LAPORAN PRAKTIKUM KIMIA FARMASI 2

ANALISIS MULTIKOMPONEN SECARA

SPEKTROFOTOMETRI UV-VISIBEL METODE DERIFATIF

Disusun oleh :

Kelompok 5D

1. Tika Aliyya Nur Azizah (3311171138)

2. Diamona Ayu Lestari (3311171146)
3. Sultan Shalahudin Jamal (3311171152)
4. Vina Sulastri (3311171160)
5. Inggit Dwi Novianti (3311171168)
6. Nadira Cantika (3311171179)

Asisten Praktikum : Mira Andam Dewi, S.Si., M.Si., Apt

LABORATORIUM KIMIA FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS JENDERAL ACHMAD YANI

CIMAHI

2019
 BAB 1

PRINSIP DAN TUJUAN PERCOBAAN

1.1 Prinsip Percobaan

1. Analisis fotometri berdasarkan absorpsi energi cahaya oleh molekul-molekul dalam daerah
sinar UV dan sinar tampak ( Visible).

2. Analisis multikomponen dengan metode derivatif yaitu berdasarkan pengukuran suatu

senyawa pada λ zero crossing senyawa lain.

1.2 Tujuan Percobaan

1. mengetahui dan memahami cara menentukan kadar campuran dan senyawa secara dalam
sediaan dengan spektrofotometri UV-Visibel metode derivatif

2. menentukan kadar sulfametoksazol dan trimetropin secara bersama-sama dengan

spektrofotometri UV-Visible derivatif
 BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

Metode spektrofotometri derivatif dapat digunakan untuk analisis kuantitatif zat dalam
campuran dimana spektrum yang tersembunyi dalam suatu bentuk spektrum besar saling
tumpang tindih dengan mengabaikan proses pemisahan zat terlebih dahulu. Spektrum yang
dialihkan bentuk ini menghasilkan profil yang lebih rinci yang tidak terlihat pada spektrum
normal. (Hayun, 2006)

Dalam suatu campuran, pengukuran konsentrasi dalam suatu sampel (analyte) dapat dilihat
dalam campuran sehingga dapat membuat pengerjaan lebih mudah atau lebih akurat. Kendala
yang sering terjadi adalah spektra derivatif tidak dapat mengurangi atau menghindarkan adanya
gangguan dari rasio serapan penggaggu yang lain ( signal-to-noise ratio ) (Skoog, 1992).

Pada prinsipnya, kadar larutan campuran dua zat dapat ditentukan dengan metode
spektrofotometri. Namun, bila tidak dipisahkan terlebih dahulu maka spektrum komponen-
komponen saling tumpang tindih ( overlapping ) bila dikehendaki pengukuran tanpa pemisahan,
dapat dilakukan dengan metode spektrofotometri ultraviolet derivatif, dimana kadar diukur pada
panjang gelombang zero crossing (Susanti dkk, 2011).

Spektrofotometri derivatif merupakan metode manipulatif terhadap spektra pada

spektrofotometri UV-VIS dan merupakan salah satu analisis multikomponen yang dapat
dilakukan apabila:

1. Hasil preparasi sample tidak memungkinkan mendapatkan senyawa tunggal

2. Tidak diinginkan pemisahan dalam preparasi sampel

3. Spektrum zat tersebut tersembunyi dalam suatu bentuk spektrum besar yang saling
tumpang tindih dengan mengabaikan proses pemisahan zat yang bertingkat.

4. Senyawa akan ditentukan kadarnya memiliki absorbansi rendah dan memiliki pengaruh
yang dapat meningkatkan nilai absorbansi (Hayun dan Yenti, 2006).
 Spektra serapan normal salah satu konstrasi dari masing-masing senyawa atau komponen
dibuat spektra derivat pertama, derivat kedua dan derivat ketiga dengan menggambarkan selisih
absorban dua panjang gelombang berdekatan dengan harga rata-rata dua panjang gelombang
tersebut. Dari spektra derivat tersebut ditentukan panjang gelombang zero crossing komponen,
dimana zero crossing masing-masing zat ditunjukan oleh panjang gelombag yang memiiki
serapan nol pada berbagai konsentrasi ( Hayun dan Yenti, 2006)

Pada spektrofotometri konvensional, spektrum dapat dibuat dengan cara memplot serapan A,

terhadap panjang gelombanng λ . Sedangkan pada metode derivatif, plot A vs λ ini

ditransformasikan menjadi plot dA/d λ vs λ . Untuk derivatif pertama dan d2A/d2 λ vs

λ , untuk derivatif kedua dan seterusnya. Panjang gelombang serapan maksimum suatu

senyawa pada spektrum normal akan menjadi λ zero crossing pada spektrum derivatif

pertama. Panjang gelombang tersebut tidak mempunyai serapan atau dA/d λ = 0. Bila panjang
gelombang zero-crossing masing-masing senyawa sama dengan panjang gelombang pada
serapan maksimum akan terjadi pelebaran pita. Pada situasi tersebut maka dicoba derivatif kedua
(Fatah, 2008)

Spektrofotometri UV-Vis derivatif kedua dapat menampilkan dan memberikan keuntungan

dalam pengukuran untuk sediaan formulasi tablet yang terdiri dari zat aktif dan zat tambahan.
Pada sediaan farmasi yang terdiri dari zat campuran yaitu zat aktif dan zat tambahan
menghasilkan larutan yang keruh sehingga spektrofotometri derivatif metode tangen dapat
digunakan untuk larutan yang keruh seperti sediaan tablet anti influenza.

Apabila suatu campuran zat memiliki λ zero crossing lebih dari satu, maka yang dipilih

untuk dijadikan λ analisi adalah λ zero crossing yang:

1. Serapan senyawa pasangan dan campuran persis sama, karena λ tersebut dapat secara
selektif mengukur serapan senyawa pasangannya.

2. Memiliki serapan yang paling besar, karena pada serapanyang paling besar , serapan yang
lebih stabil sehingga kesalahan analisis dapat diperkecil (Hayun dan Yenti, 2006)
 BAB 3

MONOGRAFI SAMPEL

1. Sulfametoksazole
Rumus molekul : C10H11N3O3S
Struktur molekul :

Berat Molekul : 253,28

Kelarutan :Praktis tidak larut dalam air, dalam eter dan dalam kloroform; mudah larut dalam
aseton dan dalam larutan natrium hidroksida encer, agak sukar larut dalam etanol.
Persyaratan : Sulfametiksazole mengandung tidak kurang dari 99,0 % dan tidak lebih dari
101,0 % : C10H11N3O3S dihitung terhadap zat yang telah dikeringkan.
2. Trimetoprim
Rumus molekul : C14H18N4O3
Struktur molekul :

Berat Molekul : 290,32

Kelarutan : larut dalam benzil alkohol; agak sukar larut dalam kloroform dan dalam methanol;
sangat sukar larut dalam air; dalam etanol dan dalam aseton; praktis tidak larut
dalam eter dan dalam karbon tetraklorida.
Persyaratan : Trimetoprim mengandung tidak kurang dari 98,5 % dan tidak lebih dari 101,0
% C14H18N4O3 dihitung terhadap zat yang telah dikeringkan.
3. Natrium Hidroksida
Rumus molekul : NaOH
Struktur molekul :
Berat molekul : 40,00
Kelarutan : mudah larut dalam air dan dalam etanol
Persyaratan : Natrium hidroksida mengandung tidak kurang dari 95,0 % dan tidak lebih dari
100,5 % alkali total, dihitung sebagai NaOH, mengandung Na 2CO3 tidak lebih
dari 3,0% [ perhatian Hati-hati dalam penanganan natrium hidroksida karena
merusak jaringan depan cepat ]
 BAB 4
METODELOGI PENELITIAN

4.1 Diagram Alir Pengenceran Sulfametoksazol

75 mg Sulfametoksazol ad 250 ml (300 ppm)

12 ppm 24 ppm 36 ppm 48 ppm 60 ppm 60 ppm

Diambil 1 ml Diambil 2 ml Diambil 3 ml Diambil 4 ml Diambil 5 ml Diambil 5 ml

+ NaOH 0.1 N + NaOH 0.1 N + NaOH 0.1 N + NaOH 0.1 N + NaOH 0.1 N + NaOH 0.1 N

Ad 25 ml Ad 25 ml Ad 25 ml Ad 25 ml Ad 25 ml Ad 25 ml

4.2 Diagram Alir Pengenceran Sulfametoksazol

75 mg Trimetoprim ad 250 ml (300 ppm)

25 mg Sulfametoksazol ad 150 ml (150 ppm)

3 ppm 6 ppm 9 ppm 12 ppm 15 ppm 10 ppm

Diambil 1 ml Diambil 1 ml Diambil 3 ml Diambil 2 ml Diambil 5 ml Diambil 3 ml

+ NaOH 0.1 N + NaOH 0.1 N + NaOH 0.1 N + NaOH 0.1 N + NaOH 0.1 N + NaOH 0.1 N

Ad 25 ml Ad 25 ml Ad 25 ml Ad 25 ml Ad 25 ml Ad 25 ml
4.3 Penetapan Kadar Sulfametoksazol dan Trimetoprim dalam Tablet Secara
Spektrofotometi Derivatif Pertama
1. Penentuan 2 zero crossing,sulfametoksazol dam pembuatan kurva kalibrasi
a) Timbang scksama 75,0 mg Baku Pembanding Sulfamctoksazol, larutkan dengan
NaOH O,1 N dalam labu takar 250,0 mL + NaOH 0.1 N ad tanda batas (larutan induk
sulfametok sazol), Jika perlu untuk melarutkan, larutan disonifikasi sampai larut.
b) Rancang prosedur (kerjakan di rumah) dan buat serangkaian larutan dengan
konsentrasi 12, 24, 36, 48, 60, dan 72 μg/mL berdasarkan hasil rancangan tersebut.
c) Menggunakan salah satu seri larutan tentukan & zero crossing sulfarnetoksazol
dengan membuat derivatif pertama. λ zero crossing sulfametoksazol yang diperoleh
selanjutnya discbut sebagai λ.
d) Ukur serapan semua seri larutan sulfametoksazol pada Na (λ zero crossing
trimetoprim), kemudian dibuat kurva kalibrasi dan tentukan persamaan kurva
kalibrasinya.
2. Penentuan a zero crossing trimetoprim dan pembuatan kurva kalibrasi
a) Timbang scksama 75,0 mg Buku Pembanding Trimetoprim, larutkan dengan NaOH
0,1 N dalam labu takar 250,0 mL + NaOH 0,1 N ad tanda batas (larutan induk
trimetoprim). Jika perlu untuk melarutkan, larutan disonifikasi sampai larut.
b) Pipet 25,0 mL larutan induk, cnccrkan dengan NaOH 0,1 N hingga 50,0 mL.
c) Rancang prosedur pengcnccran (kerjakan di rumah) dan buat serangkaian larutan
dengan konsentrasi 3,6,9, 12, 15, 18 μg/mL berdasarkan hasil rancangan tersebut.
d) Menggunakan salah satu seri larutan tentukan λ zero crossing trimetroprim dengan
membuat derivatif pertama. λ zero crossing trimetoprim yang diperoleh selanjutnya
disebut sebagai 1%.
e) Ukur serapan semua seri larutan trimetoprim pada 3 (λ zero crossing
sulfametoksazol), keudian dibuat kurva kalibrasi dan tentukan persamaan kurva
kalibrasinya.
3. Penetapan kadar sul famctok sazol dan trimetropim dalam tablet (akukan duplo)
a) Timbang seksama 20 tablet, hitung bobot rata-rata tablet. Serbukan semua tablet,
timbang serbuk yang setara dengan 75 mg sulfametoksazol, kemudian larutkan
dengan NaOH 0,1 N dalam labu takar 250,0 mL + NaOH 0,1 N ad tanda batas.
 Sonifikasi larutan sampel selama 15 menit.
Hasil Penimbangan Bobot rata-rata per tablet = 606 mg
Dosis sulfametoksazol pada etiket = 400.mg
Jumlah serbuk tablet yang harus ditimbang yang setara dengan 75 mg
sulfametoksazol: 113,625 mg
b) Larutan disaring dcngan kertas saring, kemudian pipet 5,0 mL filtratnya dan encerkan
hingga 50,0 mL. (Faktor pengenceran 50/5)
c) Ukur spektrum tablet sulfametoksazol dan trimetoprim.
d) Ukur kadar sulfamctoksazol dalam sampel pada λ2: (λ zero crossing trimctoprim).
e) Ukur kadar trimetroprim dalam sampel pada λ2 (λ zero crossing sulfamctoksazol).
f) Hitung % kadar sulfametoksazol dan trimetroprim dalam tablet.
 BAB 5

HASIL PERCOBAAN

6.1. Hasil Pengukuran Serapan Larutan Standar Sulfametoksazol di λ zero crossing trimetroprim yaitu 256,1
nm (λ2)

No Konsentrasi (µg/mL) Serapan

1. 12 -0,10426
2. 24 -0,21088
3. 36 -0,31422
4. 48 -0,41475
5. 60 -0,49994
6. 72 -0,62995

6.2. Hasil Pengukuran Serapan Larutan Standar Trimetoprim di λ zero crossing sulfametoksazol yaitu 287,2
nm (λ1)

No Konsentrasi (µg/mL) Serapan

1. 3 -0,01587
2. 6 -0,03084
3. 9 -0,04602
4. 12 -0,05628
5. 15 -0,07071
6. 18 -0,08264

6.3. Penentuan Kadar Sulfametoksazol dalam Tablet

Berat Dosis
Berat Berat
Sampel Searapan Sulfa
Pengukuran Hasil Sulfa/table %Kadar
yang pada λ2 pada
Analisis t
Ditimbang Etiket
1 113 mg -0,25537 73,45 mg 393,9 mg 400 mg 98,47 %
2 114 mg -0,25763 74,1 mg 393,9 mg 400 mg 98,47 %
% Kadar rata-rata 98,47 %
6.4. Penentuan Kadar Trimetoprim dalam Tablet

Berat Dosis
Berat Berat
Sampel Searapan Sulfa
Pengukuran Hasil Sulfa/table %Kadar
yang pada λ2 pada
Analisis t
Ditimbang Etiket
1 113 mg -0,03315 16,55 mg 88,75 mg 80 mg 110,9 %
2 114 mg -0,03302 16,47 mg 87,55 mg 80 mg 109,4 %
% Kadar rata-rata 110,15%

BAB 6

PEMBAHASAN

Pada praktikum kali ini kami melakukan penetapan kadar Sulfametoksazol dan
Trimethoprim dalam sampel tablet dengan menggunakan metode Spektrofotometri Kurva
Turunan Pertama (Derivatif). Spektrofotometri UV-Vis dapat digunakan untuk analisa kuantitatif
bahan baku, sediaan obat tunggal dan multikomponen. Secara umum ada dua strategi yang
dilakukan untuk analisa sediaan multikomponen, yaitu analisa secara simultan dan analisa
masing masing komponen yang sebelumnya dipisahkan menggunakan metode metode
pemisahan.

Pada praktikum ini digunakan teknik Spektrofotometri UV-Vis secara Derivatif

(turunan).pada metode ini kadar sulfametoksazol dan trimethoprim dapat ditentukan dengan
membaca larutan sampel pada panjang gelombang zero crossing.Digunakan metode
spektrofotometri derivatif karena serapan maksimum dari sulfametoksazol dan trimethoprim
berapa pada panjang gelombang yang berdekatan. Spektrum yang tumpang tindih menyebabkan
kesulitan dalam penetapan kadar trimetoprim karena terganggu oleh serapan sulfametoksazol.
Metode spektrofotometri derivatif ini digunakan untuk meningkatkan pemecahan puncak yang
saling tumpang tindih tersebut sehingga trimethoprim dapat ditetapkan kadarnya tanpa terganggu
oleh serapan sulfametoksazol.

Praktikum ini diawali dengan membuat larutan baku sulfametoksazol 300 ppm dan
larutan baku trimethoprim 300 ppm masing masing sebanyak 250 ml dalam NaOH. Dilakukan
proses pengenceran sulfametoksazol dan trimethoprim dengan variasi konsentrasi yang berbeda.
Kemudian masing – masing larutan standart tersebut dibaca absorbansinya pada rentang panjang
gelombang 200 – 300 nm karena panjang gelombang maksimum sulfametoksazoldan
trimethoprim terletak pada panjang gelombang tersebut. Berdasarkan pustaka, absorbansi
maksimum sulfametoksazol terletak pada panjang gelombang 270 nm sedangkan absorbansi
maksimum trimethoprim terletak pada panjang gelombang 288.

Dari spektra larutan baku sulfametoksazol dan trimethoprim diturunkan spektrum

derivatif dari kurva normal sulfametoksazol dan trimethoprim. Ditentukan derivat pertama untuk
absorbansi sulfametoksazol dan trimethoprim. Kemudian didapat derivat yang bernilai nol dari
masing – masing baku. Pada sulfametoksazol di dapat derivat nol pada panjang gelombang 256,1
nm dan pada trimethoprim di dapat derivat nol pada panjang gelombang 287.2 nm. Dalam
menentukanzero crossing trimthoprim ,berdasarkan nilai derivat yang maksimum pada panjang
gelombang maksimumsulfametoksazol. Dan didapat serapan dari tiap konsentrasi pengenceran
dari tiap sampel sulfametoksazol dan trimethoprim yang dapat dilihat pada tabel hasil. Dari tiap
serapan sampel sulfametoksazol dan trimethoprim, dibuat kurva kalibrasi untuk mendapatkan
regresi linear dan nilai r nya. Untuk sulfametoksazol didapat regresi linear y= -0.0086x - 0.0027
dengan nilai r = 0.9988. Sedangkan trimethoprim didapatkan regresi linear y= -0.0044x - 0.004
dengan nilai r = 0.9985

Selanjutnya dilakukan penetapan kadar Sulfametoksazol dan Trimethoprim dalam

sediaan tablet secara duplo. Pertama dilakukan penimbangan 20 tablet dan didapat rata rata
pertablet sebesar 606 mg. Lalu diserbukan semua tablet, timbang serbuk yang setara dengan
75mg yaitu 113.625 mg secara duplo. Dosis yang terdapat dalam etiket tablet yaitu 400mg untuk
sulfametoksazol, sedangkan trimethoprim sebesar 80 mg. Kemudian hasil penimbangan
dilarutkan dalam NaOH 0.1N dalam labu takar 250 ml. Kemudian larutan disaring dengan kertas
sering, lalu dipipet 5ml dan encerkan hingga 50 ml (Faktor Pengenceran 50/5). Kemudian diukur
spektrum larutan tersebut, lalu diukur kadar Sulfametoksazol dalam sampel pada zero crossing
trimethoprim, dan juga diukur kadar trimetoprim dalam sampel pada zero crossing
sulfametoksazol.

Hasil yang didapatkan dari pengukuran kadar sampel didapatkan %kadar sulfametoksazol
sebesar 98.96%, sedangkan %kadar trimetoprim 110.5%. Jika dilihat dari hasilnya hanya
sulfametoksazol yang sesuai dengan literatur yang didapat dari hasil FI V yaitu karena berada
pada rentang 93.0% - 107.0%. Untuk trimethoprim tidak sesuai dengan literatur, hal ini bisa
terjadi karena adanya zat tambahan yang ikut terlarut dalam pelarut yang digunakan sehingga
mempengaruhi absorbansi yang didapatkan.

BAB 7

KESIMPULAN

1. Kadar zat aktif sulfametoksazol dalam tablet tidak memenuhi persyaratan kadar karena
tidak berada dalam rentang pesyaratan yaitu 99,0% - 101%.
 2. Kadar zat aktif trimethoprim dalam tablet memenuhi persyaratan kadar karena berada
dalam rentang 98,5% - 101%.

DAFTAR PUSTAKA

Fatah, A.M. 2008. Pemanfaatan Spektrofotometri Derivatif Untuk Penetapan Kadar

Dekstrometorfan Hidrobromida Dalam Tablet Obat Batuk. Available at :www.I-
lib.ugm.ac.id/jurnal/detail.php?dataId=7138. opened at 24 November 2019

Hayun, Harianto dan Yenti. 2006. Penetapan Kadar Triprolidina Hidroklorida dan
Pseudoefedrina Hidriklorida dalam Tablet Anti Influenza secara Spektrofotometri
 Derivatif. http://jurnal.farmasi.ui.ac.id/pdf/2006/v03n02/hayun0302.pdf. opened at 24
November 2019

Skoog, Doglas Arvid. 1992. Principle of Instrumental Analysis Third Edition.USA: Saunders College
Publishing.

Susanti, Ni Made Pitri dkk.2011. Petunjuk Praktikum Kimia Analisis. Jimbaran : Jurusan Farmasi FMIPA
Universitas Udayana

LAMPIRAN

1. Perhitungan pengenceran pembuatan kurva kalibrasi sulfametoksazol

a. 12 ppm
V1 . N1 = V2 . N2
V1 . 300ppm = 50 ppm . 12 ppm
 V1 = 2mL
b. 24 ppm
V1 . N1 = V2 . N2
V1 . 300ppm = 50 ppm . 24 ppm
V1 = 4mL
c. 36 ppm
V1 . N1 = V2 . N2
V1 . 300ppm = 50 ppm . 36 ppm
V1 = 6mL
d. 48 ppm
V1 . N1 = V2 . N2
V1 . 300ppm = 50 ppm . 48 ppm
V1 = 8mL
e. 60 ppm
V1 . N1 = V2 . N2
V1 . 300ppm = 50 ppm . 60 ppm
V1 = 10mL
f. 72 ppm
V1 . N1 = V2 . N2
V1 . 300ppm = 50 ppm . 72 ppm
V1 = 12mL
2. Perhitungan Pengenceran Kurva kalibrasi Trimetoprim
a. 3 ppm
V1 . N1 = V2 . N2
V1 . 150ppm = 50 ppm . 3 ppm
V1 = 1mL
b. 6 ppm
V1 . N1 = V2 . N2
V1 . 150ppm = 50 ppm . 6 ppm
V1 = 2mL
c. 9 ppm
 V1 . N1 = V2 . N2
V1 . 150ppm = 50 ppm . 9 ppm
V1 = 3mL
d. 12 ppm
V1 . N1 = V2 . N2
V1 . 150ppm = 50 ppm . 12 ppm
V1 = 4mL
e. 15 ppm
V1 . N1 = V2 . N2
V1 . 150ppm = 50 ppm . 3 ppm
V1 = 5mL
f. 18 ppm
V1 . N1 = V2 . N2
V1 . 150ppm = 50 ppm . 3 ppm
V1 = 6mL
3. Perhitungan Berat analisis, berat sulfametoksazol/tab dan % kadar
a) Sampel 1
Y = -0,0086x – 0,0027
-0,25537 = -0,0086x – 0,0027
-0,25267 = -0,0086x
X = 29,380 µg/mL
BHA = 29,380 µg/mL x 50/5 mL x 250 mL
= 73.450 µg
= 73,450 mg
Berat sulfa/tab = BHAx rata-rata/tab
Berat sampel
= 73,450 mg x 606 mg
313 mg
= 393,900 mg

% kadar = Berat per tab / dosis sulfa x 100%

 = 393,900 mg/ 400mg x 100%

= 98,475%

b) Sampel 2
Y = -0,00086x – 0,0027
-0,025763 = -0,00086 – 0,0027
-0,25493 = -0,0027
X = 29,643 µg/mL
BHA = 29,643 µg/mL x 50/5 mL x 250 mL
= 74,1075 µg
= 74,1075 mg
Berat/tab = BHA x rata-rata/tab
Berat sampel
= 74,1057 mg x 606 mg
114 mg
= 393,939 mg

% kadar = 393,939 mg / 400mg x 100%

= 98,484%

4. Perhitungan Berat hasil analisis, berat Trimetoprim/tab dan % kadar.

a) Sampel 1
Y= -0,0044x -0,004
-0,03315 = -0,0044x-0,004
-0,02915 = -0,0044x
X = 6,625µg/mL
BHA = 6,625µg/mL x 50/5 mL x 250mL
= 16.562,5 µg
= 16,5625 mg
Berat /tab = 16,5625 mg x 606 mg
113 mg
= 88,821 mg
% Kadar = 88,821 mg/ 80 mg x 100%
= 111 %