Machine Translated by Google

Ilmu Farmasi Ilmiah Acta (ISSN: 2581-5423)

Jilid 6 Edisi 9 September 2022
Mengulas artikel

Kromatografi Lapis Tipis (KLT) VS. Kromatografi Kertas: Suatu Tinjauan

Shashank Tiwari1* dan Shreya Talreja2

1
Diterima: 08 Juli 2022
Profesor, Direktur (Akademik dan Penelitian), Lucknow Model College of
Diterbitkan: 17 Agustus 2022
Apotek, Lucknow, India
2 © Semua hak dilindungi oleh Shashank Tiwari
M.Pharm, Institut Farmasi dan Sains Goel, Lucknow, India
dan Shreya Talreja.
*Penulis Koresponden: Shashank Tiwari, Profesor, Direktur (Akademik dan
Penelitian), Sekolah Tinggi Farmasi Model Lucknow, Lucknow, India.

DOI: 10.31080/ASPS.2022.06.0894

Abstrak
Dalam bidang kimia analitik dan berbagai bidang farmasi teknik pemisahan banyak digunakan untuk mempelajari senyawa tertentu dari
suatu campuran atau bahan kompleks. Salah satu teknik pemisahan tersebut disebut Kromatografi. Hal ini terjadi berdasarkan volume relatif
masing-masing zat terlarut yang ada dalam aliran fluida yang bergerak. Penemuan kromatografi dilakukan oleh Mikhail S. Tsvet yang
merupakan seorang ahli botani Rusia pada tahun 1901. Pemisahan dilakukan melalui fase diam dan fase gerak. Kromatografi digunakan
untuk pemisahan, analisis, dan pemurnian berbagai komponen yang dapat mencakup makanan, pestisida, obat-obatan, ekstrak jaringan,
dll. Dalam makalah ini dibahas 2 jenis utama kromatografi; ini termasuk Kromatografi Kertas dan Kromatografi Lapis Tipis. Prinsip-prinsip
kedua jenis tersebut akan dibahas dan kontras antara keduanya akan ditetapkan dalam sebuah tabel
format.

Kata Kunci: Analitik; Farmasi; Kromatografi; Fase Seluler; Fase Stasioner

Perkenalan dapat digunakan secara efektif untuk tujuan pemisahan, analisis, dan

Kromatografi adalah teknik yang digunakan untuk memisahkan zat pemurnian berbagai komponen yang dapat mencakup makanan,

terlarut atau komponen yang ada dalam suatu campuran. Pemisahan pestisida, obat-obatan, ekstrak jaringan, serta sampel udara dan air.

ini terjadi berdasarkan volume relatif masing-masing zat terlarut yang

ada dalam aliran fluida yang bergerak, yang dikenal sebagai fase
Teknik ini banyak digunakan di banyak bidang farmasi dan kimia
gerak, dan juga terdapat dalam fase diam. Fase gerak dapat terdiri
karena ketepatan dan penerapannya di bidang tersebut. Beberapa
dari cairan atau gas dan fase diam terdiri dari padatan atau cairan.
kegunaan penting Kromatografi adalah sebagai berikut:
Penemuan kromatografi dilakukan oleh Mikhail S. Tsvet yang
merupakan seorang ahli botani asal Rusia. Pada tahun 1901, Tsvet
menemukan dasar pemisahan fisikokimia dan menerapkannya secara • Kromatografi dan pembuatan obat: Dalam industri farmasi, obat
ilmiah untuk memisahkan pigmen tumbuhan [1]. Dia secara khusus diproduksi terutama dengan menggunakan kromatografi cair
berfokus pada karotenoid dan klorofil tanaman. kinerja tinggi. Teknik ini dianggap tepat untuk pemisahan
Karena ia melakukan penelitian terutama pada komponen warna pada senyawa sebelum karakterisasi dalam pembuatan obat. Teknik
tumbuhan, maka ia menamakan metode ini sebagai kromatografi yang ini menentukan komposisi kuantitatif berbagai senyawa
juga berasal dari kata Yunani. Kromatografi

Kutipan: Shashank Tiwari dan Shreya Talreja. “Kromatografi Lapis Tipis (KLT) VS. Kromatografi Kertas: Suatu Tinjauan". Acta Scientific Pharmaceutical
Sciences 6.9 (2022): 05-09.
Machine Translated by Google
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) VS. Kromatografi Kertas: Suatu Tinjauan
dalam suatu obat. Oleh karena itu, ini banyak digunakan dalam
pengujian kendali mutu obat. Kromatografi jenis ini juga digunakan
dalam karakterisasi obat [2]. Ini juga digunakan dalam pemurnian
produk selama berbagai tahap sintesis, menggunakan proses
otomatis modern secara tepat waktu. Latihan ini menghasilkan
produk akhir yang lebih halus.
• Kromatografi dan pengujian obat-obatan: Kromatografi banyak
digunakan dalam pengujian obat-obatan oleh berbagai badan
hukum seperti polisi dan forensik. Dalam pengujiannya, cairan
tubuh seperti darah atau urin diuji menggunakan kromatografi
untuk memisahkan senyawa alami yang dihasilkan dari pemecahan
metabolisme bahan yang tertelan. Dalam pengujian obat, sampel
urin lebih disukai daripada sampel darah karena sebagian besar
senyawa obat memiliki waktu paruh yang relatif lebih pendek di
dalam darah dibandingkan di urin. Dalam urin banyak senyawa
obat yang dapat dideteksi bahkan setelah beberapa bulan
dikonsumsi. Senyawa ini dapat mencakup cannabinoid, opiat, dan
kokain. Sedangkan pengujian kromatografi dipasangkan dengan
spektrometri massa senyawa untuk mendapatkan hasil yang
otentik. Untuk analisis kuantitatif obat dalam sampel urin biasanya
digunakan spektrometri massa kromatografi gas atau spektrometri
massa kromatografi cair. Kromatografi gas-spektrometri massa
memerlukan lebih banyak waktu dan memakan sampel, namun ia
mendeteksi lebih banyak senyawa yang ada dalam sampel.
• Kromatografi dalam produksi vaksin: Selama pembuatan atau
tahap akhir produksi, banyak vaksin yang dimurnikan menggunakan Kromatografi kertas
teknik kromatografi.
Kromatografi juga dapat digunakan untuk mengisolasi antigen
yang diinginkan dari vaksin yang kemudian dapat diamplifikasi
untuk produksi massal. Misalnya, protein lonjakan virus corona
SARS baru-baru ini diisolasi menggunakan teknik kromatografi
cair yang memungkinkannya diproduksi dalam jumlah besar.
Isolasi ini memungkinkan para peneliti untuk melakukan banyak
tes pada protein yang diisolasi yang membantu mereka memahami
karakteristik struktural dan biokimia dari protein tersebut.
Pemahaman ini membantu dalam pembuatan vaksin yang dapat
melawan virus secara efektif. Kromatografi ampuh dalam
memisahkan komponen yang diinginkan dari produk sampingan
yang ada dalam media pertumbuhan sehingga memungkinkan
para peneliti untuk mengisolasi virus yang tidak aktif atau dilemahkan yang dapat digunakan
antigen untuk membuat vaksin yang efektif.
Kutipan: Shashank Tiwari dan Shreya Talreja. “Kromatografi Lapis Tipis (KLT) VS. Kromatografi Kertas: Suatu Tinjauan". Acta Scientific Pharmaceutical
Sciences 6.9 (2022): 05-09.
06
• Kromatografi dalam analisis bahan pangan: Karena proses
pemanenan, produk pangan umumnya mengandung campuran
senyawa kompleks yang jumlahnya banyak. Senyawa-senyawa
ini dapat terbentuk secara alami atau didapat saat diproses. Untuk
tujuan menganalisis kombinasi kompleks senyawa yang ada
dalam makanan, kromatografi digunakan. Kromatografi dapat
membantu para peneliti untuk memisahkan campuran kompleks
ini untuk mengetahui komposisinya lebih dalam. Hal ini menjadi
penting pada jenis makanan yang mempunyai konsentrasi tinggi
beberapa senyawa tertentu dalam makanan. Misalnya, produk
apa pun yang berbahan dasar tumbuhan dapat mengandung
beberapa bagian pestisida berbahaya yang dapat dipisahkan
dengan bantuan kromatografi. Selain itu, pada makanan non-
vegetarian mana pun, terdapat kandungan obat hewan di dalam
daging hewan yang dapat membahayakan konsumsi manusia.
Oleh karena itu, kromatografi banyak digunakan untuk analisis
produk makanan. Selain itu, kromatografi membantu pengendalian
kualitas produk makanan dengan mendeteksi potensi pengotor
beracun di dalamnya. Teknik ini juga digunakan untuk pembuatan
profil nutrisi makanan dengan memungkinkannya distandarisasi
dan diautentikasi.
Dua jenis utama kromatografi yaitu Kromatografi Kertas dan
Kromatografi Lapis Tipis akan dibahas
sebagai berikut.
Kromatografi bekerja pada pemisahan senyawa berdasarkan
polaritasnya terhadap fase gerak atau fase diam. Oleh karena itu, teknik
ini bersifat analitis. Untuk memisahkan padatan dan cairan digunakan
kromatografi kertas dimana kertas saring selulosa sebagai fasa diamnya
dan cairan sebagai fasa geraknya. Teknik kromatografi kertas ditemukan
pada tahun 1943 oleh Synge dan Martin [3]. Teknik ini berfungsi pada
jenis kertas tertentu sehingga disebut teknik kromatografi planar. Kertas
selulosa digunakan dalam teknik ini yang bertindak sebagai fase diam
dan membantu pemisahan senyawa.
Prinsip kromatografi kertas [4-6]
Kromatografi kertassebagai virus.
melibatkan prinsip partisi, yang mendistribusikan
berbagai komponen antar fase cair.
Machine Translated by Google
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) VS. Kromatografi Kertas: Suatu Tinjauan
Dalam hal ini, fase diam yang merupakan kertas saring, menampung
pelarut berair. Fase gerak bergerak di atas kertas. Proses pemisahan
ini dimungkinkan karena aksi kapiler pori-pori.
Keramahan komponen-komponen ini dengan air menentukan besarnya
pemisahan. Dalam metode lain, pemisahan dapat terjadi berdasarkan
adsorpsi. Dalam adsorpsi, permukaan kertas berperilaku seperti fase
diam dan pelarut cair berperilaku seperti fase gerak. Oleh karena itu,
adsorpsi sebenarnya terjadi antara fase padat dan cair. Kromatografi
kertas menemukan penerapannya di berbagai industri farmasi.
Penerapannya luas karena hemat biaya dibandingkan metode lain.
Ini memisahkan komponen terlarut berdasarkan tingkat migrasi melalui
kertas selulosa. Namun, agar hasilnya paling akurat, sampelnya harus
tepat dan akurat
menit.
Fase stasioner
Kromatografi kertas disebut juga kromatografi partisi. Dalam
kromatografi jenis ini kegunaan fase gerak dan fase diam memiliki
penerapan yang sangat besar. Hal ini juga berfokus pada fakta bahwa
tidak ada aturan khusus untuk fase-fase yang tidak dapat bercampur.
Klasifikasi jenis fasa diam adalah sistem berair, hidrofilik, dan hidrofobik. pemilihan yang optimal, karakteristik komponen serta fase diam yang
Fase diam berair
Kertas mempunyai sifat menahan air. Oleh karena itu, dalam teknik
ini kertas yang telah disetimbangkan dengan air dilekatkan pada
kertas suspensi di dalam ruang tertutup yang atmosfernya benar-
benar jenuh air. Jika terdapat kebutuhan akan fasa garam atau buffer
berair maka kertas ini dipindahkan melalui larutan dan setelah itu
diekspos ke bagian ruangan yang memiliki atmosfer jenuh air. Jenis
fase diam ini paling baik bila pemisahan dilakukan untuk campuran
polar (sedang hingga tinggi).
Fase diam hidrofilik
Fase diam hidrofilik terdiri dari pelarut organik.
Di sini, indikator utama pemisahan senyawa apa pun adalah volatilitas
pelarut organik. Namun, jika pelarut organik ditemukan cukup mudah
menguap maka kertas diseimbangkan dalam atmosfer jenuh pelarut
dalam ruangan. Dalam metode yang berbeda, pelarut fase diam
dilarutkan dalam larutan yang sangat tinggi
Kutipan: Shashank Tiwari dan Shreya Talreja. “Kromatografi Lapis Tipis (KLT) VS. Kromatografi Kertas: Suatu Tinjauan". Acta Scientific Pharmaceutical
Sciences 6.9 (2022): 05-09.
07
pengencer yang mudah menguap yang menguap yang mendistribusikan
cairan fase diam secara merata ke seluruh kertas. Beberapa pelarut
hidrofilik yang paling umum adalah metanol, formamida, gliserol dan
glikol.
Fase diam hidrofobik
Agar kertas bersifat hidrofobik perlu diolah terlebih dahulu sehingga
dapat menggambarkan sifat mempertahankan fasa diam hidrofobik.
Teknik ini menggunakan metode tetesan dimana kesetimbangan
pelarut dilakukan dengan uap.
Selain itu, campuran pelarut dan pengencer yang mudah menguap dipilih
untuk membuat pelarut hidrofobik bereaksi dengan kertas. Beberapa
pelarut yang umum digunakan adalah minyak tanah, dimetilformamida,
hidrokarbon aromatik dan alifatik.
Fase seluler
Dalam proses kromatografi kertas, fase gerak dapat digunakan
dalam berbagai kombinasi. Namun, proses pemilihan eluting optimum
yang diperlukan hanya dapat dilakukan melalui trial and error karena
tidak ada cara khusus untuk memilihnya. Namun, ada pedoman
khusus yang dapat dijadikan acuan saat melakukan seleksi dan juga
untuk memperkirakan kondisi elusi. Misalnya, untuk mendapatkan
digunakan dalam campuran harus dipelajari dengan baik. Dalam
kromatografi jenis ini, pelarut organik yang dicampur dengan air
bertindak seperti sistem pelarut. Namun, untuk mengontrol ionisasi
analit, dapat dilakukan penambahan beberapa asam atau basa.
Beberapa asam yang digunakan dapat berupa HCl, HNO3 dan asam asetat,
sedangkan basa seperti NH3 juga dapat digunakan untuk mengontrol ionisasi.
Untuk tujuan identifikasi senyawa yang lebih baik, berbagai kombinasi
sistem pelarut digunakan. Hal ini didasarkan pada sifat kimia senyawa
tersebut.
Kromatografi lapis tipis
Metode kromatografi ini menggunakan adsorpsi padat-cair untuk
tujuan mengisolasi campuran yang tidak mudah menguap. Dalam
metode ini, fase geraknya berbentuk cair tetapi fase diamnya adalah
pelat kaca berlapis silika gel. Polaritas partikel terhadap fase-fase ini
(bergerak dan diam) membantu pemisahannya satu sama lain.
Teknik kromatografi ditemukan pada tahun 1906 oleh M. Tswettin.
Prosedur kromatografi lapis tipis umumnya menggunakan lembaran
plastik, kaca atau alumunium foil
Machine Translated by Google
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) VS. Kromatografi Kertas: Suatu Tinjauan
ditutupi dengan lapisan tipis bahan penyerap, biasanya selulosa, silika gel,
aluminium oksida. Lapisan yang dilapisi ini dikenal sebagai fase tetap
(diam). Proses ini mengikuti langkah-langkah berikut:
• Pertama-tama, sampel diaplikasikan pada pelat kaca yang
merupakan fase diam.
•Suatu pelarut atau campuran dari pelarut-pelarut ini yang terdiri dari fase
gerak disusun pada pelat kaca melalui aksi kapiler.
•Karena ini, banyak analit mulai berpindah ke kaca
pelat (fase diam) dengan laju yang berbeda-beda.
•Pergerakan analit ini mengakibatkan pemisahan senyawa. Hal ini terjadi
karena turunnya berbagai analit ke dalam pelat fasa diam dengan
laju yang berbeda-beda pada proses kromatografi lapis tipis.
TLC telah digunakan secara luas oleh para peneliti untuk menganalisis
kemajuan suatu reaksi, menemukan berbagai komponen yang membentuk
campuran apa pun, dan juga untuk memeriksa kemurnian senyawa apa
pun. Pada proses ini terjadi perselisihan antara zat terlarut dan fasa gerak
agar dapat berikatan dengan fasa diam (diam). Perselisihan ini menyebabkan sifat campuran. Kromatografi lapis tipis bekerja berdasarkan prinsip
pemisahan komponen-komponen yang diinginkan. Misalnya, jika pada fase
diam digunakan silika gel, maka silika tersebut bersifat polar. Oleh karena
itu, jika digunakan dua senyawa yang mempunyai polaritas berbeda satu
sama lain, maka senyawa yang lebih polar akan lebih banyak bereaksi
dengan silika. Karena reaksi ini
DASAR Kromatografi Kertas
Mendalilkan
Hal ini didalilkan berdasarkan prinsip kromatografi partisi
Fase Stasioner
Fase diam terbuat dari kertas selulosa.
Fase Seluler Ada dua jenis fase gerak-
Hidrofilik: Ini termasuk senyawa seperti amonia, metanol, air dan
isopropanol
(Hidrofobik: Ini termasuk senyawa seperti dimetil eter, minyak tanah,
sikloheksana, dan isopropanol
Waktu persiapan
Waktu persiapan yang dibutuhkan lebih sedikit
Kebutuhan panas
Panas tinggi tidak diperlukan, oleh karena itu tidak perlu
pemanasan kertas dalam waktu lama di dalam oven.
Sampel diperlukan Jumlah sampel yang dibutuhkan lebih sedikit.
Silika Gel
Silika gel tidak diperlukan
Kutipan: Shashank Tiwari dan Shreya Talreja. “Kromatografi Lapis Tipis (KLT) VS. Kromatografi Kertas: Suatu Tinjauan". Acta Scientific Pharmaceutical
Sciences 6.9 (2022): 05-09.
08
senyawa yang lebih polar akan mampu menghilangkan fase gerak dari
tempat pengikatannya dengan mudah.
Selanjutnya, senyawa yang kurang polar cenderung berpindah tinggi ke
pelat kaca sehingga disimpulkan bahwa nilai Rf meningkat. Meskipun
demikian, jika tahap gerak disesuaikan dan dibuat dengan kombinasi
pelarut yang lebih polar maka zat terlarut akan terdispersi dari pembatasan
silika. Dengan cara ini, semua campuran pada pelat kromatografi lapis tipis
akan naik tinggi. Misalnya, jika kombinasi etil asetat dan heptana digunakan
sebagai tahap gerak, maka penambahan lebih banyak asam etil asetat
akan menghasilkan nilai Rf yang tinggi untuk setiap campuran. Namun,
setiap penyesuaian polaritas tahap gerak pada umumnya tidak menghasilkan
pergerakan sebaliknya dari senyawa pada pelat KLT.
Prinsip TLC
Pada kromatografi jenis ini, untuk keperluan fasa diam digunakan pelat
kaca yang biasanya dilapisi dengan silika gel atau aluminium oksida.
sedangkan untuk fase gerak digunakan pelarut yang dipilih berdasarkan
distribusi suatu senyawa antara fase diam padat dan fase gerak cair.
Perbandingan antara Kromatografi Kertas dan Kromatografi Lapis
Tipis (KLT) [7-10]
Kromatografi Lapis Tipis
Hal ini didalilkan pada prinsip kromatografi adsorpsi
Fase diam terdiri dari pelat kaca berlapis silika.
Fase gerak meliputi senyawa seperti gliserol,
karbon tetraklorida, piridin dan
aseton.
Diperlukan waktu persiapan yang relatif lebih
lama
Kebutuhan panasnya tinggi sehingga pelat KLT
dipanaskan lebih lama di dalam oven.
Jumlah sampel yang dibutuhkan lebih banyak.
Silika gel digunakan
Machine Translated by Google

Kromatografi Lapis Tipis (KLT) VS. Kromatografi Kertas: Suatu Tinjauan

09

Fisik Pemisahan secara fisik tidak dilakukan. Pemisahan

Hal ini sebagian besar dapat dilakukan dengan menggunakan teknik menaik
Pemisahan dilakukan dengan teknik descending.

Pemisahan
Cocok untuk senyawa yang larut dalam air polar Cocok untuk senyawa yang kurang polar
efisiensi
Waktu
Pemisahan partikel terjadi dengan cepat. Pemisahan partikel membutuhkan waktu lebih lama.

Analisis UV
Analisis sinar ultraviolet tidak dapat dilakukan. Analisis sinar ultraviolet dimungkinkan.

Biaya
Dibutuhkan lebih sedikit biaya Dibutuhkan lebih banyak biaya

Tabel 1

Kesimpulan Bibliografi
Ada banyak teknik pemisahan yang digunakan untuk memisahkan dan 1. Bele AA dan Khale A. “Ikhtisar kromatografi lapis tipis”. Jurnal Internasional Ilmu
mempelajari senyawa tertentu dari suatu campuran atau bahan yang kompleks. dan Penelitian Farmasi 2.2 (2011): 256.
Dalam makalah ini dibahas dua teknik kromatografi utama yaitu: (1) Kromatografi

Kertas (2) Kromatografi Lapis Tipis. Ini adalah metode ilmiah yang digunakan untuk
2. Dr D. “Apa kelebihan kromatografi lapis tipis dibandingkan kromatografi kertas?”
mengisolasi partikel berdasarkan kompatibilitasnya dengan fase gerak dan fase
Auriga Research Swasta terbatas. (20115): 1-10.
diam. Dari kedua jenis kromatografi tersebut, kromatografi kertas digunakan bila

diperlukan partisi padat-cair. Dalam teknik ini fase diam dan fase gerak masing-

masing adalah kertas saring selulosa dan cairan. Metode ini merupakan adsorpsi 3. Gupta M., dkk. “Kromatografi Kertas: Suatu Tinjauan”. JETIR 5.10

padatan dan cairan. Teknik ini sangat berguna untuk pemisahan dan analisis (2018): 2349-5162
senyawa yang memiliki kombinasi non-volatil. Pada kromatografi lapis tipis terdapat 4. G Zweig dan J Sherma. “Kromatografi Kertas—Dulu, Sekarang, dan Masa
fasa tetap (diam) yang terdiri dari pelat kaca yang dilapisi silika gel dan fasa gerak Depan”. Jurnal Ilmu Kromatografi 11.6 (1973): 279-283.
lainnya berupa cairan.

5.MG Rasul. “Ekstraksi, Isolasi dan Karakterisasi Produk Alami dari Tanaman
Obat”. Jurnal Internasional Ilmu Pengetahuan Dasar dan Komputasi Terapan
2.6 (2011): 1-6.
Dalam teknik ini juga seperti kromatografi kertas, isolasi komponen didasarkan

pada kesesuaiannya dengan fase gerak dan fase diam. Kedua teknik ini digunakan 6. PW Smit., dkk. “Gambaran umum penggunaan klinis kertas saring dalam
diagnosis penyakit tropis”. Jurnal Pengobatan dan Kebersihan Tropis Amerika
secara luas dalam kimia analitik dan ilmu pengetahuan lainnya karena keduanya
90.2 (2014): 195-210.
memiliki keunggulan masing-masing.
7. O. Coskun, “Teknik pemisahan: kromatografi”.
Klinik Utara Istanbul 3.2 (2016): 156.
Sumber Pendanaan
8. Singhal S., dkk. “Analisis Farmasi II”. Kromatografi lapis tipis, Pragati prakashan,
Didanai Sendiri.
Edisi pertama (2009): 98-
111.
Konflik kepentingan
Nol. 9. Vidya Sagar. “Metode instrumental analisis obat”. Pharma Med Press, Edisi
pertama (2009): 263.

Pengakuan
10. W Wolfson., dkk. “Peralatan dan prosedur yang ditingkatkan untuk kromatografi
Penulis mengucapkan terima kasih kepada semua mentornya. Makalah yang
kertas ascending pada lembaran kertas saring ukuran besar ”. Sains
dikumpulkan di sini dikumpulkan selama periode waktu tertentu dan mungkin telah 109.2839 (1949): 541-543.
direproduksi kata demi kata. Mohon maaf kepada semua peneliti jika secara tidak

sengaja gagal mencantumkan nama mereka dalam referensi.

Kutipan: Shashank Tiwari dan Shreya Talreja. “Kromatografi Lapis Tipis (KLT) VS. Kromatografi Kertas: Suatu Tinjauan". Acta Scientific Pharmaceutical
Sciences 6.9 (2022): 05-09.