UJI AKTIVITAS ANTIKANKER KOMBINASI EKSTRAK

ETANOL UMBI BAWANG DAYAK (Eleutherine americana

Merr.) DAN BIJI SIRSAK (Annona muricata) DENGAN
METOTREKSAT TERHADAP SEL T47D

USULAN SKRIPSI

Oleh:

ERIKA NUUR ANISA PUTRI

K100140168

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2017

i
 PENGESAHAN USULAN SKRIPSI

UJI AKTIVITAS ANTIKANKER KOMBINASI EKSTRAK

ETANOL UMBI BAWANG DAYAK (Eleutherine americana
Merr.) DAN BIJI SIRSAK (Annona muricata) DENGAN
METOTREKSAT TERHADAP SEL T47D

Oleh:

Erika Nuur Anisa Putri

K100140168

Telah disetujui dan disahkan pada

Hari :
Tanggal :

Pembimbing

(Dr. Haryoto, M. Sc.)

ii
 DAFTAR ISI
Halaman

HALAMAN JUDUL...................................................................................... i
HALAMAN PENGESAHAN ....................................................................... ii
DAFTAR ISI ................................................................................................. iii
A. JUDUL USULAN SKRIPSI ............................................................. 1
B. LATAR BELAKANG MASALAH .................................................. 1
C. RUMUSAN MASALAH .................................................................. 2
D. TUJUAN PENELITIAN ................................................................... 2
E. TINJAUAN PUSTAKA ................................................................... 3
1. Bawang Dayak (Eleutherine americana Merr.) .......................... 3
a. Klasifikasi tanaman Bawang Dayak ..................................... 3
b. Deskripsi Bawang Dayak ....................................................... 3
c. Kandungan Bawang Dayak .................................................... 4
2. Sirsak (Annona muricata) ........................................................... 4
a. Klasifikasi tanaman Sirsak .................................................... 4
b. Deskripsi tanaman Sirsak ...................................................... 5
c. Kandungan tanaman Sirsak ..................................................... 5
3. Kanker ......................................................................................... 6
4. Kanker Payudara ......................................................................... 7
5. Sel T47D ..................................................................................... 8
6. Metotreksat .................................................................................. 8
7. MTT Assay ................................................................................... 9
F. LANDASAN TEORI ........................................................................ 10
G. HIPOTESIS ....................................................................................... 11
H. METODE PENELITIAN .................................................................. 12
1. Kategori dan Rancangan Penelitian ........................................... 12
2. Variabel Penelitian ...................................................................... 12
a. Variabel Bebas ..................................................................... 12
1) Tempat asal sampel ....................................................... 12

iii
 2) Konsentrasi ekstrak etanol bawang dayak (Eleutherine
americana Merr.), konsentrasi ekstrak etanol biji sirsak
(Annona muricata), konsentrasi metotreksat ................ 12
b. Variabel Tergantung ............................................................. 12
c. Variabel Terkendali .............................................................. 13
1) Sel Kanker ...................................................................... 13
2) Media Kultur .................................................................. 13
3) Metode Uji Sitotoksik ..................................................... 13
4) Suhu Inkubasi ................................................................. 13
3. Alat dan Bahan ........................................................................... 13
4. Tempat Penelitian ....................................................................... 14
5. Rencana Penelitian ..................................................................... 14
a. Pengumpulan Bahan .............................................................. 14
b. Identifikasi Bawang Dayak (Eleutherine americana Merr.) . 15
c. Identifikasi Sirsak (Annona muricata) .................................. 15
d. Penentuan Golongan Senyawa dengan KLT ......................... 15
e. Pembuatan Larutan Uji .......................................................... 16
f. Uji Sitotoksik ......................................................................... 16
1) Sterilisasi ........................................................................ 16
2) Sterilisasi Laminar Air Flow (LAF) ............................... 16
3) Pertumbuhan Sel ............................................................. 16
4) Penggantian Media ......................................................... 17
5) Pemanenan Sel ............................................................... 17
6) Uji Aktivitas Sitotoksik dengan MTT Assay ................... 17
6. Analisis Data .............................................................................. 18
7. Uji Kombinasi ............................................................................. 19
I. JADWAL PENELITIAN .................................................................. 20
J. DAFTAR PUSTAKA ....................................................................... 21
K. LAMPIRAN ....................................................................................... 23

iv
 1

A. JUDUL USULAN SKRIPSI

Uji Aktivitas Antikanker Kombinasi Ekstrak Umbi Bawang Dayak (Eleutherine
americana Merr.) dan Biji Sirsak (Annona muricata) dengan Metotreksat terhadap
Sel T47D
B. LATAR BELAKANG MASALAH
Kanker payudara merupakan salah satu tipe kanker yang paling banyak
menyebabkan kematian di dunia setelah kanker paru-paru, kanker perut, kanker
hati, dan kanker usus (Jemal et al., 2010). Kanker payudara terjadi pada 26 dari
100.000 wanita di Indonesia, diikuti kanker servik dengan kejadian pada 16 dari
100.000 wanita (Depkes R.I, 2013). Sel kanker payudara yang sering digunakan
dalam penelitian adalah sel T47D. Sel T47D merupakan jenis sel kanker yang
memiliki sifat resisten terhadap mekanisme apoptosis (mekanisme fisiologis dari
reduksi suatu sel, bertujuan untuk memperbaiki jaringan dan membuang sel-sel
rusak yang sifatnya berbahaya bagi tubuh) (Ruddon, R. W., 2007).
Bawang dayak (Eleutherine americana Merr.) diketahui memiliki
kandungan senyawa seperti eleutherine, elecanacine, eleutherol, dan
eleutherinone (Hara et al., 1997). Tanaman bawang dayak sering digunakan
sebagai obat tradisional pada penyakit jantung, inflamasi, perdarahan, tumor, dan
terutama digunakan sebagai pengobatan kanker payudara pada masyarakat borneo
(kalimantan) (Kuntorini and Nugroho, 2009). Penelitian telah dilakukan mengenai
uji penghambatan siklus dan apoptosis sel terhadap fraksi non polar, semipolar
dan polar dari ekstrak umbi bawang dayak terhadap sel kanker T47D. Hasil
penelitian menunjukkan bahwa fraksi dari ekstrak umbi bawang dayak yang
memiliki aktivitas sitotoksik paling tinggi terhadap sel T47D adalah fraksi
semipolar dengan nilai IC50 147,124 µg/mL (Fitri et al., 2014).
Tanaman sirsak (Annona muricata) dikenal sebagai pohon obat yang
memiliki khasiat untuk menyembuhkan berbagai penyakit yang sifatnya ringan
seperti gatal-gatal pada kulit hingga penyakit berat seperti tumor
 2

dan kanker (Ardraviz, 2012). Penelitian lain menunjukkan bahwa tanaman sirsak
(Annona muricata L.) mengandung Annonaceous acetogenins yang memiliki
aktivitas sebagai antitumor, antiparasit, pestisida, antiprotozoa, antifeedant
(antiserangga) dan aktivitas antimikroba (Taylor, 2002). Biji sirsak memiliki
aktivitas antikanker yang dibuktikan dengan nilai IC50 pada sel T47D sebesar
20,36 ± 1,58 µg/mL (Arifianti et al., 2014) dan 87,711 µg/mL (Riyan, 2013).
Metotreksat merupakan senyawa yang secara luas digunakan untuk
pengobatan kanker terutama pada wanita yang mengalami kanker pada tahap
metastasis koriokarsinoma (Hertz et al., 1961). Metotreksat bebas (Free MTX)
setelah diuji aktivitas antikanker pada sel T47D menunjukkan nilai IC50 yaitu
sebesar 78.23 ± 3.12 nM (Taheri et al., 2011). Berdasarkan latar belakang di atas
maka perlu dilakukan penelitian terhadap aktivitas antikanker kombinasi ekstrak
etanol umbi bawang dayak (Eleutherine americana Merr.) dan biji sirsak (Annona
muricata) dengan metotreksat pada sel T47D.

C. RUMUSAN MASALAH
Berdasarkan latar belakang di atas, rumusan masalah dari penelitian ini adalah:
1. Berapa nilai IC50 dari ekstrak etanol umbi bawang dayak (Eleutherine
americana Merr.) dengan metotreksat ?
2. Berapa nilai IC50 dari ekstrak etanol biji sirsak (Annona muricata) dengan
metotreksat ?
3. Bagaimana hasil fitokimia ekstrak etanol umbi bawang dayak dan biji sirsak ?

D. TUJUAN PENELITIAN
Berdasarkan latar belakang di atas, maka tujuan dari penelitian ini adalah sebagai
berikut:
1. Mengetahui nilai IC50 dari ekstrak etanol umbi bawang dayak (Eleutherine
americana Merr.) dengan metotreksat.
2. Mengetahui nilai IC50 dari ekstrak etanol biji sirsak (Annona muricata) dengan
metotreksat.
3. Mengetahui fitokimia ekstrak etanol umbi bawang dayak dan biji sirsak.
 3

E. TINJAUAN PUSTAKA
1. Bawang Dayak (Eleutherine americana Merr.)
a. Klasifikasi tumbuhan Bawang Dayak
Taksonomi Bawang Dayak (Eleutherine americana Merr.) dapat dijelaskan
sebagai berikut: (Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Jilid II, 2001)
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Subdivisi : Angiospermae
Kelas : Monocotyledonae
Ordo : Liliales
Famili : Liliaceae
Genus : Eleutherine
Spesies : Eleutherine americana Merr. ex K. Heyne
Sinonim dari E. americana Merr.: Eleutherine bulbosa (Mill.); Eleutherine
palmifolia (Merr.), Eleutherine anomala Herb.; Eleutherine longifolia Gagnep.;
Eleutherine plicata (Sw.) Herb.; Eleutherine plicata Herb. (Kew, 2015).

b. Deskripsi
Eleutherine americana Merr. memiliki habitat didaerah pegunungan pada
ketinggian sekitar 600-2000 m dpi dan kadang ditemukan dalam jumlah besar di
pinggir-pinggir jalan yang berumput maupun di dalam kebun-kebun teh, kina dan
karet. Eleutherine americana Merr. merupakan tanaman herba semusim,
merambat, memiliki tinggi 30-40 cm dengan batang semu dan membentuk umbi.
Tanaman ini memiliki memiliki ciri daun tunggal, bentuk pita, ujung dan pangkal
runcing, tepi rata, berwarna hijau. Bunga majemuk, tumbuh pada bagian ujung
batang, panjang tangkai ± 40 cm, berbentuk silindris, terdiri atas dua daun
kelopak, berwarna hijau kekuningan, mahkota terdiri dari empat daun mahkota,
lepas, panjang ± 5 mm, berwarna putih, memiliki 4 benang sari, kepala sari
berwarna kuning, putik berbentuk jarum, panjangnya ± 4 mm, berwarna putih
kekuningan. Bawang dayak memiliki jenis akar serabut dan berwarna coklat muda
 4

dengan umbi berlapis, berwarna merah, dan berbentuk bulat telur yang
memanjang (Badan POM RI, 2011).

c. Kandungan
Umbi bawang sabrang atau sering dikenal sebagai bawang dayak atau
bawang hantu (ghost onion) merupakan tanaman khas dari Kalimantan Tengah.
Tanaman ini sering digunakan sebagai obat tradisional oleh masyarakat dayak
pada pengobatan beberapa macam penyakit seperti kanker payudara dan kolon,
hipertensi, diabetes melitus, hiperkolesterol dan stroke (Galingging, 2009).
Penelitian telah menunjukkan bahwa Eleutherine bulbosa (Mill) Urb.
mengandung naftokuinon dan derivatnya seperti elecanacine, eleutherine,
eleutherol, dan eleuthernon (Hara et al., 1997). Naftokuinon memiliki aktivitas
biologis sebagai antimikroba, antivirus, antiinflamasi, antiparasitik. Naftokuinon
juga memiliki aktivitas antikanker dan antioksidan yang biasanya dapat
ditemukan dalam bentuk glikosida pada sel vakuola tumbuhan (Babula et al.,
2005). Kandungan kimia yang terdapat dalam bawang dayak adalah flavonoid dan
polifenol (Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Jilid II, 2001).

2. Sirsak (Annona muricata)

a. Klasifikasi tanaman Sirsak (Annona muricata)
Taksonomi tumbuhan sirsak dapat dijelaskan sebagai berikut: (Badan Penelitian
dan Pengembangan Kesehatan Jilid II, 2001)
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Subdivisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledonae
Ordo : Ranunculales
Famili : Annonaceae
Genus : Annona
Spesies : Annona muricata L.
 5

b. Deskripsi
Annona muricata memiliki ciri habitus yaitu pohon atau perdu dengan
tinggi ± 8 m. Batangnya berkayu, bulat, bercabang, berwarna coklat kotor.
Memiliki ciri daun tunggal, bulat telur atau lanset, ujung tumpul, pangkal
meruncing, tepi rata, panjang 6-17 cm, lebar 2 ½ - 7 ½ cm, pertulangan menyirip,
dengan warna hijau keputih-putihan hingga hijau. Bunganya tunggal, bentuk
lonceng, kelopak segi tiga, kecil, benang sari banyak, putih, tangkai sari panjang,
kepala putik menyatu, bakal buah banyak dan mudah rontok, mahkota berdaging
tebal, panjang 2-2 ½ cm dengan warna putih kekuningan. Buah dari Annona
muricata merupakan buah buni, berbentuk majemuk bulat, berbongkol-bongkol,
diameter 5-10 cm, dilapisi lilin dan berwarna hijau. Ciri-ciri biji Annona muricata
adalah berbentuk bulat telur berwarna hitam. Memiliki akar tunggang, berbentuk
bulat dan berwarna coklat muda (Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan
Jilid II, 2001).

c. Kandungan
Tumbuhan sirsak (Annona muricata) merupakan salah satu jenis tumbuhan
yang dapat digunakan sebagai obat-obatan. Tumbuhan sirsak dapat digunakan
sebagai pengobatan pada berbagai penyakit seperti gatal-gatal pada kulit hingga
tumor dan kanker. Bagian tumbuhan seperti buah, daun, akar, biji, bunga serta
kulit batang merupakan bagian dari tumbuhan sirsak yang dapat digunakan
sebagai obat (Ardraviz, 2012). Kandungan kimia yang terdapat dalam buah sirsak
adalah alkaloid, saponin, flavonoid, polifenol dan steroid tak jenuh serta steroid
bebas (Arifianti et al., 2014).
Secara umum buah sirsak mengandung banyak karbohidrat, terutama
fruktosa. Biji sirsak bersifat racun dan dapat berfungsi sebagai insektisida alami,
sama seperti biji srikaya. Daun sirsak memiliki kemampuan dalam menghambat
sel kanker dengan menginduksi apoptosis serta fungsi lainnya seperti antidiare,
analgetik, antidisentri, antiasma, anthelmentic, dilatasi pembuluh darah, stimulasi
pencernaan, dan mengurangi depresi (Mc Laughlin, 2008).
 6

3. Kanker
Kanker (neoplasma, tumor, atau malignansi) merupakan kelompok penyakit
yang memiliki karakteristik pertumbuhan dan penyebaran sel abnormal secara
tidak terkontrol. Metastase tumor menuju ke tempat yang jauh umumnya
memiliki efek yang lebih besar dibandingkan tumor primer pada kejadian
komplikasi dan kualitas hidup serta kematian pasien. Sel kanker tidak merespon
proses normal yang mengatur pertumbuhan, fungsi dan kelangsungan hidup sel,
dan juga tidak dapat membawa fungsi fisiologis dari bagian diferensiasi normal
suatu sel (pematangan sel).
Sel kanker biasanya dideskripsikan sebagai sel yang memiliki aktivitas
diferensiasi yang rendah dan belum matang. Karakteristik lain dari sel kanker
yaitu kemampuan dalam menyerang jaringan normal yang berdekatan dan
berubah dari tumor primer (metastasize) dan berjalan melewati darah atau limfe
untuk membentuk tumor baru (metastase) di tempat yang jauh. Sel kanker
memiliki kemampuan dalam merangsang pembentukan pembuluh darah baru
(angiogenesis) dan pembelahan sel secara terus-menerus dapat berkonstribusi
dalam pertumbuhan dan kelangsungan hidup sel yang berjalan terus (Allbredge et
al., 2013).
Metastasis adalah proses pertumbuhan dari kanker yang sama dan
ditemukan tidak jauh dari tumor primer. Kanker biasanya menyebar melalui dua
jalur: hematogenous (melalui aliran darah) atau melalui limfatik (pengaliran
melalui nodus limfa terdekat). Sel berbahaya yang bergerak dari tumor primer
menemukan lingkungan yang sesuai untuk tumbuh. Sel yang berbahaya telah
dipercaya dalam mensekresikan mediator yang merangsang pembentukan
pembuluh darah untuk tumbuh dan persediaan oksigen, proses tersebut merupakan
angiogenesis. Lokasi metastasis umumnya terdapat pada otak, tulang, paru-paru,
dan hati. Maka dari itu, pasien perlu sadar dan diberikan edukasi bahwa sel kanker
payudara dapat melakukan metastasize ke otak, sehingga kemungkinan seorang
individu tidak memiliki kanker otak dan kanker payudara namun sel kanker
payudara yang melakukan metastasis ke otak (DiPiro et al., 2008).
 7

4. Kanker Payudara
Karsinoma payudara merupakan jenis kanker yang ganas, berasal dari sel
epitel yang melapisi duktus atau lobulus (Mcdonald, et al., 1997). Payudara
tersusun atas berbagai macam struktur yang berbeda termasuk lemak, otot, saluran
dan lobulus. Lobulus berasal dari jaringan glandular yang berbentuk seperti
formasi jari untuk membentuk lobulus dari sel epitel berlapis dua. Saluran yang
terhubung dengan lobulus merupakan saluran penseksresi susu menuju puting
susu. Kanker payudara diartikan berdasarkan dimana tumor berasal. Dua macam
tipe histologi kanker payudara yang paling umum adalah karsinoma duktal dan
lobular. Tumor duktal juga dapat diklasifikasikan sebagai invasive ductal
carcinoma apabila tumor menyerang melalui dasar membran dari saluran, atau
ductal carcinoma in situ (DCIS), apabila tidak menyerang dasar membran (DiPiro
et al., 2008).
Menurut ASCO (American Society of Clinical Oncology) tahun 2003,
pasien yang memiliki faktor terhadap predisposisi karsinoma payudara adalah:
a. Usia diatas 30 tahun
b. Usia diatas 25 tahun yang anggota keluarganya: ibu, saudara perempuan ibu,
saudara perempuan satu ibu pernah menderita kanker payudara
c. Tidak menikah
d. Menikah tetapi tidak pernah melahirkan anak
e. Melahirkan anak pertama sesudah umur 35 tahun
f. Tidak pernah menyusui anak
g. Mengalami trauma berulang kali pada payudara
h. Mengalami lesi fibrokistik yang luas
i. Menarche pada usia yang sangat muda
j. Mengalami radiasi sebelumnya pada payudara
k. Cenderung ke obesitas
l. Pernah operasi pada payudara atau alat reproduksi
m. Pernah mendapatkan terapi hormonal yang lama
n. Beban mental/ stres yang berat
o. Usia menopause lebih dari 55 tahun
 8

p. Mempunyai karsinoma payudara kontralateral

q. Diet tinggi lemak

5. Sel T47D
Sel T47D merupakan suatu continuous cell line yang berasal dari isolasi
terhadap jaringan tumor duktal payudara seorang wanita dengan usia 54 tahun.
Pada penelitian in vitro, continuous cell line sering digunakan karena
penangannya yang mudah, memiliki kemampuan replikasi tidak terbatas,
memiliki homogenitas tinggi serta mudah diganti dengan frozen stock. Sel T47D
dikultur pada media DMEM + 10% FBS + 2 mM L-Glutamin lalu di inkubasi
pada inkubator CO2 5% dengan suhu 37 oC. Jenis sel kanker payudara T47D
mengekspresikan protein p-53 yang mengalami mutasi. Missence mutation terjadi
pada residu 194 (pada zinc-binding domain, L2), sehingga p-53 tidak dapat
melakukan ikatan terhadap response element yang terdapat pada DNA. Kejadian
tersebut menyebabkan berkurang bahkan hilangnya kemampuan protein p-53
untuk melakukan regulasi siklus sel. Sel T47D merupakan jenis sel kanker
payudara ER/PR-Positif. Proliferasi dari sel T47D dapat meningkat dengan
adanya induksi esterogen eksogen (CCRC, 2017).

6. Metotreksat
Metotreksat merupakan senyawa yang secara luas digunakan untuk
pengobatan kanker terutama pada wanita yang mengalami kanker pada tahap
metastasis koriokarsinoma (Hertz et al., 1961). Metotreksat merupakan golongan
obat antimetabolit yang bekerja dengan cara masuk dalam materi pembentuk inti
sel baru atau berikatan dengan berbagai enzim vital dalam sel secara tetap
sehingga mencegah proses pembelahan sel yang normal (Badan POM RI, 2008).
Indikasi metotreksat yang tertera pada label adalah sebagai pengobatan pada
neoplasma tropoblastik; leukimia; psoriasis; rheumatoid arthritis (RA), termasuk
polyarticular-course juvenile rheumatoid arthritis (JRA); karsinoma pada
payudara, kepala dan leher, serta paru-paru; osteosarkoma; sarkoma pada jaringan
lunak; karsinoma pada saluran gastrointestinal, esofagus, testis; limfoma.
 9

Metotreksat merupakan antimetabolit folat yang memiliki mekanisme

menghambat sintesis DNA. Ikatan metotreksat dengan dihydrofolate reduktase
yang takterbalikkan, menghambat pembentukan folat yang tereduksi, dan
thymidylate sintase, menghasilkan efek penghambatan pada sintesis purin dan
thymidylic acid. Metroteksat bersifat spesifik terhadap siklus sel terutama fase S
pada siklus sel (Aberg et al., 2008).

7. MTT Assay
Microculture Tetrazolium Salt (MTT) Assay merupakan suatu metode yang
memiliki mekanisme dalam mereduksi garam kuning tetrazolium MTT (3-(4,5-
dimetil thiazol-2il)-2,5-difeniltetrazolium bromid) oleh sistem reduktase. Rantai
respirasi di dalam mitokondria sel-sel yang hidup mengandung suksinat
tetrazolium yang membentuk kristal formazan berwarna ungu dan tidak larut air.
Reagen stopper ditambahkan untuk melarutkan kristal ungu formazan yang
kemudian diukur absorbansinya menggunakan ELISA reader. Intensitas warna
ungu yang terbentuk adalah proporsional atau setara dengan jumlah sel hidup.
Apabila intensitas warna ungu yang dihasilkan semakin besar, maka jumlah sel
yang hidup semakin banyak (Meiyanto et al., 2017).
 10

F. LANDASAN TEORI
Penelitian telah dilakukan untuk menetapkan efek sitotoksik dari bawang
sabrang [(Eleutherine bulbosa (Mill)) sinonim dari Eleutherine americana Merr]
dan siklus sel. Ekstraksi bawang sabrang dilakukan dengan metode maserasi
dengan menggunakan beberapa solven yaitu n-heksana, etil asetat dan etanol.
Ekstrak kemudian diujikan pada sel T47D menggunakan metode MTT dan siklus
sel dengan menggunakan metode flowcytometry. Uji sitotoksik pada penelitian
mengenai efek pada inhibisi siklus dan apoptosis sel pada ekstrak bawang sabrang
(Eleutherine bulbosa (Mill.) Urb.) pada sel kanker payudara menghasilkan nilai
IC50 untuk ekstrak dengan pelarut n-heksana, etil asetat dan etanol secara berturut-
turut yaitu 265,023 µg/mL; 147,124 µg/mL dan 3782,29 µg/mL. Berdasarkan
penelitian tersebut maka dapat disimpulkan bahwa ekstrak bawang sabrang/dayak
dengan pelarut etil asetat memiliki aktivitas antikanker paling tinggi dengan nilai
IC50 147,124 µg/mL (Fitri et al., 2014). Kandungan kimia yang terkadung dalam
bawang dayak adalah flavonoid dan polifenol ((Badan Penelitian dan
Pengembangan Kesehatan Jilid II, 2001).
Penelitian terhadap efek sitotoksik dari ekstrak biji Annona muricata
terhadap sel kanker mamalia T47D, HeLa, WiDr dan Raji telah dilakukan dengan
menggunakan metode MTT assay. Parameter yang digunakan dalam menilai efek
sitotoksik dari ekstrak biji sirsak adalah nilai IC50. Hasil dari penelitian
menunjukkan bahwa ekstrak biji A.muricata memiliki aktivitas sitotoksik dengan
nilai IC50 adalah 20,36 ± 1,58 µg/mL; 8,91 ± 4,49 µg/mL; 40,06 ± 3,12 µg/mL
dan 11,24 ± 4,53 µg/mL untuk sel T47D, HeLa, WiDr dan Raji secara berturut-
turut. Berdasarkan data di atas maka dapat disimpulkan bahwa ekstrak biji sirsak
memiliki efek sitotoksik terhadap sel T47D dengan nilai IC50 adalah 20,36 ± 1,58
µg/mL (Arifianti et al., 2014). Penelitian lain juga telah dilakukan oleh Riyan
(2013) mengenai sitotoksisitas fraksi semipolar ekstrak etanol biji sirsak (Annona
muricata L.) terhadap sel T47D dan profil kromatrogramnya menunjukkan bahwa
ekstrak etanol biji sirsak mempunyai aktivitas antikanker dengan nilai IC50
sebesar 87,711 µg/mL (Riyan, 2013). Kandungan kimia yang terdapat dalam biji
 11

sirsak berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Arifianti (2014) adalah

alkaloid, saponin, flavonoid, polifenol, steroid tak jenuh dan steroid bebas.
Taheri et al. (2011) telah membuat penelitian mengenai “Enhanced Anti-
Tumoral Activity of Methotrexate-Human Serum Albumin Conjugated
Nanoparticles by Targeting with Luteinizing Hormone-Releasing Hormone
(LHRH) Peptide”. Nilai IC50 didapatkan dari pengujian terhadap metotreksat
bebas, nanopartikel MTX-HSA, nanopartikel LHRH targeted MTX-HSA rendah,
sedang dan tinggi pada LHRH receptor positive sel T47D dan LHRH receptor
negative sel SKOV3 setelah 24 jam. Hasil penelitian menunjukkan bahwa
metotreksat tunggal (ditunjukkan oleh free MTX) memiliki aktivitas sitotoksik
terhadap sel T47D dengan nilai IC50 adalah 78.23 ± 3.12 nM.

G. HIPOTESIS
1. Kombinasi ekstrak etanol bawang dayak (Eleutherine americana Merr.),
ekstrak etanol biji sirsak (Annona muricata) dan obat antikanker Metotreksat
memiliki aktivitas antikanker terhadap sel T47D.
2. Golongan senyawa yang terkandung dalam ekstrak etanol bawang dayak
adalah flavonoid dan polifenol.
3. Golongan senyawa yang terkandung dalam ekstrak etanol biji sirsak adalah
senyawa alkaloid, saponin, flavonoid, polifenol, steroid tak jenuh dan steroid
bebas.
 12

H. METODE PENELITIAN
1. Kategori dan Rancangan Penelitian
Penelitian mengenai uji aktivitas antikanker kombinasi ekstrak umbi bawang
dayak (Eleutherine americana Merr.) dan biji sirsak (Annona muricata) dengan
metotreksat terhadap sel T47D menggunakan metode post test only with control
group.

2. Variabel Penelitian
a. Variabel Bebas
Variabel bebas yang digunakan dalam penelitian uji aktivitas antikanker adalah:
1) Tempat asal sampel
Sampel umbi bawang dayak (Eleutherine americana Merr.) diperoleh dari
daerah Kalimantan Tengah, sampel biji sirsak (Annona muricata) di peroleh
dengan cara pengumpulan biji sirsak dari para penjual jus di kawasan kampus
Universitas Muhammadiyah Surakarta dan sekitarnya, dan sampel metotreksat
dibeli dari Instalasi Farmasi Rumah Sakit dr. Moewardi.
2) Konsentrasi ekstrak etanol bawang dayak (Eleutherine americana Merr.),
konsentrasi ekstrak etanol biji sirsak (Annona muricata), konsentrasi
metotreksat
Ekstrak etanol bawang dayak dan ekstrak etanol biji sirsak di buat menjadi 3 seri
konsentrasi, yaitu; 250; 125 dan 62,5 µg/mL. Obat antikanker metotreksat dibuat
juga menjadi 3 buah seri konsentrasi, yaitu 200; 100 dan 50 µg/mL.

b. Variabel Tergantung
Variabel tergantung pada penelitian terhadap uji aktivitas antikanker kombinasi
ekstrak umbi bawang dayak (Eleutherine americana Merr.) dan biji sirsak
(Annona muricata) dengan metotreksat terhadap sel T47D adalah nilai IC50 yaitu
konsentrasi dari ekstrak maupun obat yang dapat membunuh 50% populasi sel
kanker T47D.
 13

c. Variabel Terkendali
Variabel terkendali pada penelitian uji aktivitas antikanker kombinasi ekstrak
umbi bawang dayak (Eleutherine americana Merr.) dan biji sirsak (Annona
muricata) dengan metotreksat terhadap sel T47D adalah:
1) Sel Kanker
Sel kanker yang digunakan untuk pengujian aktivitas antikanker dari ekstrak
etanol umbi bawang dayak, ekstrak etanol biji sirsak dan metotreksat adalah sel
kanker payudara T47D yang diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi Farmasi,
Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta.
2) Media Kultur
Media kultur yang digunakan pada uji aktivitas antikanker ini adalah media
RPMI 1640.
3) Metode Uji Sitotoksik
Metode yang digunakan pada uji aktivitas antikanker ini adalah metode MTT.
4) Suhu Inkubasi
Suhu inkubasi yang digunakan pada uji aktivitas antikanker ini adalah 37 oC.

3. Alat dan Bahan

a. Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah sebagai berikut:
blender, peralatan maserasi, rotary evaporator, penangas air, tangki nitrogen cair,
autoclave, pipet pasteur, steril mikroskop fase kontras (Olympus Japan),
sentrifuge Sigma 3K12 (B. Braun Biotech International), inkubator CO2
(Heraceus), Elisa reader (ELX 800 Bio Tech), hemisitometer (New Bauer),
tabung konikal steril (nunclone), scraper, tissue culture flask (nunclone), ampul,
blue tape steril, yellow tape steril, water bath EMTD-204, botol duran (100 mL
dan 500 mL), cryotube, Laminar Air Flow (Nuaire), pH meter (Toa Electrics
Ltd.), microplate 96 sumuran, micropipet (Gilson), vortex (Genie), timbangan
elektrik, corong, kertas saring, oven, cawan penguap, lampu UV, pipa kapiler,
bejana elusi, dan kamera digital.
 14

b. Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah sebagai berikut: sel
T47D yang diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi Farmasi, Fakultas Farmasi,
Universitas Muhammadiyah Surakarta, umbi bawang dayak (Eleutherine
americana Merr.) yang diperoleh dari daerah Kalimantan Tengah, biji sirsak
(Annona muricata) yang diperoleh dari penjual jus di kawasan kampus
Universitas Muhammadiyah Surakarta, obat antikanker metotreksat yang
diperoleh dari Instalasi Farmasi Rumah Sakit dr. Moewardi, RPMI 1640
(Gibcobrl), etanol 96%, , PBS (Phosphate Buffer Saline), MTT (3-(4,5-dimetil
thiazol-2il)-2,5-difeniltetrazolium bromid), stopper SDS (Sodium Dodecyl
Sulphate) dalam 0,01 N HCl, plat silika GF254, amonia, pereaksi seperti sitroborat;
Dragendorff; FeCl3, dan akuades.

4. Tempat Penelitian
Penelitian uji aktivitas antikanker kombinasi ekstrak umbi bawang dayak
(Eleutherine americana Merr.) dan biji sirsak (Annona muricata) dengan
metotreksat terhadap sel T47D dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Farmasi,
Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.

5. Rencana Penelitian
a. Pengumpulan Bahan
Bawang dayak yang digunakan di dalam penelitian diperoleh dari daerah
Kalimantan Tengah. Setelah dicuci dan dibersihkan, bawang dayak dikeringkan
dibawah sinar matahari dengan ditutup menggunakan kain hitam hingga kering.
Setelah bawang kering kemudian di serbuk menggunakan blender. Biji Sirsak
yang digunakan dalam penelitian ini diperoleh dengan cara mengumpulkan biji
sirsak dari para penjual jus di kawasan kampus Universitas Muhammadiyah
Surakarta dan sekitarnya. Setelah dicuci dan dibersihkan, biji sirsak dikeringkan
dibawah sinar matahari dengan ditutup menggunakan kain hitam hingga kering.
Biji sirsak yang kering kemudian di serbuk menggunakan blender.
 15

b. Identifikasi Bawang Dayak (Eleutherine americana Merr.)

Penelitian dimulai dengan tahap identifikasi terhadap tanaman bawang
dayak di laboratorium Biologi, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan,
Universitas Muhammadiyah Surakarta. Tujuan dari identifikasi tanaman adalah
untuk menetapkan kebenaran yang berkaitan dengan ciri-ciri morfologi secara
makroskopis dari tanaman bawang dayak terhadap pustaka ”Inventaris Tanaman
Obat Indonesia (I) Jilid 2” yang disusun oleh Departemen Kesehatan dan
Kesejahteraan Sosial RI, Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan tahun
2001.

c. Identifikasi Sirsak (Annona muricata)

Penelitian selanjutnya adalah identifikasi terhadap tanaman sirsak di
laboratorium Biologi, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan, Universitas
Muhammadiyah Surakarta. Tujuan dari identifikasi tanaman adalah untuk
menetapkan kebenaran yang berkaitan dengan ciri-ciri morfologi secara
makroskopis dari tanaman sirsak terhadap pustaka ”Inventaris Tanaman Obat
Indonesia (I) Jilid 2” yang disusun oleh Departemen Kesehatan dan Kesejahteraan
Sosial RI, Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan tahun 2001.

d. Penentuan Golongan Senyawa dengan Kromatografi Lapis Tipis

1) Penyiapan larutan uji KLT : ekstrak etanol bawang dayak (Eleutherine
americana Merr.), ekstrak etanol biji sirsak (Annona Muricata. L) dilarutkan
dalam etanol 96%.
2) KLT : Larutan uji ditotolkan pada fase diam sebanyak 3 kali totolan, setiap
totolan dibiarkan sampai kering, kemudian dielusi dengan beberapa fase
gerak, fase gerak sebelumnya dilakukan orientasi terlebih dahulu (dengan
perbandingan yang berbeda). Penentuan fase gerak dilakukan dengan
mencoba-coba, dimulai dari perbandingan 1:1 dari fase gerak yang akan
digunakan hingga mendapatkan perbandingan yang menghasilkan elusi
 16

paling baik. Fase gerak yang digunakan pada penelitian ini adalah n-heksana :
etil asetat (4:6).
3) Analisis KLT: Plat hasil KLT diamati pada UV254 nm dan UV366 nm.
Bercak dideteksi dengan uap amonia serta beberapa pereaksi semprot antara
lain sitroborat, Dragendorff dan FeCl3.

e. Pembuatan Larutan Uji

Ekstrak etanol umbi bawang dayak dan ekstrak etanol biji sirsak ditimbang
sebanyak 10 mg, kemudian dilarutkan dalam 100 µL DMSO 0,25% hingga
homogen lalu di sentrifuge sehingga diperoleh konsentrasi 250 µg/mL.
Konsentrasi larutan uji yang dibuat adalah 250; 125 dan 62,5 µg/mL. Seri
konsentrasi tersebut kemudian di pindah ke dalam microplate 96 dan diuji pada
sel. Seluruh proses dilakukan di dalam Laminar Air Flow (LAF) cabinet.

f. Uji Sitotoksik
1) Sterilisasi
Sebelum dilakukan sterilisasi, peralatan gelas yang akan digunakan untuk
percobaan dicuci bersih kemudian dikeringkan dan dibungkus kertas. Peralatan
yang tidak tahan terhadap panas seperti pipet tetes, media, blue tips, yellow tips
disterilkan menggunakan autoklaf dengan suhu 121 oC selama 15 menit.
Peralatan yang tahan terhadap pemanasan dapat disterilkan menggunakan oven
pada suhu 175 oC selama 2 jam.
2) Sterililasi Laminar Air Flow (LAF)
Sterilisasi terhadap Laminar Air Flow (LAF) dapat dilakukan dengan cara
menyalakan lampu UV selama 15 menit sebelum digunakan. Sebelum
digunakan, permukaan tempat kerja harus disterilkan menggunakan alkohol 70%
dengan cara disemprotkan.
3) Pertumbuhan Sel
Sel T47D diambil dari tangki nitrogen cair, lalu dicairkan di atas
waterbath pada suhu 37 oC. Cryotube disemprot menggunakan etanol 70%,
kemudian dibuka dan dipindahkan kedalam tabung conical tube steril yang
 17

berisi media DMEM. Suspensi sel di sentrifuge selama 10 menit dengan

kecepatan 1200 rpm. Supernatan yang terbentuk kemudian dibuang. Media
pertumbuhan dimasukkan ke dalam pellet hasil sentrifugasi dan dilakukan
resuspensi secara perlahan hingga homogen. Sel T47D ditumbuhkan dalam
tissue culture flask dan diinkubasi selama 1 jam dengan suhu 37 oC dalam
inkubator CO2 5%. Media kemudian diganti dan sel ditumbuhkan hingga
jumlahnya cukup sebagai bahan untuk perlakuan.
4) Penggantian Media
Dipersiapkan media kultur dan conical tube yang berisi PBS. Media lama
dihisap dan dibuang menggunakan pipet Pasteur, kemudian dimasukkan dalam
dish 3 mL PBS untuk mencuci sel. PBS kemudian dibuang mengginakan pipa
Pasteur. Media kultur sebanyak 7 mL dituang dalam dish yang berisi sel
kemudian dihomogenkan. Pengamatan sel secara kualitatif dapat dilakukan
menggunakan mikroskop. Dish selanjutnya diinkubasi selama 24 dan diamati
kembali keesokan harinya.
5) Pemanenan Sel
Sel dipanen apabila jumlah sel 80% konflen. Pemanenan sel dilakukan
dengan membuang media dengan menggunakan pipet Pasteur steril. Sel
kemudian di cuci 2x dengan PBS 1x (volume PBS ± ½ volume media awal).
Larutan tripsin-EDTA 1x (tripsin 0,25%) ditambahkan merata dan diinkubasi
selama 3 menit. Tripsin kemudian dinonaktifkan menggunakan media ± 5 mL.
Sel di resuspensi menggunakan pipet hingga terlepas satu-persatu (tidak
bergerombol). Sel di amati menggunakan mikroskop dan apabila terdapat sel
yang menggerombol maka dilakukan resuspensi kembali. Sel yang terlepas satu-
satu lalu dipindahkan ke dalam conical tube steril baru.
6) Uji Aktivitas Sitotoksik dengan MTT Assay
100 µL suspensi sel diambil dari media lengkap dan dimasukkan kedalam
96 well plate lalu diinkubasi dalam inkubator CO2 5% selama 24 jam. Setelah
dilakukan inkubasi, media yang terdapat pada masing-masing sumuran dibuang
dan ditambahkan media baru serta sampel 100 µL pada tiap sumuran yang
berbeda sehingga diperoleh kadar akhir sampe dengan konsentrasi (500; 250;
 18

125; 62,5 µg/mL). 96 well plate kemudian diinkubasi dengan suhu 37 oC selama
24 jam dalam inkubator CO2 5%. Setelah dilakukan inkubasi maka media yang
terdapat pada masing-masing sumuran dibuang, dicuci menggunakan PBS 1x
sebanyak 100 µL MTT 5 mg/mL dalam PBS. Plate diinkubasi kembali pada
suhu 37 oC selama 4 jam.
Apabila sel hidup, maka akan bereaksi dengan MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-
2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromid) dan membentuk kristal formazan berwarna
ungu. Sodium Dodecyl Sulphate (SDS) 10% dalam HCl 0,01 N ditambahkan
dalam sumuran untuk menghentikan reaksi pembentukan formazan. Plate
kemudian diinkubasi kembali selama 24 jam. Setelah dilakukan inkubasi,
absorbansi sel dibaca menggunakan ELISA reader dengan panjang gelombang
550 nm. Persen sel yang hidup dihitung menggunakan data absorbansi sel
dengan membuat kurva hubungan log konsentrasi versus % sel hidup dan
dihitung nilai IC50 (Haryoto et al, 2013).

6. Analisis Data
Data yang diperoleh dari pengujian menggunakan MTT assay yaitu berupa
absorbansi yang kemudian di ubah menjadi % sel yang hidup. Apabila absorbansi
yang dihasilkan pada kontrol pelarut dan kontrol sel sama, maka rumus untuk
menghitung persentase sel yang hidup adalah:
(𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑝𝑒𝑟𝑙𝑎𝑘𝑢𝑎𝑛 − 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑎)
% 𝑠𝑒𝑙 ℎ𝑖𝑑𝑢𝑝 = 𝑥 100%
(𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑠𝑒𝑙 − 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑎)
Apabila absorbansi kontrol pelarut lebih rendah dibandingkan absorbansi
kontrol, maka rumus untuk menghitung persentase sel yang hidup adalah:
(𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑝𝑒𝑟𝑙𝑎𝑘𝑢𝑎𝑛 − 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑎)
% 𝑠𝑒𝑙 ℎ𝑖𝑑𝑢𝑝 = 𝑥 100%
(𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑝𝑒𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡 − 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑎)
Uji penghambatan sel kanker T47D dilakukan menggunakan kombinasi dari
esktrak etanol bawang dayak (Eleutherine americana Merr.) dengan ekstrak
etanol biji sirsak (Annona muricata), kombinasi ekstrak etanol bawang dayak
dengan metotreksat, kombinasi ekstrak etanol biji sirsak dengan metotreksat, dan
kombinasi dari kedua esktrak dengan metotreksat yang kemudian didapatkan dari
perhitungan IC50 menggunakan regresli linier dengan sumbu x adalah log
 19

kombinasi ekstrak etanol umbi bawang dayak dan biji sirsak terhadap metotreksat,
serta kombinasi kedua ekstrak dengan metotreksat. Sumbu y dalam perhitungan
ini adalah persen sel yang hidup (Meiyanto et al., 2017).

7. Uji Kombinasi
Indeks interaksi antara obat antikanker metotreksat dan ekstrak etanol
bawang dayak serta biji sirsak ditetapkan untuk melihat sinergisme dari suatu
kombinasi, dengan menggunakan persamaan:
(D)1 (D)2
IK = +
(Dx)1 (Dx)2
Dx1 dan Dx2 adalah konsentrasi dari satu senyawa tunggal yang dibutuhkan
untuk memberikan efek (IC50 terhadap pertumbuhan sel kanker payudara),
sedangkan D1, dan D2 merupakan besarnya konsentrasi kedua senyawa untuk
memberikan efek yang sama. Hasil Indeks kombinasi (IK) yang diperoleh
kemudian diinterpretasikan sesuai pada tabel berikut: (Reynolds and Maurer,
2005)
IK Interpretasi
<0,1 Sinergis sangat kuat
0,1 – 0,3 Sinergis kuat
0,3 – 0,7 Sinergis
0,7 – 0,9 Sinergis ringan-sedang
0,9 – 1,1 Mendekati additive
1,1 – 1,45 Antagonis ringan - sedang
1,45 – 3,3 Antagonis
>3,3 Antagonis kuat – sangat kuat
 20

I. JADWAL PENELITIAN

Tahapan Uraian Kegiatan Bulan ke-

Penelitian 1 2 3 4 5 6
Persiapan Observasi dan Studi  
Literatur
Preparasi Sampel  
Penelitian Pengumpulan Data  
Penyelesaian Analisis Hasil  
Penyusunan 
Laporan
 21

J. DAFTAR PUSTAKA
Aberg, J.A., Lacy, C.F, Amstrong, L.L, Goldman, M.P, and Lance, L.L., 2009,
Drug Information Handbook, 17th edition, Lexi-Comp for the American
Pharmacists Association.
Allbredge, B.K., et al., 2013, Applied Therapeutics The Clinical Use of Drugs
Tenth Edition, Lippincott Williams & Wilkins, a Wolters Kluwer business
Two Commerce Square, USA, pp: 2081.
American Society of Clinical Oncology, 2003, Cancer Prevention/Epidemiology,
39th Annual Meeting 2003, Chicago.
Ardraviz, 2012, Khasiat Tanaman Sirsak Untuk Kesehatan, (Online),
(http://ardra.biz/kesehatan/khasiat-sirsak diakses 23 Mei 2017 pukul 20:45
WIB).
Arifianti, L., Sukardiman, Studiawan, H., Rakhmawati, Megawati, L., 2014, Uji
Aktivitas Ekstrak Biji Sirsak (Annona muricata L.) Terhadap Sel Kanker
Mamalia Secara In Vitro, Jurnal Farmasi dan Ilmu Kefarmasian Indonesia,
1, 2, p.1.
Babula, P., Vojtech, A., Ladislav, H., dan Rene, K, 2009, Noteworthy Secondary
Metabolites Naphthoquinones-their Occurrence, Pharmacological Properties
and Analysis, Current Pharmaceutical Analysis, 5, 47-68.
Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan, 2001, Inventaris Tanaman Obat
Indonesia (1) Jilid 2, Bakti Husada, Jakarta, pp:25.
Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan, 2001, Inventaris Tanaman Obat
Indonesia (1) Jilid 2, Bakti Husada, Jakarta, pp:121.
BPOM, 2008, Informatorium Obat Nasional Indonesia, Badan Pengawas Obat
dan Makanan Republik Indonesia, Jakarta, pp:66.
Depkes R.I., 2013, Panduan Memperingati Hari Kanker Sedunia, Depkes RI,
Jakarta, pp:3.
DiPiro et al., 2008, Pharmacotherapy: A Pathophysiologic Approach 7th Edition,
The McGraw-Hill Companies, pp:1279-1280.
E.M. Kuntorini dan L.H. Nugroho, 2010, Structural Development and Bioactive
Content of Red Bulb Plant (Eleutherine americana Merr.); a Tradisional
Medicines for Local Kalimantan People, Biodiversitas, 11, 102-106.
Fitri, Y., Rosidah, Suwarso S., 2014, Effects of Inhibition Cell Cycle and
Apoptosis of Sabrang Onion extract (Eleutherine bulbosa (Mill.) Urb.) on
Breast Cancer Cells, International Journal of PharmTech Research, 6,
1392-1396.
Galingging, R. Y., 2009, Bawang Dayak (Eleutherine palmifolia) sebagai
Tanaman Obat Multifungsi, Warta Penelitian dan Pengembangan, 15, 2-4.
Hara, H., Maruyama, N., Yamashita, S., Hayashi, Y., Lee K. H., Bastow K. F.,
Chairul, Marumoto, R., Imakura, Y., 1997, Elecanacin: a Novel New
Naphthoquinon from the Bulb of Eleutherine americana, Chem Pharm Bull,
45, 1714-1716.
Haryoto, Muhtadi, Indrayudha, P., Azizah, T., dan Suhendi A., 2013, Aktivitas
Sitotoksik Ekstrak Etanol Tumbuhan Sala (Cynometra ramiflora Linn)
Terhadap Sel HeLa, T47D, dan WiDR, Jurnal Penelitian Saintek, 18, 2.
 22

Hertz, R., Lewis, J., and Lipsett, M. B., 1961, Five Years Experience with the
Chemotherapy of Metastatic Choriocarcinoma and Related Trophoblastic
Tumors in Women, American Journal of Obstetrics and Gynecology, 82, 3,
631–640.
Macdonald, F., and Ford, C.H.J., 1997, Molecular Biology of Cancer, BIOS
Scientific Publishers Limited, Herndon, p:1-71.
Mclaughlin, et al., 2008, Paw-paw and Cancer Annonaceous Acetogenesis from
Discovery to Comercial Products, Department of Medicinal Chemistry and
Molecular Pharmacology, School of Pharmacy and Pharmaceutical
Sciences, Perdue University, 71 (7); 1311-1321.
Meiyanto, E., Junedi, S., Hermawan, A., Ikawati, M., 2008, Prosedur Tetap Uji
Sitotoksik Metode MTT. Cancer Chemoprevention Research Center,
Fakultas Farmasi, Universitas Gajah Mada,
(http://ccrcfarmasiugm.files.wordpress.com/2008/06/10-sop-uji-sitotoksik-
metode-mtt.pdf diakses 12 Mei 2017 pukul 18:31WIB).
Idrus, R. B., Nurhayati, B., La Alio, 2013, Isolasi dan Karakterisasi Senyawa
Alkaloid dari Biji Tumbuhan Sirsak (Annona muricata Lim), Jurusan
Pendidikan Kimia Fakultas MIPA, Universitas Negeri Gorontalo, 7, pp:1.
Jemal, A., Rebecca, S., Jiaquan, X., dan Elizabeth, W, 2010, Cancer Statistics
2010, CA Cancer J Clin, 60, 277-300.
Royal Botanic Garden, 2015, Royal Botanic Gardens, Kew: calendar of events
2015, (http://www.kew.org/about/press-media/pressreleases/royal-botanic-
gardens-kew-calendar-events-2015 diakses 23 Mei 2017 pukul 20:45 WIB).
Ruddon, R.W, 2007, Cancer Biology 4th Edition, Oxford University Press: New
York, 117-196.
Taylor, L., 2002, Herbal Secrets of the Rainforest, 2nd Edition, Sage Press, pp: 2-
4.
Taheri, A., Dinarvand, R., Atyabi, F., Ahadi, F., Nouri, F. S., Ghahremani, M. H.,
Ostad, S. N., Borougeni, A. T., Mansoori, P., 2011, Enhanced Anti-Tumoral
Activity of Methotrexate-Human Serum Albumin Conjugated Nanoparticles
by Targeting with Luteinizing Hormone-Releasing Hormone (LHRH)
Peptide, International Journal of Molecular Science, 12, 4591-4608.
Widodo, R. D., 2013, Sitotoksisitas Fraksi Semipolar Ekstrak Etanol Biji Sirsak
(Annona muricata L.) terhadap Sel T47D dan Profil Kromatrogramnya,
Skripsi, Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta.
 23

K. LAMPIRAN
Lampiran 1
Tabel 1. Kontrol sel dan kontrol media
Absorbansi Rata-rata Absorbansi Rata-rata Absorbansi
kontrol sel absorbansi kontrol absorbansi kontrol sel
kontrol sel media kontrol dikurangi
media kontrol media

Tabel 2. Kombinasi ekstrak etanol umbi bawang dayak dengan

metotreksat

Kadar Absorbansi* % sel % sel hidup SD

(µg/ mL) hidup rata-rata

* data diperoleh dari replikasi sebanyak 3x masing-masing kadar

 24

Tabel 3. Kombinasi ekstrak etanol biji sirsak dengan metotreksat

Kadar Absorbansi* % sel % sel hidup SD
(µg/ mL) hidup rata-rata

* data diperoleh dari replikasi sebanyak 3x masing-masing kadar

Lampiran 2
Nilai Indeks Kombinasi (IK)

Tabel 6. Nilai Indeks Kombinasi (IK) Umbi Bawang Dayak dengan

Metotreksat
Konsentrasi Umbi Konsentrasi Metotreksat (µg/mL)
Bawang Dayak
(µg/mL) 50 100 200
62,5
125
250

Tabel 7. Nilai Indeks Kombinasi (IK) Biji Sirsak dengan Metotreksat

Konsentrasi Biji Konsentrasi Metotreksat (µg/mL)

Sirsak (µg/mL)
50 100 200
62,5
125
250