LOGO

Spektrofotometri uv & vis

Spektrofotometri uv & vis
Fauzan Zein M., M.Si., Apt.
Spektrum cahaya tampak
Spektrum cahaya tampak
INSTRUMEN
Diagram instrumen Spektrofotometer uv-vis
MONOKROMATOR
1. Prisma
MONOKROMATOR
2. Kisi
DETEKTOR
KUVET
Aplikasi Metode Spektrofotometri
UV/VIS:
Analisis Senyawa Obat
Senyawa Tunggal
Dan Multikomponen
Daerah UV-VIS
Daerah UV Dekat : 200-400 nm
Daerah UV-Vakuum : 100-200 nm
Daerah Visibel: 400-700 nm
Uji Identitas dan kemurnian: digunakan
dalam monografi farmakope
Penentuan kadar (kegunaan utama):
(1) One-point method: baku eksternal,
penambahan baku
(2) multi-point method, kurva kalibrasi:
baku eksternal, penambahan baku
(3) Senyawa tunggal, multi komponen
Sebagai detektor: HPLC, CE
Uji Identitas dan Kemurnian
Pengukuran spektrum UV/VIS suatu
zat,pembandingan dengan spektrum
baku pembanding atau dengan
spektrum dari literatur
Panjang gelombang maksimum
Penentuan Absorptivitas pada panjang
gelombang maksimum
Penentuan Kadar Senyawa Obat
Metode relatif: perlu baku pembanding
Pembuatan larutan larutan baku (perhatikan
keberlakuan Hukum Lambert-Beer, konsentrasi sekitar
10 ug/ml)
Untuk one-point method: cukup 1 larutan
baku,konsentrasi harus dekat dengan konsentrasi
sampel
Untuk multi-point method (kurva kalibrasi): dibuat
larutan dengan pengenceran bertingkat, pembuatan
kurva kalibrasi/regresi linier konsentrasi vs absorbansi
Untuk multi-point method (standard adisi):
penambahan larutan baku secara bertingkat, sampel
tetap, regresi linier konsentrasi baku yang ditambahkan
vs absorban
One Point Method
Cs = ( As / Ab) x Cb
Cs = Konsentrasi Sampel
As = Absorbansi Sampel
Ab = Absorbansi Baku
Cb = Konsentrasi Baku
MULTIPOINT METHOD
Kalibrasi eksternal
MULTIPOINT METHOD
Standar adisi
Hk. Lambert-Beer
A = Absorban
() = Absorptivitas molar
C = Konsentrasi [ mol / l]
c = Konsentrasi [g/ 100 ml]
b = Tebal sel(kuvet [cm]
A1%, 1 cm = Absorptivitas jenis
() adalah absorban A suatu larutan zat (C= 1
mol/ l) bila tebal sel 1 cm (b= 1) dan panjang
gelombang .
Daerah Keberlakuan Hk.
Lambert-Beer
0,2 - 0,8 satuan absorban (A)
1 mg/ 100 ml setara dengan 0,2 - 0,8
satuan absorban(A)
A > 0,8 : gangguan
A < 0,2 : presisi dan akurasi buruk
Kesalahan fotometrik terkecil bila A
= 0,434
Penentuan Simultan: Kasus I
Bila panjang gelombang masing-masing
senyawa terletak berjauhan dapat
ditentukan masing-masing seperti
padapenentuan tunggal masing-masing
senyawa
Penentuan Simultan: Kasus 2
Spektrum absorpsi kedua senyawa
bertumpang tindih. Tentukan absorpsi
total kedua senyawa. Dengan
pengubahan pH atau pelarut serapan
maksimum dapat dipisahkan
Penentuan Simultan: Kasus 3
Penentuan UV ganda (prosedur
perhitungan): perhitungan konsentrasi
c1 dan c2 dari dua persamaan dengan
dua variabel
Penentuan Simultan: Kasus 3
Penentuan Simultan: Kasus 3
Percobaan dan Perhitungan
Buat larutan baku masing-masing senyawa 1
dan 2
Ukur absorban larutan baku senyawa 1 pada
1 dan 2,tentukan a1(1) dan a1(2)
Ukur absorban larutan baku senyawa 2 pada
1 dan 2,tentukan a2(1) dan a2(2)
Ukur absorban larutan sampel (campuran
senyawa 1 dan 2) pada 1 (A1) dan 2 (A2)
Berlaku persamaan berikut ini:
A1 = a1(1) c1 + a2(1) c2
A2 = a1(2) c1 + a2(2) c2
Dari kedua persamaan tersebut c1 dan c2
dapat ditentukan
Pergeseran
Efek batokromik: pergeseran merah
Efek hipsokromik: pergeseran biru
Efek hiperkromik: penguatan signal
Efek hipokromik: pelemahan signal
Penyebab: auksokrom = gugus fungsi
dengan n-orbital yang langsung terikat
dengan sistem kromofor
Tipikal: -OH, -OR, -SH, -SR, Halogen,
dan Amino
Pengaruh pH Terhadap Spektrum
Titik Isosbestik
Contoh Aplikasi Klinis
Kalibrasi Spektrofotometer
Perlu dilakukan untuk mencegah kesalahan
pembacaan panjang gelombang dan absorban
Kalibrasi skala panjang gelombang:
larutan holmium dioksid dalam asam
perklorat. Perbedaan penunjukkan skala
panjang gelombang pada alat dengan panjang
gelombang seharusnya digunakan untuk
mengoreksi pembacaan alat.
Kalibrasi skala fotometrik: larutan kalium
bikromat dalam asam sulfat. Berhubungan
dengan intensitas sumber radiasi (life time
sumber radiasi)
Kalibrasi skala panjang gelombang
Kalibrasi skala fotometrik
LOGO
Fauzan Zein M., M.Si., Apt.