Kultur jaringan meliputi penanaman sel atau agrerat sel, jaringan, dan organ tanaman pada medium Komposisi medium tumbuh ternyata sangat menguntungkan bagi pertumbuhan mikroorganisme Mikroorganisme dapat menyerang eksplan sehingga mengakibatkan kematian eksplan
Sumber kontaminan
Medium; sebagai akibat proses sterilisasi yang tidak sempurna Lingkungan kerja dan pelaksanaan penanaman yang kurang hati-hati dan kurang teliti Eksplan 1. internal (kontaminan terbawa di dalam jaringan) 2. Eksternal (kontaminan berada di permukaan eksplan) Serangga atau hewan kecil
Prosedur aseptik
Sterilisasi lingkungan kerja Sterilisasi alat-alat dan media Sterilisasi bahan tanaman
Pada prinsipnya, sukar untuk menentukan suatu metode baku yang berlaku untuk semua jenis tanaman dan semua bagian tanaman. Secara garis besar ada ketentuan umum, namun secara spesifik metode sterilisasi yang paling tepat akan diperoleh dari trial and error;percobaan pendahuluan Proses sterilisasi bahan tanaman harus dilakukan dalam beberapa tahap
Bahan sterilisasi
Bahan Ca.hipoklorit Na.hipoklorit Hydrogen peroksida Gas klorin Perak nitrat Merkuri klorida Betadine Fungisida Antibiotik alkohol konsentrasi 1-10 % 1-2 % 10-12 % 1% 0,1-0,2 % 2,5-10 % 2 g/l 50 mg/l 70 % waktu 5-30 7-15 5-15 60-240 5-30 10-20 5-10 20-30 30-60 -1
4. Masukkan potongan organ / eksplan yang akan disterilsasi ke petri / erlenmenyer ;digoyang secara perlahan agar eksplan terbasahi secara sempurna 5. Apabila eksplan masih mengandung daun pembungkus, sisik, bulu, duri, ataupun bahan lain maka harus dibersihkan sampai yang muda yang berwarna tampak keputihan 6. Cuci eksplan dengan aquadest steril 2-3 kali kemudian dipotong kecil2 dengan ukuran 1-5 mm eksplan siap ditabur
Penanaman eksplan
Eksplan diambil dengan pinset, diletakkan dalam petridish, kemudian dipotong-potong dengan skalpel Potongan eksplan dimasukkan ke dalam erlenmeyer berisi media hingga permukaan yang teriris dapat bersentuhan dengan media Erlenmeyer ditutup kembali dan disimpan dalam ruang inkubator dengan suhu dan intensitas cahaya yang sesuai