PATOLOGI SISTEMIK II

SISTEM URINARIA

NEWCASTLE DISEASE

Oleh : Kelas 2016 C

Ni Kadek Intan Dwityanti Devi 1609511039

I Dewa Agung Made Wihanjana Putra 1609511042
Mira Cahyani Heryanto 1609511044
Muchammad Wildan Firdaus 1609511050
I Kadek Ariyuda Prasetya 1609511056

Fakultas Kedokteran Hewan

Universitas Udayana

Denpasar

2019
 NEWCASTLE DISEASE

A. Pengertian, Penyebab dan Sifat-sifat Newcastle Disease

Newcastle Disease (ND) merupakan salah satu penyakit virus yang terpenting
pada unggas. Penyakit ini ditemukan hampir di seluruh belahan dunia dan
menyebabkan kerugian ekonomi yang besar pada peternakan unggas. Penularan
penyakit ND terjadi melalui kontak langsung antara hewan sehat dengan hewan
terinfeksi. Tingkat keparahan penyakit ini dipengaruhi oleh beberapa faktor seperti :
strain virus,spesies inang, umur inang, ada tidaknya infeksi sekunder, stress, dan status
kekebalan inang
Newcastle Disease disebabkan oleh virus dari familia Paramyxiviridae, genus
Avian paramyxivirus type-1 (APMV-1). Familia virus ini termasuk dalam kelompok
virus RNA dengan genom serat tunggal (single stranded/ss) dan berpolaritas negatif.
Virus familia Paramyxoviridae adalah virus beramplop,berbentuk pleomorfik biasanya
bulat dengan diametr 100-500 nm, namun ada pula yang berbentuk filament (Yuniati,
2017).
Sifat virus penyakit ND adalah relatif tahan terhadap pemanasan. Virus
penyakit ND dapat bertahan selama berbulan-bulan pada temperatur kamar bahkan
dapat bertahan selama setahun pada temperatur 4°C. Cemaran virus dikandang dapat
berasal dari hewan yang terinfeksi ND melalui feses, leleran dari dinding hidung atau
mulut yang jatuh ke lantai kandang.

B. Gejala Klinis

Gejala klinis yang terlihat pada penderita sangat bervariasi, dari yang sangat
ringan sampai yang terberat. Berikut ini dijelaskan kemungkinan gejala-gejala klinis
pada ungggas penderita penyakit ND antara lain :

1. Bentuk Velogenik-viscerotropik : bersifat akut, menimbulkan kematian yang

tinggi, mencapai 80 – 100%. Pada permulaan sakit napsu makan hilang, mencret
yang kadang-kadang disertai darah, lesu, sesak napas, megap-megap, ngorok,
bersin, batuk, paralisis parsial atau komplit, kadang-kadang terlihat gejala
torticalis.
 2. Bentuk Velogenik-pneumoencephalitis : gejala pernapasan dan syaraf, seperti
torticalis lebih menonjol terjadi daripada velogenik-viscerotropik. Mortalitas
bisa mencapai 60 – 80 %.
3. Bentuk Mesogenik : pada bentuk ini terlihat gejala klinis berupa gejala
respirasi, seperti : batuk, bersin, sesak napas, megap-megap. Pada anak ayam
menyebabkan kematian sampai 10%, sedangkan pada ayam dewasa hanya
berupa penurunan produksi telur dan hambatan pertumbuhan, tidak
menimbulkan kematian.
4. Bentuk Lentogenik : terlihat gejala respirasi ringan saja, tidak terlihat gejala
syaraf. Bentuk ini tidak menimbulkan kematian, baik pada anak ayam maupun
ayam dewasa.
5. Bentuk asymptomatik : pada galur lentogenik juga sering tidak memperlihatkan
gejala klinis.

Gejala klinis anak ayam dan ayam fase bertelur penderita ND dijelaskan
sebagai berikut (a) Pada anak ayam, ditemukan penderita mati tiba-tiba tanpa gejala
penyakit. Pernapasan sesak, batuk, lemah, napsu makan menurun, mencret dan
berkerumun. Terlihat gejala syarafi berupa paralisis total atau parsial. Penderita
mengalami tremor atau kejang otot, bergerak melingkar dan jatuh. Sayap terkulai dan
leher terputar (torticolis). Mortalitas pada penderita bervariasi. (b) pada ayam fase
produksi, umur 2 sampai dengan 3 minggu terlihat gejala gangguan pernapasan,
depresi dan napsu makan menurun, namun gejala syaraf jarang terlihat. Produksi telur
menurun secara mendadak. Morbiditas dapat mencapai 100%, sedangkan mortalitas
bisa mencapai 15%.

Perubahan pasca mati pada unggas penderita antara lain, meliputi ptechiae,
berupa bintik-bintik perdarahan pada proventrikulus dan seca tonsil, eksudat dan
peradangan pada saluran pernapasan serta nekrosis pada usus, dan adanya kongesti
pada ginjal. (Alexander and Senne, 2008).

C. Patologi Anatomi

Organ ginjal dari ayam yang terinfeksi virus ND terlihat normal. Tidak terdapat
perubahan yang terlihat jelas. Hal ini tampak berbeda dengan perubahan pada ginjal
 ayam yang terinfeksi virus ND secara mikroskopis bisa berupa hemoragi dari korteks
hingga medula.

Gambar 1. Gambaran Patologi Anatomi Ginjal

yang diduga Terinfeksi Newcastle Disease

D. Histopatologi

Perubahan pada ginjal ayam yang terinfeksi virus ND secara mikroskopis bisa berupa
hemoragi dan nekrosis namun lesi tersebut biasanya lebih jarang ditemukan dari pada lesi-
lesi pada organ lain seperti pernafasan dan pencernaan (Alexander and Senne, 2008).

Gambar 2. Histopatologis organ ginjal dari embrio ayam umur 11 hari, dengan pewarnaan
H&E. (A) Diinfeksi virus ND Salatiga, mengalami kongesti. Scale bar: 50 µm. (B) Diinfeksi
virus ND La Sota, mengalami kongesti. Scale bar: 50 µm. (C) Tidak diinfeksi virus ND, tidak
ada perubahan. Scale bar: 25 µm.
 Gambar 3. Hemoragi pada korteks hingga medulla ginjal (a)

Perubahan histopatologis pada ginjal ayam yang terinfeksi konsisten dengan replikasi
virus. Isolat 9a5b NDV menyebabkan degenerasi dan nekrosis yang parah pada epitel ginjal
dengan imunostaining virus positif pada epitel tubular dan sel mononuklear.Distribusi virus
berada di korteks dan medula ginjal. Respons inflamasi lokal mungkin berperan dalam
menekan replikasi virus.

Gambar 4. Ginjal; Dilatasi ringan dan mineralisasi kerucut meduler disertai dengan
heterofilik (panah) dan infiltrasi sel mononuklear. Gambar 2. Ginjal; Immunolabeling
nukleoprotein NDV (NP) terlihat dalam epitel tubular ginjal. Gambar 3. Ginjal;
Immunolabeling positif NDV-NP terlihat dalam epitel tubular ginjal (panah) dan dalam
sel glomerulus (panah). Gambar 4. Ginjal; Imunohistokimia CD3 menunjukkan infiltrasi
interstitial nodus dan difus sel CD3 imununositif dan kadang-kadang sel imunopositif
CD3 dalam epitel tubular. Gambar 5. Ginjal; Immunolabeling CD3 hadir di interstitium
di sekitar tubulus ginjal (panah) menunjukkan immunolabeling NDV-NP dalam tubulus
ginjal yang dikelilingi oleh sel-sel inflamasi mononuklear interstitial.
E. Penanggulangan dan Pencegahan
1. Pencegahan

Berikut ini adalah cara yang dilakukan untuk mencegah penyebaran penyakit ND :

 Vaksinasi, vaknsinasi merupakan tindakan yang tepat untuk dilakukan sebagai upaya
pencegahan terhadap penyakit ini. Program vaksinasi yang secara umum diterapkan,
yaitu
1. Pada infeksi lentogenik ayam pedaging, dicegah dengan pemberian vaksin
aerosol atau tetes mata pada anak ayam umur sehari dengan menggunakan
vaksin Hitchner B1 dan dilanjutkan dengan booster melalui air minum atau
secara aerosol,
2. Pada infeksi lentogenik ayam pembibit dapat dicegah dengan pemberian vaksin
Hitchner B1 secara aerosol atau tetes mata pada hari ke-10. Vaksinasi
berikutnya dilakukan pada umur 24 hari dan 8 minggu dengan vaksin Hitchner
B1 atau vaksin LaSota dalam air, diikuti dengan pemberian vaksin emulsi
multivalen yang diinaktivasi dengan minyak pada umur 18 – 20 minggu. Vaksin
multivalen ini dapat diberikan lagi pada umur 45 minggu, tergantung kepada
titer antibodi kawanan ayam, resiko terjangkitnya penyakit dan factor-faktor
lain yang berhubungan dengan pemeliharaan.
 Tindakan sanitasi, sebelum kendang dipakai kendang dibersihkan kemudian ditabur
dengan kapur yang dibubuhi NaOH 2%, desinfeksi kendang dilakukan secara fumigasi,
bebaskan kendang dari hewan-hewan vektor yang bisa memindahkan virus ND.
2. Pengendalian

Tindakan pengendalian untuk menekan penularan penyakit ND antara lain :

1. Ayam mati karena ND harus dibakar dan dikubur

2. Ayam yang terinfeksi dengan penyakit ND harus disolasi
3. Larangan mengeluarkan ayam baik dalam keadaan mati atau hidup bagi
peternakan ayam, kecuali untuk kepentingan diagnosis
4. Larangan menetaskan telur dari ayam penderita ND dan izin menetaskan
telur harus dicabut selama masih ada wabah ND pada perusahaan pembibit
 3. Pengobatan

Belum ditemukan obat yang dapat menyembuhkan ND. Usaha yang dapat
dilakukan adalah membuat kondisi badan ayam cepat membaik dan merangsang nafsu
makannya dengan memberikan vitamin dan mineral, serta mencegah infeksi sekunder
dengan pemberian antibiotic. Dapat pula diberikan pemanasan tambahan pada kendang.
 DAFTAR PUSTAKA

Alexander, D.J. and Senne, D.A. (2008) Newcastle Disease, Other Avian

Paramyxovirus and Pneumovirus Infection In: Disease of Poultry. Saif, Y.M.

Blackwell Publishing. Iowa.

A. El-Bahrawy, A. Zaid, Y. Sunden, M. Sakurai, H. Ito, T. Ito, and T. Morita.2017.

Pathogenesis of Renal Lesions in Chickens After Experimental Infection With

9a5b Newcastle Disease Virus Mutant Isolate. Veterinary Pathology .Vol. 54(1)
94-98

Darminto dan Ronohardjo, P. (1996) Newcastle Disease pada Unggas di Indonesia:

Situasi Terakhir dan Relevansinya terhadap Pengendalian Penyakit. Balai

Penelitian Veteriner.

Hamdu Hamjaya Putra , Michael Haryadi Wibowo, Tri Untari, dan Kurniasih.2012.

Studi Lesi Makroskopis dan Mikroskopis Embrio Ayam yang Diinfeksi Virus
Newcastle Disease Isolat Lapang yang Virulen. JSV 30 (1). ISSN : 0126 –
0421.

Suandhika, Putu. Gambaran Patologi Anatomi Dan Histopatologi Organ Ayam

Kampung Yang Diduga Terinfeksi Newcastle Disease. Pendidikan Profesi

Dokter Hewan Laboratorium Patologi Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Udayana

Tabbu, CR. 2000. Penyakit ayam dan penanggulangannya. Penyakit Bakterial, Mikal

dan Viral. Volume 1. Penerbit kanisius, Yogyakarta.

Yuniati Kencana G.A. 2017. Penyakit Virus Unggas. Udayana University Press.
LAMPIRAN JURNAL
JSV 30 (1), Juli 2012 JURNAL
SAIN VETERINER
ISSN : 0126 - 0421

Studi Lesi Makroskopis dan Mikroskopis Embrio Ayam yang Diinfeksi Virus
Newcastle Disease Isolat Lapang yang Virulen

A Study of Macroscopic and Microscopic Lesions of Chicken Embryos Infected by Virulent

Newcastle Disease Virus Field Isolates

Hamdu Hamjaya Putra1, Michael Haryadi Wibowo2, Tri Untari2, dan Kurniasih3

1
Mahasiswa Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta
2
Bagian Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta
3
Bagian Patologi, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta
Email: hamdu_p@yahoo.co.id

Abstract

Newcastle disease (ND) is caused by Avian paramyxovirus, family Paramyxoviridae, one of the major
diseases in chickens. This research was aimed to find lesions in chicken's embryo organs macroscopically and
microscopically, infected by pathogenic ND virus. Embryonic chicken eggs (ECE) were inoculated by the ND
Salatiga virus and ND La Sota virus as a control avirulent virus. Aquabidestilata used as a negative control. ECE
wich showed the death of the embryos, stored in the refrigerator. The allantois fluid was collected, for further
examination of viral growth. Chicken embryos that died then observed macroscopically. The organs of chicken
embryos were made into histopathologic preparations stained with Hematoxylin and Eosin (H&E) for
microscopic analysis. The identification of ND virus growth on isolates was done by haemagglutination and
haemagglutination inhibition test using an anti-ND serum. The chicken embryos that were infected by the ND
Salatiga virus died approximately 26 hours post-inoculation. Macroscopic lesions were visible as haemorrhage
in the skin. Microscopic lesions indicated the congestion and haemorrhage in lungs, inflammation and
congestion in the skin, congestion in intestines, liver, kidneys and heart. There was also mild congestion on the
skin in chicken embryos infected by ND La Sota virus. The microscopic lesions showed congestion in lungs,
liver, kidneys and heart, also the inflammation and congestion on the skin. The macroscopic and microscopic
lesions of chicken embryos infected by the ND Salatiga virus were more severe than lesions caused by ND La
Sota virus.

Key words: Newcastle disease, chicken embryos, macroscopic lesions, microscopic lesions, La Sota

57
Hamdu Hamjaya Putra et al.

Abstrak

Newcastle disease (ND) disebabkan oleh Avian paramyxovirus dari keluarga Paramyxoviridae,
merupakan salah satu penyakit utama pada ayam. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui lesi pada organ
embrio ayam secara makroskopis maupun mikroskopis yang diinfeksi oleh virus ND. Telur ayam berembrio
(TAB) diinokulasi oleh virus ND Salatiga dan virus ND La Sota. Aquabidestilata digunakan sebagai kontrol
negatif. TAB yang menunjukkan kematian embrio disimpan di refrigerator, kemudian dikoleksi cairan
allantoisnya. Embrio ayam yang mati dilakukan pengamatan secara makroskopis. Organ dari embrio ayam
dibuat preparat histopatologi dengan pewarnaan Hematoxylin dan Eosin (H&E) untuk pemeriksaan
mikroskopis. Identifikasi adanya pertumbuhan virus ND pada isolat dilakukan dengan uji hemaglutinasi dan uji
hemaglutinasi inhibisi menggunakan serum anti ND. Embrio ayam yang diinfeksi oleh virus ND Salatiga
mengalami kematian kurang lebih 26 jam pasca inokulasi. Lesi makroskopis yang teramati berupa hemoragi
pada kulit. Lesi mikroskopis menunjukkan adanya kongesti dan hemoragi pada paru-paru, kongesti dan radang
pada kulit, serta kongesti pada usus, hati, ginjal, dan jantung. Embrio ayam yang diinfeksi virus ND La Sota
secara makroskopis teramati kongesti ringan pada kulit. Lesi mikroskopisnya menunjukkan adanya kongesti
pada paru-paru, kongesti dan radang pada kulit, serta kongesti pada hati, ginjal, dan jantung. Lesi makroskopis
dan mikroskopis embrio ayam yang diinfeksi virus ND Salatiga lebih parah bila dibandingkan dengan lesi akibat
virus ND La Sota.

Kata kunci: Newcastle disease, embrio ayam, lesi makroskopis, lesi mikroskopis, La Sota

Pendahuluan konsekuensi sosio-ekonomis dan implikasi

Newcastle disease (ND) adalah penyakit pada
unggas yang disebabkan oleh virus yang termasuk
dalam kelompok single-stranded RNA, family
Paramyxoviridae, genus Avulavirus, spesies Avian
Paramyxovirus serogrup Avian Paramyxovirus Tipe
1 (APMV-1) (Miller et al., 2010). Virus ini dapat
dibedakan dari virus lainnya, karena adanya
aktivitas neuraminidase yang tidak dimiliki virus
lain pada famili Paramyxoviridae. Aktifitas biologis
dari virus ND adalah adanya kemampuan untuk
menghemaglutinasi sel darah merah, mempunyai
neuraminidase dan adanya kemampuan untuk
menyebabkan hemolisis pada sel darah merah
(Alexander and Senne, 2008).
Menurut OIE (2009), penyakit ND
merupakan salah satu penyakit unggas yang masuk
ke dalam daftar A dari Office International des
Epizootica, yaitu penyakit yang menyebar dengan
cepat, menembus batas negara, menyebabkan
perdagangan global. Penyakit ND adalah penyakit
serius pada unggas yang dapat menyebabkan
kerugian ekonomi yang besar dan merupakan
ancaman untuk industri perunggasan di dunia (Li et
al., 2010). Kerugian penyakit Newcastle disease
(ND) di Indonesia diperkirakan mencapai 142
milyar rupiah pertahun. Hal ini disebabkan karena
tingkat kematian yang tinggi, menurunnya produksi
daging dan telur, serta tingginya biaya pengendalian
penyakit ND (Darminto dan Ronohardjo, 1996).
Gejala yang teramati dari penyakit ND dapat
dibedakan menjadi bentuk velogenik, mesogenik,
dan lentogenik. Bentuk velogenik dari penyakit ini
mencakup gejala pernafasan, pencernaan dan saraf.
Gejala pernafasan yang terlihat seperti paruh
terbuka, terdengar suara seperti tercekik, ngorok dan
batuk. Pada gejala pencernaan tinja terlihat berubah
menjadi encer dan berwarna kehijauan. Gejala
syaraf pada ayam berupa tremor otot, tortikolis, dan
kelumpuhan sayap dan kaki. Mortalitas dari bentuk

58

velogenik dapat mencapai 100% pada ayam muda.
Pada bentuk mesogenik gejala pernafasan terlihat
pada ayam muda serta penurunan produksi telur
pada ayam dewasa. Bentuk velogenik dari penyakit
ND biasanya tidak disertai gejala klinis pada ayam
dewasa (Alexander and Senne, 2008).
Pengendalian penyakit ND dapat dilakukan
dengan adanya program vaksinasi dan penerapan
biosecurity yang baik pada peternakan ayam.
Program vaksinasi saja tidak cukup untuk
pencegahan terhadap penyakit ND. Vaksinasi harus
diikuti oleh kontrol terhadap penyakit ND dan harus
memperhatikan praktek manajemen yang baik. Pada
kasus vaksinasi dengan live vaksin, kurangnya
menejemen yang baik, jumlah ayam yang terlalu
banyak, ventilasi kandang yang buruk, dan
timbulnya infeksi bakteri dapat memperparah
penyakit ND (Alexander and Jones, 2002). Kasus
lapangan yang diduga virus ND strain velogenik
Newcastle disease pernah terjadi pada tahun 2010
dan menyebabkan kerugian besar pada peternakan
ayam layer di Salatiga, Jawa Tengah. Hasil isolasi,
identifikasi, dan karakterisasi biologik
menunjukkan virus tersebut termasuk patotipe
velogenik viscerotropik Newcastle disease (VVND)
(Putra, 2011).
Kemampuan virus ND menyebabkan
kematian embrio dapat digunakan untuk penilaian
karakter virulensi virus ND. Sejauh mana lesi
embrio ayam akibat infeksi virus tersebut baik
makroskopis maupun mikroskopis perlu diteliti
lebih lanjut khususnya isolat yang digunakan dalam
penelitian ini. Oleh karena itu penelitian ini
bertujuan untuk mengetahui perubahan patologi atau
lesi yang terbentuk pada embrio ayam baik secara
makroskopis maupun mikroskopis dari embrio ayam
Studi Lesi Makroskopis dan Mikroskopis Embrio Ayam
yang diinfeksi oleh virus ND virulen.
Materi dan Metode
Penelitian dilakukan di laboratorium
mikrobiologi Fakultas Kedikteran Hewan (FKH)
Universitas Gadjah Mada (UGM) Yogyakarta pada
tahun 2010-2011. Telur ayam berembrio (TAB) yang
dipakai pada penelitian ini berasal dari TAB yang
Spesific Pathogen Free (SPF) berumur 10 hari.
Sampel virus ND diperoleh dari kasus lapangan pada
peternakan ayam petelur di Salatiga pada tahun
2010. Kontrol yang digunakan ada dua macam yaitu
kontrol positif dan kontrol negatif virus ND. Kontrol
positif digunakan virus lentogenik ND atau strain La
Sota yang berasal dari vaksin buatan Medivac,
sedangkan kontrol negatif menggunakan
aquabidestilata. Uji hemaglutinasi (HA) dan
hemaglutinasi inhibisi (HI) menggunakan serum
anti terhadap virus ND produksi Pusvetma,
Surabaya, dan eritrosit ayam konsentrasi 5%.
Isolat virus ND patogenik maupun kontrol
virus ND ditambah dengan larutan antibiotik
Penstrep (Penicillin dan Sreptomicin) kemudian
dibiarkan pada suhu ruang selama kurang lebih 1-2
jam sebelum inokulasi agar memberi waktu bagi
antibiotik untuk bereaksi terhadap bakteri (Senne,
1989). Propagasi dilakukan dengan
menginokulasikan virus ND dan aquabidestilata ke
dalam telur ayam berembrio. Bagian rongga udara
dan bagian atas kepala embrio dari TAB ditandai
mengunakan pensil, didesinfeksi dengan
menggunakan alkohol 70% dan iodin povidon. Telur
ayam berembrio yang telah ditandai kemudian
diinjeksi dengan virus ND isolat Salatiga, La Sota,
dan aquabidestilata sebanyak 0,2 ml pada ruang
59
Hamdu Hamjaya Putra et al.
allantois dengan menggunakan jarum suntik 26 G.
Lubang bekas inokulasi ditutup dengan parafin cair
untuk menghindari kontaminasi oleh bakteri
maupun virus lain. Telur yang telah ditutup
ditempatkan pada rak inkubator dengan posisi
rongga udara berada di bagian atas pada suhu 38-
o
39 C dan kelembaban 60-70% (Senne, 1989).
Embrio ayam yang sudah mati segera
o
dimasukkan ke dalam refrigerator pada suhu 4 C
dan diamkan selama satu malam atau minimal 4 jam
untuk membunuh embrio yang masih hidup untuk
mengurangi kontaminasi cairan oleh eritrosit,
setelah itu TAB dipanen atau diambil cairan
allantoisnya (Allan et al., 1978). Cairan allantois
dipanen dengan membuka cangkang telur kemudian
cairan allantois yang bening diambil menggunankan
spuit 5 ml dan dimasukkan dalam tabung steril.
Cairan allantois tersebut disimpan dalam freezer
untuk pengujian hemaglutinasi.
Embrio ayam dikeluarkan dari cangkang dan
dicuci dengan PBS kemudian embrio diamati lesi
makroskopisnya dan didokumentasi. Selanjutnya
embrio disimpan dalam formalin 10% dengan
rongga abdomen dibuka menggunakan gunting agar
organ bagian dalam ikut terfiksasi untuk
memudahkan proses pembutan preparat
histopatologi. Embrio ayam yang telah di simpan
dalam tabung berisi formalin 10% kemudian
dikoleksi organ dalamnya seperti hati, paru-paru,
usus, jantung, ginjal dan kulit. Pembuatan preparat
histopatologi menggunakan pewarnaan
Hematoxyline dan Eosin untuk pemeriksaan
mikroskopis.
60
Hasil dan Pembahasan
Virulensi virus ND dapat diketahui dengan
menghitung lamanya kematian pada embrio ayam
sejak diinokulasi virus. Virus ND isolat Salatiga
menyebabkan kematian pada embrio ayam selama
kurang lebih 26 jam pasca inokulasi. Hal ini sesuai
berdasarkan pernyataan Alexander and Senne
(2008), bahwa bentuk velogenik dari virus ND
mengakibatkan mortalitas pada embrio ayam selama
kurang dari 60 jam setelah inokulasi. Pada
penelitian ini virus ND La Sota menyebabkan
kematian embrio ayam selama lebih dari 2 hari pasca
inokulasi. Menurut Alexander and Senne (2008),
bahwa virus ND strain La Sota termasuk ke dalam
Lentogenic Newcastle Disease berdasarkan
kematian embrio ayam lebih dari 90 jam.
Beberapa penyakit ayam yang lain juga mampu
menyebabkan kematian embrio ayam. Telur ayam
berembrio yang diinfeksi oleh virus Avian influenza
menyebabkan kematian embrio yang berlangsung
18-24 jam pasca inokulasi (Wiyono et al., 2004).
Menurut Cavanagh and Gelb (2008), embrio ayam
dapat bertahan sampai 90% terhadap infeksi virus IB
sampai 19 hari pasca inokulasi. Pada telur ayam
berembrio yang diinokulasi oleh virus ILT, embrio
ayam mengalami kematian 2-12 hari pasca inokulasi
(Garcia and Guy, 2008). Kematian juga dialami oleh
embrio ayam terhadap infeksi virus IBD yaitu 3-5
hari pasca inokulasi (Eterradossi and Saif, 2008).
Lesi Makroskopis Embrio Ayam
Lesi makroskopis yang terjadi pada embrio
ayam umur 11 hari yang diinfeksi virus ND isolat

Salatiga menunjukkan adanya hemoragi pada kulit
(Gambar 1A). Lesi makroskopis akibat virus ND
yang bersifat patogen pada penelitian ini tidak
menunjukkan lesi yang spesifik karena beberapa
penyakit pada unggas lain juga menunjukkan
perubahan yang sama pada embrio ayam. Menurut
penelitian Wibowo et al. (2006), virus Avian
influenza juga dapat menyebabkan perubahan pada
telur ayam berembrio umur 9-11 hari, secara
makroskopis embrio teramati kerdil, hemoragi di
seluruh bagian tubuh, dan kerontokan bulu embrio.
Kekerdilan juga dapat terjadi pada embrio ayam
yang diinfeksi oleh virus IB dan ILT (Cavanagh and
Gelb, 2008; Garcia and Guy, 2008). Pada embrio
ayam yang diinfeksi oleh virus IBD lesi makroskopis
yang teramati berupa edema pada bagian abdomen,
kongesti dan hemoragi pada kulit (Eterradossi and
Saif, 2008).
Embrio ayam yang diinfeksi virus ND isolat
Salatiga tampak berwarna merah tua dan kulit
terlihat basah. Jaringan subkutan berisi darah dan
pembuluh darah terlihat menonjol. Gambaran
A B
Gambar 1. Gambaran makroskopis embrio ayam umur 11 hari. (A) Diinfeksi virus ND isolat Salatiga terlihat mengalamai
hemoragi pada kulit. (B) Diinfeksi virus ND La Sota menunjukkan kongesti ringan pada sebagian kulit. (C)
Tidak diinfeksi virus ND (kontrol negatif).
Studi Lesi Makroskopis dan Mikroskopis Embrio Ayam
makroskopis pada embrio ayam umur 11 hari yang
diinfeksi virus ND La Sota menunjukkan adanya
kongesti ringan pada kulit (Gambar 1B). Dalam
penelitian ini teramati bahwa embrio ayam yang
diinfeksi oleh virus ND La Sota yang termasuk strain
lentogenik tidak mengalami banyak perubahan,
hanya terlihat pembuluh darah yang lebih menonjol
bila dibandingkan dengan kontrol negatif yang
tampak normal.
Lesi makroskopis akibat infeksi virus ND
isolat Salatiga menunjukkan perbedaan yang cukup
jelas apabila dibandingkan dengan virus ND La Sota
maupun kontrol negatif atau embrio ayam normal.
Secara makroskopis virus ND isolat Salatiga
menyebabkan perubahan yang lebih parah pada
embrio ayam apabila dibandingkan dengan virus ND
La Sota. Embrio ayam umur 11 hari (kontrol negatif)
terlihat tidak mengalami lesi atau perubahan secara
kasat mata. Embrio yang tidak diinfeksi virus ND
tersebut tampak normal dari segi pertumbuhannya
(Gambar 1C).
C
61
Hamdu Hamjaya Putra et al.
Lesi Mikroskopis Embrio Ayam
Organ dari embrio ayam yang diduga
digunakan sebagai tempat replikasi virus antara lain
kulit, paru-paru, usus, hati, ginjal dan jantung
(Alexander and Senne, 2008). Lesi mikroskopis
yang diakibatkan oleh virus ND isolat Salatiga
berupa kongesti dan hemoragi pada paru-paru,
kongesti pada usus, ginjal, hati, jantung juga
kongesti kulit yang disertai radang (Gambar 2A, 3A,
4A, 5A, 6A). Lesi tersebut berbeda dengan lesi
mikroskopis yang diakibatkan oleh virus ND strain
lentogenik dalam hal ini virus ND La Sota berupa
kongesti pada paru-paru, kulit, ginjal dan jantung.
Embrio ayam yang tidak diinfeksi oleh virus ND
(kontrol negatif) terlihat normal. Organ-organ dari
embrio tersebut secara mikroskopis terlihat tidak
mengalami perubahan.
Beberapa penyakit selain ND yang pernah
dilaporkan menyebabkan perubahan mikroskopis
pada organ dari embrio ayam misalnya AI, IB, ILT
dan juga IBD. Virus AI menyebabkan lesi
mikroskopis pada banyak organ berupa perivascular
cuffing di otak, kongesti dan hemoragi pada
proventrikulus, nefritis dan nekrosis ginjal, juga
hemoragi pada kulit. Lesi mikroskopis yang teramati
pada embrio ayam yang diinfeksi virus IB berupa
kongesti dan nekrosis di hati, kongesti disertai
infiltrasi sel radang pada paru-paru, serta radang dan
edema yang terjadi pada tubulus ginjal. Virus IB
menyebabkan lesi pada embrio ayam 6 hari pasca
inokulasi (Cavanagh and Gelb, 2008). Embrio ayam
yang diinfeksi oleh virus ILT terlihat adanya plaq
atau kerak pada chorioallantoic membrane (CAM)
yang disebabkan karena nekrosis dan reaksi
62
proliferasi jaringan (Garcia and Guy, 2008). Lesi
mikroskopis yang pernah dilaporkan pada embrio
ayam yang diinfeksi virus IBD berupa hemoragi
peteki (petechial hemorrhages) dan kongesti kulit,
nekrosis dan hemoragi hati, kongesti dan nekrosis
pada ginjal, dan juga kongesti berat pada paru-paru
(Eterradossi and Saif, 2008).
Paru-paru. Berdasarkan hasil
pemeriksaan preparat histopatologi dari embrio
ayam yang diinfeksi virus Newcastle disease
isolat Salatiga, paru-paru mengalami kongesti
dan hemoragi (Gambar 2A). Hal ini hampir
sama dengan ayam dewasa. Menurut Alexander
and Senne (2008), bahwa lesi yang diakibatkan
oleh virus ND khususnya pada mukosa saluran
pernafasan atas unggas menunjukkan adanya
hemoragi, edema, dan infiltrasi sel radang
berupa leukosit dan makrofag pada 6 hari pasca
infeksi virus. Pada paru-paru juga akan tampak
adanya kongesti, edema parabronki dan akan
timbul hemoragi dan eritrofagositosis di sekitar
alveolar parabronki.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa
organ pernafasan dalam hal ini paru-paru yang
diinfeksi oleh virus ND akan menghasilkan lesi
dengan tingkat keparahan tergantung virulensi
virus masing-masing. Pada embrio ayam yang
diinfeksi oleh virus ND strain lentogenik
menunjukkan adanya kongesti pada paru-paru
namun lebih ringan bila dibandingkan dengan
lesi oleh virus ND isolat Salatiga (Gambar 2B).
Hal ini juga dapat dibandingkan dengan paru-
paru normal dari embrio ayam yang tidak
diinfeksi virus (Gambar 2C).
 Studi Lesi Makroskopis dan Mikroskopis Embrio Ayam

Gambar 2. Histopatologis organ paru-paru dari embrio ayam umur 11 hari, dengan pewarnaan H&E, Scale bar: 50 µm. (A)
Diinfeksi virus ND Salatiga, mengalami hemoragi dan kongesti. (B) Diinfeksi virus ND La Sota, mengalami
kongesti. (C) Tidak diinfeksi virus ND, tidak ada perubahan.

Kulit. Lesi mikroskopis kulit pada ayam yang
terinfeksi oleh virus ND yaitu berupa hemoragi dan
ulserasi (Alexander and Senne, 2008). Lesi yang
teramati pada kulit dari embrio ayam yang diinfeksi
virus ND isolat Salatiga berupa kongesti dan disertai
radang. Hal ini ditunjukkan dengan adanya sel-sel
radang pada kulit (Gambar 3A). Embrio ayam yang
diinfeksi oleh virus ND La Sota terlihat juga adanya
lesi berupa kongesti dan radang pada kulit (Gambar
3B). Kulit adalah organ terluar dari embrio yang
pertama kali kontak dengan virus dan memiliki
kesamaan antara lesi yang diakibatkan oleh virus ND
La Sota dan isolat Salatiga. Perubahan atau lesi pada
kulit tersebut dapat dibandingkan secara jelas
dengan kulit normal pada embrio ayam yang tidak
diinfeksi oleh virus (Gambar 3C).

Gambar 3. Histopatologis organ kulit dari embrio ayam umur 11 hari, dengan pewarnaan H&E, Scale bar: 50 µm. (A)
Diinfeksi virus ND Salatiga, mengalami hemoragi dan radang. (B) Diinfeksi virus ND La Sota, mengalami
kongesti. (C) Tidak diinfeksi virus ND, tidak ada perubahan.

Usus. Berdasarkan hasil pemeriksaan
mikroskopis pada embrio ayam yang diinfeksi virus
ND isolat Salatiga, organ usus mengalami kongesti
pada bagian sub mukosa yang berisi pembuluh darah
(Gambar 4A). Pada embrio ayam yang diinfeksi
virus ND La Sota, usus tidak mengalami perubahan
seperti pada usus embrio ayam normal (Gambar 4B
dan 4C). Pada penelitian ini lesi yang dihasilkan
pada mukosa usus tidak sampai mengalami
perdarahan dan nekrosis. Secara mikroskopis, hasil
ini berbeda dengan lesi yang diakibatkan oleh virus
ND pada ayam yaitu berupa hemoragi dan nekrosis
pada dinding usus (Alexander and Senne, 2008).

63
Hamdu Hamjaya Putra et al.

Gambar 4. Histopatologis organ usus dari embrio ayam umur 11 hari, dengan pewarnaan H&E, Scale bar: 50 µm. (A)
Diinfeksi virus ND Salatiga, mengalami kongesti. (B) Diinfeksi virus ND La Sota, tidak ada perubahan. (C)
Tidak diinfeksi virus ND, tidak ada perubahan.

Hati. Jaringan hati dari embrio ayam yang
diinfeksi virus ND isolat Salatiga secara
mikroskopis lesi yang teramati adanya kongesti
berat pada jaringan hati (Gambar 5A). Hal ini dapat
dibandingkan dengan hati dari embrio ayam yang
diinfeksi virus ND La Sota. Hati menunjukkan
kongesti yang lebih ringan (Gambar 5B). Pada
embrio ayam (kontrol negatif), hati terlihat normal
dan tidak mengalami perubahan pada hepatosit
maupun pembuluh darah hati (Gambar 5C).
Terjadinya kongesti pada sel hati didahului dengan
pembengkakan sel. Pembengkakan sel adalah
bertambahnya ukuran sel akibat penimbunan air
dalam sel, dimana sel hati membesar yang
mengakibatkan sinusoid menyempit sehingga aliran
darah terganggu. Hal ini menyebabkan terjadinya
pembendungan darah pada beberapa tempat (Jones
and Hunt, 1983). Pada ayam dewasa yang terinfeksi
virus ND virulen, secara mikroskopis terlihat
nekrosis dan kadang hemoragi serta terdapat
hiperplasia dari sel mononuklear fagosit pada organ
hati (Alexander and Senne, 2008).

Gambar 5. Histopatologis organ hati dari embrio ayam umur 11 hari, dengan pewarnaan H&E, Scale bar: 50 µm. (A)
Diinfeksi virus ND Salatiga, mengalami kongesti berat. (B) Diinfeksi virus ND La Sota, mengalami kongesti.
(C) Tidak diinfeksi virus ND, tidak ada perubahan.

Ginjal. Organ ginjal dari embrio ayam yang
diinfeksi virus ND baik isolat Salatiga maupun virus
La Sota terlihat sama-sama mengalami kongesti
(Gambar 6A dan 6B). Perubahan ini terlihat jelas
berbeda bila dibandingkan dengan ginjal embrio
ayam (kontrol negatif) yang tidak mengalami
perubahan (Gambar 6C). Perubahan pada ginjal
ayam yang terinfeksi virus ND secara mikroskopis
bisa berupa hemoragi dan nekrosis namun lesi
tersebut biasanya lebih jarang ditemukan dari pada
lesi-lesi pada organ lain seperti pernafasan dan
pencernaan (Alexander and Senne, 2008).

64
 Studi Lesi Makroskopis dan Mikroskopis Embrio Ayam

Gambar 6. Histopatologis organ ginjal dari embrio ayam umur 11 hari, dengan pewarnaan H&E. (A) Diinfeksi virus ND
Salatiga, mengalami kongesti. Scale bar: 50 µm. (B) Diinfeksi virus ND La Sota, mengalami kongesti. Scale
bar: 50 µm. (C) Tidak diinfeksi virus ND, tidak ada perubahan. Scale bar: 25 µm.

Jantung. Organ jantung dari embrio ayam Pada (kontrol negatif) embrio ayam yang tidak
secara mikroskopis menunjukkan adanya kongesti, diinfeksi oleh virus ND tidak menunjukkan adanya
baik yang diinfeksi oleh virus ND isolat Salatiga perubahan pada organ jantung (Gambar 7C).
maupun oleh virus La Sota (Gambar 7A dan 7B). Menurut Alexander and Senne (2008), pada ayam

Gambar 7. Histopatologis organ jantung dari embrio ayam umur 11 hari, dengan pewarnaan H&E, Scale bar: 50 µm. (A)
Diinfeksi virus ND Salatiga, mengalami kongesti. (B) Diinfeksi virus ND La Sota, mengalami kongesti. (C)
Tidak diinfeksi virus ND, tidak ada perubahan.

biasanya nekrosis dan hemoragi dapat ditemukan
pada jantung. Sehingga berdasarkan hasil tersebut
terdapat perbedaan antara lesi yang dihasilkan oleh
virus ND pada embrio ayam dan juga pada ayam
dewasa. Lebih lanjut dijelaskan bahwa lesi yang
terjadi pada organ ayam yang diinfeksi oleh virus
ND tergantung dari galur atau patotipe virus.
Menurut Miller (2010), virus galur velogenik dapat
menimbulkan manifestasi klinis pada saluran
pencernaan, syaraf dan saluran pernafasan. Virus
galur mesogenik menimbulkan manifestasi klinis
pada saluran pernafasan dan syaraf, sedangkan virus
ND yang kurang virulen atau lentogenik
menimbulkan manifestasi ringan pada saluran
pernafasan.
Patogenisitas virus ND terutama dipengaruhi
oleh dua spike glikoprotein yaitu hemaglutinin-
neuraminidase (HN) dan fusion protein (F)
(Oberdörfer, 2006). Fusion protein terbelah menjadi
F1 dan F2 sebagai partikel virus yang infeksius.
Pembelahan ini dimediasi oleh enzim protease yang
berada hampir diseluruh sel dan jaringan hospes

65
Hamdu Hamjaya Putra et al.
(Seal et al., 2000). Dalam proses replikasinya, virus
ND galur velogenik berbeda dengan virus ND
lentogenik. Virus ND velogenik secara in ovo lebih
mudah tumbuh dan bersifat sistemik dibandingkan
dengan virus ND lentogenik. Virus ND velogenik
dapat bereplikasi pada hampir semua sel dan
jaringan tubuh dengan atau tanpa adanya enzim
tripsin, sedangkan virus ND lentogenik hanya dapat
bereplikasi jika hanya ada tripsin pada sel. Enzim
tripsin atau yang mirip dengan tripsin hanya berada
pada epitel saluran pernafasan dan saluran
pencernaan. Berdasarkan kemampuan replikasi
virus tersebut, maka virus ND galur velogenik dapat
mengakibatkan infeksi sistemik yang lebih parah
pada ayam bila dibandingkan dengan infeksi virus
ND galur lentogenik (Alexander and Senne, 2008).
Lesi makroskopis yang teramati pada embrio
ayam setelah diinfeksi virus ND isolat Salatiga
menunjukkan adanya hemoragi pada kulit. Lesi
tersebut lebih parah bila dibandingkan dengan virus
ND La Sota yang menyebabkan kongesti ringan
pada kulit. Lesi mikroskopis yang terjadi pada
embrio ayam setelah diinfeksi virus ND isolat
Salatiga berupa kongesti dan hemoragi pada paru-
paru, kongesti dan radang pada kulit, serta kongesti
pada usus, hati, ginjal, dan jantung. Lesi tersebut
lebih parah bila dibandingkan dengan lesi yang
diakibatkan oleh infeksi virus ND La Sota yang
menunjukkan adanya kongesti pada paru-paru,
kongesti dan radang pada kulit, serta kongesti pada
ginjal, dan jantung secara keseluruhan. Lesi pada
embrio ayam yang diinfeksi virus ND isolat Salatiga
secara makroskopis maupun mikroskopis
menunjukkan lesi yang lebih parah dibandingkan
virus ND La Sota.
66
Daftar Pustaka
Alexander, D.J. and Senne, D.A. (2008) Newcastle
Disease, Other Avian Paramyxovirus and
Pneumovirus Infection In: Disease of Poultry.
Saif, Y.M. Blackwell Publishing. Iowa.
Allan, W.H., Lancaster, J.E. and Toths, B. (1978) The
Production and Use of Newcastle Disease
vaccine. Food and Agriculture Organization of
United Nations. Roma: 1-180.
Beard, C.W. (1989) Serologic Prosedures In:
Laboratory Manual for the Isolation and
Identification of Avian Pathogens. 3th ed. H. G.
Purcase et al. Kennett Square, PA. American
Association Avian Pathologists.
Cavanagh and Gelb. (2008) Infectious Bronchitis In:
Disease of Poultry. Saif, Y.M. Blackwell
Publishing. Iowa.
Darminto dan Ronohardjo, P. (1996) Newcastle
Disease pada Unggas di Indonesia: Situasi
Terakhir dan Relevansinya terhadap
Pengendalian Penyakit. Balai Penelitian
Veteriner.
Eterradossi and Saif, Y.M. (2008) Infectious Bursal
Disease In: Disease of Poultry. Saif, Y.M.
Blackwell Publishing. Iowa.
Garcia and Guy. (2008) Laringotracheitis In:
Disease of Poultry. Saif, Y.M. Blackwell
Publishing. Iowa, USA.
Jones, T.C. and Hunt, R.D. (1983) Veterinary
th
Pathology. 5 ed. Lea & Febiger. Philadelphia,
USA.
Li, Z., Li, Y., Chang, S., Dhing, Z., Mu, L. and Cong,
Y. (2010) Antigenic Variation between
Newcasle Disease Virus of Goose and Chicken
Origin. Arch. Virol. 155: 499-505.
Miller, P. J., Decanini, E. L. and Alfonso, C. L.
(2010) Newcastle disease: Evolution of
genotypes and the related diagnostic
challenges. Infect. Gen. Evol. 10: 26-35.

North, M.O. and Bell, D.D. (1990) Commercial
th
Chicken Production Manual. 4 ed. Chapman &
Hall. USA.
Oberdörfer, A.R., Veits, J., Werner, O. and
Mettenleiter. T.C. (2006) Enhancement of
Pathogenicity of Newcastle Disease Virus by
Alternation of Specific Amino Acid Residues in
the Surface Glycoprotein F and HN. J. Avi.
Dis.50: 259-263
Office Internationale Des Epizooties. (2009) OIE
Terrestrial Manual 2009, Newcastle Disease.
Putra, H.H. (2011) Studi Lesi Makroskopis dan
Mikroskopis Embrio Ayam yang Diinfeksi
Virus Newcastle Disease Isolat Ayam Petelur
Salatiga. Skripsi Fakultas Kedokteran Hewan
UGM. Yogyakarta.
Studi Lesi Makroskopis dan Mikroskopis Embrio Ayam
Seal, B.S., King, D.J. and Sellers, H.S. (2000) The
Avian Response to Newcastle disease Virus.
Dev. Comp. Imm. 24: 257-268.
Wibowo, M.H., Asmara, W. dan Tabbu, C.R. (2006)
Isolasi dan Identifikasi Serologis Virus Avian
Influenza dari Sampel Unggas yang Diperoleh
di D.I. Yogyakarta dan Jawa Tengah. J. Sain Vet.
24: 77-83.
Wiyono, A., Indriani, R., Dharmayanti, N.L.P.I.,
Damayanti, R., Parede, L., Syafriati, T. dan
Darminto. (2004) Isolasi dan Karakterisasi
Virus Highly Pathogenic Avian Influenza
Subtipe H5 dari Ayam Asal Wabah di Indonesia.
JITV. 9: 61-71.
67
Infectious Disease–Brief Communication
Veterinary Pathology
2017, Vol. 54(1) 94-98
Pathogenesis of Renal Lesions in Chickens ª The Author(s) 2016
Reprints and permission:
sagepub.com/journalsPermissions.nav
After Experimental Infection With 9a5b DOI: 10.1177/0300985816655852
journals.sagepub.com/home/vet
Newcastle Disease Virus Mutant Isolate

A. El-Bahrawy1,2,3, A. Zaid1,3, Y. Sunden1, M. Sakurai4, H. Ito5,

T. Ito5, and T. Morita1

Abstract
In this study, we investigated the pathogenesis of Newcastle disease virus (NDV) in the chicken kidney. Twenty-six 32-day-old
specific pathogen-free chickens were intranasally inoculated with the 9a5b NDV mutant isolate. Kidney tissue samples, collected
at 6 and 12 hours postinoculation (hpi) and 1, 2, 3, 5, and 10 days postinoculation (dpi), were analyzed by histopathology,
immunohistochemistry (IHC), reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), and virus titration. Histopathologically,
tubulointerstitial nephritis was detected in the renal cortex and predominantly in the medulla. Nephrotropism of 9a5b NDV was
confirmed by IHC, RT-PCR, and virus isolation. Massive degenerative changes and infiltration of CD3-immunopositive cells
accompanied replication of the 9a5b NDV isolate in chicken kidneys. In conclusion, pathological changes that were caused by
NDV in chicken kidneys were similar to those caused by avian influenza virus, infectious bronchitis virus, and avian nephritis virus,
and this highlights the importance of including NDV in the differential diagnosis of kidney disease in chickens.

Keywords
Newcastle disease, chicken, kidney, nephrotropism

Newcastle disease virus (NDV) is the causative agent of
Newcastle disease. NDV is a single-stranded, nonsegmented,
negative-sense enveloped RNA virus.4,5 The genome of NDV
encodes 6 structural proteins: nucleoprotein (NP), fusion pro-
tein (F), RNA polymerase protein (L), matrix protein (M),
hemagglutinin-neuraminidase protein (HN), and phosphopro-
tein (P).4,5 Virulence of NDV is multigenic and the F, HN, and
P genes are key players in its virulence.5,16 Based on the sever-
ity of clinical signs, NDVs can be categorized into strains of
high virulence (velogenic), moderate virulence (mesogenic),
and low virulence (lentogenic);11 also based on the intracereb-
ral pathogenicity index (ICPI) in 1-day-old chicks, NDVs can
be categorized into virulent and avirulent strains.11
The fusion (F) protein cleavage site amino acid sequence of
avirulent strains is 112(G/E)(K/R)Q(G/E) RL117 and cleaved by
trypsin-like enzymes found in certain tissues, while that of viru-
lent strains is 112(R/K)-R-Q-(R/K) RF117 and cleaved by ubiqui-
tous intracellular host proteases, causing systemic infection.4
Viral tropism for chicken kidneys has been shown by certain
viruses such as avian infectious bronchitis virus (IBV),1 avian
nephritis virus (ANV),10 and some strains of avian influenza
virus (AIV).17 Renal pathological manifestations of these
viruses include renal tubular necrosis, degeneration, and
nephritis.1,10,17 Renal lesions due to NDV have been reported
in several avian species, for example, chickens, turkeys, and
double-crested cormorants.2,3,9,12,16 However, little is known
about renal lesions in NDV infections, and no previous studies
have addressed the relationship between histopathological
alterations in chicken kidney tissues and NDV replication.
Avirulent wild viruses, having the typical avirulent fusion
protein cleavage site sequence, have the potential to become
velogenic after passage in chickens.15,18 The virulent 9a5b
NDV mutant isolate was generated from the lentogenic
Goose/Alaska/415/91 strain by 9 consecutive passages in
chicken air sacs, followed by 5 passages in chicken brain.15
1
Department of Veterinary Pathology, Faculty of Agriculture, Tottori Univer-
sity, Minami, Koyama-cho, Tottori, Japan
2
The United Graduate School of Veterinary Science, Yamaguchi University,
Yamaguchi, Japan
3
Department of Veterinary Pathology, Faculty of Veterinary Medicine,
University of Sadat City, Menoufiya, Egypt
4
Department of Veterinary Pathology, Joint Faculty of Veterinary Medicine,
Yamaguchi University, Yamaguchi, Japan
5
Department of Veterinary Public Health, Faculty of Agriculture, Tottori
University, Minami, Koyama-cho, Tottori, Japan
Supplemental material for this article is available on the Veterinary Pathology website
at http://journals.sagepub.com/home/vet/doi/suppl/10.1177/0300985816655852.
Corresponding Author:
T. Morita, Department of Veterinary Pathology, Faculty of Agriculture, Tottori
University, Tottori-shi Koyama-cho Minami 4-101, 680-8553, Tottori, Japan.
Email: morita@muses.tottori-u.ac.jp
El-Bahrawy et al 95

Table 1. Intensity and Distribution of Renal Gross Lesions, Histopathology, and Immunohistochemistry of NDV-Nucleoprotein and CD3
Staining in Chickens After Experimental Infection With 9a5b NDV Mutant Isolate.a

6 hpi 12 hpi 1 dpi 2 dpi 3 dpi 5 dpi 10 dpi Control

Chicken No. 1, 2, 3 4, 5, 6 7, 8, 9 10, 11, 12 13, 14, 15 16, 17, 18 19, 20, 21 22, 23, 24, 25, 26
Gross lesionsb –, –, – –, –, – –, –, – –, –, – –, –, – þ, þ, – þ, þ, þ –, –, –, –, –
Histopathologyc –, –, – –, –, – +, +, – –, þ, þ þ, +, þ þþ, þþ, þþ þþþ, þþþ, þþþ –, –, –, –, –
IHC (NDV)d –, –, – –, –, – –, þ, – –, þþ, þþ þþ*, þ, þþ þþþ, þþþ*, þþ þþ, –, – –, –, –, –, –
IHC (CD3)e –, +, – –, +, + +, þ, – –, þ, þ þþ, þ, þþ þþ, þþ, þþ þþþ, þþþ, þþþ +, –, +, –, –
dpi, days postinoculation; hpi, hours postinoculation. IHC, immunohistochemistry; NDV, Newcastle disease virus.
a
Chicken Nos. 1 to 21 represent the number of infected chickens; chicken Nos. 22 to 26 represent the number of control chickens.
b
Gross lesions (small whitish area); –, absent; þ, present.
c
Scoring of histopathology: –, normal + congestion, hemorrhage, and mononuclear cell infiltration; þ, mild <20%; þþ, moderate <50%; þþþ, severe >50% of
necrosis, medullary dilatation and degeneration, and cortical interstitial nephritis.
d
IHC scoring of NDV: –, no positive signals; þ, 4 positive signals of all high-power fields (HPFs); þþ, 8 positive signals of HPFs; þþþ, >8 positive signals of
HPFs. Asterisk indicates positive signals in glomeruli.
e
IHC scoring of CD3; –, no positive signals + rare positive; þ, mild <20% of all HPFs; þþ, moderate <50% of HPFs; þþþ, severe >50% of HPF.

The original strain has an ICPI of zero and avirulent F protein
cleavage site compared with the 9a5b NDV isolate, which has
an ICPI equal to 1.88 and a virulent F protein cleavage site.15
Previously, a comparative study found that renal lesions were
more prominent in chickens than ducks after experimental
infection with 9a5b NDV.2 Therefore, we aimed in this study
to investigate the renal lesions in chicken kidneys using the
same isolate, from an early to a late phase of infection, as well
as the renal pathogenesis of NDV strains that may sponta-
neously mutate from avirulent to virulent ones.
The 9a5b NDV isolate was propagated in specific pathogen-
free (SPF) eggs, and 0.1 ml of the viral suspension containing
108.75 50% embryo infectious dose (EID50) was inoculated
intranasally in each chicken.15
Twenty-six 32-day-old male SPF white Leghorn chickens
(Nippon Institute for Biological Science, Tokyo, Japan) were
assigned into 2 groups: the control group (n ¼ 5) and the infected
group (n ¼ 21). Chickens were reared under biosafety level 2
and acclimatized for 1 week prior to virus inoculation with free
access to food and water. Three chickens from the infected group
were euthanized each at 6 and 12 hours postinoculation (hpi) and
1, 2, 3, 5, and 10 days postinoculation (dpi). Chickens in the
control group were euthanized on the final experimental day.
After euthanasia, necropsy was performed and kidneys were
examined for gross abnormalities. Kidney tissues were further
processed by either fixation in 10% neutral buffered formalin for
hematoxylin and eosin (HE) and immunohistochemical (IHC)
staining or preserved at –80 C for viral RNA isolation and virus
titration. The Tottori University ethics committee approved all
experimental procedures.
Kidney tissues were fixed in formalin for approximately
60 hours and were processed routinely for HE and IHC staining.
For NDV detection, the primary antibody was prepared in rab-
bits against the NDV nucleoprotein (NDV-NP), and the IHC
protocol was performed as previously described2 using antigen
retrieval with citrate buffer (pH 5.4) for 10 minutes, overnight
incubation with primary antibody (1:8000 dilution) at 4 C,
detection with a labeled polymer (ChemMate DAKO EnVi-
sion/HRP [DAP]; Dako, Carpinteria, CA), and staining with
3, 30 -diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) and a hema-
toxylin counterstain. Positive control tissues were spleen and
kidney of experimental infected NDV in chickens. For negative
control, the primary antibody was replaced by phosphate-
buffered saline.
For CD3 IHC, we performed the previously mentioned pro-
tocol except that the primary antibody was rabbit polyclonal
anti-human CD3 (1:300 dilution; Dako), and the antigen retrie-
val time was 20 minutes.
Virus titers were measured using 10-day-old embryonated
SPF chicken eggs. Briefly, kidney tissue from each chicken
was homogenized in PBS (1:10 [wt:vol]), and a 10-fold serial
dilution of the clear homogenate (100 ml) was inoculated into
the allantoic cavity of the eggs. The eggs were incubated at
37 C for 3 days followed by incubation at 4 C for 1 day. The
hemagglutination assay was performed on all eggs, and viral
titers were expressed as EID50 per gram.13
Total RNA was extracted from the kidney tissue using TRIzol
reagent (Invitrogen, Carlsbad, CA), and then the extracted RNA
(500 ng) from each sample was reverse transcribed to comple-
mentary DNA (cDNA) using PrimeScript II first strand cDNA
synthesis kit (Takara, Otsu, Japan). Primer sets from the F gene
were used to amplify a target sequence of 168 bp. Primer
sequences were as follows: 50 -CGCAGATCACAGCGGCTT
CTG-30 (forward) and 50 -GGTCGT TTA CAAACTGCTGC- 30
(reverse).18 The polymerase chain reaction (PCR) conditions
comprised 40 amplification cycles of 94 C for 2 minutes, fol-
lowed by denaturation at 94 C for 30 seconds, annealing at 56 C
for 30 seconds, extension at 72 C for 20 seconds, and a final
extension at 72 C for 5 minutes. In total, 10 ml of the PCR
product was detected by 2% agarose gel electrophoresis. The
gel was precast with Gel Red Nucleic Acid Stain (Biotium,
Hayward, CA).
The clinical signs were mild and transient. Chickens showed
depression, lack of appetite, lethargy, green diarrhea, and closed
eyes at 3–5 dpi. After 5 dpi, the chickens returned to an almost
normal state and recommenced food and water consumption.
The findings are summarized in Table 1. Grossly, the kid-
neys were pale with mild lesions. Multifocal small whitish
96
areas were observed in cross sections of kidneys in 2 and 3
chickens at 5 and 10 dpi, respectively.
Histologically, around 1 to 2 small lymphoid foci were
observed in the interstitium of the kidney in 2 of the 5 control
chickens and in the ureteral mucosa of all examined birds.
Areas of hematopoiesis composed of red blood cells and gran-
ulocytes were observed in both control and infected birds. No
histopathological changes were observed in infected kidneys at
6 and 12 hpi. At 1 dpi, 2 chickens had congestion, hemorrhage,
and marked mononuclear cell infiltration. At 2 and 3 dpi, 2
chickens in each had mild multifocal lymphohistiocytic tubu-
lointerstitial nephritis within the cortex, and lymphoid nodules
were observed and gradually increased. The medullary cones
were mildly dilated and infiltrated with heterophils and other
mononuclear cells (Fig. 1). At 5 dpi, 3 chickens had moderate
multifocal lesions, and occasionally these lesions coalesced to
form diffuse cortical tubulointerstitial nephritis. Marked
degeneration, necrosis, and apoptosis of the renal tubular
epithelium in the cortical region were identified (Suppl. Fig.
S1). The medullary cone showed moderate dilatation and
degeneration of its components (collecting tubules and ducts,
medullary loops, and ureteral branches) associated with calci-
fication and inflammatory reaction. At 10 dpi, 3 chickens had
severe cortical tubulointerstitial nephritis. The medullary cones
were markedly dilated and more severely damaged than the
cortex. Mild to moderate interstitial fibrosis and protein casts
were observed in the renal tubular lumen. Severe dystrophic
calcification and inflammatory response were observed (Suppl.
Fig. S2). Clinical signs and gross and histopathologic lesions
were absent in control chickens.
Immunohistochemically, NDV-NP was detected in infected
renal tissues at 1 dpi, followed by an increase in intensity and
distribution at 2 to 5 dpi and then decreased or became absent
by the final experimental day. Most immunostaining for NDV-
NP was distributed in a multifocal pattern in the intact (Fig. 2)
and vacuolated epithelium of proximal and distal tubules
(Suppl. Fig. S1), in infiltrating macrophages, and occasionally
in some cells of reptilian-type glomeruli in the cortex (Fig. 3).
In the renal medulla, NDV-NP immunostaining was mainly
present in the tubular epithelium and the infiltrating mononuc-
lear cells. Kidney of control chickens was negative to NDV-NP
IHC (Suppl. Fig. S3).
CD3-positive cells were observed rarely in the interstitium of
the kidneys in 2 chickens of the control group and in the ureteral
mucosa of all control chickens. In the infected renal tissues,
infiltration of CD3-immunopositive cells commenced at 1 dpi
and became marked at 10 dpi. CD3-positive cells had focal and
diffuse infiltration throughout the entire kidney (Fig. 4) and in
areas with immunostaining signals of 9a5b NDV (Fig. 5).
Virus titration results are summarized in Figure 6. At 6
and 12 hpi, 9a5b NDV was not detected in kidneys. Virus
was detected in 1 chicken at 1 dpi, in 2 chickens at 2 dpi, in
all examined chickens at 3 and 5 dpi with a replication peak
at 5 dpi, and in only 1 chicken at 10 dpi. Reverse transcrip-
tion (RT)–PCR results in infected chickens kidneys coin-
cided with IHC and virus titration results (data not
Veterinary Pathology 54(1)
shown). Kidneys of control chickens were negative by virus
titration and RT-PCR.
This study investigated the pathogenesis of NDV in the
kidney of chickens after experimental infection. To our
knowledge, no previous studies have addressed the relation-
ship between histopathological alterations in chicken kidney
tissues and NDV replication. The clinical signs were mild
and compatible with our previous report.2 Also, similar find-
ings were observed for virulent NDV strains that do not pro-
duce much clinical disease,6,16 although those previously
studied viruses were classified as virulent strains based on
their ICPI and F protein cleavage site.16 Dortmans et al5 men-
tioned that intracerebral inoculation, not being the natural way
of infection, may lead to a difference in ICPI value compared
with the natural route of infection. In addition, NDV virulence
is multigenic, and the F gene is not the only key player in
NDV virulence.5,16
Nephrotropism of the 9a5b NDV isolate in the chicken kid-
neys was confirmed by IHC, RT-PCR, and virus isolation from
an early time after infection (1 dpi). Virus detection was con-
sistent among these 3 methods and started at 1 dpi, peaked at
5 dpi, and diminished at 10 dpi. The histopathological
changes in the kidneys of infected chickens were consistent
with the viral replication. The 9a5b NDV isolate caused
severe degeneration and necrosis in the renal epithelium with
positive viral immunostaining in both the tubular epithelium
and mononuclear cells as previously reported for other
birds.2,3,9,12,16 The virus distribution was in the cortex and
medulla of kidney as previously described.9 Moreover, in this
study, positive viral immunostaining was observed occasion-
ally in some glomerular cells.
In this study, NDV tubulointerstitial nephritis can be clas-
sified into cortical tubulointerstitial nephritis and intratubular
medullary cone nephritis as previously described in the case
of AIV infection in chickens.17 The 9a5b NDV isolate caused
more severe tubulointerstitial nephritis in the renal medulla
than in the cortex, similar to findings with IBV infection in
chickens.1 In humans, the medulla is more susceptible to
infection than the cortex due to the low pH, high osmolality,
and high concentration of ammonia in the medulla.14 In birds,
the susceptibility of the renal cortex and the medulla to infec-
tion is unknown as the pH is variable.8 Tubular injury in the
medulla more likely results from plugging of the lumina by
cell debris, calcified materials, or both, subsequently increas-
ing inflammation as proposed by others in the case of AIV
infection in chickens.17 Loss of renal function combined with
water deprivation during the peak of clinical signs may
enhance the effect.
CD3-positive cells were the main inflammatory component
in chicken kidneys as previously reported in chicken brain
during NDV infection.7 Infiltration of CD3-positive cells in the
infected kidneys was associated with a decrease or complete
absence of viral replication at 10 dpi.
In conclusion, the 9a5b NDV mutant isolate showed a
nephrotropism to chicken kidneys early after infection (1 dpi).
Tubulointerstitial nephritis was more severe in the renal
El-Bahrawy et al 97

Figure 1. Kidney; chicken, 3 days postinoculation (dpi) with 9a5b Newcastle Disease Virus mutant isolate. Mild to moderate dilatation and
mineralization of the medullary cones accompanied by heterophilic (arrowhead) and mononuclear cell infiltration. Figure 2. Kidney; chicken,
5 dpi. Immunolabeling of NDV nucleoprotein (NP) is present in the renal tubular epithelium. Inset: higher magnification of NDV-NP positive
immunolabeling in the renal tubular epithelium. Figure 3. Kidney; chicken, 2 dpi. NDV-NP positive immunolabeling was present in the renal
tubular epithelium (arrow) and in glomerular cells (arrowhead). Inset: higher magnification of NDV-NP positive immunolabeling in the
glomerular cells. Figure 4. Kidney; chicken, 3 dpi. CD3 immunohistochemistry shows nodular and diffuse interstitial infiltration of CD3-
immunopositive cells and occasional CD3-immunopositive cells within the tubular epithelium. Figure 5. Kidney; chicken, 5 dpi. CD3 immu-
nolabeling was present in the interstitium around renal tubules (arrow). The inset shows NDV-NP immunolabeling in a renal tubule surrounded
by interstitial, mononuclear inflammatory cells.

medulla than in the cortex, and the local inflammatory response those caused by AIV, IB, and ANV, and this highlights the
may play a role in suppressing viral replication. Lesions that importance of including NDV in the differential diagnosis of
were caused by NDV in the kidneys of chickens were similar to kidney disease in chickens.
98
Figure 6. Individual viral titers in chicken kidneys at indicated times postinoculation. Kidneys from 3 individual chickens evaluated at each time
point are represented as a, b, and c. The dashed line represents the virus detection limit. Undetectable samples were given a half of detection
limit value. Virus titers were determined in 10-day-old embryonated specific pathogen-free chicken eggs and are presented as EID50 per gram.
dpi, days postinoculation; hpi, hours postinoculation.
Acknowledgments
We thank the Egyptian and Education Culture Office for providing a
doctoral fellowship to the first author.
Declaration of Conflicting Interests
The author(s) declared no potential conflicts of interest with respect to
the research, authorship, and/or publication of this article.
Funding
The author(s) disclosed receipt of the following financial support for
the research, authorship, and/or publication of this article: This work
was supported by the Egyptian government and the Laboratory of
Veterinary Pathology, Tottori University, Japan.
References
1. Albassam MA, Winterfield RW, Thacker HL. Comparison of the nephropatho-
genicity of four strains of infectious bronchitis virus. Avian Dis. 1986;30(3):
468–476.
2. Anis Z, Morita T, Azuma K, et al. Comparative study on the pathogenesis of the
generated 9a5b Newcastle disease virus mutant isolate between chickens and
waterfowl. Vet Pathol. 2013;50(4):638–647.
3. Courtney SC, Susta L, Gomez D, et al. Highly divergent virulent isolates of
Newcastle disease virus from the Dominican Republic are members of a new
genotype that may have evolved unnoticed for over two decades. J Clin Micro-
biol. 2012;51(2):508–517.
4. de Leeuw OS, Hartog L, Koch G, et al. Effect of fusion protein cleavage site
mutations on virulence of Newcastle disease virus: non-virulent cleavage site
mutants revert to virulence after one passage in chicken brain. J Gen Virol.
2003;84(pt 2):475–484.
5. Dortmans JC, Koch G, Rottier PJM, et al. Virulence of Newcastle disease virus:
what is known so far? Vet Res. 2011;42(1):122.
6. Ecco R, Brown C, Susta L, et al. In vivo transcriptional cytokine responses and
association with clinical and pathological outcomes in chickens infected with
Veterinary Pathology 54(1)
different Newcastle disease virus isolates using formalin-fixed paraffin-
embedded samples. Vet Immunol Immunopathol. 2011;141(3–4):221–229.
7. Ecco R, Susta L, Afonso CL, et al. Neurological lesions in chickens experimen-
tally infected with virulent Newcastle disease virus isolates. Avian Pathol. 2011;
40(2):145–152.
8. Echols MS. Evaluating and treating the kidneys. In: Harrison GJ, Lightfoot T,
eds. Clinical Avian Medicine. Vol 2. INC, Palm Beach, Florida, USA: Spix
Publishing; 2005:451–492.
9. Kuiken T, Wobeser G, Leighton FA, et al. Pathology of Newcastle disease in
double-crested cormorants from Saskatchewan, with comparison of diagnostic
methods. J Wildl Dis. 1999;35(1):8–23.
10. Maeda M, Imada T, Taniguchi T, et al. Pathological changes in chicks inoculated
with the picornavirus ‘‘avian nephritis virus.’’ Avian Dis. 1979;23(3):589–596.
11. OIE–World Organization for Animal Health. Newcastle disease. In: Manual of
Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. 6th ed. Paris, France:
OIE–World Organization for Animal Health; 2008:576–589.
12. Piacenti AM, King DJ, Seal BS, et al. Pathogenesis of Newcastle disease in
commercial and specific pathogen-free turkeys experimentally infected with
isolates of different virulence. Vet Pathol. 2006;43(2):168–178.
13. Reed LJ, Muench HA. A simple method of estimating fifty percent endpoints.
Am J Epidemiol. 1938;27(3):493–497.
14. Schaeffer AJ. What do we know about the urinary tract infection–prone indi-
vidual? J Infecti Dis. 2001;183(suppl 1):S66–S69.
15. Shengqing Y, Kishida N, Ito H, et al. Generation of velogenic Newcastle disease
viruses from a nonpathogenic waterfowl isolate by passaging in chickens.
Virology. 2002;301(2):206–211.
16. Susta L, Miller PJ, Afonso CL, et al. Clinicopathological characterization in
poultry of three strains of Newcastle disease virus isolated from recent out-
breaks. Vet Pathol. 2011;48(2):349–360.
17. Swayne DE, Slemons RD. Renal pathology in specific-pathogen-free chickens
inoculated with a waterfowl-origin type A influenza virus. Avian Dis. 1990;
34(2):285–294.
18. Tsunekuni R, Ito H, Otsuki K, et al. Genetic comparisons between lentogenic
Newcastle disease virus isolated from waterfowl and velogenic variants. Virus
Genes. 2010;40(2):252–255.
Jurnal Veteriner Juni 2016 Vol. 17 No. 2 : 257-264
pISSN: 1411-8327; eISSN: 2477-5665 DOI: 10.19087/jveteriner.2016.17.2.257
Terakreditasi Nasional SK. No. 15/XI/Dirjen Dikti/2011 online pada http://ojs.unud.ac.id/php.index/jvet

Vaksin Kombinasi Newcastle Disease dengan Avian Influenza

Memicu Imunitas Protektif pada Ayam Petelur terhadap
Penyakit Tetelo dan Flu Burung
(COMBINED NEWCASTLE DISEASE (ND)
AND AVIAN INFLUENZA (AI) VACCINES INDUCE PROTECTIVE IMMUNE RESPONSE
IN COMMERCIAL LAYER AGAINST ND AND AI)

Gusti Ayu Yuniati Kencana1, I Nyoman Suartha2,

Ni Made Ayu Sintya Paramita3, Arini Nur Handayani4
1
Laboratorium Virologi, 2Laboratorium Penyakit Dalam,
3
Mahasiswa Program Pendidikan Dokter Hewan
Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Udayana, Jln. Sudirman, Denpasar
Telpon : 0361-223791, Email: yuniatikencana@gmail.com
4
PT. Sanbio Laboratories Research & Development,
Wanaherang, Gunung Putri, Bogor, Indonesia

ABSTRAK

Penyakit tetelo atau Newcastle disease (ND) dan flu burung atau Avian Influenza (AI) merupakan
penyakit virus menular stategis yang bersifat endemis di Indonesia. Pencegahan terhadap penyakit
tersebut dengan cara vaksinasi unggas sebagai sumber penular penyakit. Penggunaan vaksin kombinasi
ND-AI diharapkan mencegah kedua penyakit tersebut sekaligus. Penelitian ini bertujuan untuk
menentukan potensi vaksin kombinasi ND-AI pada kondisi lapang. Uji lapang dilakukan pada peternakan
ayam petelur komersial di Kecamatan Penebel, Tabanan, Bali, sedangkan uji serologi hemaglutination
inhibition (HI) dilakukan di Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana. Hasil uji HI adalah:
rataan titer antibodi terhadap ND pravaksinasi sebesar 2,27 HI unit log 2 dan titer AI sebesar 1,27 HI
unit log 2. Rataan titer antibodi terhadap ND periode dua minggu pascavaksinasi adalah sebesar 5,47 HI
unit log 2 dan titer AI sebesar 7,93 HI unit log 2. Titer antibodi terhadap ND periode tiga minggu
pascavaksinasi sebesar 7,00 HI unit log 2 dan titer AI sebesar 8,53HI unit log 2. Pada minggu ke-4
pascavaksinasi, rataan titer antibodi terhadap ND sebesar 8,73 HI unit log 2 dan titer AI sebesar 8,47 HI
unit log 2. Simpulannya adalah secara serologi vaksin ND-AI mampu memicu pembentukan respons
imun protektif ayam petelur terhadap penyakit ND dan AI ditandai dengan meningkatnya titer antibodi
di atas ambang protektif pada pengambilan darah setiap minggu. Waktu pengambilan sampel sangat
berpengaruh terhadap tingginya titer antibodi ND dan AI yang terbentuk (P<0,01). Disarankan untuk
melakukan vaksinasi pada ayam saat titer atibodi di bawah 4 HI unit log 2.

Kata-kata kunci: vaksinasi, vaksin ND-AI, titer antibodi ND, titer antibodi AI, uji HA/HI, uji lapang

ABSTRACT

Newcastle disease (ND) and Avian Influenza (AI) are infectious diseases and still endemic in Indonesia.
Prevention of the disease is conducted by vaccination of birds as the source of the infection. The use of
combined ND-AI vaccine is expected to be able to prevent both diseases simultaneously. This study aim
was to determine the potency of combined ND-AI vaccine in field condition. Field trial vaccination was
conducted in commercial layer chickens in Tabanan Bali, and the HI test was conducted at the Faculty of
Veterinary Medicine Udayana University, Denpasar. Field trial in commercial layer chickens showed that
the average HI titer of ND sera from pre-vaccinated chickens was 22.7HI units and AI titer was 21.27 HI
units. The ND titers increased to 25.47 HI Unit, 27.0 HI units, and to 28.73 HI units, whereas AI titers
increased to 27.93 HI Unit, 28.53 HI units, and 28.47 HI units in two, three and four weeks post-vaccination
with the ND-AI combined vaccine, respectively. Statistically, based on ND and AI antibody pre and post-
vaccination, it is indicated that the combined ND-AI vaccine was able to induce immune response higher
than the protective titer level (>24). Period of collecting the sera samples also affected the titer of NDV
and AI antibodies (P<0.01). Therefore it is recommended that vaccination should be conducted at antibody
titer of < 4 HI Unit.

Keywods: Vaccination, combined ND-AI vaccines, antibody titer ND and AI, HA/HI test, field test

257
GA. Yuniati Kencana, et al
PENDAHULUAN
Di Indonesia penyakit tetelo atau Newcastle
Disease (ND) dan penyakit flu burung atau
Avian Influenza (AI) telah lama dikenal. Kedua
penyakit tersebut dikelom-pokkan dalam
kelompok penyakit menular strategis. Penyakit
AI bahkan dikelompokkan dalam kelompok
penyakit menular strategis prioritas karena
bersifat zoonosis berbahaya (Kementan, 2013).
Penyakit AI dapat membu-nuh penderitanya
baik itu hewan maupun manusia yang
terinfeksi. Sumber utama penu-lar ND maupun
AI adalah unggas, oleh karena-nya vaksinasi
merupakan langkah utama dalam melakukan
tindakan pencegahan tehadap ND maupun AI.
Angka kematian dan derajat keparahan
penyakit ND maupun AI sangat bervariasi,
mulai dari penyakit yang asimp-tomatik (tanpa
gejala klinis) maupun penyakit yang bersifat
fatal (Swayne dan Suarez, 2000).
Meskipun program Pemerintah tentang
vaksinasi pada ternak unggas telah digalakkan
namun penyakit ND dan AI masih tetap
dijumpai di Indonesia (Kencana et al., 2012a;
Kencana et al., 2012 b , Kementan, 2013).
Kerugian akibat penyakit ND maupun AI dapat
berpengaruh langsung terhadap terhambatnya
produksi peternakan ayam (Sudarisman, 2009).
Seringkali penyakit ND dan AI terjadi secara
bersamaan pada unggas sehingga
mengakibatkan kerugian besar peternak
unggas. Kedua virus penyakit tersebut
terdeteksi sebagai penyebab kasus lapang,
sehingga solusinya adalah dilakukan vaksinasi
dengan vaksin kombinasi sebagai upaya
meningkatkan keberhasilan program vaksinasi
ND dan AI (Wakawa et al., 2009). Produsen
vaksin telah membuat vaksin kombinasi ND-
AI sebagai upaya menanggulangi penyakit ND
dan AI yang ada di Indonesia. Namun, kadang-
kala ada kendala dalam menggunakan vaksin
kombinasi karena kombinasi beberapa agen
penyakit ada juga yang dapat memengaruhi
efektivitas vaksin dalam menginduksi
pembentukan respons imun protektif (Cardoso
et al., 2005).
Penelitian tentang vaksin ND-AI pada ayam
specific pathogenic free (SPF) telah dilaporkan
(Kencana et al., 2015a). Berbeda halnya dengan
penelitian pada ayam petelur komersial, pada
ayam SPF sangat terjaga kondisinya karena
penelitian dilakukan di kandang Laboratorium
PT Sanbio yang terisolir. Hasil penelitian
terdahulu tentang vaksin kombinasi ND-AI
258
Jurnal Veteriner
pada ayam SPF ternyata mampu memicu
terbentuknya titer antibodi dan bersifat protektif
terhadap penyakit ND dan AI.
Penyakit AI pernah ditemukan hampir di
seluruh belahan dunia (kecuali di benua
Antartika) termasuk pula di Indonesia (Kandun
et al., 2008). Kejadian luar biasa (KLB) kasus
AI juga pernah melanda Indonesia pada tahun
2003–2006, dan Indonesia merupakan negara
dengan angka kematian manusia akibat AI yang
tertinggi di dunia. Upaya pencegahan terhadap
ND maupun AI terus dilakukan secara teratur
dengan meningkatkan biosecurity dan
melakukan vaksinasi (Nurcholis et al., 2009).
Sumber penular utama penyakit AI adalah
unggas, maka cara pencegahan terhadap
penyakit AI adalah dengan melakukan vaksinasi
unggas peliharaan secara teratur. Vaksinasi
ayam dapat dilakukan dengan vaksin aktif,
vaksin inaktif sediaan tunggal maupun
kombinasi (FOHI, 2007). Namun, vaksin virus
AI aktif (vaksin dengan virus AI yang
dilemahkan) tidak direkomendasikan karena
penyakit AI bersifat zoonosis, di samping itu
virus AI juga dapat mengalami mutasi genetik
atau terjadi reassorment dengan virus AI lain
yang bersirkulasi di daerah tersebut sehingga
dapat berubah menjadi virus ganas (Alexander,
2007). Oleh karena itu vaksin ND-AI dibuat
dalam bentuk vaksin inaktif.
Gejala klinis penyakit ND dan AI sangat
mirip, di samping itu kedua penyakit itu juga
bersifat endemik di Indonesia. Hal tersebut
menyebabkan sulit untuk membedakan secara
klinis kasus ND dan AI pada ternak unggas.
Oleh sebab itu perlu dilakukan upaya
pencegahan terhadap ND dan AI yang melanda
suatu wilayah dengan menggunakan vaksin
kombinasi ND-AI. Vaksin kombinasi ND-AI juga
mempunyai beberapa keunggulan di antaranya
adalah dapat diberikan sekaligus pada ayam
sehingga akan menurunkan tingkat stres yang
timbul pasca vaksinasi. Biaya produksi
beternak ayam juga dapat ditekan dengan
menggunakan vaksin kombinasi ND-AI inaktif.
Pada ayam pedaging yang masa pemeliha-
raannya relatif pendek (sekitar 42 hari),
vaksinasi dengan vaksin inaktif cukup hanya
sekali saja, namun vaksinasi pada ayam petelur
perlu dilakukan pengulangan menjelang masa
bertelur untuk memicu respons imun sekunder
protektif guna melindungi ayam dari kasus ND
dan AI di lapangan. Riset ini melaporkan ten-
tang respons imun ayam petelur pascavaksinasi
ND-AI pada kondisi lapang.
Jurnal Veteriner
Akibat dari rangsangan antigen ND-AI
respons imun ayam petelur adalah
terbentuknya antibodi spesifik di dalam serum.
Pembentukan antibodi spesifik terhadap antigen
dapat diuji dengan uji HI yang ditandai
terbentuknya titer antibodi protektif (Davidson
et al., 2008). Monitoring terhadap potensi vaksin
ND-AI perlu dilakukan secara berkelanjutan
dengan memeriksa titer antibodi ayam
pascavaksinasi dengan uji hambatan
hemaglutinasi. Hasil pemeriksaan titer antibodi
pravaksinasi selanjutnya diban-dingkan dengan
titer antibodi pascavaksinasi. Analisis hasil
vaksinasi ND-AI juga dilakukan terhadap waktu
pengambilan serum untuk memprediksi periode
vaksinasi yang tepat.
METODE PENELITIAN
Sampel Penelitian
Penelitian ini menggunakan vaksin ND–
AI inaktif, (Sanavac(R), Sanbio, Bogor). Vaksin
kombinasi ND–AI merupakan vaksin kombinasi
dalam bentuk emulsi yang dibuat dari virus
inaktif Avian influenza subtipe H5N1 strain
lokal > 108,5 EID50 sebelum inaktivasi, dan virus
inaktif Newcastle Disease strain La Sota > 109,5
EID50 sebelum inaktivasi. Sampel penelitian
dipilih secara acak terhadap 15 ekor ayam
petelur dari total populasi 2000 ekor pada
peternakan ayam petelur komersial di Penebel,
Tabanan, Bali.
Uji Lapang
Uji coba potensi vaksin kombinasi ND-AI
pada kondisi lapang dilakukan pada
peternakan ayam petelur komersial di Penebel,
Tabanan, Bali yang merupakan sentra industri
peternakan ayam petelur di Penebel, Tabanan,
Bali. Ayam divaksin secara intramuskuler pada
otot paha dengan satu dosis vaksin.
Dua hari pravaksinasi dilakukan
pengambilan darah untuk mengetahui titer
antibodi ayam sebelum vaksinasi, sedangkan
pemeriksaan terhadap hasil vaksinasi dilakukan
setiap minggu sebanyak tiga kali mulai minggu
ke-2 sampai minggu ke-4 pascavaksinasi.
Pengambilan darah dilakukan melalui vena
brachialis. Potensi vaksin ND-AI diukur secara
serologi dengan uji hambatan hemaglutinasi
(HI). Berdasarkan standar ASEAN titer antibodi
protektif terhadap virus ND dan AI adalah ≥ 4
HI unit log 2 (ACFAF, 2012; Permentan, 2008).
259
Juni 2016 Vol. 17 No. 2 : 264-271
Penyiapan Serum
Darah ayam diambil sebanyak 0,5-1,0 mL
melalui vena brachialis dengan menggunakan
disposable syringe volume 3 mL, kemudian
darah dibiarkan beberapa jam hingga serumnya
terpisah secara sempurna. Selanjutnya darah
disentrifuse dengan kecepatan 2500 rpm selama
10 menit. Serum dipisahkan dari bekuan darah
dan ditampung dengan tabung mikro steril
kemudian dimasukkan ke dalam penangas air
bersuhu 560C dan didiamkan selama 30 menit.
Tujuan pemanasan serum untuk menginak-
tifkan faktor pengganggu autohemolisin yang
ada dalam serum. Sampel serum yang telah siap
kemudian diuji serologi HA/HI.
Pembuatan Suspensi Eritrosit 1%
Suspensi eritrosit 1% dibuat sesuai prosedur
OIE (2012) yang telah dimodifikasi dengan
teknik sebagai berikut: sebanyak 2,5 mL darah
ayam diambil melalui vena brachialis dengan
menggunakan disposable syringe volume 3 mL.
Darah ayam selanjutnya ditampung pada
tabung steril yang telah diisi antikoagulan
alselver sebanyak 2,5 mL. Sel darah merah ayam
dicuci dengan cara ditambahkan 5 mL PBS pH
7,2 ke dalam tabung yang berisi larutan darah,
selanjutnya dicampur secara perlahan-lahan
agar sel darah merah tidak rusak. Sampel darah
kemudian disentrifuse dengan kecepatan 2500
rpm selama 10 menit. Selanjutnya darah
dipisahkan dari buffycoat dan supernatan,
sehingga yang tinggal dalam tabung hanya
endapan sel darah merah. Proses selanjutnya
dilakukan pencucian kembali sel darah merah
dengan cara ditambahkan PBS sampai 2/3
tabung lalu dihomogenkan. Proses pencucian
darah diulang kembali dengan cara yang sama
sebanyak tiga kali. Endapan sel darah merah
kemudian diukur konsentrasinya dengan cara
disentrifugasi menggunakan mikrohematokrit.
Sel darah merah diukur Paked Cell Volume
(PCV) lalu diencerkan dengan PBS sampai
menjadi konsentrasi 1% dan siap digunakan
untuk uji HA/HI.
Uji Hemaglutinasi
Uji hemaglutinasi (HA/HI) dilakukan di
Unit Pelayanan Teknis (UPT) Patobiologi,
Fakultas Kedokteran Hewan Universitas
Udayana. Uji hemaglutinasi (HA) dengan teknik
mikrotiter diawali dengan cara sebagai berikut:
sebanyak 0,025 mL PBS ditambahkan kedalam
setiap sumuran plat mikro dengan menggu-
GA. Yuniati Kencana, et al
nakan pipet mikro. Sebanyak 0,025 mL suspensi
antigen ND ditambahkan pada sumuran
pertama. Pengenceran berseri berkelipatan dua
dimulai dari sumuran ke-1, dengan menggu-
nakan mikropipet diambil sebanyak 0,025 mL
campuran tadi lalu diencerken berseri sampai
sumuran ke-11, kemudian pada sumuran nomor
11 suspensi ini dibuang. Selanjutnya PBS
ditambahkan sebanyak 0,025 mL kedalam
setiap sumuran plat mikro. Sel darah merah
unggas 1% ditambahkan sebanyak 0,025 mL ke
dalam setiap sumuran plat mikro kemudian
digoyang-goyangkan menggunakan pengayak
mikro selama kurang lebih 15 detik. Plat mikro
dibiarkan pada suhu ruangan selama 30 menit
sambil diamati terjadinya hema-glutinasi (OIE,
2012). Hasil uji dinyatakan positif apabila ada
bentukan kristal pada dasar sumuran plat
mikro sebagai akibat adanya reaksi
hemaglutinin dengan sel darah merah unggas
1%. Titer HA selanjutnya dibaca dengan cara
memiringkan plat mikro ≥ 45 0 . Titer HA
ditentukan dari pengenceran antigen tertinggi
yang masih dapat menghaemaglutinasi sel
darah merah 1%. Titer HA yang diperoleh
selanjutnya diencerkan menjadi 4 unit HA
untuk digunakan pada uji HI.
Uji Hambatan Hemaglutinasi
Uji hambatan hemaglutinasi (Haemaglu-
tination Inhibition/ HI) sesuai dengan prosedur
OIE (2012) yang telah dimodifikasi, tekniknya
adalah sebagai berikut: sebanyak 0,025 mL PBS
dimasukan ke setiap sumuran plat mikro.
Sumuran pertama diisi dengan 0,025 mL serum
kemudian diencerkan secara berseri kelipatan
dua mulai dari sumuran ke-1 sampai ke-10
dengan pengencer mikro dan dari sumuran
nomor 10 suspensi dibuang sebanyak 0.025 mL.
Masing-masing sumuran plat mikro ditam-
bahkan dengan 0,025 mL suspensi antigen ND
4 unit HA mulai dari sumuran nomor 1 sampai
nomor 11. Plat mikro diayak selama kurang
lebih 15 detik dengan mikroshaker kemudian
dibiarkan selama 30 menit pada suhu ruangan.
Suspensi sel darah merah 1% ditambahkan ke
dalam sumuran ke-1 sampai ke-12 sebanyak
0,025 ml lalu diayak kembali selama kurang
lebih 15 detik. Plat mikro kemudian
diinkubasikan pada suhu kamar selama 30
menit sambil diamati. Pembacaan hasil uji HI
dilakukan apabila pada sumuran nomor 11
sudah tampak adanya aglutinasi eritrosit dan
260
Jurnal Veteriner
pada sumuran nomor 12 tampak endapan
eritrosit. Titer HI dibaca dengan memiringkan
plat mikro 45 derajat dan diamati ada atau
tidaknya sel darah merah yang turun (tear-
shaped). Titer antibodi HI ditentukan dengan
melihat pengenceran serum tertinggi yang
masih mampu menghambat aglutinasi eritrosit
1%. Titer antibodi yang diperoleh dihitung
rataannya setiap minggu dan dinyatakan dalam
Geometric Mean Titer (GMT) dengan rumus
(Erganis and Ucan, 2003) :
(log2 t l)(S1) + (log2 t2)(S2) + ... + (log2tn)(Sn)
Log 2 GMT =
N
Keterangan:
N = jumlah contoh serum yang diamati
t = tinggi titer antibodi pada pengenceran
tertinggi
S = jumlah contoh serum yang bertiter t
n = titer antibodi pada sampel ke-n
Analisis Hasil
Penghitungan nilai titer antibodi ND dan
AI ayam petelur pascavaksinasi dengan vaksin
ND-AI pada kondisi lapang diuji dengan sidik
ragam dan apabila berbeda nyata dilanjutkan
dengan uji jarak berganda Duncan. Analisis ini
dibantu dengan perangkat SPSS versi 2.2.
Lokasi Penelitian
Penelitian lapang terhadap hasil vaksinasi
ND-AI dilakukan pada peternakan ayam petelur
komersial di Desa Senganan, Kecamatan
Penebel, Kabupaten Tabanan, Bali. Lokasi ini
sengaja dipilih karena daerah tersebut
merupakan pusat peternakan ayam petelur di
Kabupaten Tabanan
HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini merupakan vaksinasi
ulangan pada ayam petelur umur 13 minggu
yang bertujuan untuk memberikan kekebalan
maksimal terhadap penyakit ND dan AI
menjelang masa produksi. Diharapkan ayam
petelur akan memiliki titer antibodi protektif
terhadap penyakit ND maupun AI untuk
mengantisipasi kasus lapangan. Hasil
penelitian rataan titer antibodi ND dan AI
pascavaksinasi vaksin kombinasi ND-AI
disajikan pada Tabel 1.
Jurnal Veteriner
Tabel 1. Rataan titer antibodi ND dan AI ayam
petelur (HI unit log 2) yang divaksinasi
dengan vaksinkombinasi ND-AI pra
dan pascavaksinasi
Waktu Rataan titer antibodi (HI unit log 2)
pengambilan
sampel (minggu) ND AI
0 2,27 +0,46a 1,27 --+ 1,67a
2 5,47 +0,51b 7,93 + 1,79b
3 7,00+ 0,38c 8,53 + 1,12b
4 8,73+ 0,46d 8,47 + 0,99b
Keterangan : Tanda huruf (superskrip) yang
berbeda menunjukkan berbeda
sangat nyata (P<0,01), sebaliknya
tanda huruf (superskrip) yang sama
menunjukkan tidak berbeda nyata
(P>0,05).
Hasil pemeriksaan titer antibodi ND dan
AI pada ayam petelur dua hari pravaksinasi
menunjukkan rataan titer antibodi (GMT)
terhadap ND adalah sebesar 2,27 HI unit log 2
dan GMT terhadap AI sebesar 1,27 HI unit log
2. Titer tersebut menandakan bahwa ayam
petelur tidak memiliki kekebalan yang protektif
terhadap penyakit ND dan AI dan harus segera
diberikan vaksinasi ulang.
Untuk mengetahui potensi vaksin ND dan
AI yang digunakan pada ayam petelur maka
dilakukan pemeriksaan titer antibodi terhadap
ND dan AI, pra dan pascavaksinasi. Pemerik-
saan pravaksinasi dilakukan pada dua hari
sebelum vaksinasi sedangkan pemeriksaan
pascavaksinasi dimulai minggu ke-2 hingga
minggu ke-4 pascavaksinasi. Respons imun
ayam petelur terhadap ND dan AI dengan vaksin
inaktif lebih lambat jika dibandingkan dengan
menggunakan vaksin aktif. Hal ini disebabkan
karena vaksin inaktif mengandung oil adjuvant
yang berfungsi sebagai depo antigen sehingga
antigen vaksin akan dilepaskan secara
perlahan-lahan. Oleh karena itu titer antibodi
maksimal pada ayam petelur terhadap vaksin
yang diberikan pada pemberian vaksin inaktif
mempunyai durasi yang lebih panjang jika
dibandingkan dengan vaksin aktif (Aiyer et al.,
2013).
Hasil pemeriksaan titer antibodi ayam
petelur dua minggu pascavaksinasi ND-AI
menunjukkan bahwa rataan titer antibodi ND
sebesar 5,47 HI unit log 2 dan rataan titer
antibodi AI sebesar 7,93 HI unit log 2. Minggu
261
Juni 2016 Vol. 17 No. 2 : 264-271
ke-3 pascavaksinasi, rataan titer antibodi ND
sebesar 7,00 HI unit log 2 dan titer antibodi AI
sebesar 8,53HI unit log 2. Minggu ke-4
pascavaksinasi, rataan titer antibodi ND sebesar
8,73 HI unit log 2 dan AI sebesar 8,47HI unit
log 2. Hasil pemeriksaan titer antibodi ND dan
AI pada ayam petelur pascavaksinasi
mengindikasikan bahwa vaksin ND-AI yang
digunakan dalam penelitian ini mampu memicu
pembentukan respons imun protektif dan waktu
vaksinasi juga sudah tepat. Hal ini ditandai
dengan terjadinya peningkatan titer antibodi
ND dan AI setiap minggu. Sebaliknya apabila
vaksinasi dilakukan pada saat titer antibodi
berada di atas titer 22 (titer antibodi > 4 HI unit
log 2) maka dikawatirkan akan terjadi
netralisasi yang akan berpengaruh buruk
terhadap hasil vaksinasi. Potensi vaksin juga
sangat ditentukan oleh kandungan virus vaksin
(ACFAF, 2012). Rataan titer antibodi ayam
petelur pra dan pascavaksinasi dengan vaksin
ND-AI disajikan pada Gambar 1.
Gambar 1. Grafik peningkatan titer antibodi ND
dan AI pada ayam petelur pra dan
pascavaksinasi ND-AI.
Titer Antibodi ND (HI unit log 2)
Titer Antibodi AI (HI unit log 2)
Gambar 1 menunjukkan bahwa titer
antibodi ND dan AI mengalami peningkatan
yang signifikan dimulai pada minggu ke-1
hingga minggu ke-4 pascavaksinasi. Pada
minggu ke-1 pascavaksinasi tidak dilakukan
pengambilan darah karena pada pemberian
vaksin inaktif umumnya menghasilkan respons
imun yang lambat. Namun tidak demikian
halnya dengan vaksinasi ulangan, berdasarkan
hasil penelitian dengan persamaan garis regresi,
titer antibodi ND dan AI pada minggu ke-1
pascavaksinasi mengalami peningkatan yang
GA. Yuniati Kencana, et al
signifikan. Peningkatan titer antibodi yang cepat
tersebut akibat adanya sel memori (hasil
vaksinasi terdahulu saat ayam di-booster umur
dua hari dan vaksinasi ulangan umur 10 hari).
Hal tersebut merupakan reaksi pengenalan
kembali oleh sel-sel memori yang masih ada
didalam tubuh ayam petelur terhadap imunogen
yang sama (Davidson et al., 2008). Pada
vaksinasi ulangan, titer antibodi yang dihasilkan
relatif lebih tinggi dan pembentukannya juga
lebih cepat dibandingkan dengan vaksinasi
pertama. Titer antibodi AI pada minggu ke-4
pascavaksinasi mulai mengalami penurunan
yang disebabkan oleh adanya waktu paruh
antibodi yakni waktu yang dibutuhkan titer
antibodi untuk berkurang setengahnya dari titer
antibodi awal. Selain penurunan secara alami,
penurunan titer antibodi juga terjadi akibat
tantangan agen penyakit di lapangan (ayam
terinfeksi secara alami).
Meskipun pada awalnya ada kekhawatiran
dalam menggunakan vaksin kombinasi yang
akan memengaruhi kemampuan vaksin dalam
memicu pembentukan titer antibodi protektif
(Cardoso et al., 2005), namun ternyata hasil
penelitian tentang vaksin kombinasi ND-AI pada
ayam SPF (uji laboratorium) terbukti tidak
menyebabkan kegagalan vaksinasi (Kencana et
al., 2015a). Pemeriksaan titer antibodi ayam
pascavaksinasi dibandingkan dengan titer
antibodi ayam pravaksinasi sangat diperlukan
untuk mengetahui keberhasilan program
vaksinasi dalam upaya pencegahan penyakit ND
dan AI (Kapczynski et al., 2013). Potensi vaksin
ND-AI dapat diketahui berdasarkan kenaikan
titer antibodi ayam setiap minggu sampai jangka
waktu tertentu sesuai dengan jenis vaksin yang
digunakan. Monitoring hasil vaksinasi sangat
perlu dilakukan untuk mengetahui respons
imun ayam terhadap vaksin yang diberikan.
Pemberian vaksin AI subtype H5N1, clade 2.1.3
ternyata masih dapat melindungi ayam
sebanyak 80% terhadap clade 2.3.2
(Dharmayanti et al., 2013). Hal tersebut
merupakan hal yang sangat menguntungkan
peternak ayam di Indonesia karena dapat
mencegah terjadinya infeksi virus AI lapang
clade 2.3.2 (Kusumastuti et al ., 2015).
Terjadinya perbedaan tingkat respons imun
ayam petelur terhadap vaksin kombinasi ND-
AI pascavaksinasi dapat dipengaruhi oleh
beberapa faktor di antaranya adalah kemung-
kinan karena perbedaan kemampuan antigenik
dari antigen vaksin yang digunakan, di
samping kualitas antigen, komposisi adjuvant
262
Jurnal Veteriner
yang digunakan juga mempengaruhi potensi
inaktif (Aiyer et al., 2013; Indriani and
Dharmayanti, 2013). Organisasi Dunia untuk
Kesehatan Hewan (World Animal Health
Organization/ WAHO) telah merekomendasikan
bahwa pemberian vaksin sebanyak 50=PD50 per
dosis dan batas keyakinan yang lebih rendah
minimal digunakan 35 PD50 per dosis. Dosis
yang ideal dari vaksin harus memberikan
perlindungan sebesar 90 sampai 100% pada
ayam (OIE, 2006). Dosis vaksin yang tepat
merupakan faktor utama dalam memberikan
keamanan pada peternakan ayam karena akan
menghasilkan kekebalan protektif terhadap
virus lapangan (Goetz et al., 2008). Salah satu
metode untuk menentukan efikasi potensi dari
vaksin adalah dengan menentukan dosis
protektif 50% (Protective Dose-50=PD50) yakni
indeks dari dosis protektif vaksin terhadap 50%
populasi pengujian. Nilai PD-50 dari vaksin ND-
AI yang digunakan dalam penelitian ini adalah
sebesar 102,33 PD50/dosis (Kencana et al., 2015b).
Penelitian terhadap titer antibodi ND dan
AI pascavaksinasi dengan vaksin ND-AI sangat
diperlukan untuk mengetahui potensi vaksin
dalam memicu kekebalan protektif pada ayam
petelur di lapangan. Upaya ini dilakukan guna
mencegah terjadinya wabah ND maupun AI di
Indonesia. Penelitian tentang vaksin bivalen
dengan teknik rekombinan ternyata sukses
mencegah munculnya kasus ND maupun AI
ganas (HPAI subtipe H5N1) dengan pemberian
satu dosis pada ayam (Lee et al., 2013).
Pembuatan vaksin ND dengan teknik
rekombinan perlu dipertimbangkan untuk
mendapatkan hasil vaksinasi yang maksimal
dan mampu pula melindungi terhadap penyakit
AI yang ganas (Lisette et al., 2012). Namun,
perlu diperhitungkan pula bahwa proses
pembuatan vaksin rekombinan membutuhkan
biaya produksi yang tinggi sehingga harga
vaksin menjadi relatif lebih mahal dibandingkan
dengan biaya pembuatan vaksin dengan virus
utuh. Dalam hal pemilihan jenis vaksin maka
selalu diperhitungan vaksin dengan kualitas
baik dan mampu melindungi ayam dari bahaya
penyakit ND dan AI dengan harga yang
terjangkau oleh peternak.
SIMPULAN
Hasil analisis titer antibodi ayam petelur
pascavaksinasi ND-AI pada kondisi lapang,
dapat disimpulkan bahwa secara serologi vaksin
Jurnal Veteriner
yang digunakan telah mampu memicu
pembentukan respons imun protektif (titer
antibodi berada di atas ambang protektif) yang
ditandai dengan terjadinya peningkatan titer
antibodi ND maupun AI setiap minggu.
Penelitian ini juga menyimpulkan bahwa waktu
pengambilan serum sangat berpengaruh
terhadap tingginya titer antibodi yang terbentuk.
SARAN
Vaksin ND-AI mampu merangsang
pembentukan titer antibodi yang bersifat
protektif terhadap ND dan AI jika vaksinasi
dilakukan pada saat titer antibodi ayam rendah
(di bawah 4 HI Unit log 2). Hal tersebut karena
titer antibodi yang tinggi dapat menyebabkan
kegagalan vaksinasi akibat netralisasi.
UCAPAN TERIMAKASIH
Penelitian ini merupakan Riset Unggulan
Udayana yang bekerjasama dengan PT Sanbio
Laboratories, Bogor. Penulis mengucapkan
terimakasih kepada pemerintah Indonesia dan
Direktur PT Sanbio Bapak Danni Ong beserta
stafnya atas segala fasilitas dan kerjasama
penelitian, serta semua pihak yang telah
membantu penulis dalam menyelesaikan
penelitian ini.
DAFTAR PUSTAKA
(ACFAF) ASEAN Cooperation in Food,
Agriculture and Forestry. 2012. Standards
for Animal Vaccines, Second Edition.
Livestock Publication Series No.2A.http://
www.asean.org/communities/asean-
economic community/category/publications-
3. Diakses tgl 21 November 2013.
Aiyer-Harini P, Ashok-Kumar HG, Kumar
GP,Shivakumar N. 2013. An Overview
ofImmunologic Adjuvants-A Review. J
Vaccines Vaccine 4(1): 1-4.
Alexander DJ 2007. An overview of the
epidemiology of avian influenza. Vaccine 25:
5637-5644.
Cardoso, WM. Aguiar, FJLC. Romão, JM.
Oliveira, WF. Salles, RPR. Teixeira, RSC,
263
Juni 2016 Vol. 17 No. 2 : 264-271
and Sobral, MHR. 2005. Effect of Associated
Vaccines on the Interference between
Newcastle Disease Virus and Infectious
Bronchitis Virus in Broilers. Brazilian
Journal of Poultry Sci 7(3): 181-184.
Darmawi dan Hambal M. 2011. Respons
Antibodi Serum Ayam Breakel Silver
Terhadap Vaksin Avian Influenza. Jurnal
Kedokteran Hewan 5(2): 63-66.
Davidson F, Kaspers B, Schat K. 2008. Avian
Imunologi. 1 st ed. Academic Press.
Alsevier. Hlm. 373-385.
Erganis O, Ucan US. 2003. Evaluation Of Three
Different Vaccination Regimes Against
Newcastle Disease in Central Anatolia. Turk
J Vet Anim Sci 27: 1065-1069.
(FOHI) Farmakope Obat Hewan Indonesia.
2007. Jilid I (Sediaan Biologik). Edisi 3.
Direktorat Jenderal Peternakan.
Departemen Pertanian Republik Indonesia.
Hlm 59-60, 79-80, 124-125.
Goetz SK, Spackman E, Hayhow C, and Swayne,
DE 2008. Assessment of Reduced Vaccine
Dose on Efficacy of an Inactivated Avian
Influenza Vaccine Against an H5N1 High-
Pathogenicity Avian Influenza Virus. J Appl
Poult Res 17: 145-150.
Indriani R, Dharmayanti INLP 2013. Studi
Efikasi Vaksin Bivalen AI Isolat Lokal
terhadap Beberapa Karakter Genetik Virus
AI subtipe H5N1. Jurnal Biologi Indonesia
9(1): 21-30.
Kandun IN, Tresnaningsih E, Purba WH, Lee
V, Samaan G, Harun S, Soni E,Septiawati
C, Setiawati T, Sariwati E, and Wandra T,
2008. Factors associated with case fatality
of human H5N1 virus infections in
Indonesia: a case series. The Lancet 372:
744-749.
Kapczynski DR, Afonso CL, Miller PJ. 2013.
Immune responses of poultry to Newcastle
disease virus. Developmental and
Comparative Immunology. J Elsevier 41:
447-453
[Kementan] Kementerian Pertanian 2013.
Keputusan Menteri Pertanian No.4026/
Kpts/OT.140/4/2013. Tentang Penetapan
Jenis Penyakit Hewan Menular Strategis,
Jakarta.www.keswan.ditjennak.pertanian.go.id.
Diakses tgl 2 Mei 2016.
GA. Yuniati Kencana, et al
Kencana GAY, Kardena IM, Mahardika IGNK.
2012 a. Peneguhan Diagnosis Penyakit
Newcastle Disease Lapang pada Ayam
Buras di Bali Menggunakan Teknik RT-
PCR. J Kedokteran Hewan 6(1): 28-31.
Kencana GAY, Mahardika IGNK, Suardana
IBK, Mantik Astawa IN, Krisna Dewi NM,
Narendra Putra GN. 2012b. Pelacakan
Kasus Flu Burung Pada Ayam dengan
Reverse Trancriptase Polymerase Chain
Reaction. J Veteriner 13(3): 303-308.
Kencana GAY, Suartha IN , Mesakh PS,
Handayan AN, Steffi Ong, Syamsidar,
Kusumastuti A. 2015a. Respons Antibodi
terhadap Penyakit Tetelo pada Ayam yang
Divaksin Tetelo dan Tetelo-Flu Burung. J
Veteriner 16(2): 283-290.
Kencana GAY, Suartha IN, Robertus Tamur,
Handayani AN. 2015b. Protective Dose
50Vaksin ND Inaktif Tunggal dan
Kombinasi ND-AI pada Ayam SPF Pasca
Tantangan. Disampaikan pada Seminar
Nasional dan Teknologi (Senastek II)
Universitas Udayana 2015. Tanggal 29-
30 Oktober 2025, di Kuta, Badung, Bali.
Kusumastuti, Syamsidar, Zaharia Paderi,
Handayani AN, Kencana GAY. 2015.
Identifikasi Secara Serologi Galur Virus Flu
Burung Subtipe H5N1 Clade 2.1.3 dan
Clade 2.3.2 pada Ayam Petelur. J
Veteriner16 (3): 371-382
Lee DH, Park JK, Kwon JH, Yuk SS, Erdene-
Ochir TO, Jang YH, Seong BL, Lee JB, Park
SY, Choi IS, Song CS. 2013. Efficacy of
Single Dose of a Bivalent Vaccine Containing
Inactivated Newcastle Disease Virus and
Reassortant Highly Pathogenic Avian
Influenza H5N1 Virus against Lethal HPAI
and NDV Infection in Chickens. Plos One.
Vol. 8. Issue 3. e58186. Hlm. 1-5.
Cornelissen LAHM, de Leeuw OS,Tacken MG,
Klos HC, Robert P, de Vries RP, de Boer-
Luijtze EA, van Zoelen-Bos DJ, Rigter A,
Rottier PJM, Moormann RJM, de Haan
CAM. 2012. Protective Efficacy of Newcastle
264
Jurnal Veteriner
Disease Virus Expressing Soluble Trimeric
Hemagglutinin against Highly Pathogenic
H5N1 Influenza in Chickens and Mice. Plos
One 7(8. e44447):1-11.
Mulyadi B dan Prihatini. 2005. Diagnosis
Laboratorik Flu Burung (H5N1). Telaah
Pustaka. Indonesian Journal of Clinical
Pathology and Medical Laboratory 12(2):
71-81.
Nurcholis, Hastuti Dewi, Sutiono Barep. 2009.
Tatalaksana Pemeliharaan Ayam Ras
Petelur Periode Layer di Populer Farm
Desa Kuncen Kecamatan Mijen Kota
Semarang. Mediagro 5(2): 38-49.
(OIE) Office International des Epizooties. 2006.
Newcastle disease. Dalam Manual of
Diagnostic Tests and Vaccines for
Terrestrial Animals. World Org. Anim.
Health, Paris, France.www.oie.int.
Hlm. i–iii . Diakses tgl 2 Mei 2016
(OIE) Office International Des Epizooties. 2012.
Manual of Diagnostic Test and Vaccines for
Terresterial Animal Chapter.Capter 2.3.14.
Newcastle Disease. Hlm.1-9 www.oie.int.
Diakses tgl 2 Mei 2016.
(Permentan) Peraturan Menteri Pertanian.
2008. Pedoman Penataan Kompartemen dan
Penataan Zona Usaha Perunggasan. Nomor
28/Permentan/OT.140/5/2008.
www.perundangan.pertanian.go.id. Diakses
tgl 2 Mei 2016.
Sudarisman. 2009. Pengaruh Perkembangan
Sistem Produksi Ayam terhadap Perubahan
Genetik dan Biologik Virus Newcastle
Disease. Wartazoa 9(3): 1
Swayne DE, and Suarez DL, 2000. Highly
pathogenic avian influenza. Rev Sci Tech
19: 463-482.
Wakawa AM, Abdu PA, Umoh JU, Lawal S, and
Miko RB. 2009. Serological evidence of
mixed infections with avian influenza and
Newcastle disease in village chickens in
Jigawa State, Nigeria. Veterinarski Arhiv
79(2): 151-155.