Perlindungan TGF-β1 terhadap
Peradangan Saraf dan Neurodegenerasi pada
AKSES
TERBUKA
Kutipan: Chen J-H, Ke K-F, Lu J-H, Qiu Y-H,
Peng YP (2015) Perlindungan TGF-β1
terhadap Peradangan Saraf dan
Neurodegenerasi padaTikus Model
Penyakit Alzheimer yang Diinduksi
Aβ1-42. PLoS SATU 10 (2): e0116549.
DOI:10.1371/journal.pone.0116549
Editor Akademik: Michelle L. Block, Indiana
School of Medicine, AMERIKA SERIKAT
Diterima: September 8, 2014
Diterima: Desember 8, 2014
Diterbitkan: Februari 6, 2015
Hak cipta: © 2015 Chen et al. Ini adalah artikel
akses terbuka yang didistribusikan di bawah
ketentuan Lisensi Atribusi Creative Commons,
yang mengizinkan penggunaan, distribusi, dan
reproduksi tidak terbatas dalam media apa pun,
asalkan penulis dan sumber asli dikreditkan.
Data Availability Statement: Semua data yang
relevan ada di dalam kertas.
Pendanaan: Para penulis ingin mengucapkan
terima kasih kepada Dr. M. Kerry O'Banion,
University of Rochester, untuk mengedit
naskah ini. Pekerjaan ini didukung oleh hibah
81271323 dan 31371182 dari National Natural
Science Foundation of China, BK2011386 dari
Yayasan Ilmu Pengetahuan Alam Provinsi
Jiangsu
China, dan proyek yang didanai oleh Priority
Academic
Pengembangan Program (PAPD) dari Institusi
Pendidikan Tinggi Jiangsu. Para penyandang
dana tidak memiliki peran dalam desain studi,
pengumpulan datadan analisis, keputusan
untuk menerbitkan, atau persiapan naskah.
ARTIKEL PENELITIAN
Kepentingan yang Bersaing: Para penulis telah menyatakan
Pendahuluan bahwa tidak ada kepentingan yang bersaing.
PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549
Tikus Model Penyakit Alzheimer yang
Diinduksi Aβ1-42
Jia-Hui Chen 1,2, Kai-Fu Ke2, Jian-Hua Lu 1, Yi-Hua Qiu 1 *, Yu-Ping Peng 1 *
1 Departemen Fisiologi, Fakultas Kedokteran, dan Pusat Inovasi Bersama Neuroregenerasi, Nantong
Universitas, Nantong, Cina, 2 Departemen Neurologi, Rumah Sakit Afiliasi, Universitas Nantong, Nantong, Cina
* yhqiu@ntu.edu.cn (YHQ); yppeng@ntu.edu.cn (YPP)
Abstrak
Peradangan saraf telah dilaporkan terkait dengan patogenesis penyakit Alzheimer (AD).
Peradangan saraf umumnya dianggap sebagai hasil dari aktivasi glial; namun, kami baru-baru ini
menunjukkan bahwa sel T helper (Th) 17, subpopulasi sel T CD4 + proinflamasi, juga terlibat
dalam patogenesis AD. Mengubah faktor pertumbuhan (TGF)-β1, sitokin yang dapat
diekspresikan di otak, dapat bersifat imunosupresif, tetapi efeknya pada peradangan saraf limfosit-
m yang disalin pada patogenesis AD belum ditangani dengan baik. Dalam penelitian saat ini kami
memberikan TGF-β1 melalui rute intracerebroventricle (ICV) dan intranasal (IN) pada tikus
model AD untuk menyelidiki efek antiinflamasi dan neuroprotektifnya. Model tikus AD disiapkan
dengan injeksi hippocampal bilateral amiloid-β (Aβ) 1-42. TGF-β1 diberikan melalui ICV satu jam
sebelum injeksi Aβ 1-42 atau melalui kedua nares tujuh hari setelah injeksi Aβ1-42 . Pemberian
ICV TGF-β1 sebelum Aβ 1–42 injection sangat memperbaiki neurodegenerasi yang diinduksi Aβ
1–42 dan mencegah Aβ 1–42menginduksi peningkatan mediator proinflamasi yang diturunkan glia
(TNF-α, IL-1β dan iNOS), serta sitokin proinflamasi yang diturunkan dari sel T (IFN-γ, IL-2, IL-
17 dan IL-22), di hipotalamus, serum atau cairan serebrospinal (CSF) dengan cara yang
tergantung konsentrasi. Pretreatment TGFβ1 juga mencegah penurunan yang diinduksi Aβ 1-42
pada faktor neurotropik, IGF1, GDNF dan BDNF, dan pada sitokin antiinflamasi, IL-10.
Demikian pula, pemberian TGF-β1 setelah injeksi Aβ 1-42 mengurangi neurodegenerasi,
peningkatan mediator proinflamasi dan sitokin, dan pengurangan faktor neurotropik dan
antiinflamasi, di hipotalamus, serum atau CSF. Temuan ini menunjukkan bahwa T GF-β1
menekan peradangan saraf glial dan sel T yang dimediasi dan dengan demikian mengurangi
neurodegenerasi terkait AD. Efektivitas IN diberikan TGF-β1 dalam mengurangi neurotoksisitas
Aβ 1-42 menunjukkan pendekatan terapeutik yang mungkin pada pasien dengan AD.
Ion neuroinflammattelah diakui secara luas sebagai kontributor patologis yang mungkin
untuk penyakit Alzheimer (AD), gangguan neurodegeneratif yang bergantung pada usia dan
penyebab paling umum dari demensia [1, 2]. Peradangan saraf umumnya dianggap hasil dari
aktivasi sel glial termasuk mikroglia dan astrosit [3], dan mikroglia aktif terdeteksi pada otak
pasien AD [4]. Mikroglia yang diaktifkan ini melepaskan senyawa sitotoksik, sitokin dan
Pebruari 6, 2015 1 / 22
 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

kemokin, yang diyakini pada akhirnya menyebabkan kerusakan saraf dankematian [4].
Memang, penghambatan farmakologis respons inflamasi mikroglial memberikan
perlindungan saraf [5, 6]. Selain sel glial, penelitian terbaru mengungkapkan bahwa limfosit,
terutama limfosit T, berpartisipasi dalam mmasi neuroinfla terkait AD[7]. Kami baru-baru
ini melaporkan infiltrasi parenkim sel T helper (Th) 17, subpopulasi sel T CD4 +
proinflamasi, melalui penghalang darah-otak yang terganggu (BBB) dan peningkatan sitokin
proinflamasi Th17, interleukin (IL) -17 dan d IL-22 di otak AD yang diinduksi amiloid β (A
β) 1-42 [8]. Temuan ini menunjukkan bahwa sel Th17 perifer dapat menembus ke otak dan
memediasi peradangan saraf AD. Selain sel Th17, keterlibatan himpunan bagian lain dari
Sel T CD4 + termasuk sel T proinflamasi dan antiinflamasi, seperti sel Th1, Th2 dan T
regulator (Treg), masih harus diklarifikasi dalam patogenesis neuroinflamasi AD.
Mengubah faktor pertumbuhan (TGF)-β1, sitokin imunosupresif, adalahpengatur penting
pertumbuhan sel dan diferensiasi dan perbaikan jaringan setelah cedera [9, 10]. Ini juga
melindungi neuron terhadap kerusakan yang disebabkan oleh eksitotoksin, hipoksia / iskemia
dan kekurangan faktor trofik [11-14]. TGF-β 1 telah terbukti memainkan peran penting dalam
patogenesis AD [15]. Misalnya, tingkat TGF-β 1 dalam plasma pasien AD berkurang [16],
dan sekresi TGF-β 1 dari sel mononuklear darah perifer dalam sirkulasi pasien AD juga
menurun [17]. Yang penting, overexpressio n TGF-β 1 secara mencolok mengurangi
pembentukan plak dan akumulasi β pada tikus hAPP, dan efek TGF-β 1 ini terkait dengan
peningkatan pembersihan β oleh mikroglia BV-2 [18], menunjukkan bahwa mikroglia terlibat
dalam mekanisme perlindungan saraf TGF-β 1 lagist A β neurotoksisitas yang diinduksi
agregasi. Namun, kurang jelas apakah TGF-β 1 menghambat peradangan saraf yang
dimediasi sel T dan mengurangi neurodegenerasi terkait AD ketika diberikan secara eksogen.
Mengklarifikasi hal ini adalah kepentingan klinis untuk mengembangkanstrategi terapeutik
untuk mencegah dan mengobati AD.
Dalam kebanyakan sistem eksperimental yang menunjukkan neuroprotection, TGF-β1
diterapkan dengan pemberian intracerebroventricular (ICV) sebelum cedera otak. Meskipun
berguna dalam menunjukkan perlindungan oleh TGF-β 1,strategi preve ntive tidak praktis
pada pasien nyata. Pemberian intranasal (IN) adalah pendekatan yang efektif dan non-invasif
untuk pengobatan dengan faktor pertumbuhan yang melewati BBB ke otak di sepanjang jalur
saraf penciuman dan trigeminal [19, 20]. Dalam administrasi TGF-β 1 mengurangi volume
infark, meningkatkan pemulihan fungsional dan meningkatkan neurogenesis pada tikus
setelah stroke [21]. Namun, tidak diketahui apakah pemberian TGF-β 1 melalui IN setelah
toksisitas A β 1-42 dapat memperbaiki neuroinflamm terkait ADatau neurodegenerasi. Dengan
demikian, selain pemberian ICV TGF-β 1 sebelum injeksi A β 1-42, pemberian TGF-β 1
setelah injeksi Aβ 1-42 juga digunakan dalam penelitian ini untuk mengeksplorasi pendekatan
terapeutik yang lebih relevan secara klinis untuk pasien dengan AD.
Suatuβ secara luas diakui sebagai faktor patogen pada AD yang dapat secara langsung
neurotoksik serta memprovokasi respons neuroinflamasi dengan mengaktifkan mikroglia
[22]. Injeksi intrahippocampal Aβ 1-42 di otak tikus meniru beberapa fitur patologis dan
perilaku pasien AD, termasuk reaktivitas inflamasi yang ada di otak AD manusia [23]. Jadi,
dalam penelitian ini, kami menggunakan Aβ 1-42 dengan injeksi intrahippocampal pada tikus
untuk menginduksi perubahan terkait AD, termasuk gangguan pembelajaran spasial dan
memori, protein prekursor amiloid (APP) dan ekspresi protein fosfatase (PP) 2A, kehilangan
neuronal dan apoptosis, aktivasi sel glial, dan respons sel T proinflamasi dan antiinflamasi.

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 2 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

Bahan dan Metode Pernyataan Etika

Pekerjaan hewan yang dilakukan dalam penelitian ini mengikuti Panduan Institut Kesehatan
Nasional untuk Perawatan dan Penggunaan Hewan Laboratorium dan disetujui oleh Komite
Perawatan dan Penggunaan Hewan Institusional Universitas Nantong.

Binatang
Tikus Sprague-Dawley berusia empat bulan (Pusat Hewan Percobaan, Universitas Nantong,
Cina) dipelihara pada siklus terang / gelap 12 jam, dan ditempatkan secara individual dengan
akses gratis ke makanan dan air. Tikus secara acak dibagi menjadi enam kelompok untuk
ICV administration TGF-β 1: utuh, injeksi garam hippocampal bilateral, injeksi hippocampal
A β 1-42 bilateral, dan pengobatan TGF-β 1 dengan tiga konsentrasi, 4, 10 atau 50 ng dalam
5 μ l, masing-masing, melalui pemberian ICV sebelum injeksi A β 1-42 . UntukSTRASI
administrasi IN IGF-β 1, ada empat kelompok: utuh, injeksi saline hippocampal bilateral,
injeksi hippocampal A β 1-42 bilateral, dan pengobatan TGF-β 1 melalui IN setelah injeksi A
β 1-42. Hewan utuh dan diberi garam digunakan sebagai kontrol. Ada 12 tikus di setiap
kelompok, dan oleh karena itu total 120 tikus digunakan dalam penelitian ini.

Persiapan Model AD Rat yang Diinduksi β 1-42

Sebelum injeksi, Aβ1-42 (Sigma-Aldrich, AS) diinkubasi dalam garam steril pada suhu 37 ° C
selama 7 hari untuk memungkinkan perakitan peptida yang terkait dengan toksisitas [24].
Solusi Aβ 1-42 yang diinkubasi umumnya mengandung struktur seperti fibril dan oligomer
berukuran berbeda [25]. Tikus yang telah dibius secara mendalam dengan pentobarbital (55
mg / kg, i.p.) dan dipasang dalam bingkai stereotaktik (David Kopf 902-A, AS) disuntik
dengan larutan A β 1-42 yang diinkubasi ke setiap sisi hippocampus dengan volume 1 μ l
yang mengandung 4 μg Aβ 1-42 menggunakan tDia mengikuti koordinat stereotaksis: 3,6 mm
posterior ke Bregma, 2,4 mm kiri / kanan ke garis tengah, dan 2,8 mm ventral ke Bregma
[26]. Setiap injeksi dilakukan selama 5 menit dan setelah injeksi, jarum tetap berada di lokasi
target selama 10 menit untuk avoid Aβ refluks 1-42 di sepanjang saluran jarum. Setelah
operasi, setiap tikus disuntik dengan penisilin (100.000 U) di otot belakang untuk mencegah
infeksi.

Pengobatan TGF-β 1
Ada dua rute untuk pengobatan TGF-β 1, pemberian ICV sebelum injeksi Aβ 1-42 dan
DALAM administrasi setelah Aβ injeksi 1-42. Untuk pemberian ICV TGF-β 1, TGF-β 1 (R&D
Systems, Jerman) dilarutkan dalam garam steril pada konsentrasi 0,8 ng/μ l, 2 ng/μ l, atau 10
ng/μl. Satu jam sebelum injeksi Aβ 1-42, 5 μl larutan TG F-β 1 disuntikkan ke ventrikel
serebral lateral kiri dengan koordinat sebagai berikut: 0,8 mm posterior ke bregma, 1,5 mm
lateral dari garis tengah, dan 3,8mm ventral dari tengkorak. Dengan demikian, tiga
konsentrasi TGF-β 1 yang berbeda digunakan melalui pemberian ICV: 4 ng, 10 ng dan 50 ng
dalam 5 μl. Dalam administrasi TGF-β 1 dilakukan seperti yang dijelaskan oleh Liu et al. [27,
28] dengan modifikasi. Pada hari ke-7 setelah injeksi Aβ 1-42, tikus dibius dengan
pentobarbital (55 mg / kg, i.p.) dan ditempatkandi punggung mereka. Volume total larutan
30 μ l per tikus yang mengandung 1,5 μ g TGF-β 1 diberikan sebagai 2 μl turun ke nares kiri
dan kanan, sisi bergantian pada interval 2 menit selama periode 30 menit. Mulut dan naris

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 3 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

yang berlawanan ditutup selamajatah administrasi. Pada hari ke 7 setelah perawatan TGF-β 1
melalui ICV atau melalui IN, semua pengukuran yang dijelaskan di bawah ini dilakukan.

Pengujian Perilaku
Pengujian perilaku dilakukan di labirin air Morris oleh dua peneliti yang benar-benar buta
terhadap perawatan hewan, seperti yangdijelaskan secara rinci sebelumnya [8]. Labirin air
Morris (Xin Ruan XR-XM101, Cina), tangki renang hitam melingkar (diameter 160 cm dan
kedalaman 50 cm) dengan platform pelarian bulat kecil (diameter 8 cm) di dalamnya, diisi
dengan air hangat (23 ± 1 ° C) to kedalaman 27 cm dan platform pelarian terendam 1 cm di
bawah permukaan air. Sebelum mendapatkan latensi pelarian tikus di labirin air Morris, tikus
diberi empat percobaan (pergantian 60 detik berenang dan 30 detik istirahat) per hari selama
dua hari berturut-turutuntuk menemukan platform tersembunyi. Aktivitas berenang tikus
dipantau oleh kamera video yang dipasang di atas kepala dan secara otomatis direkam oleh
sistem pelacakan video. Pembacaannya adalah latensi untuk menemukan platform
tersembunyi, yaitu latensi melarikan diri.

Nissl Staining
Tikus difusikan dengan paraformaldehida 4% (pH 7,4) setelah anestesi dengan pentobarbital
(55 mg / kg, yaitu seperti yang dijelaskan secara rinci sebelumnya [8]. Secara singkat, setelah
pasca-fiksasi dalam fiksatif yang sama selama 2-4 jam pada suhu 4 ° C, otak dipotong
menjadi 30 μ bagian koronal setebal m pada cryostat (Leica CM 1900-1-1, Jerman) Untuk
memastikan bagian hippocampal dicocokkan antara kelompok, landmark anatomi yang
disediakan oleh atlas otak digunakan. Bagian-bagian tersebut dipasang pada slide berlapis
polilisin, dikeringkan semalaman, direndam dalam air suling, dan kemudian direndam dalam
1% cresyl violet selama sekitar 20 menit sampai kedalaman pewarnaan yang diinginkan
tercapai. Setelah dibilas dalam air suling dan didehidrasi dalam serried etanol bertingkat,
bagian-bagian direndam dalam xilena, dipasang dalam balsam netral, dan ditutup-tutupi. Sel-
sel nissl-positif di lapisan piramidal wilayah CA1 medial diperiksa untuk menilai kehilangan
neuronal.

Pewarnaan TUNEL
Bagian hippocampal koronal 40 μm yang mengambang bebas dikumpulkan dan diblokir
dengan 0,3% Triton X-10 0 dan 3% serum kambing dalam 0,01 M PBS (pH 7,3) selama 30
menit. Irisan diinkubasi dengan antibodi primer terhadap NeuN yang diproduksi pada kelinci
(Millipore, AS), diencerkan pada 1:200 dalam 0,01 M PBS, semalam pada suhu kamar.
Bagian tersebut kemudian dicuci dalam 0,01 M PBS dan diinkubasi dengan antibodi
sekunder, Alexa Fluor 594 kambing terkonjugasi anti-kelinci IgG (Cell signaling
Technology, USA), diencerkan dalam 0,01 M PBS (1:200), selama 4 jam pada suhu kamar.
Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated deoxyuridine triphosphate (dUTP)-
biotin nick end labeling (TUNEL) pewarnaan dilakukan dengan menggunakan In Situ Cell
Death Detection Kit (Roche Applied Science, Jerman), seperti yang dijelaskan secara rinci
sebelumnya [8]. Secara singkat, setelah pewarnaan NeuN, bagian koronal yang dipasang
dibilas dengan PBS dan diperlakukan dengan 1% Triton-100 di PBS selama 2 menit di atas
es. Bagian dibilas dalam PBS dan diinkubasi selama 60 menit pada suhu 37 ° C dengan 50 μl
campuran reaksi TÚNEL. Bagianontrol c negatif diinkubasi selama 60 menit pada suhu 37 °
C dengan 50 μl larutan paralel tanpa buffer TdT dan dUTP biotinilasi. Setelah dicuci dengan

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 4 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

PBS, irisan dianalisis dengan mikroskop fluoresensi. Untuk setiap tikus, total 15 bidang
visual di tigabagian hi ppocampal dihitung untuk sel bernoda TUNEL.

Imunohistokimia
Hippocampus dipotong secara koronal menjadi 40 bagian setebal μ m. Bagian tersebut
kemudian diblokir dengan 0,3% Triton X-100 dan 3% serum kambing dalam 0,01 M PBS
(pH 7,3) selama 30 menit. Irisan diinkubasi dengan antibodi primer terhadap CD11b (AbD
Serotec, Inggris) atau GFAP (Millipore, AS), yang diencerkan pada 1:200 dalam 0,01 M
PBS, semalam pada suhu kamar. Bagian tersebut kemudian dicuci dalam 0,01 M PBS dan
diinkubasi dengan antibo sekunder dy FITC-conjugated goat anti-mouse IgG (Sigma-Aldrich,
USA) yang diencerkan dalam 0,01 M PBS (1:200) selama 4 jam pada suhu kamar. Setelah
dibilas dalam 0,01 M PBS, bagian-bagian itu menempel pada slide kaca dan diamati di
bawah mikroskop fluoresensi.

Analisis Western Blot

Hippocampus dihomogenisasi dalam buffer sampel SDS yang mengandung campuran
inhibitor proteinase dan supernatan dikumpulkan dengan sentrifugasi pada 4 ° C pada 12.000
rpm selama 15 menit. Supernatan dicampur dengan buffer pemuatan, yang direbus selama 10
menit. Protein dipisahkan oleh elektroforesis gel natrium dodesil sulfat-poliakrilamida 10%
dan dipindahkan ke membran polivinilidena difluorida (Pall, AS) menggunakan peralatan
elektroblotting (Bio-Rad, AS). Membran diblokir selama 1 jam di ruang temperature dalam
garam Tris-buffered yang mengandung 0,1% Tween-20 dan 5% susu kering dan kemudian
diinkubasi dengan antibodi primer terhadap APP (1:1000, Millipore, USA), PP2A (1:1000,
Cell Signaling Technology, USA), tumor necrosis factor (TNF)-α (1:300, Abcam, UK), IL-1
β (1:200, Santa Cruz Biotechnology, Inc., USA), inducible nitric oxide synthase (iNOS,
1:50, Abcam, Inggris), faktor pertumbuhan seperti insulin
(IGF)-1 (1:100, Santa Cruz Biotechnology, Inc., USA), glial-derived neurotrophic factor
(GDNF, 1:100, Abcam, UK), brain-der ived neurotrophic factor (BDNF, 1:100, Santa Cruz
Biotechnology, Inc., USA), T-bet (1:100, Santa Cruz Biotechnology, Inc., USA), interferon
(IFN)-γ (1:200, Santa Cruz Biotechnology, Inc., USA), IL-2 (1:100, Santa Cruz
Biotechnology, Inc., USA), ROR-γ (1:20 0, Santa Cruz Biotechnology, Inc., AS), IL-17
(1:100, Santa Cruz Biotechnology, Inc., AS), IL-22 (1:100, Santa Cruz Biotechnology, Inc.,
AS), GATA-3 (1:100, Santa Cruz Biotechnology, Inc., AS), IL-4 (1:500, R&D Systems,
Wiesbaden, Jerman), Foxp3
(1:20 0, Santa Cruz Biotechnology, Inc.,USA), atau IL-10 (1:200, Santa Cruz Biotechnology,
Inc.,
Amerika Serikat). Membran diperiksa pada suhu 4 ° C semalam dan diinkubasi dengan
IRDye
IgG anti-kelinci kambing terkonjugasi 800 (1:5000, Rockland Immunochemicals, Inc., USA),
IRDye 800-conjugated goat anti-mouse IgG (1:5000, Rockland Immunochemicals, Inc.,
USA), atau IRDye 800-conjugated donkey anti-goat IgG (1:5000, LI-COR Inc, USA) selama
1 jam pada suhu kamar, diikuti dengan visualisasi dengan sistem pemindaian laser Odyssey
(LI-COR Inc, USA). Bercak diperiksa ulang dengan antibodi anti-β-aktin tikus monoklonal
(1:5000, SigmaAldrich, USA) dan bereaksi dengan IRDye 800-conjugated goat anti-mouse
IgG (1:5000, Rockland Immunochemicals, Inc., USA) untuk mengkonfirmasi pemuatan
protein yang sama. Berat molekult dan kuantitas relatif pita protein ditentukan oleh sistem
analisis gambar (Odyssey

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 5 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

3.0 perangkat lunak).

Analisis PCR Real-Time

Total RNA hippocampus diekstraksi dengan reagen Trizol (Invitrogen, USA) sesuai dengan
instruksi pabrik, seperti yang dijelaskan secara rinci sebelumnya [8]. DNA genom residual
yang berpotensi terkontaminasi dihilangkan dengan DNAse bebas RNA (Promega, USA).
Setelah kandungan RNA ditentukan dengan analisis spektrofotometri pada 260 nm, 2 μg total
RNA ditranskripsi secara terbalik dalam reaksi 20 μl yang digunakan untuk sintesis cDNA
dengan reverse transcriptase virus limfoma myelomonocytic murine (Promega, USA). Real-
time quantitative PCR dilakukan pada cDNA dengan menggunakan Rotor-Gene 3000 Real-
time Cycler dengan SYBR green I sebagai sistem deteksi. Setiap 20 μ l campuran reaksi
mengandung 1 μ l cDNA, 2 μ l buffer PCR, 3,0 mM MgCl 2, 0,2 mM setiap dNTP, 0,2 μM
setiap pasangan primer oligonukleotida, dan 1 U
Taq DNA polimerase. Prosedur reaksi adalah sebagai berikut: langkah initial pada 95 ° C
selama 5 menit,
40 siklus 94°C selama 15 detik, 62°C selama 20 detik, dan 72°C selama 20 detik. Data
dikumpulkan menggunakan perangkat lunak instrumen (perangkat lunak Rotor-Gen, versi
6.0) dan kuantifikasi relatif dilakukan menggunakan ambang batas komparatif (CT) me thod
setelah menentukan nilai CT untuk referensi (β-aktin) dan gen target (TNF-α, IL-1 β, iNOS,
IGF-1, GDNF, BDNF, IFN-γ, IL-2, IL-17, IL22, IL-4 atau IL-10) di setiap set sampel sesuai
dengan 2-ΔΔ Ct metode [29]. Perubahan tingkat ekspresi mRNA dihitungsetelah normalisasi
menjadi β-aktin, gen rumah tangga. Untuk memverifikasi spesifisitas setiap reaksi
amplifikasi, analisis kurva leleh dilakukan. Urutan primer untuk setiap gen target tercantum
pada Tabel 1.

Uji Imunosorben Terkait Enzim (ELISA)

Seperti dijelaskan secara rinci sebelumnya [8], darah diambil dari ventrikel kanan, dan
serum dikumpulkan dengan sentrifugasi pada 3.000 rpm selama 20 menit. Cairan
serebrospinal (CSF) ditarik dengan tusukan foramen magnum. Serum dan CSF disimpan
pada suhu -80 ° C sampai digunakan. Konsentrasi ytokin c target, IFN-γ, IL-1 β, IL-17
dan IL-10, dalam serum dan / atau CSF diukur dengan kit ELISA (eBioscience, USA)
sesuai dengan pedoman produsen.

Analisis Statistik
Data dinyatakan sebagai nilai rata-rata ± standar deviasi masing-masing kelompok. Analisis
statistik dilakukan dengan Paket Statistika Ilmu Sosial (SPSS, 12.0). Data dianalisis dengan
one-way analysis of variance (ANOVA) untuk perbandingan perbedaan antara berbagai
kelompok. Setelah ANOVA, tes Student-Newman-Keul digunakan untuk perbandingan data
berpasangan. Perbedaan dianggap signifikan secara statistik pada p< 0,05.

Hasil ICV dan IN diberikan TGF-β 1 keduanya mengurangi gangguan kognitif

dan neurotoksisitas yang diinduksi β 1-42
TGF-β1 (4, 10 atau 50 ng dalam 5 μl) adalah sayanjected ke ventrikel serebral lateral kiri
tikus satu jam sebelum hippocampal bilateral Aβ 1-42 injeksi. Pada hari ke 7 setelah perawatan
ini,

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 6 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

Tabel 1. Urutan primer PCR.

Gen Sense primer Antisense primer

IL-2 5'-CCATGATGCTCACGTTTAAATTTT-3' 5'-CATTTTCCAGGCACTGAAGATG-3'

IFN-γ 5'-GCCCTCTCTGGCTGTTACTG-3' 5'-TACCGTCCTTTTGCCAGTTC-3'

IL-4 5'-ACCTTGCTGTCACCCTGTTCT-3' 5'-CTCTCTCAGAGGGCTGTCGTTA-3'

IL-10 5'-TGGCAACCCAAGTAACCCT-3' 5'-CACCCACTTCCCAGTCAGC-3'

IL-17 5'-TGGACTCTGAGCCGCAATG-3' 5'-GGCGGACAATAGAGGAAACG-3'

IL-22 5'-AGCGGTGATGACCAGAACA-3' 5'-CTCAGGGACATAAACAGCAGA-3'

iNOS 5'-CAGCTGGGCTGTACAAACCTT-3' 5'-CATTGGAAGTGAAGCGTTTCG-3'

IL-1β 5'-CTTCCTTGTGCAAGTGTCTG-3' 5'-CAGGTCATTCTCATCACTGTC-3'

TNF-α 5'-CCACCACGCTCTTCTGTCTAC-3' 5'-ATCTGAGTGTGGGGTCTGG-3'

IGF-1 5'-TTTTACTTCAACAAGCCCACA-3' 5'-CATCCACAATGCCCGTCT-3'

GDNF 5'- ATTCAAGCCACCATCAAAAG-3' 5'-TCAGTTCCTCCTTGGTTTCG-3'

BDNF 5'-ATCCCATGGGTTACACGAAG-3' 5'-AGTAAGGGCCCGAACATACGATTG-3'

β-aktin 5'-CGTTGACATCCGTAAAGACC-3' 5'-TAGAGCCACCAATCCACAC-3'

DOI:10.1371/journal.pone.0116549.t001

Perubahan terkait AD pada tikus-tikus ini diukur. Injeksiβ 1-42 secara signifikan meningkatkan
latensi pelarian di labirin air Morris, ekspresi APP yang diregulasi, ekspresi PP2A yang
diregulasi ulang, dan menyebabkan hilangnya tubuh Nissl dan peningkatan jumlah sel positif
ganda NeuN / TUNEL di wilayah CA1, sehubungan dengantikus utuh atau injeksi garam
(Gambar 1). Selain gangguan kognitif dan patologis, injeksi A β 1-42 juga menginduksi
manifestasi klinis, termasuk berkurangnya perhatian, keaktifan lemah, dan perilaku
eksplorasi yang tertekan. Secara signifikan, dibandingkan dengan injeksi A β 1-42 saja,
pretreatment ICV TGF-β 1 dikombinasikan dengan injeksi A β 1-42 menurunkan latensi
pelarian, ekspresi APP yang diregulasi turun, ekspresi PP2A yang diregulasi, dan mengurangi
jumlah neuronal apoptosis (Gambar 1). Efek TGF-β 1 ini bergantung pada konsentrasi.
Untuk mengkonfirmasi efek neuroprotektif TGF-β 1 terhadap toksisitas A β 1-42, kami
menggunakan pendekatan kedua untuk mengelola TGF-β 1, di mana TGF-β 1 (1,5 μ g / 30
μl) diberikan melalui kedua nares pada hari ke-7 setelah injeksi A β 1-42. DALAM administrasi
TGF-β 1 masih sangat mengurangi peningkatan latensi melarikan diri, PP2A yang diregulasi
dan peningkatan kehilangan neuronal dan apoptosis yang disebabkan oleh Aβ 1-42, tetapi
tidak secara signifikan mengurangi β 1-42-induced upregulation APP expression (Gambar 2).

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 7 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

ICV dan IN diberikan TGF-β 1 keduanya menghambat aktivasi sel glial yang
diinduksi β1-42
A β 1-42 menginduksi upregulation mediator inflamasi, TNF-α, IL-1β dan iNOS, dan
downregulation faktor neurotropik, IGF-1, GDNF dan BDNF, pada tingkat ekspresi gen dan
protein di hippocampus (Gbr. 3A-B). Secara bersamaan, A β 1-42 menyebabkan peningkatan
mediator inflamasi IL-1 β dalam serum dan CSF (Gbr. 3C). TGF-β 1 (4, 10 atau 50 ng dalam
5 μl) diberikan ICV sebelum injeksi A β 1-42 menghambat semua perubahan yang diinduksi
A β 1-42 dengan cara yang bergantung pada konsentrasi (Gambar 3).
Selain itu, perlakuan IN TGF-β 1 (1,5 μ g / 30 μl) setelah injeksi Aβ 1-42 mengurangi
peningkatan β IL-1 dan ekspresi iNOS dan penurunan ekspresi GDNF dan BDNF di
hippocampus (Gbr. 4A-B). Tetapi pengobatan TGF-β 1 tidak secara signifikan mengubah Aβ
1-42-induced upregulation TNF-α atau downregulation IGF-1 di hippocampus (Gbr. 4A-B).
Peningkatan konsentrasi IL-1 β cdalam serum dan CSF oleh A β 1-42 dikurangi dengan
pemberian IN TGF-β 1 (Gbr. 4C).

ICV dan IN diberikan TGF-β 1 keduanya mengurangi peningkatan

proinflamasi yang diinduksi β 1-42 dan atenuasi antiinflamasi limfosit T
Seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 5A dan B, Aβ1-42 secara mencolok meningkatkan
mRNA dan tingkat ekspresi protein sitokin proinflamasi, IFN-γ, IL-2, IL-17 dan IL-22, tetapi
menurunkan tingkat ekspresi sitokin antiinflamasi, IL-4 dan IL-10, di hippocampus. Secara
simultan, tingkat ekspresi T-bet dan ROR-γ, faktor transkripsi spesifik yang terkait dengan
sel proinflamasi Th1 dan Th17, masing-masing, diatur, sedangkan tingkat ekspresi GATA-3
dan Foxp3, faktor transkripsi spesifik yang terkait dengan sel antiinflamasi Th2 dan Treg,
masing-masing, diturunkan dalam hippocampus tikus model AD (Gbr. 5B). Selain itu, dalam
serum atau CSF tikus AD, konsentrasi sitokin proinflamasi IFN-γ dan IL-17 meningkat,
sedangkan konsentrasisitokin antiinflamasi IL-10 menurun, sehubungan dengan hewan utuh
atau injeksi garam (Gbr. 5C). Khususnya, pretreatment dengan TGF-β 1 (4, 10 atau 50 ng
dalam 5 μl) melalui ICV sebelum injeksi A β 1-42 menghambat respons inflamasi Th1- dan
Th17-pro dan meningkatkan respons Treg-antiinflamasi di hippocampus, serum dan CSF,
dibandingkan dengan pengobatan dengan Aβ 1-42

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 8 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

Gambar 1. Pretreatment ICV TGF-β1 mencegah gangguan kognitif yang diinduksi Aβ 1-42 dan kehilangan neuronal dan apoptosis. TGF-β1 (4, 10 atau 50 ng dalam 5
μl) diberikan ICV satu jam sebelum injeksi hippocampal Aβ1-42 bilateral pada tikus. Pada hari ke 7 setelah pemberian TGF-β1, perubahan perilaku dan neuronal
sayaukur. (A) Latensi lepas dari labirin air Morris. Panel kiri menunjukkan jejak berenang tikus di labirin air Morris. Latensi pelarian dicatat sejak tikus memasuki air
(titik merah) hingga kedatangan mereka di platform (putaran l smal hijau). Panel kanan adalah histogram statistik untuk eksperimen ini. (B) Tingkat ekspresi APP dan
PP2A di hippocampus. Panel kiri menunjukkan pita elektroforesis yang representatif, dan panel kanan menunjukkan hasil grafis dari percobaan berulang. (C)
Pewarnaan nissl daerah CA1 hippocampal tikus. Panah besar menunjuk ke lokasi di mana jarum injeksi ditempatkan dan gliosis reaktif terlihat. Perhatikan bahwa Aβ 1-42

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 9 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

menginduksi kehilangan neuron yang jelas di wilayah CA1 dan bahwa TGF-β1 mengurangi kehilangan ini, reflected oleh kepadatan sel dengan badan NISSL. Inset
dalam gambar adalah pandangan umum hippocampus, di mana wilayah CA1 dilambangkan . (D) Histokimia imunofluoresen untuk NeuN dan TUNEL di hippocampus.
Panel kiri adalah representative gambar. Panah menunjuk ke sel bernoda ganda NeuN/TUEL, yang diperbesar dalam inset. Panel kanan adalah histogram statistik dari
percobaan berulang. Untuk setiap tikus, total 15 bidang visual di tiga bagian hippocampal dihitung untuk sel TUNEL-positif. Aβ = Aβ 1–42; TGF(4) = 4 ng of TGF-β1;
TGF(10) = 10 ng of TGFβ1; TGF(50) = 50 ng of TGF-β1. *p<0,05, **p<0,01, dibandingkan tikus utuh atau diberi perlakuan garam; +p<0,05, ++p <0,01, versus
tikus yang disuntikkan Aβ 1–42; &p<0,05, &&p<0,01, versus 4 atau 10 ng tikus yang diberikan TGF-β1.

DOI:10.1371/journal.pone.0116549.g001

sendirian (Gbr. 5). Efek TGF-β 1 ini bergantung pada konsentrasi. Namun, pretreatment
TGF-β 1 tidak mencegah penurunan injeksi A β 1-42 yang diamati pada GATA-3 dan IL-4,
faktor transkripsi dan sitokin sel Th2 antiinflamasi, masing-masing, di hippocampus (Gbr.
5A-B).
Selanjutnya, pengobatan TGF-β 1 melalui IN setelah injeksi A β 1-42 secara signifikan
mengurangi ekspresi IFN-γ, IL-2, IL-17 dan ROR-γ dan juga menghindariekspresi IL-10 dan
Foxp3 di hippocampus, sehubungan dengan injeksi Aβ 1-42 saja (Gbr. 6A-B). Tetapi tingkat
ekspresi IL-22 dan T-bet yang diregulasi dan IL-4 dan GATA-3 yang diregulasi yang
diinduksi oleh A β 1-42 tidak terpengaruh secara signifikan oleh reatment pasca-t TGF-β 1
melalui IN (Gbr. 6A-B). Secara bersamaan, peningkatan kadar sitokin proinflamasi, IFN-γ
dan IL-17, dan penurunan tingkat sitokin antiinflamasi, IL-10, dalam serum atau CSF yang
diinduksi oleh A β 1-42 diperbaiki oleh IN TGF-β 1 pasca perawatan (Gbr. 6C).

Diskusi
Telah ditunjukkan bahwa injeksi intrahippocampal Aβ 1-42 memiliki banyak karakteristik yang
mirip dengan yang ditemukan di otak AD [30]. Oleh karena itu, suntikanβ 1-42 adalah model
hewan yang berguna dari AD [6, 30]. Kami baru-baru ini melaporkan bahwa suntikan β 1-42
di hippocampus bilateral menginduksi gangguan kognitif, gangguan BBB, dan apoptosis
neuronal pada hari ke-7 dan ke-14 pasca-Aβ injeksi 1-42 [8]. Dalam penelitian ini, kami
mengkonfirmasi bahwa injeksi intrahippocampal Aβ 1-42 menginduksi neurodegenerasi AD-ass
ociated. Yang penting, pretreatment TGF-β 1 melalui ICV mencegah gangguan perilaku dan
patologis yang diinduksi A β1-42 dengan cara yang bergantung pada konsentrasi. Hasil ini
menunjukkan bahwa TGF-β 1 dapat menjadi neuroprotektif terhadap inisiasi AD. Karenaefek
pencegahan TGF-β 1 melalui pemberian ICV pada inisiasi AD tidak dapat diterapkan pada
pasien yang sebenarnya, pengobatan dengan IN TGF-β 1 setelah injeksi A β 1-42 dilakukan.
Meskipun peningkatan ekspresi APP di hippocampus tikus model AD tidak berkurang secara
signifikan, gangguan kognitif, penurunan regulasi PP2A dan kehilangan neuronal dan
apoptosis dikurangi dengan TGF-β 1 pasca perawatan melalui IN. Data ini memberikan bukti
kuat untuk aplikasi terapeutik potensial TGF-β 1 dalam perkembangan AD.
Administrasi TGF-β 1 melalui ICV telah dilaporkan oleh Henrich-Noack et al. [31].
Mereka menunjukkan bahwa pemberian ICV 4 ng TGF-β 1 satu jam sebelum iskemia
mengurangi persentase sel piramidal CA1 yang rusak dan efek ini sama dengan yang
diperoleh dengan dalamjection 4 ng TGF-β 1 langsung ke jaringan hippocampal. Data ini
menunjukkan pemberian ICV TGF-β 1 dapat mengirimkannya ke otak untuk mengerahkan
perlindungan saraf yang sama seperti injeksi parenkim otak. Selain itu, Ma et al. [32] telah
menunjukkan bahwa ion administrasi INTGF-β 1 secara signifikan meningkatkan
konsentrasinya di beberapa daerah otak, seperti bola penciuman (dengan konsentrasi
tertinggi), tuberkulum penciuman, striatum, korteks, talamus, hippocampus dan medula, dan
di saraf trigeminal. Oleh karena itu, merekamenyarankan bahwa TGF-β 1 dapat diangkut ke

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 10 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

sistem saraf pusat melalui jalur penciuman dan trigeminal. TGF-β 1 telah dilaporkan
imunosupresif dan neuroprotektif [33], tetapi perannya dalam AD kurang jelas. Di sini, kami
menunjukkan bahwa TGF-β 1 memiliki efek pencegahan atau terapeutik pada gangguan
terkait AD ketika diberikan

Gambar 2. IN TGF-β1 pasca perawatan mengurangi gangguan kognitif yang diinduksi Aβ1-42 dan kehilangan neuronal dan apoptosis. TGF-β1 (1,5 μg / 30 μl)
diberikan IN tujuh hari setelah injeksi Aβ1-42. Pada hari ke-7 setelah pemberian TGF-β1, latensi pelarian di labirin air Morris (A), ekspresi APP dan PP2A (B), dan
kehilangan neuronal (C) dan apoptosis (D) di hippocampus diukur. Desain percobaan dan makna araure mirip dengan Gambar 1, kecuali bahwa TGF-β1 diberikan IN

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 11 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

setelah injeksi Aβ 1-42 pada satu konsentrasi. *p<0,05, **p<0,01, versus tikus utuh atau diberi perlakuan garam; +p<0,05, ++p<0,01, versus
tikus yang disuntikkan Aβ 1–42 saja.

DOI:10.1371/journal.pone.0116549.g002

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 12 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

Gambar 3. Pretreatment ICV TGF-β1 mencegah aktivasi glial yang diinduksi Aβ 1-42. TGF-β1 (4, 10 atau 50 ng dalam 5 μl) diberikan ICV satu jam sebelum injeksi
Aβ1-42. Pada hari ke-7 setelah pemberian TGF-β1, sel glial termasuk mikroglia dan astrosit di hippocampus dievaluasi untuk aktivasi dan fungsinya. (A) Histokimia
imunofluoresen dari bagian hippocampal. Perhatikan bahwa mikroglia dan astrosit, ditandai oleh CD11b dan GFAP, masing-masing, jelas meningkat dalam ukuran
soma dengantraksi ulang proses oleh perlakuan Aβ1-42. Karakteristik memenuhi kriteria morfologis aktivasi mikroglia dan astrosit. Pretreatment TGF-β1 sebelum
injeksi Aβ 1-42 mengurangi ukuran soma mikroglia dan astrosit dibandingkan dengan injeksi Aβ1-42 pada saja.
Inset adalah amplifikasi sel yang ditunjukkan oleh panah. (B) tingkat ekspresi mRNA dari mediator proinflamasi, TNF-α, IL-1β dan iNOS, dan faktor neurotropik, IGF-
1, GDNF dan BDNF, di hippocampus. (C) Ekspresi protein levels dari mediator proinflamasi dan faktor neurotropik. (D) Konsentrasi IL-1β dalam serum dan CSF
diukur dengan ELISA. *p<0,05, **p<0,01, dibandingkan tikus utuh atau diberi perlakuan garam; +p<0,05, ++p<0,01, versus tikus yang disuntikkan Aβ 1–42;
&p<0,05, &&p<0,01, versus 4 atau 10 ng tikus yang diberikan TGF-β1. Aβ = Aβ1–42; TGF(4) = 4 ng of TGF-β1; TGF(10) = 10 ng of TGF-β1; TGF(50) = 50 ng
TGF-β1.

DOI:10.1371/journal.pone.0116549.g003

secara eksogen in vivo. Meskipun efek terapi TGF-β 1 IN mungkin tidak begitu besar seperti
efek pencegahan TGF-β 1 ICV, pendekatan administratif IN yang efektif dan aman
memberikan paradigma praktis untuk mengobati pasien AD dengan TGF-β 1.
Efek TGF-β1 tergantung pada sinyalnya. Gangguan jalur pensinyalan TGF-β 1 adalah
khusus untuk otak AD dan, khususnya, untuk fase awal penyakit [34, 35]. Kekurangan
pensinyalan TGF-β 1 dikaitkan dengan patologi β dan pembentukan kusut neurofibrillary
pada model hewan AD dan mengurangi pensinyalan TGF-β 1 tampaknya berkontribusi baik
untuk aktivasi mikroglial dan aktivasi ulang siklus sel ektopik dalam neuron, dua peristiwa
yang berkontribusi terhadap neurodegenerasi di otak AD [36]. Oleh karena itu,
menyelamatkan TGF-β 1 sinyal sangat penting untuk TGF-β 1 peran saraf. Telah dilaporkan
bahwa TGF-β 1 yang diberikan secara nasal mengatur ekspresi gen dari dua reseptornya
(reseptor TGF-β tipe I dan II) di otak, tetapi tidak mempengaruhi tingkat mRNA TGF-β 1 itu
sendiri, menunjukkan bahwa TGF-β 1 dapat mengerahkan operasi pr neuroprotektifdengan
aktivasi pensinyalannya di otak [32]. Dengan demikian, hasil kami saat ini menyiratkan
bahwa TGF-β 1 yang diberikan secara eksogen memperlambat neurodegenerasi terkait AD
dengan menyelamatkan pensinyalan TGF-β 1.
Selain manifestasi konvensional AD, peradangan saraf juga memainkan peran patogen
dalam AD [37, 38]. Karakteristik utama peradangan saraf AD adalah aktivasi mikroglial dan
astrositik oleh deposit β, dengan produksi sitokin dan kemokin mum proinf berikutnya yang
merekrut lebih banyak sel glial neurotoksik dan menyebabkan peradangan saraf dan
neurotoksisitas lebih lanjut [2, 3, 39-41]. Dalam penelitian ini, kami mengamati peningkatan
ekspresi mediator proinflamasi, TNF-α, IL-1 β dan iNO S, dan penurunan ekspresi faktor
neurotropik, IGF-1, GDNF dan BDNF,di hippocampus tikus model AD. Karena mediator
proinflamasi dan faktor neurotropik diproduksi terutama oleh mikroglia dan astrosit di otak,
temuan ini mengkonfirmasi aktivasi sel glial di otak AD. Yang penting, pemberian TGF-β 1
oleh rute ICV dan IN menghambat aktivasi sel glial yang diinduksi oleh Aβ 1-42. Meskipun
efek TGF-β 1 ini lebih besar dalam protokol pretreatment ICV daripada pendekatanpasca
perawatan IN, efektivitas pemberian IN dalam menghambat aktivasi glial memberikan
dukungan lebih lanjut untuk gagasan mengobati pasien AD dengan TGFβ1.
Peradangan saraf yang dimediasi glia telah lama dikenal pada patogenesiAD. Selain itu,
perubahan sel T perifer pada pasien AD atau model hewan AD juga telah dilaporkan. Sebagai
contoh, peningkatan yang signifikan dalam CD4 +, CD25 + dan CD28 + sel dalam sel
mononuklear darah diamati pada pasien AD [42]. Peningkatan reaktiviti sel T CD4 + dan
CD8 + perifer terhadap mitogen ditemukan pada pasien AD [43]. Tikus triple transgenik
(3xTg-AD) telah meningkatkan persentase sel dendritik dan makrofag, limpa dan sel T
memori CD8 + Ly6C + yang diturunkan dari darah dan sel CCR6 + B [44]. Temuan

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 13 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

inimenunjukkan bahwa imunitas yang dimediasi sel T perifer terlibat dalam patogenesis AD.
Bukti pertama bahwa sel T hadir di otak pasien AD disajikan 25 tahun yang lalu dan temuan
serupa telah dilaporkan secara sporadis sejak [45]. Sel-sel ini ditemukan berada dalam posisi
dekat dengan plak dan glia aktif [46]. Pada otak tikus APP / PS1, ada juga infiltrasi sel T
yang signifikan, terutama sel T IFN-γ-positif dan IL-17-positif [47]. Dalam studi saat ini,
kamimenemukan dalam darah perifer dan di CSF sentral dan hippocampus tikus model AD
bahwa respons proinflamasi Th1 dan Th17 ditingkatkan, sementara Th2- dan Treg-
antiinflamasi

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 14 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

Gambar 4. IN TGF-β1 pasca perawatan mengurangi aktivasi glial yang diinduksi Aβ 1-42. TGF-β1 (1,5 μg / 30 μl) diberikan IN tujuh hari setelah injeksi Aβ 1-42. Pada
hari ke 7 setelah pemberian TGF-β1, morfologi aktivasi glial (A), gen (B) dan protein (C) tingkat ekspresi mediator proinflamasi dan faktor otrofik neur di
hippocampus, serta konsentrasi IL-1β dalam serum dan CSF (D) diukur. Desain percobaan dan makna gambar mirip dengan Gambar 3, kecuali bahwa TGF-β1
diberikan IN setelah invasi Aβ 1-42 konsentrasi t satu. *p<0,05, **p<0,01, versus tikus utuh atau diberi perlakuan garam; +p<0,05, ++p<0,01, versus tikus
yang disuntikkan Aβ 1–42 saja.

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 15 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

DOI:10.1371/journal.pone.0116549.g004

Gambar 5. Pretreatment ICV TGF-β1 mencegah ketidakseimbangan yang diinduksi Aβ 1-42 dalam respons proinflammatory/antiinflamasi limfosit T. TGF-β1
(4, 10 atau 50 ng dalam 5 μl) diberikan ICV satu jam sebelum injeksi Aβ1-42. Pada hari ke-7 setelah pemberian TGF-β1, diferensiasi dan fungsi sel Th1, Th17, Th2 dan
Treg dinilai dengan measuring tingkat faktor transkripsi spesifik dan sitokin di hippocampus, serum dan CSF. (A) Ekspresi gen sitokin proinflamasi dan antiinflamasi

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 16 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

terkait limfosit T di hippocampus. (B) Ekspresi protein faktor transcripti onal spesifik(T-bet, ROR-γ, GATA-3 dan Foxp3) dan sitokin subset limfosit T di
/ atau
hippocampus. (C) Konsentrasi sitokin proinflamasi terkait Th1 dan Th17 (IFN-γ dan IL-17) dan sitokin antiinflamasi terkait Treg (IL-10) dalam serum dan
CSF. * p<0,05, **p<0,01, versus tikus utuh atau diberi garam; +p<0,05, ++p<0,01, versus tikus yang disuntikkan Aβ 1–42; &p<0,05,
&&p<0,01, versus 4 atau 10 ng tikus yang diberikan TGF-β1. Aβ = Aβ1–42; TGF(4) = 4 ng of TGF-β1; TGF(10) = 10 ng of TGF-β1; TGF(50) = 50 ng TGF-β1.

DOI:10.1371/journal.pone.0116549.g005

tanggapan dilemahkan. Ketidakseimbangan proinflamasi / antiinflamasi merupakan reaksi

inflamasi yang jelas dalam model AD kami. TGF-β1 diberikan dalam dua cara berbeda
mengurangi respons proinflamasi Th1 dan Th17 dan meningkatkan respons Treg-
antiinflamasi pada tikus model AD. Namun, baik pengobatan TGF-β 1 tidak meningkatkan
downregulation GATA-3 atau IL-4 expressio n yang diinduksi β 1-42, menunjukkan bahwa
TGF-β 1 tidak meningkatkan respons Th2 yang ditekan β 1-42. Fenomena ini mungkin terkait
dengan TGF-β 1 itu sendiri menghambat perkembangan Th2 [48]. Namun demikian,
penekanan respons proinflamasi yang menonjol oleh pengobatan TGF-β 1 menunjukkan
pengurangan reaksi inflamasi dan pemulihan menuju keseimbangan proinflamasi /
antiinflamasi.
Mekanisme yang mendasari infiltrasi sel T perifer ke dalam parenkim otak AD mungkin
disfungsi BBB. Kami baru-baru ini memberikan bukti langsung yang menunjukkan bahwa sel
Th17 menyusup ke parenkim otak melalui BBB yang terganggu pada tikus model AD [8].
Interaksi β intraserebral dengan reseptornya di BBB mengatur ekspresi CCR5 endotel dan
menyebabkan infiltrasi sel T yang bersirkulasi keotak yang disebabkan oleh suntikan β pada
hippocampus tikus [49]. TNF-α yang diturunkan dari mikroglia memainkan peran penting
dalam infiltrasi sel T perifer. TNF-α ini mengatur ekspresi molekul MHC kelas I pada sel
endotel otak dan menginduksi CXCR2 overexpres sion pada sel T perifer pada AD, yang
mewakili mekanisme migrasi sel T ke otak [50, 51]. Mekanisme ini mungkin juga sesuai
untuk penjelasan aktivasi sel T perifer dengan injeksi intrahippocampal Aβ 1-42 pada stu dy ini.
Selain itu, meskipun tidak ada limfatik konvensional di otak, baik cairan interstisial dan CSF
memiliki jalur drainase limfatik yang terdefinisi dengan baik, yang mengalirkan cairan dan
zat terlarut dari otak ke kelenjar getah bening serviks [52]. Melalui jalur, intracerebral TNF-α
dapat menyaring keluar dari otak ke pinggiran untuk mengaktifkan sel T perifer.
Peradangan saraf adalah proses aktif yang terdeteksi pada tahap awal AD yang mungkin
menjadi kontributor penting untuk pembentukan kusut neurofibrillary, salah satukeunggulan
patologis penting dari AD [53]. Sebagai sitokin imunosupresif, penjelasan yang paling
mungkin untuk kemampuan TGF-β 1 untuk melindungi neuron adalah dengan menghambat
peradangan saraf yang dimediasi oleh sel glial dan limfosit T. Hipotesis ini dapat
menjelaskan hasil yang lebih baik dari pencegahan TGF-β 1 daripada pengobatan TGF-β 1,
karena strategi pencegahan TGF-β 1 menargetkan inisiasi peradangan saraf. Oleh karena itu,
penghambatan peradangan saraf merupakan target penting untuk pencegahan TGF-β 1 dan
pengobatan enerasi neurodeg AD. Namun, hubungan antara neuroinflammation dan
neurodegeneration pada patogenesis AD rumit dan urutan neuroinflammation dan
neurodegeneration yang mengarah ke AD tidak sepenuhnya diklarifikasi. Dengan demikian,
mekanisme yang mendasari TGF-β 1 prevention dan pengobatan AD masih tetap harus
didefinisikan.
Singkatnya, Aβ 1-42 menginduksi peradangan saraf dan neurodegenerasi yang ditandai di
otak tikus. Peradangan saraf termasuk aktivasi sel glial dan ketidakseimbangan dalam respon
proinflamasi / antiinflamasi limfosit T. Neurodegenerasi bermanifestasi sebagai gangguan

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 17 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

kognitif, upregulasi APP, downregulation PP2A, dan kehilangan neuronal dan apoptosis di
hippocampus. TGF-β 1 diberikan dengan dua metode, ICV sebelum injeksi A β 1-42 dan IN
setelah Aβ 1-42 i njection, menghambat respon neuroinflamasi dan mengurangi
neurodegenerasi. Temuan ini menunjukkan bahwa TGF-β 1 memiliki efek pencegahan dan
terapeutik pada terjadinya dan perkembangan patologi terkait AD. Secara khusus,
efektivitasTGF-β 1 melalui pemberian IN memberikan strategi terapi yang menjanjikan untuk
pasien dengan AD.

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 18 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

Gambar 6. IN TGF-β1 pasca perawatan memperbaiki ketidakseimbangan yang diinduksi Aβ 1-42 dalam respons proinflamasi / antiinflamasi limfosit T.
TGF-β1 (1,5 μg / 30 μl) diberikan IN tujuh hari setelah injeksi Aβ1-42. Pada hari ke-7 setelah pemberian TGF-β1, diferensiasi dan fungsi sel Th1, Th17, Th2 dan Treg
diukur. Desain percobaan dan makna gambar mirip dengan Gambar 5, kecuali bahwa TGF-β1 diberikan IN setelah injeksi Aβ 1-42 pada satu konsentrasi.
*p<0,05, **p<0,01, versus tikus utuh atau diberi perlakuan garam; +p<0,05, ++p<0,01, versus saja Aβ1-42tikus yang disuntikkan.

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 19 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

DOI:10.1371/journal.pone.0116549.g006

Ucapan terima kasih

Parauthors ingin mengucapkan terima kasih kepada Dr. M. Kerry O'Banion, University of
Rochester, untuk mengedit naskah ini.

Kontribusi Penulis
Menyusun dan merancang eksperimen: YPP YHQ. Melakukan percobaan: JHC JHL. Analisis
data: KFK YPP. Kontribusi reagen/mat erials/alat analisis: YHQ YPP. Menulis makalah:
YPP JHC.

Referensi
1. Heneka MT, O'Banion MK, Terwel D, Kummer MP (2010) Proses neuroinflamasi pada penyakit Alzheimer. J
Transm Saraf 117: 919–947. DOI: 10.1007/s00702-010-0438-z PMID: 20632195
2. Rubio-Perez JM, Morillas-Ruiz JM (2012) Tinjauan: proses inflamasi pada Alzheimer's disease, peran sitokin.
Jurnal Dunia Ilmiah 2012: 756357. doi: 10.1100/2012/756357 PMID: 22566778
3. Rojo LE, Fernández JA, Maccioni AA, Jimenez JM, Maccioni RB (2008) Peradangan saraf: implikasi untuk
patogenesis dan diagnosis molekuler penyakit Alzheimer. Arch Med Res 39: 1–16. doi :
10.1016/j.arcmed.2007.10.001 PMID: 18067990
4. Schwab C, McGeer PL (2008) Aspek inflamasi penyakit Alzheimer dan gangguan neurodegeneratif lainnya. J
Alzheimer Dis 13: 359–369. PMID: 18487845
5. Ryu JK, McLarnon JG (2008) Penghambatan thalidomide pembuluh darah yang terganggu dan glial-derived
tumor necrosis factor-alpha pada model hewan otak penyakit Alzheimer yang meradang. Neurobiol Dis 29:
254–266. DOI: 10.1016/j.nbd.2007.08.019 WIB: 17964176
6. Ryu JK, McLarnon JG (2009) Penghalang darah-otak bocor, infiltrasi fibrinogen danreaktivitas microgl ial
pada otak penyakit Alzheimer yang meradang. J Sel Mol Med 13: 2911–2925. DOI: 10.1111/j.1582-
4934.2008. 00434.x PMID: 18657226
7. Saresella M, Calabrese E, Marventano I, Piancone F, Gatti A, et al. (2011) Peningkatan aktivitas limfosit Th-
17 dan Th-9 dan kemiringan jalur diferensiasi n post-timusterlihat pada penyakit Alzheimer. Otak Behav
Kekebalan 25: 539–547. doi: 10.1016/j.bbi.2010.12.004 PMID: 21167930
8. Zhang J, Ke KF, Liu Z, Qiu YH, Peng YP (2013) Th17 peradangan saraf yang dimediasi sel terlibat dalam
neurodegenerasi tikus model penyakit Alzheimer yang diinduksi abeta 1-42. PLoS Satu 8: e75786. Doi:
10.1371/journal.pone.0075786 PMID: 24124514
9. Ten Dijke P, Hill CS (2004) Wawasan baru tentang pensinyalan TGF-beta-Smad. Tren Biochem Sci 29:
265–273. doi: 10.1016/j.tibs.2004.03.008 PMID: 15130563
10. Li MO, Wan YY, Sanjabi S, Robertson AK, Flavell RA (2006) Mengubah regulasi faktor pertumbuhan-beta
respon imun. Annu Wahyu I mmunol 24: 99–146. DOI: 10.1146/annurev.immunol.24.021605. 090737
PMID: 16551245
11. Dhandapani KM, Hadman M, De Sevilla L, Wade MF, Mahesh VB, et al. (2003) Perlindungan astrosit
neuron: peran transformasi faktor pertumbuhan-beta signaling melalui jalur pelindung c-Jun-AP-1. J Biol
Chem 278: 43329–43339. DOI: 10.1074/JBC. M305835200 PMID: 12888549
12. Vivien D, Ali C (2006) Mengubah sinyal faktor pertumbuhan-beta pada gangguan otak. Faktor Pertumbuhan
Sitokin Wahyu 17: 121–128. DOI: 10.1016/j.cytogfr.2005.09.011 PMID: 16271500
13. Wyss-Coray T (2006) Jalur Tgf-Beta sebagai target potensial dalam neurodegenerasi dan Alzheimer. Skr
Alzheimer Res 3: 191–195. doi: 10.2174/156720506777632916 PMID: 16842094
14. Caraci F, Battaglia G, Busceti C, Biagioni F, Mastroiacovo F, et al. (2008) TGF-beta 1 melindungi terhadap
Abeta-neurotoksisitas melalui jalur fosfatidilinositol-3-kinase. Neurobiol Dis 30: 234–242. Doi:
10.1016/j.nbd.2008.01.007 WIB: 18356065
15. Caraci F, Battaglia G, Bruno V, Bosco P, Carbonaro V, et al. (2011) Jalur TGF-beta1 sebagai target baru
untuk perlindungan saraf pada penyakit Alzheimer. CNS Neurosci Ther 17: 237–249. DOI:
10.1111/j.17555949.2009.00115.x PMID: 19925479
16. Juraskova B, Andrys C, Holmerova saya, Solichova D, Hrnciarikova D, et al. (2010) Mengubah faktor
pertumbuhan beta danbegitu luble endoglin pada senior yang sehat dan pada pasien penyakit Alzheimer. J
Nutr Kesehatan Penuaan 14: 758-761. DOI: 10.1007/s12603-010-0325-1 PMID: 21085906

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 20 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

17. Luppi C, Fioravanti M, Bertolini B, Inguscio M, Grugnetti A, et al. (2009) Faktor pertumbuhan menurun pada
subjek dengan ringan sampai sedang penyakit Alzheimer (AD): koreksi potensial dengan
dehydroepiandrosterone-sulphate (DHEAS). LengkunganGe rontol Geriatr 49: 173–184. DOI:
10.1016/j.archger.2009.09.027 WIB: 19836631
18. Wyss-Coray T, Lin C, Yan F, Yu GQ, Rohde M, et a l.(2001) TGF-beta1 mempromosikan pembersihan beta
amiloidbeta mikroglial dan mengurangi beban plak pada tikus transgenik. Nat Med 7: 612–618. DOI :
10.1038/ 87945 PMID: 11329064
19. Thorne RG, Frey WH (2001) Pengiriman faktor neurotropik ke sistem saraf pusat: pertimbangan
farmakokinetik. Farmakokinet Klin 40: 907–946. DOI: 10.2165/00003088-200140120-00003 PMID:
11735609
20. Thorne RG, Pronk GJ, Padmanabhan V, Frey WH (2004) Pengiriman insulin-seperti faktor pertumbuhan-I ke
rdi otak dan sumsum tulang belakang sepanjang jalur penciuman dan trigeminal setelah pemberian intranasal.
Ilmu saraf 127: 481–496. DOI: 10.1016/j.neuroscience.2004.05.029 PMID: 15262337
21. Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, et al. (2008) Pengiriman intranasal mengubah faktor pertumbuhan-beta1
pada tikus setelah stroke mengurangi volume infark dan meningkatkan neurogenesis di zona r subventrikula.
BMC Neurosci 9: 117. DOI: 10.1186/1471-2202-9-117 PMID: 19077183
22. Morales I, Farías G, Maccioni RB (2010) Neuroimmunomodulatipada patogenesis penyakit Alzheimer.
Neuroimunomodulasi 17: 202–204. doi: 10.1159/000258724 PMID: 20134203
23. McLarnon JG, RyuJK (2008) Relevansi injeksi intrahippocampal abeta1-42 sebagai model hewan otak
penyakit Alzheimer yang meradang. Skr Alzheimer Res 5: 475–480. DOI: 10.2174/
156720508785908874 PMID: 18855589
24. Pike CJ, Burdick D, Walencewicz AJ, Glabe CG, Cotman CW (1993) Neurodegenerasi yang disebabkan oleh
peptida beta-amiloid in vitro: tdia peran peptida perakitan negara. J Neurosci 13: 1676–1687. PMID: 8463843
25. Giuffrida ML, Grasso G, Ruvo M, Pedone C, Saporito A, et al. (2007) Abeta (25-35) dan turunannya yang
diblokir C dan / atau N: fitur struktural yang digerakkan tembaga dan neurotoksisitas. J Neurosci Res 85:
623–633. DOI: 10.1002/jnr.21135 PMID: 17131391
26. Paxinos G, Watson C (2005) Otak Tikus dalam Koordinat Stereotaxic. Amsterdam: Elsevier Academic Press.
27. Liu XF, Fawcett JR, Thorne RG, DeFor TA, Frey WH (2001) Administrasi intranasal insulin-seperti faktor
pertumbuhan-I melewati penghalang darah - otak dan melindungi terhadap kerusakan iskemik serebral fokal. J
neurol Sci 187: 91–97. DOI: 10.1016/S0022-510X(01)00532-9 PMID: 11440750
28. Liu XF, Fawcett JR, Thorne RG, Frey WH (2001) Non-invasif intranasal insulin-seperti faktor pertumbuhan-I
mengurangi volume infark dan meningkatkan fungsi neurologis pada tikus setelah oklusi arteri serebral
tengah. Neurosci Lett 308: 91–94. DOI: 10.1016/S0304-3940(01)01982-6 PMID: 11457567
29. Livak KJ, Schmittgen TD (2001) Analisis data ekspresi gen relatif menggunakan real-time quantitative PCR
dan Metode 2(-Delta C(T)). Metode 25: 402–408. doi: 10.1006/sabu.2001.1262 WIB: 11846609
30. Jantaratnotai N, Ryu JK, Schwab C, McGeer PL, McLarnon JG (2011) Perbandingan ion Perturbat
vaskulardalam model hewan yang disuntikkan Abeta dan di otak AD. Int J Alzheimers Dis 2011: 918280. Doi:
10.4061/2011/918280 PMID: 21969915
31. Henrich-Noack P, Prehn JH, Krieglstein J (1996) TGF-beta 1 melindungi neuron hippocampal terhadap
degenerasi yang disebabkan oleh iskemia global sementara. Hubungan dosis-respon dan mekanisme
neuroprotektif potensial. Pukulan 27: 1609–1614. PMID: 8784137
32. Ma YP, Ma MM, Ge S, Guo RB, Zhang HJ, et al. (2007) Intranasally disampaikan TGF-beta1 memasuki otak
dan mengatur ekspresi gen reseptor pada tikus. Otak Res Banteng 74: 271–277. DOI: 10.1016/j.
brainresbull.2007.06.021 PMID: 17720549
33. Le Y, Yu X, Ruan L, Wang O, Qi D, et al. (2005) Sifat imunofarmakologis mengubah faktor pertumbuhan
beta. Int Immunopharmacol 5: 1771–1782. doi: 10.1016/j.intimp.2005.07.006 PMID: 16275614
34. Tesseur I, Zou K, Esposito L, Bard F, Berber E, et al. (2006) Kekurangan sinyal TGF-beta neuronal
mempromosikan neurodegenerasi dan patologi Alzheimer. J Clin Investasikan 116: 3060–3069. DOI:
10.1172/ JCI27341 PMID: 17080199
35. Bosco P, Ferri R, Salluzzo MG, Castellano S, Signorelli M, et al. (2013) Peran Gen TransformingGrowth-
Factor-β1 pada Penyakit Alzheimer Onset Akhir: Implikasi untuk Pengobatan. Genomik skr 14: 147–156.
DOI: 10.2174/1389202911314020007 PMID: 24082824
36. Caraci F, Spampinato S, Sortino MA, Bosco P, Battaglia G, et al. (2012) Disfungsi TGF-beta1 signaling di
Alzheimer disease: perspektif untuk neuroprotection. Jaringan Sel Res 347: 291–301. Doi:
10.1007/s00441-011-1230-6 PMID: 21879289
37. Block ML, Zecca L, Hong JS (2007) Neurotoksisitas yang dimediasi mikroglia: mengungkap mekanisme
molekuler. Nat Wahyu Neurosci 8: 57–69. DOI: 10.1038/nrn2038 PMID: 17180163

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 21 / 22

 TGF-β 1 Perlindungan saraf melawan
β1 –A42 -Disebabkan Peradangan saraf

38. Meraz-Ríos MA, Toral-Rios D, Franco-Bocanegra D, Villeda-Hernández J, Campos-Peña V (2013) Proses

inflamasi pada Penyakit Alzheimer. Depan Integr Neurosci 7: 59. DOI: 10.3389/FNINT.2013. 00059 PMID:
23964211
39. Tuppo EE, Arias HR (2005) Peran peradangan pada penyakit Alzheimer. Int J Biochem Sel Biol 37:
289–305. doi: 10.1016/j.biocel.2004.07.009 PMID: 15474976
40. Heneka MT, O'Banion MK (2007) Proses inflamasi padapenyakit Alzheimer. J Neuroimmunol
184: 69–91. DOI: 10.1016 /j.jneuroim.2006.11.017 PMID: 17222916
41. Biscaro B, Lindvall O, Tesco G, Ekdahl CT, Nitsch RM (2012) Penghambatan aktivasi mikroglial melindungi
neurogenesis hippocampal dan meningkatkan defisit kognitif dalam model tikus transgenik untuk penyakit
Alzheimer. Neurodegener Dis 9: 187–198. DOI: 10.1159/000330363 PMID: 22584394
42. Lombardi VR, García M, Rey L, Cacabelos R (1999) Karakterisasi produksi sitokin, skrining pola subset
limfosit dan apoptosis in vitro pada individu sehat dan Alzheimer's Disease (AD). J neuroimunol 97: 163–171.
DOI: 10.1016/S0165-5728(99)00046-6 PMID: 10408971
43. Schindowski K, Eckert A, Peters J, Gorriz C, Schramm U, et al. (2007) Peningkatan reaktivitas sel-T dan
peningkatan kadar CD8 + memori T-sel pada pasien penyakit Alzheimer dan hiporeaktivitas sel-T dalam
model tikus penyakit Alzheimer: implikasi untuk imunoterapi. Neuromolekuler Med 9: 340–354. DOI :
10.1007/s12017-007-8015-9 PMID: 17963048
44. Subramanian S, Ayala P, Wadsworth TL, Harris CJ, Vandenbark AA, et al. (2010) CCR6: biomarker untuk
penyakit mirip Alzheimer dalam model tikus transgenik rangkap tiga. J Alzheimer Dis 22: 619–629. DOI: 10.
3233/JAD-2010-100852 PMID: 20847401
45. Lynch MA (2014) Dampak perubahan neuroimun pada perkembangan patologi amiloid; relevansi dengan
penyakit Alzheimer. Imunologi 141: 292–301. DOI: 10.1111/imm.12156 PMID: 23876085
46. Togo T, Akiyama H, Iseki E, Kondo H, Ikeda K, et al. (2002) Terjadinya sel T di otak penyakit Alzheimer dan
penyakit neurologis lainnya. J neuroimunol 124: 83–92. DOI: 10.1016/S01655728(01)00496-9 PMID:
11958825
47. Browne TC, McQuillan K, McManus RM, O'Reilly JA, Mills KH, et al. (2013) Produksi IFN-γ oleh sel Th1
spesifik β amiloid mempromosikan aktivasi mikroglial dan meningkatkan beban plak pada model tikus
penyakit Alzheimer. J Immunol 190: 2241–2251. DOI: 10.4049/jimmunol.1200947 PMID: 23365075
48. Heath VL, Murphy EE, Crain C, Tomlinson MG, O'Garra A (2000) TGF-beta1 down-mengatur
pengembangan Th2 dan results dalam penurunan IL-4-induced STAT6 aktivasi dan GATA-3 ekspresi.
EUR J Immunol 30: 2639–2649. DOI: 10.1002/1521-4141(200009)30:9%3C2639::AID-IMMU2639%
3E3.0.CO;2-7 PMID: 11009098
49. Li M, Shang DS, Zhao WD, Tian L, Li B, et al. (2009) Interaksi beta amiloid dengan reseptor untuk produk
akhir glikasi lanjutan mengatur ekspresi CCR5 endotel otak dan mempromosikan sel T melintasi penghalang
darah-otak. J Immunol 182: 5778–5788. doi: 10.4049/jimmunol.0803013 PMID: 19380826
50. Liu YJ, Guo DW, Tian L, Shang DS, Zhao WD, et al. (2010) Sel T perifer yang berasal dari pasien penyakit
Alzheimer overexpress CXCR2 berkontribusi terhadap migrasi transendotelnya, yang merupakan mikroglial
Tergantung TNF-alpha. Neurobiol Penuaan 31: 175-188. DOI: 10.1016/j.neurobiolaging.2008.03.024 PMID:
18462836
51. Yang YM, Shang DS, Zhao WD, Fang WG, Chen YH (2013) Mikroglial TNF-α-tergantung elevasi MHC
kelas I ekspresi pada otak endotelium yang disebabkan oleh amyloid-beta promotes migrasi transendotel sel T.
Neurochem Res 38: 2295–2304. DOI: 10.1007/s11064-013-1138-5 PMID: 23990225
52. Carare RO, Hawkes CA, Weller RO (2014) Jalur imunologi aferen dan eferen otak. Anatomi, Fungsi dan
Kegagalan. Otak Behav Kekebalan 36: 9–14. DOI: 10.1016/j.bbi.2013.10.012 PMID: 24145049
53. Metcalfe MJ, Figueiredo-Pereira ME (2010) Hubungan antara patologi tau dan peradangan saraf pada
penyakit Alzheimer. Gunung Sinai J Med 77: 50–58. DOI: 10.1002/msj.20163 PMID: 20101714

PLOS SATU | doi:10.1371/journal.pone.0116549 Pebruari 6, 2015 22 / 22