LAPORAN RESMI

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI INDUSTRI

Materi :
ALKOHOL

Oleh:
Kelompok 2 Selasa Siang
Agung Satrio Wibowo (21030112140155)
Alfan Nuroini (21030112130113)
Ayu Fitriana (21030112130095)
Dewi Puspitosari (21030112130100)

Laboratorium Mikrobiologi Industri

Jurusan Teknik Kimia Fakultas Teknik
Universitas Diponegoro
Semarang
2014
ALKOHOL

HALAMAN PENGESAHAN

Laporan Resmi Praktikum Mikrobiologi Industri dengan materi Alkohol

disusun oleh:
Kelompok
1. Agung Satrio Wibowo
2. Alfan Nuroini
3. Ayu Fitriana
4. Dewi Puspitosari
Asisten Pengampu
Laboran
Dosen Pembimbing
a. Nama Lengkap
b. NIP
: 2 Selasa Siang
NIM. 21030112140155
NIM. 21030112130113
NIM. 21030112130095
NIM. 21030112130100
: Fahri Rizki
: Jufriyah
: Dr. Widayat, ST, MT
: 197206091998031001

Semarang, 4 Juni 2014

Mengetahui Menyetujui
Laboran Laboratorium Mikrobiologi Industri Asisten Pengampu

Jufriyah Fahri Rizki

NIM. 21030111130138

Mengetahui
Dosen Pembimbing

Dr. Widayat, ST, MT

NIP. 197206091998031001

Laboratorium Mikrobiologi Industri ii

ALKOHOL

RINGKASAN

Alkohol adalah senyawa yang diperlukan bagi kehidupan kita yang memiliki
gugus hidroksil yang berikatan dengan gugus alkil. Tujuan dari percobaan ini
adalah membuat alkohol dari sari buah nanas dengan membandingkan konversi
hasil proses fermentasi sesuai variabel bebas pada percobaan yaitu jumlah ragi saat
starter alkohol dan persentase volume starter saat fermentasi.Bahan yang digunakan
untuk membuat alkohol adalah bahan yang mengandung glukosa, seperti nanas
dengan kandungan total 12,1%. Variabel yang digunakan pada starter ialah
banyaknya ragi dan pH, sedangkan pada fermentasi yaitu %V starter. Langkah
pertama dalam praktikum adalah pembuatan starter dimana dihitung koloni mikroba
dengan hemositometer. Selanjutnya dilakukan fermentasi media yang meliputi
analisa glukosa standar, persiapan sari buah yang akan difermentasi, pengukuran
kadar glukosa sari buah, penentuan kadar glukosa substrat, dan fermentasi media
sari buah, dan menganalisa hasilnya.Dari percobaan, jumlah koloni starter semakin
meningkat seiring bertambahnya waktu karena dalam fase eksponensial dan semakin
banyak jumlah ragi, maka jumlah koloni juga semakin banyak karena banyak yang
membelah. Densitasnya semakin menurun karena adanya perubahan sebagian
glukosa menjadi etanol yang memiliki densitas rendah (<1). Pada tahap fermentasi,
kadar glukosa semakin menurun karena glukosa dikonversi menjadi alkohol dan
CO2. Sedangkan densitas hasil fermentasi semakin meningkat karena masih terjadi
fase eksponensial.

Kata kunci: alkohol, koloni, kadar glukosa, densitas

Laboratorium Mikrobiologi Industri iii

ALKOHOL

SUMMARY

Alcohol is a substance that is necessary for our lives which has hydroxyl group
which bond to alkyl group. The purpose of this experiment is to make alcohol from
pineapple juice by compare the conversion according to fermentation process free
variables which are the amount of yeast when starter process of alcohol and the
percentages of volumes of starters when fermentation process of alcohol. The
materials used to make alcohol is a glucose-containing materials, such as pineapple
which have a total content of glucose is 12,1%. The variables used to alcohol starter
are amount of yeast and pH, but in fermentation, the variables used is volume of
starter. First step is manufacturing the starter where counting the coloni of microbe
by hemositometer. Next is medium fermentation which includes standard glucose
analysis, preparing pineapple juice, measuring glucose-containing of pineapple juice
and substrat, and medium fermentation, and analyze the result.According to the
experiment, the coloni of starter increased exponentially with time because of the
exponential phase and the coloni increased with amout of yeast because all of them
separated. Density is decrease because of glucose conversion into ethanol which
have low density (<1). In the fermentation, glucose-containing is decrease because
of glucose conversion into alcohol and carbondioxide. Whereas, density of product is
increase because it still in the exponential phase.

Keywords: alcohol, coloni, glucose containing, density

Laboratorium Mikrobiologi Industri iv

ALKOHOL

PRAKATA

Puji syukur kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat dan
hidayah-Nya sehingga laporan resmi ini dapat disusun. Laporan resmi dengan judul
Alkohol disusun untuk memenuhi tuhas Praktikum Mikrobiologi Industri.
Laporan resmi ini dalam penyusunannya tidak terlepas dari bantuan yang telah
diberikan oleh berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis mengucapkan terima kasih
kepada:
1. Dr. Widayat, ST, MT selaku dosen pembimbing
2. Jufriyah selaku laboran Laboratorium Mikrobiologi Industri
3. Fahri Rizki selaku asisten pembimbing
4. Keluarga yang senantiasa mencurahkan cinta dan kasih sayangnya serta teman-
teman yang memberikan dorongan dan semangat.
Tiada gading yang tak retak dan kesempurnaan hanya milik Allah SWT.
Penulis menyadari akan adanya kekurangan dari laporan resmi ini sehingga kritik
dan saran yang membangun sangat diharapkan untuk memperbaiki laporan-laporan
yang selanjutnya. Semoga laporan resmi ini dapat bermanfaat bagi pembaca dan
memberikan kontribusi pada Laboratorium Mikrobiologi Industri.

Semarang, 2 Juni 2014

Penulis

Laboratorium Mikrobiologi Industri v

ALKOHOL

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL
HALAMAN PENGESAHAN................................................................................. ii
RINGKASAN ......................................................................................................... iii
SUMMARY ............................................................................................................ iv
PRAKATA.............................................................................................................. v
DAFTAR ISI........................................................................................................... vi
DAFTAR TABEL................................................................................................... viii
DAFTAR GAMBAR .............................................................................................. ix
BAB I PENDAHULUAN ....................................................................................... 1
I.1. Latar Belakang........................................................................................... 1
I.2. Tujuan Percobaan ...................................................................................... 1
I.3. Manfaat Percobaan .................................................................................... 1
BAB II TINJAUAN PUSTAKA............................................................................. 3
II.1. Spesifikasi Bahan Baku............................................................................ 3
II.2. Alkohol..................................................................................................... 3
II.3. Starter ....................................................................................................... 4
II.4. Fermentasi Alkohol .................................................................................. 5
BAB III METODOLOGI PERCOBAAN............................................................... 7
III.1. Bahan dan Alat yang Digunakan ............................................................ 7
III.2. Gambar Alat............................................................................................ 7
III.3. Variabel Percobaan ................................................................................. 8
III.4. Cara Kerja ............................................................................................... 8
BAB IV HASIL PERCOBAAN DAN PEMBAHASAN ....................................... 12
IV.1. Starter...................................................................................................... 12
IV.2. Fermentasi............................................................................................... 14
BAB V PENUTUP.................................................................................................. 17
V.1. Kesimpulan .............................................................................................. 17
V.2. Saran......................................................................................................... 17
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................. 18
LAMPIRAN
A. Lembar Perhitungan .................................................................................... A-1

Laboratorium Mikrobiologi Industri vi

ALKOHOL

B. Laporan Sementara...................................................................................... B-1

C. Kuantitas Reagen ........................................................................................ C-1
D. Fotocopy Referensi yang Dipakai
E. Lembar Asistensi

Laboratorium Mikrobiologi Industri vii

ALKOHOL

DAFTAR TABEL

Tabel 2.1. Komposisi Kimia Buah Nanas Menurut Direktorat Gizi Departemen
Kesehatan (Muljoharjo, 1984)................................................................ 3
Tabel 4.1. Data Hasil Percobaan Starter ................................................................. 10
Tabel 4.2. Data Hasil Percobaan Fermentasi .......................................................... 10

Laboratorium Mikrobiologi Industri viii

ALKOHOL

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1. Skema Embden-Meyerhof-Parnas glikolitik...................................... 6

Gambar 3.1. Gambar Alat yang Digunakan............................................................ 8
Gambar 3.2. Tampilan Hemositometer Menggunakan Mikroskop ........................ 9
Gambar 4.1. Grafik Hubungan Jumlah Koloni vs Waktu....................................... 12
Gambar 4.2. Grafik Hubungan Jumlah Ragi vs Jumlah Koloni ............................. 12
Gambar 4.3. Grafik Hubungan Densitas vs Waktu Saat Starter Fermentasi
Alkohol .............................................................................................. 13
Gambar 4.4. Grafik Hubungan Kadar Glukosa vs Waktu Fermentasi.................... 14
Gambar 4.5. Grafik Densitas vs Waktu Fermentasi Alkohol ................................. 15

Laboratorium Mikrobiologi Industri ix

ALKOHOL

BAB I
PENDAHULUAN

I.1. Latar Belakang

Alkohol merupakan senyawa yang sangat diperlukan bagi kehidupan kita,
dapat digunakan untuk kosmetik, obat-obatan dan yang lainnya. Alkohol adalah
senyawa yang memiliki gugus hydroxyl yang berikatan dengan gugus alkil. Akohol
dapat dibuat salah satunya dengan cara fermentasi menggunakan mikroorganisme.
Mikroorganisme yang paling sering digunakan adalah jamur Saccharomyces sp.
Bahan pembuatan alkohol dengan menggunakan metode fermentasi dapat
dibuat dari bahan yang mengandung glukosa, salah satunya adalah nanas. Nanas
mengandung gula total yaitu 12,1% (Kwartiningsih, 2005). Alkohol sangat penting
bagi kehidupan kita diantaranya sebagai energi yang dapat diperbarui, maka dari itu
kami perlu melakukan praktikum pembuatan alkohol.

I.2. Tujuan Percobaan

I.2.1. Starter
1. Membuat starter dari sari buah nanas sesuai variabel.
2. Membandingkan densitas dan jumlah koloni pada masing-masing
starter.
I.2.2. Fermentasi Etanol
1. Membuat alkohol dari sari buah nanas secara fermentasi sesuai variabel.
2. Membandingkan konversi alkohol hasil proses fermentasi dengan %V
yang berbeda pada jumlah ragi dalam starter.
3. Mengetahui fenomena yang terjadi pada fermentasi alkohol.

I.3. Manfaat Percobaan

I.3.1. Starter
1. Memahami dan mengetahui proses pembuatan starter dari sari buah
nanas sesuai dengan variabel.
2. Mampu membandingkan densitas dan jumlah koloni pada masing-
masing starter.

Laboratorium Mikrobiologi Industri 1

ALKOHOL

I.3.2. Fermentasi Etanol

1. Memahami dan mengetahui proses pembuatan alkohol dari sari buah
nanas secara fermentasi sesuai variabel.
3. Mampu membandingkan konversi alkohol hasil fermentasi dengan %V
yang berbeda pada jumlah ragi dalam starter.
4. Memahami fenomena yang terjadi pada fermentasi alkohol.

Laboratorium Mikrobiologi Industri 2

ALKOHOL

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

II.1. Spesifikasi Bahan Baku

Nanas (Ananas comosus L.) merupakan tanaman pangan yang tersebar di
dunia, khususnya di Indonesia. Tanaman ini mudah tumbuh di berbagai jenis tanah
dan iklim. Tanaman ini berasal dari Amerika Selatan dan Hindia Barat. Sistematika
nanas dengan taksonominya dapat diklasifikasikan dalam divisio Spermatofita,
subdivisio Angiospermae, kelas Monokotiledon, ordo Farinosae, familia
Bromeliaceae, genus Ananas, dan spesies Ananas comusus L (Kwartiningsih, 2005).
Buah ini memiliki karakteristik unik dengan rasanya yang manis dan sedikit asam.
Salah satu produk lokal yang berasal dari nanas adalah alkohol dan produk ini
berpotensial untuk diekspor (Chanprasartsuk, 2012).
Buah nanas mengandung asam 1,6%, gula total 12,1%, dan sakarosa 7,88%
(Kwartiningsih, 2005). Sedangkan komposisi kimia buah nanas menurut Diretorat
Gizi Departemen Kesehatan dapat dilihat pada tabel berikut.
Tabel 2.1. Komposisi Kimia Buah Nanas Menurut Diretorat Gizi Departemen
Kesehatan (Muljoharjo, 1984)
Bahan Komposisi
Kalori 52 kal
Protein 0,4 %
Lemak 0,2 %
Karbohidrat 13,7 %
Kalsium 16 mgr/100 gr
Air 85,3 %
Fosfor 11 mgr/100 gr
Besi 0,3 mgr/100 gr

II.2. Alkohol
Alkohol sering disebut sebagai etanol. Etanol merupakan hasil dari fermentasi
glukosa (gula) yang dilanjutkan dengan proses destilasi. Proses destilasi dapat
menghasilkan etanol dengan kadar 95% volume, untuk digunakan sebagai bahan
bakar perlu pemurnian lagi hingga mencapai 99% yang lazim disebut fuel grade

Laboratorium Mikrobiologi Industri 3

ALKOHOL

ethanol (FGE). Proses pemurnian dengan prinsip dehidrasi umumnya dilakukan

dengan metode Molecular Sieve, untuk memisahkan air dari senyawa etanol. Bahan
baku alkohol yang dapat digunakan antara lain ubi kayu, tebu, sagu dan lain-lain
(Musanif, 2008).
Secara umum, proses pengolahan bahan berpati untuk menghasilkan etanol
dilakukan dengan proses hidrolisis dan fermentasi etanol. Proses hidrolisis yaitu
proses konversi pati menjadi glukosa. Prinsip dari hidrolisis pati pada dasarnya
adalah pemutusan rantai polimer pati menjadi unit-unit dekstrosa (C6H12O6). Tahap
kedua adalah proses fermentasi untuk mengkonversi glukosa (gula) menjadi etanol
dan CO2. Setelah proses fermentasi selesai, dilakukan destilasi untuk memisahkan
etanol. Distilasi merupakan pemisahan komponen berdasarkan titik didihnya. Titik
didih etanol murni adalah 78oC sedangkan air adalah 100oC pada kondisi standar
(Musanif, 2008).

II.3. Starter
Dalam pembentukan alkohol melalui proses fermentasi, peran mikroorganisme
sangat besar dan biasanya mikroorganisme yang digunakan untuk fermentasi
mempunyai beberapa syarat yaitu mempunyai kemampuan untuk memfermentasikan
karbohidrat yang cocok secara cepat, mempunyai genetik yang stabil, toleran
terhadap tekanan osmosa yang tinggi, dan toleran terhadap kadar alkohol yang tinggi
(Rahim, 2008).
Starter yang digunakan pada fermentasi alkohol ialah Saccharomyces
cerevisiae yang merupakan cendawan berupa khamir (yeast) sejati tergolong eukariot
mempunyai kemampuan yang tinggi sebagai imonostimulan dan bagian yang
bermanfaat adalah dinding selnya (Rahim, 2008). Khamir jenis ini dapat berproduksi
tinggi, toleran terhadap alkohol yang cukup tinggi, tahan terhadap kadar gula yang
tinggi dan tetap aktif melakukan fermentasi pada suhu 4-32oC (Musanif, 2008).
Mikroba ini dapat tumbuh dengan baik dalam kodisi aerob maupun anaerob. Tapi
dalam kondisi anaerob, bakteri akan memfermentasi substrat menjadi gula sangat
cepat dan akan segera dikonversi menjadi etanol (Wardhani, 2008). Mikroba ini
menghasilkan enzim zimase yang berfungsi sebagai pemecah sukrosa menjadi
glukosa dan fruktosa (Azizah, 2012).

Laboratorium Mikrobiologi Industri 4

ALKOHOL

Produk utama dalam metabolisme Saccharomyces cerevisiae adalah air dan

CO2, sedangkan produk lain yang dihasilkan dalam jumlah sedikit. Saccharomyces
cerevisiae memerlukan suhu optimum 25-30oC dan pH 3-6 agar dapat tumbuh
dengan baik (Rahim, 2008).

II.4. Fermentasi Alkohol

Kata fermentasi berasal dari bahasa latin yaitu fermentum. Fermentasi
merupakan suatu proses dimana terjadi perubahan kimia pada substrat organik
sebagai hasil dari aktivitas enzim mikroba (Chojnacka, 2011). Senyawa organik yang
biasa digunakan adalah zat gula (Fardiaz, 1984).
Sebelum proses fermentasi yaitu proses hidrolisis yang merupakan proses
pemecahan selulosa dari biomassa menjadi senyawa gula yang dapat difrementasikan
menjadi alkohol. Yeast ditambahkan ke dalam media dan dipanaskan. Yeast berperan
sebagai katalis dan membantu mengonversi sukrosa menjadi glukosa dan fruktosa.
C12H22 +H2O C6H12O6 (fruktosa) + C6H12O6 (glukosa)
Fruktosa dan glukosa kemudian bereaksi dengan enzim zymase yang dikandung oleh
yeast untuk memproduksi etanol dan karbondioksida.
C6H12O6 2 C2H5OH + 2CO2
(Santi, 2008)
Selama proses fermentasi akan timbul panas, apabila tidak dilakukan pendinginn,
suhu akan meningkat sehingga proses fermentasi akan terhambat (Rahim, 2008).
Ada tiga jalur pusat metabolisme karbohidrat pada bakteri ialah glikolisis,
jalur pentose fosfat, dan jalur Entner Doudoroff. Untuk kebanyakan sel-sel, jalur
terbesar dalam katabolisme glukosa adalah glikolisis. Pada jalur ini molekul glukosa
dirubah menjadi asam piruvat (glikolisis) dan asam piruvat menjadi asam laktat
(fermentasi asam laktat) tanpa pemasukan molekul oksigen. Konsep dasar dari
glikolisis tersusun dalam 11 reaksi enzimatis oleh skema Embden-Meyerhof-Parnas
(EMP), ditunjukkan pada gambar 2.1. Walaupun jalur dasarnya sama untuk tiap
semua jenis sel, perlengkapan enzim-enzim tertentu pada jalur tersebut tidak seragam
untuk berbagai jenis sel setiap spesies (Kusnadi, 2010).

Laboratorium Mikrobiologi Industri 5

ALKOHOL

Gambar 2.1. Skema Embden-Meyerhof-Parnas Glikolitik

Laboratorium Mikrobiologi Industri 6

ALKOHOL

BAB III
METODOLOGI PERCOBAAN

III.1. Bahan dan Alat yang Digunakan

III.1.1. Bahan
1. Sari buah nanas 1,5 liter 6. Indikator MB @ 2 tetes
2. Glukosa 1,25 gram 7. Aquadest
3. KH2PO4 dan MgSO4 @ 0,25 gram 8. H2SO4
4. Fehling A dan Fehling B @ 5 ml 9. NaOH
5. Ragi roti (Fermipan) 0,75 gram 10. Urea @ 0,5 gram
III.1.2. Alat
1. Erlenmeyer 6. Labu takar
2. Buret, statif, klem 7. Hemositometer
3. Pipet tetes 8. Gelas ukur
4. Kompor listrik 9. Beaker glass
5. Pengaduk 10. Corong

III.2. Gambar Alat

1. 2. 3.

1. 5. 6.

Laboratorium Mikrobiologi Industri 7

ALKOHOL

7. 8.

9. 10.
Gambar 3.1. Gambar Alat yang Digunakan

III.3. Variabel Percobaan

1. Starter
Variabel tetap : sari buah 250 ml, 2 gr/l urea, 1 gr/l MgSO4, dan
1 gr/l KH2PO4
Variabel barubah : ragi roti (1 gr/l dan 2 gr/l)
Variabel kontrol : pH, penutup alumunium foil, densitas dan
jumlah koloni (yeast)
2. Fermentasi
Variabel tetap : sari buah 125 ml
Variabel barubah : % V starter yaitu 4% V, 6% V, 8% V, dan 10% V
Variabel kontrol : penutup alumunium foil, kadar glukosa 10%, densitas
dan kadar glukosa

III.4. Cara Kerja

Pembuatan Starter
a. Sari buah 250 ml disiapkan, kemudian 1 gr/l KH2PO4, 1 gr/l MgSO4, dan
urea sebanyak 2 gr/l sebagai nutrient ditambahkan ke sari buah tersebut.

Laboratorium Mikrobiologi Industri 8

ALKOHOL

b. Larutan tersebut disterilkan dengan cara dididihkan.

c. larutan didinginkan pada suhu kamar.
d. pH diatur hingga 4,5.
e. Ragi roti (fermipan) 1 gr/l ditambahkan ke dalam larutan tersebut.
f. Banyaknya yeast dihitung menggunakan hemositometer.
g. Larutan lalu didiamkan selama 2 hari (setiap hari dihitung yeastnya).
Cara perhitungan jumlah mikroorganisme dengan hemositometer:
1. Sampel 1 ml diencerkan sampai 10 ml, kemudian diambil 1 ml dan
diencerkan sampai 10 ml.
2. Jumlah mikroba dihitung dengan hemositometer.

Gambar 3.2. Tampilan Hemositometer Menggunakan Mikroskop

Jumlah mikroorganisme per sempel:
1
fp total volume starter sel
80 25. 10 10

Fermentasi Media
1. Analisa Glukosa Standar
a. Glukosa standar disiapkan.

Laboratorium Mikrobiologi Industri 9

ALKOHOL

b. Glukosa anhidrit 1,25 gram dilarutkan sampai 500 ml.

c. Standarisasi kadar glukosa
1. Glukosa standar 5 ml diencerkan sampai 100 ml, diambil 5 ml, dan
pHnya dinetralkan.
2. Fehling A 5 ml dan fehling B 5 ml ditambahkan ke glukosa standar.
3. Dipanaskan hingga 60oC-70oC.
4. Glukosa standar dititrasi sambil dipanaskan 60oC-70oC sampai warna
biru hampir hilang lalu MB 2 tetes ditambahkan.
5. Dititrasi lagi dengan glukosa standar sambil dipanaskan 60oC-70oC
sampai warna biru menjadi merah bata.
6. Kebutuhan titran dicatat.
F = V titran
2. Persiapan Sari Buah
a. Sari buah yang telah bebas dari ampas sesuai variabel disiapkan.
b. Sari buah disterilkan dengan cara didihkan.
c. Didinginkan sampai suhu kamar, lalu pH diatur hingga 4,5.
3. Mengukur Kadar Glukosa Sari Buah
a. Sari buah diukur densitasnya.
b. M dicari dengan melakukan langkah kerja terakhir.
c. Kadar glukosa sari buah dihitung dengan rumus berikut:

( )
% = 100% 0,0025

4. Penentuan Kadar Glukosa Substrat
a. Kadar glukosa substrat sebelum fermentasi diatur sebesar 10%.
Contoh : Bila dalam substrat kita menginginkan kadar glukosanya 14%.
Bila %SB > 14 %, perlu diencerkan:
%
14% = 100%
( )+( )
Bila %SB <14%, perlu ditambah sukrosa:
180 + (% )
14% = 100%
342 + ( )

Berat sukrosa = X mol . 342 gr/mol = Y gram

Laboratorium Mikrobiologi Industri 10

ALKOHOL

Y gram dilarutkan ke dalam substrat tersebut

5. Fermentasi Media Sari Buah
a. Substrat yang telah diatur kadar glukosanya diambil.
b. Starter ditambahkan ke dalam substrat tersebut (sesuai dengan variabel).
c. Densitas dan volume konstan sebelum fermentasi diukur terlebih dahulu.
d. Media sari buah difermentasi secara anaerob selama 5 hari.

Analisa Hasil
1. Densitas setelah fermentasi diukur.
2. F dan M dicari.
3. Kadar glukosa hasil fermentasi dianalisa dengan rumus:

( )
% = 100% 0,0025

Cara Penentuan M (M = V titran)

1. Sari buah diambil 5 ml, diencerkan hingga 100 ml, diambil 5 ml dan pHnya
dinetralkan.
2. 5 ml fehling A dan 5 ml fehling B ditambahkan, glukosa standar yang telah
diencerkan ditambahkan (sebanyak 5 ml).
3. Dipanaskan hingga 60oC-70oC.
4. Dititrasi dengan glukosa standar sambil dipanaskan 60oC-70oC, sampai
warna biru hampir hilang, lalu 2 tetes MB ditambahkan ke dalam larutan
tersebut.
5. Dititrasi lagi dengan glukosa standar sambil dipanaskan 60oC-70oC sampai
warna biru menjadi merah bata.
6. Kebutuhan titran dicatat.

Laboratorium Mikrobiologi Industri 11

ALKOHOL

BAB IV
HASIL PERCOBAAN DAN PEMBAHASAN

IV.1. Stater
IV.1.1. Pengaruh waktu terhadap jumlah koloni
4,5E+10
4E+10
3,5E+10 stater 1
jumlah koloni

3E+10
2,5E+10 stater 2
2E+10
1,5E+10
1E+10
5E+09
0
0 1 2
waktu (hari)

Gambar 4.1. Grafik Hubungan Jumlah Koloni vs Waktu

Grafik di atas menunjukkan perkembangan jumlah koloni yang bertambah

seiring bertambahnya waktu. Dibuktikan dengan grafik juga saat
Saccharomyces cereviceae pada hari kedua, mikroorganisme tersebut memiliki
aktivitas paling besar atau sedang dalam fase eksponensial sehingga jumlah
koloni yang dihasilkan tiap harinya bertambah dan mencapai maksimumnya
pada hari kedua (Oktarina, 2008).

IV.1.2. Pengaruh jumlah ragi terhadap jumlah koloni

7E+09
6E+09
jumlah koloni

5E+09
starter 1
4E+09 starter 2
3E+09
2E+09
1E+09
0
0 0,5 1 1,5 2 2,5
jumlah ragi (gr/liter)

Gambar 4.2. Grafik Hubungan Jumlah Ragi vs Jumlah Koloni

Laboratorium Mikrobiologi Industri 12

ALKOHOL

Pada variabel 1, kami menggunakan ragi sebanyak 1 gr/liter. Sedangkan

pada variabel 2, kami menggunakan ragi sebanyak 2 gr/liter. Semakin banyak
yeast yang ditambahkan, maka semakin banyak pula mikroba yang membelah,
sehingga banyak koloni yang dapat dihitung jumlahnya (Dutta, 2008). Hal ini
disebabkan karena mikroba mengalami fase log (eksponensial) yaitu fase
dimana mikroba memperbanyak sel sehingga terjadi pertumbuhan yang
meningkat. Akibatnya, jumlah koloni yang terlihat semakin banyak (Oktarina,
2008).

IV.1.3. Pengaruh waktu terhadap densitas stater

1,075
1,07
1,065
stater 1
Densitas (gr/mL)

1,06
stater 2
1,055
1,05
1,045
1,04
1,035
1,03
0 1 2
Waktu (hari)

Gambar 4.3. Grafik Hubungan Densitas vs Waktu Saat Starter Fermentasi

Alkohol

Grafik diatas menunjukkan densitas pada hari saat pemberian yeast

merupakan densitas yang tertinggi yakni 1.062 untuk starter 1 dan 1.069 untuk
starter 2. Hari selanjutnya densitas starter menurun menjadi 1.046 untuk starter
1 dan starter 2. Untuk hari terakhir pelaksanaan starter alkohol densitas starter
menjadi 1.046 untuk starter 1 dan 1.05 untuk starter 2.
Fenomena penurunan densitas untuk kedua starter diakibatkan oleh
perubahan sebagian glukosa menjadi etanol. Etanol memiliki densitas berkisar
antara 0.80390.8063 kg/L sedangkan densitas starter 1 dan starter 2 diatas 1.0,
sehingga seiring dengan waktu densitas starter akan menurun (MSDS
Commercial Alcohols, 2009).

Laboratorium Mikrobiologi Industri 13

ALKOHOL

Kemudian terjadi pertambahan densitas untuk starter 2 dan konstan untuk

starter 1. Hal ini diakibatkan oleh akibat adanya nutrisi makro dan mikro,
sumber karbon yang diberikan pada starter serta pengaturan kondisi lingkungan
(media) menyebabkan yeast dapat tumbuh dan berkembang yang menyebabkan
jumlah koloni yeast bertambah pada saat pengukuran jumlah koloni. Fenomena
yang terjadi pada pengukuran densitas berjalan secara simultan antara
pembentukan etanol dan tumbuh-kembangnya jumlah koloni yeast yang ada.
Oleh karena itu, untuk starter 1 pada hari 1 hingga 2 tidak mengalami
pertambahan berat massa densitas karena kecepatan pembentukan alkohol
terhadap densitas dan kecepatan pertumbuhan-perkembangan yeast terhadap
densitas sama sehingga densitas tetap, untuk starter 2 pada hari 1 hingga 2
mengalami pertambahan berat massa densitas karena karena kecepatan
pertumbuhan-perkembangan yeast terhadap densitas lebih besar dari kecepatan
pembentukan alkohol terhadap densitas sehingga densitas bertambah (Azizah,
2012).

IV.2. Fermentasi
IV.2.1. Pengaruh waktu fermentasi terhadap kadar glukosa
25
Variabel 1
20 Variabel 2
Kadar Glukosa (%)

Variabel 3
15 Variabel 4
variabel 5
10 Variabel 6
Variabel 7
5 Variabel 8

0
0 1 2
Waktu fermentasi (hari)

Gambar 4.4. Grafik Hubungan Kadar Glukosa vs Waktu Fermentasi

Berdasarkan gambar di atas, pada fermentasi hari ke-1, kadar glukosa

sisa pada variabel 1,2,3,5, dan 8 mengalami peningkatan karena masih terjadi
pemecahan disakarida menjadi glukosa, sedangkan glukosa yang sudah
terbentuk belum seluruhnya dikonversi menjadi alkohol. Ada juga yang

Laboratorium Mikrobiologi Industri 14

ALKOHOL

mengalami penurunan yaitu pada variabel 4,6, dan 7. Hal ini disebabkan karena
glukosa lebih banyak yang sudah dikonversi menjadi alkohol.
Pada fermentasi hari ke-2, kadar glukosa sisa setiap variabel juga ada
yang meningkat dari fermentasi hari sebelumnya yaitu pada variabel 2, 3, 4, 6,
7, dan 8. Hal ini disebabkan karena masih adanya pemecahan disakarida
menjadi glukosa, sedangkan glukosa yang terbentuk belum seluruhnya
terkonversi menjadi alkohol. Ada juga yang mengalami penurunan dari
fermentasi hari sebelumnya yaitu pada variabel 1 dan 5. Hal ini disebabkan
karena lebih banyak glukosa yang sudah terkonversi menjadi alkohol (Azizah,
2012).

IV.2.2. Pengaruh waktu fermentasi terhadap densitas

1,05
1,04
Variabel 1
Densitas (gr/mL)

1,03
Variabel 2
1,02
1,01 Variabel 3
1 Variabel 4
0,99 variabel 5
0,98 Variabel 6
0,97 Variabel 7
0 1 2
Variabel 8
Waktu (hari)

Gambar 4.5. Grafik Hubungan Densitas vs Waktu Fermentasi Alkohol

Dari grafik di atas, kenaikan densitas hasil fermentasi seiring dengan

semakin bertambahnya waktu fermentasi. Hal ini disebabkan karena sampai
hari ke-2 fermentasi, masih terjadi fase eksponensial yaitu tahap dimana
mikroba mulai melakukan pertumbuhan sehingga semakin lama waktu
fermentasi, maka mikroorganisme berkembang biak dan jumlahnya bertambah.
Bertambahnya koloni ini menyebabkan naiknya densitas (Hikmiyati, 2010).

IV.2.3. Metode Mengembangbiakkan Saccharomyces cereviceae

Salah satu metode untuk mengembangbiakkan Saccharomyces cereviceae
adalah dengan YPD Broth dengan menambahkan dekstrosa dan pepton pada

Laboratorium Mikrobiologi Industri 15

ALKOHOL

pH 6,5 dan suhu 25oC. Persiapan yang perlu dilakukan adalah melarutkan 50 gr
medium dalam 1 liter distilled water, kemudian dididihkan. Disterilisasi
dengan autoclave pada 118oC selama 15 menit. Medium tersebut selanjutnya
disimpan pada suhu 2-8oC. Yeast utmbuh dengan baik pada media yang
memiliki glukosa dan garam dalam jumlah kecil. Media yang akan digunakan
dalam metode ini mengandung glukosa (dengan penambahan dekstrosa setelah
di autoclave), garam, dan protein (Guthri, 1991).

Laboratorium Mikrobiologi Industri 16

ALKOHOL

BAB V
PENUTUP

V.1. Kesimpulan
1. Jumlah koloni meningkat seiring pertambahan waktu. Peningkatan paling
maksimum terjadi saat hari ke-2 karena mikroorganisme mengalami fase
eksponensial.
2. Semakin banyak yeast yang ditambahkan, maka semakin banyak pula
mikroorganisme yang membelah. Pembelahan yang terjadi pada fase
eksponensial ini mengakibatkan koloni bertambah banyak.
3. Densitas starter 1 dan starter 2 mengalami penurunan dan kenaikan.
Penurunan densitas untuk kedua starter disebabkan karena perubahan
sebagian glukosa menjadi etanol sedangkan densitas naik karena adanya
nutrisi makro dan mikro.
4. Kadar glukosa sisa setiap variabel ada yang mengalami peningkatan dan
penurunan. Kadar glukosa yang mengalami peningkatan disebabkan karena
masih terjadi pemecahan disakarida menjadi monosakarida. Sedangkan,
kadar glukosa yang turun disebabkan karena glukosa dikonversi menjadi
alkohol.
5. Semakin meningkatnya densitas saat fermentasi disebabkan karena
mikroorganisme masih dalam fase eksponensial.
6. Salah satu metode untuk mengembangbiakkan Saccharomyces cereviceae
adalah dengan YPD Broth dengan menambahkan dekstrosa dan pepton pada
pH 6,5 dan suhu 25oC.

V.2. Saran
1. Sterilkan bahan sebelum praktikum.
2. Pastikan mengatur pH dengan teliti sesuai prosedur.
3. Cermat dalam pengamatan jumlah koloni menggunakan mikroskop.
4. Tutup rapat erlenmeyer dengan alumunium foil.
5. Perhatikan perubahan warna titrasi saat TAT.

Laboratorium Mikrobiologi Industri 17

ALKOHOL

DAFTAR PUSTAKA

Azizah, N., et al. 2012. Pengaruh Lama Fermentasi terhadap Kadar Alkohol, pH,
dan Produksi Gas pada Proses Fermentasi Bioetanol dari Whey dengan
Substitusi Kulit Nanas. Jurnal Aplikasi Teknologi Pangan Vol. 1 No. 2.
Chanprasartsuk, On-ong, et al. 2012. Pineapple Wine Fermentation with Yeasts
Isolated from Fruit as Single and Mixed Starter Cultures. Asian Journal of
Food and Agro-Industry 5(02), 104-111.
Chojnacka, K. 2011. Fermentation Products. Encyclopedy of Life Support System
Chemical Engineering and Chemical Process Technology Vol. V.
Dutta, Rajiv. 2008. Fundamentals of Biochemical Engineering. Springer. New York.
Fardiaz, Winarno. 1984. Biofermentasi dan Biosintesa Protein. Angkasa. Bandung.
Guthri, Christine and Gerald Fink. 1991. Guide to Yeast Genetics and Molecular
Biology. Methods in Enzymology Vol.4.
Hikmiyati, Nopita dan Noviea Sandrie Yanie. 2010. Pembuatan Bioetanol dari
Limbah Kulit Pisang melalui Proses Hidrolisa Asam dan Enzimatis.
Universitas Diponegoro. Semarang.
Kusnadi. 2010. Mikrobiologi. FMIPA UPI. Bandung.
Kwartiningsih, Endang dan Ln. Nuning Sri Mulyati. 2005. Fermentasi Sari Buah
Nanas Menjadi Vinegar. Ekuilibrium Vol. 4. No. 1, 8-12.
MSDS Commercial Alcohols. 2009.
Muljoharjo, M. 1984. Nanas dan Teknologi Pengolahannya. Liberty. Bandung.
Musanif, Jamil. 2008. Bio-ethanol. Departemen Pertanian. Jakarta.
Oktarina, Eva. 2008. Penapisan dan Uji Akttivitas Bakteri Alkalo Termofilik
Penghasil Xilanase. Universitas Indonesia. Jakarta.
Rahim, Dicha. 2008. Produksi Etanol oleh Saccaromyces cereviceae var enipsodeus
dari Sirup Dekstrin Pati Sagu (Mettroxylon sp.) Menggunakan Metode Aerasi
Penuh dan Aerasi Dihentikan. Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Santi, Sintha Soraya. 2008. Pembuatan Alkohol dengan Proses Fermentasi Buah
Jambu Mete oleh Khamir Saccaromyces cereviceae. Teknik Kimia UPN
Veteran. Surabaya.

Laboratorium Mikrobiologi Industri 18

ALKOHOL

Wardhani, Agnes Dwi dan Dyani Prasasti. 2008. Pengaruh Bakes Yeast terhadap
Pembuatan Ethanol dari Buah Nangka Sortiran. Jurusan Teknik Kimia
Universitas Diponegoro. Semarang.

Laboratorium Mikrobiologi Industri 19

ALKOHOL

LEMBAR PERHITUNGAN

1. Hasil Percobaan
Stater
Volume picno = 26 mL
Tabel.4.1. Data Hasil Percobaan Stater
Hari ke-0 Hari ke-1 Hari ke-2
Variabel Jumlah Jumlah Jumlah
(gr/ml) koloni (gr/ml) koloni (gr/ml) koloni
1 1,062 3,75 x 109 1,046 1,5 x 1010 1,046 2 x 1010
2 1,069 6,25 x 109 1,046 3 x 1010 1,05 4 x 1010

Fermentasi
% SB = 14,34%
Pengenceran dengan menambah aquadest sebanyak 745 ml.
Tabel 4.2. Data Hasil Percoban Fermentasi
Hari ke-0 Hari ke-1 Hari ke-2
Variabel
%h (gr/ml) %h (gr/ml) %h (gr/ml)
1 14,85 1,01 17,47 1,03 14,13 1,04
2 15 1 15,37 1,015 15,96 1,04
3 15,54 1,01 16,27 1,02 20,33 1,038
4 11,94 1,03 10,14 1,035 19,02 1,046
5 12,91 1,03 13,33 1,035 9,25 1,038
6 12,37 1,035 10,31 1,038 17,88 1,04
7 12,62 1,03 4,83 1,035 16,47 1,038
8 9,71 1,03 11,59 1,035 19,17 1,038

2. Perhitungan
a. Stater
Massa picno kosong = 24,8 gr
Massa aquadest + picno = 50,8 gr
Massa aquadest = (50,8-24,8) gr = 26 gr

Laboratorium Mikrobiologi Industri A-1

ALKOHOL

V picno = = /
= 26

- Densitas Stater hari ke-0

Stater 1; massa = 27,6 gr
27,6
= = = 1,062 /
26
Stater 2; massa = 27,8 gr
27,8
= = = 1,069 /
26
- Densitas Stater hari ke-1
Stater 1; massa = 27,2 gr
27,2
= = = 1,046 /
26
Stater 2; massa = 27,2 gr
27,2
= = = 1,046 /
26
- Densitas Stater hari ke-2
Stater 1; massa = 27,2 gr
27,2
= = = 1,046 /
26
Stater 2; massa = 27,3 gr
27,6
= = = 1,05 /
26
Jumlah Koloni
1

80 25. 10 10
- Jumlah Koloni hari ke-0
Starter 1:
1
100 250 3 = 3,75 10
80 25. 10 10
Starter 2:
1
100 250 5 = 6,25 10
80 25. 10 10
- Jumlah Koloni hari ke-1
Starter 1:
1
100 250 12 = 1,5 10
80 25. 10 10

Laboratorium Mikrobiologi Industri A-2

ALKOHOL

Starter 2:
1
100 250 14 = 3,0 10
80 25. 10 10
- Jumlah Koloni hari ke-2
Starter 1:
1
100 250 16 = 2,0 10
80 25. 10 10
Starter 2:
1
100 250 32 = 4,0 10
80 25. 10 10

b. Fermentasi
Kadar glukosa nanas
F = 23 mL
M = 8 mL
= 1,046 gr/mL

( )
% = 100% 0,0025

( )
% =

(23 8 )
% = = 14,34%
1,046 /
Kadar yang diminta adalah 10%, karena kadar kurang dari yang diminta
maka perlu ditambahkan sukrosa, penambahannya :
Bila %SB >10%, perlu ditambah sukrosa:
%
10% = 100%
( )+( )
14,34 5 1,046 /
10% = 100%
( 1 / ) + (26 1,046 / )
V aq = 745 ml

Densitas dan %h tiap variabel

( )
% = 100% 0,0025

Laboratorium Mikrobiologi Industri A-3

ALKOHOL

( )
% = 100% 0,0025

hari ke-0
Volume = 26 mL
F =23 mL
- Variabel 1
Massa : 26,2gr
26,2
= = = 1,01 /
26
M= 8 mL
( ) (23 8)
% = = = 14,85 %
1,01 /
- Variabel 2
Massa : 26gr
26
= = =1 /
26
M= 8,5 mL
( ) (23 8,5)
% = = = 15%
1 /
- Variabel 3
Massa : 26,2gr
26,2
= = = 1,01 /
26
M= 7,3 mL
( ) (23 7,3)
% = = = 15,54 %
1,01 /
- Variabel 4
Massa : 26,8gr
26,8
= = = 1,03 /
26
M= 10,7 mL
( ) (23 10,7)
% = = = 11,94 %
1,03 /
- Variabel 5

Laboratorium Mikrobiologi Industri A-4

ALKOHOL

Massa : 26,8gr
26,8
= = = 1,03 /
26
M= 9,7 mL
( ) (23 9,7)
% = = = 12,91 %
1,03 /
- Variabel 6
Massa : 26.9gr
26,9
= = = 1,035 /
26
M= 10,2 mL
( ) (23 10,2)
% = = = 12,37 %
1,035 /
- Variabel 7
Massa : 26,8gr
26,8
= = = 1,03 /
26
M= 10 mL
( ) (23 10)
% = = = 12,62 %
1,03 /
- Variabel 8
Massa : 26,8gr
26,8
= = = 1,03 /
26
M= 13 mL
( ) (23 13)
% = = = 9,71 %
1,03 /

hari ke-1
Volume = 26 mL
F = 24,3 mL
- Variabel 1
Massa : 26,7gr
26,7
= = = 1,03 /
26

Laboratorium Mikrobiologi Industri A-5

ALKOHOL

M= 6,3 mL
( ) (24,3 6,3)
% = = = 17,47 %
1,03 /
- Variabel 2
Massa : 26,4gr
26,4
= = = 1,015 /
26
M= 8,7 mL
( ) (24,3 8,7)
% = = = 15,37 %
1,015 /
- Variabel 3
Massa : 26,5gr
26,5
= = = 1,02 /
26
M= 7,7 mL
( ) (24,3 7,7)
% = = = 16,27 %
1,02 /
- Variabel 4
Massa : 26,9gr
26,9
= = = 1,035 /
26
M= 13,8 mL
( ) (24,3 13,8)
% = = = 10,14%
1,035 /
- Variabel 5
Massa : 26,9gr
26,9
= = = 1,035 /
26
M= 10,5 mL
( ) (24,3 10,5)
% = = = 13,33%
1,035 /

- Variabel 6
Massa : 27
27
= = = 1,038 /
26

Laboratorium Mikrobiologi Industri A-6

ALKOHOL

M= 13,6 mL
( ) (24,3 13,6)
% = = = 10,31%
1,038 /
- Variabel 7
Massa : 26,9 gr
26,9
= = = 1,035 /
26
M= 19,3 mL
( ) (24,3 19,3)
% = = = 4,83%
1,035 /
- Variabel 8
Massa : 26,9 gr
26,9
= = = 1,035 /
26
M= 12,3 mL
( ) (24,3 12,3)
% = = = 11,59%
1,035 /

hari ke-2
Volume = 26 mL
F = 32,1 mL
- Variabel 1
Massa : 27,1 gr
27,1
= = = 1,04 /
26
M= 17,4 mL
( ) (32,1 17,4)
% = = = 14,13%
1,04 /
- Variabel 2
Massa : 27,1 gr
27,1
= = = 1,04 /
26
M= 15,5 mL
( ) (32,1 15,5)
% = = = 15,96%
1,04 /

Laboratorium Mikrobiologi Industri A-7

ALKOHOL

- Variabel 3
Massa : 27 gr
27
= = = 1,038 /
26
M= 11 mL
( ) (32,1 11)
% = = = 20,33 %
1,038 /
- Variabel 4
Massa : 27,2gr
27,2
= = = 1,046 /
26
M= 12,2 mL
( ) (32,1 12,2)
% = = = 19,02%
1,046 /
- Variabel 5
Massa : 27 gr
27
= = = 1,038 /
26
M= 22,5 mL
( ) (32,1 22,5)
% = = = 9,25%
1,038 /
- Variabel 6
Massa : 27,1
27,1
= = = 1,04 /
26
M= 12,5mL
( ) (32,1 13,5)
% = = = 17,88%
1,04 /
- Variabel 7
Massa : 27gr
27
= = = 1,038 /
26
M= 15 mL
( ) (32,1 15)
% = = = 16,47%
1,038 /
- Variabel 8

Laboratorium Mikrobiologi Industri A-8

ALKOHOL

Massa : 27gr
27
= = = 1,038 /
26
M= 12,2 mL
( ) (32,1 12,2)
% = = = 19,17%
1,038 /

Laboratorium Mikrobiologi Industri A-9