LAPORAN PRAKTIKUM

KULTUR JARINGAN
PEMBUATAN MEDIUM

OLEH :

NAMA : SARI KOSA INTAN WIDURI

NIM : 08041182126006
KELOMPOK : V (LIMA)
ASISTEN : REZA FITRIANI

LABORATORIUM BIOTEKNOLOGI DAN GENETIKA

JURUSAN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS SRIWIJAYA
2024
 BAB 1
PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Teknik perbanyakan mikro yang dikatakan sebagai sebuah bentuk aplikasi
teknik kultur jaringan dan bertujuan untuk perbanyakan tanaman lebih terbukti
sesuai untuk perbanyakan tanaman. Untuk memanfaatkan teknik ini secara
optimal diperlukan penguasaan kondisi yang tepat untuk pertumbuhan dan
perkembangan secara in vitro. Salah satunya berupa pemakaian media kultur
dengan kandungan komponen-komponennya yang tepat dan mampu merangsang
perbanyakan protocorm like bodies (PLB) ataupun perbanyakan tunas. Teknik
kultur jaringan dapat menjadi metode alternatif untuk perbanyakan vegetative
tanaman dengan kelebihan memiliki tingkat perbanyakan yang sangat cepat dalam
waktu yang relative singkat. berkualitas tinggi, bebas penyakit pada tanaman yang
diperbanyak secara vegetatif (Yusdian et al., 2024).
Modifikasi teknik kultur jaringan dapat dilakukan dengan penambahan
persenyawaan aseptic komplek pada media yang dapat berupa buah atau sayuran
untuk dijadikan media kultur jaringan dengan syarat tidak mengandung zat
berbahaya apapun yang dapay menghambat pertumbuhan tanaman. Teknik ini
sangat membantu dalam usaha untuk mengeliminasi yang dikenal juga dengan
penyakit sistemik, karena pada teknik ini dilakukan metode memilih bagian-
bagian atau sel-sel yang tidak mengandung ucrose sistematik terutama virus dan
menumbuhkan sel-sel tersebut serta meregenerasikannya kembali menjadi
tanaman yang sempurna (Syahirah et al., 2019).
Jaringan tanaman atau kultur sel membutuhkan berbagai kombinasi nutrisi,
mineral, zat pertumbuhan tanaan, vitamin, dan gula sebagai sumber karbon.
Namun media kultur ini juga sesuai untuk pertumbuhan bakteri dan jamur secara
tepat. Mikroorganisme yang menyerang jaringan tanaan atau kultur sel-sel pada
umumnya tumbuh dengan cepat, sehingga akan menghabiskan nutrisi dan
menghasilkan racun dapat mempengaruhi pertumbuhan dan juga mematikan bagi
jaringan tanaman (Wulandari et al., 2021).

Universitas Sriwijaya
 Media tanam memberikan pengaruh yang besar terhadap keberhasilan kultur
jaringan. Media tanam diperlukan agar jaringan tanaman yang diisolasi dapat
tumbuh dan berkembang menjadi tanaman yang lengkap. Dalam media tanaman
kultur jaringan terdapat penambahan zat pengatur tumbuh. Zat pengarut tumbuh
berfungsi merangsang pertumbuhan tanaman, misalnya pertumbuhan akar, tunas ,
perkecambahan. Media MS (murashige and Skoog) dikatakan sebagai salah satu
media yang sering digunakan dalam perbanyakan secara in vitro karena
menghasilkan respon yang baik pada banyak tanaman. Media MS sering
digunakan untuk subkultur. Dalam formulasi media MS terdapat sumber hara
makr, mikro, sukrosa, vitamin dan bahan organik (Yusdian et al., 2024).
Penggunaan media dasar MS memiliki pengaruh yang baik untuk
pertumbuhan eksplan pada kultur jaringan beberapa varietas tanaman. Pada media
MS mengandung nitrat, ammonium, kalsium serta unsur makro dan mikro lain
yang dapat mempengaruhi pertumbuhan eksplan. Selain itu zat pengatur tumbuh
juga memberikan pengaruh pada pertumbuhan eksplan. Zat pengatur tumbuh
dikatakan sebagai suplemen yang ditambahkan kedalam medium kultur jaringan
untuk mengatur pertumbuhan dan perkembangan pada kultur jaringan dan kultur
organ tanaman. Dua golongan utama ZPT yang sering digunakan didalam kultur
in vitro tumbuhan berupa golongan auksin dan sitokinin (Tuwo et al., 2022).
Zat pengatur tumbuh golongan sitokinin yang sering digunakan dalam
kultur jaringan adalah BAP dan kinetin. Hormon BAP dikatakan sebagai sitokinin
yang sering digunakan karena paling efektif untuk merangsang pembentukan
tunas lebih stabil dan tahan terhadap oksidasi. Pertumbuhan pada kultur jaringan
terjadi setelah terbentuknya tunas dan eksplan perlu penambahan ZPT eksogen
untuk memauc pembentukan tanaman. Pertumbuhan dan pembentukan organ
tanaman, menyesuaikan dari interaksi antara hormone endogen dan eksogen.
Keseimbangan ZPT eksogen dan endogen dengan konsentrasi yang sesuai dapat
menunjang terjadinya pembelahan sel (Syahirah et al., 2019).

1.2. Tujuan Praktikum

Praktikum ini bertujuan untuk meningkatkan pemahaman bagaiana
mengembangkan protokol untuk membuat medium MS yang efisien dan aman.

Universitas Sriwijaya
 BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Kultur Jaringan

Kultur jaringan dikatakan sebagai suatu metode untuk mengisolasi bagian
dari tanaan seperti protoplasma, sel, jaringan, organ serta menumbuhkannya
dalam kondisi aseptic sehingga bagian-bagian tersebut dapat memperbanyak diri
dan beregenerasi menjadi tanaman utuh Kembali. Teknik kultur jaringan
dikatakan salah satu cara untuk mendapatkan bahan tanam yang bebas pathogen
karena menghasilkan bibit dala julah yang lebih banyak dalam waktu yang
relative singkat, bebas penyakit, tidak tergantung pada iklim dan cuaca,
menghasilkan tanaman yang sehat, mempertahankan sifat baik induk, tidak
membutuhkan lahan yang luas untuk pembibitan, sedikit tenaga kerja, dan dapat
memperbanyak tanaman tertentu yang sulit jika diperbanyak secara konvensial
(Tuhuteru, 2022).
Komposisi dari media yang digunakan salah satu ucrose keberhasilan
dalam penggunaan metode kultur jaringan dikarenakan pada media kultur jaringan
menyediakan tidak hanya ucros hara makro dan mikro yang dibutuhkan tanaman
tetapi karbohidrat yang umumnya berupa sukrosa untuk menggantikan karbon
yang biasanya didapat dari atmosfer melalui fotosintesis. Untuk memperoleh hasil
yang lebih baik pada media dapat ditambahkan vitamin, asam amino, dan juga zat
pengatur tumbuh (Tuwo et al., 2022).

2.2. Tahapan Kultur Jaringan

2.2.1. Media
Media dikatakan sebagai ucros penentuan dalam perbanyakan dengan
kultur jaringan. Komposisi media yang digunakan tergantung dengan jenis
tanaman yang akan diperbanyak. Media yang digunakan biasanya terdiri dari
garam mineral, vitamin, dan hormon serta bahan tabahan seperti agar, dan gula.
Zat pengatur tumbuh yang ditambahkan bervariasi, baik jenisnya maupun
jumlahnya, tergantung dengan tujuan dari kultur jaringan yang dilakukan. Media
yang sudah jadi ditempatkan pada tabung reaksi atau botol kaca. Media yang

Universitas Sriwijaya
digunakan juga harus distrerilkan dengan cara memanaskannya dengan autoklaf
(Ziraluo, 2021).
2.2.2. Inisiasi
Inisiasi dikatakan sebagai pengabilan eksplan dari bagian tanaman yang
akan dikulturkan. Perkembangan dari penerapan teknik jaringan kemungkinan
penggunaan kultur sel tanaman untuk memproduksi metabolit sekunder tanaman
berkhasiat obat. Ada beberapa tipe jaringan yang digunakan sebagai eksplan
dalam pengerjaan kultur jaringan. Pertama berupa jaringan muda yang belum
mengalami deferensiasi dan masih aktif embelah sehingga memiliki kemampuan
regenerasi yang tinggi. Jaringan tipe pertama ini ditemukan pada tunas ucros,
tunas aksiler, bagian tepi daun, ujung akar, maupun ucrose batang. Tipe jaringan
kedua berupa jaringan parenkima yang dimana jaringan penyusun tanaman muda
yang sudah mengalami diferensiasi dan menjalankan fungsinya (Anggraeni et al.,
2022).

2.2.3. Sterilisasi
Strerilisasi dikatakan sebagai kegiatan dalam kultur jaringan harus
dilakukan ditempat yang steril, seperti lainar flow dan menggunakan alat-alat
yang juga steril. Sterilisasi juga dilakukan terhadap peralatan, menggunakan
etanol yang disemprotkan secara merata pada peralatan yang digunakan. Teknisi
yang melakukan kultur jaringan juga harus steril (Tuwo et al., 2022).

2.2.4. Multiplikasi
Multiplikasi pada kultur jaringan salah satu kegiatan memperbanyak calon
tanaman dengan menanam eksplan pada media. Kegiatan ini dilakukan di laminar
air flow untuk menghindari adanya kontainasi yang menyebabkan gagalnya
pertumbuhan eksplan. Tabung reaksi telah ditanami eksplan diletakan pada rak
dan ditempatkan di tempat yang steril dengan suhu kamar (Fathurrahman, 2023).

2.2.5. Pengakaran
Pengakaran dikatakan sebagai fase diana eksplan akan menunjukan adanya
pertumbuhan akar yang menandai bahwa proses kultur jaringan yang dilakukan
mulai berjalan dengan baik. Pengamatan dilakukan setiap hari untuk melihat
pertumbuhan dan perkembangan akar serta untuk melihat adanya kontaminasi

Universitas Sriwijaya
oleh bakteri ataupun jamur. Eksplan yang terkontaminasi menunjukan gejala
seperti berwarna putih atau biru yang disebabkan oleh jamur atau busuk yang
disebabkan oleh bakteri karena kontaminasi (Ziraluo, 2021).
BAB 3
METODE PRAKTIKUM

3.1. Waktu dan Tempat

Praktikum Fitokimia ini dilaksanakan pada hari Rabu, 24 Januari 2024.
Pukul 08.00 sampai 10.00 WIB. Bertempat di Laboratorium Bioteknologi dan
Genetika, Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Sriwijaya, Indralaya.

3.2. Alat dan Bahan

Alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah aluunium foil, batang
pengaduk, kertas saring, rotary evaporator, selang kecil dan tabung erlenmeyer
besar. Sedangkan bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah pelarut
methanol dan sampel tumbuhan.

3.3. Cara Kerja

Adapun cara kerja pada praktikum kali ini adalah persiapan alat dan bahan
kemudian serbuk simplisia daun yang akan digunakan ditimbang sebanyak 200
gram dan diekstrak dengan maserasi menggunakan pelarut methanol sebanyak 1
liter selama 2x24 jam. Proses ekstraksi dimulai dengan simplisia yang sudah
dihitung lalu masukkan kedalam Erlenmeyer besar, kemudian tambahkan pelarut
methanol sebanyak 1 liter, setelah itu tutup erlenmeyer menggunakan alumunium
foil dan diamkan ekstrak selama 2 hari. Setelah 2 hari dilanjutkan dengan proses
penyaringan, filtrat yang didapat ditampung dalam wadah sedangkan residunya
dilakukan maserasi kembali. Filtrat daun yang telah didapatkan sebelumnya
kemudian diuapkan dengan evaporator. Suhu, tekanan dan kecepatan evaporator
diatur sesuai dengan pelarut yang digunakan. Proses evaporasi ditunggu hingga
pelarut dan methanol terpisah dengan zat aktif yang terdapat pada daun sampel.
Ekstrak kental sampel daun yang telah didapat dimasukkan kedalam gelas kaca

Universitas Sriwijaya
dan disebut rendemen ekstrak, rendemen ekstrak daun yang didapat dihitung
menggunakan rumus rendemen.

BAB 4
HASIL PRAKTIKUM

4.1. Hasil
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan didapatkan hasil pengamatan sebagai
berikut:

Universitas Sriwijaya
4.2. Pembahasan
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan pada pembuatan medium
media yang digunakan medium MS (Murashige and Skoog) dan medium tanpa
penambahan MS. Media MS terdiri dari unsru hara makro, unsur hara mikro,
vitamin, nutrisi serta zat pengatur tumbuh (ZPT). Medium MS sering digunakan
karena medium ini termasuk media yang sangat luas pemakaianya serta
mengandung unsur hara makro dan mikro yang dapat digunakan untuk berbagai
spesies tanaman, media tersebut lebih komplek dan mengandung hampir semua
unsur yang dibutuhkan untuk tanaman. Menurut Setiawan et al. (2020), media MS
memiliki kandungan nitrat, kalium dan amoium yang tinggi yang dibutuhkan
untuk pertumbuhan tanaman.
Medium tanpa penambahan medium MS hanya menggunakan agar sebagai
pemadat dan juga gula. Gula atau sukrosa dalam media kultur berfungsi sebagai
sumber energi, karena umumnya bagian tanaan atau eksplan yang dikulturkan
tidak autotrof dan mempunyai laju fotosintesis sangat rendah. Penggunaan
medium tanpa penambahan medium MS digunakan dalam perkecambahan biji
pada tumbuhan. Menurut Kaurow (2023), medium tanpa tanpa medium MS dapat
dibuat dengan tingkat kepadatan yang berbeda tergantung pada kebutuhan
tanaman.
Komposisi media MS (Murashige and Skoog) tanam kultur jaringan terdiri
dari sejumlah unsur yang diperlukan untuk pertumbuhan bahan tanam terdapat
unsur hara makro. Menurut Ziraluo (2021), unsur hara makro dikatakan sebagai
unsur hara esensial yang dibutuhkan dalam jumlah banyak oleh tanaman berupa
nitrogen, phosphor, kalium, kalsium, magnesium, dan sulfur. Terdapat unsur hara
mikro, yang dibutuhkan dalam julah yang sedikit oleh tanaman. Baik unsur hara
makro dan unsur hara mikro keduanya diberikan dalam bentuk garam inorganik.
Selain itu terdapat zat pengatur tubuh, yang umumnya terdapat dua golongan ZPT
yang digunakan berupa golongan auksin dan sitokinin. Terdapat vitamin yang

Universitas Sriwijaya
dibutuhkan sebagai katalisator dalam berbagai proses metabolism. Serta terdapat
gula, pemadat media berupa agar.
Kelebihan dari medium MS dalam kultur jaringan tanaman diantaranya
dapat berupa komposisi nutrisi yang lengkap, medium yang kaya akan nutrisi
esensial bagi pertumbuhan dan perkembangan tanaman. Komposisi yang lengkap
membantu menyediakan semua elemen penting yang dibutuhkan oleh tanaman
untuk tubuh dengan baik. Selain itu medium MS juga bersifat fleksibilitas, atau
dapat disesuaikan dengan kebutuhan spesifik tanaman yang akan ditanaman.
Stabilitas pH juga dikatakan sebagai salah satu kelebihan pada medium MS.
Menurut Istiqomah (2019), medium MS biasanya memiliki pH yang stabil yang
dapat membantu dalam mengoptimalkan penyerapan nutrisi oleh tanaman.
Reproduksi tanamana juga secara efisien dalam mendukung pembentukan kalus,
organogenesis dan embryogenesis somatic memungkinkan reproduksi tanaman
secara efisien.
Medium murashige and skoog (MS) dikatakan sebagai salah satu medium
kultur jaringan yang sangat efektif dalam budidaya tanaman in vitro terdapat
beberapa kekurangan yang medium MS diantaranya harga yang terpaut mahal,
bahan-bahan yang digunakan untuk medium MS termasuk garam dan vitamin
yang kaya dapat membuatnya relative mahal dibandingkan dengan beberapa
media alternatif. Kompleksitas formulasi juga termasuk kekurangan dalam
medium ini, kompleksitas formulasi medium MS membuatnya kurang praktis atau
lingkungan yang tidak memiliki peralatan yang memadai. Menurut Setiawan et al.
(2020), pembentukan ineral pesipitat dapat membentuk presipitat yang sulit larut,
terutama jika air yang digunakan untuk merencanakan mediu memiliki kandungan
mineral.
Kegagalan pada teknik kultur jaringan disebabkan oleh adanya
kontaminan pada eksplan dan medium kultur. Kontaminasi dikatakan sebagai
faktor dominan yang mempengaruhi keberhasilan dalam teknik kultur jaringan
terutama pada eksplan. Menurut Harahap (2023), kontaminasi dikatakan sebagai
gangguan yang terjadi pada kultur jaringan berupa mikroorganisme seperti jamur,
bakteri bahkan virus. Untuk pencegahan terjadinya gangguan dalam kultur

Universitas Sriwijaya
jaringan maka dilakukan sterilisasi yang tepat dan sesuai pada eksplan yang
digunakan.
Keberhasilan kultur jaringan tanaman dipengaruhi oleh beberapa faktor
diantaranya sterilisasi, pemilihan bahan eksplan, faktor lingkungan seperti pH,
cahaya dan temperature serta kandungan zat pengatur tumbuh (ZPT) dalam
medium kultur. Menurut Kaurow (2023), zat pengatur tumbuh pada tanaman
dikatakan sebagai senyawa organik bukan hara, yang dalam jumlah sedikit dapat
mendukung, menghambat dan dapat mengubah proses fisiologi tumbuhan.
BAB 5
KESIMPULAN

5.1. Kesimpulan
Berdasarkan hasil praktikum yang telah dilaksanakan, didapatkan
beberapa kesimpulan sebagai berikut :
1. Proses pembuatan medium, media yang digunakan medium MS
(Murashige and Skoog) dan medium tanpa penambahan MS.
2. Medium MS sering digunakan karena mengandung unsur hara makro,
lebih komplek dan mengandung hampir semua unsur yang dibutuhkan
untuk tanaman.
3. Keberhasilan kultur jaringan tanaman dipengaruhi oleh beberapa faktor
diantaranya sterilisasi, pemilihan bahan eksplan, faktor lingkungan seperti
pH, cahaya dan temperature serta kandungan zat pengatur tumbuh (ZPT)
4. Penggunaan medium tanpa penambahan medium MS digunakan dalam
perkecambahan biji pada tumbuhan.
5. Kegagalan pada teknik kultur jaringan disebabkan oleh adanya
kontaminan pada eksplan dan medium kultur.

Universitas Sriwijaya
 DAFTAR PUSTAKA

Anggraeni, D., Ismaini, L., Surya, M. I., Rahmi, H., dan Saputro, N. W. (2022).
Inisiasi Kalus Daun Talinum Triangulare (Jacq.) Willd pada Beberapa
Kombinasi Konsentrasi Zat Pengatur Tumbuh 2, 4-Dichlorophenoxyatic
Acid Dan Benzyl Adenine. Agrikultura. Vol 33(3): 276-288.

Fathurrahman, F. (2023). Multiplikasi Eksplan Mahkota Nanas (Ananas Comosus

L. Merr.) Varietas Suska Kualu Riau pada Perlakuan Bap dan
Naa. Dinamika Pertanian. Vol 39(1): 1-10.

Harahap, F., Bangun, E. F. B., Suriani, C., Edi, S., Ningsih, A. P., dan Nusyirwan,
N. (2023). Variasi Waktu dan Sterilisasi Untuk Anggrek Cattelya Sp.
Sebelum Penanaman In-Vitro. BEST Journal (Biology Education, Sains
And Technology). Vol 6(2): 492-498.

Istiqhomah, S., Mukaromah, AS, dan Rusmadi, R. (2019). Pengaruh Kepadatan

Medium MS0 Terhadap Perkecambahan Biji Jagung (Zea Mays L., Var.”
Lokal”) Secara In Vitro. Al-Hayat: Jurnal Biologi dan Biologi Terapan.
Vol 2 (2): 68-75.

Kaurow, T. J., Mandang, J., dan Mamarimbing, R. (2023). Pertumbuhan In Vitro

Tiga Varietas Krisan pada Variasi Media Murashige dan Skoog
(MS). Agri-Sosioekonomi. Vol 19(1).

Setiawati, T., Zahra, A., Budiono, R., dan Nurzaman, M. (2018). Perbanyakan
Tanaman Kentang In Vitro (Solanum Tuberosum [L.] Cv. Granola) dengan
Penambahan Meta-Topolin pada Media Modifikasi MS (Murashige dan
Skoog). Jurnal Metamorfosa. Vol 5 (1): 17-22.

Tuhuteru, S., Hehanussa, M. L., dan Raharjo, S. H. (2022). Pertumbuhan dan

Perkembangan Anggrek Dendrobium Anosmum pada Media Kultur In
Vitro dengan Beberapa Konsentrasi Air Kelapa. Agrologia. vol 1(1):
288770.

Universitas Sriwijaya
Tuwo, M., Tambaru, E., dan Marianty, N. (2022). Respon Pertumbuhan Biji Jeruk
Keprok Citrus Reticulata Blanco pada Beberapa Teknik Sterilisasi. Jurnal
Ilmu Alam Dan Lingkungan. Vol 13(2).

Wulandari, S., Nisa, Y. S., Taryono, T., Indarti, S., dan Sayekti, R. S. (2021).
Sterilisasi Peralatan dan Media Kultur Jaringan. Agrotechnology
Innovation (Agrinova). Vol 4(2): 16-19.

Yusdian, Y., Minangsih, D. M., dan Febrianty, S. (2024). Karakteristik

Pertumbuhan Subkultur Kentang (Solanum Tuberosum L.) Varietas
Granola dengan Metode Kultur Jaringan Akibat Perlakuan Zat Pengatur
Tumbuh Bap (Benzyl Amino Purine). Agro Tatanen| Jurnal Ilmiah
Pertanian. Vol 6(1): 13-20.

Ziraluo, Y. P. B. (2021). Metode Perbanyakan Tanaman Ubi Jalar Ungu (Ipomea

Batatas Poiret) dengan Teknik Kultur Jaringan Atau Stek Planlet. Jurnal
Inovasi Penelitian. Vol 2(3): 1037-1046.

Universitas Sriwijaya
 LAMPIRAN

(Sumber: Dokumentasi pribadi, 2023).

Universitas Sriwijaya
PLAGIARISME

Universitas Sriwijaya