UNIVERSITAS HASANUDDIN
UNIVERSITAS HASANUDDIN
MAKASSAR
2024
LEMBAR PENGESAHAN
PRAKTIKUM II
PEMERIKSAAN BAKTERIOLOGIS PADA MAKANAN
GADO-GADO DI LABORATORIUMTERPADU KIMIA
BIOFISIK FAKULTAS KESEHATAN MASYARAKAT
UNIVERSITAS HASANUDDIN
DEPARTEMEN KESEHATAN LINGKUNGAN
FAKULTAS KESEHATAN MASYARAKAT
UNIVERSITAS HASANUDDIN
Mengetahui
Koordinator Asisten Asisten
Puji serta syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa, oleh
karena berkah dan hidayahnya sehingga penulis dapat menyelesaikan laporan
praktikum dengan judul “Pemeriksaan Bakteriologis Pada Makanan Gado - Gado
Pintu 2 Di Laboratorium Terpadu Kimia Biofisik Fakultas Kesehatan Masyarakat
Universitas Hasanuddin”. Penulis mengucapkan terima kasih kepada dosen mata
kuliah Praktikum Kesehatan Lingkungan serta kepada asisten yang telah
membimbing dan mengajar selama kegiatan praktikum dilaksanakan.
Penulis menyadari bahwa laporan ini masih memiliki banyak kekurangan.
Oleh karena itu penulis meminta maaf sebesar-besarnya jika terdapat kesalahan
di dalam laporan. Kritik dan saran membangun kiranya dapat disampaikan
kepada penulis sebagai masukan agar kedepannya bisa menjadi lebih baik lagi.
Penulis berharap laporan ini bisa bermanfaat bagi para pembaca dan utamanya
bagi penulis sendiri. Akhir kata penulis mengucapkan terima kasih.
Penulis
DAFTAR ISI
SAMPUL................................................................................................................1
LEMBAR PENGESAHAN.....................................................................................vi
KATA PENGANTAR............................................................................................vii
DAFTAR ISI........................................................................................................viii
DAFTAR GAMBAR..............................................................................................ix
DAFTAR TABEL..................................................................................................xii
BAB I PENDAHULUAN........................................................................................1
A. Latar Belakang............................................................................................1
B. Tujuan Percobaan.......................................................................................3
C. Prinsip Percobaan.......................................................................................3
BAB II TINJAUAN PUSTAKA.............................................................................5
A. Tinjauan Umum tentang Makanan..............................................................5
B. Tinjauan Umum tentang Bakteri Pada Makanan.........................................6
C. Tinjauan Umum tentang Food Borne Disease...........................................8
D. Tinjauan Umum tentang Standart Plate Count (SPC)...............................10
BAB III PROSEDUR KERJA..............................................................................13
A. Alat dan Bahan..........................................................................................13
B. Waktu dan Tempat Percobaan..................................................................15
C. Prosedur Kerja...........................................................................................16
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN.................................................................22
A. Hasil...........................................................................................................22
B. Pembahasan.............................................................................................23
BAB V PENUTUP................................................................................................26
A. Kesimpulan................................................................................................26
B. Saran.........................................................................................................26
DAFTAR PUSTAKA............................................................................................27
DAFTAR GAMBAR
Gambar 3. 1 Bulb.................................................................................................13
Gambar 3. 2 Cawan Petri.....................................................................................13
Gambar 3. 3 Colony Counter...............................................................................13
Gambar 3. 4 Gelas Beaker 100 ml.......................................................................13
Gambar 3. 5 Gelas ukur.......................................................................................13
Gambar 3. 6 Inkubator.........................................................................................13
Gambar 3. 7 Kantong Plastik Steril......................................................................13
Gambar 3. 8 Korek Gas.......................................................................................13
Gambar 3. 9 Labu Erlenmeyer.............................................................................13
Gambar 3. 10 Pembakar Bunsen.........................................................................13
Gambar 3. 11 Pipet Ukur......................................................................................13
Gambar 3. 12 Rak Tabung reaksi........................................................................13
Gambar 3. 13 Sendok Steril.................................................................................14
Gambar 3. 14 Stopwatch......................................................................................14
Gambar 3. 15 Tabung Steril.................................................................................14
Gambar 3. 16 Timbangan Analitik........................................................................14
Gambar 3. 17 Vorter Mixer...................................................................................14
Gambar 3. 18 Aquades........................................................................................14
Gambar 3. 19 Hand Sanitizer...............................................................................14
Gambar 3. 20 Handscoon....................................................................................14
Gambar 3. 21 Kertas Kopi....................................................................................14
Gambar 3. 22 Kapas............................................................................................14
Gambar 3. 23 Label..............................................................................................14
Gambar 3. 24 Masker...........................................................................................15
Gambar 3. 25 NaCl steril......................................................................................15
Gambar 3. 26 Plate Count Agar Steril..................................................................15
Gambar 3. 27 Pepton Steril..................................................................................15
Gambar 3. 28 Sampel Makanan..........................................................................15
Gambar 3. 29 Tisu Kering....................................................................................15
Gambar 3. 30 Alcohol pads..................................................................................15
Gambar 3. 31 Pengambilan sampel makanan oleh penjamah makanan............16
Gambar 3. 32 Sampel makanan dalam plastik steril dibawa ke laboratorium.....16
Gambar 3. 33 Disterilkan tangan terlebih dahulu menggunakan hand sanitizer..16
Gambar 3. 34 Disterilkan meja kerja menggunakan desinfektan.........................16
Gambar 3. 35 Dilumatkan sampel menggunakan tangan....................................17
Gambar 3. 36 Ditimbang 10 gram sampel makanan menggunakan timbangan
analitik...........................................................................................17
Gambar 3. 37 Dicampurkan 10 gr sampel makanan dengan 90 ml Pepton
steril, diaduk hingga tercampur.....................................................17
Gambar 3. 38 Disiapkan 4 tabung reaksi yang telah berisi NaCl 9 ml dan telah
dilabeli 10-1,10-2,,10-3,10-4...............................................................17
Gambar 3. 39 Difiksasi pipet ukur dan mulut tabung sebelum dan setelah
digunakan, khusus pipet ukur dibersihkan dahulu dengan
aquades setelah digunakan..........................................................18
Gambar 3. 40 Dimasukkan 1 ml sampel ke tabung reaksi pertama (10-1) yang
berisi 9 ml NaCl.............................................................................18
Gambar 3. 41 Dihomogenkan sampel pada tabung reaksi pertama (10-1)
Menggunakan vortex mixer selama 1 menit.................................18
Gambar 3. 42 Diambil sampel dari tabung pengenceran pertama (10-1)
sebanyak 1 ml menggunakan pipet ukur dan dimasukkan ke
tabung pengenceran kedua (10-2), lalu dihomogenkan dengan
vortex mixer selama 1 menit.........................................................18
Gambar 3. 43 Diambil 1 ml sampel dari tabung pengenceran kedua (10-2) dan
dimasukkan ke tabung pengenceran ketiga (10-3), lalu
dihomogenkan dengan vortex mixer selama 1 menit...................19
Gambar 3. 44 Diambil 1 ml sampel dari tabung pengenceran ketiga (10-3) dan
dimasukkan ke tabung pengenceran keempat (10-4), lalu
dihomogenkan dengan vortex mixer selama 1 menit...................19
Gambar 3. 45 Diambil 1 ml sampel dari tabung pengenceran ketiga (10-3) dan
dimasukkan ke dalam cawan petri yang telah dilabeli (10-3).
Dilakukan hal yang sama untuk sampel tabung pengencer dan
cawan petri empat (10-4)................................................................19
Gambar 3. 46 Diberi PCA pada kedua cawan petri tersebut, hingga menutupi
permukaan cawan petri.................................................................19
Gambar 3. 47 Cawan petri kemudian dihomogenkan dengan pola membentuk
angka 8 sebanyak 12 kali..............................................................20
Gambar 3. 48 Didiamkan masing – masing cawan petri selama 15 menit
hingga memadat............................................................................20
Gambar 3. 49 Dimasukkan cawan petri ke dalam inkubator selama 1 x 24 jam
pada suhu 34o C............................................................................20
Gambar 3. 50 Dikeluarkan cawan petri dari inkubator setelah 1 x 24 jam...........21
Gambar 3. 51 Diperiksa cawan petri menggunakan Colony counter...................21
Gambar 3. 52 Dinyalakan Colony Counter lalu diletakkan cawan petri diatas
lampu Colony Counter.................................................................21
Gambar 3. 53 Diamati kemudian ditandai koloni bakteri menggunakan pen
yang terhubung dengan Colony Counter, hasil perhitungan
bakteri setiap petri kemudian dicatat.............................................21
DAFTAR TABEL
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Manusia merupakan makhluk hidup yang memiliki kebutuhan pokok
yaitu mengkonsumsi makanan sebagai sumber energi yang ditubuhkan untuk
pertumbuhan serta mempertahankan aspek kelangsungan hidup di setiap
harinya. Makanan yang dikonsumsi hendaknya harus memiliki aspek – aspek
dan juda standar kesehatan yang telah ditetapkan dan terkait dengan
kesehatan dan kebersihan, dapat memenuhi asupan gizi, dan mudah
dilakukan penyerapan dan dicerna oleh tubuh. Hal ini yang kemudian akan
dapat mempengaruhi makanan dengan bagaimana cara pengolahan bahan
yang digunakan dalam proses pembuatan makanan (1).
Makanan dapat mengandung berbagai macam vitamin, mineral, nutrisi
serta zat lain yang dibutuhkan oleh tubuh. Oleh karena itu manusia
membutuhkan makan untuk memenuhi nutrisi serta energi untuk menjalani
aktivitasnya sebagai makhluk hidup. Karena sebagian besar energi dan nutrisi
didapatkan melalui konsumsi makanan yang dilakukan oleh manusia (2).
Makanan juga pada umumnya terdiri dari produk olahan yang pada
proses pengolahannya ada kemungkinan terdapat mikroorganisme.
Mikroorganisme merupakan suatu makhluk hidup yang memiliki ukuran
sangat kecil dengan dan akan berinteraksi dengan mikroorganisme lainnya
dengan tujuan akhir membentuk efek yang bervariasi bagi makanan. Contoh
mikroorganisme yang ada di dalam makanan biasanya adalah dari kelompok
bakteri dan juga fungi (3).
Menurut Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor
1096 Tahun 2011 Tentang Higiene Sanitasi Jasaboga menjelaskan mengenai
batas kandungan E. coli. Dikatakan bahwa batas kandungan E. coli pada
makanan yang diperiksa pada laboratorium adalah 0/gr. Oleh karena itu
makanan harus bersih dan terhindar dari mikroorganisme patogen yang dapat
menyebabkan berbagai dampak buruk untuk manusia. Dalam hal ini bakteri
dianggap sebagai sesuatu yang tidak diperkenankan ada pada makanan (4).
1
2
B. Tujuan Percobaan
Tujuan dari pemeriksaan bakteriologis pada makanan yaitu:
1. Untuk mengetahui keberadaan bakteri E. coli pada makanan Gado-Gado.
2. Untuk mengetahui jumlah bakteri E. coli pada makanan Gado-Gado.
C. Prinsip Percobaan
Prinsip pemeriksaan bakteriologis pada makanan yaitu:
1. Meja kerja harus disterilkan menggunakan alkohol dan tangan praktikan
menggunakan hand sanitizer.
2. Alat dan bahan yang digunakan pada percobaan harus disterilkan
sebelum digunakan.
3. Tabung reaksi difiksasi sebelum dan sesudah dimasukkan sampel untuk
menjaga agar tabung tetap steril.
4
4. Pipet ukur harus selalu dibersihkan menggunakan air steril dan difiksasi
sebelum dan sesudah digunakan.
5. Sampel dihomogenkan dengan menggunakan Vortex Mixer selama 1
menit.
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
5
6
yang timbul. Ada tiga jenis makanan tidak sehat yang perlu dihindari, yaitu
makanan berlemak dan asin, jajanan yang kurang sehat, dan makanan
dengan kandungan gula tinggi. Namun, banyak remaja lebih suka makanan
cepat saji, minuman ringan, dan makanan manis daripada sayur dan buah
yang memberikan nutrisi yang dibutuhkan tubuh. Sebanyak 70% remaja tidak
terlalu memperhatikan masalah kesehatan saat memilih makanan, tetapi
mereka lebih fokus pada pengelolaan berat badan (13)
Makanan jajanan merupakan bagian penting dalam kehidupan
masyarakat, terutama bagi anak-anak. Makanan jajanan mengandung 36%
energi, 29% protein, dan 52% zat besi. Namun, makanan jajanan juga bisa
berdampak negatif pada kesehatan jika terkontaminasi oleh bahan-bahan
biologis atau bahan kimia berbahaya (14).
Banyak penjaja makanan yang tidak menjaga kebersihan saat
menangani makanan, sehingga makanan jajanan bisa terkontaminasi oleh
mikroba. Selain itu, penjaja makanan jajanan sering memiliki pengetahuan
yang minim, sehingga mereka mungkin tidak menyadari bahaya bahan kimia
berbahaya yang bisa terdapat dalam makanan jajanan. Untuk itu pentingnya
memperhatikan adanya bahaya pada makanan (15).
Makanan bisa menjadi tempat berkembangbiaknya mikroba atau
kuman, terutama jika memiliki kadar air dan protein yang tinggi. Makanan
yang aman adalah makanan yang tidak tercemar, tidak mengandung
mikroorganisme atau bakteri berbahaya, dan telah diolah dengan cara yang
benar agar sifat dan nutrisinya tetap terjaga. Karena itu penting untuk selalu
memperhatikan kualitas makanan dari segi bakteriologi, kimia, dan fisik.
Faktor risiko keracunan makanan dan penyakit yang disebabkan oleh
makanan harus dihindari. Selain cara pengolahan makanan, tempat-tempat
seperti restoran dan warung juga penting untuk diperhatikan, karena
kebersihan dan kualitas makanan, penyajian, makanan yang dijual, dan
peralatan makanan yang digunakan harus memenuhi standar kesehatan (16).
B. Tinjauan Umum tentang Bakteri Pada Makanan
Bakteri merupakan kelompok organisme yang sangat kecil dan tidak
memiliki membran inti sel. Pada umumnya, bakteri memiliki dinding sel dan
tidak memiliki klorofil, yang merupakan elemen penting dalam fotosintesis.
Meskipun ukurannya kecil, bakteri memainkan peran penting dalam
7
FBD sendiri juga dapat didefinisikan sebagai suatu penyakit yang timbul yang
diakibatkan oleh karena adanya kontaminasi mikroba dan juga zat kimia yang
berbahaya. Adapun mikroorganisme yang paling dominan dalam
mengontaminasi makanan adalah bakteri dan juga fungi. FBD juga dapat
berkembang menjadi resistensi apabila pada saat tatalaksana dalam
penanganan penyakitnya lambat dan juga tidak konsisten (22).
Penyakit bawaan makanan adalah salah satu masalah kesehatan yang
berkaitan dengan masalah sanitasi, baik itu sanitasi terhadap lingkungan
maupun sanitasi terhadap diri sendiri. Makanan yang sudah terkontaminasi
oleh mikroorganisme apabila dikonsumsi akan menyebabkan gangguan serta
masalah kesehatan lanjutan. Namun pada realitanya penyakit bawaan
makanan ini kurang diperhatikan sanitasinya, sehingga penyakit ini masih
termasuk penyakit yang tergolong serius di seluruh dunia dan merupakan
penyakit yang selalu ada serta terjadi di sekitar manusia (23).
Fungi merupakan penyebab terjadinya kerusakan makanan serta
dalam perkembangbiakannya, fungi memiliki filamen yang dijadikan sebagai
ciri khas morfologi dari kapang untuk membedakan dengan khamir. Kapang
sendiri dapat menghasilkan toksin yang sifatnya membahayakan bagi tubuh
manusia karena toksin akan menghasilkan mitoksin. Mitoktoksin kemudian
akan menghasilkan metobolit sekunder dan akan menyebabkan efek buruk
dan toksis bagi manusia yang dapat disebut sebagai efek mitotoksik (24).
Salmonella, Escherichia coli, Shigella dan mikroba lainnya adalah
penyebab dari terjadinya foodborne disease. Dalam proses penularannya,
Salmonella mendapat transmisi dari daging mentah serta unggas dan suda
terjadi 40% kasus akibat mengkonsumsi produk olahan daging, telur, susu,
dan daging unggas yang tida melalui proses pengolahan. Penyakit ini memiliki
gejala umum yang dimana akan terkena penyakit diare, septikemia, serta
gastroentritis. Untuk itu diperlukan sebuah upaya untuk mengatasi kerusakan
dari bahan-bahan makanan dan upaya untuk menghindari kontaminasi bahan
makanan yang akan dihidangkan (25).
Foodborne disease merupakan masalah yang berkaitan dengan
higiene dan sanitasi makanan yang kompleks dan ini adalah sebuah masalah
kesehatan berulang yang sering terjadi dan kurangnya keseriusan dalam
menangani persoalan ini. Penjaman kemudian dapat peran penting dalam
10
deretan rantai koloni yang terlihat seperti garis tebal, mereka dihitung sebagai
satu koloni tunggal. Persyaratan ini dapat dipenuhi dengan melakukan
serangkaian pengenceran dan penanaman pada cawan, dimana untuk
penentuan jumlah mikroba dalam sampel, dilakukan perkalian antara jumlah
koloni dengan faktor pengenceran yang digunakan pada cawan tersebut (29).
Metode SPC atau yang dikenal juga dengan standar hitungan cawan
dapat digunakan untuk menghitung jumlah mikroba dalam air limbah. Metode
ini adalah salah satu metode yang paling umum digunakan dalam perhitungan
jumlah koloni bakteri, sebab koloni dapat terlihat secara langsung oleh mata
tanpa menggunakan mikroskop. Selain itu, digunakan media Nutrient Agar
(NA) dalam metode SPC untuk menghitung total bakteri. Penentuan jumlah
bakteri dengan metode ini bersifat empiris, karena setiap spesies bakteri
membentuk koloni yang berbeda saat tumbuh. Setiap bakteri dalam sampel
akan mengalami pertumbuhan pada media agar, dan setiap kelompok bakteri
akan membentuk satu koloni yang memiliki karakteristik khusus sehingga
dengan menghitung jumlah koloni yang terbentuk, kita dapat mengetahui
jumlah total bakteri yang ada (30).
BAB III
PROSEDUR KERJA
13
14
2. Bahan
Gambar 3.30
Alcohol pads
B. Waktu dan Tempat Percobaan
1. Pengambilan Sampel
a. Waktu : Selasa, 5 Maret 2024 Pukul 08.32 WITA
b. Tempat : Warung Gado – Gado Pintu 2 Unhas Tamalanrea
2. Pemeriksaan Sampel
a. Pemeriksaan Sampel
1) Waktu : Selasa, 5 Maret 2024 Pukul 09.00 WITA
2) Tempat : Laboratorium Kimia Biofisik Fakultas Kesehatan
Masyarakat Universitas Hasanuddin
b. Perhitungan Jumlah Kuman dan Bakteri Escherecia Coli
1) Waktu : Rabu, 6 Maret 2024 Pukul 13.00 WITA
3) Tempat : Laboratorium Kimia Biofisik Fakultas Kesehatan
Masyarakat Universitas Hasanuddin.
C. Prosedur Kerja
1. Pengambilan Sampel
16
A. Hasil
18
19
B. Pembahasan
Praktikum pemeriksaan hasil uji bakteriologis pada makanan
menggunakan sampel Gado – Gado yang dibeli di sekitar Pintu Dua Unhas
yang dilakukan oleh kelompok empat, percobaan dilaksanakan di
Laboratorium Kimia Biofisik Fakultas Kesehatan Masyarakat Universitas
Hasanuddin. Praktikum ini bertujuan Untuk mengetahui keberadaan bakteri E.
coli pada makanan Gado-Gado dan Untuk mengetahui jumlah bakteri E. coli
pada makanan Gado-Gado.Prinsip dalam pemeriksaan bakteriologis pada
makanan adalah tangan praktikan dan alat-alat yang digunakan harus steril,
serta pipet dan tabung reaksi harus selalu difiksasi dan disterilkan untuk
menghindari kontaminasi.
Pengambilan sampel dilakukan di Warung Gado – Gado sekitar Pintu
Dua pada Pukul 08.32 sampel selanjutnya dibawa ke laboratorium pada pukul
09.00 WITA lalu sampel dihancurkan secara manual dan ditimbang
menggunakan neraca analitik kemudian dan diambil sebanyak 10 gram,
dicampur dengan dengan larutan pepton sebanyak 90 ml. Pepton adalah
hidrolisis protein yang diekstrasi dari bahan pangan. Pepton merupakan salah
satu bahan yan digunakan pada proses pembacaan mikroba karena berfungsi
sebagai sumber nutrogen pada media pertumbuhan mikroba (31).
Setelah sampel dihomogenkan dengan pepton kemudian masukkan
sebanyak 10ml dalam larutan NaCl 0,9 %, dalam tabung reaksi dan proses ini
dinamakan proses pengenceran (32). Pengenceran dilakukan sebagai
langkah untuk mengurangi jumlah mikroba yang ada didalam cairan serta
memudahkan media pada saat perhitungan pengukuran nantinya.
Pengenceran dilakukan berulang pada tabung 10 -2 sampai tabung 10-4 secara
bertingkat dengan ketentuan harus disesuaikan dengan perkiraan jumlah
mikroba yang ada pada sampel (28).
Sampel yang telah diencerkan dihomogenkan dengan menggunakan
vortex mixer. Proses pencampuran larutan harus dilakukan dengan selalu
memfiksasi dan mensterilkan pipet ukur dan tabung reaksi sebelum
digunakan. Vortex Mixer merupakan sebuah alat untuk mencampur larutan
yang ada pada tabung reaksi dengan prinsip semakin cepat perputaran
motornya, semakin cepat juga percampuran yang terjadi pada tabung reaksi
(Umar).
20
PENUTUP
A. Kesimpulan
Berdasarkan hasil pemeriksaan bakteriologis pada makanan dengan
sampel Gado – Gado yang dibeli dari warung sekitar pintu 2 Unhas
Tamalanrea yang dilakukan oleh kelompok empat dan didapatkan hasil
bahwa:
1. Dalam makanan Gado – Gado terdapat kontaminasi bakteri E. coli.
2. Jumlah bakteri pada sampel Gado – Gado setelah dilakukan perhitungan
adalah 8,7 x 10-4 koloni/gram. Hasil ini menunjukan bahwa bakteri
tersebut melebihi Nilai Ambang Batas yang terdapat pada Peraturan
Menteri Kesehatan Republik Indonesia No. 1096/ Menkes/Per/VI/2011
Tentang Higiene Sanitasi Jasaboga yang dimana bahwa batas maksimum
bakteri pada makanan yaitu 0/gram.
B. Saran
Saran praktikan kepada pada hasil perhitungan bakteriologis pada
makanan adalah:
1. Pemerintah disarankan untuk memberikan pemahaman tentang
kesehatan dan kebersihan dari makanan kepada produsen maupun
konsumen serta melakukan pengawasan terhadap penjual – penjual
makanan.
2. Masyarakat harus selalu waspada dengan apa yang hendak dikonsumsi.
3. Institusi diharapkan untuk melakukan pemeriksaan dan pengawasan
terhadap kualitas makanan yang dijual di area institusi.
4. Asisten diharapkan untuk tetap sehat dan senantiasa memaknai
praktikum sehingga praktikum dapat berjalan dengan baik.
22
23
DAFTAR PUSTAKA
33. Cempaka L, Widyana MA, Astuti RM. Karakteristik Sensori Dan Analisis
Mikroba Tempe Segar Beraneka Rasa. J Ilmu Pangan dan Has Pertan.
2020;4(1):43–59.
34. Afrah NM, Djaja IM. Faktor Yang Memengaruhi Kontaminasi Bakteri
Escherichia Coli Pada Makanan Jajanan Di Sekolah Dasar Kecamatan Beji, Kota
Depok Tahun 2018. J Nas Kesehat Lingkung Glob [Internet]. 2020;1(2):101–8.
Available from: https://core.ac.uk/download/pdf/326577361.pdf
35. Misgiyarta M, Winarti C. Pengendalian Kontaminan Mikroba pada Sayuran Segar
dengan Formula Sanitizer dari Natrium Hipoklorit dan Asam Asetat. Teknotan.
2023;17(1):43.