Vaksin kanker multipeptida untuk aplikasi klinis

Kedokteran Oxford

Imunologi Tumor dan Imunoterapi

Diedit oleh Robert C. Rees

Penerbit: Oxford University Press Print

Cetak Tanggal Publikasi: Mei 2014
ISBN-13: 9780199676866
Diterbitkan online: Juli 2014
DOI: 10.1093 / med /
9780199676866.001.0001

Vaksin kanker multipeptida untuk aplikasi klinis

Bab: Vaksin kanker multipeptida untuk aplikasi klinis
Penulis: Harpreet Singh-Jasuja, Toni Weinschenk, dan Steffen Walter
DOI: 10.1093 / med / 9780199676866.003.0021

Pendahuluan: vaksin kanker terapeutik

Imunoterapi kanker aktif, juga dikenal sebagai vaksin kanker terapeutik, menawarkan keuntungan potensial untuk menggabungkan
kemanjuran yang berarti, yaitu perpanjangan substansial dari kelangsungan hidup secara keseluruhan, dengan keamanan dan tolerabilitas
yang sangat baik. Dalam dekade terakhir, golongan obat ini baru-baru ini bergerak secara signifikan melampaui tahap-tahap konseptual
awal. Sejak 2009, lapangan telah mengalami kebangkitan dengan uji coba fase III pertama yang berhasil diterbitkan (Kantoff et al., 2010;
Schuster et al., 2011; Schwartzentruber et al., 2011).

Mekanisme kerja sentral dari vaksin kanker terapeutik dimediasi oleh Limfosit T. Sel T, melalui reseptor sel T (TCR), mampu secara
khusus mengenali peptida yang terikat pada molekul HLA (antigen leukosit manusia) pada manusia. Molekul HLA pada tampilan
permukaan sel peptida fragmen dari sel dan protein yang tertelan ke luar, sehingga memungkinkan sel T untuk membedakan antara sel
sehat dan sel tumor.

Sel T membutuhkan dua sinyal untuk aktivasi (' cat dasar ') dan pemenuhan fungsi efektornya: (1)
 Vaksin kanker multipeptida untuk aplikasi klinis

peptida disajikan oleh molekul HLA dan secara khusus dikenali oleh TCR; dan (2) sinyal ko-stimulasi yang menstimulasi reseptor
ko-stimulasi seperti CD28 pada sel T. Biasanya, hanya khusus sel penyaji antigen profesional ( APCs) seperti sel dendritik (DC)
mengekspresikan molekul ko-stimulasi tersebut. Vaksinasi terapeutik dengan peptida secara konseptual berarti menempatkan peptida
ke dalam konteks yang benar: peptida yang disuntikkan secara intradermal atau subkutan dapat mengikat langsung ke molekul HLA
DC yang berada di kulit. DC yang dimuat peptida dan diaktifkan dengan benar (membawa molekul co-stimulatory) kemudian
bermigrasi ke kelenjar getah bening, di mana mereka bertemu dan sel T prima khusus untuk peptida terkait tumor (TUMAP) yang
digunakan dalam vaksin. Setelah sel T dipancing oleh DC, jumlahnya meningkat dengan cepat (proliferasi klonal). Segera setelah itu,
mereka meninggalkan kelenjar getah bening, memasuki jaringan, dan bermigrasi melalui pemindaian jaringan sel demi sel sampai
mereka menemukan sel tumor yang menampilkan peptida yang persis sama dengan yang mereka aktifkan dalam proses priming.

Presentasi antigen yang dimediasi HLA

Dua kelas peptida yang berbeda disajikan oleh reseptor HLA: peptida terbatas HLA kelas I dan HLA kelas II. Peptida terbatas kelas I
HLA adalah peptida pendek (biasanya 8-10 asam amino) yang dikenal oleh sel T sitotoksik ( CTL). CTL yang diaktifkan memiliki
kemampuan untuk secara langsung membunuh sel yang menyajikan peptida tersebut melalui zat sitolitik yang disekresi, atau dengan
mendorong sel tumor ke dalam apoptosis. Molekul HLA kelas I biasanya diekspresikan oleh setiap sel tubuh yang berinti. Peptida
kelas I HLA dihasilkan oleh mesin pengolah antigen sel terutama dari protein yang baru disintesis, tetapi gagal melipat (produk
ribosom yang rusak), dari protein yang hidup pendek (SLIP) dan protein yang sudah tua. Protein seperti itu dengan cacat lahir atau
usia biasanya didegradasi menjadi peptida oleh protease seperti proteasome dan selanjutnya oleh peptidase menjadi asam amino
yang kemudian didaur ulang untuk pembuatan protein baru. Namun, sebagian kecil dari peptida ini sepanjang jalan ini berhasil
melarikan diri dari degradasi lebih lanjut dengan dibawa ke retikulum endoplasma (ER) melalui TAP (transporter yang terkait dengan
pemrosesan antigen) di mana mereka dapat mengikat molekul kelas I HLA. Molekul HLA kelas I dapat dibawa ke permukaan sel untuk
diperiksa oleh sel T sitotoksik.

Peptida terbatas kelas II HLA adalah peptida yang lebih panjang (biasanya 12-20 atau lebih asam amino) yang memiliki kemampuan
untuk mengaktifkan secara khusus sel T pembantu. Sel T pembantu yang diaktifkan memainkan peran penting dalam pembentukan
antibodi oleh sel B, tetapi juga dianggap memberikan bantuan untuk CTL dengan memberikan sinyal ko-stimulasi (misalnya dimediasi
oleh interaksi ligan CD40 ‒ CD40) ke APC, meningkatkan konsentrasi sitokin secara lokal. sebagai interferon (IFN) -γ, dan mungkin juga
memiliki efek anti-angiogenik langsung pada tumor. Molekul HLA kelas II hanya diekspresikan oleh subset sel, biasanya APC seperti
makrofag, sel B, dan sel dendritik (tetapi juga beberapa sel tumor). Secara konseptual, sementara peptida kelas I HLA dihasilkan dari
protein endogen, peptida kelas II HLA berasal dari protein eksogen. Protein tersebut dapat diambil oleh APC melalui endositosis atau
makropinositosis dan terdegradasi dan selanjutnya dipangkas oleh protease dan peptidase di vesikula endosom dan lisosom.

Molekul HLA kelas I dan II terdiri dari empat domain, dua di antaranya memiliki struktur imunoglobulin dan dua di antaranya
membentuk alur pengikat peptida terbuat dari lembaran beta yang membentuk
 Vaksin kanker multipeptida untuk aplikasi klinis

dasar alur dan dua heliks alfa yang membentuk tepi (lihat Gambar 21.1). Peptida terletak pada konformasi yang diperpanjang dalam
alur yang distabilkan oleh ikatan hidrogen dan interaksi ionik. Pengikatan rantai samping pada posisi tertentu dari peptida (residu
jangkar) dengan kantong molekul HLA memainkan peran penting untuk kekhususan pengikatan peptida ke molekul HLA. Ratusan
alel HLA yang berbeda ada pada populasi manusia, dengan kantong yang sangat polimorfik pada alur pengikatnya dan setiap alel
HLA memiliki sendiri motif pengikat,

yaitu residu jangkar yang disukai untuk peptida terikat (Rammensee et al., 1999). Komponen lain dari mesin presentasi antigen
seperti proteasome, protease / peptidase dan transporter lainnya seperti TAP memiliki persyaratan urutan tambahan yang
selanjutnya membatasi jumlah urutan peptida yang disajikan oleh molekul HLA.

Gambar 21.1.

Struktur kristalografi sinar-X molekul MHC kelas I dengan domain α1 dan α2 merupakan alur pengikatan peptida.
Menariknya, dari sudut tertentu,
struktur ini menyerupai kepala rusa. Direproduksi atas izin Hansjörg Schild, Hak Cipta © 1990.

Imunopeptidom kanker

Karena peptida kelas I HLA berpotensi dihasilkan dari semua protein, dengan cara ini, proteome lengkap dapat direpresentasikan
pada permukaan sel dalam bentuk peptida yang dibatasi HLA. Entitas peptida yang disajikan HLA ini juga disebut sebagai Ligan HLA (
Klug et al., 2009) atau
immunopeptidome ( Caron et al., 2005). Dalam kasus sel kanker, keseluruhan dari semua peptida yang dibatasi HLA dapat disebut
sebagai immunopeptidome kanker. Karena beberapa sel kanker juga mengekspresikan molekul HLA kelas II, imunopeptidom
kanker dapat terdiri dari peptida kelas I HLA dan kelas II. Imunopeptidom kanker merupakan informasi yang paling padat dan penting
yang
ditransfer dari sel-sel yang sakit ke sistem kekebalan seluler. Dengan demikian, pengetahuan tentang karakteristik imunopeptidom
kanker dan perbedaannya dengan imunopeptidom sel sehat relevan untuk pengembangan rasional vaksin kanker terapeutik yang
bergantung pada antigen.

Peptida terkait tumor untuk vaksinasi

 Vaksin kanker multipeptida untuk aplikasi klinis

Keuntungan vaksin peptida

Dibandingkan dengan vaksin berbasis protein atau asam nukleat (DNA, RNA, vektor virus), vaksin berbasis peptida memiliki
banyak keuntungan:

◆ Independensi dari pemrosesan antigen: Vaksin peptida dianggap mengikat langsung ke reseptor HLA APC, sehingga tidak
memerlukan pemrosesan lebih lanjut oleh mesin pengolah antigen APC. Sebagai perbandingan, dengan protein atau peptida
panjang, pengambilan dan pemangkasan lebih lanjut dari ujung C dan N dari urutan diperlukan sebelum mereka dimuat ke molekul
HLA dari APC, mekanisme yang disebut sebagai presentasi silang. Jika mesin pemrosesan antigen di APC berbeda dari sel tumor,
peptida lain yang dibatasi HLA yang 'salah', dapat ditampilkan secara silang pada APC dibandingkan dengan tumor. Memang,
contoh pertama yang menunjukkan pemrosesan dan presentasi antigen yang berbeda adalah MAGE-3.B40 yang disajikan secara
eksklusif oleh sel tumor yang mengekspresikan sebagian besar imunoproteasom (dengan motif pembelahan yang berbeda
dibandingkan dengan proteasom konstitutif) tetapi tidak oleh APC profesional (van der Bruggen et al., 2002). Berbeda dengan
antigen lengkap, menggunakan vaksin peptida memberikan kebebasan penuh dari berbagai mesin pemrosesan antigen potensial
dalam tumor dan APC.

◆ Profil keamanan: Peptida telah diberikan dalam berbagai studi klinis selama hampir dua dekade dan dapat ditoleransi dengan
sangat baik. Jadi, dari perspektif peraturan, mereka dikenali dengan baik oleh otoritas dan biasanya (jika peptida alami
digunakan dan data yang cukup tentang spesifisitas tumornya dapat ditampilkan) tidak memerlukan studi toksikologi hewan.

◆ Kemanjuran: Peptida kelas I dan II HLA dapat menginduksi respon sel T CD8 dan CD4 yang manjur jika divaksinasi bersama
dengan imunomodulator yang sesuai. Khususnya menggunakan formulasi multi-peptida, tingkat respons sel T yang diinduksi
vaksin dari 70-100% dapat diamati (Slingluff et al., 2007; Walter et al., 2012) dengan frekuensi sel T dalam beberapa percobaan
di atas 1% di antara semua sel T CD8 (Speiser et al., 2005).

◆ Kimia dan stabilitas: Peptida yang dibatasi HLA kelas I dan II (biasanya 8-20 asam amino) dapat dengan mudah
diproduksi secara sintetis menggunakan bahan kimia yang sudah mapan. Manufaktur hingga kisaran kilogram dapat
dilakukan dengan biaya barang (COG) yang relatif rendah. Peptida (dan campuran peptida) dapat diliofilisasi dan telah
terbukti stabil dalam bentuk ini bahkan pada suhu kamar selama bertahun-tahun.

◆ Imunomonitoring: Respon imunologi terhadap peptida yang divaksinasi dapat diukur secara langsung dan secara
spesifik menggunakan peptida yang sama persis seperti yang divaksinasi. Karena epitop minimal yang dikenali tersedia
langsung,
HLA-peptida kelas I dan multimer kelas II dapat digunakan untuk imunomonitoring. Multimer HLA pada saat yang sama
merupakan alat yang paling sensitif, paling fleksibel dan paling kuat untuk kuantifikasi dan karakterisasi sel T spesifik antigen yang
tersedia saat ini. Respon sel-T yang diinduksi vaksin dengan demikian dapat digunakan sebagai parameter pengganti yang
penting pada tahap awal perkembangan klinis ketika uji coba non-acak pada ukuran sampel kecil dilakukan yang hanya
memungkinkan kesimpulan terbatas dengan evaluasi titik akhir klinis saja.

◆ Vaksin kombinasi multi-epitop: Pengembangan farmasi dan pembuatan campuran hingga 20 peptida yang
sepenuhnya sesuai dengan praktik produksi yang baik (GMP) telah dibuktikan layak memungkinkan pembuatan vaksin
multi-target yang ditentukan dan stabil. Vaksin multi-peptida semacam itu dapat menyebabkan banyak respons sel-T tanpa
ada
 Vaksin kanker multipeptida untuk aplikasi klinis

efek negatif dari persaingan di antara peptida (Slingluff et al., 2007). Secara teoritis, vaksin multi-antigen tersebut juga dapat
dibangun dengan mengkodekan beberapa epitop dalam DNA atau RNA, namun hal ini disertai dengan risiko ketergantungan
pada pemrosesan antigen. Selain itu, epitop buatan yang berasal dari urutan linker mungkin sangat imunogenik (seperti
yang dikenali sebagai asing) tetapi tidak berguna atau bahkan imunodominan.

Keterbatasan vaksin peptida

Peptida, terutama peptida terbatas kelas I HLA pendek juga dapat mengalami beberapa keterbatasan:

◆ Pembatasan HLA: Menurut definisi, kekhususan peptida tersebut ke HLA juga membatasi aplikasinya pada alel HLA tertentu.
Banyak uji klinis harus membatasi perekrutan pasien pada jenis HLA yang paling melimpah, misalnya HLA-A * 02 yang disajikan
pada 45-50% populasi di Eropa, AS dan Cina atau HLA-A * 24 yang diekspresikan pada 60% orang di Jepang. Batasan ini
dapat diatasi dengan menggunakan berbagai peptida yang menutupi alel HLA yang paling melimpah. Secara teoritis, vaksin
yang mencakup lima alel HLA-A * 01, A * 02, A * 03, A * 24 dan B * 07 akan mencakup lebih dari 90% populasi dunia.

◆ Persyaratan untuk adjuvanation: Peptida tanpa ajuvan tidak bersifat imunogenik, yaitu tidak dapat memicu peningkatan
regulasi sinyal ko-stimulasi pada APC dan tidak membentuk depot ekstraseluler tetapi dengan cepat terdegradasi secara in vivo.
Keterbatasan ini dapat diatasi dengan pemberian ajuvan dan imunomodulator secara bersamaan.

◆ Mengikat ke APC non-profesional: Setelah vaksinasi intradermal / subkutan, peptida pendek dapat mengikat semua jenis sel
yang menyimpan molekul HLA kelas I termasuk APC non-profesional seperti fibroblas dimana mereka disajikan tanpa ko-stimulasi
yang tepat. Konsekuensinya tidak jelas tetapi telah berspekulasi bahwa sel penyaji peptida non-profesional seperti itu bahkan
dapat menginduksi toleransi terhadap antigen yang divaksinasi. Namun, gagasan ini sebagian besar dihasilkan dari data hewan
dan hanya ada sedikit bukti untuk ini dalam uji klinis.

Peptida terkait tumor

Antigen, yaitu gen / protein, yang terkait dengan ekspresi spesifik atau ekspresi berlebih pada tingkat mRNA atau protein dalam
jaringan tumor dan mampu memunculkan respons sel-T spesifik dikenal sebagai
antigen terkait tumor ( TAA). MZ2-E (juga dikenal sebagai MAGE-A1) dianggap sebagai yang pertama (van der Bruggen et al., 1991)
di antara keluarga TAA yang besar dan sedang berkembang. TUMAP menjelaskan peptida terbatas HLA yang berasal dariTAAs.

Empat kelas TAA atau TUMAP yang berbeda dijelaskan (Vacchelli et al., 2012):

1 TAA yang benar-benar eksogen, 'bukan-diri' biasanya berasal dari antigen virus. Contoh yang menonjol termasuk
antigen human papillomavirus (HPV) HPV-16 dan -18 yang terkait dengan kanker kepala dan leher serta serviks / dubur dan
antigen hepatitis B dan C (HBV / HCV) yang terkait dengan kanker hepatoseluler. Epitop virus tersebut memiliki spesifisitas
tumor yang kuat dan imunogenisitas sel T yang tinggi karena sifatnya yang 'bukan diri'. Namun, banyak penyakit neoplastik
tidak terkait dengan ekspresi epitop virus, sehingga bidang aplikasinya terbatas sampai batas tertentu.

2 TAA idiotipe adalah kelas antigen tertentu yang terjadi di sel B yang mengekspresikan a
 Vaksin kanker multipeptida untuk aplikasi klinis

reseptor sel B unik (BCR) di permukaannya. BCR secara de facto adalah protein diri, tetapi berisi wilayah variabel unik yang
mendefinisikan spesifisitasnya (idiotipe) yang berpotensi menghasilkan respons sel B (yaitu antibodi anti-idiotipik) tetapi juga
respons sel T yang diarahkan ke idiotipe . TAA idiotipik adalah target bermakna yang telah divalidasi secara klinis (Schuster et
al., 2011) tetapi terbatas pada keganasan sel B. Epitop sel T bersarang di daerah variabel BCR idiotipik telah dijelaskan, tetapi
tampaknya jarang dan terbatas pada tanggapan sel T pembantu CD4 (Gricks dan Gribben,

2003).
3 TAA bersama atau diekspresikan secara berlebihan dibagi antara tumor dan jaringan sehat dari mana mereka berasal,
oleh karena itu mereka 'sendiri' tetapi dapat ditemukan sangat diekspresikan (pada tingkat mRNA) dan / atau sangat berlebihan
(pada tingkat peptida) dalam tumor dibandingkan dengan jaringan sehat. Contoh yang menonjol adalah c-met dan famili cyclins
yang ditemukan sangat diekspresikan dalam berbagai neoplasma tetapi hanya pada level rendah pada jaringan sehat. Kelas
lain adalah antigen testis kanker yang diekspresikan dalam kanker dan oleh sel germline tetapi sering dianggap unik karena
testis menjadi lokasi yang memiliki kekebalan. TAA bersama memiliki keuntungan sebagai keluarga yang paling umum di antara
antigen tumor yang terjadi di semua neoplasma. Beberapa TAA bersama banyak ditemukan di antara satu jenis kanker yang
memungkinkan penggunaan antigen 'off-the-shelf' untuk semua pasien yang menderita jenis tumor ini.

4 TAA unik biasanya hasil dari pergantian genetik yang menumpuk sel ganas selama onkogenesis. Contoh yang menonjol
termasuk p53, KRAS dan EGFR yang terkait dengan sejumlah entitas tumor. TAA semacam itu menawarkan janji untuk
benar-benar spesifik tumor dan — mungkin karena kurangnya toleransi sentral — sangat imunogenik. Serupa dengan
antigen virus 'non-self', mereka mungkin sangat mujarab dan spesifik (dan dengan demikian aman). Tetapi berbeda dengan
antigen virus, mereka mungkin terjadi pada semua neoplasma. Namun, sangat sedikit TAA termutasi yang ditemukan pada
kanker dengan frekuensi tinggi di antara pasien yang berbeda. Biasanya, mutasi tertentu dapat ditemukan pada sangat
sedikit atau bahkan satu manusia. Jadi, TAA yang unik seperti itu menawarkan prospek yang bagus dalam pendekatan
vaksin yang dipersonalisasi.

Identifikasi peptida untuk vaksinasi

Pada prinsipnya, peptida untuk vaksinasi pada kanker telah diidentifikasi oleh tiga teknologi berbeda (lihat juga Gambar 21.2):

1 Sel T sebagai titik awal: Ini adalah pendekatan pertama yang digunakan oleh kelompok Boon pada 1990-an (van der
Bruggen et al., 1991). Sel T dari pasien melanoma diisolasi dan CTL pembunuh tumor dihasilkan oleh kultur campuran dengan
sel tumor autologus. Perpustakaan ekspresi DNA dibangun dari garis sel target yang dikenali secara spesifik oleh sel T ini
untuk mengidentifikasi antigen penolakan tumor. Transfektan yang mengekspresikan antigen yang relevan dapat dipilih dengan
kemampuannya untuk merangsang CTL yang sesuai. Banyak peptida terkait melanoma telah diidentifikasi dengan metode asli
ini. Keuntungannya adalah peptida semacam itu biasanya sangat imunogenik. Namun,

2 Gen / protein sebagai titik awal: Sejumlah peptida dalam perkembangan klinis memiliki
 Vaksin kanker multipeptida untuk aplikasi klinis

menggunakan antigen tertentu yang diinginkan sebagai titik awal (misalnya Mucin-1). Pengetahuan tentang motif pengikatan
peptida dapat digunakan untuk membangun algoritma komputer yang mampu memprediksi kemungkinan pengikatan peptida
pada molekul HLA (Rammensee et al., 1997). Peptida semacam itu dapat digunakan untuk priming in vitro sel T diikuti dengan
konfirmasi spesifisitas sel T. Metode ini juga disebut sebagai imunologi terbalik (Celis et al., 1994) dan biasanya menghasilkan
peptida yang sangat imunogenik. Namun, masih belum jelas apakah peptida benar-benar muncul pada tumor, karena algoritme
komputer yang digunakan diperkirakan memiliki angka positif palsu yang tinggi dan hasil harus dikonfirmasi dengan metode
lebih lanjut (Schirle et al., 2000).

3 Peptida sebagai titik awal: Ini tampaknya menjadi cara paling langsung untuk mengakses imunopeptidome kanker
(Weinschenk et al., 2002; Singh-Jasuja et al., 2004). Kompleks peptida HLA diisolasi dari sel tumor dengan kromatografi
afinitas dan kromatografi cair kinerja tinggi yang digabungkan dengan spektrometri massa tandem (HPLC-MS / MS) digunakan
untuk mengisolasi dan mengurutkan sejumlah besar peptida yang dibatasi HLA. Peptida ini (jika urutannya dapat dikonfirmasi
dengan jelas) adalah de facto TUMAP yang disajikan secara alami. TUMAP semacam itu juga dapat digunakan untuk
melakukan priming in vitro untuk menentukan imunogenisitasnya dan memilih TUMAP dengan imunogenisitas tertinggi.

Gambar 21.2.

Sel tumor menghadirkan peptida ke sel T melalui degradasi protein yang ada
selanjutnya terikat pada molekul HLA. Sel T secara khusus dapat mengenali kompleks peptida HLA-seperti itu melalui reseptor
sel-T mereka. Rute berbeda untuk mengidentifikasi peptida terkait tumor telah digunakan dengan mengambil sel-T, peptida yang
dibatasi HLA atau gen tertentu yang menarik sebagai titik awal.

Aplikasi klinis dari vaksin peptida

Uji klinis pertama yang menggunakan vaksin peptida diterbitkan pada tahun 1995 yang menunjukkan respons imun spesifik yang
diinduksi oleh vaksin terhadap nonapeptida MAGE-A1 pada pasien melanoma positif HLA-A * 01 (Hu et al., 1996; Mukherji et al., 1995)
. Ini adalah titik awal dari lusinan uji klinis dengan vaksin peptida yang telah dilakukan sejak itu dan ditinjau di tempat lain (Vacchelli et
al., 2012; Yamada et al., 2012). Sebagian besar uji coba vaksin peptida telah dilakukan pada melanoma berdasarkan fakta bahwa TAA
pertama diidentifikasi pada jenis kanker ini, dan sensitivitas melanoma terhadap intervensi imunoterapi seperti IL-2 telah ditetapkan
sebelumnya. Sementara itu, uji coba vaksin peptida telah diperluas ke semua jurusan
 Vaksin kanker multipeptida untuk aplikasi klinis

indikasi kanker. Vaksin kanker berbasis peptida pertama baru-baru ini mencapai validasi klinis yang ditunjukkan dengan pengaturan
terkontrol secara acak (Schwartzentruber et al., 2011) atau dengan kejadian respon objektif klinis yang luar biasa (Kenter et al., 2009).

Kombinasi beberapa peptida dalam satu vaksin

Kebanyakan uji klinis yang menggunakan vaksin berbasis peptida dan vaksin kanker lainnya telah menggunakan satu atau beberapa
antigen saja. Alasan untuk ini sebagian besar adalah kurangnya ketersediaan antigen, biaya produksi, pengembangan kompleks
formulasi multi-epitop, dan kompleksitas yang terlibat dalam pemantauan banyak antigen. Namun, penggunaan satu atau beberapa
antigen dalam vaksin bertentangan dengan heterogenitas ekspresi antigen dan kemampuan sel tumor untuk menurunkan modulasi
antigen tunggal untuk menghindari respon imun dengan cara yang tidak dapat diubah (Sampson et al., 2010). Selain itu, karena
sebagian besar epitop tidak imunogenik pada semua pasien, meningkatkan jumlah peptida dalam vaksin siap pakai meningkatkan
kemungkinan peningkatan beberapa respons sel-T secara bersamaan.

Banchereau dkk. adalah orang pertama yang menunjukkan bahwa pasien yang telah menerima vaksin yang terdiri dari empat peptida
melanoma yang berbeda mengamati manfaat klinis yang lebih baik (pengendalian tumor dan kelangsungan hidup keseluruhan
rata-rata) jika mereka menunjukkan tanggapan yang diinduksi vaksin terhadap setidaknya dua peptida dalam komposisi berbeda
dengan pasien yang memiliki respon imun terhadap nol atau satu antigen saja (Banchereau et al., 2001; Fay et al., 2006). Pengamatan
serupa baru-baru ini dilakukan oleh kelompok kami pada kanker sel ginjal (RCC) (Walter et al., 2012) dan kanker kolorektal (CRC)
(Kuttruff et al., 2012).

Saat melakukan vaksinasi beberapa peptida di satu lokasi vaksinasi, ada kekhawatiran bahwa beberapa antigen mungkin bersaing
untuk situs pengikatan HLA sehingga mengarah ke penghambatan respons sel T terhadap peptida pengikat afinitas rendah oleh
peptida dengan afinitas pengikatan yang lebih tinggi. Slingluff dkk. termasuk di antara sedikit yang telah mempelajari pertanyaan ini
dalam uji klinis acak. Pasien melanoma diacak untuk menerima vaksin 12-peptida atau 4-peptida, dimana empat peptida terakhir
(peptida indeks) juga dimasukkan dalam komposisi 12-peptida. Respon kekebalan terhadap peptida indeks sebagian besar serupa
pada kedua kelompok pengobatan yang menunjukkan bahwa persaingan tidak terjadi sementara ada peningkatan yang signifikan dari
imunogenisitas total vaksin 12-peptida dibandingkan komposisi empat peptida (Slingluff et al.,

2007). Kami mengamati tidak ada perbedaan besar dalam imunogenisitas ketika membandingkan dua komposisi vaksin multi-peptida
yang berbeda dalam uji klinis fase II ginjal dan kolorektal ketika secara khusus melihat peptida yang tumpang tindih dalam komposisi
kedua vaksin (tidak dipublikasikan). Pengamatan ini menunjukkan bahwa vaksinasi beberapa peptida di satu lokasi dapat didukung.

Perhatian lain untuk vaksinasi multi-antigen adalah apakah formulasi multi-peptida yang mengandung banyak peptida dapat
dikarakterisasi secara farmasi dan dengan demikian memenuhi persyaratan peraturan oleh otoritas yang kompeten untuk digunakan
dalam uji klinis dan akhirnya di pasar. Dengan menggunakan pengembangan metode khusus, kami telah berhasil menghasilkan
formulasi untuk hingga 19 peptida berbeda yang dapat dipisahkan sepenuhnya dengan metode berbasis HPLC tunggal. Metode ini
dapat digunakan untuk pelepasan dan penilaian stabilitas setiap peptida individu dalam komposisi dan bahkan untuk penilaian
ketidakmurnian. Kami telah mengamati bahwa formulasi multi-peptida tersebut sangat stabil selama lima tahun dan lebih pada formulasi
terliofilisasi pada suhu 4 ° C. FDA, otoritas Eropa dan PMDA (di Jepang) telah menyetujui
 Vaksin kanker multipeptida untuk aplikasi klinis

beberapa aplikasi uji klinis menggunakan formulasi multi-peptida (Slingluff et al., 2007; Walter et al., 2012; Yamada et al., 2012).

Peptida pendek versus panjang

Baru-baru ini, ada banyak perdebatan tentang penggunaan peptida pendek, yaitu HLA kelas I-terbatas, dengan panjang tipikal 8 sampai 10 asam amino. Kekhawatiran telah

dikemukakan bahwa peptida pendek — setelah vaksinasi — dapat mengikat ke sel mana pun di tempat pemberian, tidak hanya pada APC profesional, sehingga berpotensi bahkan

memberikan toleransi ketika disajikan ke sel T tanpa adanya sinyal ko-stimulasi. Sebaliknya, data pra-klinis oleh Melief et al. menggunakan peptida memanjang (20 asam amino dan

lebih panjang) yang menyematkan epitop CD8 pendek dalam urutannya dan diperpanjang oleh urutan alami yang ditemukan dalam protein menunjukkan bahwa peptida panjang

tersebut lebih unggul dalam mendorong tanggapan sel T CD8 (Zwaveling et al., 2002) . Namun, ini membutuhkan presentasi silang dari peptida panjang oleh APC, proses yang telah

dibahas sebagai tidak efisien (Ochsenbein et al., 2001) berbeda dengan pemuatan langsung molekul HLA oleh peptida. Pengamatan klinis kami sendiri menggunakan komposisi

vaksin yang mengandung peptida panjang dan pendek menunjukkan bahwa respon sel T CD8 terhadap epitop kelas I yang diinduksi oleh vaksinasi dengan peptida memanjang

dalam satu percobaan jauh lebih lemah dibandingkan dengan vaksinasi peptida pendek (data tidak dipublikasikan). Sementara pengamatan ini bersifat tidak langsung, jawaban yang

lebih pasti untuk pertanyaan-pertanyaan ini harus diperoleh dengan perbandingan langsung peptida pendek versus panjang dalam uji coba terkontrol secara acak. Pengamatan klinis

kami sendiri menggunakan komposisi vaksin yang mengandung peptida panjang dan pendek menunjukkan bahwa respon sel T CD8 terhadap epitop kelas I yang diinduksi oleh

vaksinasi dengan peptida memanjang dalam satu percobaan jauh lebih lemah dibandingkan dengan vaksinasi peptida pendek (data tidak dipublikasikan). Sementara pengamatan ini

bersifat tidak langsung, jawaban yang lebih pasti untuk pertanyaan-pertanyaan ini harus diperoleh dengan perbandingan langsung peptida pendek versus panjang dalam uji coba

terkontrol secara acak. Pengamatan klinis kami sendiri menggunakan komposisi vaksin yang mengandung peptida panjang dan pendek menunjukkan bahwa respon sel T CD8

terhadap epitop kelas I yang diinduksi oleh vaksinasi dengan peptida memanjang dalam satu percobaan jauh lebih lemah dibandingkan dengan vaksinasi peptida pendek (data tidak

dipublikasikan). Sementara pengamatan ini bersifat tidak langsung, jawaban yang lebih pasti untuk pertanyaan-pertanyaan ini harus diperoleh dengan perbandingan langsung

peptida pendek versus panjang dalam uji coba terkontrol secara acak.

Imunomodulator untuk vaksin peptida

Vaksin peptida sendiri tidak cukup imunogenik dan memerlukan imunomodulator atau bahan pembantu untuk menginduksi kekebalan
sel-T yang kuat. Pada prinsipnya, tiga kelas imunomodulator yang berbeda untuk peptida dan vaksin lain dapat dibedakan:

1 Adjuvan dan imunomodulator lokal: Selama bertahun-tahun ini digunakan paling luas dan termasuk adjuvan (dicampur
dengan komposisi vaksin; banyak digunakan adalah Montanide ISA-51 untuk menghasilkan emulsi air dalam minyak yang
membentuk depot dengan pelepasan antigen yang lambat dan berkelanjutan) atau imunomodulator (diberikan secara terpisah
di lokasi vaksinasi untuk menarik dan / atau mengaktifkan APC profesional in situ, yang paling banyak digunakan adalah
faktor perangsang koloni granulosit-makrofag [GM-CSF]). Baru-baru ini, imunomodulator yang berpotensi lebih kuat yang
mengandung agonis reseptor seperti Toll sedang diselidiki secara klinis (CpG, turunan poli I: C, imiquimod, dll.). Beberapa
agen ini telah menunjukkan peningkatan imunogenisitas yang signifikan dalam uji coba secara acak (Speiser et al.,

2005).
2 Imunomodulator sistemik biasanya digunakan untuk melawan mekanisme regulasi imun. Diantaranya adalah agen untuk
menurunkan modulasi sel T regulator seperti siklofosfamid dosis tunggal (Walter et al., 2012) dan antibodi yang memblokir pos
pemeriksaan regulasi imun seperti CTLA-4 atau PD-1. Sangat sedikit uji coba acak yang dikombinasikan dengan vaksin yang
telah dilakukan sejauh ini untuk menentukan peran imunologisnya.

3 Terapi kombinasi: Pada prinsipnya, setiap standar perawatan yang diberikan dalam kombinasi dengan vaksin dan memiliki
pengaruh pada kekebalan yang diinduksi oleh vaksin dapat dianggap sebagai imunomodulator. Khususnya peran kemoterapi
klasik serta terapi bertarget telah dieksplorasi dan ditinjau secara lebih rinci di tempat lain
 Vaksin kanker multipeptida untuk aplikasi klinis

(Galluzzi dkk., 2012).

Imunomonitoring vaksin multi-peptida di klinik

Imunomonitoring respons sel-T mengacu pada pengukuran kuantitas dan / atau fungsionalitas sel-T dalam jaringan. Imunomonitoring
dengan peptida yang telah divaksinasi adalah metode paling langsung untuk memantau respons yang diinduksi.

Untuk menentukan apakah pemberian vaksin mengarah pada peningkatan kekebalan, sampel harus diambil dari pasien
sebelum dan setelah vaksinasi.

Lokasi dan titik waktu pengambilan sampel jaringan

Ini akan cukup untuk menentukan respon imun di kelenjar getah bening di mana ia dimulai (Slingluff et al., 2007), atau di lokasi tumor
yang menjadi sasarannya. Namun ini seringkali tidak layak dalam uji klinis multi-pusat. Sel T teraktivasi yang diinduksi oleh vaksinasi
bersirkulasi dalam perjalanannya memasuki jaringan, pendeteksiannya dalam darah tepi juga dimungkinkan dengan mengisolasi sel
mononuklear darah perifer (PBMC). Karena sel T biasanya hanya transit di kompartemen ini, disarankan untuk mengambil darah pada
beberapa titik waktu untuk menutupi respons puncak sel T.

Persiapan sampel

Preparasi PBMC biasanya mengacu pada fraksinasi berbasis gradien kepadatan sel mononuklear dari komponen darah lainnya. Fraksi
PBMC kemudian dapat disimpan pada suhu kriogenik. Beberapa parameter selama pembuatan PBMC dapat mempengaruhi kualitas
sampel (Britten et al., 2013). Dengan demikian, standarisasi proses pengambilan sampel dengan menggunakan reagen yang telah diuji
sebelumnya, protokol operasi standar (SOP), dan personel yang terlatih dengan tepat dan peralatan yang berkualifikasi sangat penting,
terutama dalam uji coba multi-pusat. Kami telah membangun jaringan global yang terdiri dari 62 laboratorium yang mengisolasi PBMC
dengan cara yang sepenuhnya terstandarisasi. Dari total 494 pasien RCC, kanker kolorektal, dan glioblastoma, terkumpul 2.281 sampel
dan 99,5% berhasil diisolasi. Ini menunjukkan bahwa pengambilan sampel PBMC standar layak bahkan dalam uji coba besar.

Tes respons sel-T

Ada banyak jenis tes sel-T yang berbeda dan ditinjau di tempat lain (Nagorsen dan Marincola, 2005). Jenis tes yang paling sering
dilaporkan yang digunakan dalam uji klinis adalah pengukuran pelepasan IFN-γ oleh ELISpot dan deteksi langsung sel T antigen
spesifik menggunakan multimer HLA dalam aliran sitometri. Kemajuan teknologi terkini berfokus pada pendeteksian banyak parameter
secara bersamaan dari bahan sampel yang tersedia. Pengkodean kombinatorial dari beberapa fluorokrom memungkinkan deteksi
independen dari lusinan spesifisitas sel T dalam satu sampel (Hadrup et al., 2009). Pengujian seperti pengujian pewarnaan sitokin
intraseluler (ICS) dapat menangkap banyak sitokin pada waktu yang bersamaan. Dalam uji coba multi-sentris, disarankan untuk
melakukan tes ini di laboratorium tes pusat secara bersamaan untuk semua sampel yang diperoleh dari satu pasien dan dengan cara
standar, yaitu dengan protokol yang sama, peralatan yang memenuhi syarat, dan personel terlatih. Jika ini tidak memungkinkan,
standarisasi atau setidaknya
 Vaksin kanker multipeptida untuk aplikasi klinis

harmonisasi kinerja uji antara laboratorium imunomonitoring yang berbeda harus dilakukan (Britten et al., 2009). Salah satu tantangan
utama dalam imunomonitoring vaksin multipeptida dengan jumlah peptida yang lebih tinggi adalah kebutuhan volume darah yang
besar. Sensitisasi in vitro dengan kultur sel T, misalnya selama sepuluh hari untuk memperkaya sel T spesifik oleh karena itu rutin
dilakukan dalam banyak uji coba.

Biomarker seluler

Selain penanda respons sel-T, populasi seluler tambahan dapat diukur dalam fraksi PBMC atau dalam tumor yang telah dijelaskan
untuk melawan respons sel-T. Seperti itu
populasi seluler pengatur termasuk sel T pengatur (T regs), sel supresor yang diturunkan dari myeloid (MDSC), dan IL-10 mensekresi
sel Tr3. Populasi sel lebih lanjut mungkin secara tidak langsung
indikasi penekanan kekebalan, misalnya sel T yang mengekspresikan TCRzeta tingkat rendah dan lainnya. Populasi sel tersebut
memiliki minat khusus dalam imunoterapi di mana mereka dapat mewakili biomarker prediktif. Kami telah menunjukkan dalam dua uji
klinis di RCC yang layak untuk mempelajari populasi ini dengan sedikit tambahan kebutuhan darah dan bahwa data yang dihasilkan
dapat digunakan sebagai panduan untuk pengembangan klinis yang rasional (Walter et al., 2012).

Vaksin multipeptida baru

Vaksinasi dengan beberapa peptida yang disajikan secara alami

Pada bagian berikut, tiga vaksin multipeptida baru tahap klinis diperkenalkan secara singkat yang sedang dikembangkan oleh kelompok
kami dalam uji klinis fase I sampai III. Ketiga vaksin adalah formulasi multi-peptida yang terdiri dari sepuluh hingga 13 peptida terbatas
HLA kelas I dan II terkait tumor dengan sebagian besar peptida yang terkandung terbukti secara alami disajikan selama fase penemuan
program pengembangan. Semua studi klinis yang dilakukan telah disertai dengan program imunomonitoring dan biomarker yang
ekstensif.

Vaksin kanker sel ginjal IMA901

IMA901 adalah vaksin RCC baru yang terdiri dari sembilan HLA kelas I dan satu TUMAP kelas II HLA dengan sebagian besar peptida
dikonfirmasi untuk disajikan secara alami dan dibagi di antara jaringan RCC. Studi klinis fase I dan II independen berturut-turut dilakukan
pada pasien HLA-A * 02 + stadium lanjut / metastasis RCC (total n = 96). Data ini telah dipublikasikan dan dirangkum di sini dengan
sangat singkat (Walter et al., 2012). Pasien di kedua uji klinis menerima vaksinasi intradermal berulang dengan IMA901 ditambah
GM-CSF manusia. Kedua studi menunjukkan hubungan antara manfaat klinis dan beberapa respon sel T yang diinduksi oleh vaksin
(lihat Gambar 21.3) dan dampak siklofosfamid dosis tunggal (300 mg / m 2) di

T regs dan kelangsungan hidup secara keseluruhan. Selanjutnya, dua populasi MDSC (CD14 + HLA-DR- / rendah dan CD14- CD11b +
CD15 +) secara signifikan terkait negatif dengan kelangsungan hidup pada
Pasien RCC. Pengetahuan yang diperoleh dalam uji coba ini digunakan untuk merancang studi acak terkontrol (Rini et al., 2011).
Perekrutan 339 pasien RCC lini pertama stadium lanjut / metastatik baru saja diselesaikan. IMA901 dikombinasikan dengan tirosin
kinase inhibitor sunitinib berdasarkan temuan bahwa sunitinib memodulasi dua populasi MDSC. Lebih lanjut, dalam penelitian acak ini,
relevansi dua penanda serumbiomarker (apolipoprotein A1 dan CCL17) yang ditemukan pada penelitian sebelumnya terkait dengan
respon imun dan kelangsungan hidup keseluruhan (OS) akan dieksplorasi secara prospektif.
 Vaksin kanker multipeptida untuk aplikasi klinis

Gambar 21.3.

Asosiasi luasnya respon imun yang diinduksi oleh vaksin dengan kelangsungan hidup secara keseluruhan pada pasien
kanker sel ginjal yang menerima vaksin multi-peptida IMA901 (studi IMA901 fase II, populasi per protokol yang dapat
dievaluasi imun).

Vaksin kanker kolorektal IMA910

IMA910 adalah vaksin CRC baru yang terdiri dari sepuluh HLA kelas I dan tiga TUMAP kelas II HLA dengan sebagian besar peptida
dikonfirmasi untuk disajikan secara alami dan dibagi di antara jaringan CRC. Percobaan fase I / II dilakukan pada 92 pasien CRC
lanjut HLA-A * 02 + dengan penyakit stabil (SD) atau merespons (PR / CR) setelah 12 minggu terapi lini pertama berbasis oksaliplatin.
Setelah itu, kemoterapi lini pertama berbasis oxaliplatin dihentikan dan pasien menerima a

siklofosfamid dosis tunggal untuk mengurangi T regs diikuti dengan vaksinasi intradermal berulang dengan IMA910 ditambah GM-CSF
tanpa (kohort pertama; n = 66) atau dengan (kohort kedua; n = 26) secara topikal
imiquimod terapan, agonis reseptor Toll-like. IMA910 menimbulkan respon imun terhadap beberapa kelas I (pada 43% subjek) dan
TUMAP kelas II (65%). Serupa dengan uji coba vaksin IMA901 di RCC, CD8 + yang diinduksi vaksin serta tanggapan sel T CD4 +
terhadap beberapa TUMAP dikaitkan dengan peningkatan OS. Pasien yang menerima imiquimod lebih sering merupakan responden
multi-peptida kelas I ( p = 0,016) sebagaimana ditentukan dengan uji pewarnaan sitokin intraseluler (ICS) dan menunjukkan peningkatan
frekuensi sel-T ( p = 0,12) sebagaimana ditentukan oleh uji multimer HLA. Menariknya, dua populasi MDSC yang sama seperti yang
diamati pada pasien RCC secara negatif terkait dengan respon imun yang diinduksi vaksin dan OS, menyiratkan peran umum yang
potensial dari dua populasi MDSC ini. Pengembangan lebih lanjut dari vaksin ini direncanakan dalam pengaturan di mana standar
perawatan yang memodulasi MDSC (misalnya kemoterapi) diterapkan (Kuttruff et al., 2012).

Vaksin glioblastoma IMA950

IMA950 adalah vaksin glioblastoma baru yang terdiri dari sembilan HLA kelas I dan dua TUMAP HLA kelas II dengan mayoritas
peptida dipastikan disajikan secara alami dan dibagi di antara jaringan glioblastoma. Data dari tahap penemuan program ini telah
dipublikasikan (Dutoit et al., 2012). Sebuah studi fase I yang disponsori oleh Cancer Research UK baru-baru ini telah diselesaikan di
Inggris tetapi data akhir belum tersedia. Sebanyak 45 pasien glioblastoma yang baru didiagnosis dirawat. Tujuan utama dari studi
first-in-man ini adalah untuk menilai keamanan, tolerabilitas, dan imunogenisitas IMA950 plus GM-CSF ketika diberikan bersamaan
dengan kemoradioterapi standar diikuti dengan kemoterapi adjuvan dengan temozolomide.
 Vaksin kanker multipeptida untuk aplikasi klinis

tanggapan dalam dua kelompok ini.

Masa depan vaksin multi-epitope

Vaksin kanker telah berpindah melalui jalan yang panjang dan berliku. Vaksin pertama sebagian besar didasarkan pada jaringan tumor
autologus termasuk banyak antigen, meskipun sifat antigen ini tidak diketahui dan TAA di antara persiapan vaksin autologus sangat
diencerkan di antara antigen yang tidak terkait dengan tumor. Generasi vaksin berikutnya memasukkan antigen yang didefinisikan
secara molekuler, yaitu peptida dan antigen lengkap yang dikirim sebagai protein atau asam nukleat. Ini — melalui kemampuan untuk
mengukur respons imun spesifik terhadap vaksin yang ditentukan — membuka pintu bagi pengembangan vaksin kanker yang dipandu
oleh biomarker yang rasional. Namun, vaksin antigen tunggal tidak secara memadai memenuhi kebutuhan untuk respons yang luas
atau heterogenitas ekspresi antigen dalam tumor. Ketika pengetahuan tentang TAA meningkat, strategi vaksin saat ini bergerak menuju
formulasi multi-antigen. Bagian terakhir dari jalan pengembangan vaksin kanker peptida telah dijelaskan dalam bab ini. Ada bukti dari
beberapa uji coba sekarang bahwa semakin luas respon imun, semakin baik hasil klinisnya. Ini sangat mendukung vaksin multi-epitop.

Namun, apakah ini ujung jalan? Tentu tidak.

Munculnya modulasi pos pemeriksaan dengan antibodi terhadap CTLA-4 serta PD-1 dan PD-L1 telah membawa keberhasilan
spektakuler pada populasi pasien tertentu. Dihipotesiskan bahwa respon obyektif, terutama dengan blokade PD-1 / PD-L1, terjadi
terutama pada pasien dengan sel T yang sudah ada sebelumnya dalam jaringan tumor sejalan dengan cara kerja. Blokade pos
pemeriksaan dianggap "melepaskan rem" pada sel T yang sudah ada sebelumnya (Topalian et al., 2012). Disarankan bahwa pasien
yang tidak memiliki sel T yang sudah ada sebelumnya dapat memperoleh manfaat klinis dari blokade checkpoint jika mereka telah
mendapatkan vaksinasi sebelumnya untuk mendorong sel T spesifik tumor ke dalam tumor dan kemudian "melepaskan rem" pada sel
T yang diinduksi vaksin ini.

Berkenaan dengan pemilihan antigen tumor, sebagian besar strategi saat ini bergantung pada antigen yang dibagikan berkenaan
dengan ekspresi dan presentasi mereka oleh sebagian besar tumor yang dianalisis dan secara komersial cocok untuk pengembangan
pendekatan 'off-the-shelf', di mana satu vaksin (obat ) adalah 'cocok untuk semua', yaitu vaksin dikembangkan untuk seluruh populasi
pasien yang menderita penyakit kanker tertentu. Sangat tidak mungkin bahwa karsinogenesis hanya didorong oleh antigen yang banyak
digunakan bersama. Faktanya, analisis imunopeptidom mengungkapkan bahwa ada berbagai macam antigen lain yang diekspresikan
dalam populasi kecil atau bahkan individu tunggal dengan potensi terapeutik yang tinggi (Dutoit et al., 2012; Weinschenk et al., 2002).
Bahkan, seperti diketahui bahwa sel kanker berkembang oleh beberapa kejadian genetik dan evolusi klonal selanjutnya menghasilkan
terjadinya mutasi ganda pada genom, transkriptom, dan kemungkinan besar juga pada imunopeptidom. Potensi terapeutik dari vaksin
kanker yang ditujukan untuk melawan mutasi individu tersebut baru mulai dijelaskan baru-baru ini (Castle et al., 2012; Heemskerk et al.,
2013; Matsushita et al., 2012; Britten et al., 2013). Dengan munculnya spektrometri massa sensitivitas tinggi dan teknologi sekuensing
generasi mendatang yang terjangkau, hanya masalah waktu hingga era berikutnya dari pengembangan vaksin kanker dapat dimasuki:
penerapan vaksin kanker yang sepenuhnya dipersonalisasi secara molekuler pada manusia. Kami telah, bekerja sama erat dengan
mitra penelitian, baru-baru ini memulai upaya serupa pada pasien glioma (www.
 Vaksin kanker multipeptida untuk aplikasi klinis

Referensi
Banchereau J, Palucka AK, Dhodapkar M, Burkeholder S, Taquet N, dkk. ( 2001).
Respon imun dan klinis pada pasien dengan metastasis melanoma terhadap CD34 (+) vaksin sel dendritik yang diturunkan dari
progenitor. Res kanker. 61, 6451–6458 .

Britten CM, Janetzki S, van der Burg SH, Gouttefangeas C, Hoos A ( 2007). Menuju ke
harmonisasi pemantauan kekebalan dalam uji klinis: Quo vadis? Kanker Immunol. Immunother.
57, 285–288.

CM Britten, Singh-Jasuja H, Flamion B, Hoos A, Huber C, dkk. ( 2013). Regulasi

lanskap untuk imunoterapi kanker yang dipersonalisasi secara aktif. Nat Biotechnol. Doi:
10.1038 / nbt.2708.

Caron E, Charbonneau R, Huppe G, Brochu S, Perreault C ( 2005). Struktur dan

lokasi akun SIMP / STT3B karena jejaknya yang menonjol pada immunopeptidome MHC I. Int. Immunol. 17, 1583–1596.

Castle JC, Kreiter S, Diekmann J, Lower M, van de RN, dkk. ( 2012). Memanfaatkan
mutanom untuk vaksinasi tumor. Res kanker. 72, 1081–1091.

Celis E, Tsai V, Crimi C, DeMars R, Wentworth PA, dkk. ( 1994). Induksi anti tumor
limfosit T sitotoksik pada manusia normal menggunakan kultur primer dan epitop peptida sintetik. Proc. Natl. Acad. Sci.
Amerika Serikat 91, 2105–2109 .

Dutoit V, Herold-Mende C, Hilf N, Schoor O, Beckhove P, dkk. ( 2012). Memanfaatkan

glioblastoma peptidome untuk menemukan antigen terkait tumor baru untuk imunoterapi. Otak 135, 1042–1054.

Fay JW, Palucka AK, Paczesny S, Dhodapkar M, Johnston DA, dkk. ( 2006). Jangka panjang
hasil pada pasien dengan melanoma metastatik yang divaksinasi dengan melanoma peptida-pulsed CD34 (+) sel dendritik yang
diturunkan dari progenitor. Kanker Immunol. Immunother. 55, 1209–1218.

Galluzzi L, Senovilla L, Zitvogel L, Kroemer G ( 2012). Sekutu rahasianya: imunostimulasi

dengan obat antikanker. Nat. Rev. Drug Discov. 11, 215–233.

Gricks CS, Gribben JG ( 2003). Respon sel T sitotoksik terhadap imunoglobulin dalam sel B ganas dan normal: implikasi untuk
imunitas tumor dan autoimunitas. Curr. Pharm. Des. 9, 1889–1903.

Hadrup SR, Bakker AH, Shu CJ, Andersen RS, van VJ, dkk. ( 2009). Deteksi paralel
respon sel T antigen spesifik dengan pengkodean multidimensi multimer MHC. Nat. Metode 6, 520–526.

Heemskerk B, Kvistborg P, Schumacher TN ( 2013). Antigenome kanker. EMBO J 32,

194–203.

Hu X, Chakraborty NG, JR Sporn, Kurtzman SH, Ergin MT, Mukherji B ( 1996).

Peningkatan frekuensi prekursor limfosit T sitolitik pada pasien melanoma setelah imunisasi dengan antigen yang dimuat peptida
MAGE-1 yang menyajikan vaksin berbasis sel. Res kanker. 56, 2479–2483 .
 Vaksin kanker multipeptida untuk aplikasi klinis

Kantoff PW, Higano CS, Shore ND, Berger ER, Small EJ, dkk. ( 2010). Sipuleucel-T
imunoterapi untuk kanker prostat yang tahan kebiri. N. Engl. J. Med. 363, 411–422.

Kenter GG, Welters MJ, Valentijn AR, Lowik MJ, Berends-van der Meer DM, dkk.
(2009). Vaksinasi terhadap onkoprotein HPV-16 untuk neoplasia intraepitel vulva. N. Engl. J. Med. 361, 1838–1847.

Klug F, Miller M, Schmidt HH, Stevanovic S ( 2009). Karakterisasi ligan MHC untuk vaksinasi tumor berbasis peptida. Curr.
Pharm. Des. 15, 3221–3236 .

Kuttruff S, Weinschenk T, Schoor O, Lindner J, Kutscher S, dkk. ( 2012). Imun

tanggapan dan hubungan dengan hasil klinis pasien kanker kolorektal lanjut yang diobati dengan vaksin multi-peptida IMA910.
J. Clin. Oncol. 30 (suppl; abstr 2522).

Matsushita H, Vesely MD, Koboldt DC, Rickert CG, Uppaluri R, dkk. ( 2012). Kanker
Analisis exome mengungkapkan mekanisme imunediting kanker yang bergantung pada sel T. Alam 482,
400–404.

Mukherji B, Chakraborty NG, Yamasaki S, Okino T, Yamase H, dkk. ( 1995). Induksi

sel T sitolitik spesifik antigen in situ di melanoma manusia dengan imunisasi dengan antigen autologous berpulsa peptida sintetis
yang menyajikan sel. Proc. Natl. Acad. Sci. Amerika Serikat 92, 8078–
8082.

Nagorsen D, Marincola FM ( 2005). Menganalisis Respons Sel T. New York: Springer.

Ochsenbein AF, Sierro S, Odermatt B, Pericin M, Karrer U, dkk. ( 2001). Peran

lokalisasi tumor, sinyal kedua dan cross priming dalam induksi sel T sitotoksik. Alam
411, 1058–1064.

Rammensee HG, Bachmann J, Stevanovic S ( 1997). Ligan MHC dan Motif Peptida. Heidelberg, Jerman: Springer-Verlag.

Rammensee H, Bachmann J, Emmerich NP, Bachor OA, Stevanovic S ( 1999).

SYFPEITHI: database ligan MHC dan motif peptida. Imunogenetika 50, 213–219.

Rini BI, Eisen T, Stenzl A, Brugger W, Weinschenk T, dkk. ( 2011). IMA901 Multipeptida
Vaksin Randomized International Phase III Trial (IMPRINT): Sebuah studi acak terkontrol yang menyelidiki vaksin kanker
multipeptida IMA901 pada pasien yang menerima sunitinib sebagai terapi lini pertama untuk RCC lanjutan / metastatik. J. Clin.

Oncol. 29 Suppl, abstr TPS183.

Sampson JH, Heimberger AB, Archer GE, Aldape KD, Friedman AH, dkk. ( 2010).
Pelarian Imunologis Setelah Kelangsungan Hidup Bebas Perkembangan Yang Lama Dengan Vaksinasi Epidermal Growth Factor
Receptor Varian Peptida III pada Pasien Dengan Glioblastoma yang Baru Didiagnosis. J. Clin. Oncol. 28, 4722–4729 .

Schirle M, Keilholz W, Weber B, Gouttefangeas C, Dumrese T, dkk. ( 2000).

Identifikasi ligan MHC kelas I terkait tumor dengan pendekatan independen sel T baru. Eur. J. Immunol. 30, 2216–2225 .

Schuster SJ, Neelapu SS, Gause BL, Janik JE, Muggia FM, dkk. ( 2011). Vaksinasi dengan
Antigen yang diturunkan dari tumor spesifik pasien pada remisi pertama meningkatkan kelangsungan hidup bebas penyakit
 Vaksin kanker multipeptida untuk aplikasi klinis

limfoma folikuler. J. Clin. Oncol. 29, 2787–2794 .

Schwartzentruber DJ, Lawson DH, Richards JM, Conry RM, Miller DM, dkk. ( 2011).
Vaksin peptida Gp100 dan interleukin-2 pada pasien dengan melanoma lanjut. N. Engl. J.
Med. 364, 2119–2127 .

Singh-Jasuja H, Emmerich NP, Rammensee HG ( 2004). Pendekatan Tubingen:

identifikasi, seleksi, dan validasi peptida HLA terkait tumor untuk terapi kanker. Kanker Immunol. Immunother. 53, 187–195.

Slingluff CL Jr, Petroni GR, Chianese-Bullock KA, Smolkin ME, Hibbitts S, dkk.
(2007). Hasil imunologis dan klinis dari uji coba fase II secara acak dari dua vaksin multipeptida untuk melanoma dalam pengaturan
adjuvan. Clin. Res kanker. 13, 6386–6395 .

Speiser DE, Lienard D, Rufer N, Rubio-Godoy V, Rimoldi D, dkk. ( 2005). Cepat dan
respon sel T CD8 + manusia yang kuat terhadap vaksinasi dengan peptida, IFA, dan CpG oligodeoxynucleotide
7909. J. Clin. Menginvestasikan. 115, 739–746.

SL Topalian, Hodi FS, Brahmer JR, Gettinger SN, Smith DC dkk. ( 2012). Keamanan,
aktivitas, dan kekebalan berkorelasi dengan antibodi anti-PD-1 pada kanker. N Engl J Med. 366, 2443–54.

Vacchelli E, Martins I, Eggermont A, Fridman WH, Galon J, dkk. ( 2012). Jam tangan percobaan:
Vaksin peptida dalam terapi kanker. Onkoimunologi 1, 1557–1576.

van der Bruggen P, Traversari C, Chomez P, Lurquin C, De PE, dkk. ( 1991). Sebuah gen
pengkodean antigen yang dikenali oleh limfosit T sitolitik pada melanoma manusia. Ilmu
254, 1643–1647.

van der Bruggen P, Zhang Y, Chaux P, Stroobant V, Panichelli C, dkk. ( 2002). Tumor-
peptida antigenik bersama spesifik yang dikenali oleh sel T manusia. Immunol. Putaran. 188, 51–64.

van der Burg SH, Kalos M, Gouttefangeas C, Janetzki S, Ottensmeier C, dkk.

(2011). Harmonisasi uji biomarker imun untuk studi klinis. Sci. Terjemahan. Med. 3,
108ps44.

Walter S, Weinschenk T, Stenzl A, Zdrojowy R, Pluzanska A, dkk. ( 2012).

Respon imun multipeptida terhadap vaksin kanker IMA901 setelah siklofosfamid dosis tunggal berhubungan dengan kelangsungan hidup
pasien yang lebih lama. Nat. Med. 18, 1254–1261.

Weinschenk T, Gouttefangeas C, Schirle M, Obermayr F, Walter S, dkk. ( 2002).

Pendekatan genomik fungsional terintegrasi untuk desain vaksin antitumor pasien-individu. Res kanker. 62, 5818–5827 .

Yamada A, Sasada T, Noguchi M, Itoh K ( 2012). Vaksin peptida generasi berikutnya untuk kanker stadium lanjut. Cancer Sci. 104,
15–21

Zwaveling S, Ferreira Mota SC, Nouta J, Johnson M, Lipford GB, dkk. ( 2002).
Tumor human papillomavirus tipe 16 yang sudah mapan dibasmi secara efektif setelah vaksinasi dengan peptida panjang. J.
Immunol. 169, 350–358.