Tugas kuliah Bioteknologi Kedokteran

T-reg Terapi Berbasis Sel

(Tantangan Dan Perspektif)

HAVIZ YUAD
NIM : 2030312009

Pembimbing

dr. HIROWATI ALI, PhD

S 3 BIOMEDIK

FAKULTAS KEDOKTERAN

UNIVERSITAS ANDALAS PADANG

2021
 Treg Terapi Berbasis Sel: Tantangan Dan Perspektif

Caroline Raffin 1,2, Linda T. Vo 1,2, Jeffrey A. Bluestone 1,* 1 Laboratorium Penelitian Autoimun Sean N. Parker,
Pusat Diabetes, Universitas California, San Francisco, San Francisco, CA, AS. 2.

Abstrak

Terapi seluler menggunakan regulator T (T reg) sel saat ini sedang menjalani uji klinis
untuk pengobatan penyakit autoimun, penolakan transplantasi dan penyakit graft-versus-host. Di
dalam Ulasan, kami membahas biologi T reg sel dan menggambarkan upaya baru di T reg rekayasa
sel untuk meningkatkan spesifisitas, stabilitas, aktivitas fungsional dan pengiriman. Kesuksesan
dari T reg terapi sel dalam autoimunitas dan transplantasi akan mendorong penggunaan klinis T
angkat reg terapi sel untuk penyakit non-imun, seperti gangguan neurologis dan perbaikan
jaringan. Potensi terapeutik dari subset imunosupresif FOXP3+ unik dari regulasi T (T reg) sel
telah ditunjukkan dalam berbagai model praklinis penyakit graft-versus-host (GVHD) 1-3,
transplantasi organ padat 4,5, diabetes melitus tipe 1 (T1D) 6,7, lupus sistemik eritematosus (SLE)
8, penyakit radang usus 9,10 dan sklerosis multipel (MS) 11. Ini telah merangsang kemajuan dalam
pengembangan klinis terapi sel adopsi (ACT) dari T reg sel di klinik.

Sekarang ada lebih dari 50 uji klinis aktif dan lengkap yang menguji keamanan dan
kemanjuran T reg terapi sel untuk indikasi seperti transplantasi ginjal atau hati, pemfigus vulgaris,
SLE, penyakit radang usus, hepatitis autoimun, alergi dan asma 12. Meskipun protokol pemisahan
dan perluasan untuk T reg sel bervariasi, hasil uji klinis awal melaporkan keberhasilan manufaktur
dan profil keamanan yang sangat baik 12–17. Memperluas potensi terapeutik T reg ACT sel akan
bergantung pada penggunaan teknologi baru untuk mengubah genom sel guna meningkatkan
aktivitas fungsional, stabilitas, kegigihan, dan antigen kekhususan.

Sejumlah penelitian praklinis telah menunjukkan bahwa T . spesifik antigen reg sel lebih
kuat daripada T . poliklonal reg sel dalam model T1D 6,7, sistem saraf pusat autoimun penyakit
18 dan transplantasi 19–22. Selain itu, T . spesifik antigen reg sel sebagian besar terlokalisasi di
tempat presentasi antigen, mengurangi risiko imunosupresi. Dengan demikian, T . spesifik antigen
reg sel mungkin lebih aman dan lebih efisien daripada T . poliklonal yang tidak dipilih reg sel
untuk ACT. Karena prekursor tinggi mereka frekuensi 23,24, manusia 'terpilih antigen' T reg sel
dengan allospesifisitas langsung, yang berasal dari penerima transplantasi, dapat secara efisien
diperluas in vitro menggunakan antigen-alogenik sel presentasi (APC) dari donor transplantasi 25.
Ini saat ini sedang dievaluasi sebagai terapi berbasis sel dalam beberapa uji klinis 26,27. Namun,
T reg sel dengan allospesifisitas tidak langsung serta T . reaktif-antigen sendiri reg sel memiliki
frekuensi prekursor yang diprediksi menjadi 1.000 kali lipat hingga 10.000 kali lipat lebih rendah
dari frekuensi T . alloreaktif langsung reg sel dan belum secara efektif diperluas hingga saat ini
23,28.

Oleh karena itu, strategi alternatif seperti genetik rekayasa diperlukan untuk menghasilkan
T reg sel spesifik untuk antigen nominal tertentu. Upaya saat ini untuk meningkatkan T reg
spesifisitas sel, kelangsungan hidup dan fungsi sebagai terapi generasi berikutnya, menggunakan
teknik baru seperti pengeditan gen berbasis CRISPR dan penggunaan sumsum tulang, yang
diinduksi sel induk berpotensi majemuk dan sel induk embrionik untuk menghasilkan T reg sel,
untuk memajukan penggunaan pengatur penting homeostasis imun ini untuk berbagai imun dan
non-imun.

Latar belakang T reg sel Konsep regulasi imun oleh limfosit khusus telah menjadi doktrin
imunologi selama lebih dari empat dekade. Namun, tidak adanya penanda molekuler yang jelas
menantang dogma dan untuk waktu yang lama menurunkan gagasan sel penekan ke pembakar
belakang imunologi. Kemudian, serangkaian penelitian oleh Sakaguchi et al. 29 merevitalisasi
lapangan dengan menunjukkan bahwa sebagian kecil sel, yang diidentifikasi oleh ekspresi CD4
dan CD25, dapat digunakan untuk mentransfer toleransi pada hewan yang mengembangkan
autoimunitas sebagai konsekuensi dari timektomi neonatal.

Terobosan besar datang ketika tiga kelompok secara independen mengidentifikasi gen
terkait-X FOXP3 pada tikus dan manusia, sebagai transkripsi faktor yang menentukan T reg
program fungsional sel dengan menginduksi program ekspresi gen spesifik dan tanda epigenetik
selama T reg perkembangan sel 30–32. NS peran penting untuk FOXP3 dan, sebagai
konsekuensinya, untuk T reg sel-sel dalam toleransi imun jelas ditetapkan dengan penemuan
bahwa peradangan multi-organ fatal onset dini dan gangguan autoimun diamati pada pasien dan
tikus dengan gangguan FOXP3 gen. Pada manusia, lakilaki dengan mutasi yang merusak
mengembangkan imunodisregulasi sindrom polyendocrinopathy enteropathy X-linked (IPEX) dan
tikus dengan FOXP3 mutan (tikus scurfy) mengembangkan autoimunitas multi-organ yang
mematikan.

Kedua sindrom tersebut secara langsung konsekuensi dari cacat sistemik pada T reg sel
33–35. Faktanya, utilitas pertama yang ditunjukkan untuk transfer adopsi T reg sel sebagai terapi
dilakukan pada tikus mutan FOXP3 dan memberikan alasan utama untuk penggunaan sel-sel ini
baik sebagai terapi untuk pasien IPEX dan dalam manusia dengan berbagai penyakit kekebalan. T
reg sel, yang terdiri dari 5-7% sel T CD4+, berkembang baik secara langsung di timus (tT reg sel)
dan di perifer (pT reg sel). pT reg sel berkembang, terutama di usus, dari sel T konvensional CD4+
di bawah kondisi faktor pertumbuhan transformasi tingkat tinggi- β (TGF ) dan asam retinoat di
lingkungan atau sebagai respons terhadap metabolit yang dihasilkan oleh mikrobiota 36,37.
Reseptor sel T (TCR) repertoar dari pT reg sel dan populasi sel T konvensional sebagian besar
tidak tumpang tindih 38–40. Memang, tT reg sel terutama mengenali diri antigen, sedangkan pT
reg repertoar TCR sel juga mencakup TCR spesifik untuk antigen infeksi 'non-self' atau antigen
turunan mikrobiota komensal yang tidak berbahaya, yang penting untuk pemeliharaan toleransi
mukosa 41.

Tidak seperti di mouse, di mana neuropilin 1 (NRP1) telah didefinisikan sebagai penanda
pT reg sel 42,43, saat ini tidak ada penanda yang dapat membedakan tT reg sel dari pT reg sel pada
manusia. Jadi, T reg sel yang diisolasi dari darah tepi kemungkinan merupakan kombinasi dari tT
reg sel dan pT reg sel. Penting, T reg sel dapat ditemukan secara lokal di jaringan maupun sistemik
selama respon inflamasi. Mereka bermigrasi melalui limfatik aferen dari jaringan yang meradang
ke drainase kelenjar getah bening, di mana mereka juga dapat berfungsi untuk mengontrol
presentasi antigen. Jadi, T reg sel mengerahkan fungsi supresi mereka baik di tempat jaringan
peradangan dan di sekunder lokal jaringan limfoid 44–47. T reg sel memberikan toleransi imun
melalui berbagai mekanisme 48. Melalui ekspresi mediator larut anti-inflamasi, seperti IL-10, TGF
β dan IL-35, konsumsi IL-2, dan ekspresi reseptor permukaan sel regulator negatif seperti antigen
limfosit T sitotoksik 4 (CTLA-4), CD39 dan CD73 (REF. 49), mereka dapat menargetkan sel T
secara langsung atau tidak langsung dengan memodulasi APC. Misalnya, CTLA-4 mengikat
CD80/CD86 pada APC dapat menyebabkan induksi indolamin-2,3-dioksigenase (IDO) 50,51.
Selain itu, T reg mengikat APC dapat mengakibatkan pengupasan molekul permukaan sel
(trogositosis) mengubah co-stimulasi dan presentasi antigen 52,53.
 Beberapa data menunjukkan bahwa T reg sel, mengekspresikan perforin dan granzyme B,
dapat secara langsung membunuh APC yang mengekspresikan target antigen 53. Yang penting,
banyak dari aktivitas penekan T . ini reg sel dapat berfungsi dengan cara antigen nonspesifik, yang
disebut penekanan pengamat dominan, yang memungkinkan mereka untuk menekan sel T efektor
dengan kekhususan yang beragam 54. T reg sel juga dapat memodulasi lingkungan mikro jaringan
melalui produksi beberapa imunosupresif yang sama ini molekul, mempromosikan munculnya
populasi sel imunosupresif lainnya seperti T reg sel dengan spesifisitas yang berbeda dan sel T
regulator 1 (Tr1) 55–58. Fenomena ini, yang disebut 'toleransi menular', mendukung gagasan
bahwa, dalam pengaturan terapeutik, adopsi ditransfer T reg sel mungkin tidak perlu bertahan
tanpa batas waktu tetapi cukup lama untuk memberikan kapasitas supresif ke sel imun lain yang
terletak di jaringan yang terkena. 59.

Penting untuk menyoroti bahwa mekanisme aksi T reg sel dan sel T efektor berbeda,
dengan yang terakhir berfungsi dalam cara yang sebagian besar bergantung pada kontak sel yang
diarahkan melawan antigensel bantalan (Gbr. 1). Perbedaan ini perlu dipertimbangkan ketika
merancang T reg terapi berbasis sel. transfer adopsi T reg sel sebagai terapi dilakukan pada tikus
mutan FOXP3 dan memberikan alasan utama untuk penggunaan sel-sel ini baik sebagai terapi
untuk pasien IPEX dan dalam manusia dengan berbagai penyakit kekebalan. T reg sel, yang terdiri
dari 5-7% sel T CD4+, berkembang baik secara langsung di timus (tT reg sel) dan di perifer (pT
reg sel). pT reg sel berkembang, terutama di usus, dari sel T konvensional CD4+ di bawah kondisi
faktor pertumbuhan transformasi tingkat tinggi- β (TGF ) dan asam retinoat di lingkungan atau
sebagai respons terhadap metabolit yang dihasilkan oleh mikrobiota 36,37. Reseptor sel T (TCR)
repertoar dari pT reg sel dan populasi sel T konvensional sebagian besar tidak tumpang tindih 38–
40.

Memang, tT reg sel terutama mengenali diri antigen, sedangkan pT reg repertoar TCR sel
juga mencakup TCR spesifik untuk antigen infeksi 'non-self' atau antigen turunan mikrobiota
komensal yang tidak berbahaya, yang penting untuk pemeliharaan toleransi mukosa 41. Tidak
seperti di mouse, di mana neuropilin 1 (NRP1) telah didefinisikan sebagai penanda pT reg sel
42,43, saat ini tidak ada penanda yang dapat membedakan tT reg sel dari pT reg sel pada manusia.
Jadi, T reg sel yang diisolasi dari darah tepi kemungkinan merupakan kombinasi dari tT reg sel
dan pT reg sel. Penting, T reg sel dapat ditemukan secara lokal di jaringan maupun sistemik selama
respon inflamasi. Mereka bermigrasi melalui limfatik aferen dari jaringan yang meradang ke
drainase kelenjar getah bening, di mana mereka juga dapat berfungsi untuk mengontrol presentasi
antigen. Jadi, T reg sel mengerahkan fungsi supresi mereka baik di tempat jaringan peradangan
dan di sekunder lokal jaringan limfoid 44–47. T reg sel memberikan toleransi imun melalui
berbagai mekanisme 48. Melalui ekspresi mediator larut anti-inflamasi, seperti IL-10, TGF β dan
IL-35, konsumsi IL-2, dan ekspresi reseptor permukaan sel regulator negatif seperti antigen
limfosit T sitotoksik 4 (CTLA-4), CD39 dan CD73 (REF. 49), mereka dapat menargetkan sel T
secara langsung atau tidak langsung dengan memodulasi APC. Misalnya, CTLA-4 mengikat
CD80/CD86 pada APC dapat menyebabkan induksi indolamin-2,3-dioksigenase (IDO) 50,51.
Selain itu, T reg mengikat APC dapat mengakibatkan pengupasan molekul permukaan sel
(trogositosis) mengubah co-stimulasi dan presentasi antigen 52,53.

Beberapa data menunjukkan bahwa T reg sel, mengekspresikan perforin dan granzyme B,
dapat secara langsung membunuh APC yang mengekspresikan target antigen 53. Yang penting,
banyak dari aktivitas penekan T . ini reg sel dapat berfungsi dengan cara antigen nonspesifik, yang
disebut penekanan pengamat dominan, yang memungkinkan mereka untuk menekan sel T efektor
dengan kekhususan yang beragam 54. T reg sel juga dapat memodulasi lingkungan mikro jaringan
melalui produksi beberapa imunosupresif yang sama ini molekul, mempromosikan munculnya
populasi sel imunosupresif lainnya seperti T reg sel dengan spesifisitas yang berbeda dan sel T
regulator 1 (Tr1) 55–58.

Fenomena ini, yang disebut 'toleransi menular', mendukung gagasan bahwa, dalam
pengaturan terapeutik, adopsi ditransfer T reg sel mungkin tidak perlu bertahan tanpa batas waktu
tetapi cukup lama untuk memberikan kapasitas supresif ke sel imun lain yang terletak di jaringan
yang terkena. 59. Ini penting untuk menyoroti bahwa mekanisme aksi T reg sel dan sel T efektor
berbeda, dengan yang terakhir berfungsi dalam cara yang sebagian besar bergantung pada kontak
sel yang diarahkan melawan antigensel bantalan (Gbr. 1). Perbedaan ini perlu dipertimbangkan
ketika merancang T reg terapi berbasis sel.

Rekayasa antigen spesifik T reg sel Saat ini ada beberapa pendekatan untuk menghasilkan
dan/atau memperluas antigen spesifik T reg sel in vitro (Gbr. 2). Seperti disebutkan, T . spesifik
antigen endogen reg sel lebih kuat daripada T . poliklonal reg sel tetapi ekspansi mereka menantang
karena frekuensi prekursor yang rendah. Pendekatan lain untuk menghasilkan T . spesifik antigen
reg sel adalah untuk mengarahkan ulang T . poliklonal reg sel dengan memperkenalkan reseptor
sintetik. Reseptor ini dapat berbentuk CAR, memungkinkan pengenalan antigen langsung, atau
TCR yang direkayasa, yang menargetkan antigen dalam konteks kompleks antigen-MHC-peptida.
Pendekatan ketiga adalah mengubah efektor antigen spesifik T sel menjadi T reg sel melalui
ekspresi berlebih dari FOXP3. T reg sel dengan TCR yang direkayasa. Penelitian pada hewan telah
menunjukkan bahwa T . spesifik antigen jaringan yang direkayasa reg sel secara signifikan lebih
efisien daripada T . poliklonal reg sel dalam model praklinis T1D 6,7, radang usus besar 60, artritis
reumatoid (RA) 61,62, NONA 18 dan transplantasi 63. Yang penting, transduksi TCR T reg sel-
sel terakumulasi dalam jaringan yang ditargetkan selama autoimunitas dengan cara yang
digerakkan oleh antigen, di mana mereka mengerahkan represi antigen-spesifik dan penekanan
pengamat non-spesifik aktivasi berikut 18,61,62.

Mengingat bahwa, dalam banyak kasus, T reg populasi sel dengan TCR spesifik antigen
tunggal dapat menekan populasi sel T patogen polispesifik, autoantigenrekayasa reaktif T reg sel
mungkin sama efektifnya dengan T . poliklonal reg sel untuk mematikan sel T patogen terlepas
dari spesifisitasnya. Namun, dalam beberapa pengaturan, oligoklonal atau pauciklonal T reg sel
mungkin lebih efektif. Dalam hal ini, ditunjukkan bahwa diperluas T reg sel dengan spesifisitas
alogenik langsung lebih efisien dalam mempromosikan toleransi cangkok jantung ketika juga
ditransduksi dengan TCR dengan spesifisitas untuk antigen donor yang disajikan oleh host APC
(spesifisitas alloantigen tidak langsung) 63.

Dengan demikian, ekspansi antigen-spesifik dan genetik rekayasa dengan TCR

rekombinan dapat digabungkan untuk menghasilkan T . spesifik ganda reg sel yang memiliki
efisiensi lebih tinggi dalam mempromosikan toleransi cangkok. Hasil ini mendorong
pengembangan TCR transgenik manusia T reg sel khusus untuk antigen yang banyak terdapat di
jaringan yang terkena. Sebagai contoh, T . manusia reg sel dengan TCR transgenik spesifik untuk
faktor anti-hemofilik VIII (FVIII) ditekan secara efisien proliferasi dan produksi sitokin sel T
efektor spesifik FVIII dan penurunan produksi antibodi FVIII dalam splenosit hemofilia transgenik
HLA-DR1 yang diimunisasi FVIII tikus in vitro 64. Selain itu, T reg sel dengan TCR transgenik
spesifik untuk protein dasar mielin (MBP) mampu menekan sel T spesifik MBP dan sel T dengan
kekhususan lainnya dalam model tikus praklinis MS 65. Kemampuan T . manusia reg sel yang
ditransduksi dengan TCR untuk mencapai penekanan pengamat juga diamati dalam studi praklinis
lainnya menggunakan TCR dengan spesifisitas antigen yang beragam 66–68.

Kekhususan T reg . manusia juga dialihkan secara efisien oleh TCR transgenik terbatas
kelas I, yang dapat mengoptimalkan efektivitas T reg sel-sel dalam jaringan autoimun 66,69. Perlu
dicatat bahwa sebagian besar upaya saat ini mengandalkan TCR spesifik antigen yang diisolasi
dari efektor T . sel dan ditransduksi menjadi T reg sel. Ada kemungkinan bahwa afinitas dan
spesifisitas intrinsik dari TCR diisolasi dari T reg sel dapat berbeda dari sel T efektor,
mempengaruhi migrasi ke relung spesifik dan aktivitas fungsional. Dengan demikian, pendekatan
yang menggunakan TCR yang diisolasi dari T reg sel untuk mengarahkan spesifisitas antigen
dalam T reg sel mungkin lebih dekat 'meniru' fungsi intrinsik T . spesifik antigen reg sel.

Reseptor antigen chimeric CAR adalah reseptor buatan yang terdiri dari situs pengikatan
antigen dari antibodi monoklonal (mAb) dalam domain ekstraselulernya dan domain stimulasi sel
T dan domain intraseluler kostimulatori (Gbr. 3). Sel T efektor yang direkayasa CAR (sel T CAR)
telah menunjukkan kemanjuran yang luar biasa pada pasien dengan kanker darah 70–73.
Keuntungan utama dari CARs adalah kemampuannya untuk mengenali seluruh protein yang
diekspresikan dalam jaringan target, daripada terbatas pada antigen yang disajikan dalam konteks
MHC kelas I atau II. Dengan demikian, CAR juga dapat memberikan kesempatan unik untuk
menargetkan T reg sel ke tempat penghancuran jaringan atau ke jaringan yang ditransplantasikan.
Studi praklinis pertama dengan generasi saat ini dari T . yang mengekspresikan CAR reg sel
dilakukan satu dekade yang lalu pada model tikus kolitis dan pada tikus xenotransplantasi 74,75,
dan manusia pertama T reg sel yang ditransduksi dengan CAR generasi ini dikembangkan sekitar
waktu yang sama 76.

Namun, minat untuk ACT meningkat setelah ditunjukkan bahwa T reg sel yang direkayasa
dengan CAR yang menargetkan HLA-A2, antigen yang biasanya tidak cocok di transplantasi,
dapat menginduksi penekanan spesifik alloantigen pada tikus yang dimanusiakan model
transplantasi 77. Secara khusus, CAR manusia khusus HLA-A2 T reg sel mencegah GVHD
xenogeneic yang disebabkan oleh sel yang mengekspresikan HLA-A2 dalam model tikus. Selain
itu, menggunakan CAR T khusus HLA-A2 serupa reg sel, beberapa penelitian kemudian
menunjukkan bahwa T reg sel dapat menekan penolakan allograft kulit HLA-A2+ 78–80 dan
secara selektif menargetkan jaringan yang mengandung HLAA2 tanpa efek pada HLA-A2 -
allograft dalam transplantasi berdampingan model 78. Dalam pengaturan hemofilia A, T . manusia
reg sel yang mengekspresikan CAR spesifik FVIII menekan respons antibodi bertarget FVIII
dalam model tikus xenogeneic 81.

Dalam model ini, CAR T . khusus FVIII reg sel mampu menekan proliferasi sel T efektor
spesifik FVIII dan sel T efektor dengan spesifisitas antigen yang berbeda, menunjukkan
kemampuan mereka untuk mengerahkan penindasan pengamat. Properti unik T reg sel untuk
mengerahkan penindasan pengamat memungkinkan desain rasional untuk target T reg sel ke
jaringan yang meradang, tanpa harus menargetkan antigen permukaan sel. Misalnya, CAR
dikembangkan yang khusus untuk citrullinated vimentin (CV), protein translasi yang dimodifikasi
berlimpah dan hampir secara eksklusif hadir dalam matriks ekstraseluler dari sendi yang meradang
pasien dengan RA 82. Yang penting, CAR khusus CV T reg sel berkembang ketika dikultur dengan
cairan sinovial dari sendi pasien dengan RA, menunjukkan bahwa CV hadir dalam matriks
ekstraseluler cukup untuk memicu CAR-mediated aktivasi sel 82.

Pendekatan pengalihan T reg sel ke matriks ekstraseluler alih-alih menargetkan sel

pengekspres antigen mungkin terbukti bermanfaat dalam pengaturan inflamasi tertentu 83 sebagai
penargetan langsung sel pengekspres antigen dapat merugikan mengingat melaporkan aktivitas
sitolitik T reg sel dalam beberapa kasus 53

Perbandingan TCR dan CAR rekombinan. Meskipun pengenalan TCR atau CAR
rekombinan dapat memberikan spesifisitas antigen dalam T reg sel, reseptor yang direkayasa ini
memiliki sifat mekanistik dan fungsional yang berbeda yang dapat mewakili keuntungan atau
kerugian tergantung pada konteksnya (Gbr. 3). Untuk Misalnya, meskipun tingkat ekspresi antigen
yang rendah cukup untuk menginduksi stimulasi yang dimediasi TCR, beberapa penelitian sel T
efektor CAR menunjukkan bahwa kepadatan antigen yang dikenali oleh CAR harus tinggi pada
sel target untuk memicu aktivasi. 84–86. Di dalam hal, penting untuk menyatakan kembali bahwa
meskipun T reg sel dapat memiliki fungsi penekan dengan cara antigen non-spesifik, aktivasi sel
yang dimediasi CAR adalah antigen spesifik, sehingga tingkat ekspresi antigen lokal menentukan
apakah sel menjadi aktif. Dengan demikian, TCR mungkin lebih tepat untuk menargetkan antigen
yang diekspresikan pada tingkat rendah sedangkan CAR mungkin lebih berguna untuk antigen
yang diekspresikan secara melimpah pada jaringan target, dengan ekspresi rendah pada jaringan
normal.
 Meskipun ada bukti praklinis yang mendukung pengembangan kedua T reg sel yang
direkayasa dengan TCR rekombinan dan T reg sel yang direkayasa dengan CAR, beberapa kunci
pengamatan dapat memberikan indikasi keberhasilan klinis potensial mereka. Misal seperti T reg
sel dirancang untuk mendeteksi antigen yang disajikan dalam konteks MHC kelas II dan, dengan
demikian, mengekspresikan molekul CD4 pengikat kelas II. Jika sel-sel ini direkayasa untuk
mengikat antigen dalam konteks MHC kelas I, tidak pasti apakah molekul CD8 perlu
diekspresikan bersama pada sel untuk secara efisien melibatkan MHC kelas I. Namun, itu
ditunjukkan secara in vivo model tikus yang T reg sel yang ditransduksi dengan TCR terbatas
MHC kelas I mampu melewati kebutuhan pengikatan MHC oleh koreseptor CD8 bahkan dengan
TCR afinitas rendah 69. Dia masih harus ditentukan apakah TCR dapat dibuat secara rutin dengan
afinitas yang cukup, dan terhadap autoantigen yang relevan, untuk menjadi ko-reseptor independen
seperti yang ditunjukkan dalam studi praklinis 67,69.

Yang penting, TCR dibatasi oleh MHC, yang memerlukan pencocokan genotipe MHC
pasien, sedangkan pengenalan antigen melalui CAR tidak bergantung pada MHC dan dapat
berlaku untuk jumlah pasien yang lebih besar. Namun, CAR T reg aktivitas sel berpotensi lebih
terbatas pada tempat peradangan, meskipun orang mungkin mempertimbangkan untuk
menggunakan antibodi untuk pembuatan CAR yang diarahkan pada kompleks peptida-MHC kelas
II autoantigenik, yang akan diekspresikan pada APC di situs yang meradang dan, berpotensi,
kelenjar getah bening yang mengering.

Akhirnya, meskipun tidak ada sitotoksisitas yang diamati pada uji praklinis awal
KERANJANG reg studi sel, baru-baru ini dilaporkan bahwa CAR T reg sel dapat memiliki
aktivitas sitotoksik secara in vitro 77,83. Pengenalan langsung antigen pada sel target oleh CAR
juga dapat mengarah ke T reg pembunuhan bertarget yang dimediasi sel melalui jalur perforin /
granzyme B as sebelumnya ditampilkan 87,88. Dengan demikian, potensi pembunuhan CAR T
reg sel perlu diselidiki lebih lanjut dan dapat membuat pengenalan langsung molekul pada jaringan
target bermasalah.

Ekspresi berlebih ektopik dari FOXP3 dalam sel T CD4+ spesifik antigen. Strategi
alternatif untuk rekayasa reseptor antigen adalah ekspresi FOXP3 . yang dipaksakan untuk
mengubah sel T CD4+ konvensional spesifik antigen menjadi kumpulan T . spesifik antigen reg
sel seperti sel. Telah ditunjukkan bahwa transduksi antigen-spesifik berbasis lentiviral sel T
konvensional dengan FOXP3 mengarah ke tingkat tinggi ekspresi FOXP3 yang tidak berfluktuasi
dengan keadaan aktivasi sel T. Ini menghasilkan sel-sel penekan yang sama kuatnya sebagai
bonafide T reg sel baik secara in vitro 89,90 dan in vivo 31,91–93.

Yang penting, ekspresi berlebih FOXP3 menekan produksi sitokin efektor dalam sel T
CD4+ konvensional. Ini pendekatan telah diterapkan untuk mengubah sel T CD4+ dari pasien
dengan sindrom IPEX, yang disebabkan oleh defisiensi FOXP3, menjadi T reg sel, dan dalam
model praklinis autoimunitas 30–32,91–93. Namun, induksi FOXP3+ T reg sel seperti sel
menimbulkan risiko potensial jenis sel yang tidak stabil atau menengah yang mungkin masih
memiliki fungsi efektor karena pencetakan epigenetik dalam sel T efektor. Selain itu, ada sedikit
pemahaman perbedaan pensinyalan TCR dan afinitas antara T reg sel dan sel T efektor dan
bagaimana ini mempengaruhi fungsi di T reg sel dibandingkan dengan sel T konvensional.

Memang, ada bukti eksperimental yang menunjukkan bahwa banyak perbedaan epigenetik
fungsional ditemukan di T reg sel hadir di T reg sel sebelum ekspresi FOXP3 tetapi tidak dapat
direplikasi ketika FOXP3 diekspresikan secara berlebihan dalam sel T konvensional 94–96. Selain
itu, konsekuensi dari ekspresi molekul permukaan sel tertentu yang mengatur energi dan kelelahan
jalur dalam sel T efektor versus T . bonafide reg sel tetap tidak jelas. Sebagai contoh, CTLA-4 dan
kematian sel terprogram 1 (PD-1) secara konstitutif diekspresikan pada T . fungsional reg sel dan
sangat penting untuk aktivitas penekan mereka, sedangkan molekul pos pemeriksaan ini
memainkan peran yang berbeda sebagai molekul penghambat dalam sel T efektor. Dengan
demikian, kesetiaan jenis sel yang dikonversi seperti itu perlu dievaluasi secara ketat di berbagai
pengaturan inflamasi menggunakan platform ACT canggih 97,98. Stabilitas, daya tahan, dan
perdagangan Kebanyakan T reg pendekatan rekayasa sel telah terbatas pada generasi spesifisitas
antigen yang ditentukan.

Namun, dengan meningkatnya kemampuan CRISPR dan pengeditan gen lainnya

pendekatan, mudah untuk membayangkan beberapa acara pengeditan dalam satu sel dan, sebagai
konsekuensinya, perubahan tambahan yang dapat memodulasi T reg fungsi sel, stabilitas,
kegigihan dan perdagangan, atau menambahkan muatan yang dapat mengirimkan molekul terlarut
ke situs yang meradang untuk melengkapi T reg aktivitas supresi sel. T reg plastisitas sel. T reg
sel memiliki plastisitas fenotipik yang luar biasa dan dapat memperoleh program transkripsi yang
berbeda sebagai respons terhadap lingkungan yang berubah, terutama melalui pensinyalan sitokin
99.

Dasar dari plastisitas fenotipik ini terletak pada kemampuan mereka untuk
mengekspresikan master yang berbeda faktor transkripsi regulasi. T reg sel dapat mengadopsi
program garis keturunan transkripsi alternatif ini, yang dapat menghasilkan subset yang berbeda
secara fungsional yang dapat melokalisasi ke spesifik situs peradangan dan memperoleh program
supresif dan perbaikan jaringan yang secara efektif mengontrol respons imun spesifik jaringan
yang sedang berlangsung 99. Misalnya, ekspresi faktor transkripsi garis keturunan alternatif,
seperti taruhan T, GATA3 dan ROR γ t, mengaktifkan program transkripsi yang mendorong
ekspresi diferensial kemokin, kemokin reseptor dan molekul adhesi untuk menekan inflamasi lokal
yang dimediasi oleh sel efektor 'cocok'. Beberapa penelitian tikus telah menyarankan bahwa
sebagian kecil dari T reg sel dapat kehilangan ekspresi FOXP3 (disebut sel exFOXP3), terutama
dengan adanya sitokin inflamasi dan defisiensi IL-2, yang mengarah pada akuisisi sel T efektor
fenotipe dan potensi patogenisitas populasi exFOXP3 100-103.

Yang penting, pT reg sel dilaporkan kurang stabil daripada tT reg sel di bawah kondisi
limfopenik, menunjukkan bahwa tT reg sel dapat mewakili populasi yang lebih baik untuk ACT
104. Peran kunci FOXP3 di T reg stabilitas sel dicontohkan oleh FOXP3 mutasi gen pada pasien
IPEX. Meskipun sebagian besar mengakibatkan hilangnya protein FOXP3 dan, dengan demikian,
ketidakmampuan untuk menghasilkan T reg garis keturunan sel, beberapa mutasi menghasilkan
populasi T reg sel mengekspresikan protein FOXP3 yang diubah yang menyebabkan pemasangan
ulang T reg transkripsi sel program dan transdiferensiasi T reg sel menjadi sel T efektor lainnya.

Dalam satu contoh, seorang pasien dengan mutasi FOXP3 di antarmuka swap domain
diduga dari dimer protein disajikan dengan sindrom autoimun yang dihasilkan dari T . yang tidak
terkendali pembantu tipe 2 (T H 2) respon imun sel oleh T . mutan reg sel karena derepresi spesifik
dari T H 2 program transkripsi, yang mengarah ke generasi T H 2-seperti T reg sel yang
memproduksi sitokin tipe 2 105. Memang, perhatian yang valid untuk T . spesifik antigen reg
terapi sel adalah potensi destabilisasi FOXP3 dan kemungkinan konversi patogen dari T reg sel
menjadi sel T efektor antigen spesifik yang dapat memperburuk kerusakan jaringan. Pada kasus
ini, molekul kecil yang menargetkan pengubah epigenetik, seperti DNA methyltransferase, histone
deacetylase, histone demethylase atau methyltransferase (misalnya, methyltransferase EZH2) 106,
berpotensi dapat digunakan dalam kombinasi dengan ACT untuk membantu menstabilkan T reg
sel in vivo 107.108. Namun, ide ini masih perlu divalidasi secara in vivo dan di klinik.

Dengan demikian, ekspresi berlebih FOXP3 atau modulasi jalur epigenetik yang mengatur
FOXP3 ekspresi mungkin strategi yang layak untuk menstabilkan T reg sel. Studi yang bertujuan
untuk memahami mekanisme molekuler di balik T reg program nasib alternatif sel diperlukan
untuk mendapatkan wawasan yang lebih baik tentang cara mengontrol dan mempertahankan T reg
stabilitas sel, terutama dalam pengaturan inflamasi Knockout gen selektif untuk mempromosikan
T reg stabilitas sel. Molekul pro-inflamasi telah dilaporkan mengacaukan T reg sel 109.110 dan
karena itu dapat berfungsi sebagai target untuk T reg modifikasi sel. Salah satu contohnya adalah
IL-6, sitokin pleiotropik yang merupakan pengatur pusat keseimbangan antara T reg sel dan T H
17 sel. Bersama TGF , saya - 6 menginduksi perkembangan T H 17 sel dari sel T naif. Oleh kontras,
IL - 6 menghambat TGF - induksi T reg Pembedaan sel 111. IL-6 memicu transduser sinyal dan
penggerak sinyal transkripsi 3 (STAT3), yang menginduksi ekspresi dari DNA methyltransferase
DNMT1, menghasilkan metilasi FOXP3 lokus dan downregulation ekspresinya 112.113.

Secara fungsional, pensinyalan IL-6 telah terbukti menghambat penekanan kekebalan oleh
T reg sel pada psoriasis 114, dan terapi anti-IL-6R dicegah perkembangan T H 17 sel dan radang
sendi dalam model radang sendi yang diinduksi kolagen 115 dan patologi yang ditekan pada
ensefalomielitis autoimun eksperimental 116. Pada manusia, IL-6Rantibodi yang ditargetkan
mewakili strategi terapeutik untuk penyakit inflamasi dan autoimun seperti RA 117, Penyakit
Crohn 118 dan SLE 119. Dengan demikian, karena peran kunci IL-6 dalam T H 17/T reg
paradigma sel, melumpuhkan IL-6R atau STAT3 di T reg sel dapat mewakili a strategi yang layak
untuk meningkatkan stabilitas T reg sel dan membuatnya tahan terhadap perubahan potensial yang
disebabkan oleh pensinyalan IL-6. Namun, KO IL-6R mungkin kontraproduktif pada gangguan
tertentu, seperti yang dilaporkan T . tertentu reg subset sel sebenarnya membutuhkan pensinyalan
IL-6 untuk pengembangan.

Sebuah penelitian baru-baru ini menunjukkan bahwa selain mempromosikan T H 17

tanggapan dalam model tikus untuk glomerulonefritis bulan sabit, memberi sinyal melalui IL-6R
α dan juga penting untuk menghasilkan ROR pelindung γ t+ T reg populasi sel dengan peningkatan
sifat imunosupresif 120. Oleh karena itu, strategi untuk menstabilkan T reg sel melalui modulasi
IL-6/IL-6R untuk ACT harus spesifik konteks.
 Mempromosikan ketekunan melalui IL-2. Faktor pertumbuhan IL-2 sangat penting untuk
T reg generasi sel, kelangsungan hidup, stabilitas dan fungsi 121, dan jika tidak ada T reg sel
mengalami kematian apoptosis, yang menyebabkan autoimunitas 122. Khususnya, defisiensi IL-2
berkontribusi terhadap T . intra-islet reg disfungsi sel dan telah dikaitkan dengan perkembangan
penyakit pada model tikus non-obesitas diabetes (NOD). diabetes, menunjukkan bahwa defisiensi
IL-2 di lokasi gangguan autoimun dapat menyebabkan T reg ketidakstabilan sel 123.

Beberapa pendekatan telah dikembangkan untuk menggunakan IL-2 sebagai jalur terapi
untuk meningkatkan T . reg kemanjuran sel, stabilitas dan kelangsungan hidup in vivo 121.124.
Di dalam faktanya, penelitian telah menyarankan bahwa T reg sel 'diprogram' untuk memiliki
ambang sinyal reseptor IL-2 (IL-2R) yang berkurang 125.126. Dengan demikian, telah
dihipotesiskan bahwa administrasi IL-2 dosis rendah secara istimewa akan mengaktifkan T reg sel
dan membatasi aktivasi sel T efektor yang sebelumnya diamati sebagai respons terhadap
pengobatan dengan IL-2 dosis tinggi di klinik 123.127–129. Akibatnya, uji klinis pertama yang
berhasil menguji kemanjuran terapeutik IL-2 dosis rendah dilakukan pada pasien dengan vaskulitis
yang diinduksi virus hepatitis C. 130 dan pada pasien dengan GVHD 131.132.

Pengobatan dengan IL-2 dosis rendah telah diperiksa pada kolitis ulserativa 133, alopecia
areata 134, SLE 135.136 dan T1D 137 demikian juga. Efek IL-2 dosis rendah pada ekspansi,
fungsi, dan kelangsungan hidup autologous secara adopsi ditransfer T reg sel pada pasien dengan
T1D saat ini sedang diselidiki 138. Namun, perlu dicatat bahwa ada bukti aktivasi sel efektor pada
beberapa pasien bahkan pada dosis IL-2 sedang. Efek di luar target ini disebabkan oleh sifat
pleiotropik sitokin dalam mendorong perluasan jenis sel imun lainnya termasuk sel T CD4+. 139–
141, Sel T sitotoksik CD8+ 142, sel pembunuh alami (NK) 143.144 dan populasi sel limfoid
bawaan lainnya 145. Oleh karena itu, beberapa kelompok telah mengembangkan mutan IL-2,
PEGylated IL-2 dan mAb yang diarahkan oleh IL-2 yang mempromosikan T reg ekspansi sel in
vivo 146-148. Khususnya, bentuk IL-2 yang diubah telah dikembangkan untuk memperpanjang
waktu paruh sirkulasi IL-2 dan menjanjikan secara selektif menginduksi perluasan T . yang
diperpanjang reg sel secara in vivo.

Keberhasilan pendekatan ini di klinik tetap menjadi ditentukan 149.150. Beberapa mAb
yang menargetkan IL-2 telah dijelaskan yang secara selektif mempromosikan proliferasi subset sel
T spesifik dengan mengubah konformasi IL-2 sedemikian rupa sehingga memodulasi interaksi IL-
2 dengan subunit reseptornya. 151.152. Antibodi anti-IL-2 yang sepenuhnya manusiawi, yang
disebut F5111.2, baru-baru ini dikembangkan 128. Dengan memblokir IL-2R β mengikat dan
mengurangi IL-2R α interaksi, F5111.2 menginduksi ekspansi preferensial T . manusia reg sel.
Kompleks antibodi-IL-2 ini efektif pada model tikus T1D dan eksperimental ensefalomielitis
autoimun, serta di GVHD 128. Sebagai catatan, untuk menyederhanakan administrasi klinis
kompleks mAb-IL-2, versi IL-2 yang terkait secara kovalen dan IL-2- mAb spesifik (JES6-1)
dikembangkan, yang secara selektif memperluas T reg sel dan menunjukkan pengendalian
penyakit yang unggul dalam model kolitis murine dibandingkan dengan nonkompleks IL-2 dan
JES6-1 yang terhubung secara kovalen (REF. 153). Upaya saat ini untuk mengembangkan mAb
anti-IL-2 manusia yang ditambatkan sedang berlangsung.

Mengatur T reg fungsi sel menggunakan reseptor sintetik. Sejumlah reseptor sintetik telah
direkayasa untuk memanipulasi T reg fungsi sel. Misalnya, pendekatan ortogonalisasi reseptor-
ligan digunakan untuk merekayasa sitokin IL-2 mutan dan IL-2R mutan yang secara khusus
mengikat satu sama lain tetapi tidak dengan rekan-rekan tipe liar mereka 155. Dalam interaksi ini,
sel ditransduksi dengan IL-2R . mutan , menggantikan gen tipe liar endogen, yang kemudian secara
selektif memungkinkan sel untuk merespon IL-2 mutan yang memiliki sedikit atau tidak ada
aktivitas pada IL-2R tipe liar , diekspresikan oleh sel endogen. Pendekatan ACT sel T efektor
dengan IL-2R . ortogonal - CD4+ dan IL-2R . ortogonal - Sel T CD8+ mempromosikan respons
imun antitumor yang kuat dalam model kanker praklinis 155.

Dalam pendekatan pelengkap, ditunjukkan bahwa transduksi versi mutan STAT5, yang
diaktifkan secara konstitutif, dapat meningkatkan T reg kelangsungan hidup dan fungsi sel dalam
model praklinis 156. Saat ini, studi sedang berlangsung untuk menentukan apakah pasangan
ortogonal IL-2 dan IL-2R manusia mutan dapat digunakan dalam T reg sel ACT untuk
meningkatkan kelangsungan hidup dan kemanjuran sel yang ditransfer. Strategi lain untuk
mengendalikan T reg fungsi sel dan ekspansi telah menjadi pengembangan sistem pengaktifan
antigen ganda, seperti reseptor Notch (SynNotch) sintetis yang menginduksi aktivasi transkripsi
khusus sebagai respons terhadap antigen yang dipilih 157. Sinyal awal mendorong transkripsi
ekspresi CAR; dengan demikian, spesifisitas antigen dikendalikan oleh ekspresi gated ini dan
memberikan kontrol dan regulasi sel T yang lebih baik.
 Meskipun penelitian yang dipublikasikan telah dilakukan pada sel T efektor pada kanker
praklinis model mouse, tidak ada alasan apriori mengapa ini mungkin tidak efektif di T reg
pengaturan sel. Pendekatan serupa telah digunakan yang menggunakan protein permukaan sel
yang diubah yang bentuk sakelar protein bioaktif 158. Selain itu, sistem ini dapat dikombinasikan
dengan IL-2/IL-2R . ortogonal β pendekatan dengan menempatkan ekspresi IL-2 ortogonal di
bawah kendali reseptor SynNotch yang bergantung pada antigen untuk menghasilkan ortogonal
mandiri IL-2R + T reg sel yang akan menghasilkan IL-2 ortogonal dengan cara loop umpan balik
positif bergantung antigen 155. Meningkatkan perdagangan dan fungsi lain untuk menargetkan
situs jaringan. Administrasi langsung T reg sel ke tempat peradangan tidak layak untuk banyak
gangguan autoimun karena tidak dapat diaksesnya jaringan atau adanya beberapa yang terkena
situs. Ini mendorong kebutuhan untuk memastikan penempatan T . yang diinfuskan reg sel ke situs
yang diinginkan untuk membatasi risiko aktivitas di luar target. Reseptor kemokin, seperti CXCR3
dan CCR5, telah dilaporkan penting untuk perekrutan sel imun pada MS 159 dan T1D 160.161
sedangkan CCR6 berperan dalam patogenesis psoriasis 162. Dengan demikian, ekspresi bersama
reseptor kemokin yang dipaksakan mengenali kemokin yang diekspresikan dalam lingkungan
inflamasi dapat meningkatkan T reg aktivitas sel.

Dalam studi analog, overekspresi reseptor kemokin meningkatkan sel T CAR homing ke
tumor dan meningkatkan aktivitas antitumor dan kelangsungan hidup 163–169. Selain itu,
koekspresi CXCR4 dan CAR spesifik untuk KIT, antigen yang diekspresikan oleh sel punca
hematopoietik, dalam sel T memungkinkan penempatan yang efisien dari sel-sel ini ke sumsum
tulang dan mencapai penipisan sel punca hematopoietik untuk transplantasi sumsum tulang
alogenik tanpa iradiasi pada tikus model 170. Pada pasien yang menerima ACT sel T efektor untuk
melanoma metastatik, potensi terapeutik limfodeplesi diikuti oleh ACT limfosit infiltrasi tumor
yang mengekspresikan CXCR2, dalam kombinasi dengan IL-2 dosis tinggi, saat ini sedang
dievaluasi dalam fase I/II uji klinis 171.

Pendekatan lain adalah manipulasi reseptor sitokin dan faktor transkripsi seperti yang
dijelaskan di atas. Sifat migrasi T . manusia reg sel dapat disesuaikan selama ekspansi in vitro
dengan menambahkan sitokin dan / atau metabolit ke kultur, sambil mempertahankan T reg
stabilitas dan fungsi sel 172. Dengan demikian, menggabungkan reseptor kemokin ektopik,
reseptor sitokin atau ekspresi faktor transkripsi dengan spesifisitas antigen melalui CAR atau TCR
mungkin meningkatkan T reg sel homing dan membatasi aktivasi mereka ke jaringan target,
sehingga membatasi risiko aktivitas di luar target. Strategi alternatif untuk mengontrol secara
khusus perdagangan sel yang dipindahkan secara adopsi ke tempat yang diinginkan adalah
merancang pasangan ligan-protein ortogonal yang direkayasa untuk mengekspresikan reseptor
kemokin ortogonal secara konstitutif, sedangkan ekspresi kemokin ortogonal akan dipicu oleh
aktivasi CAR atau reseptor SynNotch dalam antigen-dependent tata krama. T . rekayasa pertama
reg sel yang mencapai tempat yang diinginkan akan menjadi aktif dan mengeluarkan kemokin
ortogonal, menghasilkan gradien kemokin yang akan secara khusus menarik T . yang direkayasa
reg sel.

Selain perdagangan, beberapa aktivitas fungsional lainnya dapat direkayasa menjadi T reg
sel. Ini termasuk memasukkan muatan tambahan, seperti faktor penekan yang dipilih atau molekul
perbaikan jaringan yang dapat meningkatkan T reg kemanjuran sel. Keamanan dan keteraturan Sel
yang digunakan untuk ACT mewakili obat hidup dan dapat mengembangkan aktivitas yang tidak
diinginkan. T reg sel dapat menjadi tidak stabil dan subset dapat menghasilkan sitokin efektor yang
dapat menyebabkan kerusakan, bahkan jika risikonya tampaknya tidak terlalu mengkhawatirkan
dibandingkan dengan efektor sel T ACT yang digunakan dalam imunoterapi kanker. Kekhawatiran
lain adalah risiko tumorigenesis yang terkait dengan integrasi virus di dekat onkogen.

Penting untuk mempertimbangkan bagaimana sel-sel ini dapat dihilangkan jika mereka
memperoleh aktivitas yang merusak Kaset bunuh diri. Beberapa program bunuh diri yang telah
dikembangkan untuk terapi sel T efektor CAR untuk mencegah atau memblokir efek samping
potensial juga dapat digunakan untuk CAR atau TCR rekombinan. T reg sel ACT. Meskipun risiko
sindrom pelepasan sitokin dilaporkan pada beberapa sel T CAR uji klinis tampaknya sangat kecil
dengan T reg sel karena mereka tidak menghasilkan sitokin proinflamasi, kaset bunuh diri
mungkin diperlukan jika terjadi inflamasi lingkungan mikro menginduksi disfungsi atau konversi
patogen yang tidak stabil dari adopsi ditransfer T reg sel. Strategi gen bunuh diri tingkat klinis saat
ini untuk terapi sel T efektor CAR termasuk pemrograman sel untuk mengekspresikan versi
pertumbuhan epidermal yang terpotong reseptor faktor (EGFRt) yang diekspresikan bersama
dengan CAR pada permukaan sel; sel-sel ini dapat dihilangkan baik awal dan akhir setelah transfer
melalui pemberian mAb cetuximab yang diarahkan EGFRt 173.174. Gen bunuh diri lainnya adalah
RQR8, penanda epitop berbasis asam amino 136 yang direkayasa dengan menggabungkan epitop
dari antigen CD34 dan CD20, yang memungkinkan pelacakan dan penghapusan sel dalam kasus
efek samping dengan membuatnya sangat rentan terhadap lisis oleh CD20- mengarahkan mAb
rituximab 175. Selain itu, Bellicum Pharmaceuticals telah mengembangkan teknologi sakelar
pengaman, CaspaCIDe, yang merupakan konstruksi yang terdiri dari domain pengikat CID dan
domain pensinyalan yang berasal dari caspase 9 (iCasp9), enzim yang memulai dalam jalur
apoptosis. Konstruksi ini dapat direkayasa menjadi sel T CAR sebelum infus dan, jika terjadi
toksisitas, pemberian rimiducid molekul kecil memicu dimerisasi domain CID, yang mengarah
pada aktivasi iCasp9, menginduksi apoptosis selektif dari sel yang mengandung CaspaCIDe .

Sebuah penelitian baru-baru ini melaporkan bahwa penghambat tirosin kinase dasatinib
dapat digunakan untuk menginduksi blokade langsung fungsi sel T CAR dan bahwa efek ini dapat
dibalikkan setelah penghapusan dasatinib. 176. Khususnya, pengobatan dasatinib mampu
menghentikan produksi sitokin, dan penelitian lebih lanjut diperlukan untuk menentukan apakah
itu dapat digunakan sebagai obat darurat untuk menghentikan sindrom pelepasan sitokin. Sistem
sakelar hidup/mati ini merupakan alat yang menarik untuk CAR T reg ACT sel, terutama dalam
kasus penekanan pengamat yang tidak disengaja, seperti selama infeksi virus lokal. Situs integrasi.
Keterbatasan kritis dari pendekatan TCR dan CAR rekombinan di T reg sel ACT adalah
penggunaan vektor virus rekombinan saat ini untuk memasukkan transgen. Dalam hal manufaktur,
produksi dan pengujian vektor virus memakan waktu dan mahal. Selain itu, transgen terintegrasi
secara acak dalam genom, yang membawa risiko menyebabkan perubahan genetik onkogenik.

Munculnya teknologi pengeditan genom seperti CRISPR–Cas9 telah memungkinkan

strategi alternatif untuk meningkatkan keamanan, kemanjuran, dan pembuatan sel T spesifik
antigen yang dimodifikasi secara genetik. Menggunakan sistem penargetan genom yang dimediasi
CRISPR–Cas9 dalam sel T primer manusia, ditunjukkan bahwa lokus TCR endogen dapat
digantikan oleh TCR rekombinan 177. Selain itu, sekali lagi dalam konteks imunoterapi kanker,
ditunjukkan bahwa menargetkan CAR ke reseptor sel T endogen- α lokus konstan (TRAC)
memungkinkan ekspresi dan regulasi daur ulang CAR yang relevan secara fisiologis dalam sel T,
menghasilkan aktivasi sel T yang unggul dan aktivitas in vivo, serta menunda diferensiasi dan
kelelahan sel T 178. Yang penting, menargetkan lokus TRAC mengganggu ekspresi TCR endogen,
sehingga mengurangi risiko spesifisitas antigen ganda sebagai konsekuensi dari mispairing - dan
- rantai antara penduduk asli dan TCR rekombinan dalam konteks TCR yang direkayasa. Selain
itu, penyisipan transgen CAR di lokus TRAC memungkinkan ekspresi transgen endogen melalui
promotor TRAC, yang mencegah pensinyalan CAR yang terlalu aktif dan menunda kelelahan sel
T efektor. 178.

Bagaimana strategi pengeditan gen yang ditargetkan ini dapat memengaruhi T reg
homeostasis dan fungsi sel masih harus diselidiki. Namun demikian, penghapusan T . endogen reg
TCR sel dapat menghilangkan potensi aktivitas imunosupresif di luar target karena T reg TCR sel
dianggap dipilih untuk pengenalan antigen diri. Menuju donor universal T reg sel Uji klinis yang
sedang berlangsung akan terus memvalidasi potensi terapeutik T reg terapi berbasis sel. Namun,
langkah penting menuju penerapan luas ACT adalah off-theproduk sel T rak. Sumber T . autologus
reg sel membatasi dan strategi saat ini membutuhkan T . autologus reg ekspansi sel di bawah
kondisi yang sesuai dengan praktik manufaktur yang baik, yang saat ini sangat mahal. Sebagai T
reg terapi berbasis sel bergerak maju, ada beberapa pendekatan untuk menghindari kebutuhan T .
autologus reg pembuatan sel.

Penggunaan pihak ketiga (tidak terkait dengan donor atau penerima) T reg sel telah menjadi
strategi dalam pengaturan klinis GVHD di mana T reg sel yang berasal dari darah tali pusat
digunakan sebagai solusi jangka pendek sebelum T . endogen reg generasi sel dari sel sumsum
tulang donor. Jadi, salah satu pendekatan untuk off-the-shelf T reg produk sel akan menjadi
generasi dan penggunaan a bank T reg sel yang dihasilkan untuk mencocokkan MHC yang berbeda
sebaik mungkin. Ini dapat digunakan sebagai solusi jangka pendek yang cukup untuk
memungkinkan pembentukan penekan lingkungan (yaitu, toleransi infeksi) 179.180.

Namun, pendekatan ini mungkin masih rentan terhadap eliminasi yang dimediasi host dari
sel yang ditransfer, mencegah respons yang tahan lama. Dengan demikian, generasi T reg sel yang
lolos dari pengenalan kekebalan oleh inang akan menawarkan peluang unik dalam pengembangan
produk yang tersedia. Salah satu pendekatan telah menggunakan Teknologi CRISPR–Cas9 untuk
membuat sel kekurangan HLA, dan karenanya kurang imunogenik. Namun, selsel yang tidak
mengekspresikan molekul HLA kelas I atau II kanonik menjadi sasaran pembunuhan sel NK.
Salah satu solusinya mungkin dengan mengekspresikan HLA-E atau HLA-G secara ektopik, gen
HLA nonkanonik yang diekspresikan selama toleransi ibu-janin yang merupakan ligan untuk
reseptor penghambatan pada sel NK, untuk memotong pembunuhan yang dimediasi sel NK 181.
 Pilihan lain adalah secara artifisial mengekspresikan CD47 'jangan-makan-saya-sinyal'
dalam sel T yang ditransfer secara adopsi untuk mencegah fagositosis oleh makrofag 182.183.
Menargetkan banyak gen dalam limfosit T primer menimbulkan tantangan teknis karena validasi
keamanan substansial yang diperlukan untuk setiap produk sel; oleh karena itu, sel induk
pluripotent master perbankan dengan sifat yang direkayasa dapat menjadi alternatif yang layak.
Sel induk berpotensi majemuk manusia mewakili sumber sel yang berguna secara klinis yang
berpotensi tidak habis-habisnya dan dapat menerima pengeditan gen 184.185.

Sampai saat ini, ada beberapa penelitian yang menunjukkan kelayakan generasi sel T dari
sel induk berpotensi majemuk. 186–190. Laporan ini sebagian besar berfokus pada pengembangan
dan karakterisasi progenitor sel T (CD4+CD8+) atau sel T efektor CD8+ untuk imunoterapi
kanker. Selanjutnya, diferensiasi sel T dari kultur pluripoten hampir secara eksklusif bias terhadap
CD8 . + Sel T, dengan sedikit CD8 + perkembangan sel T 189.191. Pemahaman yang lebih baik
tentang mekanisme yang mengontrol perkembangan subset sel T yang berbeda akan meletakkan
dasar untuk diferensiasi sel T yang berguna secara terapeutik dari induk berpotensi majemuk. sel,
termasuk CD4+ T reg sel. Selanjutnya, sel induk berpotensi majemuk manusia dapat direkayasa
agar tahan terhadap kelelahan dan peradangan. Pendekatan rekayasa genetika telah dikembangkan
untuk menghasilkan garis sel induk berpotensi majemuk donor universal yang tidak memiliki β 2-
mikroglobulin, dan karena itu molekul MHC kelas I, dan mengekspresikan HLA-E untuk
menghambat sel NK sitotoksisitas yang dimediasi 181.192.193. Pada prinsipnya, jalur donor
universal ini dapat dibedakan untuk memberikan terapi sel T yang tersedia; Namun, tantangan
utama tetap memahami jalur mendasar yang membedakan himpunan bagian sel T yang berbeda,
termasuk T reg sel, dan prekursornya.

Kesimpulan

Dalam dekade terakhir, kami telah menyaksikan potensi terapi transformatif dari terapi sel
T adopsi untuk kanker. Validasi lanjutan dan keberhasilan sel T CAR terapi telah membuka jalan
bagi T reg terapi berbasis sel untuk penyakit autoimun dan solid transplantasi organ dan sumsum
tulang. Hasil dari uji klinis yang berfokus pada T reg terapi berbasis sel untuk T1D, SLE dan
penyakit radang usus sedang muncul 12. Inisial sukses T reg terapi sel pada penyakit autoimun
kemungkinan akan mempromosikan penggunaan T reg sel untuk mengobati gangguan non-
autoimun. Model tikus transgenik di mana T reg sel adalah yang diablasi secara khusus telah
mengungkap peran non-tradisional untuk T . residen jaringan reg sel dalam proses modulasi yang
mempromosikan perbaikan jaringan dan penyembuhan luka di beberapa pengaturan independen
dari aktivitas penekan mereka 194–197. T reg sel juga telah terbukti memiliki efek neuroprotektif
pada model tikus dengan penyakit Alzheimer 198.199, dan ada yang sedang berlangsung uji klinis
fase I kecil untuk mengevaluasi keamanan dan tolerabilitas ACT dengan perluasan poliklonal T
reg sel pada pasien dengan amyotrophic lateral sclerosis 200.201. Namun, T reg sel terapi saja
mungkin tidak cukup untuk menginduksi toleransi dan tidak mungkin bahwa T reg sel akan
digunakan sebagai terapi tunggal (BOX 2).

Penggunaan poliklonal T reg terapi sel akan beralih ke antigenT . spesifik reg sel yang
dihasilkan dengan pendekatan pengeditan gen non-virus yang ditingkatkan 177 dan upaya untuk
mendapatkan produk yang siap dipasarkan (Gbr. 4). Teknologi yang dimediasi CRISPR–Cas9
memungkinkan generasi gangguan genetik yang cepat dan efisien untuk mengidentifikasi jalur
baru yang mengatur stabilitas, proliferasi, dan fungsi sel T 202. Di luar aplikasi terapeutik dari T
reg sel untuk penyakit autoimun, T reg sel dapat dimanfaatkan untuk penyakit inflamasi yang lebih
umum dan dalam terapi kombinasi. Efek samping autoinflamasi adalah sering dikaitkan dengan
imunoterapi kanker (misalnya, inhibitor pos pemeriksaan) dan oleh karena itu T reg sel dapat
digunakan secara bersamaan 203. Namun, T . tersebut reg sel harus direkayasa untuk memiliki
spesifisitas jaringan target untuk mencegah atau mengobati autoimun yang merugikan acara dan
tidak meredam respon antitumor. Masih ada beberapa pertanyaan yang belum terjawab
berhubungan dengan T . dasar reg biologi sel, T reg rekayasa sel dan terjemahan klinis (BOX 3).
Namun, ini adalah era terapi gen dan sel yang menarik, dengan banyak alat baru dan strategi untuk
mempercepat T reg imunoterapi berbasis sel. Menemukan keseimbangan yang tepat antara
imunosupresi dan pengawasan kekebalan akan menjadi kunci keberhasilan saat kita bergerak
menuju T reg terapi berbasis sel sebagai modalitas imunoterapi.