Uji Mutasi Gen pada Mencit

Uji Lokus Khusus Uji lokus khusus dikembangkan oleh Rusell (1951) untuk
menentukan mutagenisitas radiasi ion pada sel germinal. Prosedur ini kemudian diadaptasikan
untuk menilai mutagenisitas zat kimia(Searle, 1975). Kelebihan uji ini adalah mendeteksi secara
langsung pada mamalia utuh efek mutagen toksikan pada sel germinal, tetapi biasanya
dibutuhkan hewan yang sangat banyak.

Uji ini dilakukan dengan memajankan mencit nomutan terhadap zat kimia dan sesudah
itu mengawinkannya dengan hewan yang resesif-ganda. Keturunannya akan berubah fenotipenya
yang ditunjukkan oleh warna rambut, struktur rambut, warna mata, panjang telinga, dan ciri-ciri
lain. Beberapa mutan merupakan mosaic dan bukan hewan lengkap. Mutasi dapat juga dideteksi
oleh penolakan atau penerimaan cangkokan kulit yang dilakukan antara keturunan generasi
pertama. Mutasi ini dapat lebih jauh digolongkan secara imunogenetik ( Bailey dan Kohn, 1965).

Uji Berak Mencit Pengujian ini dirancang untuk mendeteksi mutasi gen pada sel
somatic. Pada dasarnya uji ini dilakukan dengan member perlakuan mencit hamil yang
embrionya heterozigot pada lokus untuk warna kulit khusus, dan kemudian memeriksa bayinya
yang baru lahir untuk melihat ada tidaknya bercak-bercak mozaik pada bulunya. Bercak
semacam itu menunjukkan pembentukan klon sel mutan yang bertanggung jawab terhadap warna
bulu. Uji ini relative tidak mahal dan hanya memakan waktu beberapa minggu. Meskipun dapat
member hasil positif palsu, uji ini belum pernah member hasil negative palsu. Karenanya uji
bercak itu merupakan alat pra-saring yang berguna untuk mendeteksi mutasi germinal turunan
pada mamalia (Rusell, 1978).

PERUBAHAN KROMOSOM

Efek suatu toksikan pada kromosom dapat muncul sebagai aberasi structural atau sebagai
perubahan dalam jumlahnya. Efek yang pertama mencakup delesi, duplikasi dan translokasi.
Efek yang belakangan melibatkan pengurangan atau peningkatan jumlah kromosom. Beberapa
efek itu diwariskan.

Cara kerja yang mendasari efek ini dapat melibatkan tautan silang (cross linkage)
molekul, yang dapat menyebabkan terhambatnya sintesis DNA, sehingga menyebabkan
terbentuknya celah pada kromosom. Perbaikan yang tidak sempurna terhadap kerusakan DNA
dapat juga merupakan penyebabnya. Nondisjunksi (gagalnya pemisahan sepasang kromosom
selama pembelahan mitosis) dapat mengakibatkan mosaikisme. Suatu nondisjunksi selama
gametogenesis (nondisjunksi meiosis) menyebabkan sel anak berisi satu kromosom ekstra atau
berkurang satu kromosom dibandingkan dengan normal. Yang pertama dikenal sebgai trisomi
dan yang belakangan monosomi. Sejumlah system uji telah dikembangkan untuk menentukan
efek kromosom. Berikut ini adalah 1ystem-sistem yang utama.
Serangga

Drosophila melanogaster mempunyai keuntungan karena beberapa selnya memiliki

kromosom yang bentuk dan ukurannya besar. Selain itu, berbagai efek kromosom dapat dengan
mudah dipastikan secara genetic, misalnya letalitas terangkai-seks resesif. Efek kromosom ini
antara lain berupa hilangnya kromosom X dan Y, dan translokasi fragmen antara kromosom
kedua dan ketiga.

Efek pada kromosom seks dapat juga dideteksi oleh perubahan fenotip, misalnya, warna
badan dan warna serta bentuk mata (National Research Council, 1983).

Penelitian Sitogenetik dengan Sel Mamalia

Uji In Vitro Untuk uji sitogenetik, sel yang biasa digunakan diperoleh dari limfoma
mencit, ovarium tupai cina, dan limfosit manusia. Sel ini dibiakkan dalam perbenihan yang
sesuai. Sel-sel itu kemudian dikenai zat kimia yang diuji dengan kadar yang berbeda-beda
dengan atau tanpa system bioaktivator (biasanya fraksi mikrosom dari homogenate hati tikus).
Uji biasanya dilakukan dengan dua mutagen control positif, yaitu metan sulfonat yang bekerja
langsung, dan dimetilnitrosamin yang membutuhkan bioaktivasi. Setelah suatu masa inkubasi
yang sesuai, pembelahan sel dihambat oleh penambahan kolkisin. Sel kemudian iambil,
diwarnai, dan diberi skor (Cohen dan Hirshhorn, 1971).

Contoh cara member skor pada aberasi diperlihatkan dibawah ini : celah kromatid,
patahan kromatid, celah kromosom, delesi kromatid, fragmen asentrik, translokasi, triradial,
kuadriradial, satu kromosom hancur, banyak kromosom hancur, sel hancur, kromosom
melingkar, kromosom disentrik, kromosom kecil, lebih besqar dari 10 aberasi, polipoid dan
hiperploid. Mengenai define berbagai istilah ini, lihat Brusick (1987).

Uji In Vivo Sel mamalia yang digunakan dalam penelitian efek kromosom in vivo
antar lain dalah sel germinal dan jaringa somatic. Bahan kimia yang akan diuji diberikan kepada
hewan utuh misalnya, hewan pengerat (menvit, tikus, tupai) dan manusia. Jaringan somatic yang
biasa diberikan adalah sum-sum tulang dan limfosit perifer. Protocol klasik yang menggunakan
sum-sum tulang mencit, tikus atau tupai telah disediakan oleh Komite Ad Hoc Dari
Environmental Mutagen Society dan Institute For Medical Research (1972). Cara pemberian
skor sama dengan cara dalam uji in vitro.

Suatu prosedur in vivo yang lebih sederhana adalah uji mikronukleus. Ini dilakukan
dengan menggunakan sel stem eritrosit polikromatik dari mencit CD-1. Enam jam setelah dua
kali pemberian zat kimia yang diuju, dengan selang waktu 24 jam, hewan dibunuh dan sum-sum
tulang dikumpulkan dari kedua femur. Peningkatan jumlah sel yang bermikronukleus
dibandingkan control (skitar 0,5%) dianggap positif (schmid, 1976). Mikronukleus ini mewakili
fragmen kromosom dan kromatid akibat gangguan fungsi spindle/sentromer.
 Untuk uji pada sel germinal, biasanya hewan jantan. Untuk memungkinkan terpajannya
sel dengan berbbagai tahap spermatogenesis yang berbeda, zat kimia diberikan setiap hari selama
5 hari dan hewan dikorbankan 1, 3, dan 5 minggu setelah dosis terakhir. Sperma dikumpulkan
dengan membedah caude epididimis. Setelah direkatkan dan diwarnai, dihitung insidens sperma
dengan kepala yan abnormal, dan ini dibandingkan dengan control negative dan positif
(Wyrobek dan Bruce, 1975).

Uji Letal Dominan pada Hewan Pengerat

Uji ini dirancang untuk melihat efek toksis pada sel germinal pada hewan jantan utuh,
biasanya mencit atau tikus. Efeknya dapat mucul pada hewan betina yang dikawini dalam bentuk
matinya implantasi dan atau hilangnya praimplantasi (beda antara jumlah korpus dan jumlah
implantasi). Efek ini biasanya disebakan oleh kerusakan kromosom, yang mengakibatkan
kesalahan perkembangan yang fatal bagi zigot. Namun, efek sitotoksik lain daoat juga
menyebabkan kematian ddini janin. Protocol khusus telah disediakan dalam sejumlah makalah
(Ehling dkk, 1978).

Uji Translokasi Turunan Pada Mencit

Pengujian ini dimaksudkan untuk mendeteksi kemampuan mewariskan kerusakan

kromosom. Kerusakan, yang terdiri atas translokasi timbale-balik dalam sel-sel germinal mecit
jantan yang mendapat perlaukan, diteruskan kepada keturunannya. Dengan mengawinkan
keturunan jantan F1 dengan mencit betina yang tidak diberi perlakuan, efek kromosom terungkap
dengan berkurangnya janin yang dapat hidup. Adanya translokasi timbale-balik ini dapat
dibuktikan dengan kehadiran gambar translokasi diantara tetrad ganda selama meiosis (Adler,
1980).

PERBAIKAN DNA DAN REKOMBINASI

Proses biologic ini bukanlah mutasi, tetapi terjadi setelah kerusakan DNA. Karena itu
fenomena ini menunjukkan adanya kerusakan DNA yang umumnya disebabkan oleh mutagen.

Bakteri

Diantara E. coli, ada bakteri yang memiliki enzim DNA polymerase I yang mampu
memperbaiki kerusakan DNA, dan ada bakteri yang tak punya enzim ini. Mutagen menginduksi
kerusakan partikel. Membesarnya ukuran inti menunjukkan karsinogenisitas zat kimia itu (Finch
dkk., 1980).

EVALUASI

Kebutuhan akan Penelitian Mutagenesi

Bahaya metagenesis tidak diragukan lagi. Seperti disebutkan sebelumnya, banyak penyait
bawakan diduga berkaitan dengan aberasi kromosom serta mutasi gen dominan dan resesif.
Selain itu mutagenesis dapat berguna pada penelitian etiologi penyakit biasa, misalnya diabetes
mellitus, epilepsy, skizofernia, hipertensi esensial, katarak, penuaan, penyakit jantung dan kanker
tertentu. Akhirnya, harus diingat ada hubungan erat antara mutagen dan karsinogen.

Dengan demikian, ada tantangan besar bagi ahli toksikologi untuk mengidentifikasi
mutagen yang mengenai manusia dan menghitung resikonya. Sejauh ini, keberhasilan dalam
daerah ini masih terbatas. System uji baru masih dikembangkan, dan kesahihan dan keterbatasan
uji yang ada masih dipelajari. Namun, pengetahuan dalam bidang ini ini memberikan suatu dasar
untuk pendekatan rasional dalam menyaring toksikan dari segi potansi mutagen/karsinogennya.

Pemilihan System Uji

Karena memengaruhi zat genetic dengan cara yang berbeda-beda, mutagen dapat member
hasil negative pada satu uji dan positif bagi uji lainnya. Untuk menyingkirkan hasil negative
palsu (dan positif palsu), sebaiknya dilakukan beberapa uji, lebih baik uji dari kategori berbeda.
OECD (1987) menganjurkan serangkaian uji untuk penyaringan, pemastian dan penilaian risiko
(Tabel 8-2).

Komite mutagen kimia lingkungan dari national research council menganjurkan suatu
program peniliaian mutagen (National Research Council, 1983). Disarankan bahwa uji
mutagenesis ditempatkan dalam tiga tingkatan. Deretan tingkat I terdiri atas (1) uji
Salmonella/mutasi-gen mikromosom, (2) uji mutasi-gen sel mamalia, dan (3) uji patah
kromosom sel mamalia. Kalau semua uji itu negative, zat kima diduga nonmutagen bagi
mamalia. Kalau dua dari uji ini positif, zat ini digolongkan sebagai diduga mutagen bagi
mamalia. Kalau hanya satu yang positif, perlu dilakukan uji deretan II (mutasi letal terangkai-
seks pada Drosophila). Untuk lebih jauh menyaring zat-zat kimia yang penting, dilakukan uji
tambahan. Uji lokus-khusus dianjurkan untuk zat kimia yang mempunya potensi mutagenisitas
pada sel germinal mamalia, dan uji letal dominan harus dilakukan untuk zat kimia yang
menunjukkan berbagai efek kromosom.

Kemaknaan Hasil

Hubungan Antara Mutagenisitas dan Karsinogenisitas

Beberapa penyelidik telah memperlihatkan hubungan antara karsinogen dengan mutagen.

Contohnya, McCann dkk. (1975) melaporkan penelitian mereka mengenai mutagenesitas 300 zat
kimia dengan uji salmonella/mikrosom. Hasilnya dibandingkan dengan laporan karsinogenisitas
atau nonkarsinogenisitas zat-zat ini. Dengan uji itu mereka menunjukkan korelasi yang tinggi
antara kedua efek toksis itu : 90% (156/175) karsinogen juga bersifat mutagen. Hanya sedikit zat
nonkarsinogen yang memperlihatkan sifat mutagenisitas.

Dari 18 karsinogen yang member hasil negative-palsu, beberapa terbukti membutuhkan

aktivasi metabolic lain (contohnya, sikain dan 1,2-dimetilhidrazin tidak bersifat karsinogen pada
hewan bebas kuman, menunjukkan adanya kebutuhan akan aktivasi oleh flora usus). Karsinogen
lainnya, misalnya aminotriazol, tiosetamid, dan tiourea bersifat goitrogen dan menyebabkan
tumor tiroid lewat mekanisme non-mutagen. Lainnya, misalnya auramin, bersifat karsinogen
hanya karena pengotornya. Mutagenisitas dietilstilbestrol tidak dapat diuji sebagaiman mestinya
dalam system ini Karena toksisitasnya pada bakteri itu.

Baru-baru ini, Mason dkk. (1989) menghimpun informasi mengenai hubungan antara
karsinogenisitas pada hewan pengerat dan mutagenisitas yang ditentukan oleh S. typhimurium.
Korelasi ini bervariasi antar 55 dan 93%.

Efek turunan pada waktu ini tidak ada korelasi langsung antar uji laboratorium untuk
mutasi turunan dan pengalaman manusia. Namun, kalau suatu zat telah terbukti dapat bersifat
mutagen dalam berbagai jenis system uji termasuk mutasi turunan pada mamalia utuh, zat itu
harus dianggap sebagai suatu mutagen manusia kecuali kalau ada bukti sebaliknya. Selain itu,
bagi banyak zat kimia, misalnya zat ttambahan makanan, pestisida, kosmetik dan sebagian besar
obat yang pajanannya dapat dihindari, informasi yang sangat sedikit cukup sebagai alasan untuk
penundaan penggunaannya (Flamm, 1977). Pada masa kini belum ada metode terpercaya yang
tersedia untuk memperkirakan risiko akibat mutagen berdasarkan kekuatannya (National
Research Council, 1983).

Seperti telah disebut diatas, penyelidik tentang mutagenesis adalah suatu disiplin baru.
Pengetahuan yang dengan cepat dapat diperoleh dalam bidang ini mungkin sekali akan
mempengaruhi tafsiran mengenai pentingnya hasil suatu pengujian mutagenisitas disamping
mempengaruhi seleksi system uji untuk menyaring berbagai toksikan.

DAFTAR PUSTAKA

Abrahamson, S., and Lewis, E.B. (1971)