Pendekatan Pewarnaan Gram dan Hasil

Kultur di Laboratorium Mikrobiologi

SAID TRYANDA SYAFITRA

RISKA YULIANA SARI

PPDS PULMONOLOGI DAN KEDOKTERAN RESPIRASI

FK UNRI
2021
Latar Belakang
• Kualitas spesimen klinis dapat mempengaruhi nilai
pewarnaan Gram yang dilakukan.
• Pilihan spesimen yang dikirim untuk pewarnaan Gram
dan kultur bergantung pada tempat infeksi dan
kemungkinan patogen.
• Pengumpulan spesimen yang baik harus menghindari
kontaminasi dengan bakteri kolonisasi di sekitarnya,
memberikan volume bahan yang memadai untuk
pewarnaan Gram dan kultur, dikumpulkan sebelum
memulai terapi antimikroba dan diberi label dengan
hati-hati dengan informasi klinis yang relevan, dan
diangkut ke laboratorium pada waktu yang tepat.
• Artikel ini akan membahas interpretasi pewarnaan Gram
dan hasil kultur serta masalah yang berkaitan dengan
pengelolaan infeksi.
Metode Pewarnaan Gram
Pewarnaan Gram  untuk
membedakan berbagai jenis bakteri
berdasarkan sifat biokimia dinding
selnya.
Metode ini dikembangkan oleh
ilmuwan Denmark Hans Christian
Gram (1853 hingga 1938)  untuk
membedakan dua bakteri penyebab
pneumonia yang berbeda
(Streptococcus pneumoniae dan
Klebsiella pneumoniae).
Pewarnaan Gram pada spesimen
klinis (termasuk spesimen cairan
tubuh yang steril dan tidak steril,
spesimen biopsi, dan spesimen
kultur positif) berguna untuk
memandu manajemen klinis empiris
untuk infeksi bakteri sambil
menunggu data kultur definitif dan /
atau data molekuler. Pewarnaan
Gram juga memungkinkan
visualisasi ragi.
Prosedur Pewarnaan Gram
Hasil Pewarnaan Gram

• Hadian dkk. (2018)  Terdiri dari gram positif dan gram negatif  Bakteri gram positif:
mempertahankan kristal violet dan tampak ungu dengan pewarnaan Gram; Bakteri gram negatif:
tidak mempertahankan kristal violet tetapi menggunakan pewarnaan safranin sehingga tampak merah
muda.
• Beberapa organisme adalah variabel gram (yaitu, mereka mungkin bernoda negatif atau positif).
• Organisme gram-variabel umum yang diamati dalam spesimen klinis termasuk jenis Gardnerella
vaginalis dan Mobiluncus. Organisme ini berhubungan dengan vaginosis bakterial dan secara teknis
diklasifikasikan sebagai "gram positif."
• Selain itu, beberapa organisme gram negatif seperti Acinetobacter spesies cenderung
mempertahankan kristal violet dan terkadang muncul variabel gram.
• Beberapa spesies bakteri tidak dapat divisualisasikan dengan pewarnaan Gram karena mereka tidak
memiliki dinding sel (mis., spesies Mikoplasma) atau karena struktur dinding selnya tidak
mempertahankan reagen pewarnaan Gram (misalnya, jenis Klamidia dan Mikobakteri; yang terakhir
mungkin memiliki tampilan gram positif "manik-manik").
Hasil Pewarnaan Gram

• Beberapa spesies nonbakteri juga diwarnai ungu dengan pewarnaan Gram (seperti jenis Candida).
• Bakteri yang diwarnai Gram dijelaskan menurut morfologi masing-masing bakteri (misalnya, "cocci“
berbentuk bola, "basil" berbentuk batang, "coccobacilli", dan bakteri melengkung), susunannya
(misalnya, "rantai" atau "kelompok") , dan ukurannya.
• Morfologi masing-masing bakteri terkadang tidak khas jika pasien mengalaminya menerima
antibiotik sebelum pengambilan spesimen. Misalnya, beberapa bakteri gram negatif dapat menjadi
lebih panjang dan lebih layu.
• Untuk spesimen klinis yang dikumpulkan dari tempat steril, semi-kuantifikasi jumlah organisme yang
terdapat dalam pewarnaan Gram mungkin berguna. Hasil dapat dilaporkan sebagai bakteri dalam
jumlah kecil, sedang, atau besar yang ada atau menggunakan sistem penilaian 1+ hingga 3+.
Keberadaan bakteri apapun dalam spesimen ini harus dianggap signifikan. Ketiadaan bakteri juga
penting untuk dilaporkan. Pendekatan ini kurang berguna jika spesimen klinis dikumpulkan dari
tempat yang tidak steril, karena bakteri komensal mungkin tidak mudah dibedakan dari bakteri
patogen.
Hasil Pewarnaan Gram

1. ORGANISME GRAM
POSITIF

Kokus gram positif Basilus gram positif (batang)

Anggur- biasanya menunjukkan Besar - biasanya mengindikasikan

Staphylococcus, meskipun pewarnaan
Gram tidak dapat membedakan
Staphylococcus aureus dari spesies
stafilokokus
lainnya.
Rantai - Kokus Gram-positif dalam
rantai biasanya menunjukkan
Streptococcus atau Enterococcus.
anaerobik Clostridium atau aerobik
Medium – berbentuk panjang jenis
Basil atau Lactobacillus. Basilus ini Corynebacterium; Cutibacterium dan
berbentuk "gerbong kotak" dengan
Listeria.
ujung persegi dan sisi sejajar.

Kecil - Batang gram positif kecil dan

palisading termasuk Corynebacterium,
Cutibacterium, Listeria, Gardnerella
( ariabel gram), dan Rhodococcus. Ini
mungkin pleomorfik atau "berbentuk
tongkat" .
Percabangan - Basilus gram positif
yang bercabang biasanya
menunjukkan baik itu aerobik
Nocardia atau anaerobik Actinomyces.
Hasil Pewarnaan Gram
2. ORGANISME GRAM
NEGATIF
Kokus gram negatif -
biasanya menunjukkan
Neisseria meningitidis
atau Neisseria
gonorrhoeae.
Sedang sampai
Sedang sampai
panjang, tipis —
panjang, bulat padat
Menengah-ke-panjang,
—Menengah-ke-
batang gram negatif tipis
panjang, batang gram
termasuk Pseudomonas,
negatif bulat padat
Enterobacteriaceae
termasuk
(Escherichia, Klebsiella,
Enterobacteriaceae
Enterobacter, dll),
(Escherichia, Klebsiella,
Bacteroides,
Enterobacter, dll),
Capnocytophaga,
Bacteroides, Prevotella,
Prevotella,
Fusobacterium, dan
Fusobacterium, dan
organisme lain.
organisme lain
Basilus gram negatif
(batang) - Pewarnaan Gram
tidak dapat dibedakan secara
pasti. Gambaran sperti
coccobacilli gram negatif,
melengkung, atau gram
negatif kecil
Lengkung - Batang
Pendek sampai gram negatif
Mungil - Batang gram
panjang, pleomorfik - melengkung (lebar 0,2
negatif kecil (0,2 hingga
Pleomorfik, pendek- hingga 0,8 mikron
3 mikron), sering
panjang, kadang-kadang dengan lebar 0,5 hingga
muncul coccobacillary,
termasuk batang gram 5 mikron panjang)
sesuai dengan sejumlah
negatif vakuolasi adalah penampilan khas
organisme termasuk
Bacteroides, jenis Vibrio.
Haemophilus,
Fusobacterium,Enteroba Campylobacter dan
Acinetobacter,
cteriaceae (Escherichia, spesies Helicobacter
Moraxella, Prevotella,
Klebsiella, Enterobacter, mungkin juga tampak
dan Porphyromonas
dll), Pseudomonas, dan melengkung atau
organisme lain "berbentuk S"
Hasil Pewarnaan Gram

3. CANDIDA

Candida - Candida adalah spesies nonbakteri yang bernoda ungu dengan pewarnaan Gram.
Panjang "Pseudohyphae" (struktur memanjang) mungkin ada serta sel ragi anak "bertunas" dari
sel ragi induk yang lebih besar.
 KULTUR
Pendekatan - Teknik
Kondisi pertumbuhan -
mikrobiologi diagnostik
Kondisi pertumbuhan
tradisional mengandalkan
yang penting meliputi Media Kultur
pertumbuhan organisme
suhu dan kondisi
pada media kultur yang
atmosfer.
sesuai.
Agar coklat – berwarna
coklat dan berisi lysed sel
darah merah yang telah
melepaskan faktor
Agar darah - Agar darah
pertumbuhan hemin (Faktor
mendukung pertumbuhan
X) dan NAD (faktor V).
banyak manusia biasa
Faktor pertumbuhan ini
diperlukan untuk
pertumbuhan in vitro H.
influenzae
Jenis hemolisis :
Hemolisis alfa,
Hemolisis beta,
Hemolisis gamma
KULTUR
Morfologi koloni –
Bench test - untuk
Koloni dijelaskan
menentukan genus dan /
berdasarkan tekstur,
atau spesies patogen yang
ukuran, bentuk, dan
dibudidayakan.
warnanya.
- Tes koagulase : membedakan S. aureus dari
Agar MacConkey —media Media selektif - untuk stafilokokus lain
selektif yang dirancang biakan spesimen - Tes katalase : membedakan stafilokokus dari
untuk mendeteksi bakteri dikumpulkan dari situs streptococci dan enterococci
gram negatif. Garam nonsteril dan membantu - Tes oksidase : membedakan basil gram negatif
empedu dalam agar mendeteksi organisme berdasarkan produksi oksidase sitokrom c
MacConkey menghambat patogen tertentu yang tertentu
pertumbuhan bakteri tumbuh bersamaan dengan
grampositif. bakteri kolonisasi normal. - Pengelompokan bidang tombak :
mengidentifikasi streptokokus beta-hemolitik
- Kelarutan empedu : diferensiasi cepat
S.pneumoniae ( yang larut dalam empedu) dari
streptokokus alfa-hemolitik lainnya
- Hidrolisis PYR : identifikasi lebih lanjut dari
cocci gram positif dalam rantai, namun jarang
digunakan
- MALDI-TOF : identifikasi cepat dan akurat
dari genus dan spesies untuk berbagai bakteri
gram negatif dan gram positif
Hasil Pewarnaan Gram

Hasil yang Berhubungan:

 Temuan pewarnaan Gram harus dikorelasikan dengan hasil kultur. Pewarnaan Gram
yang menunjukkan beberapa spesies bakteri bersama-sama dengan hanya satu atau
dua spesies aerobik yang diisolasi dalam kultur, misalnya, dapat menjadi petunjuk
penting tentang keberadaan anaerob.

 Jika pewarnaan Gram positif dan kultur negatif, kemungkinan termasuk adanya
anaerob, hasil negatif palsu yang mencerminkan terapi antibiotik sebelumnya, atau
organisme rewel yang tidak dapat tumbuh di media rutin.
Ringkasan

01 Pewarnaan Gram adalah teknik laboratorium yang digunakan untuk

membedakan berbagai jenis bakteri berdasarkan sifat biokimia dinding selnya

Keberadaan bakteri dalam pewarnaan Gram pada spesimen yang dikumpulkan

02 dari tempat steril harus selalu dianggap sebagai temuan yang signifikan.
Namun, pewarnaan Gram pada spesimen dari tempat nonsteril harus
diinterpretasikan dengan hati-hati.

03 Untuk spesimen ini, jumlah dan jenis sel manusia yang ada memberikan
informasi tentang kualitas spesimen dan adanya peradangan

Pewarnaan Gram dikategorikan menjadi dua kelompok utama: gram positif

04 dan gram negatif. Bakteri gram positif mempertahankan kristal violet dan
tampak ungu, sedangkan bakteri gram negatif tidak mempertahankan kristal
violet tetapi menggunakan pewarnaan safranin sehingga tampak merah muda.
Ringkasan

05
Bakteri yang diwarnai Gram dijelaskan menurut morfologi masing-masing
bakteri (misalnya, "cocci" bulat atau "basil" berbentuk batang), susunannya
(misalnya, "rantai" atau "kelompok"), dan ukurannya.

Spesimen dari tempat steril harus diinokulasi ke media serbaguna yang

06
diperkaya seperti agar darah atau agar coklat; kebanyakan bakteri patogen biasa
tumbuh dengan mudah pada media padat nonselektif ini. Spesimen dari situs
nonsteril yang mungkin berisi campuran mikroba flora juga harus diinokulasi ke
media selektif seperti agar MacConkey atau media selektif lainnya.
Sejumlah organisme umum memiliki morfologi yang khas; Morfologi koloni
organisme tertentu dapat bervariasi sesuai dengan media agar yang digunakan
07 dan kondisi pertumbuhannya. Koloni dijelaskan berdasarkan tekstur, ukuran,
bentuk, dan warnanya. Beberapa patogen umum memiliki bau yang khas
(meskipun kultur penyaringan umumnya tidak dianjurkan).

08 Bench test adalah alat biokimia yang digunakan untuk menentukan spesies
patogen yang dibudidayakan. Uji bench yang umum mencakup uji koagulase,
katalase, dan oksidase.