UJI TOKSISITAS BEBERAPA SENYAWA ALKALOID

HASIL ISOLASI DARI EKSTRAK METANOL

DAUN Melochia umbellata (Houtt.) Stapf. Var. Deglabrata
PADA LARVA Artemia salina LEACH.

Abdul Rahim

Fakultas Farmasi, Universitas Hasanuddin, Makassar

ABSTRAK
Penelitian ini dilakukan dengan mengekstraksi dan mengisolasi beberapa senyawa alkaloid dari
ekstrak metanol daun Melochia umbellata (Houtt) Stapf. var. deglabrata kemudian diuji toksisitasnya pada
larva Artemia salina Leach. Ekstraksi sampel dilakukan dengan menggunakan pelarut n-heksan dan
metanol. Ekstrak metanol kemudian difraksinasi dengan metode kromatografi kolom cair vakum (KCV) dan
kromatografi lapis tipis preparatif (KLTP). Hasil isolasi diperoleh tiga senyawa alkaloid, yang dinamakan
senyawa MU-1, MU-2 dan MU-3 Masing senyawa alkaloid diuji toksisitasnya pada larva udang Artemia
salina Leach. Hasil pengujian diperoleh nilai LC50 untuk senyawa MU-1, MU-2 dan MU-3 masing-masing
berturut-turut 0,146; 1,042; dan 35,631 µg/ml.

Kata kunci : Isolasi, Alkaloid dan toksisitas

PENDAHULUAN Uji toksisitas menggunakan larva Artemia

Melochia umbellata (Houtt) Stapf var. de-
glabrata merupakan salah satu jenis tumbuhan
yang digunakan secara tradisional oleh masyara-
kat Sulawesi Selatan sebagai bahan obat. Tum-
buhan ini juga dinamakan paliasa. Namun berbeda
dengan paliasa jenis Kleinhovia hospita Linn.,
yang digunakan untuk mengobati penyakit hepati-
tis, tumbuhan ini secara empiris digunakan untuk
mengobati penyakit kanker khususnya kanker
rahim dan hati.
M. umbellata (Suku Sterculiaceae) me-
ngandung senyawa alkaloid (1). Beberapa spesies
dari genus Melochia lain yang telah diketahui kan-
dungan kimianya antara lain alkaloid chamaedrone
dan antidesmone yang berkhasiat antimikroba dari
M. chamaedrys (2). Alkaloid melochinone, melono-
vine-A dan melonovine-B, scutianine dari M. to-
mentosa. Alkaloid frangulanine dan waltherione-A,
yang berkhasiat antifungi dari M. odorata. Alkaloid
myrianthine-B dan lotusanine-A, frangufoline, fra-
ngunine dan melofoline dari M. corchorifolia, serta
adouetine dan integerrenine dari M.pyramidata (3).
Namun demikian, penelitian pada spesies M. um-
bellata (Houtt) Stapf. var deglabrata belum banyak
dilaporkan.
Penelitian efek antimitosis terhadap sel
telur bulubabi dari ekstrak larut etilasetat M. umbel-
lata (Houtt) Stapf var. deglabrata memiliki nilai IC50
sebesar 0,779 μg/ml (4). Fraksinasi ekstrak me-
tanol M. umbellata dan uji antiproliferasi pada sel
HeLa menghasilkan fraksi aktif (fraksi C) dengan
nilai IC50 sebesar 110,645 µg/ml pada perlakuan
72 jam dan teridentifikasi sedikitnya 3 senyawa
alkaloid dalam fraksi ini (5).
salina dianalogikan dengan kemampuan suatu ba-
han obat yang memiliki efek antikanker. Metode ini
disarankan untuk digunakan pada skrining awal
senyawa bioaktif bahan alam karena menunjukkan
adanya korelasi dengan metode sitotoksik in vitro
lainnya (6). Metode ini sangat sederhana, murah,
relatif mudah dikerjakan dan tidak memerlukan
kondisi aseptik. Suatu bahan obat disebut aktif
apabila mampu membunuh 50 % larva A. salina
pada konsentrasi kurang dari 1000 g/ml (7).
Berdasarkan uraian tersebut, maka telah
dilakukan uji toksisitas beberapa senyawa alkaloid
yang terkandung dalam daun M. umbellata (Houtt)
Stapf var. deglabrata. Penelitian ini dilakukan de-
ngan mengekstraksi dan mengisolasi senyawa al-
kaloid dari ekstrak metanol daun M. umbellata. Se-
nyawa alkaloid yang diperoleh diuji toksisitasnya
pada larva udang A. salina Leach. dan nilai LC50
senyawa tersebut ditentukan dengan analisis
probit.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui
toksisitas dan menentukan nilai LC50 beberapa
senyawa alkaloid hasil isolasi dari ekstrak metanol
daun M. umbellata (Houtt) Stapf var. deglabrata
pada larva udang A. salina Leach, dan menambah
data ilmiah senyawa alkaloid dari daun M. umbel-
lata (Houtt) Stapf var. deglabrata.
METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan antara lain pe-
rangkat maserasi; rotavapor (Buchi); kromatografi

35
36 Majalah Farmasi dan Farmakologi, Vol. 15, No. 1 – Maret 2011, hlm. 35 – 39
kolom cair vakum; kromatografi lapis tipis prepa-
ratif; Lampu UV 254 dan 366 nm; mikropipet 5 µl –
50 µl, 50 µl – 200 µl, 200 µl – 1 ml (Soccorex);
timbangan analitik (Sartorius)
Bahan yang digunakan adalah daun M.um-
bellata; metanol; n-heksan; etil asetat; pelarut-
pelarut organik; telur Artemia salina, air laut, ragi
Saccharomyces cereviceae dan dimetil sulfoksida
(DMSO) (Fluka).
Penyiapan Sampel
Daun M. umbellata var. deglabrata dideter-
minasi di Laboratorium Farmakognosi Fitokimia,
Fakultas Farmasi UNHAS. Sampel daun dikumpul-
kan dari kota Makassar, Sulawesi Selatan, diber-
sihkan dan dikeringkan dengan cara diangin-
anginkan di tempat yang tidak terkena sinar mata-
hari. Setelah kering daun diserbukkan untuk siap
digunakan sebagai bahan penelitian.
Pembuatan Ekstrak
Sebanyak 500 g serbuk daun dimasukkan
ke dalam wadah maserasi kemudian ditambahkan
2 liter n-heksan dan dibiarkan selama 24 jam
sambil sekali-sekali diaduk. Filtrat disaring dan
ampas direndam lagi dengan pelarut yang sama.
Hal ini dilakukan sebanyak 3 x 24 jam. Filtrat di-
kumpulkan dan diuapkan pada rotavapor hingga
diperoleh ekstrak n-heksan kental. Ampas dike-
ringkan kemudian dengan cara yang sama dieks-
traksi kembali dengan metanol hingga diperoleh
ekstrak metanol.
Partisi dan Fraksinasi Komponen Kimia
Ekstrak metanol dipartisi dengan etil asetat
hingga diperoleh ekstrak metanol larut etil asetat
dan yang tidak larut etil asetat. Ekstrak metanol
yang larut etil asetat difraksinasi dengan kromato-
grafi kolom cair vakum (KCV) dengan fase diam
silika gel G-60 dan fase gerak yang memiliki
gradien kepolaran yang meningkat, berturut-turut
n-heksan, n-heksan:etil-asetat 15:1, 10:1, 5:1, 1:1,
1:5, etilasetat, etil-asetat:metanol 1:5, 1:1 dan me-
tanol. Masing-masing fraksi dipantau komponen
kimianya dengan KLT menggunakan fase diam
silika gel GF254 dan fase gerak n-heksan : etilasetat
(2:1), dan di-peroleh 12 fraksi, yang selanjutnya
diidentifikasi dengan pereaksi Dragendorf. Fraksi
yang mengandung alkaloid (fraksi 6 dan 7) diga-
bung menjadi satu fraksi dan diisolasi lebih lanjut
dengan kromatografi lapis tipis preparatif.
Isolasi dan Pemurnian
Fraksi gabungan diisolasi dengan kroma-
tografi lapis tipis preparatif dengan fase diam silika
gel PF254 dan fase gerak n-heksan : etil asetat :
amoniak (90:30:0,5) dan diperoleh 3 pita isolat se-
nyawa alkaloid Masing-masing pita pemisahan
yang diperoleh dikerok kemudian dilarutkan dalam
kloroform – metanol (1:1), lalu dipisahkan antar
komponen kimia dengan silika gel dengan penya-
ringan. Ada 3 senyawa alkaloid yang diperoleh dan
disebut sebagai senya-wa MU-1, MU-2 dan MU-3.
Masing-masing senyawa dimurnikan dan diuji ke-
murniannya dengan KLT multieluen.
Brine Shrimp Lethality Test (BST)
a. Penyiapan Sampel dan Kontrol
Larutan stok dari masing-masing senyawa MU
dibuat dengan konsentrasi 0,5 mg/ml dengan
melarutkan 1 mg dari masing-masing senyawa
MU-1, MU-2 dan MU-3 dalam 2 ml campuran
pelarut kloroform – metanol (1:1). Seri konsen-
trasi dibuat berturut-turut 0,05; 0,5; 5; dan 50
g/ml dalam 5 ml air laut. Untuk kontrol, diguna-
kan air laut dan campuran pelarut kloroform –
metanol (1:1). Sampel dan kontrol pelarut da-
lam flakon diuapkan pada suhu ruang hingga
kering dan tidak berbau pelarut lagi. Masing-
masing seri konsentrasi dan kontrol pelarut di-
persiapkan dalam 3 flakon.
b. Penetasan telur Artemia salina Leach.
Telur artemia ditetaskan di dalam wadah pene-
tas dengan menggunakan air laut sebagai me-
dia. Penetas dilengkapi dengan lampu pijar 60
watt sebagai sumber cahaya dan dilengkapi de-
ngan aerator sebagai sumber oksigen dan men-
jaga agar telur tidak mengendap. Wadah yang
digunakan berbentuk kerucut. Telur dimasuk-
kan ke dalam wadah dan akan menetas kira-
kira 24 jam setelah ditaburkan. Setelah 48 jam,
larva siap untuk diuji.
c. Uji aktivitas
Sepuluh ekor larva A. salina Leach. yang di-
ambil secara acak dimasukkan ke dalam
flakon-flakon yang telah berisi sampel ataupun
kontrol, kemudian air laut ditambahkan hingga
5 ml. Pakan yang diberikan adalah ragi Saccha-
romyces cereviceae dengan konsentrasi 3 mg/5
ml air laut. Pakan ditambahkan sebanyak satu
tetes ke dalam masing-masing flakon. Flakon-
flakon yang sudah berisi sampel maupun pela-
rut serta larva didiamkan selama 24 jam dan di-
hitung jumlah larva yang mati. Nilai LC50 diten-
tukan berdasarkan analisis probit.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil ekstraksi 500 g serbuk kering daun
M. umbellata (Houtt) Stapf. var. deglabarata disaji-
kan dalam tabel 1. Ekstrak metanol yang larut etil
asetat selanjutnya difraksinasi pada kolom cair
vakum (KCV) dengan eluen n-heksan – etilasetat
dengan gradien kepolaran yang meningkat. Fraksi-
nasi menghasilkan 12 fraksi. Komponen kimia dari
fraksi yang diperoleh dimonitor dengan kromato-
grafi lapis tipis (KLT) dengan penampak noda UV
254 dan 366 nm serta pereaksi semprot Dragen-
 Abdul Rahim, Uji Toksisitas Senyawa Alkaloid Hasil Isolasi Ekstrak Metanol Daun M.umbellata
dorf. Fraksi yang mengandung alkaloid (ditandai
ada reaksi positif dengan pereaksi Dragendorf)
yaitu fraksi 6 dan 7 selanjutnya digabung menjadi
satu fraksi (gambar 1)
Tabel 1. Hasil ekstraksi dan partisi cair padat ekstrak
daun M.umbellata (Houtt) Stapf. var. deglabarata
Jenis ekstrak Bobot (g)
n-heksan 90,24
Metanol 133,92
Ekstrak metanol larut etil asetat 91,28
Ekstrak metanol tidak larut etil asetat 40,58
UV 366 nm
UV 254 nm
Dragendorf
Gambar 1. Profil kromatogram lapis tipis hasil fraksinasi
ekstrak metanol yang larut etil asetat daun M.umbellata
(Houtt) Stapf. var. deglabarata, dengan menggunakan
beberapa jenis penampak noda.
Fraksi yang mengandung alkaloid diisolasi
kembali dengan kromatografi lapis tipis preparatif
(KLTP) menggunakan fase diam silika gel dan fase
gerak n-heksan – etilasetat – ammonia (90:30:0,5).
KLTP menghasilkan 3 (tiga) isolat senyawa alkalo-
id yaitu senyawa MU-1 (3,2 mg), MU-2 (3,1 mg)
dan MU-3 (4,2 mg). (Gambar 2 dan tabel 2).
Terhadap ketiga senyawa selanjutnya di-
lakukan uji sitotoksik dengan metode Brine Shrimp
Lethality Test (BST) dengan menggunakan larva
udang Artemia salina, dan diperoleh hasil seperti
pada tabel 2.
37
UV 254 nm UV 366 nm Dragendorf
Gambar 2. Kromatogram lapis tipis senyawa alkaloid
hasil isolasi dari ekstrak daun Melochia umbellata
(Houtt) Stapf. var deglabrata, dengan beberapa jenis
penampak noda. Fase diam silica gel 60 F254. Fase
gerak n-heksan - etil asetat - ammonia (3 : 1 : 2 tetes)
Melochia umbellata (Houtt) Stapf var de-
glabrata atau oleh sebagian masyarakat Sulawesi
Selatan dinamakan paliasa, meskipun spesies
tumbuhan ini berbeda dengan Kleinhovia hospita
Linn. yang selama ini telah umum dikenal sebagai
paliasa. Tumbuhan ini secara empiris digunakan
untuk mengobati penyakit kanker seperti kanker
hati dan rahim.
Sampel daun M. umbellata diekstraksi de-
ngan n-heksan, kemudian ampasnya diekstraksi
kembali dengan metanol. Penggunaan dua pelarut
dengan tingkat kepolaran yang berbeda ini dimak-
sudkan agar senyawa kimia yang diperoleh ter-
pisah sesuai dengan tingkat kepolarannya. Senya-
wa kimia yang memiliki tingkat kepolaran yang ren-
dah diharapkan akan terekstraksi dengan n-hek-
san, sedangkan senyawa yang semipolar dan se-
nyawa dengan tingkat kepolaran tinggi akan ter-
ekstraksi dengan metanol.
Ekstrak metanol selanjutnya dipartisi cair
padat dengan etil asetat. Senyawa kimia dengan
tingkat kepolaran yang rendah akan larut dalam
etil asetat (ekstrak metanol larut etil asetat), se-
dangkan yang memilki tingkat kepolaran yang ting-
gi tidak larut dalam etil asetat (ekstrak metanol
tidak larut etil asetat).
Pada pengujian sebelumnya, ekstrak metan-
ol larut etil asetat lebih aktif daripada ekstrak me-
tanol tidak larut etil asetat (4,5), sehingga ekstrak
metanol yang larut etil asetat yang dipilih untuk di-
fraksinasi lebih lanjut dengan metode kromatografi
kolom cair vakum (KCV). Metode KCV merupakan
metode fraksinasi kasar ekstrak dengan cepat se-
hingga metode ini sangat membantu dalam pen-
carian senyawa-senyawa bioaktif yang baru (8)
Fraksinasi ekstrak metanol larut etil asetat
dengan eluen n-heksan dan etil asetat dengan
gradien kepolaran yang meningkat menghasilkan
12 fraksi. Hasil identifikasi dengan pereaksi Dra-
gendorf menunjukkan bahwa fraksi 6 dan 7 me-
ngandung senyawa alkaloid (gambar 1). Sehingga
fraksi ini diisolasi lebih lanjut dengan metode kro-
matografi lapis tipis preparatif (KLTP).
38 Majalah Farmasi dan Farmakologi, Vol. 15, No. 1 – Maret 2011, hlm. 35 – 39

Tabel 2. Hasil Uji sitotoksik menggunakan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BST) senyawa MU-1,
MU-2 dan MU-3 dari Hasil Isolasi Ekstrak Metanol Daun M. umbellata (Houtt) Stapf.var deglabrata.

Kons. % Log LC50

Sampel Probit Pers. Regresi
(µg/ml) kematian Kons. (µg/ml)
0,5 70 -0,301 5,52
y = 1,390x + 6,162
0,1 50 -1,000 5,00
Senyawa MU-1 0,146
0,05 33,33 -1,301 4,57 R² = 0,9356
0,01 3,33 -2,000 3,16
50 96,67 1,699 6,84
y = 1,063x + 4,981
5 70 0,699 5,52
senyawa MU-2 1,042
0,5 46,67 -0,301 4,91 R² = 0,9799
0,005 6,67 -1,301 3,50
50 66,67 1,699 5,43
y = 1,8071x + 2,196
25 30 0,699 4,48
senyawa MU-3 35,631
12,5 20 -0,301 4,17 R² = 0,9409
6,25 10 -1,301 3,72

Isolasi dengan metode KLTP menghasil-
kan 3 buah isolat yang merupakan senyawa alka-
loid yaitu MU-1, MU-2 dan MU-3. (gambar 2).
Ketiga senyawa ini menunjukkan sifat yang cen-
derung semipolar karena tidak larut dalam air dan
n-heksan. Respon terhadap UV 254 dan 366 nm
menunjukkan bahwa ketiga alkaloid tersebut me-
ngandung ikatan rangkap lebih dari dua atau ada
kemungkinan ada cincin aromatik karena menim-
bulkan efek quenching (pemadaman) pada UV 254
nm (9). Pada respon terhadap UV 366, senyawa
MU-1 memberikan efek fluoresensi yang tidak
dihasilkan oleh senyawa MU-2 dan MU-3.
Metode Brine Shrimp Lethality Test (BST)
menggunakan larva Artemia salina Leach. Larva
yang digunakan untuk pengujian ini adalah larva
(nauplius) yang masih berada dalam fase instar I
(24-36 jam). Pada fase ini larva belum mempunyai
mulut, salur-an pencernaan, dubur dan terdiri atas
sel-sel dengan pertumbuhan yang cepat untuk
masuk ke fase instar II (10)
Metode BST digunakan untuk skrining
awal ekstrak bahan alam yang diduga bersifat sito-
toksik. Metode ini memiliki aktivitas farmakologis
yang luas dan menunjukkan adanya korelasi de-
ngan metode uji sitotoksik lainnya (6). Sejak diper-
kenalkan pada tahun 1982, telah berhasil diguna-
kan sebagai bioassay guided fractionation dari se-
nyawa aktif sitotoksik dan antitumor seperti tri-
lobacin dari akar Asimina triloba dan cis-annonacin
dari Annona muricata (11).
Pengujian dengan BST menghasilkan nilai
LC50 untuk senyawa MU-1, MU-2 dan MU-3
masing-masing 0,146; 1,042; dan 35,631 µg/ml.
Suatu bahan obat disebut toksik apabila mampu
membunuh 50 % larva A. salina pada konsentrasi
kurang dari 1000 g/ml dengan waktu kontak 24
jam (7). Berdasarkan hal tersebut maka ketiga
senyawa yang diperoleh bersifat toksik.
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang telah
dilakukan maka disimpulkan bahwa :
1. Pengujian dengan metode BST menghasilkan
LC50 untuk senyawa MU-1, MU-2 dan MU-3
masing-masing 0,146; 1,042; dan 35,631 µg/ml.
2. Senyawa MU-1, MU-2 dan MU-3 bersifat toksik
terhadap larva Artemia salina Leach.
3. Senyawa MU-1 lebih toksik daripada MU-2 dan
MU-3

DAFTAR PUSTAKA

1. Tayeb, R., 2005, Isolasi, Identifikasi dan Uji 2. Dias, G.O., Porto, C., Stuker C.Z., Graessler
Aktivitas Senyawa Bioaktif Daun Paliasa Ter- V., Burrow R.A., Dalcol I.I., da Silva, U.F. and
hadap Artemia salina Leach, Tesis, Program Morel A.F. 2007, Alkaloid from Melochia
Pascasarjana Unhas, Makassar Chamaedrys, Planta Med. 73(3) : 289 -292
 Abdul Rahim, Uji Toksisitas Senyawa Alkaloid Hasil Isolasi Ekstrak Metanol Daun M.umbellata
3. Tan,N.H., and Zhou,J., 2006, Plant Cyclopep-
tides, Chem. Rev., 106: 840-895
4. Irnayanti, 2007, Fraksinasi Senyawa Aktif Anti-
mitosis Ekstrak Daun Paliasa (Melochia
umbellata (Houtt.) Stapf var. deglabrata),
Skripsi tidak diterbitkan, Fakultas Farmasi
Unhas, Makassar
5. Tayeb, R., Rahim, A., Alam, G., Wahyuono, S.,
dan Hartati, M.S. 2007, Fraksinasi Senyawa
Antikanker Daun Paliasa (Melochia umbellata
(Houtt) Staff Var. Deglabrata, Majalah Farmasi
dan Far-makologi Vol.11 : 61-71
6. Carballo, J.L., Hernandes-Inda, Z.L., Perez, P.,
Garcia-Gravalos, M.D., 2002, A comparison
between two brine shrimp assays to detect in
vitro cytotoxicity in marine natural products,
BMC Biotech-nology, 2: 17, p.1-5
39
7. Meyer, B.N., Ferrigni, N.R., Putnam, J.E.,
Jacobson, L.B., Nichols, D.E., McLaughlin,
J.L., 1982, Brine shrimp: A convenient general
bioassay for active plant constituents, Plant.
Med. 45: 31-4
8. Houghtin, P.J., and Raman, A. 1998. Labora-
tory handbook for the Fractination of Natural
Extracts. Chapman & Hall.
9. Stahl, E. 1985. Analisis Obat Secara Kroma-
tografi dan Mikroskopi. Terjemahan Kosasih
Padmawinata. Penerbit ITB. Bandung. 73
10. Mujiman, A.,1988, Udang Renik Air Asin,
Bharata Karya Aksara, Jakarta. 15-25.
11. Pisutthanan, N., Ruanruay, S., and Muanrit, O,
2004, Brine Shrimp Lethality Activity of Thai
Medicinal Plants in the Family Meliaceae,
Naresuan University Journal, 12 (2) : 13-18