SPESIMEN DAN

PULASAN SITOPATOLOGI

Supri irianti handayani

Laboratorium Sitopatologi
PAFKUI 2022
Pendahuluan
⚫ Sitologi 🡪 ilmu yang mempelajari tentang sel
⚫ Diagnostik Sitologi 🡪 interpretasi dari sel, baik yang
terlepas (exfoliated) dari permukaan epitel ataupun yang
diambil dari beberapa tempat dengan cara tertentu.

Prinsip teknik sitologi

⚫ Memproses spesimen sitologi menjadi preparat yang

refresentatif yang bisa diinterpretasikan dan di diagnosa.
Sejarah Sitodiagnosis
The first era
- Abad19
- Sel-sel kanker yang terlepas (exfoliated)
dapat ditemukan di semua jenis spesimen

-1861
-Pada sekresi faring
-Post mortem
-Keratinizing squamous cell carcinoma
Sejarah Sitodiagnosis
The second era

-wet fixation untuk spesimen sitologi

🡪 Pulasan Papanicolaou
- screening pada kanker serviks
🡪 sel abnormal, besar, perubahan
bentuk nukleus, dan hiperkromatik

Titik awal Perkembangan

Sitologi

Dr. George N Papanicolaou (1832-1962)

Sejarah Sitodiagnosis
The third era
- technique of FNAC
- Diagnostic cytology and its
histopathologic basis

the fourth era

- the Bethesda system of
reporting cervical/vaginal
cytology diagnoses

Dr. Leopold G Koss

Kelebihan Pemeriksaan Sitologi

⚫ Mudah
⚫ Murah
⚫ Cepat
⚫ Sederhana
⚫ Resiko minimal (pendarahan sedikit/ bahkan tanpa rasa nyeri)
⚫ Waktu pemeriksaan relatif singkat
⚫ Dapat dilakukan sebagai tindakan massal
⚫ Untuk screening lesi yang derajat keganasannya tinggi tidak
menimbulkan stimulasi metastase
⚫ Efektif untuk diagnosis tumor saluran cerna, paru, saluran kemih,
dan lambung
⚫ Dapat memberikan hasil positif meskipun pada pemeriksaan
langsung dan palpasi tidak menunjukkan kelainan
 Keterbatasan Pemeriksaan Sitologi

⚫ Diagnosis hanya berdasar perubahan sitoplasma dan inti sel

⚫ Perubahan yang terjadi harus dipastikan bukan akibat kesalahan

teknis

⚫ Hanya dapat mendeteksi lesi yang letaknya di permukaan mukosa

⚫ Hanya untuk lesi yang tidak tertutup keratin tebal

⚫ Tidak efektif digunakan pada lesi non ulseratif dan hiperkeratotik

karena sel-sel abnormal tertutup oleh lapisan keratin

⚫ Hasil pemeriksaan sitologi yang mengindikasikan keganasan masih

perlu konfirmasi biopsi

⚫ Seringkali bahan yang terambil tidak refresentatif

 SPESIMEN SITOLOGI
LCS
Vaginal smear/ cervical smear

Sputum
Sendi
Bronchial washing/ brushing

Urine cerebrospinal

Cairan lambung
pleura
Aspirasi jaringan tumor

Imprint jaringan tumor ascites

Cairan tubuh lain pericardium

Types of cytology samples
Exfoliative
cytology

Fine Needle
Aspiration Cytology
(FNAC)

Body
fluids
Exfoliative cytology/
Sitologi Ekspoliatif
⚫ 🡪 Sel yang terlepas atau diambil dari permukaan
Epitel dari berbagai organ.

wash smear

scraping brushing
Bronchial wash
Brushing
Scraping
Fine needle aspiration biopsy (fnab)
Body fluids

Pleura Pericardium
Body fluids

CSF Ascites
JENIS CAIRAN SIAP
DI SENTRIFUS
⚫ Fiksasi 🡪
- mencegah proses degenerasi sel dan
jaringan
- mempertahankan morfologi sel seperti
pada saat masih hidup di dalam tubuh
 Metode Fiksasi
⚫ Wet Fixation/ fiksasi basah 🡪 95% Ethyl Alcohol (Ethanol)
• Fiksasi yang ideal dan
direkomendasikan
• dehydrating agent
• menghasilkan detail
karakteristik kromatin
yang optimal
• Waktu fiksasi 30 menit
• Papanicolaou

⚫ Air drying/ Fiksasi kering 🡪 Giemsa/ Diff Quick

⚫ Liquid-based Fixation for Papanicolaou Tests

• Spray Fixation

Jarak antara spesimen yang difiksasi dengan spray

fixation sangat mempengaruhi hasil.

Jarak yang terlalu dekat 🡪 sel-sel tersapu dan tidak

terfiksasi dengan baik.
Kesalahan pada Fiksasi
⚫ Sediaan apus telah kering sebelum difiksasi 🡪
terlalu lama di luar/ tidak segera di rendam di
cairan fiksasi.
Fiksasi secepatnya penting karena dapat terjadi artefak
akibat pengeringan udara

⚫ Fiksasi tidak menggunakan alkohol 96%

⚫ Penggunaan hairspray/ spray fixation
disemprotkan pada jarak terlalu dekat
 I. Proses sediaan Cairan Tubuh/ Body Fluid

⚫ Identifikasi Sampel dan formulir

⚫ Sentrifuge 5 menit 1000 rpm 🡪 sedimen🡪 apusan 🡪 fiksasi
alkohol 96%

SENTRIFUGE
Teknik Apusan 🡪 Pull Apart
 Cytocentrifugation/ Sedimen + NaCl 0.09% (1:1)
Cytospin

⚫ 🡪 mesin sentrifuge khusus yang menghasilkan endapan yang langsung

terkumpul dan melekat di tengah slide.

Wet
1000 rpm 5 menit
Fixation🡪
Papanicolaou

Dry
Fixation🡪
Giemsa
 Principle
•to concentrate cells within a defined area
•a filter card between the chamber sample and the glass
slide resulting in cell to slide adhesion

Hydraulic force

Centrifugal force
Cytocentrifugation

⚫ Shandon cytocentrifuge I

⚫ Shandon cytocentrifuge II

⚫ Shandon cytocentrifuge III

⚫ Shandon cytocentrifuge IV

⚫ Wescor cytopro

⚫ Hettick cytocentrifuge

⚫ Leif’s centrifugal cytology buckets

 II. Proses sediaan Sputum

Teknik Apusan 🡪
SPREADING

- used for thick mucoid secretions

- smears of fresh sputum and bronchial aspirates
- Fiksasi alkohol 96 %
III. Proses sediaan Aspirasi/ FNAB

Diff Dry Air Alkohol 96 %

Quick Fixation (wet Fixation)

Giemsa Methanol Papanicolaou

 Diff
Giemsa Papanicolaou
Quick

Diff Papanicolaou Giemsa

Quick
 konvensional IV. Proses sediaan Pap Smear / Cervical Smear

Pap smear
Alkohol 96 % Papanicolaou
konvensional

collection of
samples Saline moistened
Ayre spatula cotton tip
applicator

Conventional smear
 Liquid based
cytology
⚫ cytology (the study of cells) through a liquid
medium
⚫ Cells are collected from cervix(any other site)
are placed directly into liquid preservative,
rather than transferred to slide.
⚫ Sample is processed and resultant thin smear
easy to screen
⚫ Cellprep LBC system 🡪liquid based
cytology system that used blowing
technology.
⚫ Filtration and collection of vacum packed
cells on a membrane and transferring to
the coating slide.
Cell prep
 Cell prep kit

Specimen filtration & Membrane Microscope

Preservation Vial Cervix Brush
Filter slide
Conventional smear Cellprep slide
Conventional smear Cellprep slide
 Convetional ThinPrep Cellprep

Fixation Ethanol methanol Ethanol

Collection Smear on slide Sample rinsed Collection

in vial device left in
vial

Cell sample Random Uniform Uniform

distribution distribution distribution
over 20 mm of over 20mm of
slide slide
Collection device EC brush, EC brush, Cervex-Brush
spatula, Cervex- spatula, Cervex- most effective,
Brush Brush rinsed tip
in vial deposited into
vial

Preservation Air drying, All preservation All preservation

artifacts blood, artifacts greatly artifacts greatly
inflammation, reduced reduced
irregular
distribution of
cells
Automated Not applicable Vacuum pressure Blowing
processing through TransCyte technology
filter

Imaging Not applicable Available Available

technology

Ancillary Not applicable HPV, Chlamydia, HPV, Chlamydia,

testing gonorrhea gonorrhea
References
1. Naylor B, Ramzy I. Cytopathology:the past, the present and the glimpse
into the new millenium. In. Gray W, Mckee GT. Diagnostic cytopathology.
2nd edition. Churchill Livingston.2002. p. 3-13.

2. Bales CE. Laboratory techniques. In. Koss LG. Koss’s diagnostic cytology
and its histopathologic bases. 5th edition. Lippincott Williams and Wilkins.
2005. p. 1570- 1634.

3. Weidmann JE, Keebler CM, Fasik MS. Cytopreparatory techniques. In.

Bibbo M, Wilbur DC. Comprehensive cytopatholgy. 3rd edition. Saunders.
2008. p. 835-58.
4. Cibas ES. Cervical and vaginal cytology. In. Ducatman BS. Cytology:
diagnostic principles and clinical correlates.4th edition. Saunders. 2014. 1-
57.

5 . Orell SR, Veilh p. The techniques of FNA cytology. In. Orell SR, Sterret
GF. Fine needle aspiration cytology. 5th edition. Churchill Livingstone.
2011. p. 8-27.
Metode Pulasan Sitologi

Papanicolaou

Giemsa

Diff Quick
Papanicolaou Staining

⚫ Ditemukan oleh Dr. George N. Papanicolaou

(1832-1962)

⚫ Pewarnaan polikromatik

⚫ Menunjukkan berbagai variasi morfologi sel

sesuai derajat maturitas dan aktifitas

metaboliknya
principles
Prinsip Papanicolaou

Hidrasi dan Dehidrasi

Hidrasi 🡪 penyerapan sel terhadap zat warna untuk inti

sel (Hematoxylin)

Dehidrasi 🡪 penyerapan sel terhadap zat warna

counterstain yang mewarnai sitoplasma (OG-6 & EA-50)

Dehidrasi dan clearing solution 🡪menghasilkan sel yang

jernih dan siap untuk tahap akhir/ mounting.
 Zat Warna
Papanicolaou

Nuclear staining/ Harris

pewarnaan inti Hematoxylin

Kromatin &
membran
inti 🡪 biru -
ungu

Anak inti 🡪 merah,

merah muda dan
orange
 Two cytoplasmic counter staining

1. Orange Sitoplasma kuning/ orange

G -6 jika mengandung keratin

Sitoplasma asidofil <🡪 eosin

(asam)🡪 merah muda – kuning 🡪
supervisial
including three
2. Eosin Sitoplasma
Azure (EA)- stains basofil <🡪
light green
50 –Eosin Y (basa)🡪 biru
pucat/ biru
–Light Green
kehijauan🡪
–Bismarck basal/parabasa
l
 Prinsip Pewarnaan Papanicolaou

(1) Fixation
- 95% ethyl alcohol or in other substitutes
- minimum of 15 minutes

(2) Nuclear staining

Harris haematoxylin 🡪 regressive staining method
(3) Cytoplasmic staining
(4) Dehydration
- Rinse the smears in absolute alcohol for two
or three changes for the removal of water.
(5) Clearing
- alcohol is being replaced with Xylene
- Xylene has a refractive index as that of glass
and mounting medium
- It prevents cellular distortion.
(6) Mounting
 fixation

hydration

dehydration

clearing
 Type of Age of dyes
No. Of slides
fixatives
in each dye

Moisture and
humidity
Regressive
or Factors affecting
progressive Pap staining

Length of
staining time

Presence or absence
Quality of cell of inflammatory cell
sample changes
 Giemsa

Tujuan ⚫ Diperiksa detail morfologi inti sel 🡪 apakah sel tersebut

normal, sel neoplasma jinak atau ganas.

1. Larutan Giemsa
Bahan 2. Larutan phosfat buffer
(ph 6,8)
3. Methanol
Prosedur Pewarnaan Giemsa

1. Sediaan apus di keringkan di udara

2. Fiksasi dengan methanol minimal 5 menit
3. Keringkan di udara
4. Tetesi dengan pewarna Giemsa dengan
perbandingan (GZ: Buffer phosfat 1:4)
5. Cuci dengan aquadest 🡪 kering di udara
6. Mounting
 Diff Quick

⚫ Fast three-step differential

stain for bone marrows,
smears, FNAs, and
microorganisms such as H.
pylori

⚫ Includes:

Reagent 1: Fixative;
⚫ Reagent 2: Eosin;
⚫ Reagent 3: Methylene Blue
Prosedur Diff Quick

1. Apus sampel pada slide 🡪keringkan di udara

2. Celup🡪 Reagen #1🡪 5 kali
3. Celup 🡪Reagen #2 🡪5 kali
4. Celup 🡪Reagen #3 🡪5 kali
5. Bilas dengan aquadest
6. Keringkan di udara/ dryer

Note :
1. Terlalu biru – kurangi 1 celup di Reagent #3.
2. Terlalu merah – kurangi 1 celup di Reagent
#2.
3. Terlalu gelap kurangi 1 atau 2 celup di
Reagents #2 and #3.
4. Terlalu terang – tambahkan 1 atau 2 celup di
Reagents #2 and #3.
Minimal 3 celup di Reagent #2 and #3 .
RESUL
T

Expected Results
1. Erythrocytes: Pink tan with degrees of chromasia.
2. WBCs: Nuclei with bright, bluish-purple chromatin, light blue nucleoli.
3. Lymphocytes: Clear blue cytoplasm, red-purple granules may be present.
4. Monocytes: Mosaic of pink and blue cytoplasm, azure granules usually present.
5. Neutrophils: Light purplish-pinkish or lavender granules in cytoplasm.
6. Eosinophils: Bright red or reddish-orange granules in cytoplasm.
7. Basophils: Deep purple and violet-black granules in cytoplasm.
8. Platelets: Clearly demarcated red-purple granules in light blue cytoplasm.