1

Dr. F. Y. Widodo, M.Kes

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS WIJ AYA KUSUMA
SURABAYA
PENDAHULUAN
PROTEIN: - Biokatalisator
- Mempercepat tercapainya
keseimbangantanpa me-
rubah Keq
- J umlah katalisator tdk
berhub. dg reaktan/produk
A P [A - - - transisi - - - P]
2
Peningkatan Reaksi Kimia:
Peningkatan suhu energi kinetik
meningkat
Katalisator:
- energi aktivasi turun
- tdk merubah G
Kekhususan Enzim
Spesifik: 1 E 1 S (kekhususan absolut)
Mg
2+
-D-glukosa +ATP ADP +glukosa-6-P
Kekhususan relatif: 1 enzim memiliki
beberapa Substrat
contoh: enzim D-Asam amino oksidase
glukokinase
3
Kekhususan tergantung:
- sifat ikatan E-S
- sifat gugus katalitik : - stereospecificity
- regioselectivity
- chemoselectivity
- kofaktor organik
- ion logam
- bentuk komplementer
- muatan listrik
- sifat hidrofilik/hdrofobik dari E/S
Eduar d Buc hne r
He f ound t hat s ugar
was f er ment ed ev en
when t her e wer e no
l i v i ng y eas t c el l i n
t he mi x t ur e
Aspek Khusus:
1. Kekhususan optik: absolut
2. Kekhususan gugus:
- Beberapa enzim hanya bekerja pd gugus kimia tertentu
Contoh: Dehidrogenase alkohol pada alkohol
4
Lock & Key Model
Emil Fischer (1894):
- enzim dan substrat memiliki bentuk yang saling
komplementer satu dg yg lain
- tdk bisa menjelaskan stabilitas dari fase transisi
Induced Fit Model
Daniel Koshland (1958):
- active-site dpt menyesuaikan dg bentuk substrat
Tata Nama Enzim
ase: - S + ase urease, lipase
- jenis reaksi + ase transferase
- S + jenis reaksi + ase aminook-
sidase, laktat dehidrogenase
IUB: - memakai sistem nomor
- kompleks dan membingungkan
5
KLASIFIKASI ENZIM
1. OKSIDOREDUKTASE
S
tered
+ S
teroks
S
teroks
+ S
tered
2. TRANSFERASE
SG + S SG + S
3. HIDROLASE
Mengkatalisis pemecahan hidrolitik dari
CC,
CN, CO, PO
4. LIASE
- Pemecahan tidak dengan cara hidrolisis
- Menghasilkan senyawa berikatan rangkap
5. ISOMERASE
Mengkatalisis perubahan geometrik/struktural pada
suatu molekul
6. LIGASE
Pengikatan 2 substrat dengan menggunakan energi
6
PROSTHETIC GROUPS
- Memiliki ikatan yg erat & stabil dg struktur protein
(kovalen/nonkovalen)
- Contoh: piridoksal fosfat, FMN, FAD, thiamin, biotin
& ion-ion logam (metaloenzim)
KOFAKTOR
- Ikatan bersifat sementara, tdk sekuat prostetic group
- Bisa berikatan dg enzim atau substrat (ATP)
- Terbanyak berupa ion-ion logam (metal-activated
enzyme)
KOENZIM
Recyclable shuttle service atau group
transfer.
Mentransport substrat dari tempat
produksi ke tempat utilisasi.
Menstabilisir substrat pada lingkungan
sel.
Banyak koenzim, kofaktor dan prostetic
group merupakan derivat vitamin B.
NAD/P
7
ISOZIM
Sekelompok enzim yg dpt mengkatalisis reaksi yg sama
Sifat fisik, kimia atau imunologis beda
Banyak ditemukan pada sera & jaringan vertebrata, insekta,
tanaman, dan organisme uniseluler.
Contoh: Laktat dehidrogenase
- dlm hati tikus ><E. coli.
- pada manusia ada beberapa isozim, perubahan
kadar PATOLOGIK
FUNGSI DIAGNOSTIK
Enzim Plasma Fungsional:
- LPL, Kholinesterase, proenzim
hemostasis.
Enzim Plasma Non Fungsional:
- AST=SGOT infark myokard, viral hepatitis
- ALT=SGPT infark myokard, viral hepatitis
- Amilase & Lipase pankreatitis
- -Glutamil Transpeptidase liver diseases
- Laktat dehidrogenase penyakit jantung
- Acid Fosfatase kanker prostat
- Alkali Fosfatase penyakit obstruksi pd hepar,
kelainan tulang
8
KINETIKA ENZIM
J umlah enzim sangat kecil: g atau unit.
Cara mengukur membandingkan kecepatan
reaksi dengan kecepatan enzim murni.
Unit aktivitas enzim:
mikromol substrat yg bereaksi, atau produk yg
terbentuk per satuan waktu.
- IUB 1u = enzim yg mengkatalisis pembentukan
1 mikromol produk per menit
- Aktivitas enzim perubahan kadar substrat
dalam waktu tertentu untuk volume tertentu
(unit/volume).
KECEPATAN REAKSI
S atau P
P Grafik berbelok krn:
- substrat makin berkurang
- product inhibition
S
0 t
9
Kecepatan Reaksi
S/P
Kecepatan sesaat A =B =C
C
- S
Kec. Sesaat: V =Limit
B
t0 t
P
Atau V =Limit
A t
t0 t
d [S] d [P]
V = atau V =
dt dt
S
Kecepatan rata-rata: V
rata rata--rata rata
==
tt
KECEPATAN AWAL
Kecepatan reaksi enzimatik kecepatan awal
Kadar substrat, kadar enzim, suhu, pH dll. hanya dapat
diketahui pada awal reaksi.
b
S/P Kecepatan awal: Vo =tg =
a
A + B C + D
b
[C][D]
G =Go +RT ln
a t
[A][B]
Go: - perubahan energi bebas dalam keadaan standar (bila A =B =C =D)
- tergantung suhu, macam reaksi, sifat reaktan, kadar reaktan.
10
PENGARUH KADAR ENZIM
S V rata-rata
4 unit (mg S/ to
mnt)
I
2 unit
II t
1
1 unit
III t
2
to t
1
t
2
0 1 2 4 unit E
PENGARUH KADAR SUBSTRAT
Vmax C
B Vmax C : Enzim J enuh,
peningkatan
jumlah [S] tidak akan me-
Vmax ningkatkan kecepatan.
A [S]
A: Kadar substrat rendah
B: Kadar substrat sedang
C: kadar substrat tinggi
11
HIPOTESIS MICHAELIS-MENTEN
E harus berikatan dulu ES sebelum P terbentuk
E + S ES E + P
Kecepatan reaksi ditentukan oleh ES E + P
Bila [E] tetap, maka kecepatan pembentukan P tergantung pada kadar
S grafik linier. Kenyataan grafik tidak linier.
Awal reaksi [P] =0.
Kadar [S] selalu lebih besar daripada [E]
1 E hanya punya 1 S.
K1 K3
E + S ES E + P
K2 K4
K1[E][S] +K4[E][P] =K2[ES] +K3[ES] (Awal reaksi [P] =0, jadi [E][P] =0)
K1[E][S] =K2[ES] +K3[ES]
[E][S] K2 +K3 Kecepatan awal reaksi tgt [ES]
= = Km
[ES] K1
PERHITUNGAN V
Vo Vo
Vo =K3[ES] [ES] = dan K3 =
K3 [ES]
Vmax : V dimana semua E sudah mengikat S
[E]
t
=[ES] [E]
t
: kadar enzim total
Vmax
Vmax =K3[ES] =K3 [E]
t
[E]
t
=
K3
[E]
t
=[E] +[ES] [E] =[E]
t
- [ES]
Vmax V (Vmax V)
[E] = =
K3 K3 K3
[E][S] K2 +K3 Vmax V [S]
= = Km X = Km
[ES] K1 K3 [ES]
12
Lanjutan
V
V =K3[ES] K3 =
[ES]
Vmax V [S]
X = Km
V/[ES] [ES]
(Vmax V)[S]
= Km
V
(Vmax V)[S] =Km . V
Km . V =Vmax[S] V[S]
Km . V +V[S] =Vmax[S]
V{Km +[S]}=Vmax[S]
Vmax[S] Persamaan M.M.
V = V dlm hal ini
Km +S
Bila [S] <<Km, penambahan [S] pd Km
Diabaikan, maka:
Vmax[S] Vmax[S] Vmax
V = = = [S]
Km +[S] Km Km
Vmax dan Km keduanya konstan, maka
Vmax
adalah konstan
Km
Bila [S] <<Km, maka V berbanding lurus
dg [S]
Bila [S] =Km
Vmax[S] Vmax[S]
V = = = Vmax
Km +[S] [S] +[S]
Bila [S] >>Km
Vmax[S] Vmax[S]
V = = =Vmax
Km +[S] [S]
Kecepatan reaksi =Vmax
Lanjutan
Km dapat dipengaruhi: - struktur substrat
- suhu
- pH
Km menunjukkan afinitas E thd S
Bila E bekerja thd >1 S, maka utk masing-masing S
punya harga Km sendiri-sendiri
Misalnya, Heksokinase glukosa: 0.15
fruktosa: 1.15
Heksokinase memiliki afinitas thd glukosa >fruktosa
13
MENENTUKAN Km
1. Double Resiprocal/Lineweaver-Burk Plot:
Vmax[S] 1 Km +[S] Km [S]
V = = = +
Km +[S] V Vmax[S] Vmax[S] Vmax[S]
Km 1 1
= X +
Vmax [S] Vmax
1/V
Km Bila 1/[S] =0, maka 1/V =1/Vmax
slope =
Vmax Bila 1/V =0, maka 1/[S] =- 1/Km
1/Vmax
- 1/Km 0 1/[S]
2. Hanes-Woolf Plot 3. Woolf-Augustinson-Hofstee Plot
[S] V
V
slope =- Km slope =- Km
Km
Vmax Vmax
Km
- Km 0 [S] 0 V
[S]
Leonor Michaelis
Maud Menten
14
PENGARUH pH PADA REAKSI ENZIMATIK
R C COOH R C COO
-
R C COO
-
NH
3
+
+H
+
NH
3
+
+OH
-
NH
2
pH <pH isoelektrik pH >pH isoelektrik
S
S pH I pH dimana pd tiap-tiap
t
pH II saat selalu >pH lain
pH optimum (misalnya pH I)
pH III
pH IV
t
LANJ UTAN
- pH >atau <: enzim denaturasi
SH
+
E - pengaruh muatan listrik S & E
100%
E + SH
+
ESH
pH <<: E + H
+
EH
pH >>: SH
+
S + H
+
0 pH< pH opt. pH>pH opt. Perubahan pH KONFORMASI
15
PENGARUH SUHU PADA REAKSI ENZIMATIK
100%
0
O
70
O
S 50
o
60
o
70
o
40
o
80
o
0 t
1
t
2
t
Diatas suhu opt. DENATURASI
Suhu opt. adalah sesuai suhu sel
Dibawah suhu optimum, reaksi
akan meningkat karena kenaikan
energi kinetik molekul-molekul
yang bereaksi.
Suhu opt berubah-ubah terantung
waktu (t
1
& t
2
)
Stabilitas enzim terhadap suhu
dipengaruhi:
- pH
- Kekuatan ionik medium
- Ada tidaknya ligan
PENGARUH INHIBITOR
SIFAT IKATAN:
1. Inhibitor Reversibel: E + I EI
2. Inhibitor Irreversibel: E + I EI
SIFAT KINETIK:
1. Inhibitor Kompetitif
Efek Inhibitor hilang bila [S] ditingkatkan
2. Inhibitor Non Kompetitif
Efek Inhibitor tidak hilang bila [S] ditingkatkan
Inhibitor Reversibel Kompetitif
Non Kompetitif
Inhibitor Irreversibel Non Kompetitif
16
INHIBITOR KOMPETITIF
Selalu Reversibel
Hanya dpt berikatan dg E saja atau S saja, tdk dg ES
EI
K5 K6 [E][I] K6
E Ki = =
K1 [EI] K5
K2 ES E + P Ki : Konst. Disosiasi Kompleks EI
V Tanpa Inhibitor
Vmax
[I]
Dg Inhibitor Km =(1 + ) Km
Vmax Ki
O Km Km [S]
lanjutan
1 Dg Inhibitor 1
V A =-
Tanpa Inhibitor Km
1
1 B =-
Vmax Km
INHIBITOR KOMPETITIF MERUBAH
() Km TAPI TIDAK MERUBAH HAR-
A B 0 1 GA Vmax
[S]
Efek Inhibitor selain tergantung [I] juga tergantung Ki
Bila jumlah [S] diperbesar
[I] [I]
[S]>>Km (1 + ) sehingga Km (1 + ) +[S] [S]
Ki Ki
Vmax [S]
V = =Vmax J ADI, EFEK INHIBITOR DAPAT DIHILANGKAN DENGAN
[S] MENINGKATKAN J UMLAH [S]
17
CARA KERJA
1. INHIBITOR MEMILIKI STRUKTUR MOLEKUL MIRIP SUBSTRAT
INHIBITOR ANALOG SUBSTRAT
I S Contoh:
Suksinat + FAD Fumarat +FADH
2
ENZIM Active Site Penghambat: Malonat, Oksalat, Propionat dan
Glutarat
2. INHIBITOR TIDAK TERIKAT PADA ACTIVE-SITE, TAPI MENGHALANGI
IKATAN S DENGAN E (STERIC HIDRANCE INHIBITOR)
Contoh:
I S - Sulfanilamida mirip PABA, shg menghambat
sintesis as. Folat dalam bakteri.
ENZIM - Fisostigmin mirip asetil kholin (myotikum)
- Asetazolamid (Diamox) mirip dg anhidrase
as. Karbonat.
H
2
CO
3
CO
2
+ H
2
O
INHIBITOR NON KOMPETITIF
INHIBITOR NON KOMPETITIF REVERSIBEL
Dapat berikatan dengan E maupun ES
E + I EI ES + I ESI
Berikatan dengan E pada tempat berbeda dg S
Struktur tidak mirip S
K1 K3
S E ES E + P
E
K2 K4
I
K5 K6 K5 K6
K1
EI ESI
K2
K6 [E] [I] [ES] [I]
Ki = = =
K5 [EI] [ESI]
18
35
lanjutan
V 1 Dg Inh.
Vmax Tanpa Inh. V
Vmax Dg Inh.
Vmax 1 Tanpa Inh.
Vmax
Vmax
1
Vmax
0 Km [S] 1 0 1
Km [S]
INHIBITOR NON KOMPETITIF REVERSIBEL TIDAK MERUBAH KM,
TAPI MERUBAH/MENURUNKAN Vmax
Karena Vmax = K
3
[E
t
], maka Inhibitor Non Kompetitif Reversibel
seakan-akan menurunkan [E] yang aktif.
36
INHIBITOR NON KOMPETITIF IRREVERSIBEL
Merubah konformasi seluruh enzim (Hg, Ag, Ba), atau merubah
konfigurasi active site (derivat fosfofluoridat), sehingga enzim
menjadi inaktif.
Sulit dibedakan dengan Inhibitor non Kompetitif Reversibel.
Menurunkan harga Vmax, tetapi tidak merubah harga Km
19
REAKSI DG LEBIH DARI 2 SUBSTRAT
Merupakan sebagian besar reaksi Biokimia.
1. Reaksi Bi-Bi yang teratur
A B P Q
E EA EAB EPQ EQ E
2. Reaksi Bi-Bi acak
A B P Q
E EA EAB - EPQ EQ E
EB EP
B A Q P
3. Reaksi Ping-Pong
A P B Q
E EA EP E EB EQ E
20
ENZIM ALLOSTERIK
Tidak mengikuti kinetika Michaelis-Menten.
Umumnya Oligomerik (lebih dari 2 sub-unit), tdd
protomer
2
Menunjukkan Kooperativitas, dapat mengikat > 1
molekul S.
Memiliki tempat ikatan lain, yg disebut tempat ikatan
Allosterik
Tidak semua Enzim Oligomerik adalah Allosterik (laktat
dehidrogenase).
Beberapa Enzim punya sub-unit Katalitik dan sub-unit
Regulatorik.
Enzim Allosterik Multi Ligan (S, I, Aktivator dll.)
Kooperativitas: pengikatan 1 S mempermudah
pengikatan S berikutnya.
ENZIM ALLOSTERIK
Sub-Unit Katalitik V Allosterik
M.M
Sub-Unit
Regulatorik
[S]
Misalnya, 1 E dapat mengikat 4 molekul S:
[ES] [ES
3
]
E + S ES K1 = ES
2
+ S ES
3
K3 =
[E] [S] [E] [S]
[ES
2
] [ES
4
]
ES + S ES
2
K2 = ES
3
+ S ES
4
K4 =
[ES] [S] [E] [S]
21
41
ENZIM ALLOSTERIK
1 Koop. pos. Rumus Koop. Pos. tercapai bila
V Tdk ada koop. K4 >>>K3 >>K2 >K1
Koop. neg.
0 1
[S]
Koop. neg.: pengikatan 1 molekul S akan menghambat pengikatan molekul S
berikutnya (K4 <K3 <K2 <K1)
Vmax [S]
n
n: J umlah tempat ikatan S per molekul E
V =
K +[S]
n
GARIS HILL
V (K +[S]
n
) =Vmax [S]
n
V
V.K +V[S]
n
=Vmax [S]
n
Log
V.K =Vmax [S]
n
- V[S]
n
Vmax
V.K =(VmX V) [S]
n
n =tg
V.K
=[S]
n
(Vmax V)
V [S]
n
Log [S]
(Vmax V) K
V
Log =n Log [S] Log K
(Vmax V Garis Hill
22
KESIMPULAN
Enzim Allosterik punya tempat ikatan dg substrat (active-
site) dan tempat ikatan Allosterik
Pengikatan pada tempat Allosterik perubahan konformasi
tempat ikatan S (tempat ikatan isosterik) laju reaksi akan
naik/turun (aktivasi/inhibisi)
Pengaruh tersebut dpt tertuju pd pengikatan S (thd K), pd
proses katalisis (thd Vmax) atau thd keduanya
Tempat Allosterik hanya dpt mengikat senyawa dg konfigu-
rasi yg cocok (kekhususan sterik)
ASPARTAT TRANSKARBAMILASE (ATC-ASE)
L Aspartat + Karbamoilfosfat KarbamoilLAspartat +
As. Fosfat
Inh. Komp. =Sistidintrifosfat (CTP); Aktivator =ATP
ATC-Ase bersifat kooperativitas +kurva sigmoid
Hg
2+
=- Efek kooperativitas ATC-Ase, efek CTP dan efek ATP
hilang.
- Enzim tetap aktif kurva hiperbola
- Enzim terdisosiasi jadi 2 sub-unit, besar dan kecil:
Besar =efek enzimatik
Kecil =mengikat CTP/ATP
Ternyata, ATC-Ase tdd 12 sub-unit, 6 sub-unit katalitik
tergabung menjadi 2 trimer, 6 subunit regulatorik tergabung
menjadi 3 dimer
23
45
ASPARTAT TRANSKARBAMOILASE
Peristiwa Allosterik adalah salah satu mekanisme
pengendalian utk homeiostasis
V
Sub-Unit Katalitik E +A E E +I
Sub-Unit Regulatorik
[S]
LAJU REAKSI ENZIMATIK
A B C D E F
E
1
E
2
E
3
E
4
E
5
Pengendalian:
a. Pengendalian sintesis/degradasi enzim
b. Pengendalian aktivitas katalitik enzim
Pengendalian Sintesis Enzim
Berjalan secara genetis, pada Prokariota
1. Represi:
a. typhimurium:
- penambahan His akan enzim biosintesis His.
- penambahan Leu akan enzim biosintesis Leu.
- represi umpan balik produk.
24
REPRESI
b. E. coli yg tumbuh pd sumber C selain glukosa
(X) glukosa menekan enzim katabolisme X
represi katabolit
2. Induksi:
- E. coli +laktosa mula-mula tdk bisa berbiak krn
enzim (-). Tapi kmd E. coli dpt memproduksi enzim
pemecah laktosa.
- Laktosa =induktor
Enzim =enzim induksibel (inducible enzyme)
Enzim konstitutif selalu ada dlm setiap keadaan.
Pengendalian Degradasi Enzim
Pada eukariota
Enzim adalah protein dpt dihidrolisis oleh enzim
proteolitik
Triptofan oksigenase bila triptofan peningkatan
jumlah enzim karena degradasi enzim
Pengendalian Aktivitas Katalitik
a. Pengendalian melalui modulasi Allosterik
(inhibisi/aktivasi Allosterik)
b. Pengendalian melalui perubahan kovalen
Fosfo Enzim Defosfo Enzim
Salah satu mungkin aktif, mungkin
inaktif.
Fosfo Enzim : glikogen fosforilase
Defosfo Enzim: glikogen sintetase
Donor fosfat:
Eukariota : E + ATP E + ADP (NDP)
Prokariota: E + ATP E-AMP (E-NMP) + PPi
25
ATP ADP e
1
=protein kinase
e
2
=prot. fosfatase
e
1
E EP Prot. Kinase & prot.
e
2
fosfatase di kontrol
oleh hormonatau
Pi H
2
O jar. Saraf.
C. Pengendalian Mel. Mek. Proenzim-Enzim
Pepsinogen Pepsin TripsinogenTripsin
Pre E1 E1 Kaskade, mis. pd sistem
pembekuan darah.
Pre E2 E2
Pre E3 E3
PENGENDALIAN ALUR METABOLIK
A B C D E F
E
1
E
2
E
3
E
4
E
5
Hukum Aksi Massa: Reaksi berhenti bila tercapai keseimbangan.
[F]
K = K = K
1
. K
2
. K
3
. K
4
. K
5
[A] Harga K tetap pada P dan T yang yang tetap.
Pengendalian laju reaksi tidak merubah K, hanya
mempercepat/memperlambat tercapainya
keseimbangan.
A B C D E F
Reaksi berjalan terus A akan habis.
26
MEKANISME DASAR
X X dan Y: Senyawa diluar jalur
(-) metabolisme
A B C D E
(+) (+) (-)
Y
Pengendalian umpan balik (-) : E
Allosterik
Pengendalian umpan maju (+): A
Mekanisme: - Pengendalian Sintesis Enzim
- Pengendalian Allosterik
Represor: senyawa akhir
Induktor: senyawa awal
PENGENDALIAN ALUR METABOLIK
E
1
E
2
E
3
E
4
A B C D E
Represi terkoordinasi, E adalah represor utk Enzim E1, E2, E3, E4.
E
1
E
2
E
3
E
4
A B C D E
+
+
+
+
Induksi terkoordinasi, P adalah induktor dari E
1
, E
2
, E
3
, E
4
Represi Alur Biosintetik/Anabolik, Induksi Alur Degradasi/Katabolik
27
PENGENDALIAN ALUR METABOLIK DIVERGEN
(-)
e5 e6
D1 E1 F1
e1 e2 e3 (-)
A B C
(-)
e4 e7 e8
` D2 E2 F2
(-)
F1 & F2 menghambat e3 & e4 C menumpuk
F1 & F2 menghambat e1 reaksi berhenti
F1 cukup menghambat e1 reaksi berhenti
F1 cukup tapi F2 belum cukup F1 menghambat D1
PENGENDALIAN UMPAN BALIK GANDA
a. Represi Multivalen: e1 akan berhenti bila F1 & F2 berlebih. Salah satu
berlebih e1 belum berhenti
b. Multiple Feedback Inhibition:
1. Hambatan umpan balik multivalen
2. Hambatan umpan balik kumulatif
F1 dan F2 dapat menghambat e1
Hambatan total: Hambatan F1 +Hambatan F2
3. Hambatan umpan balik kooperatif
Hambatan total lebih besar daripada F1 +F2
4. Mekanisme enzim ganda
e1 e1: dihambat F1
A B e2: dihambat F2
e1
Hambatan maximal tercapai bila F1 maupun F2 telah berlebih.
28
PENGENDALIAN ALUR METABOLIK
KONVERGEN
(-)
e1 (-) e2
A B C
(+) e3
G H I
(+) e7 e8
e4 e5 e6
D E F
(-)
(-)
PENGENDALIAN ALUR METABOLIK 2 ARAH
Glukosa Glukosa - 6 P
Kekanan: Glukosa + ATP Glukosa 6 P + ADP
Heksokinase
Kekiri : Glukosa 6 P +H
2
O Glukosa + Pi
Glukosa - 6 Phosphatase
ATP ADP
Heksokinase
Glukosa Glukosa - 6 P
Glukosa - 6 - Phosphatase
Pi H
2
O
29
=-
e1 e2 e3 e4 =+
A B C D E
e5
Terima Kasih
Selamat Belajar