LAMPIRAN A

PERHITUNGAN PEMBUATAN LARUTAN

A. Pembuatan buffer sitrat

a. Persamaan handerson-Haseback (Perrin dan Demsey, 1974)

[HA− ]
pH = pKa + log [HA−]

[Na3 C6 H5 O7 .2H2 O]
pH = pKa + log [C6 H8 O7 .H2 O]

[40 mM]
pH = pKa + log [10 mM]

pH = 6,40 + log 4

pH = 6,40 + 0,6021

pH = 7,00

b. Pembuatan Asam Sitrat 10 mM dalam 1 L

10 mM = 0,01 M

Mol = 0,01 M × 1 L

Mol = 0,01 mol

Massa = mol × BM

Massa = 0,01 mol × 210,14 g/mol

Massa = 2,1014 g

c. Pembuatan Natrium Sitrat 40 mM dalam 1 L

40 mM = 0,04 M

Mol = 0,04 M × 1 L

Mol = 0,04 mol

 Massa = mol × BM

Massa = 0,04 mol × 294,10 g/mol

Massa = 11,7640 g

d. Pembuatan buffer sitrat pH 0,5; 1; 1,5 dengan menggunakan pH meter

Tabel A.1 Perbandingan asam sitrat dengan natrium sitrat

Konsentrasi pH Perbandingan
(M) (Asam Sitrat 10 mM : Na-Sitrat 40 mM)
0,5 1:30
1 1:29
1,5 1:33

2. Pembuatan pelarut crude PPO jamur tiram putih reject dalam 50 mL

a. Pembuatan Triton-X 100 0,5% v/v

0,5
Volume = × 50 mL
100

= 0,25 mL

b. Pembuatan EDTA 2 mM

2 mM = 0,002 M

Berat 1000 mL
M = ×
BM zat Volume (mL)

Berat 1000 mL
0,002 M = gram ×
372,24 ⁄mol 50 mL

Berat = 0,0372 gram

b. Pembuatan NaCl 1 M

Berat 1000 mL
M = ×
BM zat Volume (mL)
 Berat 1000 mL
1M = ×
58,43 gram/mol 50 mL

Berat = 2,9215 gram

d. Pembuatan PVP 0,5 % dalam 50 mL buffer sitrat

0,5
Berat = × 50 mL
100

= 0,25 mL
A.3. Pembuatan larutan untuk uji aktivitas crude-PPO jamur tiram putih
reject
a. Pembuatan larutan induk katekol 10mM sebanyak 50 mL
Berat 1000 mL
M = ×
BM zat Volume (mL)

Berat 1000 mL
M = ×
110 𝑔/𝑚𝑜𝑙 50 mL

Berat = 0,055 gram

b. Pembuatan Asam Askorbat 2,1 mM sebanyak 50 mL
2,1 mM = 0,0021 M

Berat 1000 mL
M = ×
BM zat Volume (mL)

Berat 1000 mL
0,021 M = ×
176,21 g/mol 50 (mL)

Berat = 0,0185 gram

d. Perhitungan Pembuatan EDTA 0,65 mM sebanyak 50 mL

0,65 mM = 0,00065 M

Berat 1000 mL
M = ×
BM zat Volume (mL)

Berat 1000 mL
0,00065 M = ×
372,24 g/mol 50 mL

Berat = 0,0121 g
A.4. Pembuatan larutan standar Bovine Serum Albumine

a. Pembuatan larutan induk BSA 2 mg/mL sebanyak 50 mL

2 mg
Berat = x 50 mL
1 mL

Berat = 100 mg = 0,1 g

A.5. Pembuatan larutan uji limbah katekol artifisial

a. Pembuatan larutan induk katekol 1000 mg/L 100 mL

1000 mg
Berat = x 100 mL
1000 mL

Berat = 100 mg = 0,1 g

b. Pembuatan limbah katekol artifisial 10 mg/L sebanyak 500 mL

V1 x M1 = V2 x M2

V1 x 1000mg/L = 500 mL x 10 mg/L

V1 = 5 mL

c. Pembuatan larutan K3Fe(CN)6 4% sebanyak 100 mL

4 gran
Berat = x 100 mL
100 mL

Berat = 100 g

d. Pembuatan larutan NH4OH 0,5 N sebanyak 100 mL

V1 x N1 = V2 x N2

V1 x 14,8 N = 100 mL x 0,5 N

V1 = 3,3784 mL
 LAMPIRAN B

PERHITUNGAN AKTIVITAS ENZIM

𝟏 𝐕 𝐭𝐨𝐭𝐚𝐥 𝐝 [ 𝐒𝐮𝐛𝐬𝐭𝐫𝐚𝐭]
Aktivitas = . -
ɛ𝐛 𝐕 𝐞𝐧𝐳𝐢𝐦 𝒅𝒕

dimana:

1
= slope dari [A] vs [Substrat] = µmol/mL
εb

V total = volume campuran (3 mL)

V enzim = 0,1 mL enzim PPO

d [Substrat]
= perubahan absorban terhadap perubahan waktu
dt

B.1. Contoh perhitungan dari data konsentrasi pH 0,5 M dengan variasi

konsentrasi katekol 0,5 mM

a.Persamaan regresi linier dari gambar kalibrasi katekol

Didapat y = 2,180479x + 0,439907 denga R2 = 0,997522

Maka εb = 2,18

1 1
=− = −0,458716
εb 2,18

b. Persamaan regresi linier dari laju awal enzim PPO pada pH optimum

Didapat y = -0,015351x + 0,158429 dengan R2 = 0,932723

Maka slope = -0,015351 per detik

d [Katekol]
= −(−0,015951)x30 = 0,46053
dt
 1 V total d [katekol]
aktivitas = . .
εb V enzim dt

aktivitas = −0,458716x 30x 0,46053

aktivitas = 63,37 unit/mL

B.3 Data uji aktivitas substrat katekol

Konsentrasi
Konsentrasi Regresi Linier Aktivitas
Katekol Ɛb 1/Ɛb d[katekol]/dt Vt/V0
Buffer Enzim (Unit/mL)
(mM)
y = -0.012357x +
0,5 0,1 2.18 0.46 0.37 30 51.02
0.276310
R² = 0.878085
y = -0.015351x +
0,5 2.18 0.46 0.46 30 63.38
0.158429
R² = 0.932723
y = -0.014246x +
1 2.18 0.46 0.43 30 58.81
1.108681
R² = 0.969228

y = -0.012597x +
1 0,1 2.18 0.46 0.38 30 52.01
0.447173
R² = 0.977388
y = -0.010691x +
0,5 2.18 0.46 0.32 30 44.14
0.150029
R² = 0.964469
y = -0.010503x +
1 2.18 0.46 0.32 30 43.36
0.118957
R² = 0.980807

y = -0.010866x +
1,5 0,1 0,32 30 44,86
2.18 0.4587 0.131814
R² = 0.962437
y = -0.0131x +
0,5
2.18 0.4587 0.3044 0,29 30 54,08
R² = 0.9715
y = -0.003269x +
1
2.18 0.4587 0.201905 0,16 30 22,49
R² = 0.993353
B.4 Perhitungan kadar protein dalam crude

Persamaan regresi y = 0,2515x + 0,7189 dengan R2 = 0,996038

Diketahui absorban crude = 0,3858

Dimana absorban crude = y

Kadar protein = x

y − 0,1789 0,3858 − 0,178930

X1 = = = 0,8225 mg/mL
0,2515 0,2515

Karena 20 kali pengenceran, maka :

X = 0,8225mg/ml x 20

X= 16,45 mg/ml

B.5 Perhitungan aktivitas spesifik PPO dalam crude dengan substrat katekol

aktivitas PPO
aktivitas spesifik =
kadar protein

63,37 unit/mL
aktivitas spesifik =
16,37mg/mL

aktivitas spesifik = 3,87 unit/mg

 LAMPIRAN C

APLIKASI LIMBAH KATEKOL

Persamaan regresi y = 0,12547x + 0,00415 dengan R2 = 0,998

Diketahui absorban limbah fenol sebelum ditambah crude = 0,331 (X1)

Diketahui absorban limbah fenol setelah ditambah crude 0,5 = 0,2695 (X2)

Diketahui absorban limbah fenol setelah ditambah crude 1,0 = 0,3087 (X3)

Diketahui absorban limbah fenol setelah ditambah crude 2,0 = 0,336 (X4)

Dimana absorban limbah fenol = y

Kadar fenol = x

Maka:

Kadar fenol dalam limbah cair buatan sebelum ditambah crude:

y − 0,00415 0,331 − 0,00415

X1 = = = 2,605 mg/L
0,012547 0,012547

Kadar femol dalam limbah cair buatan sebelum ditambah crude:

y − 0,00415 0,2695 − 0,00415

X2 = = = 2,11 mg/L
0,012547 0,12547

y − 0,3087 0,3087 − 0,00415

X3 = = = 2,427 mg/L
0,012547 0,012547

y − 0,336 0,336 − 0,00415

X1 = = = 2,645 mg/L
0,012547 0,012547

Persentase pengurangan fenol:

2,605 − 2,11
% pengurangan X2 = x 100% = 19 %
2,605
 2,605 − 2,427
% pengurangan X2 = x 100% = 6,83 %
2,605

2,605 − 2,445
% pengurangan X2 = x 100% = 1,6 %
2,605