PENYERAPAN SECARA BIOLOGIS LOGAM PB 2+ OLEH

BAKTERI E. coli

PROPOSAL PENELITIAN

Oleh:
Muhammad Sigit Ariski
NIM. 1807035019

PROGRAM STUDI S1-KIMIA

JURUSAN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN
ALAM
UNIVERSITAS MULAWARMAN
SAMARINDA
2023
 DAFTAR ISI

Halaman
HALAMAN JUDUL.......................................................................... i
DAFTAR ISI ..................................................................................... ii
DAFTAR GAMBAR ....................................................................... iv

BAB 1 PENDAHULUAN ................................................................. 1

1.1 Latar Belakang ..................................................................................................1
1.2 Rumusan Masalah .............................................................................................2
1.3 Tujuan Penelitian ..............................................................................................2
1.4 Manfaat Penelitian ............................................................................................3

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ....................................................... 4

2.1 Landasan Teori ...................................................................................................4
2.1.1 Logam Berat ................................................................................................4
2.1.1.1 Logam Timbal (Pb) ...............................................................................4
2.1.2 Bakteri ..........................................................................................................5
2.1.2.1 Bakteri E. Coli ......................................................................................6
2.1.3 Adsorpsi .......................................................................................................7
2.1.4 Biosorpsi ......................................................................................................8
2.1.5 Spektrofotometer .........................................................................................9
2.1.5 Landasan Empiris ......................................................................................10

BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN ........................................ 11

3.1 Rancangan Penelitian .......................................................................................11
3.2 Waktu dan Tempat Penelitian ..........................................................................11
3.2.1 Waktu Penelitian........................................................................................11

ii
 3.2.2 Tempat Penelitian ......................................................................................11
3.3 Sampel Penelitian .............................................................................................11
3.4 Alat dan Bahan Penelitian ................................................................................11
3.4.1 Alat Penelitian............................................................................................11
3.4.2 Bahan Penelitian ........................................................................................12
3.5 Prosedur Penelitian...........................................................................................12
3.5.1 Pembuatan Larutan Pb2+ ............................................................................12
3.5.1.1 Pembuatan Larutan Induk Pb2+ 1000 ppm ..........................................12
3.5.1.2 Pembuatan Larutan Induk Pb2+ 100 ppm ............................................12
3.5.1.3 Pembuatan Larutan Induk Pb2+ 10 ppm..............................................12
3.5.1.4 Pembuatan Larutan Induk Pb2+ (4; 0,8; 1,2; 1,6; 2,0) ppm .................12
3.5.2 Pembuatan Buffer (KH2PO4-NaOH) ........................................................13
3.5.2.1 Pembuatan Larutan KH2PO4 0,2 M .....................................................13
3.5.2.2 Pembuatan Larutan NaOH 0,2 M .......................................................13
3.5.3 Pembuatan Larutan NaOH 0,1 M ..............................................................13
3.5.4 Sterillisasi Alat .........................................................................................13
3.5.5 Pembuatan Nutrient Broth.........................................................................13
3.5.6 Regenerasi Bakteri ....................................................................................14
3.5.7.1 Pembuatan Starter Bakteri Pseudomonas sp .......................................14
3.5.7 Penentuan Nilai OD (Optical Density) .....................................................14
3.5.8 Panjang Gelombang Maksimum ...............................................................14
3.5.9 Penentuan pH Optimum Kompleks Pb-ARS ............................................14
3.5.10 Pembuatan Kurva Standar Pb2+ ...............................................................15
3.5.11 Biosorpsi Ion Pb2+ Oleh Bakteri Pseudomonas sp ..................................15
3.5.12 Pengujian Sampel ....................................................................................15
3.6 Analisis Data ....................................................................................................15

iii
DAFTAR PUSTAKA
LAMPIRAN

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Bakteri E.Coli .......................................................................................7

Gambar 2.2 Spektrofotometer Sinar Tunggal ..........................................................9

iv
 BAB 1
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Industri pulp serta kertas ialah salah satu industri hasil hutan yang sangat
berarti. Nyaris tidak terdapat kegiatan kehidupan manusia yang tidak
menggunakan komoditi industri ini, mulai dari kegiatan kehidupan di rumah
tangga, perkantoran, industri, pembelajaran, perdagangan serta lain sebagainya.
Indonesia selaku negeri yang masih mempunyai hutan lumayan luas, berpotensi
jadi salah satu pemain dunia di bidang industri pulp serta kertas sebab
ketersediaan hutan, selaku sumber utama bahan baku, masih ialah penggerak
utama untuk berkembangnya industri ini. Disamping mempunyai hutan yang
lumayan luas serta hawa tropis yang membolehkan tumbuhan berkembang lebih
kilat, Indonesia pula mempunyai sumber- sumber bahan baku alternatif, semacam
limbah pertanian ( Kemenperin, 2021).
Industri kertas memakai bahan organik serta anorganik dalam proses
produksinya. Logam berat Pb serta persenyawaannya tercantum dalam bahan
perona yang digunakan oleh industri pulp serta kertas. Perihal ini dibuktikan oleh
penulis lewat uji pendahuluan yang menciptakan isi logam berat Pb dalam limbah
cairnya. Bagi Darmono( 1995).( wulandari, 2011).
Logam berat ialah faktor alam yg bisa ditemui di erosi batuan tambang,
vulkanis, laut serta sebagainya. Logam berat diperairan bisa membahayakan
kehidupan organisme secara langsung maupus tidak secara langsung terhadap
kesehatan manusia( Natsir, 2018). Logam berat ialah komponen yang tidak
didegradasi maupun dihancurkan. Logam berat dibutuhkan buat pengaturan pada
berabagai guna kimia serta fisiologi badan pada makhluk hidup dengan
kandungan yang rendah. Logam berat bisa jadi beracun ataupun beresiko bila
dalam kandungan yang kelewatan didalam badan( Irianti, 2017).
Logam Pb ialah logam non esensial serta beracun yang tidak perlukan oleh
organisme makhluk hidup yang bisa menimbulkan penimbunan pada jaringan
badan oraganisme tersebut sehingga bisa mengusik proses metabolisme

1
 2

(Nasution, 2011). Logam Pb mempunyai watak tidak bisa diregulasi oleh

organisme air sehingga logam Pb hendak terus terakumulasi didalam organisme
tersebut( Wulandari, 2011).
Adsorpsi ialah sesuatu zat( molekul ataupun ion) pada permukaan adsorben.
Mekanisme adsorpsi ialah dimana molekul yang terdapat pada adsorbat, terikat
pada permukaan zat adsorben. Proses adsorpsi bisa terjalin bila style adhesi antara
molekul adsorbat dengan molekul adsorben lebih besar dibanding dengan style
kohesi pada tiap- tiap molekul( Wijayanti, 2019). Pengikatan logam berat pada
biosorben bisa terjalin dengan metode pertukaran ion logam berat yang
mempunyai muatan positif berhubungan dengan permukaan bilik sel yang
mempunyai muatan negatif dalam polimer ekstra seluler, semacam protein serta
polisakarida selaku sumber gugus guna yang berfungsi berarti dalam pengikatan
ion logam berat (Ratnawati , 2010).
Berdasarkan penjabaran diatas, penelitian ini bertujuan untuk mengetahui
kemampuan serta kondisi optimum penyerapan secara biologis logam Pb 2+ oleh
bakteri E. Coli dengan menggunakan variasi konsentrasi logam dan perubahan
waktu pengukuran. Spektrofotometer visible digunakan untuk mengetahui
konsentrasi logam Pb2+ setelah dilakukan penyerapan secara biologis.

1.2 Rumusan Masalah

Rumusan permasalahan di penelitian ini yaitu:
1. Apakah penyerapan secara biologis logam Pb2+ dapat dilakukan oleh bakteri
Streptococcus mutans ?
2. Berapakah waktu dan konsentrasi optimum penyerapan secara biologis logam
Pb2+ oleh bakteri Streptococcus mutans ?

1.3 Tujuan Penelitian

Adapun tujuan dari penelitian ini yaitu:
1. Menentukan kemampuan penyerapan secara biologis logam Pb 2+ oleh bakteri
E. coli.
 3

2. Menentukan waktu dan konsentrasi optimum penyerapan secara biologis

logam Pb2+ oleh bakteri E. coli.
1.4 Manfaat Penelitian
Manfaat yang diperoleh dari penelitian ini diantaranya yaitu:
1. Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi kepada para
pembaca tentang waktu dan konsentrasi optimum penyerapan secara biologis
logam Pb2+ olehbakteri E. coli.
2. Memberikan informasi kepada para pembaca tentang kemampuan penyerapan
secara biologis logam Pb2+ oleh bakteri E. coli.
3. Sebagai bahan informasi untuk bahan penelitian selanjutnya yang masih
berkaitan dengan penelitian ini.
 BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Landasan Teori

2.1.1 Logam Berat
Logam ialah zat yang mempunyai kontivitas besar terhadap listrik, kilau
serta kelenturan, yang secara sukarela kehabisan trons buat pembuatan kation.
Logam berat pada biasanya ialah logam yang mempunyai kepadatan khusus lebih
dari 5 gram/ cm3 serta pengaruhi area serta organisme hidup. (Adhani, 2017).
Logam digolongkan jadi 2 tipe, ialah logam berat serta ringan. Logam berat
ialah logam yang mempunyai berat lebih dari sama dengan 5 gram/ cm3. Logam
berat dinamakan selaku logam non esensial serta pada tingkatan terntentu bisa jadi
beracung baig makhluk hidup. Sebaliknya logam ringan ialah logam yang
mempunyai berat kurang dari 5 gram/ cm3. (Irianti, 2017).
Logam berat ialah bahan beracun yang bisa memunculkan kehancuran pada
organisme akuatik. Pencemaran logam berat sebagian besar berasal dari peleburan
logam, pertambangan, industri yang lain dana bisa berasal dari limbah dalam
negeri yang memakai logam, dan zona pertanian yang memakai pupuk yang
memiliki logam. Menyebabkan terbentuknya penyusutan mutu air serta sedimen
pada perairan semacam sungai, danau serta waduk. (Rahayu, 2022).
Logam berat ialah logam toksik yang dapar beresiko bila masuk ke dalam
badan melebihi ambang batasan. Logam berat pula jadi beresiko disebabkan
proses bioakumulasi. Bioakumulasi ialah kenaikan konsentrasi faktor kimia
didalam badan makhluk hidup cocok rantai santapan. Logam berat bisa
memunculkan dampak negatif dalam kehidupan makhluk hidup semacam
mengusik respon kimia, sehingga membatasi absorpsi dari nutrien- nutrien yang
esensial. (Hananingtyas, 2017).
2.1.1.1 Logam Pb2+
Timbal ialah logam berkilau bercorak kelabu keperakan ataupun putih
kebiruan. Logam Pb mempunyai no atom 82, bobot atom 207, 20 gram/ mol, titik

4
 5

leleh 327˚C serta titik didih 1755˚C. Timbal hadapi kepudaran ataupun kumal kala
kontak dengan hawa, sehingga membentuk kombinasi lingkungan cocok keadaan.
Sifat-sifat yang dimiliki oleh logam timbal yaitu:
1. Timbal memiliki tekstur lunak sehingga dapat dipotong dengan
menggunakan pisau ataupun dengan tangan.
2. Timbal memiliki tekstur yang lembut sehingga dapat dibentuk dengan
mudah.
3. Timbal dapat bertahan dari peristiwa korosi atau karat sehingga sehingga
dapat digunakan sebagai bahan coating.
4. Timbal memiliki sifat konduktor yang listrik yang lemah.
5. Timbal memiliki kerapatan yang lebih besar dibandingkan dengan logam
biasa kecuali emas dan merkuri.
(Irianti, 2017).
Logam Pb(II) merupakan salah satu logam berat yang cukup berbahaya.
Logam Pb yang masuk kedalam tubuh manusia dapat melalui makanan,air minum
dan udara yang dapat menyebabkan gangguan pada organ dalam seperti gangguan
neurologi, sistem reproduksi, sistem hemopoitik, sistem syaraf pusat dan ginjal
terutama pada anak-anak yang dapat menurunkan tingkat kecerdasan otak
(Nafi’ah, 2016).
2.1.2 Bakteri
Kuman ialah salah satu kalangan mikroorganisme prokariotik( bersel
tunggal) yang hidup berkoloni serta tidak memiliki selubung inti tetapi sanggup
hidup dimana saja. Bagi klasifikasinya kuman dipecah jadi 2 ialah kuman Gr
positif serta kuman Gr negatif. Sebagian kuman Gr positif serta kuman Gr negatif
ialah flora wajar pada badan manusia. Flora wajar merupakan mikroorganisme
yang menempati sesuatu wilayah tanpa memunculkan penyakit pada inang yang
dihuni. Pada kulit manusia wajar umumnya dihuni dekat 102- 106 CFU/ cm2
(Holderman, 2017).
Kuman ialah salah satu tipe mikroorganisme yang tidak dapat dilihat oleh
mata langsung. Kuman ialah organisme yang jumlahnya sangat banyak dibanding
maklhluk hidup lain serta tersebar luas didunia. Kuman mempunyai ratusan ribu
 6

spesies yang hidup di darat, laut, hawa serta tempat- tempat ekstrem. Bakteri
memiliki ciri-ciri yang berbeda dengan makhluk lain antara lain:
 Organisme bersifat uniseluler (bersel satu).
 Prokariot (tidak memiliki membran inti sel).
 Tidak memiliki klorofil
 Hidup dengan bebas atau menjadi parasit
 Memiliki ukuran tubuh antara 0,12 mikron sampai ratusan mikron
 Memiliki dinding sel. Dinding sel pada bakteri tersusun atas
mukopolisakarida dan peptidoglikan. Peptodoglikan terdiri dari polimer
besar yang tersusun atas N-asetil glukosamin dan N-asetil muramat yang
saling berikatan kovalen.
 Memiliki endospora berupa kapsul yang keluar jika dalam kondisi yg tidak
menguntungkan sebagai perisai terhadap panas dan gangguan alam lainnya.
(Rini, 2020).
2.1.2.1 Bakteri E. Coli
E. coli ialah kelompok kuman gr negatif yang berupa batang pendek serta
panjangnya dekat 2μm, diameter 0, 7μm, lebar 0, 4- 0, 7μm( va Brigitta Patay et
angkatan laut(AL). 2016). E. coli biasanya hidup dalam saluran pencernaan
manusia serta bisa menimbulkan penyakit disentri. Kuman tersebut banyak
ditemui pada partikel hawa serta melekat pada debu( Harahap, 2018).
E. Coli, semacam yang universal diketahui, merupakan kuman Gr negatif
berupa batang. E. coli yang non- bersporulasi. Mereka bisa berkembang aerobik
ataupun anaerobik serta menimbulkan pengurangan substrat, semacam oksigen
serta nitrat. Walaupun sebagian besar strain E. Coli yang tidak beresiko serta yang
muncul dalam usus manusia sebagian jam sehabis melahirkan, strain E. Coli
tertentu bisa menciptakan toksin yang mematikan serta dapat beresiko. Mereka
dapat menimbulkan peradangan saluran kencing, meningitis neonatal, keracunan
santapan serta komplikasi sungguh- sungguh, semacam sindrom hemolitik
uremik, pada manusia. Mengkonsumsi sayur- mayur yang tidak dicuci dengan
benar serta daging yang belum dimasak betul- betul bisa menyebabkan
 7

peradangan E. Coli. Peradangan E. Coli pula dikenal terjalin dari makan hazelnut
( Priyanti, 2017).

Gambar 2.1 Bakteri E.Coli

(Romadhon, 2016).

Berikut ini klasifikasi bakteri E.coli

Kingdom : Prokaryot
Deviso : Gacilicutes
Class : Scotobacteria
Orda : Eubacteriales
Family : Enterebacteriaceae
Genus : Escherichia
Spesies : Escherichia coli
(Amanda, 2014).
2.1.3 Adsorbsi
Penyerapan (adsorpsi) secara universal merupakan sesuatu proses
pembelahan bahan dari kombinasi gas ataupun cair, bahan yang wajib dipisahkan
ditarik oleh permukaan adsorben padat serta diikat oleh gaya- gaya yang berkerja
pada permukaan tersebut. Adsorben merupakan bahan padat dengan luas
permukaan dalam yang sangat besar. Adsorben yang kerap diketahui yakni karbon
aktif, silika gel, zeolit alam, tapis molekuler( moleculer sieve), tanah kelantang(
pemutih earth), aluminium oksida serta lain- lain( Anggriawan, 2019).
 8

Adsorpsi adalah suatu fenomena permukaan karena akumulasi sesuatu

spesies pada batasan permukaan padat- cair. Adsorsi bisa terjalin sebab
terdapatnya style tarik- menarik. Terdapat 2 jenis adsorpsi, ialah:
1. Adsorpsi fisis ataupun Van der Waals
2. Adsorpsi kimia
Adsorpsi yang terjadi dalam hal ini adalah non- spesifik dan non- selektif
penyebab gaya tarik menarik sebab adanya ikatan koordinasi hidrogen serta gaya
Van der Waals. Apabila adsorbat dan permukaan adsorben terikat dengan gaya
Van der Waals saja hingga dinamakan adsorsi fisis atau adsorpsi Van der Waals
(Widayanto, 2017).
Adsorbsi bisa terjalin jida terdapatnya tenaga permukaan yang mempunyai
style tarik- menarik. Tiap- tiap permukaan mempunyai watak yang berbeda,
bergantung pada lapisan dalam molekul- molekul zat pada tiap- tiap permukaan.
Tiap molekul dalam bidang dalamnya dikelilingj oleh molekul- molekul yang
lain, sehingga terjalin style tarik menarik antar molekul jadi sama besar serta
setimbang ke seluruh bagian. Sebaliknya buat molekul dipermukaan cuma
memiliki style tarik kearah dalam( Asip, 2008).
Adsorpsi ialah penyerapan sesuatu zat( ion ataupun molekul) pada
permukaan adsorben. Mekanisme adsorpsi ialah proses dimana molekul yang
semula terdapat pada larutan, terikat pada permukaan zat adsorben secara fisika.
Molekul bisa teradsorpsi bila style adhesi antara molekul adsorbat dengan
molekul adsorben yang lebih besar dibanding dengan style kohesi pada tiap- tiap
molekul. Proses adsorpsi dicoba buat kurangi kandungan senyawa organik yang
ada didalam limbah cair, sehingga limbah cair bisa dimurnikan. Proses adsorpsi
bisa terjalin bila terdapatnya luas permukaan, terus menjadi luas permukaan
adsorben yang ada makan terus menjadi banyak molekul yang terserap (Wijayanti,
2019).
2.1.4 Biosorpsi
Biosorpsi ialah teknologi pengolahan limbah terkini yang bisa meresap
logam- logam beracun dalam limbah cair, sehingga biosorpsi bisa
dipertimbangkan selaku sesuatu teknologi alternatif buat pengolahan limbah
 9

industri. Proses biosorpsi bisa terjalin bila terdapatnya material biologis yang
diucap biosorben serta terdapatnya larutan yang memiliki logam berat yang
mempunyai afinitas besar supaya gampang terikat dengan biosorben. Mekanisme
pengikatan logam berat yang tercantum didalam sesuatu larutan ialah dengan
pertukaran ion- ion pada bilik sel mikroorganisme dengan ion- ion logam berat
kompleksitas ion logam berat dengan muatan positif berhubungan dengan pusat
aktif ion mikroorganisme dengan muatan negatif pada permukaan bilik sel
ataupun polimer ekstra seluler, semacam protein serta polisakarida selaku gugus
guna yang berfungsi berarti dalam pengikatan ion logam berat ( Ratnawati, 2010).
Biosorpsi ialah tata cara penyerapan logam berat secara hayati pada limbah
tercemar, yang dikenal selaku teknologi alternnatif yang berpotensi buat
dibesarkan dibanding dengan proses kimia. Proteksi terhadap area dikala ini jadi
permasalahan yang sangat berarti, sehingga biosorpsi jadi metode penyerapan
logam berat yang menjanjikan. Biosorpsi ialah teknologi pengolahan limbah
terkini yang bisa meresap/ melenyapkan logam- logam berat beracun dalam
limbah cair, sehingga teknologi biosorpsi dipertimbangkan selaku sesuatu
teknologi alternatif buat pengolahan limbah cair industri( Ratnawati, 2010).
2.1.5 Spektrofotometer Visible
Spektrofotometer merupakan salah satu alat alat yang digunakan dalam
analisis laboratorium yang terdiri dari dua bagian yaitu spektrometer dan
fotometer. Spektrometer merupakan alat yang menghasilkan sinar dari spektrum
dengan panjang gelombang tertentu serta fotometer yaitu alat pengulkanggkur
intensitas cahaya yang ditransmisikan atau yang di absorpsi.
Spektrofotometer UV-Vis marupakan salah satu metode instrumen yang
paling sering digunakan dalam analisis kimia untuk mendeteksi senyawa yang
terdapat didalam larutan berdasarkan absorbansi foton. Spektrofotometer UV-Vis
memiliki panjang gelombang foton 200 nm – 700 nm, untuk mendeteksi senyawa
pada sampel, biasanya sampel diberika perlakuan, seperti penambahan reagen
dalam pembentukan garam kompleks dan lain sebagainya (Irawan, 2019).
 10

Gambar 2.2 Spektrofotometer Sinar Tunggal

(Suhartati, 2017).

2.1 Landasan Empiris

Penelitian yang dilakukan oleh Lestari (2022) tentang Bioakumulasi dan
Aktivitas Resistensi Logam Timbal (Pb) terhadap Streptomyces sp. strain I18,
menunjukan bahwa logam Pb2+ dapat diserap oleh bakteri Streptomyces sp. Strain
I18 sebesar 49%. Konsentrasi optimum logam Pb2+ untuk proses biosorpsi sebesar
3.07 ppm.
Bakteri Pseudomonas sp dapat digunakan untuk menyerap logam Pb2+
sebanyak 36,388%. Konsentrasi logam Pb2+ optimum untuk proses biosorpsi
sebesar 4 ppm. Waktu optimum proses biosorpsi terjadi pada hari ke-14. Kadar
Timbal ditentukan dengan spektrofometer visibel (Riki, 2021). Pada penelitian
Anugerah (2022), bakteri Pseudomonas sp mampu menyerap Cr(VI) sebesar
85,72% pada hari ke-6 dan konsentrasi optimum 5 ppm dan pada penelitain
Setiawan (2022), dengan bakteri Pseudomonas sp mampu menyerap Cu(II)
sebanyak 51,837% dengan konsntrasi 3 ppm pada hari ke-4.
Berdasarkan penelitian tersebut diharapkan bakteri E. coli dengan variasi
konsentrasi dan waktu pengukuran pada penelitian ini diperoleh persen biosorpsi
yang besar sehingga dapat diketahui potensi daya biosorpsi logam Pb2+ oleh
bakteri E. coli.
 BAB 3
METODOLOGI PENEITIAN

3.1 Rancangan Penelitian

Penelitian ini dirancang secara eksperimental yang meliputi mengenai
persiapan kultur bakteri E. coli, pembuatan larutan nutrient broth (NB),
pembuatan pereaksi kimia dan pengujian sampel bakteri E. coli secara
spektrofometer UV-Vis. Untuk mengetahui efektivitas dari adsorpsi ion Pb2+ oleh
bakteri E. coli, maka akan dilakukan pengujian larutan logam yang telah diberi
bakteri E. coli dengan menggunakan instrumen spektrofometer vis untuk
membuktikan bahwa logam tersebut telah teradsorpsi dengan sempurna. Setelah
diperoleh konsentrasi penyerapan logam besi dalam sampel, maka akan diketahui
konsentrasi besi yang telah teradsorpsi oleh bakteri E. coli.
3.2 Waktu dan Tempat Penelitian
3.2.1 Waku Penelitian
Penelitian ini dilakukan dari bulan Desember 2022 hingga februari 2023.

3.2.2 Tempat Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Lingkungan, Pusat
Penelitian Lingkungan Hidup Sumber Daya Alam, Universitas Mulawarman,
Samarinda, Kalimantan Timur.

3.3 Sampel Penelitian

Sampel penelitian yang digunakan ialah bakteri E. coli yang diperoleh dari
Laboratorium Biokimia Fakultas Matematikan dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Mulawarman, Samarinda, Kalimantan Timur.

3.4 Alat dan Bahan Penelitian

3.4.1 Alat Penelitian
Alat yang digunakan dalam penelitian yaitu instrumen spektrofometer
Visible (Rayleight Vis 7220G), micropipette eppendorf, neraca analitik, gelas

11
 12

kaca, jarum ose, autoclave, spatula, batang pengaduk, botol semprot,

pinset, bunsen, kapas swab steril, inkubator, laminar air flow, hotplate with
magnetic stirer dan botol timbang.

3.4.2 Bahan Penelilitian

Bahan yang digunakan dalam penelitian yaitu padatan Pb(NO3)2, larutan
Alizarin Red S (ARS) 0,01 M, larutan buffer fosfat, Larutan KH2PO4 0,1 M,
larutan NaOH 0,1 M, NaCl, Tripton, yeast extract, aquades dan bakteri E. coli.

3.5 Prosedur Penelitian

3.5.1 Pembuatan Larutan Pb2+
3.5.1.1 Pembuatan Larutan Induk Pb2+ 1000 ppm
Padatan Pb(NO3)2 sebesar 0,1598 gram dilarutkan kedalam labu ukur
100 mL dengan aquades hingga tanda tera dan dihomogenkan.

3.5.1.2 Pembuatan Larutan Induk Pb2+ 100 ppm

Larutan standar Pb2+ 1000 ppm sebanyak 10 mL dilarutkan kedalam
labu ukur 100 mL dengan aquades hingga tanda tera dan dihomogenkan.

3.5.1.3 Pembuatan Larutan Standar Pb2+ 10 ppm

Larutan standar Pb2+ 100 ppm sebanyak 10 mL dilarutkan kedalam
labu ukur 100 mL dengan aquades hingga tanda tera dan dihomogenkan.

3.5.1.4 Pembuatan Larutan Standar Pb2+ (0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5) ppm
Larutan standar Pb2+ 10 ppm diambil sebanyak (0 ;2,5 ;5 ;7,5 ;10
;12,5) mL dimasukkan kedalam labu takar 50 mL dengan aquades hingga
tanda tera.
 13

3.5.2 Pembuatan Buffer (KH2PO4-NaOH)

3.5.2.1 Larutan KH2PO4 0,2 M
Padatan KH2PO4 sebanyak 3,4 gram, dimasukkan kedalam labu
takar 100 mL, tuang aquades ¼ bagian labu takar dan dihomogenkan;
ditambahkan kembali aquades hingga tanda tera.

3.5.2.1 Larutan NaOH 0,2 M

Padatan NaOH 0,8 gram dimasukkan kedalam labu takar 100 mL,
ditambahkan pelarut aquades hingga tanda tera dan dihomogenkan.

3.5.3 Pembuatan Larutan NaOH 0,1 M

Padatan NaOH 0,4 gram dimasukkan kedalam labu takar 100 mL,
ditambahkan pelarut aquades hingga tanda tera dan dihomogenkan.

3.5.4 Sterilisasi Alat

Alat kaca yang digunakan seperti labu Erlenmayer, tabung reaksi dan
cawan petri dicuci hingga bersih, dikeringkan dan dibungkus dengan
menggunakan kertas dan plastik. Alat kaca tersebut kemudian disterilisasi
didalam autoclave selama 15 menit pada suhu 121 oC.

3.5.5 Pembuatan Luria Bertani

Erlenmeyer 250 mL sebanyak 6 buah, masing-masing ditambahkan 1%
NaCl, 1% tripton dan 0,5% yeast extract. Kemudian dilarutkan menggunakan
aquades sebanyak 200 mL dan dihomogenkan menggunakan magnetic stirrer.
Setelah itu, medium disterilisasi menggunakan autoclave pada suhu 121οC
selama 30 menit dan disimpan pada suhu 40 οC.

3.5.6 Regenerasi Bakteri

3.5.6.1 Pembuatan Starter Bakteri E.Coli
Medium nutrient broth yang telah disterilisasi sebanyak 10 mL
dimasukkan ke dalam labu Erlenmeyer 50 mL. Bakteri E.coli diinokulasikan
 14

ke dalam medium sebanyak 1 jarum ose, proses inokulasi dilakukan di dalam

laminar airflow. Medium diinkubasi pada suhu 37 ºC selama 24 jam sebelum
digunakan.

3.5.7 Penentuan Nilai OD (Optical Density)

Medium starter bakteri E. coli sebanyak 1 ml diambil dari larutan starter
dimasukkan kedalam kuvet. Diukur nilai absorbansi pada rentang 610 nm pada
spektrofotometer vis (pengukuran dilakukan pada rentang waktu (0 jam, 1 jam,
12 jam dan 24 jam) (Khoiriyah, 2014).

3.5.8 Panjang Gelombang Maksimum

Larutan standar Pb2+ dengan konsentrasi 1,2 ppm sebanyak 10 mL,
kemudian ditambahkan 1 mL Aliizarin Red S 0,01 M pada masing-masing
larutan, ditambahkan 0,15 mL NaOH 0,1 M dan 1 mL larutan buffer pH 7.
Larutan standar yang telah dicampur dengan Aliizarin Red S dibiarkan selama
± 30 menit. Diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer vis pada
panjang gelombang 400-550 nm (Alsamarrai, 2011).

3.5.10 Penentuan pH Optimum Kompleks Pb-ARS

Larutan standar Pb2+ dengan konsentrasi 1,2 ppm sebanyak 10 mL,
kemudian ditambahkan 1 mL Aliizarin Red S 0,01 M pada masing-masing
larutan, ditambahkan 0,15 mL NaOH 0,1 M dan 1 mL larutan buffer pH (4; 7;
dan 12). Larutan standar yang telah dicampur dengan Aliizarin Red S dibiarkan
selama ± 30 menit. Diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer vis
pada panjang gelombang maksimum (Alsamarrai, 2011).

3.5.10 Pembuatan Kurva Standar Pb2+

Larutan standar Pb2+ 10 ppm dimasukkan kedalam labu ukur 50 ml
dengan variasi konsentrasi (0,5; 1,0; 1,6; 2,0 dan 2,5) ppm. Masing-masing
larutan dengan variasi konsentrasi tersebut diambil sebanyak 10 mL,
 15

dipindahkan kedalam Erlenmayer 50 mL dan ditambahkan Aliizarin Red S

0,01 M sebanyak 1 mL serta NaOH sebanyak 0,15 mL. Kemudian,
ditambahkan 1 mL larutan buffer sesuai dengan pH optimum yang diperoleh.
Diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer visible pada panjang
gelombang maksimum (Alsamarrai, 2011).

3.5.11 Biosorpsi Ion Pb2+ Oleh Bakteri E. coli

Labu Erlenmeyer 250 mL berisi medium Luria bertani sebanyak 6 buah
ditambahkan masing-masing 0 mL; 2,5 mL; 5 mL; 7,5 mL; 10 mL; dan 12,5
mL larutan standar Pb2+ 100 ppm, ditambahkan Luria bertani dan
dihomogenkan. Masing-masing medium diinokulasikan dengan starter bakteri
E. coli sebanyak 1 mL. Medium bakteri E. coli dimasukkan ke dalam
inkubator pada suhu 37 ºC

3.5.12 Pengujian Sampel

Larutan Luria bertani yang telah dipaparkan bakteri E. coli dengan
variasi konsentrasi (0; 5; 10; 15; 20 dan 25) ppm. Masing-masing larutan
variasi konsentrasi diambil 10 mL lalu disaring menggunakan kertas saring
membrane milipore 0,45µ lalu ditambahkan Alizarin Red S 0,01 M sebanyak 1
mL serta NaOH 0,1 M sebanyak 0,15 mL. Ditambahkan 1 mL larutan buffer
yang sesuai dengan pH optimum yang diperoleh. Diukur absorbansinya
menggunakan spektrofotometer vis pada panjang gelombang maksimum.
Pengujian sampel dilakukan setiap 48 jam (Alsamarrai, 2011).

3.6 Teknik Analisis Data

Teknik analisis data dilakukan dengan membuat kurva standar antara
konsentrasi (ppm) pada sumbu x dan absorbansi pada sumbu y dengan
menggunakan deret larutan standar Pb(II) dengan konsentrasi (0,5; ,1,0; 1,5; 2,0;
dan 2,5) ppm sehingga diperoleh persamaan:

Keterangan:
 16

a = Slope
b = Intercept
y = Absorbansi
x = Konsentrasi (ppm)
Kadar bisorpsi ditentukan melalui selisih konsentrasi pemaparan dengan
konsentrasi yang terukur (sisa) dan dinyatakan dengan persentase dengan
persamaan:

Keterangan :
% Biosorpsi = Kadar biosorpsi
Xpemaparan = Konsentrasi Pemaparan
Ysisa = Konsentrasi Sisa
(Adriansyah, 2018).
 DAFTAR PUSTAKA

Adhani, Rosihan., & Husaini. 2017. LOGAM BERAT SEKITAR MANUSIA.

Banjarmasin: Lambung Mangkurat University Press.

Adriansyah, Renaldi., Restiasih, Elya Novta., & Meileza, Nessi. 2018.

BIOSORPSI ION LOGAM BERAT Cu(II) DAN Cr(VI)
MENGGUNAKAN BIOSORBEN KULIT KOPI TERXANTHASI. Jurnal
Pendidikan Dan Ilmu Kimia, 2(2), 114– 121.

Alsamarrai, K.F., 2011. “Spectrophotometric Assay of Lead in Human Hair

Samples by Using Alizarin RED (S) in Samarra Area”. Samarra. J. of
University of Anbar for Pure Science, Vol 5 (3).

Amanda, Fiqriah Rezeki. 2014. Efektivitas Ekstrak Bawang Dayak (Eleutherine

palmifolia (L.) Merr. Dalam Menghambat Pertumbuhan Bakteri
Escherichia coli. Jakarta: UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF
HIDAYATULLAH.

Anggriawan, Agus., M. Yanggi Atwanda., Nurhazizah Lubis., Rif’an Fathoni.

2019. Kemampuan Adsorpsi Logam Berat Cu Dengan Menggunakan
Adsorben Kulit Jagung (Zea Mays). Jurnal Chemurgy, 3(2).

Anugerah, D., Kartika, R., & Gunawan, R. (2022, October). Method Verification
And Absorption Of Cr6+ Ion By The Bacterium Pseudomonas Sp. In AIP
Conference Proceedings (Vol. 2668, No. 1, P. 030007). AIP Publishing
LLC.

Arsip, Faisol., Mardhian, Ridha., & Husna. 2008. UJI EFEKTIFITAS

CANGKANG TELUR DALAM MENGADSORBSI ION Fe DENGAN
PROSES BATCH. Jurnal teknik kimia Universitas Sriwijaya, 15(2).

Hananingtyas, Izza. 2017. Studi Pencemaran Kandungan Logam Berat Timbal

(Pb) dan Kadmium (Cd) pada Ikan Tongkol (Euthynnus sp.) di Pantai
Utara Jawa. BIOTROPIC The Journal of Tropical Biology, 1(2).

Harahap, Muhammad Ridwan. 2018. Aktivitas Daya Hambat Limbah Daging

Buah Kopi Robusta (Coffea robusta L.) Aceh terhadap Bakteri S.aureus
dan E.coli. Jurnal Kesehatan, 9(1).

Holderman, Michelle V., Edwin de Queljoe., Sendy B. Rondonuwu. 2017.

IDENTIFIKASI BAKTERI PADA PEGANGAN ESKALATOR DI
SALAH SATU PUSAT PERBELANJAAN DI KOTA MANADO. Jurnal
Ilmiah Sains, 17(1).
Irawan, Anom. 2019. KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER SEBAGAI
PENJAMINAN MUTU HASIL PENGUKURAN DALAM KEGIATAN
PENELITIAN DAN PENGUJIAN. INDONESIAN JOURNAL OF
LABORATORY, 1(2), 1-9

Irianti, Tatang Tanti. 2017. Logam Berat dan Kesehatan. Yogyajarta: Universitas
Gajah Mada

Kementrian Perindustrian Republik Indonesia.2021. Analisis Pembangunan

Industri edisi IV. Pusdatin Kemenperin. Jakarta

Khoiriyah, Hanimatul., Ardiningsih, Puji., & Jayuska, Afghani. 2014.

PENENTUAN WAKTU INKUBASI OPTIMUM TERHADAP
AKTIVITAS BAKTERIOSIN Lactobacillus sp. RED4. 3(1), 7-12

Lestari, Mutia Dinda., Miranda, Mesy AR., Setiawati, Ulin Ni’mah., Nukmal,
Nismah., Setyaningrum, Endah., Arifiyanto, Achmad., & Aeny, Titik Nur.
2022. Bioakumulasi dan Aktivitas Resistensi Logam Timbal (Pb) terhadap
Streptomyces sp. strain I18. Jurnal Sumberdaya Alam dan Lingkungan,
9(1), 1-6

Nafi’ah, Rohmatun. 2016. KINETIKA ADSORPSI Pb (II) DENGAN

ADSORBEN ARANG AKTIF DARI SABUT SIWALAN. Jurnal Farmasi
Sains dan Praktis, 1(2).

Nasution, S., Siska, M. 2011. KANDUNGAN LOGAM BERAT TIMBAL (Pb )

PADA SEDIMEN DAN SIPUT Strombus canarium DI PERAIRAN
PANTAI PULAU BINTAN. Jurnal Ilmu Lingkunga, 5(2)

Priyanto, Evy. 2017. Penerapan Algoritma Naïve Bayes Untuk Klasifikasi Bakteri
Gram-Negatif, 3(2).

Rahayu, Dwi Retno., & Mangkoedihardjo, Sarwoko. 2022. Kajian Bioaugmentasi

untuk Menurunkan Konsentrasi Logam Berat di Wilayah Perairan
Menggunakan Bakteri (Studi Kasus: Pencemaran Merkuri di Sungai
Krueng Sabee, Aceh Jaya). JURNAL TEKNIK ITS, 11(1)

Ratnawati, Emmy., Ermawati, Rahyani., & Naimah, Siti. 2010. TEKNOLOGI

BIOSORPSI OLEH MIKROORGANISME, SOLUSIALTERNATIF
UNTUK MENGURANGI PENCEMARAN LOGAM BERAT. Jurnal
Kimia dan Kemasan, 32(1), 34-40.

Riki, R., Kartika, R., & Gunawan, R. (2022, October). Biosorption Of Pb2+ Ion
By Bacterium Pseudomonas Sp. In AIP Conference Proceedings (Vol.
2668, No. 1, P. 030009). AIP Publishing LLC.
Rini, Chylen Setiyo., Jamilatur Rohmah. 2020. BAKTERIOLOGI DASAR.
SIDUARJO: UMSIDA PRESS

Romadhon, Zahrotu. 2016. IDENTIFIKASI BAKTERI Escherichia coli DAN

Salmonella sp PADA SIOMAY YANG DIJUAL DI KANTIN SD NEGERI
DI KELURAHAN PISANGAN CIRENDEU DAN SEMPAKA PUTIH.
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan. UIN Syarif Hidayatullah :
JAKARTA

Setiawan, A. D., Kartika, R., & Gunawan, R. (2022, October). Adsoprtion Of Cu

(II) Ion In Aqueous Solution By Pseudomonas Sp. Biosorbent. In AIP
Conference Proceedings (Vol. 2668, No. 1, P. 030008). AIP Publishing
LLC.

Suhartati, Tati. 2017. Dasar-dasar Spektrofotometri UV-Vid dan Spektrometri

Massa Untuk Penentuan Struktur Senyawa Organik. Lampung: AURA

Widayanto, Tri., Yuliawati, Teti., & Susilo, Agung Adi. 2017. ADSORPSI
LOGAM BERAT (Pb) DARI LIMBAH CAIR DENGAN ADSORBEN
ARANG BAMBU AKTIF. Jurnal Teknologi Bahan Alam, 1(1).

Wijayanti, Imas Eva., & Kurniawati, Eka Anisa. 2019. STUDI KINETIKA
ADSORPSI ISOTERMPERSAMAAN LANGMUIR DAN
FREUNDLICH PADA ABU GOSOK SEBAGAI ADSORBEN. Jurnal
Kimia dan Pendidikan, 4(2)

Wulandari, Sri Yulina. 2011. UPTAKE Pb LIMBAH CAIR INDUSTRI KERTAS

OLEH LELEDUMBO (Clarias gariepenus) DAN ECENG GONDOK
(Eichornia crassipes). 1(1), 12-26
 LAMPIRAN

Lampiran 1. Flowsheet
A. Pembuatan Larutan Pb(II) 1000 ppm

Padatan Pb(II) sebanyak 0,1589 gram

Dimasukkan ke dalam labu takar 100 mL

Ditambahkan aquades 100 mL hingga tanda tera
Dihomogenkan

Larutan standar Pb(II) 1000 ppm

B. Pembuatan Larutan Pb(II) 100 ppm

Larutan standar Pb(II) 1000 ppm sebanyak 10 mL

Dimasukkan ke dalam labu takar 100 mL

Ditambahkan aquades hingga tanda tera

Dihomogenkan

Larutan standar Pb(II) 100 ppm

C. Pembuatan Larutan Pb(II) 10 ppm

Larutan standar Pb(II) 100 ppm sebanyak 10 mL

Dimasukkan ke dalam labu takar 100 mL

Ditambahkan aquades hingga tanda tera

Dihomogenkan

Larutan standar Pb(II) 10 ppm

D. Pembuatan Larutan Pb(II) (0; 0,5; 1; 1,5: 2; 2,5) ppm

Larutan standar Pb(II) 10 ppm 10 mL

Diambil masing-masing (0; 2,5; 5; 7,5; 10; 12,5)

Dimasukkan ke dalam labu takar 100 mL
Ditambahkan aquades hingga tanda tera
Dihomogenkan

Larutan standar Pb(II) (0; 0,5; 1; 1,5: 2; 2,5) ppm

E. Pembuatan Buffer KH2PO4-NaOH

- Larutan KH2PO4 0,2 M

Padatan KH2PO4 sebanyak 2,7216 gram

Dimasukkan ke dalam labu takar 100 mL

Ditambahkan 1/4 aquades

Dihomogenkan
Ditambahkan aquades hingga tanda tera

Didapatkan larutan KH2PO4 0,2 M

- Larutan NaoH 0,2 M

Padatan NaOH sebanyak 0,8 gram

Dimasukkan ke dalam labu takar 100 mL

Ditambahkan aseton hingga tanda tera
Dihomogenkan

Didapatkan larutan NaOH 0,2 M

F. Pembuatan NaOH 0,1 M

Padatan NaOH sebanyak 0,8 gram

Dimasukkan ke dalam labu takar 100 mL

Ditambahkan aseton hingga tanda tera
Dihomogenkan

Didapatkan larutan NaOH 0,2 M

G. Strilisasi Alat

Peralatan kaca

Dicuci hingga bersih

Dibungkus dengan kertas
Disterilisasi menggunakan autoclave
selama 1 jam dengan suhu 121oC

Peralatan kaca steril

H. Pembuatan Nutrient Broth

NaCl 1 g, tripton 1 g dan yeast extract 0,5 g.

Dimasukkan ke dalam 6 labu Erlenmeyer 250 mL

Dilarutkan dengan 200 mL aquades
dihomogenkan dengan magnetic stirrer

Larutan Luria Bertani

Disterilisasi dengan autoclave dengan suhu 121oC

selama 30 menit
Dimasukkan ke dalam inkubator dengan suhu 40oC

Medium Luria Bertani steril

I. Pembuatan Starter Bakteri E. coli

Medium Luria Bertani steril

sebanyak 10 mL

Dimasukkan ke dalam labu Erlenmeyer

Diinokulasi bakteri ke dalam medium
sebanyak 60 µL di dalam
Diinkubasi pada suhu 37°C selama
24 jam sebelum digunakan

Bakteri beregenerasi

J. Penentuan nilai OD (Optical Density)

Medium starter bakteri E. coli

sebanyak 1 mL

Dimasukkan ke kuvet
Diukur nilai absorbansi pada
panjang gelombang 610 nm
Dilakukan pengukuran sebelum dan sesudah
medium diinkubasi

Absorbansi medium Absorbansi medium

sebelum diinkubasi sesudahdiinkubasi

K. Penentuan pH optimum dan Panjang Gelombang Maksimum Pb(II)

Larutan standar Pb(II) 0,5 ppm sebanyak 10 mL

Dimasukkan ke dalam labu Erlenmeyer 50 mL

Ditambahkan Alizari Red S 0,01 M 10 mL
Ditambahkan 0,15 mL NaOH 0,1 M
Ditambahkan buffer sesuai dengan pH (4; 7; 12)
Didiamkan hingga 30 menit
Ditentukan panjang gelombang maksimum
pada rentang 400-550 nm

Absorbansi
L. Pembuatan Kurva Standar Pb(II)
Larutan standar Pb(II) (0; 0,5; 1; 1,5: 2; 2,5) ppm
sebanyak 10 mL

Dimasukkan masing-masing ke dalam

labu Erlenmeyer 50 mL
Ditambahkan Alizarin Red S 0,01 M

Ditambahkan larutan buffer sesuai dengan pH optimum

yang didapatkan

Didiamkan hingga 30 menit

Diukur absorbansi pada panjang gelombang maksimum

Absorbansi Absorbansi Absorbansi Absorbansi Absorbansi Absorbansi Absorbansi

M. Biosorpsi Pb2+ oleh Bakteri E. coli

6 buah botol schott berisi
medium E. coli

Ditambahkan masing-masing larutan standar logam Pb(II) 100 ppm

sebanyak (0; 2,5; 5; 7,5; 10; 12,5) mL
Ditambahkan dengan Luria bertani hingga tera

Dimasukkan ke dalam inkubator pada suhu 37 ºC

Biosorpsi logam Biosorpsi logam Biosorpsi logam Biosorpsi logam Biosorpsi logam Biosorpsi logam
Pb(II) 0 ppm Pb(II) 0,5 ppm Pb(II) 1 ppm Pb(II) 1,5 ppm Pb(II) 2 ppm Pb(II) 2,5 ppm

N. Pengujian Sampel
Medium bakteri E. coli yang telah dipaparkan
Pb(II) dengan konsentrasi (0; 5; 10; 15; 20; 25) ppm

Diambil sebanyak 10 mL
Disaring dengan membrane milipore 0,45 nm
Dimasukkan masing masing ke dalam Erlenmeyer 50 mL
Ditambahkan 1 ml Alizarin Red S 0,01 M
Ditambahkan 0,15 mL NaOH 0,1 M
Ditambahkan larutan buffer sesuai pH optimum yang didapatkan
Didiamkan hingga 30 menit
Diukur absorbansi menggunakan spektrofometer visibel
dengan panjang gelombang maksimum
Pengujian sampel dilakukan setiap 48 jam

Absorbansi Absorbansi Absorbansi Absorbansi Absorbansi Absorbansi