Latiffah Febrina - Nindita Lutfiana

Tujuan
Menentukan level dan aktivitas
GPT/GOT dalam sampel serum darah
dengan menggunakan metode biokimia.
Dasar Teori

Organ penghasil dan fungsinya

SGPT/SGOT
Mekanisme perubahan aktivitas GPT/GOT
Nilai normal
Penyakit terkait
Metode penentuan aktivitas
PERSAMAAN REAKSI
Alat & Bahan
Alat Bahan
Tabung Reaksi Na2HPO4 anhidrat
Labu takar KH2PO4 anhidrat
Pipet ukur DL-alanine
Pro pipet -ketoglutaric acid
pH meter Na. pyruvate
Termometer NaOH
Penangas air Dinitrofenilhidrazin
Spektrofotometer HCl Pekat
EDTA
Aquadest
Cara Kerja
Pembuatan Dapar Fosfat pH 7,4
Menimbang 11,3 gr Na2HPO4 anhidrat
dengan 2,7 gr KH2PO4 anhidrat

Melarutkan dalam air hingga volume

900 ml

Mengukur pH dengan pH-meter sampai

menunjukkan angka 7,4

Menambahkan air hingga volume 1000 ml

Cara Kerja
Pembuatan Larutan Substrat
Melarutkan 8,9 gr DL alanine dengan larutan
NaOH 1 N secukupnya hingga pH 7,4 (NaOH
90 ml)

Menambahkan 0,146 gr asam -ketoglutarat

dengan penambahan NaOH 1 N sampai larut
dengan mempertahankan pH

Menambahkan dapar fosfat 7,4 hingga

volume 500 ml
Cara Kerja
Pembuatan Larutan Stock Pyruvate
Melarutkan 220 mg Na. Pyruvate ke dalam
dapar fosfat hingga volume 100 ml

Pembuatan Larutan Standar Pyruvate

Memipet 1 ml larutan stock pyruvate dengan
4 ml dapar fosfat
Cara Kerja
Pembuatan Larutan NaOH 0,4 N
Melarutkan 16 gr NaOH ke dalam air hingga
volume 1 liter

Pembuatan Larutan DNFH

Melarutkan 19,8 mg DNFH dalam 10 ml HCL
pekat.

Mengencerkan dengan Aquadest hingga
volume 100 ml.
Cara Kerja
1. Metode GPT Dasar
Larutan Sampel
Memanaskan 0,5 ml substrat dalam tabung di atas
penengas air pada suhu 37oC selama 3 menit

Menambahkan 0,1 ml serum dan menginkubasi

selama 60 menit

Menambahkan 0,5 ml DNFH lalu kocok homogen

dan biarkan selama 20 menit

Menambahkan 5 ml NaOH 0,4 N, menghomogenkan

dan diamkan 10 menit

Replikasi 3x
Cara Kerja
1. Metode GPT Dasar
Larutan Kontrol
Mencampur 0,5 ml substrat dalam tabung dengan 0,1
ml serum

Menambahkan 0,5 ml DNFH lalu kocok homogen

Membiarkan selama 20 menit

Menambahkan 5 ml NaOH 0,4 N, menghomogenkan

dan diamkan 10 menit

Replikasi 3x
Cara Kerja
1. Metode GPT Dasar
Larutan Blanko
Mencampur 0,5 ml substrat dalam tabung dengan 0,1
ml aquadest

Menambahkan 0,5 ml DNFH lalu kocok homogen

Membiarkan selama 20 menit

Menambahkan 5 ml NaOH 0,4 N, menghomogenkan

dan diamkan 10 menit

Replikasi 3x
Cara Kerja
1. Metode GPT Dasar
Larutan Standar
Mencampur 0,1 ml larutan standar pyruvate dalam
tabung dengan 0,4 ml substrat

Menambahkan 0,1 ml aquadest

Menambahkan 0,5 ml DNFH lalu kocok homogen

dan biarkan selama 20 menit

Menambahkan 5 ml NaOH 0,4 N, menghomogenkan

dan diamkan 10 menit

Replikasi 3x
Cara Kerja
Pengukuran Kadar
Mengukur absorbansi keempat larutan pada
panjang gelombang 510 nm (max 510nm).
Cara Kerja
2. Metode GPT (KIT)
suhu ruang (25-30oC)
Mencampur 0,2 ml serum dalam tabung dengan 1,0
ml reagensia dan mendiamkan selama 1 menit

Membaca absorbansi awal (AW1) sekaligus

menyalakan stopwatch pada saat pengukuran

Mengulangi pembacaan absorbansi tepat pada

menit ke-1 (AW2), ke-2 (AW3) dan ke-3 (AW4)

Menentukan rata-rata perbuhan absorbansi per

menit

Replikasi 3x
Cara Kerja
2. Metode GPT (KIT)
suhu ruang (37oC)
Mencampur 0,1 ml serum dalam tabung dengan 1,0
ml reagensia dan mendiamkan selama 1 menit

Membaca absorbansi awal (AW1) sekaligus

menyalakan stopwatch pada saat pengukuran

Mengulangi pembacaan absorbansi tepat pada

menit ke-1 (AW2), ke-2 (AW3) dan ke-3 (AW4)

Menentukan rata-rata perbuhan absorbansi per

menit

Replikasi 3x
Cara Kerja
Pengukuran Kadar
Menggunakan aquadest sebagai blanko

Mengukur absorbansi ketiga larutan pada
panjang gelombang 340 nm (max 340nm)
Hasil Percobaan
Metode GPT Reagen Lab
Std.
Laruta Substr Seru Aquades DNF NaO
Pyruvat Abs.
n at m t H H
e
Sampel 0,5
0,5 ml 0,1 ml - - 5 ml
1 ml
Sampel 0,5
0,5 ml 0,1 ml - - 5 ml
2 ml
Sampel 0,5
0,5 ml 0,1 ml - - 5 ml
3 ml
Kontrol 0,5
0,5 ml 0,1 ml - - 5 ml
1 ml
Kontrol 0,5
0,5 ml 0,1 ml - - 5 ml
Hasil Percobaan
Perhitungan Aktivitas GPT
1. Reagen Lab
T K x 0,4 n mol pyruvate
SB
T K x 0,4 x 1 x 1000 = T K x 67 n mol
SB 60 0,1 SB

T = serapan Sampel
K = serapan Kontrol
S = serapan Standar pyruvate
B = serapan Blanko
Hasil Percobaan
Hasil Percobaan
Metode GPT Reagen Lab
Abs 0 Abs 1 Abs 2 Abs 3
Larutan Serum Reagen
(AW1) (AW2) (AW3) (AW4)
Sampel
0,2 ml 1,0 ml
A1
Sampel
0,2ml 1,0 ml
A2
Sampel
0,2 ml 1,0 ml
A3
Sampel
0,1 ml 1,0 ml
B1
Sampel
0,1 ml 1,0 ml
B2
Hasil Percobaan
Perhitungan Aktivitas GPT
2. Reagen KIT
Suhu ruang (25-30oC)
Rata (dA) = AW1 + AW2 + AW3 + AW4
4
Kadar GPT = dA x 952

Suhu 37oC
Rata (dA) = AW1 + AW2 + AW3 + AW4
4
Kadar GPT = dA x 1745
Wassalamual
aikum SEKIAN
Wr.
Wb.