FITOKIMIA

KROMATOGRAFI (PENDAHULUAN)

TIM DOSEN
 DEFINISI
KROMATOGRAFI

• Adalah teknik yang digunakan untuk memisahkan

dan mengidentifikasi komponen-komponen campuran
• Bekerja dengan membiarkan molekul yang ada dalam
campuran untuk mendistribusikan diri mereka sendiri
antara Fasa Diam (Stationaire Phase) dan Fasa Gerak
(Mobile Phase)
• Molekul yang menghabiskan sebagian besar waktunya
dalam fase gerak dibawa lebih cepat
 lapisan atau pelapis
Fasa Diam (Stationaire pada media pendukung
yang berinteraksi
Phase) dengan analit

Fasa Gerak (Mobile pelarut yang mengalir

KOMPONEN Phase)
melalui media
pendukung
KROMATOGRAFI

Medium support permukaan padat di

mana fase diam terikat
(Supporting Medium) atau dilapisi
PENEMUAN
KROMATOGRAFI
Mikhail Tswett menemukan
kromatografi pada tahun 1901 selama
penelitiannya tentang pigmen tumbuhan.
Dia menggunakan teknik untuk
memisahkan berbagai pigmen tumbuhan
seperti klorofil, xantofil dan karotenoid.
 Kromatografi Kertas

Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi Kolom
JENIS-JENIS
KROMATOGRAF Kromatografi Cair
I • Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
(KCKT)/HPLC
• Kromatografi Ion

Kromatografi Gas
 JENIS-JENIS KROMATOGRAFI

Thin layer
Paper

HPLC Gas Column

KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS
• Di sini fase gerak adalah cairan
• Mengalir melewati lapisan tipis serbuk pada penyangga yang kokoh
• Zat yang kurang tertarik pada padatan atau lebih larut dalam cairan
bergerak lebih cepat
• Dan bergerak lebih jauh ke atas plate pada saat proses telah dihentikan
dengan mengeluarkan plate dari cairan. - Rf lebih besar
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS

Fasa Diam ---------> Silica Gel

Fasa Gerak-------------> Solvent/ Pelarut

(developing)
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS
DEVELOPING
CHAMBER

SPOT

SOLVENT

Solvent
Front

1.1 cm

5.5 cm

Origin

Distance from starting origin to center of zone

Rf =
Distance from starting origin to solvent front

5.5
= = 0.5
11
KROMATOGRAFI KERTAS DAN LAPIS TIPIS
Pelarut bergerak ke atas kertas dengan
aksi kapiler, membawa komponen campuran
pada tingkat yang berbeda.
solvent
front

Later

solvent
 Hasil Perhitungan
• Analisa
• Hitunglah nilai Rf .

• Rf = Distance from the start to the middle of a spot (x)

• Distance from start to finish point of the water (y)

Untuk zat yang sangat larut dalam cairan Rf akan mendekati ....

Untuk zat yang agak tidak larut dalam cairan Rf akan mendekati ....

0
 Comparing Chromatography to the
Flow of a River...
Light leaf

Heavy stone Water flow

Base
Bagaimana Kromatografi Bekerja?
• Dalam semua pemisahan kromatografi, sampel diangkut dalam fase gerak.
Fase gerak dapat berupa gas, cairan, atau cairan superkritis
• Fase gerak kemudian dipaksa melalui fase diam yang ditahan dalam kolom
atau pada permukaan padat. Fase diam harus sesuatu yang tidak bereaksi
dengan fase gerak atau sampel
• Sampel kemudian memiliki kesempatan untuk berinteraksi dengan fase
diam saat bergerak melewatinya. Sampel yang sangat berinteraksi,
kemudian tampak bergerak lebih lambat. Sampel yang berinteraksi lemah,
kemudian tampak bergerak lebih cepat. Karena perbedaan laju ini, sampel
kemudian dapat dipisahkan menjadi komponen-komponennya
 Fasa Gerak / Fasa Diam

• Sebuah situs di mana fase bergerak (fase

gerak) dan fase tidak bergerak (fase diam)
Mobile melakukan kontak melalui antarmuka yang
phase diatur.
Strong Weak
• Afinitas/ketertarikan dengan fase gerak dan
fase diam bervariasi dengan zat terlarut.
Stationary Pemisahan terjadi karena perbedaan
phase kecepatan gerak.
 KROMATOGRAFI GAS-CAIR
• Di sini fase gerak adalah gas yang tidak reaktif ( misalnya Nitrogen) yang
mengalir melalui tabung.
• Dan fase diam adalah cairan yang tidak mudah menguap yang dipegang pada
partikel pendukung padat.
Kromatografi Kolom dan Planar
Separation column

Paper or a
substrate coated
with particles

Packing material
Paper Chromatography
Column Chromatography Thin Layer Chromatography (TLC)
Proses Pemisahan dan Kromatogram pada
Kromatografi kolom
concentration

Chromatogram
Output

Time
 Kromatogram

tR
Intensity of detector signal

Peak tR : Retention time

t0 t0 : Non-retention time
h
A A : Peak area
h : Peak height

Time
 Kromatografi Pertukaran Ion

R
Anion exchange
N+ R
R

++++
Cation exchange
SO3- + +
++++
Electrostatic interaction
(Coulomb force)
Fasa Diam yang Digunakan dalam
Model Pertukaran Ion
• Base Material
 Resin is often used.
 Silica gel is also used.

• Cation Exchange Column

 Strong cation exchange (SCX) -SO3-
 Week cation exchange (WCX) -COO-
• Anion Exchange Column
 Strong anion exchange (SAX) -NR3+
 Week anion exchange (WAX) -NHR2+
TERIMAKASIH