JOURNAL READING

Oligosakarida dalam ASI Menghambat Infeksi

Rotavirus pada Manusia dalam Sel MA104

Meika Amsi Munte, S.Ked (G1A218104)

Pembimbing: dr. Ifo Faujiah S, M. Ked (Ped), Sp.A
Abstrak
Latar belakang: Kesimpulan:
 Oligosakarida dalam ASI berperan sebagai reseptor  Susu oligosakarida mengurangi infektivitas
umpan yang dapat larut dan mencegah adhesi patogen rotavirus manusia dalam sel MA104, terutama
pada usus bayi. melalui efek pada virus.
 Oligosakarida susu mengurangi infektivitas strain  Meskipun bayi yang diberi ASI secara langsung
rotavirus babi; Namun, efeknya pada rotavirus manusia dilindungi, penambahan oligosakarida spesifik
kurang dimengerti. untuk susu formula bayi dapat memberikan
manfaat ini untuk bayi yang diberi susu formula

Tujuan: menentukan efek oligosakarida susu

spesifik dan berlimpah pada infektivitas 2 strain
rotavirus manusia yang dominan secara global. Metode: Empat susu oligosakarida — 2 # -
fucosyllactose (2 # FL), 3 # -sialilaktosa (3 # SL), 6 # -
sialilaktosa (6 # SL), dan galacto-oligosakarida — diuji
Hasil:
untuk pengaruhnya terhadap infektifitas bakteri.
 dibandingkan dengan infeksi tanpa glisans,
human rotavirus G1P [8] dan G2P [4] melalui uji fokus
semua oligosakarida secara substansial
fluoresen pada sel epitel ginjal monyet hijau Afrika (sel
mengurangi infektivitas kedua jenis virus rota
MA104). Oligosakarida ditambahkan pada titik waktu
manusia secara in vitro
yang berbeda dalam tes infektivitas. Infeksi tanpa
 Untuk semua oligosakarida pengurangan
adanya oligosakarida berperan sebagai kontrol.
infektivitas dimediasi oleh efek pada virus dan
bukan pada sel.

Kata Kunci: oligosakarida susu manusia, reseptor umpan, rotavirus, infeksi, 2 # -

fucosyllactose, sialoglycans
Pendahuluan Oligosakarida susu manusia (HMO) adalah kelompok
yang kompleks secara struktural, glikans tak
terkonjugasi yang ditemukan dalam ASI.

Rata-rata, ASI manusia mengandung 5-15 g oligosakarida

/ L, menjadikan HMO komponen padat ketiga yang paling
banyak dari ASI setelah lipid dan laktosa.

Profil oligosakarida dalam ASI beragam, dengan 200 struktur

berbeda diidentifikasi sampai saat ini.
Pertama kali dideskripsikan sebagai substrat prebiotik untuk
mikrobiota usus bayi, HMO sekarang diakui memainkan banyak
peran bermanfaat dalam neonatus yang sedang berkembang.

HMO memodulasi imunitas neonatal dengan mengubah respon

sel epitel dan imun inang dalam usus bayi dan bertindak sebagai
reseptor pemikat yang larut untuk memblokir perlekatan berbagai
mikroba patogen ke reseptor permukaan sel.
 Penelitian in vitro menunjukkan bahwa HMO
01 mencegah pengikatan dan infeksi sel oleh
sejumlah patogen diare seperti Escherichia coli,
Vibrio cholerae, dan Salmonella fyris

02 Penyakit diare adalah penyebab utama

kematian kedua di dunia pada anak-anak <5
tahun.

Di antara agen penyebab diare pada

03 kelompok usia ini, rotavirus adalah
penyebab utama gastroenteritis dehidrasi
parah dan bertanggung jawab atas>
215.000 kematian setiap tahunnya.

Vaksin terhadap rotavirus dilisensikan untuk

04 digunakan pada tahun 2006 dan telah efektif dalam
mengurangi kejadian penyakit rotavirus parah di
negara maju.6 Namun, kemanjuran vaksin rotavirus
jauh lebih rendah di negara-negara berkembang, di
mana sebagian besar kasus gastroenteritis rotavirus
parah terjadi
 Studi epidemiologis: manfaat perlindungan dari
menyusui terhadap gastroenteritis rotavirus
05 parah, dengan anak-anak yang tidak disusui
menunjukkan peningkatan risiko 2x lipat dari
diare yang disebabkan oleh rotavirus.

06 Tingkat antigenemia rotavirus lebih rendah

pada bayi yang disusui daripada bayi yang
tidak disusui.

Beberapa komponen susu telah terbukti

07 menghasilkan perlindungan terhadap infeksi
rotavirus.
Antibodi ASI terhadap rotavirus berkorelasi
dengan perlindungan terhadap infeksi pada
neonatus, dan anti-rotavirus IgA dari ASI
manusia memiliki efek menetralkan pada
infektivitas rotavirus secara in vitro.

Dalam sebuah kohort pasangan ibu-bayi di Meksiko,

08 kadar lactadherin protein globule lemak yang lebih tinggi
dikaitkan dengan perlindungan terhadap infeksi rotavirus
simtomatik.Peran oligosakarida susu dalam perlindungan
dari infeksi rotavirus manusia kurang dipahami dengan
baik.
 Bukti langsung untuk pengikatan rotavirus ke
HMO ditunjukkan melalui studi array glycan.
01 Namun, efek ini tidak diamati ketika strain
rotavirus manusia diuji.

02 Dalam penelitian ini, kami menguji efek

oligosakarida susu spesifik dan berlimpah
pada infektivitas 2 strain rotavirus manusia
yang dominan secara global dalam sistem
infektivitas in vitro.
 METODE
Sel dan virus

Infeksi rotavirus dilakukan pada sel epitel ginjal monyet hijau

Afrika (sel MA104), model mapan untuk studi rotavirus in vitro.

Dua strain rotavirus manusia, Wa dan DS1, masing-

masing mewakili genotipe dominan global G1P [8]
dan G2P [4], diuji.

Kemurnian tinggi (> 95%) oligosakarida 3 # SL dan 6 # SL

(keduanya dari IsoSep), 2 # FL, dan galacto-
oligosaccharides [(Vivinal GOS) yang terakhir 2 dari
FrieslandCampina DOMO] diuji untuk efeknya terhadap
infektivitas rotavirus.

Oligosakarida (konsentrasi 2,5 dan 5,0 mg / mL) dilarutkan

dalam DMEM bebas serum dan disaring dengan melewatkan
larutan melalui filter 0,22 mm. DMEM bebas serum tanpa
oligosakarida yang difilter melalui filter 0,22 mm digunakan
sebagai kontrol dalam setiap percobaan.
Tes Infektifitas
Efek oligosakarida susu pada infektivitas rotavirus dinilai melalui uji fokus
fluoresen standar pada sel MA104.14,18 Pengenceran virus G1P [8] dan
G2P [4] yang menghasilkan, 100-200 unit pembentuk fokus / sumur diuji.
GAMBAR 1 Skema kondisi percobaan. Panah hitam dan abu-abu
menunjukkan ada dan tidak adanya oligosakarida 2 # fucosyllactose,
galacto-oligosaccharides, 3 # sialyllactose, dan 6 # sialyllactose di berbagai
titik.
Tes Infektifitas

Oligosakarida pertama kali ditambahkan selama inokulasi virus dan

selama infeksi untuk menentukan efek pada infektivitas rotavirus
(Gambar 1, kondisi 1). Modifikasi protokol ini kemudian digunakan
untuk menilai secara spesifik mode aktivitas oligosakarida dan efek
waktu penambahan oligosakarida pada infektivitas virus (Gambar 1,
kondisi 2-6 dan Gambar Tambahan 1).18-20 Dalam semua percobaan,
infektivitas dengan tidak adanya oligosakarida berfungsi sebagai
kontrol. Metode terperinci untuk pengujian infektivitas disediakan
dalam metode Tambahan.
 Analisis Data
Setiap kondisi percobaan diuji Untuk setiap kondisi,
minimum3 kali dengan replikasi persentase infektivitas di
teknis untuk setiap virus dan hadapan setiap oligosakarida
konsentrasi oligosakarida dibandingkan dengan
dimasukkan dalam setiap persentase infektivitas tanpa
pengujian. adanya oligosakarida.

Semua analisis statistik

Untuk setiap percobaan, titer virus
yang diukur dengan tidak adanya
oligosakarida dianggap 100%
Online
infektivitas, dan perubahan titer
virus di hadapan oligosakarida
dinyatakan sebagai persentase
infektivitas dibandingkan dengan
tanpa perawatan oligosakarida.
dilakukan dengan menggunakan
ANOVA dengan uji post hoc
Dunnett pada GraphPad Prism
versi 6.0 untuk Windows
Doctor
(Perangkat Lunak GraphPad).
Nilai P yang disesuaikan dengan
multiplisitas ditentukan dan nilai P <0,01
dianggap signifikan secara statistik.
 Hasil
seperti infeksi saluran kemih
dan infeksi saluran pernapasan
atas, menjadi penyebab utama
dengan tingkat setinggi 81%,
Walaupun etiologi sebenarnya dari CU mungkin
tidak dapat diidentifikasi atau jelas dalam banyak
kasus, jika ada kecurigaan klinis dari penyebab
yang mendasarinya, seperti infeksi atau alergi
makanan, tes terbatas yang dipandu oleh
sejarah yang menyeluruh dan pemeriksaan fisik
mungkin diperlukan

infeksi virus dan racun

makanan (keracunan
scombroid). kondisi autoimun, seperti
gangguan tiroid (hipotiroidisme
lebih daripada hipertiroidisme),
DM tipe I, SLE dan RA.

zat tambahan makanan dan infeksi

sama seperti yang biasa (Masing- NSAID
masing 11% -13%).
 Infectivity, % of
no oligosaccharide control

Virus Concentration, mg/mL 3#SL 6#SL 3#SL + 6#SL

G1P[8] 2.5 73 6 12* 75 6 7* 68 6 13*

5.0 60 6 9* 63 6 7* 65 6 14*

G2P[4] 2.5 54 6 2*,# 66 6 5*,# 32 6 6*

5.0 53 6 4*,# 60 6 12*,# 27 6 4*

Nilai rata-rata adalah 6 SD, n = 3. Infektivitas dengan tidak adanya oligosakarida dianggap
100% (G1P [8]: 100% 6 8%, G2P [4]: 100% 6 16%). Data diekspresikan relatif terhadap kontrol
no-oligosaccharide. * Berbeda dari kontrol, P, 0,01; # berbeda dari 3 # SL + 6 # SL, P, 0,01.
MA104, sel epitel ginjal monyet hijau Afrika; 3 # SL, 3 # -sialyllactose; 6 # SL, 6 # -sialyllactose.
GAMBAR 2 Susu oligosakarida mengurangi infektivitas strain
rotavirus manusia dalam sel MA104. Efek oligosakarida susu (2 #
FL, GOS, 3 # SL, dan 6 # SL) pada infektivitas 2 strain rotavirus
manusia yang relevan secara klinis G1P [8] (A) dan G2P [4] (B) diuji
(lihat Gambar 1, kondisi 1 untuk pengaturan eksperimental). Data
berarti 6 SD, dan $ 3 percobaan independen. Infektivitas dengan tidak
adanya oligosakarida dianggap 100% (G1P [8]: 100% 6 8%, G2P [4]:
100% 6 16%) (garis putus-putus hitam). Data diekspresikan relatif
terhadap kontrol no-oligosaccharide. * Berbeda dari kontrol, P, 0,01.
GOS, galacto-oligosaccharide; MA104, sel epitel ginjal monyet hijau
Afrika; 2 # FL, 2 # -fucosyllactose; 3 # SL, 3 # -sialyllactose; 6 # SL,
6 # -sialyllactose. mengurangi infektivitas G1P [8] dari 3 # SL dan 6 #
SL bila digunakan secara terpisah, kombinasi dari glycans ini lebih
kuat dalam mengurangi infektivitas G2P [4] daripada reduksi yang
diamati dengan glycans sialylated individu (Tabel 1). Campuran SL
juga secara signifikan mengurangi infektivitas G2P [4] dibandingkan
dengan GOS atau 2 # FL (data tidak ditampilkan). Hasil ini
menunjukkan bahwa 3 # SL dan 6 # SL bisa lebih efektif dalam
menghambat infeksi rotavirus manusia dalam kombinasi, tetapi efek
ini tergantung pada genotipe rotavirus.
GAMBAR 3 Susu oligosakarida mengurangi infektivitas
strain rotavirus manusia melalui efek pada virus dan bukan sel
MA104. Preinkubasi virus selama 2 jam dengan adanya
oligosakarida susu (2 # FL, GOS, 3 # SL, dan 6 # SL)
mengurangi infektivitas strain rotavirus manusia G1P [8] (A)
dan G2P [4] (B) (lihat Gambar 1, kondisi 2 untuk pengaturan
eksperimental), sedangkan preinkubasi sel dengan adanya
oligosakarida susu selama 24 jam tidak mengurangi
infektivitas kedua galur [G1P [8] (C) dan G2P [4] (D); lihat
Gambar 1, kondisi 3 untuk pengaturan eksperimental]. Data
berarti 6 SD, dan $ 3 percobaan independen. Infektivitas tanpa
adanya oligosakarida dianggap 100% (G1P [8]: 100% 6 10%,
G2P [4]: 100% 6 9%).
GAMBAR 4 Penambahan oligosakarida setelah penyerapan
virus mengurangi infektivitas strain rotavirus manusia dalam
sel MA104. Penambahan oligosakarida (2 # FL, GOS, 3 # SL,
dan 6 # SL) setelah penyerapan G1P [8] (A) dan G2P [4] (B)
selama 20 menit mengurangi infektivitas kedua strain (lihat
Gambar 1, kondisi 5 untuk pengaturan eksperimental). Data
berarti 6 SD, dan $ 3 percobaan. Infektivitas tanpa adanya
oligosakarida dianggap 100% (G1P [8]: 100% 6 10%, G2P [4]:
100% 6 18%) (garis putus-putus hitam). Data diekspresikan
relatif terhadap kontrol no-oligosaccharide. * Berbeda dari
kontrol, P, 0,01. GOS, galacto-oligosaccharide; MA104, sel
epitel ginjal monyet hijau Afrika; 2 # FL, 2 # - fucosyllactose;
3 # SL, 3 # -sialyllactose; 6 # SL, 6 # -sialyllactose.
Ucapan Terima Kasih
You can simply impress your audience and add a unique zing and appeal to your
Presentations. Get a modern PowerPoint Presentation that is beautifully designed.
I hope and I believe that this Template will your Time, Money and Reputation.
Tanggung jawab penulis adalah sebagai berikut — DRL:
merancang dan melakukan percobaan You can simplydan menganalisis
impress your data;
audience and add a unique zing and
MKE
You candan SR:
simply mengawasi
impress your proyek,
appealmerancang eksperimen
to your Presentations. Easy to dan
You can simply impress your
audience and add adata;
menganalisis unique zing
VTand dan RS:change
memberikan
colors, photosreagen
and Text. Idan saran
audience and add a unique zing and
appeal to your Presentations. Easy to hope and I believe that this Template
konseptual untuk appeal to your Presentations. Easy to
change colors, photos andmerancang
Text. I percobaan; DRLand
will your Time, Money dan SR: menulis
Reputation. change colors, photos and Text. I
hope and
draf awalI believe that thisdan
naskah; Template
semua penulis: memberikan ulasan kritis hope and I believe that this Template
will your Tim, Money and Reputation.
dan persetujuan akhir dari naskah. will your Time, Money and Reputation.
You can simply impress your You can simply impress your
audience and add a unique zing and audience and add a unique zing and
appeal to your Presentations. Easy to appeal to your Presentations. Easy to
change colors, photos and Text. I change colors, photos and Text. I
hope and I believe that this Template hope and I believe that this Template
will your Time, Money and Reputation. will your Time, Money and Reputation.
You can simply impress your You can simply impress your
audience and add a unique zing and audience and add a unique zing and
appeal to your Presentations. Easy to appeal to your Presentations. Easy to
change colors, photos and Text. change colors, photos and Text.
 DAFTAR PUSTAKA

1. Bode L. Human milk oligosaccharides: every baby needs a sugar mama. Glycobiology 2012; 22: 1147–62.
2. Ninonuevo MR, Park Y, Yin H, Zhang J, Ward RE, BH Clowers, German JB, Freeman SL, Killeen K, Grimm R, et al. A strategy for
notating the human milk glycome. J Agric Food Chem 2006; 54: 7471–80.
3. Coppa GV, Zampini L, Galeazzi T, Facinelli B, Ferrante L, Capretti R, Orazio G. Human milk oligosaccharides inhibit the adhesion to
Caco-2 cells of diarrheal pathogens: Escherichia coli, Vibrio cholerae, and Salmonella fyris. Pediatr Res 2006; 59: 377–82.
4. Morrow AL, Ruiz-Palacios GM, Altaye M, Jiang X, Guerrero ML, Meinzen-Derr JK, Farkas T, Chaturvedi P, Pickering LK, Newburg DS.
Human milk oligosaccharides are associated with protection against diarrhea in breast-fed infants. J Pediatr 2004; 145: 297-303.
5. Tate JE, Burton AH, Boschi-Pinto C, Parashar UD; WHO-Coordinated Global Rotavirus Surveillance Network. Global, regional, and
national estimates of rotavirus mortality in children <5 years of age, 2000–2013. Clin Infect Dis 2016; 62 (Suppl 2): ​S96-105.
6. Jiang V, Jiang B, Tate J, Parashar UD, Patel MM. Performance of crime vaccines in developed and developing countries. Hum Vaccin
2010; 6: 532–42.
7. Plenge-Boig nig, Soto-Ramirez N, Karmaus W, Petersen G, Davis S, Forster J. Breastfeeding protects against acute gastroenteritis due
to rotavirus in infants. Eur J Pediatr 2010; 169: 1471–6.
8. Kurugo Z, Geylani S, Karaca Y, Umay F, Erensoy S, Vardar F, Bak M, Yaprak I, Ozkinay F, Ozkinay C. Rotavirus gastroenteritis among
children under five years of age in Izmir, Turkey. Turk J Pediatr 2003; 45: 290–4.
9. Das S, Sahoo GC, Das P, Singh UK, Jaiswal AK, Singh P, Kumar R, Kumar R. Evaluating the impact of breastfeeding on rotavirus
antigenemia and disease severity in Indian children. PLoS One 2016; 11: e0146243.
10. Jayashree S, Bhan MK, Kumar R, Bhandari N, Sazawal S. Protection against neonatal rotavirus infection by breast milk antibodies
and trypsin inhibitors. J Med Virol 1988; 26: 333–8.
11. Asensi MT, Martinez-Costa C, Buesa J. Anti-rotavirus antibodies in human milk: quantification and neutralizing activity. J Pediatric
Gastroenterologist Nutr 2006; 42: 560-7.
12. Newburg DS, Peterson JA, Ruiz-Palacios GM, Matson DO, Morrow AL, Shults J, Guerrero ML, Chaturvedi P, Newburg SO, Scallan
CD, et al. Role of human-milk lactadherin in protection against symptomatic rotavirus infection. Lancet 1998; 351: 1160-4.
13. Yu Y, Lasanajak Y, Song X, Hu L, Ramani S, Mickum ML, Ashline DJ, Prasad BV, Estes MK, Reinhold VN, et al. Human milk contains
novel glycans that are potential decoy receptors for neonatal rotaviruses. Mol Cell Proteomics 2014; 13: 2944–60.
14. Hester SN, Chen X, Li M, Monaco MH, Comstock SS, Kuhlenschmidt TB, Kuhlenschmidt MS, Donovan SM. Human milk
oligosaccharides inhibit rotavirus infectivity in vitro and in acutely infected piglets. Br J Nutr 2013; 110: 1233–42.
15. Li M, Monaco MH, Wang M, Comstock SS, Kuhlenschmidt TB, Fahey GC Jr., Miller MJ, Kuhlenschmidt MS, Donovan SM. Human milk
oligosaccharides shorten rotavirus-induced diarrhea and modulate piglet mucosal immunity and colonic microbiota. ISME J 2014; 8:
1609-20.
16. Ciarlet M, Estes MK, Barone C, Ramig RF, Conner ME. Analysis of host range restriction determinants in the rabbit model: comparison
of immunologic and heterologous rotavirus infections. J Virol 1998; 72: 2341–51.
17. van Leeuwen SS, BJ Kuipers, Dijkhuizen L, Kamerling JP. Comparative structural characterization of 7 commercial galacto-oligosaccharide
(GOS) products. Carbohydr Res 2016; 425: 48–58.
18. Ciarlet M, Crawford SE, Cheng E, Blutt SE, Rice DA, Bergelson JM, Estes MK. VLA-2 (alpha2beta1) integrin promotes rotavirus entry into cells
but is not necessary for rotavirus attachment. J Virol 2002; 76: 1109-23.
19. Gutie´rrez M, Isa P, Sanchez-San Martin C, Prez-Vargas J, Espinosa R, Arias CF, Lpez S. Different rotavirus strains enter MA104 cells through
different endocytic pathways: the role of clathrin-mediated endocytosis. J Virol 2010; 84: 9161-9.
20. Zrate S, Cuadras MA, Espinosa R, Romero P, Jurez KO, Camacho-Nuez M, Arias CF, Lpez S. Interaction of rotaviruses with Hsc70 during cell
entry is mediated by VP5. J Virol 2003; 77: 7254–60.
21. Angeloni S, Ridet JL, Kusy N, Gao H, Crevoisier F, Guinchard S, Kochhar S, Sigrist H, Sprenger N. Glycoprofiling with micro-arrays of
glycoconjugates and lectins. Glycobiology 2005; 15: 31–41.
22. Ruiz-Palacios GM, Cervantes LE, Ramos P, Chavez-Munguia B, Newburg DS. Campylobacter jejuni binds intestinal H (O) antigen (Fuc alpha 1,
2 Gal beta 1, 4GlcNAc), and fucosyloligosaccharides of human milk inhibit its binding and infection. J Biol Chem 2003; 278: 14112-20.
23. Shoaf K, Mulvey GL, Armstrong GD, Hutkins RW. Prebiotic gal-actooligosaccharides reduce adherence of enteropathogenic Escherichia coli to
tissue culture cells. Infect Immun 2006; 74: 6920–8.
24. Schroten H, Hanisch FG, Hansman GS. Human norovirus interactions with GOS - blood group antigens and human milk oligosaccharides. J
Virol 2016; 90: 5855-9.
25. Weichert S, Koromyslova A, Singh BK, Hansman S, Jennewein S, Schroten H, Hansman GS. Structural basis for norovirus inhibition by human
milk oligosaccharides. J Virol 2016; 90: 4843–8.
26. Marriage BJ, Buck RH, Goehring KC, Oliver JS, Williams JA. Infants fed a lower calorie formula with 2 # FL show growth and 2 # FL uptake like
breast-fed infants. J Pediatr Gastroenterol Nutr 2015; 61: 649–58.
27. Hu L, Crawford SE, Czako R, Cortes-Penfield NW, Smith DF, Le Pendu J, Estes MK, Prasad BV. Cell attachment VP8 protein * of a human
rotavirus specifically interacts with A-type histo-blood group antigens. Nature 2012; 485: 256-9.
28. Huang P, Xia M, Tan M, Zhong W, Wei C, Wang L, Morrow A, Jiang X. Spike protein VP8 * of human rotavirus recognizes histo-blood group
antigens in a type-specific manner. J Virol 2012; 86: 4833–43.
29. Holscher HD, Davis SR, Tappenden KA. Human milk oligosaccharides influence the maturation of human intestinal Caco-2Bbe and HT-29 cell
lines. J Nutr 2014; 144: 586–91.
30. Kuntz S, Kunz C, Rudloff S. Oligosaccharides from human milk induce growth arrest via G2 / M by influencing growth-related cell cycle genes in
intestinal epithelial cells. Br J Nutr 2009; 101: 1306-15.
31. Kuntz S, Rudloff S, Kunz C. Oligosaccharides from human milk influencing growth-related characteristics of intestinally transformed and non-
transformed intestinal cells. Br J Nutr 2008; 99: 462–71.
32. Hester SN, Donovan SM. Individual and combined effects of nucleosides and human milk oligosaccharides on proliferation, apoptosis and necrosis
in a human fetal intestinal cell line. Food Nutrition Sci 2012; 3: 1567–76.
33. Saxena K, Blutt SE, Ettayebi K, Zeng XL, Broughman JR, Crawford SE, Karandikar UC, Sastri NP, Conner ME, Opekun AR, et al. Human intestinal
enteroids: a new model for the study of human rotavirus infection, host restriction, and pathophysiology. J Virol 2015; 90: 43–56.
 Thank You
Insert the Sub Title of Your Presentation