ISOLASI DNA TANAMAN dan ELEKTROFORESIS DNA

Laporan Praktikum Genetika Diajukan Untuk Memenuhi Salah Satu Tugas Mata Kuliah Genetika (BI40 !

Disusun oleh : Kelompok 1, Kelas B "i#$an Maulana (0%04%& ! '#riana (0%0(()*! +,a -a.i#a (0%04**)! /eina Kranimulia Putri (0(0)&)&!0 1o,i2anti 3 (0%04404! "atna Sari Murti (0%00%&&! 5ea 5etina (0%044% ! JURUSAN PENDIDIKAN BIOLOGI
AKUL!AS PENDIDIKAN "A!E"A!IKA DAN IL"U PENGE!A#UAN ALA"

UNI$ERSI!AS PENDIDIKAN INDONESIA

%&1&

BAB I PENDA#ULUAN 1'1 La(a) Belakan* D1' a#alah asam nukleat 2ang mengan#ung materi genetik #an 6er.ungsi untuk mengatur perkem6angan 6iologis seluruh 6entuk kehi#upan se7ara seluler8 D1' ter#apat pa#a nukleus9 mitikon#ria9 #an kloroplas8 Per6e#aan ketigan2a a#alah D1' nukleus 6er6entuk linier #an 6erasosiasi sangat erat #engan protein histon9 se#angkan D1' mitokon#ria #an kloroplas 6er6entuk sirkular #an ti#ak 6erasosiasi #engan protein histon8 Selain itu D1' mitokon#ria #an kloroplas memiliki 7iri khas9 2aitu han2a me$ariskan si.at:si.at 2ang 6erasal #ari garis i6u8 Se#angkan D1' nukleus memiliki pola pe$arisan si.at #ari ke#ua orangtua8 Dilihat #ari organismen2a9 struktur D1' prokariot ti#ak memiliki protein histon #an 6er6entuk sirkular9 se#angkan D1' eukariot 6er6entuk linier #an memiliki protein histon8 D1' memiliki struktur pilinan utas gan#a 2ang anti pararel #engan komponen: komponenn2a9 2aitu gula pentosa (#eoksiri6osa!9 gugus .os.at #an pasangan 6asa8 Se6uah sel memiliki D1' 2ang merupakan materi genetik #an 6ersi.at here#iter pa#a seluruh sistem kehi#upan8 Genom a#alah set lengkap #ari materi genetik (D1'! 2ang #imiliki suatu organisme #an terorganisasi menja#i kromosom8 D1' juga #apat #iisolasi9 6aik pa#a manusia maupun tum6uhan8 D1' manusia #apat #iisolasi melalui #arah8 Komponen #arah 2ang #iisolasi 2aitu sel #arah putih9 karena memiliki nukleus #imana ter#apat D1' #i#alamn2a8 D1' 2ang #iisolasi #ari tanaman seringkali terkontamoinasi oleh polisakari#a #an meta6olit sekun#er seperti tannin9 pigmen9 alkaloi#9 #an .la,onoi#8 Salah satu kesulitan isolasi D1' #ari tanaman tinggi a#alah proses #estruksi #in#ing sel untuk melepaskan isi sel8 -al ini #ise6a6kan karena tanaman memiliki #in#ing sel 2ang kuat9 #an pa#a 6e6erapa tanaman kontaminasi sulit #ipisahkan #ari ekstrak asam nukleat8 Keha#iran kontaminasi #iatas #apat mengham6at akti,itas en;im9 misaln2a D1' ti#ak sensiti,e oleh en;im retriksi #san mengganggu proses ampli.ikasi D1' #engan P<"8

+lektro.oresis #engan 'garose merupakan meto#e stan#ar untuk memisahkan9 mengi#enti.ikasi9 mengkarakterisasi #an puri.ikasi #ari molekul D1'="1'8 <ara pemisahan #engan elektro.oresisi ini merupakan alat pen#ukung 2ang sangat pokok #alam teknologi D1' rekom6inan9 #engan aplikasi 2ang 6egitu luas 6aik untuk pemisahan untai tunggal atau untai gan#a molekul D1'8 1'% !u+uan 48 Dapat melakukan isolasi D1' #ari 6er6agai jenis tanaman >8 Dapat memahami 7ara kerja sen2a$a 2ang #igunakan untuk mengisolasi D1' 1', Dasa) !eo)i Isolasi DNA Deo?2ri6onu7lei7 a7i# (D1'! merupakan sen2a$a kimia 2ang paling penting #alam makhluk hi#up8 D1' merupakan sen2a$a 2ang mengan#ung in.ormasi genetik makhluk hi#up #ari satu generasi ke generasi selanjutn2a (Sur2o >004@ *%!8 Keseluruhan D1' #alam suatu sel akan mem6entuk genom8 Genom meliputi 6agian gen 2ang .ungsional maupun non:.ungsional #alam sel organisme8 D1' genom meliputi gen #anintergen(<amp6ell #kk8>004@>>4!8 D1' organisme prokariot #an eukariot mempun2ai per6e#aan 6entuk8 Arganisme prokariot memiliki D1' 6er6entuk sirkular9 se#angkan organisme eukariotik mempun2ai D1' 6er6entuk linier8 D1' eukariot terletak #alam inti sel9 se#angkan D1' prokariot terletak #alam sitoplasma (/usu. >004@%!8 Struktur D1' pertama kali #ijelaskan oleh /ames Batson #an 3ran7is <ri7k8 Mereka memperoleh mo#el D1' #ari hasil .oto #i.raksi sinar C 2ang #i6uat oleh "osalin# 3ranklin #an Mauri7e Bilkins8 Batson #an <ri7k men2impulkan 6ah$a struktur D1' merupakan rantai gan#a (#ou6le heli?!8 Untai gan#a tersusun #ari #ua rantai polinukeloti#a 2ang terpilin8 Ke#ua rantai memiliki susunan antiparalel9 2aitu satu rantai 6erorientasi #ari ujung *D ke &Dse#angkan 2ang lain 6erorientasi ujung &D ke *D8 Ujung *D merupakan ujung 2ang 6erakhir #engan gugus *:.os.at #an ujung &D 6erakhir #engan gugus A-8 Ke#ua rantai #ihu6ungkan #engan ikatan hi#rogen 2ang memghu6ungkan ke#ua 6asa nitrogen (Sa#a,a #kk8>004@>4)::>>0!8

Komponen nukleoti#a D1' a#alah gula9 .os.at9 #an 6asa nitrogen8 Komponen gula pa#a D1' a#alah gula #eoksiri6osa9 2aitu gula ri6ose 2ang kehilangan satu atom oksigen8 Basa 2ang a#a pa#a D1' a#a #ua ma7am9 2aitu purin #an pirimi#in8 Purin ter6agi lagi menja#i #ua ma7am9 2aitu a#enin #an guanin8 Pirimi#in ter#iri #ari #ua jenis9 2aitu timin #ansitosin (Sa#a,a #kk8>004@>4 !8 D1' mempun2ai .ungsi:.ungsi 2ang sangat penting 6agi tu6uh kita8 -al terse6ut #ikarenakan D1' merupakan molekul kehi#upan utama #i #alam sel makhluk hi#up8 un*si-.un*si (e)se/u( a0alah: 48 Tempat men2impan #an men2alurkan in.ormasi genetik suatu makhluk hi#up (Sa#a,a #kk8>004@>>0!8 >8 3ungsi heterokatalis9 2aitu .ungsi untuk melaksanakan pengaturan pem6uatan molekul: molekul lain 2ang penting #alam tu6uh #an .ungsi autokatalis9 2aitu .ungsi D1' untuk mereplikasi #irin2a sen#iri (Sur2o 4 @* !8 D1' eukariot ti#ak han2a #ijumpai pa#a nukleus9 tetapi #apat #itemukan pa#a mitokon#ria #an kloroplas8 D1' 2ang #iisolasi #ari kloroplas menunjukkan si.at 6er6entuk sirkular9 ter#iri #ari untai gan#a9 replikasi semikonser,ati.9 #an 6e6as #ari protein histon8 D1' kloroplas penting #alam proses .otosintesis ("a,en E /ohnson >00>@ 4!8 D1' juga #ijumpai pa#a organisme prokariotik8 D1' prokariot mempun2ai D1' ekstranuklear 2ang #inamakan plasmi#8 Plasmi# merupakan D1' 2ang ti#ak terlalu esensial 6agi .ungsi kehi#upan 6akteri9 tetapi penting #alam pengaturan siklus hi#up #an perum6uhan #alam lokasi hi#upn2a8 Ke6an2akan plasmi# a#alah sirkular #an tersusun #ari 6e6erapa ri6u pasangan 6asa8 Plasmi# mempun2ai titik ori (origin o. repli7ation! sehingga mampu mereplikasi #iri tanpa pengaturan #ari D1' kromosom8 "eplikasi #imulai #ari titik ori hingga semua plasmi# tereplikasi (Pier7e>00*@>0&!8 Isolasi D1' merupakan langkah 2ang tepat untuk mempelajari D1'8 Prinsipn2a a#a #ua9 2aitu sentri.ugasi #an presipitasi8 Sentri.ugasi merupakan teknik untuk memisahkan 7ampuran 6er#asarkan 6erat molekul komponenn2a8 Molekul 2ang mempun2ai 6erat

molekul 6esar akan 6era#a #i 6agian 6a$ah ta6ung #an molekul ringan akan 6era#a pa#a 6agian atas ta6ung8 -asil sentri.ugasi akan menunjukkan #ua ma7am .raksi 2ang terpisah9 2aitu supernatan pa#a 6agian atas #an pelet pa#a 6agian 6a$ah (<amp6ell #kk8 >00>@ 44*!8 Presipitasi merupakan langkah 2ang #ilakukan untuk mengen#apkan suatu komponen #ari 7ampuran ('l6erts #kk8 4 4@ >*4!8 Se6uah #i.enilamin (DP'! in#ikator akan mengkon.irmasi ke6era#aan D1'8 Prose#ur ini meli6atkan hi#rolisis kimia D1'@ ketika #ipanaskan (misaln2a F * G <! #alam asam9 reaksi memerlukan gula #eoksiri6osa #an karena itu spesi.ik untuk D1'8 Dengan kon#isi terse6ut9 >:#eoksiri6osa akan #ikon,ersi ke $:h2#ro?2le,ulin2l al#ehi#a9 2ang 6ereaksi #engan sen2a$a9 #i.enilamin9 untuk menghasilkan sen2a$a 6er$arna 6iru8 Konsentrasi D1' #apat #itentukan mengukur intensitas a6sor6ansi larutan pa#a (00 nm #engan spektro.otometer #an mem6an#ingkan #engan kur,a stan#ar konsentrasi D1' #iketahui8 Mengukur intensitas a6sor6ansi larutan D1' pa#a panjang gelom6ang >(0 nm #an >)0 nm #igunakan se6agai ukuran kemurnian D1'8 D1' men2erap sinar UH pa#a >(0 #an >)0 nanometer9 #an protein aromatik men2erap sinar UH pa#a >)0 nm9 se6uah sampel D1' murni memiliki rasio >(0=>)0 pa#a 49) #an relati. 6e6as #ari kontaminasi protein8 Se6uah persiapan D1' 2ang terkontaminasi #engan protein akan memiliki rasio >(0=>)0 le6ih ren#ah #ari 49)8 D1' 6isa #iukur #engan memotong D1' #engan en;im restriksi9 menjalankann2a pa#a gel agarosa9 pe$arnaan #engan 6romi#a eti#ium atau no#a 2ang 6er6e#a #an mem6an#ingkan intensitas D1' #engan penan#a D1' konsentrasi #ikenal8 Menggunakan teknik Southern 6lot ini #iukur D1' #apat #iisolasi #an #iperiksa le6ih lanjut menggunakan analisis P<" #an "3LP8 Prose#ur ini memungkinkan #i.erensiasi #iulang #alam urutan genom8 Ini a#alah teknik:teknik 2ang ilmu$an .orensik #igunakan untuk per6an#ingan9 i#enti.ikasi9 #an analisis8 5u6ai#ah (>004! #alam /amilah (>00*! men2atakan 6ah$a isolasi D1' #apat #ilakukan melalui tahapan:tahapan antara lain@ preparasi ekstrak sel9 pemurnian D1' #ari ekstrsk sel #an presipitasi D1'8 Meskipun isolasi D1' #apat #ilakukan #engan 6er6agai 7ara9 akan tetapi pa#a setiap jenis atau 6agian tanaman #apat mem6erikan hasil 2ang 6er6e#a9 hal ini #ikarenakan a#an2a sen2a$a poli.enol #an polisakari#a #alam

konsentrasi tinggi 2ang #apat mengham6at pemurnian D1'8 /ika isolasi D1' #ilakukan #engan sample 6uah9 maka ka#ar air pa#a masing:masing 6uah 6er6e#a9 #apat mem6eri hasil 2ang 6er6e#a:6e#a pula8 Semakin tinggi ka#ar air9 maka sel 2ang terlarut #i #alam ekstrak akan semakin se#ikit9 sehingga D1' 2ang terpretisipasi juga akan se#ikit8 Penam6ahan #eterjen #alam isolasi D1' #apat men2e6a6kan rusakn2a mem6rane sel9 melalui ikatan 2ang #i6entuk melalui sisi hi#ro.o6ik #eterjen #engan protein #an lemak pa#a mem6rane mem6entuk sen2a$a Ilipi# protein:#eterjen kompleksJ8 Sen2a$a terse6ut #apat ter6entuk karena protein #an lipi# memiliki ujung hi#ro.ilik #an hi#ro.o6ik9 #emikian juga #engan #eterjen9 sehingga #apat mem6entuk suatu ikatan kimia8 KIRS"AN1,'%&1&'isolasi DNA Elek()o.o)esis Elek()o.o)esis a#alah teknik pemisahan komponen atau molekul 6ermuatan 6er#asarkan per6e#aan tingkat migrasin2a #alam se6uah me#an listrik 8 Me#an listrik #ialirkan pa#a suatu me#ium 2ang mengan#ung sampel 2ang akan #ipisahkan8 Teknik ini #apat #igunakan #engan meman.aatkan muatan listrik 2ang a#a pa#a makromolekul9 misaln2a D1' 2ang 6ermuatan negati.8 /ika molekul 2ang 6ermuatan negati. #ile$atkan melalui suatu me#ium9 kemu#ian #ialiri arus listrik #ari suatu kutu6 ke kutu6 2ang 6erla$anan muatann2a maka molekul terse6ut akan 6ergerak #ari kutu6 negati. ke kutu6 positi.8
K>L

Ke7epatan gerak molekul terse6ut tergantung pa#a nis6ah muatan terha#ap

massan2a serta tergantung pula pa#a 6entuk molekuln2a8 Pergerakan ini #apat #ijelaskan #engan ga2a Lorent;9 2ang terkait #engan si.at:si.at #asar elektris 6ahan 2ang #iamati #an kon#isi elektris lingkungan@

Ke(e)an*an@ 3 a#alah ga2a Lorent;9 M a#alah muatan 2ang #i6a$a oleh o6jek9 + a#alah me#an listrik8 Se7ara umum9 elektro.oresis #igunakan untuk memisahkan9 mengi#enti.ikasi9 #an memurnikan .ragmen D1'

Pi(a DNA Se(elah Elek()o.o)esis 0an Diama(i 0i Ba2ah Sina) U$ Jenis Elek()o.o)esis Elek()o.o)esis ke)(as a#alah jenis elektro.oresis 2ang ter#iri #ari kertas se6agai .ase #iam #an partikel 6ermuatan 2ang terlarut se6agai .ase gerak9 terutama ialah ion:ion kompleks8 Pemisahan ini terja#i aki6at a#an2a gra#asi konsentrasi sepanjang sistem pemisahan8 Pergerakan partikel #alam kertas tergantung pa#a muatan atau ,alensi ;at terlarut9 luas penampang9 tegangan 2ang #igunakan9 konsentrasi elektrolit9 kekuatan ion9 p-9 ,iskositas9 #an a#sorpsi,itas ;at terlarut8 Elek()o.o)esis *el ialah elektro.oresis 2ang menggunakan gel se6agai .ase #iam untuk memisahkan molekul:molekul8 '$aln2a elekto.oresis gel #ilakukan #engan me#ium gel kanji (se6agai .ase #iam! untuk memisahkan 6iomolekul 2ang le6ih 6esar seperti protein: protein8 Kemu#ian elektro.oresis gel 6erkem6ang #engan menja#ikan agarosa #an poliakrilami#a se6agai gel me#ia8

1'3 "e(o0e Ke)+a Isolasi DNA !anaman 'lat @ mikro,i,et 6er6agai ukuran ta6ung 49* ml tips mikropipet 6er6agai ukuran saringan gelas kimia sen#ok penangas ,orteks mini sentri.uga 6len#er = lumping

Bahan @ 6u..er ekstraksi (400 mM tris: -<l9 Ph )N *0 mM +DT'N *00 mM 1a<l9 <T'B >O! Potasium asetat * M SDS >0O Kloro.orm @ Isoamil al7ohol (>4@4! 'lkohol 400O (pa! T+ (40 mM Tris:-<l9 4 mM +DT' p- )! Buah stro$6eri <T'B >O

Elek(o.o)esis DNA "ange pemisahan molekul D1' #engan agarose gel 'garose O 09& 09( 09% 09 49> 49* >90 Bahan kimia @ Bu..er T'+ 40 C (400 mM Tris asetat9 40 mM +DT' Ph ) ! +i#ium 6romi#a Loa#ing 6u..er D1' Marker 'garose Seaparsi optimal #ari molekul D1' (K6! *90:(0 490:>0 09):40 09*:%90 094:(90 09>:490 094:&90

'lat #an 6ahan @ +lektro.oresis unit (meliputi 7om6 #an tra2! Po$er supl2 Mikropipet #igital Transilluminator UH

BAB II #ASIL PENGA"A!AN

!a/el 1' #asil Pen*ama(an Isolasi DNA o(o #asil Pen*ama(an

Ke(e)an*an

Setelah sentri.uge ke#ua #engan ke7epatan 44000rpm selama 40 menit8

Barna merah mu#a

Sampel #i homogenkan #engan 7ara #i6olak:6alik se6an2ak *0? Setelah #i sentri.uge #engan ke7epatan 448000 rpm selama 40 menit

Larutan Bening D1'

!a/el %' Pen*ama(an #asil Elek()o.o)ensis DNA o(o #asil Pen*ama(an Ke(e)an*an

Tam6ahkan loa#ing #2e ke#alam sampel #engan per6an#ingan * 6agian sampel D1' #an > 6agian Loa#ing #2e8

Sampel #imasukkan ke #alam sumur 2ang ter#apat #alam gel9 alat siap #ipasang #an #isam6ungkan ke sum6er listrik( elektro.oresis pa#a #a2a 400 ,olt selama &0 menit !

Fragmen DNA yg sempurna, karena tidak terurai Kontrol .ragmen:.ragmen D1' 3ragmen D1' 2ang 6an2ak terurai #an kurang sempurna

PER!AN4AAN DAN JA5ABAN Isolasi DNA 48 -itung jumlah sen2a$a 2ang #imasukka pa#a tahapan kerja nomer *9 44 #an 4)P Bu..er ekstraksi se6an2ak 4 kali ,olume total sampel Q 4 ? Kloro.orm Isoamil 'lkohol se6an2ak R ? ,olume total sampel Q R ? 'lkohol se6an2ak > ? ,olume total sampel Q > ? >8 /elaskan apa .ungsi sen2a$a:sen2a$a 2ang #igunakan #alam isolasi D1' P Bu..er ekstraksi 6erperan #alam proses #estruksi jaringan tanaman sehingga terja#i #egra#asi pa#a D1'8 SDS 6er.ungsi se6agai #etergen 2ang #apat melisis #in#ing sel #an men#enaturasi protein8 Kloro.orm Isoamil 'lkohol mem6antu proses #enaturasi protein 2ang masih menempel pa#a kromosom8 'lkohol #igunakan untuk mempresipitasi asam nukleat8 Elek()o.o)esis DNA 48 <o6a se6utkan manakah 2ang #ise6ut D1' pa#a hasil elektro.oresis an#a P >8 Mengapa D1' han2a #apat #iamati #engan 6antuan sinar UH S /elaskan P D1' 6erukuran sangat ke7il #an sulit untuk #iamati9 oleh karena itu untuk memu#ahkan pengamatan D1' #i$arnai menggunakan +ti#ium 6romi#a8 +ti#ium 6romi#a ini akan 6erinteraksi #engan 6asa #ari molekul D1' #an 6aru akan tampak jika #i 6a$ah lampu UH9 $arnan2a Dorange .luoresen7eD8 &8 'pakah +ti#ium Bromi#e S Bagaimana 7ara kerja +ti#ium 6romi#a #alam proses pe$arnaan D1' S +ti#ium 6romi#a seperti telah #ise6utkan #i atas a#alah pe$arna 2ang #igunakan untuk mempermu#ah pengamatan D1' #alam gel8 +ti#ium 6romi#a akan 6erinteraksi #engan 6asa #ari molekul D1' #an 6aru akan tampak jika #i 6a$ah lampu UH9 $arnan2a Dorange .luoresen7eD8

BAB III PE"BA#ASAN Isolasi DNA Pa#a praktikum isolasi D1'9 #ilakukan isolasi terha#ap tanaman stra$6err28 Isolasi D1' ini #ilakukan melalui 6e6erapa tahap8 Tahap pertama 2ang #ilakukan 2aitu mengisolasi jaringan 2ang ingin #igunakan #engan mengam6il 6e6erapa 6agian #agiang 6uah stra$6err2 2ang #ihan7urkan #i#alam ta6ung8 Tahap selanjutn2a 2aitu melisiskan #in#ing #an mem6ran sel #engan larutan pelisis9 2aitu menggunakan larutan 6u..er ekstraksi8 Untuk mengisolasi jaringan 6uah stra$6err29 maka jaringan tanaman terse6ut 2ang masih memiliki komponen:komponen lengkap perlu #ipisahkan satu #engan lainn2a sehingga 2ang tersisa han2a sel #arah putih8 Karena itu ke #alam ta6ung #i6erikan larutan pelisis sel 2aitu 6u..er ekstraksi seperti 2ang #ipaparkan #i atas 2ang merupakan larutan hipotonis8 Karena larutan terse6ut hipotonis9 maka akan terja#i hemolisis8 Larutan pelisis sel ter#iri atas +DT' (ethylenediamine tetraacetic acid! 2ang akan mem6entuk kompleks (chelate! #engan ion logam9 seperti Mg>T 2ang merupakan ko.aktor D1'se8 Selain itu #alam larutan terse6ut juga ter#apat larutan 1a<L 2ang 6er.ungsi untuk mensta6ilkan larutan sehingga memper7epat reaksi:raksi 2ang akan terja#i pa#a tahapan 6erikutn2a8 Untuk melisiskan mem6ran sel #an mem6ran nukleus sel tanaman 2ang terisolasi ta#i9 #i6erikan pula larutan SDS (Sodium Dodecyl Sulfate! 2ang 6er.ungsi untuk merusak lipi# pa#a mem6ran sel sehingga leukosit han7ur8 Pa#a saat proses #estruksi jaringan tanaman #apat men2e6a6kan #egra#asi pa#a D1' #engan a#an2a akti,itas en;im en#onuklease9 karena itu #igunakan 6u..er ekstraksi 2ang mengan#ung sen2a$a Tris9 +DT'9 <T'B9 potassium asetat9 #an SDS8 Sen2a$a <T'B #an SDS merupakan #etergen9 2ang #apat melisis #in#ing sel #an men#enaturasi protein8 Selain itu <T'B #an +DT' a#alah sen2a$a inhi6itor 2ang #apat mengham6at akti,itas en;im nu7lease8

Kemu#ian sampel terse6ut #ihomogenkan #engan menggunakan ,ortek?8 Setelah #ihomogenkan $arna larutan 6eru6ah menja#i merah8 Sampel 2ang telah homogen kemu#ian #iinku6asikan9 setelah itu #i6eri larutan Potassium asetat #an #ihomogenkan9 setelah homogen2 sampel #isimpan #alam $a#ah 6erisi es8 Potassium asetat a#alah sen2a$a 2ang 6erikatan #engan #e6ris sel #an protein sehingga mem6entuk sen2a$a kompleks #engan <T'B:potassium aesta:protein: #e6ris sel8 Setelah itu sampel #isentri.uga pa#a ke7epatan 448000 rpm selam 40 menit8 Setelah sampel #isentri.uga ter6entuk > lapisan9 .asa atas 6erupa larutan ekstrak #an 6er$arna 6ening9 se#angkan .asa 6a$ah 6erupa en#apan 2ang 6er$arna merah8 3asa atas 2ang kemu#ian #iam6il untuk #igunkan pa#a tahap selanjutn2a8 Tahap ini #ise6ut juga #engan tahap puri.ikasi8 Tahap ini 6ertujuan untuk mem6ersihkan sel tanaman #ari ;at:;at lainn2a8 Kemu#ian9 pa#a tahap 6erikutn2a #igunakan kloro.om@ isoamil al7ohol (>4@4! 2ang 6erperan untuk men#enaturasi protein 2ang masih menempel pa#a kromosom9 se#angkan untuk mempresipitasi asam nukleat #igunakan alkohol 400O8 Pem6erian alkohol 6ertujuan untuk mem6ersihkan D1' #ari pengotor:pengotorn2a8 D1' #alam al7ohol akan terpresipitasi (menggumpal! se#angkan D1' #alam air akan larut9 tetapi protein ti#ak #apat larut #alam air8 Tahap terse6ut merupakan terakhir9 #ise6ut juga tahap presipitasi presipitasi 6ertujuan untuk mengen#apkan protein histon9 sehingga untai:untai D1' ti#ak lagi menggulung (7oiling! #an 6erikatan #engan protein histon9 2ang men2e6a6kan D1' menja#i terlihat8 -al terse6ut #apat terlihat #engan a#an2a 6enang: 6enang en#apan D1' pa#a #asar ta6ung8 Pem/ahasan Elek()o.o)esis UPa#a praktikum elektro.oresis kali ini #igunakan gel agarose karena #engan menggunakan gel agarose teknik 2ang #igunakanpun 7ukup se#erhana9 mu#ah penanganann2a #an se#erhana9 selain itu gel agarose mempun2ai kemampuan pemisahan #engan range 2ang 7ukup luas 2aitu mulai %0 p6 (pasangan 6asa! sampai )008000p68 Selainitu penggunaan gel agarose juga mempun2ai keuntungan9 #imana lokasi #ari D1' #alam gel #apat #iamati se7ara insitu #engan menggunakan +ti#ium Bromi#a se6agai pe$arna8 +ti#ium 6romi#e nantin2a akan 6erinteraksi #engan 6asa #ari molekuk D1' #an mem6erikan $arna orange 3loresan7e #i6a$ah lampu UH8

-asil pen2inaran #i6a$ah lampu UH #apat #ilihat 6erupa potongan pita:pita D1'9 2ang mempun2ai .ragmen:.ragmen8Gam6ar pa#a hasil pengamatan kami #itemukan salah satun2a potongan .ragmen pita D1' 2ang 6an2ak terurai #an kurang sempurna karena pengaruh konsentrasi agarose 2ang men2e6a6kan D1' 6ermigrasi9sehingga .ragmen:.ragmenn2a le6ih 6esar8

Ba/ I$ Kesimpulan

D1' juga #apat #iisolasi9 6aik pa#a manusia maupun pa#a tum6uhan8 Pa#a praktikum isolasi D1' #ari tanaman #igunakan jaringan tanaman 2ang mengan#ung se#ikit kontaminan9 2aitu menggunakan #aging 6uah8 Prinsip:prinsip #alam melakukan isolasi D1' a#a >9 2aitu sentri.ugasi #an presipitasi8 Isolasi D1' memiliki 6e6erapa tahapan9 2aitu isolasi jaringan9 #in#ing #an mem6ran sel #ilisiskan9 ekstraksi #alam larutan9 puri.ikasi9 #an presipitasi8 Dari hasil pengamatan #apat #ilihat hasil #ari tahap:tahap 2ang telah #ilakukan8 Isolasi D1' telah 6erhasil #ilakukan8 -al terse6ut #ilihat #engan a#an2a 6enang:6enang D1' 2ang ter6entuk8 Ter6entukn2a 6enang:6enang terse6uut juga merupakan hasil #ari proses tahapan:tahapan 2ang #ilakukan #engan menggunakan larutan sen2a$a:sen2a tertentu8

DA !AR PUS!AKA '7hmma#9 Ben#28 >0408 Isolasi D1'8 http@==$$$8ma7nature87om=>040=0>=isolasi:#na:re.erensi:terper7a2a8html http@==en8$ikipe#ia8org=$iki=D1'Ve?tra7tion ! http@==kirsman)&8$ee6l887om=>=post=>040=04=isolasi:#na 6uah8html287om=>=post=>040=04=isolasi:#na:6uah8html http@==i#8$ikipe#ia8org=$iki=+lektro.oresis (#iakses pa#a tanggal 40 Mei >040!

Lampi)an Gam/a)

P)oses Penuan*an la)u(an ke 0alam sampel 0en*an men**unakan mik)opipe(

Sen()i.u*e

Pipe( Uku)