TUGAS FITOKIMIA REVIEW JURNAL

INTERNASIONAL
“Preliminary phytochemical screening and in vitro antibacterial activity of
Bauhinia variegata Linn. against human pathogens”

OLEH :
MOHAMMAD ZULFIKHAR A (152210101068)
KELAS :B

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS JEMBER
2017
 1. Pendahuluan
Saat ini, peningkatan jumlah agen infeksi menjadi lebih tahan terhadap senyawa
antimikroba komersial. Kebutuhan untuk mengembangkan obat baru memerlukan
strategi yang bervariasi, bioprospection metabolit sekunder yang dihasilkan oleh
tanaman obat adalah salah satunya. Namun, manusia kini dihadapkan pada masalah
global resistensi yang muncul di hampir semua patogen.
Bauhinia variegata. (Leguminosae), dikenal sebagai Kanchanar dalam bahasa
Hindi, adalah pohon berukuran medium yang tumbuh melimpah di saluran Sub-
Himalaya hingga ke Assam, Timur Tengah dan India Selatan. Berbagai bagian tanaman
yaitu, daun, kuncup bunga, bunga, batang, kulit batang, biji dan akar digunakan dalam
pengobatan demam, sebagai tonik, diare, disentri, wasir, edema, pencahar, obat cacing,
antileprotic di penyakit kulit, penyembuhan luka, antigoitrogenic, antitumor, obesitas,
stomatitis, obat penawar untuk keracunan ular, dispepsia, perut kembung dan sebagai
karminatif. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk melakukan evaluasi praklinis dari
beberapa spesies tanaman obat populer, yaitu, screening biologis dan fitokimia
Penelitian ini dilakukan untuk mempelajari skrining fitokimia dan antibakteri B.
variegata (Daun, kulit batang, bunga) yang dapat digunakan sebagai salah satu
parameter untuk standarisasi simplisia.

2. Bahan dan Metode

Semua bahan kimia dan pelarut yang digunakan dalam percobaan adalah kelas
analitis.
a. Koleksi Tanaman dan Identifikasi
Bagian tanaman segar dikumpulkan secara acak dari kebun raya herbal
dari Bhopal, Madhya Pradesh, India. Identitas taksonomi tanaman B. variegata
dikonfirmasi oleh ahli botani Dr SS Khan (Voucher Spesimen No: SP / 101 /
LGOB / 2006), Departemen Botani, Safia Ilmu College, Bhopal, Madhya
Pradesh, India. Bahan tanaman segar dicuci di bawah air leding, dikeringkan
dan kemudian dihomogenisasi menjadi bubuk halus dan disimpan dalam botol
kedap udara.
b. Persiapan Ekstrak
Bahan tanaman yang dikeringkan ditumbuk menjadi bubuk halus
menggunakan penggiling. Timbang 50 g bahan bubuk kemudian diekstraksi dan
di pisahkan dalam separating funnel aparatus dengan menggunakan pelarut 250
mL Metanol 50%. Ekstrak yang diperoleh masing-masing pelarut disaring
melalui kertas saring Whatman No. 1 dan dipanaskan dalam water bath. Zat
kehijauan-coklat lengket diperoleh dan disimpan dalam lemari es sampai
digunakan.

c. Protokol untuk Pengukuran Fitokimia Pendahuluan Penyaringan

Tes skrining standar ekstrak metanol dilakukan untuk berbagai konstituen
tanaman. Ekstrak kasar disaring untuk ada atau tidak adanya metabolit
sekunder seperti alkaloid, senyawa steroid, senyawa fenolik, flavonoid,
saponin, tanin menggunakan prosedur standar.

1. Uji untuk Karbohidrat dan Glikosida

1.1. Uji Molish
Sebanyak 2 mL filtrat dengan dua tetes larutan alkohol α-naphthol
ditambahkan, campuran di aduk ad homogeny. satu mL asam sulfat
pekat ditambahkan perlahan-lahan di sepanjang tabung reaksi dan
didiamkan. Jika ada cincin ungu menunjukkan adanya karbohidrat.
1.2.Uji Fehling
Satu mililiter filtrat dipanaskan dalam water bath dengan
ditambahkan 1 mL masing-masing larutan Fehling A dan B. jika
warna merah demgan penambahan fehling A menunjukkan adanya
gula.
1.3. Deteksi Glikosida
Uji Borntrager, 200 ekstrak kasar mg dicampur dengan 2 ml asam
sulfat encer dan 2 mL dari 5% larutan klorida, rebus selama 5 menit
yang menyebabkan oksidasi Antrhroquinone, yang mengindikasikan
keberadaan glikosida.
2. Uji untuk Protein dan Asam Amino
2.1. Uji Biuret
Sebuah alikuot 2 mL filtrat ditambah dengan satu tetes 2% Tembaga
sulfat. Kemudian ditambah 1 mL etanol (90%) dan pelet kalium
hidroksida. warna pink di lapisan etanol menunjukkan adanya protein.
2.2.Uji Ninhidrin
Dua tetes larutan ninhidrin ditambahkan ke 1 mL filtrat berair.
Trjadinya perubahan warna ungu menunjukkan adanya asam amino.

3. Uji untuk Alkaloid

3.1. Uji Mayer
Ekstrak kasar dicampur dengan reagen (iodida kalium merkuri)
Mayer. Terbentuk endapan, menunjukkan adanya alkaloid.
3.2. Uji Dragondroff
Ekstrak kasar dicampur dengan reagen Dragondroff (Kalium bismut
iodida). Endapan coklat kemerahan yang terbentuk menunjukkan
adanya alkaloid.

4. Uji untuk Fitosterol

Pada tes kloroform, 0,5 g ekstrak ditambah dengan 10 mL kloroform dan
disaring. Filtrat digunakan untuk menguji keberadaan fitosterol dan
triterpenoid. Ekstrak direfluks dengan larutan alkohol kalium hidroksida
sampai terjadi saponifikasi. Campuran diencerkan dan diekstraksi
dengan eter. Lapisan eter diuapkan dan residu diuji untuk mengetahuhi
kandungan fitosterol. Residu dilarutkan dalam beberapa tetes asam
asetat encer, anhidrida asetat 3 mL diikuti oleh beberapa tetes asam
sulfat pekat. Perubahan warna menjadi warna hijau kebiruan
menunjukkan adanya fitosterol.

5. Tes Untuk Senyawa Steroid dan Triterpenoid

5.1. Uji Salkowski
 Ekstrak kasar dicampur dengan beberapa tetes asetat anhidrat.
Kemudian dipanaskan dan didinginkan. Ditambahkan H 2 SO 4
pekat dari sisi tabung tes. Adanya cincin cokelat di persimpangan
dua lapisan dibentuk. Lapisan berubah hijau atas yang menunjukkan
adanya steroid dan pembentukan warna merah tua menunjukkan
adanya triterpenoid.
5.2. Uji Lieberman
Ekstrak kasar dicampur dengan kloroform dan beberapa tetes H2SO4
pekat, dikocok dengan dan didiamkan selama beberapa waktu. Warna
merah muncul di lapisan bawah menunjukkan adanya steroid dan
pembentukan lapisan berwarna kuning menunjukkan adanya
triterpenoid.

6. Tes Untuk Flavanoids

6.1. Tes Untuk Flavanoids Bebas
Lima mL etil asetat ditambahkan ke dalam larutan 0,5 g ekstrak
dalam air. Aduk ad homogen kemudian diperiksa. Adanya warna
kuning di lapisan organik menandakan positif terdapat flavonoid
bebas.
6.2. Uji Timbal Asetat
Larutan 0,5 g ekstrak dalam air, ditambahkan sekitar 1 mL dari 10%
timbal asetat. Terjadinya endapan kuning menunjukkan adanya
flavanoids.
6.3. Reaksi dengan Natrium Hidroksida
Larutan encer natrium hidroksida ditambahkan ke dalam larutan 0,5 g
ekstrak dalam air. Pembentukan warna kuning menunjukkan adanya
flavanoids.

7. Tes Untuk Saponin

Pada uji Froth, 0,5 ekstrak g dilarutkan dalam 10 mL air suling selama
30 detik. Tabung uji bertutup dan dikocok dengan kuat selama sekitar 30
detik Tabung reaksi diamati selama 30 menit. Jika “honey comb” buih di
atas permukaan cairan stabil selama 30 menit, sampel diduga
mengandung saponin.
8. Uji Untuk Tannin
8.1. Uji Klorida
Sebagian dari ekstrak dilarutkan dalam air. Larutan disaring dan
ditambahkan 10% Larutan klorida. Kemudian diamati perubahan
warna hitam kebiruan menunjukkan adanya tannin.
8.2.Uji Formalin
sekitar 0,5 g ekstrak dalam 5 mL air, ditambahkan tiga tetes formalin
dan enam tetes asam klorida encer. Campuran yang dihasilkan
dipanaskan sampai mendidih selama 1 menit dan didinginkan.
Endapan yang terbentuk (Jika ada) dicuci dengan air panas, alkohol
hangat, dan 5% Kalium hidroksida. Endapan residu berwarna setelah
dicuci, menunjukkan adanya phlobatannins.
8.3.Uji Untuk Phlobatanins
Terjadi endapan merah ketika ekstrak air dari bagian tanaman direbus
dengan 1% asam klorida menunjukkan adanya phlobatannin.
8.4.Tes Kompleks Besi Dimodifikasi
larutan 0,5 g ekstrak tanaman di 5 mL air ditambahakan setetes asam
asetat dan 1 g natrium kalium tartrate. Campuran dipanaskan dan
disaring untuk menghilangkan endapan. Larutan 0,25% besi
amonium sitrat ditambahkan ke filtrat sampai tidak ada perubahan
dari warna yang diperoleh dan kemudian direbus. Warna endapan
ungu kehitaman, yang tidak larut dalam amonia encer, menunjukkan
adanya pirogalol tanin.
8.5.Uji Untuk Senyawa Fenolik
Ferri ferrosianida reagen untuk uji fenolat: 10% Besi klorida (FeCl 3 )
(Aq) dicampur dengan sianida besi (FECN6) (1 g / 100 mL atau 0,1
g / 10 mL), 0,1 g klorida dan 0,1 g Potassium ferrisianida
(K 3 F 3 CN 3 ) dengan melarutkannya dalam 10 mL air suling. Ditambahkan
dengan ekstrak dan dipanaskan pada suhu 110 ° C. Perubahan warna
 menjadi biru menunjukkan adanya fenolat.

9. Tes Untuk Minyak dan Lemak

9.1.Tes Stain
sedikit ekstrak kasar ditekan antara dua kertas filter; noda di kertas
filter menunjukkan adanya minyak.
9.2. Uji Saponifikasi
sedikit minyak mentah ekstrak ditambahkan beberapa tetes 0,5 N
alkohol kalium hidroksida kemudian ditambahkan fenolftalein secara
terpisah dan dipanaskan dalam water bath selam 1 jam. Pembentukan
sabun menunjukkan adanya minyak dan lemak.

d. Penentuan Aktivitas Antibakteri

1. Strain Bakteri
Tiap hydromethanolic ekstrak daun, kulit batang dan bunga B.
variegata dengan konsentrasi 1000 mg / mL.750 mg / mL. 500 mg
/mL dan 250 mg / mL diuji terhadap bakteri gram Bacillus subtilius
positif (B. subtilius) (ATCC 11778). S. aureus (ATCC 25923),
Streptococcus epidermidis (S. epidermidis) (ATCC 24.676) dan Gram-
negatif E. coli (ATCC 25922), Shigella flexneri (S. flexneri) (ATCC
11435), Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) (ATCC 17440) untuk
aktivitas antimikroba. Strain bakteri diperoleh dari National Chemical
Laboratory, Pune, Sayandia. Tiap bakteri ditumbuhkan dalam kaldu nutrisi
pada suhu 37°C dan ditumbuhkan dalam agar nutrien slants pada suhu
4°C.
2. Persiapan Inokulum (Media Muller Hinton)
Salah satu koloni tunggal dari setiap jenis mikroorganisme (dari agar-
agar nutrisi) diambil dengan loop steril, dan dipindahkan ke dalam 10
ml kaldu nutrisi steril. Kultur kaldu diinkubasi dalam shaker
inkubator pada 37°C selama 16-20 jam.
3. Antibakteri Uji Bioassay Difusi Disk
 Aktivitas antimikroba ekstrak metanol tanaman diuji terhadap tiga
mikroorganisme dengan menggunakan metode difusi agar seperti
yang direkomendasikan oleh Institute Laboratorium Klinis. Media
nutrien agar disiapkan menggubakan agar nutrien(Merck) 20 g /L
dalam air suling. Nilai pH media disesuaikan 7.0, kemudian
6

diautoklaf dan dibiarkan dingin hingga 45 °C. Media ditambah

dengan 10 CFU / mL dandisiapkan inokulum. Selanjutnya, media
(75-80 ml) dituangkan ke dalam cawan petri dan diberi label
(diameter = 14 cm) kemudian dibiarkan membeku. disk ditambahkan
empat konsentrasi yang berbeda yaitu, 1 000 mg / mL, 750 mg / mL,
500 mg / mL dan 250 mg / mL ekstrak tanaman (w / v; mg / mL).
Kemudian diinokulasi dan diinkubasi 24 jam pada suhu 37°C.
Aktivitas antibakteri ditunjukkan ketika zona inhibisi yang jelas
terdapat di sekitar cakram. Diameter zona inhibisi diukur dan hasilnya
dinyatakan sebagai mean dari tiga percobaan independen. Tes ini
diulang tiga kali. Setiap ekstrak dilarutkan dalam 99,9% Dimethyl
sulfoxide (Sigma- Aldrich Amerika Serikat) didapatkan konsentrasi
100 mg / L. Antibiotik standar(5 ug) Gram positif (TE-tetrasiklin,
OF- ofloksasin, AZ-azitromisin, PC-piperacillin) dan Gram negatif
FU-nitrofurantoin, GM-gentamisin, CX-sefotaksim, NF-norfloxaci, (5
ug / disc) yang disiapkan sebagai kontrol positif. Dimethyl sulfoxide
(99,9%) digunakan sebagai kontrol negatif

3. Hasil penelitian
Hasil tes fitokimia mengungkapkan adanya flavonoid, saponin, alkaloid,
asam lemak, tanin glikosida di ekstrak metanol B. variegata (Tabel 1).
Tabel 1 Skrining phytochemical ekstrak pelarut B. variegata L. (daun, kulit batang dan bunga).

No Senyawa Reagen BVL BVB BVF

1 Carbohydrates Tes Fehlings + + +

Tes Molish + - -

2 Glycosides Borntrager + + +
3 Alkaloids Uji Dragendorff - + +

Uji Mayer - - +

4 Phytosterol Khloroform - - -

5 Senyawa steroidal Uji Salkowski - - -

Uji Lieberman - - -

6 Saponins Tes Rothf - + +

7 Tannin Uji Ferric Klorida + + +

Tes Formaldehyde + + +

Test untuk Phlobatanins + + +

8 minyak dan Lemak Tes Spot + - +

9 Flavonoids Tes untuk Flavonoid Bebas + + +

Tes Lead Asetat + + +
Hidroksida + + +

10 Psenyawa henolic Uji ferric klorida + + +

11 Protein dan asam amino Tes Biuret + + +

Tes Ninhydrin + + +
+: positif -: negatif, BVL: Daun B. variegata, BVB: B. variegata kulit batang, BVF: B. variegata bunga

4. Pembahasan
Obat herbal memiliki sifat kuratif karena adanya berbagai zat kimia yang
kompleks komposisi yang berbeda, yang ditemukan sebagai metabolit sekunder
dalam satu atau lebih bagian dari tanaman ini. Laporan kami sebelumnya pada
skrining fitokimia menunjukkan bahwa nilai obat tanaman terletak pada
phytocomponents bioaktif yang terdapat dalam tanaman.
Tes fitokimia mengungkapkan adanya flavonoid, saponin, alkaloid, asam
lemak, tanin glikosida dalam ekstrak metanol. Senyawa konstituen fitokimia
adalah sumber yang baik sebagai antimikroba dan aktivitas antioksidan.
Kesimpulannya, ekstrak B. variegata memiliki spektrum yang luas dari
aktivitas terhadap bakteri yang bertanggung jawab atas penyakit umum. Hasil
pendahuluan diperoleh dalam percobaan ini membuka jalan untuk mengeksplorasi
potensi pengembangan senyawa baru yang akan diluncurkan di pasar farmasi
untuk mengatasi resistensi antibiotik di dunia.