Iqmal Kinetika 11 Reaksi Enzimatis

11/20/2013
1
KINETIKA KIMIA
Kinetika Reaksi Enzimatis
LABORATORIUM KIMIA FISIKA
Jurusan Kimia - FMIPA
Universitas Gadjah Mada (UGM)
Drs. Iqmal Tahir, M.Si.
LaboratoriumKimia Fisika,, J urusanKimia
Fakultas Matematika danIlmuPengetahuanAlam
Universitas GadjahMada, Yogyakarta, 55281
Tel : 085786877886; Fax: 0274-545188
Email :
iqmal@ugm.ac.id atau iqmal.tahir@yahoo.com
Website :
http://iqmal.staff.ugm.ac.id
http://iqmaltahir.wordpress.com
Enzim sebagai katalis
Enzimmerupakankatalis biologis. Kemampuankatalisis enzim
adalahspesifik.
Secara struktural kebanyakanenzimmemiliki massa molekul besar
(10,000 to 10
6
amu) danmemiliki bentuk yang spesifik.
Kemampuankatalisis enzimadalahspesifik. Substrat dapat
melakukanreaksi pada daerahsitus aktif pada enzimdenganjalan
menempatinyadankemudianreaksi dapat langsungterjadi. Produk
reaksi selanjutnya meninggalkanenzim.
2
Jurusan Kimia FMIPA, UGM
Hanya substrat yang tepat menempati situs aktif saja yang bisa
mengalami reaksi.
J ika suatumolekul terikat pada enzimsehingga substrat lain tidak
dapat menempatinya, maka situs aktif tersebut dikatakanterhalang
danmolekul tersebut dikatakansebagai katalis inhibit (atauenzim
inhibitor)
Mekanisme molekular
reaksi enzimatis
3
Profil energetika reaksi
J ika suatumolekul terikat pada enzimsehingga substrat lain tidak
dapat menempatinya, maka situs aktif tersebut dikatakanterhalang
danmolekul tersebut dikatakansebagai katalis inhibit (atauenzim
inhibitor)
4
Pada inhibisi kompetitif, substrat dan
inhibitor bersaingmenempati situs
aktif pada enzim
Inhibisi non kompetitif terjadi jika inhibitor
menyerangenzimtapi tidak pada daerah
situs aktifnya. Penyerangan tersebut akan
mengubahbentuk 3D enzimsehingga
enzimmenjadi tidak aktif
Kinetika reaksi enzimatis
Reaksi enzimatis termasuk reaksi yang melibatkan reaksi pra
kesetimbangan dengan persamaan reaksi :
E +S P +E E =enzim
S =substrat
P =produk reaksi enzimatis.
Dalam hal ini E berfungsi sebagai katalis karena tidak mengalami
perubahan, sedangkan S terkonversi menjadi P.
Data eksperimen : Laju pembentukan hasil reaksi tergantung kepada
konsentrasi enzim. J adi meskipun reaksi dapat ditulis S P harus namun
5
sebenarnya enzim terlibat di dalam mekanisme reaksi tersebut.
Mekanisme reaksi sederhana dituliskan sebagai berikut
(ES) menyatakan intermediet yang merupakan kombinasi aktif dari enzim
dengan substrat yang dapat berubah menjadi hasil reaksi dengan konstanta
laju reaksi tingkat satu k
2
atau terurai menghasilkan material asal dengan
konstanta laju reaksi k
-1
.
Laju reaksi pembentukan hasil reaksi dirumuskan sebagai :
Untuk menyelesaikan persamaan tersebut perlu diketahui konsentrasi
substrat yang terikat sebagi (ES). Laju pembentukan ES dirumuskan :
Suku pertama pada persamaan tersebut menyatakan pembentukan
6
p p p y p
(ES) dari E dan S
Suku kedua menyatakan perubahan menjadi E dan S kembali
Suku ketiga menyatakan perubahan menjadi hasil.
Digunakan pendekatan keadaan tunak (steady state) :
laju pembentukan ES =laju peruraian ES
11/20/2013
2
Profil konsentrasi spesies setiapsaat pada keadaansteady state vs non SS
7
Dengan pendekatan keadaan steady maka untuk =0 menghasilkan
dan
[E] dan [S] berturut-turut adalah konsentrasi enzim dan substrat bebas.
Apabila [E]
0
adalah konsentrasi enzim total, maka [E] +[(ES)] =[E]
0
J umlah [E]
0
selalu tetap selama reaksi berlangsung.
Mengingat penambahan enzim hanya sedikit, maka konsentrasi total
substrat mendekati konsentrasi substrat yang tidak berikatan dengan enzim,
[S] +[(ES)] mendekati [S] dengan demikian :
atau
L j b t k d k k ik ti
8
Laju pembentukan produk akan mengikuti persamaan :
Didefinisikan konstanta Michaelis-Menten sebagai :
maka laju reaksi menjadi
Laju enzimolisis bergantung secara linier terhadap jumlah enzim yang
ditambahkan dan terhadap jumlah substrat yang ada.
Persamaan laju reaksi enzimatis :
Apabila dP/dt =v
0
maka persamaan dapat diubah
v
0
=kecepatan awal
9
Nilai v
0
umumnya linear dan
mengikuti order satu.
Nilai v
0
ditentukan dari grafik
konsentrasi versus waktu pada
bagian linearitas sebagai harga
slope.
Didefinisikan :
Kecepatan maksimum V
max
Bilangan pembalikan (turn over number) untuk k
-1
Persamaanlaju reaksi menjadi :
10
Dibuat kurva 1/v
0
versus 1/[S] maka
intersep =1/V
max
slope =K
m
/V
max
.
Nilai v
o
akan berubah sesuai dengan
variasi nilai konsentrasi S.
Akandihasilkandata
11
Akandihasilkandata
v
o
dan [S].
Kurva 1/v
0
versus 1/[S] disebut sebagai
kurva Lineweaver-Burk
12
11/20/2013
3
Arti fisik
HubunganV
max
danKm
V
max
laju maksimal saat S >>K
M
13
K
M
Konstnata Michaelis,
konsentrasi substrat
saat v = V
max
Arti fisik :
Model Kurva Michaelis-
Menten
J ika [S] <K
M
, maka
lajureaksi fungsi dari [S]
J ik [S] >K k
14
J ika [S] >K
M
, maka
lajureaksi tidak tergantung
dari [S]
Arti fisik Km
K
M
tergantung kepada jenis substrat dan kondisi lingkungan seperti pH, T
dan kekuatan ionik
1 2
M
1
k k
K
k
1
ES
1
[E][S]
[ES]
k
K
k

15
K
M
sama dengan K
d
dari komplek ES jika k
2
<<k
-1
Nilai K
M
yang tinggi menunjukkan ikatan lemah, nilai K
M
yang rendah
menunjukkan ikatan yang kuat
K
M
menunjukkan afinitas komplek ES hanya jika k
-1
>>k
2
1 1
[ ]
Tabel nilai Km
16
Arti fisik V
max
Range nilai V
max
lebar
V
max
menunjukkan turnover number (k
cat
)
enzim
J umlah molekul substrat diubah menjadi
produk persatuan waktu (s
-1
)
17
Turnover number (k
cat
) sama dengan k
2
pada:
V
max
=k
2
[E]
T
max
2
T
[E]
V
k
Arti fisik efisiensi katalisis
Dalam kondisi fisiologis kebanyakan enzim tidak dalam keadaan jenuh
substrat
[S]/K
M
antara 0.01 dan 1. Saat [S] <<K
M
[E] sama dengan [E]
T
0 T
M
[ ][ ]
cat
k
V S E
K
18
k
cat
/K
M
adalah konstanta laju untuk interaksi S dan E dan dapat
digunakan sebagai pengukur efisiensi katalitik (catalytic effciency)
k
cat
/K
M
diartikan preferensi enzyme untuk substrat berbeda
11/20/2013
4
Tabel nilai Km/Kcat
19
Tabel nilai Km/Kcat
20
Analisis kinetika reaksi enzimatis
Analisis melibatkanmonitoring ikatan enzim-substrate.
Dilakukan menggunakan teknik spektroskopi (UV-Vis, fluoresen)
- Khususnya enzim yang mengandung gugus prostetik berwarna
- Tryptophan synthase (piridoksal fosfat)
21
Latihan
Data reaksi Diubah1/[S] dan1/[V]
Dibuat kurva 1/[S] vs1/[V]
22
Perhitungan

Iqmal Kinetika 11 Reaksi Enzimatis

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Iqmal Kinetika 11 Reaksi Enzimatis

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

11/20/2013

Anda mungkin juga menyukai