PENGARUH WAKTU INKUBASI PADA t=0 DAN t=20 MENIT TERHADAP

NILAI VMAKS, KM DAN STABILITAS KOMPLEKS ENZIM SUBSTRAT

Oleh,
Ni Putu Satya Darma Patni (1313031040)
Jurusan Pendidikan kimia, FMIPA, Universitas Pendidikan Ganesha
email: satya.darmapatni@yahoo.com

Abstrak

Enzim mempengaruhi laju reaksi saat kesetimbangan tercapai, tetapi tidak

mempengaruhi kesetimbangan total dari reaksi. Tidak seperti reaksi yang tidak dikatalis,
laju reaksi awal (V0) dari reaksi yang dikatalisis oleh enzim meningkat dengan
bertambahnya konsentrasi substrat hingga tercapai keadaan dimana penambahan substrat
tidak lagi meningkatkan laju reaksi awal. Keadaan dimana laju reaksi awal maksimum
(Vmaks) dicapai pada kondisi substrat jenuh. Kecepatan reaksi secara keseluruhan tergantung
pada kecepatan disosiasi produk dari enzim, dan penambahan substrat tidak akan
mempengaruhi Vo. Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk menentukan kadar enzim
berdasarkan kecepatan reaksi yang dikatalisnya dan untuk menentukan V maks dan KM untuk
waktu 20 menit dan 0 menit yang ditentukan dengan menggunakan grafik hubungan antara
laju reaksi enzimatis dan konsentrasi substrat melalui pengukuran absorbansi. Berdasarkan
percobaan yang telah dilakukan dapat diperoleh hasil bahwa harga Vmaks dari reaksi
enzimatik antara tripsin dan kasein adalah 1,718 μmol/menit dan tetapan Michaelis-Menten
dari enzim tripsin dalam percobaan ini diperoleh KM = 0,2576 mg/mL.
Kata kunci : katalis, substrat, Vmaks, tetapan disosiasi(KM)

Abstract

Enzymes affect reaction rates when equilibrium is reached, but did not affect the total
equilibrium of the reaction. Unlike the non- catalyzed reaction , the initial reaction rate (V 0)
of the reaction catalyzed by the enzyme increased with increasing substrate concentration
until a state is reached where the addition of the substrate is no longer improve the initial
reaction rate. Circumstances where the maximum initial reaction rate (V max) achieved at
substrate saturation conditions. Overall reaction speed depends on the speed of the
dissociation products of the enzyme, and the addition of the substrate will not affect Vo. The
purpose of this lab is to determine the levels of enzymes based on the speed of reaction
dikatalisnya and to determine Vmax and KM for 20 minutes and 0 minutes is determined by
using the graph the relationship between the rate of the enzymatic reaction and the substrate
concentration by measuring the absorbance. Based on experiments that have been done to
the result that the price of Vmax of the enzymatic reaction between trypsin and casein was
1,718 μmol / min Michaelis - Menten constant and of the enzyme trypsin in these
experiments was obtained KM = 0.2576 mg/mL.

Keywords : catalyst, substrate, Vmax, the dissociation constant(KM)

1
PENDAHULUAN
Reaksi-reaksi kimia dalam tubuh
secara tidak langsung dipengaruhi oleh
enzim. Enzim merupakan biokatalis yang
dapat meningkatkan kecepatan reaksi
dalam sistem biologi dan enzim tidak
mengalami perubahan selama reaksi
(Redhana, 2010). Seperti halnya katalis,
enzim mempengaruhi laju reaksi saat
kesetimbangan tercapai, tetapi tidak
mempengaruhi kesetimbangan total dari
reaksi. Enzim membantu reaksi dengan
menyediakan jalur reaksi yang memiliki
energi aktivasi rendah untuk transisi
substrat menjadi produk dibandingkan
dengan proses tanpa katalisis (Tika, 2010).
Enzim sebagai katalisator
mempunyai sifat-sifat seperti katalis pada
umumnya. Enzim ikut bereaksi namun
pada akhir reaksi enzim kembali dalam
bentuk semula. Hal tersebut
mengakibatkan enzim dapat dipakai
kembali setelah melaksanakan
aktivitasnya, sehingga tubuh tidak
memerlukan enzim dalam jumlah besar.
Jumlah atau kadar enzim yang kecil
tersebut menimbulkan kesulitan tersendiri
bagi kita untuk mengukur kadar enzim,
sehingga memerlukan teknik yang rumit.
Secara klinis, pengukuran kadar enzim
sangat penting untuk dilakukan (Tika,
2010).
Tanpa adanya enzim, maka reaksi
dapat berlangsung dengan sangat lambat
dan sulit. Dengan adanya enzim,
kecepatan reaksi dapat ditingkatkan
sampai 107 kali lipat. Reaksi yang
dikatalisis oleh enzim dapat berlangsung
pada kondisi yang biasa (suhu di bawah
100o C) dengan tekanan atmosfer dan pH
yang netral. Enzim bersifat sangat spesifik
terhadap substrat yang sesuai dengannya
(Tika,2010).
Tidak seperti reaksi yang tidak
dikatalis, laju reaksi awal (V 0) dari reaksi
yang dikatalisis oleh enzim meningkat
dengan bertambahnya konsentrasi substrat
hingga tercapai keadaan dimana
penambahan substrat tidak lagi
meningkatkan laju reaksi awal. Keadaan
dimana laju reaksi awal maksimum
(Vmaks) dicapai pada kondisi substrat jenuh.
Pengamatan ini, seperti yang terjadi pada
reaksi enzimatis atau hidrolisis substrat
tunggal, telah dijelaskan dengan postulat
reaksi sebagai berikut, dimana E, S, dan P
masing-masing adalah enzim, substrat,
dan produk reaksi membentuk
kesetimbangan sebagai berikut
(Tika,2010).
k1 k3
E+S ES E+P
k2 k4
Reaksi berlangsung melalui
pembentukan kompleks enzim-substrat
(ES). Kompleks ES dapat berdisosiasi lagi
untuk membentuk enzim ataupun substrat
atau membentuk enzim dan produk.
Konstanta kecepatan K1, K2 dan K3
menunjukkan kecepatan yang
berhubungan dengan masing-masing tahap
proses katalitik. Dari pengamatan terhadap
beberapa sifat-sifat enzim, diketahui
bahwa kecepatan awal (Vo) pada
konsentrasi substrat yang rendah akan
berbanding lurus dengan [S]. Namun pada
kondisi dimana kecepatan substrat yang
tinggi, maka akan memiliki nilai
maksimum dimana kecepatan tidak lagi
bergantung pada substrat. Bila semua
enzim berada dalam keadaan ES (enzim
dijenuhkan oleh substrat atau semua sisi
aktif enzim sudah mengikat substrat),
maka laju reaksi akan mencapai nilai
maksimum (Vmaks). Kecepatan disosiasi
produk dari enzim dan penambahan
substrat lebih lanjut tidak akan
mempengaruhi V0 (Tika, 2010).
Pengaruh konsentrasi substrat adalah
jika konsentrasi substrat dinaikkan dua
kali, maka kecepatan reaksi awal (Vo)
meningkat dua kali lipat. Pada konsentrasi
tinggi, peningkatan konsentrasi substrat
akan menyebabkan perubahan Vo sangat
2
kecil dan pada konsentrasi substrat yang KM = tetapan Michaelis-Menten (mol
sangat tinggi, peningkatan konsentrasi perliter)
substrat tidak akan mempengaruhi harga Vmaks = Kecepatan maksimum enzim.
Vo (harga Vo konstan). Keadaan ini Sering KM didefinisikan sebagai
disebabkan karena enzim telah dijenuhkan tetapan disosiasi reaksi yang dikatalisis
oleh substrat. Kecepatan reaksi meningkat oleh enzim. Pada reaksi sederhana dapat
sesaat konsentrasi substrat ditingkatkan dilihat.
sampai pada suatu titik dimana enzim
k2 [E] [S] k2
dikatakan jenuh dengan substrat. ES E + S Maka KS = =
Kecepatan reaksi secara keseluruhan k1 [ES] k1
tergantung pada kecepatan disosiasi
produk dari enzim, dan penambahan k2 + k3 k2 + k3
substrat tidak akan mempengaruhi V o. Plot Karena KM = Maka KS =
Vo terhadap [S] berbentuk hiperbolik k1 k1
seperti kurva berikut (Tika,2010).
Jadi KM akan selalu sama atau lebih besar
daripada Ks. Dilihat dari persamaan
V maks [ S ] 1 KM 1 1
V=
KM + [S]
maka =
V ( ) +
V maks [ S ] V maks
Persamaan diatas identik dengan
persamaan garis lurus y = ax + b.
1 1 K 1
y= ; x = ; a = M dan b =
V [S] V maks V maks

Gambar 1. Hubungan Konsentrasi

Substrat dan V0

Michaelis dan Menten menyatakan

bahwa reaksi enzimatis pada berbagai
konsentrasi substrat mengalami dua fase:
1) ketika [S] rendah, daerah aktif enzim
tidak semuanya terikat dengan enzim, 2)
pada [S] tinggi, sisi aktif yang telah terikat
seluruhnya dengan substrat. Pada saat ini
enzim telah bekerja dengan kapasitas
penuh. Adapun persamaan Michaelis-
Menten secara matematis dapat dituliskan:
V maks [ S ]
Vo =
KM +[S]
Keterangan:
Vo = laju awal
[S] = konsentrasi substrat
Gambar 2. Hubungan 1/Vo dan 1/[S]
plot Lineweaver-Burk
Persamaan tersebut dinyatakan oleh
Lineweaver-Burk. Berdasarkan gambar
dinyatakan persamaan garis lurus dengan
1
V o adalah
titik potong pada sumbu
1 1
V maks , titik potong pada sumbu [ S]

3
 1 disertai pengadukan yang kuat. Larutan
− didiamkan selama 30 menit dalam air es
adalah
K M . Kemiringan garis sama
KM
dengan V maks . Plot Lineweaver-Burk
juga sangat berguna untuk menentukan
jenis inbibisi yang terjadi pada reaksi
enzimatis.
Adapun tujuan dari praktikum ini
adalah untuk menentukan kadar enzim
berdasarkan kecepatan reaksi yang
dikatalisnya dan untuk menentukan Vmaks
dan KM untuk waktu 20 menit dan 0 menit
yang ditentukan dengan menggunakan
grafik hubungan antara laju reaksi
enzimatis dan konsentrasi substrat.
METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan
Adapun alat yang digunakan terdiri
10 buah tabung reaksi lengkap dengan
raknya, 1 buah batang pengaduk, 3 buah
gelas kimia, 1 buah gelas ukur 5 mL, 2
buah pipet tetes, 1 buah kaca arloji, 1 buah
termometer, 1 buah corong, 1 buah pipet
volumetri 2 mL, alat sentrifuge, dan 1
buah Erlenmeyer 100 mL. Sedangkan
bahan yang digunakan terdiri dari larutan
TCA 20%, larutan Kasein 1%, Buffer
posfat 0,1M (pH=8), larutan Tripsin,
larutan NaOH 0,5 M, Reagen Folin
Coicalteu, aquades, kertas saring, dan
indikator universal.
Prosedur Kerja
Waktu inkubasi 20 menit
Sebanyak 0,1; 0,5; 1; 3; 5 mL kasein
1% diikubasi dalam masing-masing
tabung reaksi selama 5 menit pada 35 0C.
Kemudian secara berturut-turut
ditambahkan larutan buffer fosfat 5,9; 5,5;
5,0; 3; 1 mL dan larutan 1 mL tripsin dan
diaduk secara perlahan-lahan. Selanjutnya
larutan diinkubasi selama 20 menit pada
penangas air dengan suhu 35oC dihitung
mulai tripsin ditambahkan. Reaksi
dihentikan dan ditambahkan 3 mL TCA
20% ke dalam masing-masing tabung
agar pengendapan berlangsung sempurna.
Larutan disentrifugasi selama 10 menit,
lalu disaring. Filtrat yang diperoleh
dikerjakan menurut cara ANSON.
Filtrat diambil masing-masing sebanyak 2
mL filtrat (dari percobaan di atas)
dicampur dengan 4 mL larutan NaOH 0,5
M. Selanjutnya ditambahkan 1 mL larutan
Folin-Ciocalteu, lalu diaduk. Didiamkan
selama 10 menit. Masing-masing larutan
yang berada pada tabung reaksi diukur
absorbansinya dengan menggunakan
spektrofotometer.
Waktu t = 0 menit
Ke dalam tabung reaksi yang masing-
masing berisi pengaduk, dimasukkan
larutan buffer dan larutan enzim,
kemudian ditambahkan masing-masing 3
mL larutan TCA 20% dan diaduk kuat dan
terakhir ditambahkan larutan kasein 1%.
Selanjutnya Inkubasi selama 20 menit
dalam penangas dengan suhu 35oC.
dihitung mulai enzim ditambahkan.
Kemudian diambil sebanyak 2 mL filtrat
(dari percobaan di atas) dicampur dengan
4 mL larutan NaOH 0,5 M. Selanjutnya
ditambahkan 1 mL larutan Folin-
Ciocalteu, lalu diaduk. Didiamkan selama
10 menit. Masing-masing larutan yang
berada pada tabung reaksi diukur
absorbansinya dengan menggunakan
spektrofotometer.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Percobaan ini dilakukan
pengujian kinetika reaksi enzim. Kinetika
reaksi enzim ini ditentukan dengan harga
Vmaks dan Km. Harga Vmaks dan Km ini
ditentukan dengan cara membuat grafik
hubungan antar laju reaksi terhadap
konsentrasi substrat. Enzim yang
digunakan pada praktikum ini adalah
tripsin, sedangkan substrat yang
digunakan adalah kasein. Tripsin
merupakan enzim proteolitik, dimana
enzim ini akan mengkatalisis hidrolisis
4
ikatan peptida. Ikatan peptida yang pecah
dalam kasein terletak pada sisi karboksil
dari residu lisin atau arginin yang
bermuatan.
Praktikum ini diberikan dua
kontrol waktu yang berbeda yaitu pada t =
0 dan t = 20 menit, juga komposisi tabung
yang berbeda pula. Untuk masing-masing
waktu disediakan lima buah tabung reaksi
(I-V). Dalam tabung-tabung tersebut
digunakan konsentrasi substrat yang
berbeda-beda. Tabung dengan inkubasi 0
menit berfungsi sebagai kontrol terhadap
tabung dengan inkubasi 20 menit.
Waktu Inkubasi 20 menit
Waktu inkubasi 20 menit
dilakukan dengan memasukkan larutan
kasein pada kelima tabung (komposisi
disesuaikan dengan tabel 1). Larutan ini
diaduk dan diinkubasi selama 5 menit
pada penangas air dengan suhu yaitu 35 oC
(gambar). Hal ini bertujuan untuk
mengkondisikan substrat pada suhu yang
optimal yaitu pada suhu tubuh normal
(35oC). Setelah penambahan kasein
dilanjutkan dengan penambahan buffer
fosfat dan tripsin, Penambahan buffer
fosfat bertujuan untuk mengkondisikan
larutan agar konsentrasi substrat pada tiap-
tiap tabung berbeda-beda sehingga
nantinya dapat dibuat plot laju reaksi
terhadap konsentrasi substrat. Sedangkan
penambahan larutan tripsin (enzim) ini
bertujuan untuk mengkatalisis reaksi
hidrolisis dari ikatan peptida yang terdapat
dalam larutan kasein. Ikatan peptida yang
dipecah oleh tripsin ini merupakan ikatan
yang terletak pada sisi karboksil residu
lisin dan arginin. Penambahan buffer
fosfat dan enzim menyebabkan larutan
berwarna kuning transparan. Setelah
penambahan enzim tripsin, dilanjutkan
dengan proses inkubasi selama 20 menit
dalam penangas air 35oC. Pada saat proses
inkubasi ini, maka enzim akan terikat pada
sisi aktif substrat kasein.
Reaksi dihentikan dengan
penambahan TCA 20% sebanyak 3 mL ke
dalam masing-masing tabung.
Penambahan TCA 20% menyebabkan
warna larutan semakin keruh. Larutan
semakin keruh dan terbentuk endapan
semakin banyak dari tabung I-V.
Penambahan TCA ini mampu
menghentikan aktivitas dari enzim dan
substrat kasein. Hal ini karena larutan
TCA bersifat asam, sehingga mampu
menyebabkan terjadinya denaturasi baik
pada kasein maupun pada tripsin (enzim).
Hal inilah yang menyebabkan
terbentuknya endapan setelah penambahan
larutan TCA. Selain menyebabkan
denaturasi protein pada kasein dan tripsin,
penambahan larutan TCA juga
menyebabkan pH larutan menjadi
menurun (asam). Hal ini menyebabkan
kompleks substrat yang terbentuk menjadi
tidak stabil dan aktivitas enzim dalam
mengkatalisis reaksi hidrolisis kasein
menjadi terhenti akibat pH yang semakin
menurun karena enzim tripsin dapat
bekerja optimal pada pH 8,0. Setelah
penambahan TCA, kelima tabung
dimasukkan pada penangas air es selama
30 menit agar pengendapan protein dan
tripsin dapat berlangsung secara
sempurna.
Setelah 30 menit, pada tabung I,
larutan tetap tidak berwarna, pada tabung
II, larutan agak keruh, pada tabung III,
larutan sudah sangat keruh, pada tabung
IV sudah timbul endapan putih dan pada
tabung V juga terbentuk endapan putih.
Kelima larutan pada tabung ini kemudian
disentrifugasi dan disaring sehingga
diperoleh filtrat yang berwarna bening
kekuningan.
Gambar 3. Filtrat yang berwarna bening
kekuningan
5
 Filtrat yang diperoleh dari
masing-masing tabung diuji dengan cara
Anson, yaitu sebanyak 2 mL filtrat dari
masing-masing tabung ditambahkan 4 mL
larutan NaOH 0,5 M dan ditambahkan 1
mL reagen Folin-Ciocalteu. Penambahan
larutan NaOH dan reagen Folin-Ciocalteu
menyebabkan filtrat berwarna biru.
Gambar 4. Filtrat berwarna biru setelah
ditambahkan larutan
NaOH dan reagen Folin-Ciocalteu
Reagen Folin-Ciocalteu dapat
mendeteksi residu tirosin (dalam protein)
karena kandungan fenolik dalam residu
tirosin yang mampu mereduksi reagen
fosfotungstat dan fosfomolibdat menjadi
tungstat dan molibdenum. Warna biru
yang dihasilkan semakin pekat dari tabung
I-V, sehingga tabung I memiliki jumlah
produk yang paling sedikit sedangkan
tabung V memiliki jumlah produk yang
paling banyak. Larutan yang berwarna
biru ini kemudian diukur transmitansinya
menggunakan spektronik 20+ dengan
panjang gelombang 650 nm.
Waktu Inkubasi 0 menit
Prinsip kerja dari waktu inkubasi t
=0 hampir sama dengan t = 20, hanya
berbeda pada urutan prosedur kerjanya
saja. Pada waktu inkubasi 0 menit, larutan
buffer fosfat dan larutan tripsin
dimasukkan pada tabung reaksi sesuai
dengan komposisi pada tabel 1. Larutan
yang dihasilkan berwarna kuning
transparan. Kemudian, ditambahkan
masing-masing 3 mL larutan TCA 20%
pada tiap tabung. Terakhir dilakukan
penambahan substrat yaitu larutan kasein.
Setelah penambahan larutan kasein mulai
terbentuk larutan keruh. Kelima tabung
selanjutnya diinkubasi pada penangas air
es selama 30 menit selanjutnya
disentrifugasi dan disaring. Filtrat yang
dihasilkan setelah penyaringan adalah
larutan berwarna bening kekuningan.
Gambar 5. Filtrat yang berwarna bening
kekuningan
Filtrat ini diuji cara Anson, yaitu
sebanyak 2 mL filtrat dari masing-masing
tabung ditambahkan larutan NaOH 0,5 M
sebanyak 4 mL dan reagen Folin-
Ciocalteu 1 mL. Larutan yang dihasilkan
berwarna biru (gambar 6) dan diukur
transmitansinya menggunakan spektronik
20+ pada panjang gelombang 650 nm.
Gambar 6. filtrat yang telah ditambahkan
NaOH
dan reagen Folin-Ciocalteu
Berdasarkan hasil pengukuran
menggunakan spektronik 20+, maka
diperoleh transmitansi masing-masing
tabung (t=0 dan t=20). Melalui
transmitansi (T) akan diperoleh absorbansi
(A) dengan rumus A = -log T, dan juga
akan diperoleh ∆A, yaitu selisih dari At=20
dam At=0. Data disajikan pada tabel
dibawah ini.
6
 Tabel 2. Data hasil pengukuran dan perhitungan
No. Waktu (menit) Tabung A ΔA
1 20 I 0,18 0,02
0 0,16
2 20 II 0,24 0,10
0 0,14
3 20 III 0,32 0,08
0 0,24
4 20 IV 0,35 0,13
0 0,22
5 20 V 0,69 0,43
0 0,265
Setelah itu, dilakukan perhitungan substrat 7,142 mg/mL sehingga 1/[S] =
konsentrasi substrat, diperoleh massa 0,14 mL/mg.
kasein yang ditambahkan sama dengan 1 Perhitungan harga 1/Vo juga
gram dalam 100 mL aquades sehingga dilakukan untuk mendapatkan nilai K m
konsentrasi kasein menjadi 10 mg/mL. dan Vmaks berdasarkan data hubungan
Setelah dilakukan pengenceran, harga grafik dengan menggunakan rumus 1/A
konsentrasi substrat pada masing-masing yang artinya sama dengan 1/V o.
tabung reaksi dapat diketahui dengan Perhitungan harga 1/Vo adalah sebagai
menggunakan persamaan V1 x M1 = V2 x berikut : tabung 1 diperoleh harga 1/Vo =
M2. Hasilnya adalah sebagai berikut : 50 mol/menit, tabung 2 diperoleh harga
tabung 1 diperoleh konsentrasi substrat 1/Vo = 10 mol/menit, tabung 3 diperoleh
0,1428 mg/mL sehingga 1/[S] = 7,003 harga 1/Vo = 12,5 mol/menit, tabung 4
mL/mg, tabung 2 diperoleh konsentrasi diperoleh harga 1/Vo = 7,69 mol/menit,
substrat 0,714 mg/mL sehingga 1/[S] = dan tabung 5 diperoleh harga 1/Vo = 2,35
1,39 mL/mg, tabung 3 diperoleh mol/menit.
konsentrasi substrat 1,428 mg/mL Setelah didapatkan harga 1/[S]
sehingga 1/[S] = 0,7 mL/mg, tabung 4 dan 1/Vo maka dapat dibuat grafik yang
diperoleh konsentrasi substrat 4,285 menyatakan hubungan antara 1/[S] dan
mg/mL sehingga 1/[S] = 0,233 mL/mg, 1/Vo. Grafiknya adalah sebagai berikut :
dan tabung 5 diperoleh konsentrasi
8
7
f(x) = 0.15 x − 0.58
6 R² = 0.98
1/V0 (mol/menit)

5
4
3
2
1
0
0 10 20 30 40 50 60
1/[S] (mg/mL)

Gambar 7. Grafik Hubungan Antara 1/[S] dan 1/Vo

7
 Setelah dibuat grafik hubungan
antara 1/[S] dan 1/Vo maka dapat
ditentukan persamaan garisnya, dimana
persamaan garisnya adalah sebagai berikut
y = 0,1499x + 0,5819. Sehingga
berdasarkan persamaan garis tersebut
dapat ditentukan harga Km dan Vmaks
dimana harga 1/Vmaks adalah harga dimana
x = 0 dan -1/Km adalah harga dimana y =
0. Berdasarkan hasil perhitungan
diperoleh harga Vmaks = 1,718 μmol/menit.
Pada sumbu 1/[S] adalah – 1/KM, nilai ini
sama artinya dengan harga saat y = 0,
sehingga harga Km adalah KM = 0,2576
mg/mL. Jadi harga Vmaks adalah sebesar
1,718 μmol/menit dan Km adalah 0,2576
mg/mL. Harga Vmaks dapat dicapai apabila
semua enzim berada pada bentuk
kompleks dengan substrat.
Berdasarkan data yang diperoleh
melalui percobaan, dapat dikatakan bahwa
untuk waktu inkubasi yang lebih lama
harga Vmaks lebih cepat dicapai. Dengan
demikian semakin lama waktu inkubasi
maka enzim akan semakin cepat berada
dalam bentuk kompleks dengan substrat.
Harga KM menunjukan ukuran stabilitas
kompleks enzim dan substrat, dimana
harga KM yang tinggi menunjukan
pengikatan terhadap substrat lemah dan
harga KM rendah menunjukan pengikatan
enzim terhadap substrat kuat. Berdasarkan
hasil percobaan diperoleh bahwa harga KM
untuk waktu inkubasi 0 menit lebih besar
daripada harga KM untuk inkubasi waktu
20 menit. Hal ini disebabkan karena
lamanya inkubasi mempengaruhi stabilitas
kompleks ES. Semakin lama waktu
inkubasi enzim akan semakin kuat
berikatan dengan substrat. Sebaliknya,
semakin cepat waktu inkubasi maka ikatan
antara enzim dengan substrat akan
semakin lemah.
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil pengamatan dan
pembahasan diatas dapat disimpulkan
bahwa harga Vmaks dari reaksi enzimatik
antara tripsin dan kasein adalah 1,718
μmol/menit dan tetapan Michaelis-Menten
dari enzim tripsin dalam percobaan ini
diperoleh KM = 0,2576 mg/mL.
UCAPAN TERIMA KASIH
Dalam praktikum ini, praktikan
mendapat banyak dukungan dan
bimbingan dari banyak pihak. Untuk
itulah dengan penuh rasa hormat praktikan
ucapkan terimakasih kepada: 1). Bapak
Dr. I Nyoman Tika, M.Si. selaku dosen
pengampu praktikum biokimia. 2) I
Nengah Wiyadnya dan I Made Wirahadi
Kusuma selaku asisten dosen praktikum
biokimia. 3). Drs. I Dewa Putu Subamia,
M.Pd. selaku laboran yang telah
memberikan sumbangsih berupa kritik dan
saran dalam pelaksanaan praktikum
sehingga artikel ini dapat terselesaikan.
REFERENSI
Budi Witarto, Arief. 2001. The Role of
Protein Engineering in
Bioindustry and Its Prospect in
Indonesia. 1-7.
Fessenden, Ralph J. dan Joan S.
Fessenden. 2010. Dasar-dasar
Kimia Organik. Binarupa
Aksara. Tangerang.
Muderawan, I Wayan. 2007. Buku Ajar
Instrumen. Universitas
Pendidikan Ganesha.
Singaraja.
Redhana, I Wayan. 2010. Penuntun
Praktikum Biokimia.
Singaraja : Universitas
Pendidikan Ganesha
Tika, I Nyoman. 2010. Buku Penuntun
Praktikum Biokimia. Singaraja:
Universitas Pendidikan
Ganesha.
Voet, Donald et al.1999.Fundamentals of
Biochemistry.USA: John Wiley
& Sons, Inc.