index.php/AGRITROPEI

Mukhlissul Faatih. 2009.ISOLASI DAN DIGESTI DNA KROMOSOM

ISOLATION AND DIGESTION OF CHROMOSOMAL DNA. Surakarta. Jurnal Penelitian Sains &
Teknologi, Vol. 10, No. 1, 2009: 61 - 67