Checklist Praktikum Mikrobiologi Aktif Pewarnaan Gram

No

Poin Penilaian
0
Pembuatan preparat untuk pengecatan
Tandai pojok kiri slide dengan marker.
Kemudian letakkan 1 tetes larutan akuades steril pada kaca
objek.
Ambil kuman dari media kultur dengan cara aseptic
( membuka cawan petri atau tabung gelas di sekitar panas,
memanaskan ose sampai membara sebelum dan sesudah
dipakai, meletakkan alat yang sudah digunakan dalam
cairan lisol )
Ratakan specimen dan biarkan kering di udara.
Lewatkan slide di atas api Bunzen 3x untuk fiksasi panas
Pengecatan Gram
Letakkan preparat di atas rak pengecatan
Genangi preparat dengan Kristal violet selama 30 detik
Bilas dengan air 5 detik
Genangi dengan larutan lugol selama 1 menit
Bilas dengan air 5 detik
Lunturkan dengan ethanol selama 15 30 detik (hati-hati
jangan terlalu lama)
Bilas dengan air 5 detik
Genangi dengan safranin/ air fuchsin 60 detik
Bilas dengan air 5 detik
Keringkan preparat dengan kertas tissue secara hati-hati.

No

Poin Penilaian

Tidak
bisa

Poin

Diagnosis mikroskopis :
Menentukan bentuk bakteri dan sifat bakteri terhadap
pewarnaan gram (8 poin)
Menyebutkan 1 Spesies pathogen dan
Penyakit yang ditimbulkannya (4 poin)

1
2

3
4
5
6
7
8

Bisa

Pewarnaan Gram
Tujuan: untuk mengidentifikasi bakteri gram Positif & Negatif
Prinsip: bakteri gram positif akan mengikat dengan kuat senyawa kristal violet iodine,
sehingga pada pelunturan dengan alkohol tidak akan luntur sedangkan bakteri gram Negatif
akan luntur dan pada pemberian cat Counterstain bakteri gram negatif yang tidak berwarna
akan mengambil warna merah dari air fuchsin
Tehnik Pewarnaan Gram
Preparat yang sudah dibuat dibiarkan kering diudara, kemudian difiksasi
Preparat dicat dengan Karbol Gentian Violet selama 5 menit
Dibilas dengan air
Preparat dituangi dengan lugol selam 45 detik, bilas dengan air
Lunturkan dengan alkohol 96%, bilas dengan air
Warnai dengan air fuchsin 1-2 menit
Bilas dengan air, keringkan dan periksa dengan objektif 100 x
Interpretasi Hasil Pengecatan Gram
Bakteri Gram Positif : warna ungu
Bakteri Gram Negatif : warna merah

Pewarnaan BTA

Tujuan: Untuk menemukan Basil Tahan Asam

Prinsip: BTA memiliki lapisan lemak yg sukar ditembus oleh cat, dengan pemanasan dan
pengaruh fenol cat basic fuchsin dapat menembus lapisan lemak itu. Pendinginan pada proses
pencucian akan merapatkan kembali lapisan lemak. Pada waktu pelunturan dengan asam
alkohol warna merah dari BTA tdk akan dilepaskan sedangkan bakteri yg tdk tahan asam
akan luntur sehingga mengambil warna biru dari metilen blue
Tehnik Pengecatan BTA
Metode ZN

Preparat yang sudah dibuat dibiarkan kering diudara, kemudian difiksasi

Cat dengan Carbol Fuchsin, panasi preparat sampai menguap selama 3-5 menit, dan

dinginkan selama 5 menit

Cuci dengan air
Lunturkan dengan HCl alkohol, cuci dengan air
Cat dengan metilen blue 1 menit, bilas
Biarkan kering dan periksa dibawah mikroskop objektif 100x

Interpretasi Hasil BTA

Menurut IUAT
-

Negatif : tdk ditemukan BTA dlmsediaan

Positif jarang(+) : 1-9 BTA dalam 100 LP
Positif 1 : 10-99 BTA dalam 100 LP
Positif 2 : 1-10 BTA dalam 1LP
Positif 3 : lebih dari 10 BTA dalam 1 LP