Perbedaan utama antara sandwich Elisa dan Elisa kompetitif adalah bahwa

ELISA sandwich adalah jenis ELISA yang biasa digunakan untuk mendeteksi dan
mengukur antigen dalam immunoassay, sedangkan ELISA kompetitif adalah jenis
Elisa yang biasa digunakan untuk mendeteksi dan mengukur antibodi dalam
immunoassay.

Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) adalah teknik immunoassay yang

mendeteksi penyakit. Sandwich dan ELISA kompetitif adalah dua jenis ELISA utama
yang digunakan dalam diagnostik. Jenis utama ELISA meliputi ELISA langsung,
ELISA tidak langsung , ELISA sandwich, dan ELISA kompetitif. Selain itu, semuanya
memerlukan penggunaan tag fluoresen , chemiluminescent , atau kolorimetri . Tag
ini dikenal sebagai reporter dan digunakan untuk mengukur pengujian.

Apa itu Sandwich Elisa?

Sandwich ELISA adalah jenis ELISA yang biasa digunakan untuk mendeteksi dan
mengukur antigen dalam immunoassay. Ini adalah jenis uji imunosorben terkait-
enzim yang menggunakan dua antibodi: antibodi penangkap dan antibodi
pendeteksi. Dalam teknik ini, antigen dalam sampel diikat di antara antibodi. Tujuan
ELISA adalah untuk mendeteksi keberadaan antigen target dalam suatu sampel.
Oleh karena itu, dalam kasus sandwich ELISA, antigen target terikat antara antibodi
penangkap dan antibodi pendeteksi. Pada awal prosedur, antibodi penangkap sudah
diimobilisasi di permukaan. Namun, antibodi pendeteksi diterapkan sebagai langkah
terakhir sebelum kuantifikasi. Kedua antibodi dalam sandwich ELISA berikatan pada
tempat berbeda pada antigen target. Lebih-lebih lagi,
Gambar 01: Sandwich Elisa

Langkah-langkah dalam sandwich ELISA antara lain melapisi permukaan dengan

antibodi penangkap, memblokir sisi pengikatan protein yang tidak terikat pada
permukaan, menambahkan sampel yang mengandung antigen target,
menambahkan antibodi pendeteksi berlabel konjugat, dan deteksi. Keunggulan
teknik ini adalah spesifisitasnya yang tinggi dan sensitivitasnya yang tinggi. Namun,
kelemahan utamanya adalah interaksi antara antibodi penangkapan dan deteksi.

Apa itu Elisa Kompetitif?

ELISA kompetitif adalah jenis ELISA yang biasa digunakan untuk mendeteksi dan
mengukur antibodi dalam immunoassay. Ini adalah teknik yang juga dikenal sebagai
ELISA penghambatan . Dalam ELISA kompetitif, antigen sampel bersaing dengan
antigen referensi untuk berikatan dengan sejumlah antibodi berlabel tertentu.
Gambar 02: Elisa Kompetitif

Antigen referensi dilapisi terlebih dahulu pada permukaan pelat multi-sumur.

Kemudian antigen sampel diinkubasi terlebih dahulu dengan antibodi berlabel yang
ditambahkan ke dalam sumur. Tergantung pada jumlah antigen dalam sampel (lebih
atau kurang), antibodi bebas akan tersedia untuk mengikat antigen referensi. Sinyal
yang lebih lemah menunjukkan bahwa lebih sedikit antigen referensi yang akan
terdeteksi ketika terdapat lebih banyak antigen dalam sampel. Keunggulan teknik ini
adalah kesesuaian untuk mendeteksi antigen kecil, kesesuaian untuk mendeteksi
sampel kompleks, spesifisitas tinggi, dan sensitivitas tinggi. Namun, hal ini
mempunyai beberapa kelemahan, seperti perlunya pelabelan antibodi untuk setiap
ELISA, yang dapat mengakibatkan inaktivasi antibodi dan penurunan sinyal seiring
dengan peningkatan antigen target.

Apa Persamaan Antara Sandwich Elisa dan Elisa Kompetitif?

Sandwich dan ELISA kompetitif adalah dua jenis ELISA utama yang digunakan di
laboratorium diagnostik.

Kedua teknik tersebut menggunakan interaksi antigen-antibodi.

Teknik ini menggunakan penanda fluoresen, chemiluminescent, atau kolorimetri

yang disebut reporter.

Kedua teknik ini tidak mahal.

Apa Perbedaan Antara Sandwich Elisa dan Elisa Kompetitif?

Sandwich ELISA umumnya digunakan untuk mendeteksi dan mengukur antigen

dalam immunoassay, sedangkan ELISA kompetitif biasanya digunakan untuk
mendeteksi dan mengukur antibodi dalam immunoassay. Jadi, inilah perbedaan
utama antara sandwich Elisa dan Elisa yang kompetitif. Selanjutnya sandwich ELISA
menggunakan dua antibodi, sedangkan ELISA kompetitif menggunakan dua antigen.

Infografis di bawah ini menyajikan perbedaan antara sandwich Elisa dan Elisa
kompetitif dalam bentuk tabel untuk perbandingan berdampingan .

Ringkasan – Sandwich Elisa vs Elisa Kompetitif

Sandwich dan ELISA kompetitif adalah dua jenis ELISA utama yang digunakan di
laboratorium diagnostik penyakit rutin. Kedua teknik tersebut menggunakan interaksi
antigen-antibodi dan tag yang berbeda sebagai pelapor. Sandwich ELISA umumnya
digunakan untuk mendeteksi dan mengukur antigen dalam immunoassay,
sedangkan ELISA kompetitif biasanya digunakan untuk mendeteksi dan mengukur
antibodi dalam immunoassay.

DEFENISI

SANDWICH ELIZA adalah jenis ELIZA yang biasa digunakan untuk mendeteksi dan
mengukur antigen dalam immunoassay

ELIZA kompetitif adalah jenis ELIZA yang biasa digunakan untuk mendeteksi dan
mengukur antibodi dalam immunoassay

PROSEDUR

DUA ANTIBODI digunakan dalam prosedur ini

DUA ANTIGEN digunakan dalam prosedur ini

IMOBILISASI

Antibodi primer atau antibodi penangkap di imobilisasi pada awal lubang pelat
Antigen referensi diimobilisasi pada awal hingga ke dalam lubang pelat

KEUNTUNGAN

spesivitas tinggi, sensitivitas tinggi, fleksibilitas tinggi

kesesuaian untuk mendeteksi antigen kecil. kesesuaian untuk mendeteksi sampel

kompleks, spesifisitas tinggi, dan sensitivitas tinggi

KEKURANGAN

Interaksi antara alur kerja penangkapan dan deteksi antibodi yang kompleks, dan
kebutuhan akan optimalisasi yang lebih baik

pelabelan antibodi diperlukan untuk setiap ELIZA, yang dapat mengakibatkan

inaktivasi antibodi dan sinyal menurun seiring dengan meningkatnya antigen target

Format sandwich atau kompetitif: mana yang tepat

untuk LFA Anda?

Memilih format yang tepat merupakan langkah awal yang penting dalam
pengembangan pengujian aliran lateral. Di sini kita mengeksplorasi format sandwich
dan LFA kompetitif, cara kerjanya, dan mana yang cocok untuk molekul target yang
berbeda.

Bagaimana cara kerja uji aliran lateral?

LFA dimulai dengan penerapan sampel cairan (seringkali urin, darah, atau air liur
dalam tes diagnostik) ke bantalan sampel. Cairan kemudian bergerak secara lateral
melalui bantalan konjugasi dan menuju membran uji. Saat melewati berbagai bagian
perangkat, sampel bertemu dengan reagen yang membantu mendeteksi keberadaan
molekul target dalam sampel. Ini bisa berupa antigen, zat obat, atau protein lain
(Gbr. 1).

Gambar 1. Dalam LFA, sampel mengalir melalui serangkaian bantalan dan

membran, yang berisi reagen pendeteksi.

Bantalan konjugasi

Bantalan konjugasi berisi reagen detektor berlabel, biasanya antibodi, yang

dilepaskan ke dalam sampel saat mengalir melintasi bantalan. Labelnya berupa
nanopartikel berwarna atau berpendar yang terikat pada antibodi dan akan terlihat
saat melewati garis pengujian atau kontrol. Antibodi ini spesifik terhadap molekul
target. Saat sampel mengalir melintasi bantalan konjugasi, reagen akan dilepaskan
ke dalam sampel dan berikatan dengan molekul target jika ada.

Membran uji adalah jantung dari pengujian, dan biasanya terdiri dari membran
nitroselulosa (NC) yang mengandung serat yang dilapisi surfaktan. Membran juga
merupakan bagian dari perangkat yang menampilkan hasil tes, dan memainkan
peran sentral dalam menentukan parameter seperti kecepatan, sensitivitas, dan
spesifisitas tes.

Garis uji dan garis kendali

 Garis uji menunjukkan ada tidaknya molekul target dalam sampel.

 Garis kontrol menunjukkan bahwa pengujian telah menghasilkan hasil
pengujian yang valid, dan bahwa pengujian tersebut tidak terdegradasi,
misalnya karena penyimpanan yang tidak tepat.
Jalur pengujian dan kontrol mengandung ligan yang akan berikatan secara selektif
dengan molekul target atau antibodi dalam reagen detektor. Sifat dan lokasi reagen
pada membran bervariasi tergantung target dan jenis LFA.

Komponen terakhir dari LFA adalah bantalan serapan. Ini hanya menyerap
kelebihan cairan karena aksi wicking terus menarik sampel melalui membran
nitroselulosa.

Sandwich atau kompetitif? Dasar

Ada dua format utama yang perlu dipertimbangkan: sandwich LFA dan LFA
kompetitif. Molekul target Anda akan menjadi kunci untuk menentukan format LFA
mana yang paling sesuai untuk pengujian Anda.

 Jenis tes LFA yang pertama adalah tes non-kompetitif , atau tes sandwich .
Ini digunakan untuk analit makromolekul dengan dua situs pengikatan
antigen: ia memiliki pengikat yang menempel pada target dan tidak saling
mengganggu. Jika target ada dalam sampel, maka akan terjadi peningkatan
sinyal pada garis uji. Contoh tes sandwich yang terkenal adalah tes
kehamilan.
 Tipe kedua dikenal sebagai tes kompetitif . Ini digunakan untuk analit
molekul kecil yang tidak memiliki dua situs pengikatan. Karena Anda tidak
dapat mengikat lebih dari satu pengikat ke molekul target, Anda perlu
menggunakan garis uji yang berisi molekul target Anda. Jika ada target dalam
sampel, maka akan terjadi penurunan sinyal pada garis uji. Contoh tes
kompetitif adalah tes yang digunakan untuk menguji penyalahgunaan
narkoba.

Tes sandwich

Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2, dalam uji aliran lateral tipe sandwich,
bantalan konjugasi berisi antibodi yang terkonjugasi ke label detektor. Antibodi ini
akan berikatan dengan wilayah (atau epitop) tertentu dari target dalam sampel.
Bantalan konjugat juga mengandung antibodi kontrol berlabel. Saat sampel melewati
bantalan konjugasi, target berikatan dengan antibodi terkonjugasi detektor – juga
dikenal sebagai antibodi berlabel – dan mengalir menuju garis uji pada membran.
Antibodi kontrol juga akan terbawa bersama sampel.

Gambar 2. Ilustrasi yang menunjukkan cara kerja sandwich LFA.

Saat sampel bertemu dengan garis uji pada membran, yang berisi 'antibodi
penangkap' yang tidak bergerak dan berikatan dengan target menggunakan epitop
yang berbeda dengan antibodi pelabelan, garis uji tersebut menangkap konjugat
target-antibodi-label yang lewat. Tindakan ini 'menjepit' target antara antibodi
penangkap dan antibodi berlabel. Akumulasi label pada garis uji dapat dideteksi
secara digital atau terlihat oleh pengguna sebagai garis berwarna pada membran
jika sampelnya positif.

Setelah garis uji, sampel bertemu dengan garis kontrol yang berisi antibodi
penangkap yang mengikat antibodi kontrol berlabel. Garis ini menjadi terlihat
terlepas dari keberadaan target.

Format sandwich lebih disukai untuk analit dengan berat molekul lebih besar, karena
pengalaman menunjukkan bahwa format ini tidak berfungsi dengan baik untuk zat
dengan berat molekul lebih kecil.

Tes kompetitif

Seperti diilustrasikan pada Gambar 3, dalam pengujian kompetitif, bantalan

konjugasi berisi antibodi uji berlabel yang berikatan dengan target dan bergerak
mengikuti aliran fluida, mirip dengan pengujian sandwich. Namun molekul pada garis
uji mengandung situs pengikatan yang meniru target, yang berarti hanya antibodi
berlabel yang tidak terikat yang akan ditangkap. Akibatnya, sinyal garis uji menjadi
lebih kuat dengan konsentrasi molekul target yang lebih rendah dalam sampel.

Garis kontrol dalam pengujian kompetitif berisi antibodi penangkap yang mengikat
semua antibodi uji berlabel, baik terikat pada target atau tidak. Garis akan muncul
terlepas dari keberadaan target dalam sampel, namun intensitas sinyal akan lebih
tinggi seiring dengan meningkatnya konsentrasi target.

Gambar 3. Ilustrasi yang menunjukkan cara kerja LFA kompetitif.

Ringkasan

Memilih format LFA yang tepat untuk mendeteksi molekul target Anda merupakan
langkah awal yang penting dalam pengembangan LFA. Jelajahi pusat pengetahuan
kami untuk mempelajari lebih lanjut. Kami juga menawarkan layanan
pengembangan pengujian diagnostik untuk membantu Anda memulai dari ide hingga
komersialisasi dengan lebih cepat dan efisien.

Untuk sampel atau untuk menghubungi spesialis