Xeroderma pigmentosum: Perbaikan Cacat DNA Rusak di Manusia

Matahari bersinar cerah pada hari-a pertengahan musim panas hari yang sempurna bagi
kebanyakan anak-anak untuk menghabiskan di pantai. Semua teman-teman Nathan
mengenakan celana pendek atau pakaian renang. Sebagai Nathan siap untuk bergabung teman-
temannya, ia menarik celana panjang penuh dan kemeja lengan panjang. Lalu ia mengenakan
topi bertepi lebar dan diterapkan lapisan tebal tabir surya untuk tangan dan wajahnya.
Sedangkan teman-temannya menikmati bermain di bawah sinar matahari, Nathan hidup dalam
ketakutan dari efek sinar matahari. Nathan lahir dengan mewarisi dis rangka xeroderma
pigmentosum, yang merupakan sifat resesif autosomal yang mempengaruhi sekitar satu dari
250.000 anak-anak.
sel-sel kulit Nathan sangat sensitif terhadap sinar ultraviolet radiasi tinggi energi sinar
matahari. sinar ultraviolet menyebabkan perubahan kimia dalam DNA dalam sel kulit Nathan,
perubahan yang menyebabkan tidak hanya untuk freckling intens tetapi juga untuk kanker kulit.
teman Nathan memberikan sedikit pemikiran untuk bermain di bawah sinar matahari; sengatan
matahari adalah perhatian mereka hanya besar. sel-sel kulit mereka mengandung enzim yang
memperbaiki perubahan DNA yang dihasilkan dari paparan sinar ultraviolet. Namun, sel-sel
kulit Nathan kurang salah satu enzim yang dibutuhkan untuk memperbaiki ultraviolet
perubahan cahaya yang disebabkan dalam struktur DNA. Hasil Xeroderma pigmentosum dari
kerugian-of-fungsi mutasi homozigot dalam sembilan gen autosomal yang berbeda. Selain itu,
kelainan bawaan lainnya diketahui hasil dari kegagalan untuk memperbaiki DNA yang rusak
oleh agen fisik dan kimia lainnya. Konsekuensi yang mengancam jiwa ini cacat diwariskan
dalam enzim perbaikan DNA secara dramatis menekankan pentingnya mereka. Mengingat
peran kunci bahwa DNA memainkan dalam organisme hidup, evolusi mekanisme untuk
melindungi integritas tampaknya tak terelakkan. Memang, seperti yang kita bahas dalam bab
ini, sel-sel hidup mengandung banyak enzim yang DNA terus scan untuk mencari nukleotida
yang rusak atau salah dipasangkan. Ketika terdeteksi, cacat ini diperbaiki oleh pasukan kecil
enzim perbaikan DNA, masing-masing berevolusi untuk memerangi jenis tertentu dari
kerusakan. Dalam bab ini, kita memeriksa jenis perubahan yang terjadi pada DNA, proses
dengan mana perubahan ini diperbaiki, dan proses yang terkait rekombinasi antara molekul
DNA homolog.

Anak-anak bermain di luar. Anak di baju putih memiliki xeroderma pigmentosum, kelainan
resesif autosomal yang ditandai dengan sensitivitas akut terhadap sinar matahari. Dia harus
menghindari paparan sinar matahari untuk mencegah kanker kulit.

Mutasi: Sumber dari Keragaman Genetik Diperlukan untuk Evolution

Mutasi-mewarisi perubahan dalam bahan-genetik memberikan variasi genetik baru yang
memungkinkan organisme untuk berkembang.
Kita tahu dari sebelumnya bab yang warisan didasarkan pada gen yang ditularkan dari orang
tua kepada keturunannya selama reproduksi dan bahwa gen menyimpan informasi genetik
dikodekan dalam urutan pasang nukleotida dalam DNA atau nukleotida dalam RNA. Kami
telah meneliti bagaimana informasi genetik ini akurat digandakan selama replikasi
semikonservatif dari DNA. replikasi akurat ini ditunjukkan tergantung sebagian pada kegiatan
proofreading dibangun ke dalam DNA polimerase yang mengkatalisis sintesis DNA. Dengan
demikian, mekanisme telah berevolusi untuk memfasilitasi transmisi setia informasi genetik
dari sel ke sel dan akhirnya dari generasi ke generasi. Namun demikian, kesalahan dalam materi
genetik terjadi. Perubahan diwariskan seperti di materi genetik disebut mutasi.
Mutasi merujuk pada keduanya (1) perubahan materi genetik dan (2) proses terjadinya
perubahan. Organisme yang menunjukkan fenotipe baru yang dihasilkan dari mutasi disebut
mutan. Digunakan dalam arti sejarah yang luas, mutasi mengacu pada setiap mendadak,
perubahan diwariskan dalam genotipe dari sel atau organisme. Namun, perubahan genotipe,
dan dengan demikian dalam fenotip, suatu organisme yang dihasilkan dari peristiwa
rekombinasi yang menghasilkan kombinasi baru dari yang sudah ada sebelumnya variasi
genetik harus hati-hati dibedakan dari perubahan yang disebabkan oleh mutasi baru. Kedua
acara kadang-kadang menimbulkan fenotipe baru pada frekuensi yang sangat rendah.
perubahan mutasi dalam genotipe organisme termasuk perubahan dalam jumlah kromosom dan
struktur (Bab 6), serta perubahan dalam struktur gen individu. Mutasi yang melibatkan
perubahan pada situs tertentu dalam gen yang disebut sebagai mutasi titik. Mereka termasuk
penggantian satu pasang dasar untuk lain atau penyisipan atau penghapusan satu atau beberapa
pasang nukleotida di situs tertentu dalam gen. Hari ini, mutasi istilah kadang-kadang digunakan
dalam arti sempit untuk merujuk hanya untuk perubahan dalam struktur gen individu. Dalam
bab ini, kami mengeksplorasi proses mutasi sebagaimana didefinisikan dalam arti sempit.
Mutasi adalah sumber utama dari semua variasi genetik; menyediakan bahan baku bagi evolusi.
mekanisme rekombinasi mengatur ulang variabilitas genetik dalam kombinasi baru, dan seleksi
alam atau buatan mempertahankan kombinasi terbaik disesuaikan dengan kondisi lingkungan
yang ada atau yang diinginkan oleh tanaman atau hewan peternak. Tanpa mutasi, semua gen
akan ada dalam satu bentuk. Alel tidak akan ada, dan analisis genetik klasik tidak akan
mungkin. Yang paling penting, populasi organisme tidak akan mampu berevolusi dan
beradaptasi dengan perubahan lingkungan. Beberapa tingkat mutasi adalah penting untuk
menyediakan variabilitas genetik baru dan memungkinkan organisme untuk beradaptasi
dengan lingkungan baru. Pada saat yang sama, jika mutasi terjadi terlalu sering, mereka akan
mengganggu transfer setia informasi genetik dari generasi ke generasi. Selain itu, sebagian
besar mutasi dengan efek fenotipik mudah terdeteksi adalah merusak pada organisme di mana
mereka terjadi. Seperti yang kita harapkan, tingkat mutasi dipengaruhi oleh faktor genetik, dan
mekanisme telah berevolusi yang mengatur tingkat mutasi yang terjadi di bawah berbagai
kondisi lingkungan.
Mutasi adalah perubahan diwariskan dalam materi genetik yang menyediakan bahan baku bagi
evolusi.
Dasar Molekuler Mutasi
Mutasi mengubah urutan nukleotida gen dalam beberapa cara, misalnya substitusi satu pasang
dasar untuk lain atau penghapusan atau penambahan satu atau beberapa pasangan basa.
Ketika Watson dan Crick menggambarkan struktur double-helix dari DNA dan mengusulkan
replikasi semikonservatif yang didasarkan pada spesifik dasar-pasangan untuk menjelaskan
transmisi akurat informasi genetik dari generasi ke generasi, mereka juga mengusulkan
mekanisme untuk menjelaskan spontan mutasi. Watson dan Crick menunjukkan bahwa
struktur dasar dalam DNA tidak statis. atom hidrogen dapat berpindah dari satu posisi dalam
purin atau pirimidin posisi-selama misalnya, dari kelompok amino ke nitrogen cincin. fluktuasi
kimia tersebut disebut pergeseran tautomerik. Meskipun pergeseran tautomerik jarang, mereka
mungkin hal penting dalam metabolisme DNA karena beberapa mengubah potensi pasangan
basa. Struktur nukleotida yang kita bahas dalam Bab 9 adalah umum, bentuk yang lebih stabil,
di mana adenin selalu berpasangan dengan timin dan guanin selalu berpasangan dengan sitosin.
Bentuk-bentuk keto lebih stabil dari timin dan guanin dan bentuk-bentuk amino dari adenin
dan sitosin mungkin jarang mengalami pergeseran tautomerik ke enol dan imino bentuk kurang
stabil, masing-masing (Gambar 13.1). Dasar akan diharapkan untuk ada dalam bentuk
tautomerik mereka kurang stabil hanya jangka waktu yang singkat. Namun, jika dasar ada
dalam bentuk yang jarang pada saat itu sedang direplikasi atau sedang dimasukkan ke dalam
rantai DNA baru lahir, mutasi akan menghasilkan. Ketika basis yang hadir dalam imino atau
enol langka mereka negara, mereka dapat membentuk adenin-sitosin dan pasangan basa
guanin-timin (Gambar 13.2a). Efek bersih dari peristiwa seperti itu, dan replikasi berikutnya
diperlukan untuk memisahkan pasangan basa serasi, adalah A: T ke G: C atau G a: C ke A: T
pasangan basa substitusi (Gambar 13.2b). Lihat Memecahkan Ini: Nukleotida-Pair Substitusi
dalam Human HBB Gene untuk memeriksa efek dari perubahan tersebut di urutan nukleotida
gen penting. Mutasi yang dihasilkan dari pergeseran tautomerik di basis DNA melibatkan
penggantian purin di salah satu untai DNA dengan purin lainnya dan penggantian pirimidin
dalam untai komplementer dengan pirimidin lainnya. pasangan basa substitusi semacam ini
disebut transisi. substitusi pasangan basa melibatkan penggantian purin dengan pirimidin dan
sebaliknya disebut transversi. Ada tiga pergantian pemain-satu transisi dan dua transversi-
mungkin bagi setiap pasangan basa. Sebanyak empat transisi yang berbeda dan delapan
transversi yang berbeda yang mungkin (Gambar 13.3a). Tipe lain dari mutasi titik melibatkan
penambahan atau penghapusan satu atau beberapa pasangan basa. Pasangan basa penambahan
dan penghapusan dalam daerah coding gen secara kolektif disebut mutasi sebagai frameshift
karena mereka mengubah kerangka pembacaan semua kembar tiga pasangan basa (triplet DNA
yang menentukan kodon di mRNA dan asam amino dalam produk gen polipeptida) di gen yang
distal ke situs di mana mutasi terjadi (Gambar 13.3b). Semua tiga jenis titik mutasi-transisi,
transversi, dan frameshift mutasi-yang hadir antara spontan terjadi mutasi. Sebagian besar
mengejutkan mutasi spontan yang telah dipelajari dalam prokariota tunggal pasangan basa
penambahan dan penghapusan daripada pasangan basa substitusi. Mutasi frameshift hampir
selalu menghasilkan sintesis produk gen protein nonfungsional.
 GAMBAR 13.1 bentuk tautomerik dari empat
basa umum di DNA. Pergeseran atom hidrogen antara nomor 3 dan nomor 4 posisi dari
pirimidin dan antara nomor 1 dan nomor 6 posisi purin mengubah potensi dasar-pasangan
mereka.

GAMBAR 13.2 Efek dari pergeseran tautomerik di nukleotida dalam DNA pada (a)
basepairing dan (b) mutasi. Langka A: C dan G: dasar T pasang seperti yang ditunjukkan dalam
(a) juga terbentuk ketika timin dan adenine berada di langka bentuk enol dan imino mereka,
masing-masing. (B) A guanin (1) mengalami pergeseran tautomerik ke bentuk enol langka (G
*) pada saat replikasi (2). Dalam bentuk enol nya, pasangan guanin dengan timin (2). Selama
replikasi berikutnya (3 sampai 4), guanin bergeser kembali ke bentuk keto lebih stabil. The
timin dimasukkan berlawanan bentuk enol dari guanin (2) mengarahkan penggabungan adenin
selama replikasi berikutnya (3 sampai 4). Hasil bersih adalah G: C ke A: T pasangan basa
substitusi.
Nukleotida-Pair Substitusi dalam Human HBB Gene
Asam amino kedua di -globin manusia dewasa adalah histidin, yang spesifik ed oleh CAU
kodon di HBB mRNA. Jika Anda mempertimbangkan hanya single nucleotide-pasangan
substitusi dalam porsi gen HBB menentukan histidin pada posisi 2, berapa banyak substitusi
asam amino yang berbeda yang mungkin? Yang nukleotida-pair substitusi akan menimbulkan
masing-masing substitusi asam amino? Apakah ada substitusi asam amino ini telah terdeteksi
di -globins manusia. Apakah ada di antara varian ini diberi nama? Jika demikian, apa nama
mereka? Anda akan perlu untuk melakukan pencarian web untuk menjawab dua pertanyaan
terakhir. Untuk melihat solusi untuk masalah ini, kunjungi situs Companion Mahasiswa.

GAMBAR 13.3 Jenis mutasi titik yang terjadi pada DNA: (a) substitusi dasar dan (b) mutasi
frameshift. (A) substitusi dasar meliputi empat transisi (purin untuk purin dan pirimidin untuk
pirimidin; panah hijau) dan delapan transversi (purin untuk pirimidin dan pirimidin untuk
purin; panah biru). (B) A gen mutan (atas, kanan) diproduksi oleh penyisipan dari C: pasangan
basa G antara pasangan basa keenam dan ketujuh dari gen tipe liar (atas, kiri). penyisipan ini
mengubah kerangka pembacaan yang sebagian dari distal gen mutasi, relatif terhadap arah
transkripsi dan translasi (kiri ke kanan, seperti yang digambarkan). Pergeseran dalam bingkai
membaca, pada gilirannya, mengubah semua kodon pada mRNA dan semua asam amino dalam
polipeptida yang ditentukan oleh pasangan basa kembar tiga distal mutasi.
Meskipun masih banyak yang harus dipelajari tentang penyebab, mekanisme molekuler, dan
frekuensi spontan terjadi mutasi, tiga faktor utama (1) keakuratan mesin replikasi DNA, (2)
efisiensi mekanisme yang telah berevolusi untuk perbaikan rusak DNA, dan (3) tingkat paparan
agen mutagenik hadir di lingkungan. Gangguan dari aparat replikasi DNA atau perbaikan DNA
sistem, baik yang berada di bawah kontrol genetik, telah terbukti menyebabkan peningkatan
besar dalam tingkat mutasi.
MUTASI INDUKSI
Banyak mutasi yang terjadi secara alami diidentifikasi dan dipelajari oleh ahli genetika awal.
Namun, ilmu genetika berubah secara dramatis pada tahun 1927 ketika Hermann J. Muller
menemukan bahwa sinar X diinduksi mutasi pada Drosophila. Kemampuan untuk menginduksi
mutasi membuka pintu untuk pendekatan yang sama sekali baru untuk analisis genetik.
Genetika sekarang dapat menginduksi mutasi pada gen dari bunga dan kemudian mempelajari
efek dari produk gen yang hilang.
Muller menunjukkan bahwa pengobatan Drosophila sperma dengan sinar X meningkat tajam
frekuensi lethals resesif terkait-X. (Sinar X adalah bentuk dari radiasi elektromagnetik dengan
panjang gelombang yang lebih pendek dan energi yang lebih tinggi daripada cahaya tampak;.
Lihat Gambar 13.10) studi Muller adalah demonstrasi pertama bahwa mutasi dapat diinduksi
oleh faktor eksternal. Pada tahun 1946, ia menerima Hadiah Nobel dalam Fisiologi atau
Kedokteran untuk penemuan penting ini.
Demonstrasi ambigu Muller dari mutagenisitas sinar X menjadi mungkin karena ia
mengembangkan teknik sederhana dan akurat yang dapat digunakan untuk mengidentifikasi
mutasi yang mematikan pada kromosom X Drosophila. Teknik ini, disebut metode CLB,
dilakukan dengan betina heterozigot untuk kromosom X normal dan X diubah kromosom-the
CLB kromosom-yang Muller dibangun khusus untuk digunakan dalam eksperimennya.
The CLB kromosom memiliki tiga komponen penting. (1) C, crossover penekan, mengacu pada
inversi panjang yang menekan rekombinasi antara kromosom CLB dan kromosom X struktural
normal pada wanita heterozigot. inversi tidak mencegah menyeberang antara dua kromosom,
tetapi menyebabkan keturunan yang membawa kromosom X rekombinan yang diproduksi oleh
menyeberang antara dua kromosom untuk membatalkan karena duplikasi dan kekurangan
(lihat Bab 7). (2) l mengacu mutasi mematikan resesif pada kromosom CLB. betina homozigot
dan laki-laki hemizygous membawa mutasi mematikan X-linked ini tidak layak. (3) B mengacu
pada mutasi yang menyebabkan fenotip bar-mata, suatu kondisi di mana mata majemuk besar
tipe liar lalat mengurangi ukuran untuk mempersempit, mata berbentuk bar. Karena B adalah
sebagian dominan, perempuan heterozigot untuk kromosom CLB dapat diidentifikasi dengan
mudah. Kedua mematikan resesif (l) dan bar-mata mutasi (B) berada dalam segmen terbalik
dari kromosom CLB.
Muller iradiasi lalat jantan dan dikawinkan mereka dengan CLB / betina (Gambar 13.4). Semua
anak-anak perempuan bar bermata kawin ini dilakukan kromosom CLB dari induk betina dan
kromosom X yang disinari dari induk jantan. Karena seluruh populasi sel reproduksi laki-laki
diiradiasi, masing-masing putri bar bermata membawa berpotensi bermutasi kromosom X.
putri bar bermata ini kemudian dikawinkan secara individual (dalam budaya terpisah) dengan
tipe liar laki-laki. Jika kromosom X iradiasi dilakukan oleh seorang putri bar bermata telah
mengakuisisi X-linked mematikan, semua keturunan kawin akan perempuan. Laki-laki
hemizygous untuk kromosom CLB akan mati karena resesif mematikan (l) kromosom ini
membawa; di samping itu, laki-laki hemizygous untuk kromosom X yang diradiasi akan mati
jika mematikan resesif telah diinduksi di atasnya. Perkawinan putri bar bermata membawa
kromosom X iradiasi di mana tidak ada mutasi yang mematikan telah diinduksi akan
menghasilkan perempuan dan keturunan laki-laki dalam rasio 2: 1 (hanya laki-laki dengan
kromosom CLB akan mati). Dengan teknik CLB, mendeteksi baru diinduksi resesif, lethals X-
linked adalah jelas dan bebas dari kesalahan; melibatkan tidak lebih kompleks daripada
mencetak untuk kehadiran atau tidak adanya keturunan laki-laki. Dengan prosedur ini, Muller
mampu menunjukkan peningkatan 150 kali lipat dalam frekuensi lethals X-linked setelah
mengobati lalat jantan dengan sinar X. lethals X-linked adalah jelas dan bebas dari kesalahan;
melibatkan tidak lebih kompleks daripada mencetak untuk kehadiran atau tidak adanya
keturunan laki-laki. Dengan prosedur ini, Muller mampu menunjukkan peningkatan 150 kali
lipat dalam frekuensi lethals X-linked setelah mengobati lalat jantan dengan sinar X. lethals X-
linked adalah jelas dan bebas dari kesalahan; melibatkan tidak lebih kompleks daripada
mencetak untuk kehadiran atau tidak adanya keturunan laki-laki. Dengan prosedur ini, Muller
mampu menunjukkan peningkatan 150 kali lipat dalam frekuensi lethals X-linked setelah
mengobati lalat jantan dengan sinar X.
Kami membahas demonstrasi Muller mutasi X-ray-induced pada kromosom X Drosophila
lebih lanjut dalam Sebuah Milestone di Genetika: Muller Menunjukkan Bahwa X Rays Apakah
mutagenik di situs Mahasiswa Companion.
Peneliti lain segera menunjukkan bahwa sinar X bersifat mutagenik pada organisme lain,
termasuk tanaman, hewan lain, dan mikroba. Selain itu, jenis lain dari energi tinggi radiasi
elektromagnetik dan banyak bahan kimia segera terbukti mutagen kuat. Kemampuan untuk
menginduksi mutasi pada gen berkontribusi sangat besar untuk kemajuan dalam genetika. Ini
memungkinkan peneliti untuk menginduksi mutasi pada gen dari bunga dan “knock out” fungsi
mereka. Organisme mutan kemudian bisa dipelajari untuk memperoleh informasi tentang
fungsi produk gen tipe liar. Pendekatan-mutasi diseksi-proses biologis ini telah terbukti
menjadi alat yang ampuh dalam analisis banyak proses biologis. sinar X memiliki banyak efek
pada jaringan hidup. Oleh karena itu, mutasi X-ray-induced memberikan sedikit informasi
tentang mekanisme molekuler dimana mutasi diproduksi.

GAMBAR 13.4 Teknik CLB

yang digunakan oleh Muller untuk mendeteksi mutasi X-linked resesif mematikan (m) di
Drosophila. The kawin ditampilkan di Cross II akan menghasilkan hanya keturunan perempuan
jika X-linked resesif mematikan hadir pada kromosom X yang diradiasi. Sepertiga dari
keturunan yang dihasilkan dari Palang II akan laki-laki jika tidak ada resesif mematikan pada
kromosom X yang diradiasi. Dengan demikian, mencetak mutasi yang mematikan hanya
melibatkan skrining keturunan Salib II untuk kehadiran atau tidak adanya laki-laki.
gas mustard (belerang mustard) adalah bahan kimia pertama terbukti mutagenik. Charlotte
Auerbach dan rekan-rekannya menemukan efek mutagenik gas mustard dan senyawa terkait
selama Perang Dunia II. Namun, karena potensi penggunaan gas mustard di perang kimia,
pemerintah Inggris ditempatkan hasil mereka pada daftar diklasifikasikan. Dengan demikian,
Auerbach dan rekan kerja bisa tidak mempublikasikan hasil mereka atau mendiskusikannya
dengan ahli genetika lain sampai perang berakhir. Senyawa yang mereka pelajari adalah contoh
dari kelas besar mutagen kimia yang mentransfer alkil (CH3O, CH3CH2O, dan sebagainya)
kelompok untuk basis dalam DNA; dengan demikian, mereka disebut agen alkylating. Seperti
sinar X, gas mustard memiliki banyak efek pada DNA. Kemudian, mutagen kimia yang
memiliki efek tertentu pada DNA ditemukan (Gambar 13.5).
MUTASI AKIBAT CHEMICALS
mutagen kimia dapat dibagi menjadi dua kelompok: (1) orang-orang yang mutagenik untuk
kedua replikasi dan nonreplicating DNA, seperti agen alkilasi dan asam nitrat; dan (2) orang-
orang yang mutagenik hanya untuk mereplikasi DNA, seperti basis purin analogs- dan
pirimidin dengan struktur mirip dengan basis normal dalam DNA. The analog dasar harus
dimasukkan ke dalam rantai DNA di tempat pangkalan normal selama replikasi untuk memberi
efek mutagenik mereka. Kelompok kedua mutagen juga termasuk pewarna akridin, yang
intercalate menjadi DNA dan meningkatkan kemungkinan kesalahan selama replikasi. The
analog dasar mutagenik memiliki struktur mirip dengan basis normal dan dimasukkan ke dalam
DNA selama replikasi. Namun, struktur mereka cukup berbeda dari basis normal dalam DNA
bahwa mereka meningkatkan frekuensi mispairing, dan dengan demikian mutasi, selama
replikasi. Dua analog dasar yang paling umum digunakan adalah 5-bromouracil dan 2-
aminopurine. The pirimidin 5-bromouracil adalah analog timin; bromin di 5 posisi serupa
dalam beberapa hal untuk kelompok metil (OCH3) di 5 posisi di timin. Namun, bromin pada
posisi ini mengubah distribusi muatan dan meningkatkan frekuensi pergeseran tautomerik
(lihat Gambar 13.1). Dalam bentuk keto lebih stabil, pasang 5-bromouracil dengan adenin.
Setelah pergeseran tautomerik ke bentuk enol nya, pasang 5-bromouracil dengan guanin
(Gambar 13.6). The pirimidin 5-bromouracil adalah analog timin; bromin di 5 posisi serupa
dalam beberapa hal untuk kelompok metil (OCH3) di 5 posisi di timin. Namun, bromin pada
posisi ini mengubah distribusi muatan dan meningkatkan frekuensi pergeseran tautomerik
(lihat Gambar 13.1). Dalam bentuk keto lebih stabil, pasang 5-bromouracil dengan adenin.
Setelah pergeseran tautomerik ke bentuk enol nya, pasang 5-bromouracil dengan guanin
(Gambar 13.6). The pirimidin 5-bromouracil adalah analog timin; bromin di 5 posisi serupa
dalam beberapa hal untuk kelompok metil (OCH3) di 5 posisi di timin. Namun, bromin pada
posisi ini mengubah distribusi muatan dan meningkatkan frekuensi pergeseran tautomerik
(lihat Gambar 13.1). Dalam bentuk keto lebih stabil, pasang 5-bromouracil dengan adenin.
Setelah pergeseran tautomerik ke bentuk enol nya, pasang 5-bromouracil dengan guanin
(Gambar 13.6).

Efek mutagenik dari 5-bromouracil adalah sama dengan yang diperkirakan untuk pergeseran
tautomerik di basis normal (lihat Gambar 13.2b), yaitu, transisi. Jika 5-bromouracil hadir dalam
bentuk enol kurang sering sebagai trifosfat nukleosida pada saat penggabungan menjadi untai
baru lahir dari DNA, itu akan dimasukkan guanin berlawanan di untai cetakan dan
menyebabkan G: C → A: T transisi (Gambar 13.7a). Namun, jika 5-bromouracil yang
tergabung dalam bentuk keto lebih sering adenin berlawanan (di tempat timin) dan mengalami
pergeseran tautomerik ke bentuk enol selama replikasi berikutnya, itu akan menyebabkan A: T
→ G: C transisi ( Gambar 13.7b). Dengan demikian, 5-bromouracil menginduksi transisi di
kedua arah, A: T ↔ G: C. Konsekuensi penting dari bidirectionality transisi 5-bromouracil-
diinduksi adalah bahwa mutasi awalnya diinduksi dengan analog timin ini juga dapat diinduksi
bermutasi kembali ke tipe liar dengan 5-bromouracil. 2-Aminopurine bertindak dengan cara
yang sama tapi dimasukkan di tempat adenin atau guanin.
nitrous acid (HNO2) adalah mutagen kuat yang bertindak di kedua mereplikasi atau
nonreplicating DNA. Asam nitrat menyebabkan deaminasi oksidatif dari gugus amino di
adenin, guanin, dan sitosin. Reaksi ini mengubah gugus amino kelompok keto dan perubahan
potensi ikatan hidrogen dari basis yang dimodifikasi (Gambar 13.8). Adenin adalah
dideaminasi untuk hipoksantin, yang dasar-pasangan dengan sitosin bukan timin. Sitosin
diubah menjadi urasil, yang dasar-pasangan dengan adenin bukan guanin. Deaminasi dari
guanin menghasilkan xanthine, tapi xanthine- seperti guanin-base-pasangan dengan sitosin.
Dengan demikian, deaminasi dari guanin tidak mutagenik. Karena deaminasi hasil adenin A:
T → G: C transisi, dan deaminasi sitosin menghasilkan G: C → A: transisi T, asam nitrat
menginduksi transisi di kedua arah, A: T ↔ G: C. Akibatnya, mutasi asam-induced nitrous
juga diinduksi untuk bermutasi kembali ke tipe liar oleh asam nitrat. Menguji pemahaman
Anda tentang mutasi asam-diinduksi nitrat dengan bekerja melalui Keterampilan Pemecahan
Masalah: Memprediksi Asam Amino Perubahan yang Diinduksi Kimia Mutagen.
Pewarna acridine seperti proflavin (lihat Gambar 13.5c), oranye akridin, dan seluruh rangkaian
senyawa terkait adalah mutagen kuat yang menginduksi mutasi frameshift (lihat Gambar
13.3b). Acridine yang bermuatan positif intercalate, atau sandwich sendiri, antara pasangan
yang ditumpuk dasar dalam DNA (Gambar 13.9). Dengan demikian, mereka meningkatkan
kekakuan dan mengubah konformasi dari helix ganda, menyebabkan tikungan ringan atau
Kinks dalam molekul. Ketika molekul DNA yang mengandung Acridine diselingi meniru,
penambahan dan penghapusan dari satu sampai beberapa pasangan basa terjadi. Seperti yang
kita harapkan, ini penambahan kecil dan penghapusan, biasanya dari pasangan basa tunggal,
menghasilkan frame membaca diubah untuk bagian dari distal gen mutasi (lihat Gambar
13.3b). Dengan demikian, mutasi acridine-diinduksi di ekson gen biasanya menghasilkan
produk gen berfungsi.
agen alkylating adalah bahan kimia yang menyumbangkan kelompok alkil ke molekul lain.
Mereka termasuk mustard nitrogen, dan metil dan etil metana sulfonat (MMS dan EMS) (lihat
Gambar 13.5a) -chemicals yang memiliki beberapa efek pada DNA. agen alkylating
menginduksi semua jenis mutasi, termasuk transisi, transversi, frameshifts, dan bahkan
penyimpangan kromosom, dengan frekuensi relatif yang tergantung pada reaktivitas agen yang
terlibat. Salah satu mekanisme mutagenesis oleh agen alkylating melibatkan transfer metil atau
etil kelompok untuk basis, sehingga diubah potensi dasar-pasangan. Misalnya, EMS
menyebabkan ethylation dari pangkalan di DNA di 7-N dan posisi 6-O. Ketika 7-ethylguanine
diproduksi, itu dasar-pasangan dengan timin menyebabkan G: transisi T: C → A. produk-
produk dasar alkilasi lainnya mengaktifkan proses perbaikan DNA rawan kesalahan yang
memperkenalkan transisi, transversi, dan mutasi frameshift selama proses perbaikan. Beberapa
agen alkylating, terutama difungsional alkylating agen (orang-orang dengan dua gugus alkil
reaktif), cross-link untai DNA atau molekul dan menginduksi kromosom istirahat, yang
mengakibatkan berbagai macam penyimpangan kromosom (Bab 6). agen alkylating sebagai
kelas karena itu menunjukkan efek mutagenik kurang spesifik dibandingkan analog dasar,
asam nitrat, atau Acridine. yang mengakibatkan berbagai macam penyimpangan kromosom
(Bab 6). agen alkylating sebagai kelas karena itu menunjukkan efek mutagenik kurang spesifik
dibandingkan analog dasar, asam nitrat, atau Acridine. yang mengakibatkan berbagai macam
penyimpangan kromosom (Bab 6). agen alkylating sebagai kelas karena itu menunjukkan efek
mutagenik kurang spesifik dibandingkan analog dasar, asam nitrat, atau Acridine.
GAMBAR 13,7 Efek mutagenik 5- bromouracil. (A) Ketika 5-bromouracil (BU) hadir dalam
bentuk yang kurang sering enol (oranye) pada saat penggabungan ke DNA, menginduksi G:
transisi T: C → A. (B) Ketika 5-bromouracil dimasukkan ke dalam DNA dalam bentuk yang
lebih umum keto (biru) dan pergeseran ke bentuk enol selama replikasi berikutnya, itu
menginduksi A: T → G: C transisi. Dengan demikian, 5-bromouracil dapat menginduksi
transisi di kedua arah, A: T ↔ G: C.
GAMBAR 13,8 asam Nitrous menginduksi mutasi oleh deaminasi oksidatif dari pangkalan di
DNA. bertobat nitrous acid (a) adenin untuk hipoksantin, menyebabkan A: T → G: C transisi;
(B) sitosin ke urasil, menyebabkan G: C → A: transisi T; dan (c) guanin ke xanthine, yang
tidak mutagenik. Bersama-sama, efek dari asam nitrit pada adenin dan sitosin menjelaskan
kemampuannya untuk menginduksi transisi di kedua arah, A: T ↔ G: C.
Berbeda dengan kebanyakan agen alkylating, agen hydroxylating hidroksilamin (NH2OH)
memiliki efek mutagenik tertentu. Itu menginduksi hanya G: C → A: transisi T. Ketika DNA
diobati dengan hidroksilamin, kelompok amino dari sitosin adalah hydroxylated. Yang
dihasilkan hydroxylaminocytosine dasar-pasangan dengan adenin, yang mengarah ke G: C →
A: transisi T. Karena kekhususan nya, hydroxylamine telah sangat berguna dalam
mengklasifikasikan mutasi transisi. Mutasi yang diinduksi untuk kembali ke tipe liar oleh asam
atau basa nitrous analog, dan karena itu awalnya disebabkan oleh transisi, dapat dibagi menjadi
dua kelas berdasarkan revertibility mereka dengan hidroksilamin. (1) Mereka dengan A:
pasangan basa T di lokasi mutan tidak akan diinduksi untuk kembali oleh hydroxylamine. (2)
Mereka dengan G: pasangan basa C di lokasi mutan akan diinduksi untuk kembali oleh
hydroxylamine. Demikian,

GAMBAR 13,9 interkalasi proflavin ke dalam double

helix DNA. Studi difraksi sinar-X menunjukkan bahwa pewarna acridine bermuatan positif
menjadi terjepit di antara pasangan basa yang ditumpuk.
MUTASI AKIBAT RADIASI
Bagian dari spektrum elektromagnetik (Gambar 13.10) dengan panjang gelombang yang lebih
pendek dan energi tinggi dari cahaya tampak dibagi menjadi radiasi pengion (sinar X, sinar
gamma, dan sinar kosmik) dan RADIASI NON-ION (sinar ultraviolet). Radiasi pengion adalah
energi tinggi dan berguna untuk diagnosis medis karena mereka menembus jaringan hidup
untuk jarak yang cukup besar. Dalam proses ini, energi tinggi sinar ini bertabrakan dengan
atom dan menyebabkan pelepasan elektron, menciptakan bermuatan positif radikal bebas atau
ion. Ion-ion, pada gilirannya, bertabrakan dengan molekul lain dan menyebabkan pelepasan
elektron tambahan. Hasilnya adalah bahwa kerucut ion terbentuk di sepanjang jalur masing-
masing ray energi tinggi saat melewati jaringan hidup. Proses ionisasi diinduksi oleh sinar
mesin diproduksi X, proton, dan neutron, serta oleh sinar alfa, beta, dan gamma dirilis oleh
isotop radioaktif seperti 32P, 35S, dan uranium-238 yang digunakan dalam reaktor nuklir. sinar
ultraviolet, memiliki energi yang lebih rendah daripada radiasi pengion, menembus hanya
lapisan permukaan sel-sel pada tumbuhan dan hewan yang lebih tinggi dan tidak menyebabkan
ionizations.
Sinar ultraviolet menghilangkan energi mereka untuk atom yang mereka hadapi, meningkatkan
elektron di orbital terluar ke tingkat energi yang lebih tinggi, negara disebut sebagai eksitasi.

GAMBAR
13.10 elektromagnetik spektrum.
Molekul yang mengandung atom dalam baik bentuk ionik atau keadaan tereksitasi secara
kimiawi lebih reaktif daripada yang mengandung atom di negara-negara yang stabil normal
mereka. reaktivitas peningkatan atom hadir dalam molekul DNA bertanggung jawab untuk
sebagian besar mutagenisitas radiasi pengion dan sinar ultraviolet.

GAMBAR 13.11
Hubungan antara dosis iradiasi dan frekuensi mutasi pada Drosophila.
sinar X dan bentuk lain dari radiasi pengion yang kuantitatif menilai di rontgen (r) unit, yang
merupakan ukuran jumlah ionizations per satuan volume di bawah satu set standar kondisi.
Secara khusus, satu unit rontgen adalah kuantitas radiasi pengion yang menghasilkan 2,083
109 ion pasang di satu sentimeter kubik udara pada 0C dan tekanan 760 mm air raksa.
Perhatikan bahwa dosis iradiasi dalam satuan rontgen tidak melibatkan skala waktu. Dosis yang
sama dapat diperoleh dengan intensitas rendah iradiasi selama jangka waktu yang panjang atau
intensitas tinggi iradiasi untuk waktu singkat. Hal ini penting karena dalam kebanyakan studi
frekuensi mutasi titik induksi berbanding lurus dengan dosis iradiasi (Gambar 13.11). Sebagai
contoh, X-iradiasi Drosophila sperma menyebabkan peningkatan sekitar 3 persen di tingkat
mutasi untuk setiap kenaikan 1000-r dosis iradiasi. hubungan linear ini menunjukkan bahwa
induksi mutasi dengan sinar X menunjukkan kinetika tunggal-hit, yang berarti bahwa setiap
hasil mutasi dari acara ionisasi tunggal. Artinya, setiap ionisasi memiliki probabilitas tetap
menginduksi mutasi di bawah satu set standar kondisi.
Apa tingkat yang aman dari radiasi? Pengembangan dan penggunaan bom atom dan kecelakaan
di pembangkit listrik tenaga nuklir telah dihasilkan kekhawatiran tentang paparan radiasi
pengion. Linier hubungan antara tingkat mutasi dan dosis radiasi menunjukkan bahwa tidak
ada tingkat aman dari radiasi. Sebaliknya, hasil menunjukkan bahwa semakin tinggi dosis
iradiasi, semakin tinggi tingkat mutasi, dan rendah dosis, semakin rendah tingkat mutasi.
Bahkan tingkat yang sangat rendah iradiasi memiliki probabilitas tertentu rendah, tapi nyata,
merangsang mutasi.
Dalam Drosophila sperma, iradiasi kronis (rendahnya tingkat iradiasi selama jangka waktu)
adalah sebagai efektif dalam mendorong mutasi sebagai iradiasi akut (total dosis yang sama
dari iradiasi diberikan pada intensitas tinggi untuk jangka waktu yang singkat). Namun, pada
tikus, hasil iradiasi kronis pada mutasi yang lebih sedikit dari dosis yang sama dari radiasi akut.
Selain itu, ketika tikus diperlakukan dengan dosis intermiten iradiasi, frekuensi mutasi sedikit
lebih rendah daripada ketika mereka diperlakukan dengan jumlah total yang sama dari iradiasi
dalam dosis terus menerus. Tanggapan diferensial lalat buah dan mamalia untuk iradiasi kronis
diduga hasil dari perbedaan efisiensi dengan yang spesies ini memperbaiki kerusakan
irradiationinduced di DNA. mekanisme perbaikan mungkin ada di spermatogonium dan oosit
mamalia yang tidak berfungsi di Drosophila sperma. Namun demikian, kita harus menekankan
bahwa semua perlakuan iradiasi ini mutagenik, meskipun untuk derajat yang berbeda, baik
Drosophila dan mamalia.
radiasi pengion juga menginduksi perubahan bruto dalam struktur kromosom, termasuk delesi,
duplikasi, inversi, dan translokasi (Bab 6). penyimpangan kromosom ini hasil dari istirahat
akibat radiasi di kromosom. Karena penyimpangan ini membutuhkan dua istirahat kromosom,
mereka menunjukkan kinetika dua-hit daripada kinetika single-hit diamati untuk mutasi titik.
Ultraviolet (UV) radiasi tidak memiliki energi yang cukup untuk menginduksi ionizations.
Namun, mudah diserap oleh banyak molekul organik seperti purin dan pirimidin dalam DNA,
yang kemudian memasuki keadaan yang lebih reaktif atau bersemangat. Sinar UV menembus
jaringan hanya sedikit. Dengan demikian, pada organisme multisel, hanya lapisan epidermis
sel biasanya terkena efek UV. Namun, sinar ultraviolet adalah mutagen ampuh bagi organisme
uniseluler. Penyerapan maksimum UV oleh DNA adalah pada panjang gelombang 254 nm.
mutagenisitas maksimal juga terjadi pada 254 nm, menunjukkan bahwa proses mutasi imbas
UV dimediasi langsung oleh penyerapan UV oleh purin dan pirimidin. In vitro studi
menunjukkan bahwa pirimidin menyerap kuat pada 254 nm dan, sebagai hasilnya, menjadi
sangat reaktif. Dua produk utama penyerapan UV oleh pirimidin (timin dan sitosin) yang hidrat
pirimidin dan dimer pirimidin (Gambar 13.12). dimer timin menyebabkan mutasi dalam dua
cara. (1) dimer mengganggu struktur heliks ganda DNA dan mengganggu replikasi DNA
akurat. (2) Kesalahan terjadi selama proses seluler yang memperbaiki cacat dalam DNA,
seperti dimer timin imbas UV (lihat Mekanisme bagian DNA Repair kemudian dalam bab ini).
 GAMBAR
13.12 photoproducts pirimidin dari radiasi UV. (A) Hidrolisis sitosin ke bentuk hidrat yang
dapat menyebabkan mispairing pangkalan selama replikasi. (B) Cross-linking molekul timin
yang berdekatan untuk membentuk dimer timin, yang memblokir replikasi DNA.
MUTASI AKIBAT TRANSPOSABEL GENETIKA UNSUR

GAMBAR 13,13 Mekanisme mutasi transposoninduced. Penyisipan elemen genetik

transposabel (merah) menjadi gen wildtype (kiri) biasanya akan membuat gen nonfungsional
(kanan). Sebuah produk gen terpotong biasanya hasil dari sinyal transcriptionor terjemahan-
terminasi, atau keduanya, yang terletak di dalam transposon.
CAG dan CTG mengulangi trinucleotide terlibat dalam beberapa penyakit neurologis warisan,
termasuk penyakit Huntington, distrofi myotonic, penyakit Kennedy, atrofi pallidoluysian
dentatorubral, penyakit Machado-Joseph, dan penyakit degeneratif syaraf. Dalam semua
gangguan neurologis ini, tingkat keparahan penyakit ini berkorelasi dengan copy trinucleotide
nomor-semakin tinggi jumlah copy, semakin parah gejala penyakit. Selain itu, trinucleotides
diperluas terkait dengan penyakit ini tidak stabil dalam sel somatik dan antar generasi.
Ketidakstabilan ini menimbulkan fenomena antisipasi, yang merupakan keparahan
meningkatnya penyakit atau usia awal onset yang terjadi pada generasi berturut-turut sebagai
nomor copy trinucleotide meningkat. Sebuah mekanisme yang mungkin ekspansi trinucleotide
dibahas dalam Bab 16
organisme hidup mengandung unsur DNA yang luar biasa yang dapat berpindah dari satu situs
dalam genom ke situs lain. transposon ini, atau elemen genetik transposabel, adalah subyek
dari Bab 17. penyisipan transposon ke dalam gen akan sering membuat gen nonfungsional
(Gambar 13.13). Jika gen mengkode produk penting, fenotipe mutan cenderung menghasilkan.
Para ahli genetika sekarang tahu bahwa banyak mutan klasik jagung, Drosophila, E. coli, dan
organisme lain disebabkan oleh penyisipan elemen genetik transposabel ke gen penting.
Memang, alel keriput Mendel dalam kacang yang (Bab 3) dan mutasi pertama (w1)
menyebabkan mata putih di Drosophila (Bab 5) baik dihasilkan dari penyisipan unsur
berpindah. Lihat Bab 17 untuk rincian tambahan tentang mekanisme yang transposon bergerak
dan, dalam proses,
MENGEMBANGKAN trinucleotide mengulangi dan diwariskan PENYAKIT MANUSIA
Semua jenis mutasi dibahas dalam bagian sebelumnya dari bab ini terjadi pada manusia. Selain
itu, jenis lain dari mutasi terjadi yang berhubungan dengan penyakit manusia. urutan diulang
satu sampai enam pasang nukleotida dikenal sebagai mengulangi tandem sederhana.
mengulangi tersebut tersebar di seluruh genom manusia. Mengulangi dari tiga pasang
nukleotida, mengulangi trinucleotide, dapat meningkatkan jumlah copy dan menyebabkan
penyakit warisan pada manusia. Beberapa trinucleotides telah ditunjukkan untuk menjalani
kenaikan tersebut dalam jumlah copy. Diperluas CGG trinucleotide mengulangi di situs
FRAXA pada kromosom X bertanggung jawab untuk sindrom X rapuh, bentuk kedua paling
umum dari warisan keterbelakangan mental pada manusia (Bab 16). kromosom X yang normal
mengandung dari 6 sampai 50 salinan ulangi CGG di situs FRAXA.
Mutasi yang diinduksi oleh bahan kimia, pengion radiasi, sinar ultraviolet, dan unsur-unsur
genetik transposabel endogen. mutasi titik adalah tiga jenis: (1) transisi-purin untuk purin dan
pirimidin untuk substitusi pirimidin; (2) transversi-purin untuk pirimidin dan pirimidin untuk
substitusi purin; dan (3) frameshift mutasi-penambahan atau penghapusan satu atau dua pasang
nukleotida, yang mengubah kerangka pembacaan distal gen ke lokasi mutasi. Beberapa
penyakit manusia mewarisi disebabkan oleh mengulangi trinucleotide diperluas.
Mutasi: Fitur Dasar Proses
Mutasi terjadi pada semua organisme dari virus ke manusia. Mereka dapat terjadi secara
spontan atau diinduksi oleh agen mutagenik. Mutasi biasanya merupakan proses acak, tidak
adaptif.
Mutasi terjadi pada semua gen dari semua organisme hidup. Mutasi ini memberikan variabilitas
genetik baru yang memungkinkan organisme untuk beradaptasi dengan perubahan lingkungan.
Dengan demikian, mutasi telah, dan terus menjadi, penting untuk proses evolusi. Sebelum kita
membahas efek fenotipik mutasi, mari kita mempertimbangkan beberapa fitur dasar dari proses
penting ini.
MUTASI: somatik OR Germinal
Sebuah mutasi dapat terjadi pada setiap sel dan pada setiap tahap dalam pengembangan
organisme multisel. Efek langsung dari mutasi dan kemampuannya untuk menghasilkan
perubahan fenotipe ditentukan oleh dominasinya, jenis sel di mana itu terjadi, dan waktu di
mana itu terjadi selama siklus hidup organisme. Pada hewan yang lebih tinggi, kuman-line sel
yang menimbulkan gamet terpisah dari garis keturunan sel lain di awal pembangunan (Bab 2).
Semua sel nongerm-line adalah sel somatik. mutasi germinal adalah mereka yang terjadi pada
sel germinal-line, sedangkan mutasi somatik terjadi pada sel somatik.
Jika mutasi terjadi dalam sel somatik, fenotip mutan yang dihasilkan akan terjadi hanya dalam
keturunan sel itu. mutasi tidak akan menular melalui gamet ke progeni. Delicious apel (Gambar
13.14) dan pusar oranye adalah contoh dari fenotipe mutan yang dihasilkan dari mutasi yang
terjadi pada sel somatik. The Lezat apel ditemukan pada tahun 1881 oleh Jessie Hiatt, seorang
Iowa petani. Ini telah kemudian telah dimodifikasi oleh pemilihan mutasi somatik tambahan.
Pohon buah-buahan di mana mutasi asli terjadi adalah mosaik somatik. Untungnya,
perbanyakan vegetatif adalah layak untuk kedua apel lezat dan pusar oranye, dan hari ini
banyak keturunan dari cangkokan dan tunas telah diabadikan mutasi asli.
Jika mutasi dominan terjadi pada sel germinal-line, efek mereka dapat dinyatakan langsung di
keturunan. Jika mutasi adalah resesif, efek mereka sering dikaburkan di diploid. mutasi germinal dapat
terjadi pada setiap tahap dalam siklus reproduksi organisme. Jika mutasi muncul dalam gamet, hanya
satu anggota dari keturunan cenderung memiliki gen mutan. Jika mutasi terjadi dalam sel germ-line
primordial dari testis atau ovarium, beberapa gamet mungkin menerima gen mutan, meningkatkan
potensi untuk pelestarian. Dengan demikian, dominasi alel mutan dan tahap dalam siklus reproduksi
di mana mutasi terjadi adalah faktor utama dalam menentukan kemungkinan bahwa alel mutan akan
diwujudkan dalam suatu organisme.

Yang paling awal yang tercatat mutasi germinal dominan pada hewan domestik yang diamati oleh Seth
Wright pada tahun 1791 di ladangnya oleh Sungai Charles di Dover, Massachusetts. Di antara kawanan
dombanya, Wright melihat seekor domba jantan yang aneh dengan kaki sangat pendek. Terpikir
olehnya bahwa hal itu akan menjadi keuntungan untuk memiliki seluruh kawanan domba-domba
berkaki pendek, yang tidak bisa melompati pagar batu rendah di lingkungan New England-nya. Wright
menggunakan ram berkaki pendek baru untuk berkembang biak domba betina di musim depan. Dua
domba mereka memiliki kaki pendek. domba berkaki pendek kemudian dibesarkan bersama-sama,
dan garis dikembangkan di mana sifat baru diungkapkan dalam semua individu.

MUTASI: spontan atau diinduksi

Ketika mutasi-seperti baru sebagai salah satu yang diproduksi sheep- berkaki pendek Wright terjadi,
apakah disebabkan oleh beberapa agen di lingkungan atau apakah itu hasil dari proses yang melekat
dalam organisme hidup? mutasi spontan adalah mereka yang terjadi tanpa diketahui penyebabnya.
Mereka mungkin benar-benar menjadi spontan, yang dihasilkan dari rendahnya tingkat kesalahan
metabolisme bawaan, atau mereka mungkin benar-benar disebabkan oleh agen yang tidak diketahui
hadir di lingkungan. mutasi induksi, seperti yang sudah dibahas, adalah mereka yang dihasilkan dari
paparan organisme untuk agen fisik dan kimia yang menyebabkan perubahan DNA (atau RNA dalam
beberapa virus). agen seperti ini disebut mutagen; mereka termasuk iradiasi pengion, sinar ultraviolet,
dan berbagai macam bahan kimia, seperti yang dibahas di bagian sebelumnya.

Secara operasional, tidak mungkin untuk membuktikan bahwa mutasi tertentu terjadi secara spontan
atau diinduksi oleh agen mutagenik. Genetika harus membatasi perbedaan tersebut ke tingkat
populasi. Jika tingkat mutasi meningkat seratus kali lipat oleh pengobatan populasi dengan mutagen,
rata-rata 99 dari setiap 100 mutasi hadir dalam populasi akan telah diinduksi oleh mutagen tersebut.
Para peneliti sehingga dapat membuat perbandingan yang valid antara mutasi spontan dan induksi
statistik dengan membandingkan populasi terpapar agen mutagenik dengan populasi kontrol yang
belum terkena mutagen tersebut.

mutasi spontan jarang terjadi, meskipun frekuensi yang diamati bervariasi dari gen untuk gen dan dari
organisme ke organisme. Pengukuran frekuensi mutasi spontan untuk berbagai gen dari fag dan
bakteri berkisar dari sekitar 108-1010 mutasi terdeteksi per pasang nukleotida per generasi. Untuk
eukariota, perkiraan tingkat mutasi berkisar dari sekitar 107-109 mutasi terdeteksi per pasang
nukleotida per generasi (mengingat hanya gen-gen yang datanya luas tersedia). Dalam
membandingkan tingkat mutasi per nukleotida dengan tingkat mutasi per gen, daerah pengkode gen
rata-rata biasanya diasumsikan 1000 pasang nukleotida panjang. Dengan demikian, tingkat mutasi per
gen bervariasi dari sekitar 104-107 per generasi.

Terapi dengan obat mutagenik dapat meningkatkan frekuensi mutasi oleh lipat. Frekuensi mutasi per
gen pada bakteri dan virus dapat meningkat menjadi lebih 1 persen oleh pengobatan dengan mutagen
kimia ampuh. Artinya, lebih 1 persen dari gen dari organisme diobati akan berisi mutasi, atau,
menyatakan berbeda, lebih 1 persen dari fag atau bakteri dalam populasi akan memiliki mutasi pada
gen tertentu.

MUTASI: BIASANYA A ACAK, PROSES adaptif

Tikus di banyak kota tidak lagi dipengaruhi oleh antikoagulan yang secara tradisional telah digunakan
sebagai racun tikus. Banyak populasi kecoa yang tidak sensitif terhadap Chlordane, racun yang
digunakan untuk mengendalikan mereka pada 1950-an. populasi lalat sering menunjukkan tingkat
tinggi resistensi terhadap banyak insektisida. Semakin banyak patogen mikroorganisme menjadi
resisten terhadap antibiotik yang dikembangkan untuk mengendalikan mereka. Pengenalan pestisida
dan antibiotik oleh manusia diproduksi lingkungan baru bagi organisme ini. Mutasi memproduksi
resistensi terhadap pestisida tersebut dan antibiotik terjadi; organisme sensitif tewas; dan mutan
dikalikan untuk menghasilkan populasi resisten baru. Banyak kasus seperti evolusi melalui mutasi dan
seleksi alam didokumentasikan dengan baik.

Contoh-contoh ini menimbulkan pertanyaan dasar tentang sifat mutasi. Apakah mutasi acara murni
acak di mana tekanan lingkungan hanya mempertahankan mutasi yang sudah ada? Atau mutasi
diarahkan oleh tekanan lingkungan? Misalnya, jika Anda memotong ekor tikus selama beberapa
generasi, akan Anda akhirnya menghasilkan strain tikus berekor? Meskipun keyakinan Jean Lamarck
dan Trofim Lysenko, yang percaya pada warisan “sifat-sifat yang diperoleh” -traits dikenakan pada
organisme dengan lingkungan faktor-jawaban tidak; tikus akan terus lahir dengan ekor.

Hari ini, sulit untuk memahami bagaimana Lysenko bisa menjual keyakinannya pada Lamarckisme-
warisan yang diperoleh sifat-to mereka yang berkuasa di Uni Soviet dari tahun 1937 melalui 1964.
Namun, tidak membuktikan Lamarckisme adalah bukan tugas yang mudah, terutama dalam hal
mikroorganisme, di mana bahkan budaya kecil sering mengandung miliaran organisme.

Sebagai contoh, mari kita pertimbangkan populasi bakteri seperti E. coli tumbuh di lingkungan
streptomisin bebas. Ketika terkena streptomisin, sebagian besar bakteri akan dibunuh oleh antibiotik.
Namun, jika populasi cukup besar, hal itu akan segera menimbulkan budaya streptomisin-tahan di
mana semua sel yang resisten terhadap antibiotik. Apakah streptomisin cukup pilih langka, terjadi
secara acak mutan yang ada sebelumnya dalam populasi, atau semua sel memiliki beberapa
probabilitas rendah mengembangkan resistensi dalam menanggapi kehadiran streptomycin?
Bagaimana ahli genetika dapat membedakan antara dua kemungkinan ini? Resistensi terhadap
streptomisin hanya dapat dideteksi dengan memperlakukan budaya dengan antibiotik. Bagaimana,
kemudian, dapat ahli genetika menentukan apakah bakteri resisten yang hadir sebelum paparan
streptomisin,

Pada tahun 1952, Joshua dan Esther Lederberg mengembangkan teknik baru penting yang disebut
replika plating. Teknik ini memungkinkan mereka untuk menunjukkan kehadiran mutan resisten
antibiotik dalam budaya bakteri sebelum paparan antibiotik (Gambar 13.15). The Lederbergs pertama
diencerkan budaya bakteri, menyebarkan bakteri pada permukaan media nutrien agar semisolid di
cawan petri, dan diinkubasi piring sampai setiap bakteri telah menghasilkan koloni terlihat pada
permukaan agar-agar. Mereka selanjutnya terbalik setiap piring dan menekannya ke beludru steril
ditempatkan di atas sebuah blok kayu. Beberapa sel dari masing-masing koloni menempel beludru.
Mereka kemudian dengan lembut menekan piring steril agar media nutrisi yang mengandung
streptomycin ke beludru. Mereka mengulangi prosedur replika-plating dengan banyak piring, masing-
masing berisi sekitar 200 koloni bakteri. Setelah mereka diinkubasi piring selektif (yang mengandung
streptomisin) semalam, koloni streptomycin tahan langka telah terbentuk.

The Lederbergs kemudian diuji koloni pada lempeng non selektif (yang tidak mengandung
streptomycin) karena kemampuan mereka untuk tumbuh pada media yang mengandung
streptomisin. Hasil mereka definitif. Koloni yang tumbuh pada piring replika selektif hampir selalu
terdapat sel streptomisin-tahan, sedangkan koloni yang gagal tumbuh pada media selektif jarang
terdapat sel-sel resisten (Gambar 13.15).

Jika mutasi yang membuat bakteri resisten terhadap streptomisin terjadi pada tahap awal dalam
pertumbuhan koloni, sel tahan akan membelah dan menghasilkan dua, lalu empat, kemudian delapan,
dan akhirnya sejumlah besar bakteri resisten. Jadi, jika mutasi adalah acak terjadi, proses adaptif,
banyak koloni yang terbentuk pada pelat non selektif akan berisi lebih dari satu bakteri resisten
antibiotik dan akan menimbulkan budaya tahan saat diuji untuk pertumbuhan pada media selektif.
Namun, jika mutasi adaptif dan mutasi resistensi streptomisin terjadi hanya setelah terpapar
antibiotik,

GAMBAR
13.15 Joshua dan penggunaan Esther Lederberg tentang replika plating untuk menunjukkan sifat acak
atau nondirected mutasi. Untuk mempermudah, hanya empat koloni ditampilkan di setiap lempeng,
dan hanya dua yang diuji untuk ketahanan streptomisin pada Langkah 5. Sebenarnya, setiap piring
akan berisi sekitar 200 koloni, dan banyak piring akan digunakan untuk menemukan jumlah yang
memadai koloni mutan.

Jadi, dengan menggunakan teknik replika-plating mereka, Lederbergs menunjukkan adanya mutan
streptomisin tahan pada populasi bakteri sebelum eksposur mereka terhadap antibiotik. hasil mereka,
bersama dengan orang-orang dari banyak percobaan lainnya, telah menunjukkan bahwa stres
lingkungan tidak langsung atau menyebabkan perubahan genetik sebagai Lysenko percaya; itu hanya
memilih mutasi yang sudah ada sebelumnya langka yang menghasilkan fenotipe yang lebih baik
disesuaikan dengan lingkungan baru.

MUTASI: A PROSES REVERSIBEL

Seperti yang kita bahas sebelumnya, mutasi pada gen tipe liar dapat menghasilkan alel mutan yang
menghasilkan suatu fenotipe abnormal. Namun, alel mutan juga dapat bermutasi kembali ke bentuk
yang mengembalikan tipe liar fenotipe. Artinya, mutasi adalah proses reversibel. Mutasi gen tipe liar
ke bentuk yang menghasilkan fenotipe mutan disebut sebagai maju mutasi. Namun, terkadang
penunjukan tipe liar dan fenotipe mutan cukup sewenang-wenang. Mereka mungkin hanya mewakili
dua fenotip yang berbeda, tapi normal,. Sebagai contoh, ahli genetika mempertimbangkan alel untuk
warna mata coklat dan biru pada manusia baik untuk menjadi tipe liar. Namun, dalam populasi terdiri
hampir seluruhnya dari individu bermata cokelat, alel untuk mata biru mungkin dianggap sebagai alel
mutan.

GAMBAR 13.16 Pemulihan asli tipe liar fenotipe dari suatu organisme dapat terjadi oleh (1) kembali
mutasi atau (2) penekan mutasi (ditampilkan pada kromosom yang sama untuk kesederhanaan).
Beberapa mutan dapat kembali ke tipe liar fenotipe oleh kedua mekanisme. Revertants dari dua jenis
dapat dibedakan dengan backcrosses ke tipe liar asli. Jika mutasi kembali terjadi, semua keturunan
silang balik akan tipe liar. Jika mutasi penekan bertanggung jawab, beberapa keturunan silang balik
akan memiliki fenotip mutan (2c).

Ketika mutasi kedua mengembalikan fenotip asli hilang karena mutasi sebelumnya, proses ini disebut
pengembalian atau mutasi sebaliknya. Pembalikan dapat terjadi dalam dua cara yang berbeda: (1)
oleh mutasi kembali, mutasi kedua di tempat yang sama pada gen sebagai mutasi asli, memulihkan
tipe liar urutan nukleotida, atau (2) oleh penekan mutasi, mutasi kedua di lokasi yang berbeda dalam
genom, yang mengkompensasi efek dari mutasi pertama (Gambar 13.16). Kembali mutasi
mengembalikan tipe liar nukleotida urutan asli dari gen, sedangkan mutasi penekan tidak. mutasi
penekan dapat terjadi pada situs yang berbeda pada gen yang sama dengan mutasi asli atau dalam
gen yang berbeda, bahkan pada kromosom yang berbeda.

Beberapa mutasi kembali terutama oleh mutasi kembali, sedangkan yang lain melakukannya hampir
secara eksklusif melalui terjadinya mutasi penekan. Dengan demikian, dalam studi genetik, peneliti
sering harus membedakan antara dua kemungkinan ini dengan silang balik yang reversi fenotip
dengan yang asli tipe liar organisme. Jika tipe liar fenotipe dipulihkan oleh mutasi penekan, mutasi asli
masih akan hadir dan dapat dipisahkan dari mutasi penekan oleh rekombinasi (Gambar 13.16). Jika
tipe liar fenotipe dipulihkan oleh mutasi kembali, semua keturunan silang balik akan tipe liar.

POIN KUNCI

Mutasi terjadi di kedua kuman-line dan sel somatik, tetapi hanya germ-line mutasi ditransmisikan ke
keturunannya.

Mutasi dapat terjadi secara spontan atau diinduksi oleh agen mutagenik di lingkungan.

Mutasi biasanya adalah proses adaptif dimana stres lingkungan hanya memilih organisme dengan
yang sudah ada sebelumnya, secara acak terjadi mutasi.

Pemulihan tipe liar fenotipe dalam organisme mutan dapat hasil dari baik mutasi kembali atau mutasi
penekan.

Mutasi: Fenotipik Efek

Efek mutasi pada fenotipe berkisar dari tidak ada perubahan diamati untuk mematikan.

Efek mutasi pada rentang fenotipe dari sehingga perubahan kecil bahwa mereka dapat dideteksi
hanya dengan teknik genetik atau biokimia khusus, untuk modifikasi gross morfologi, untuk lethals.
Sebuah gen adalah urutan pasangan nukleotida yang biasanya mengkode polipeptida tertentu. Setiap
mutasi yang terjadi di dalam gen tertentu sehingga akan menghasilkan alel baru gen itu. Gen yang
mengandung mutasi dengan tidak berpengaruh pada fenotipe atau efek kecil yang dapat dikenali
hanya dengan teknik khusus disebut isoalleles. Mutasi lainnya menghasilkan alel nol yang
mengakibatkan tidak ada produk gen atau produk gen benar-benar berfungsi. Jika mutasi dari tipe
yang terakhir terjadi pada gen yang diperlukan untuk pertumbuhan organisme, individu yang
homozigot untuk mutasi tidak akan bertahan. Mutasi tersebut disebut lethals resesif.

Mutasi dapat berupa resesif atau dominan. Dalam organisme monoploid seperti virus dan bakteri,
baik mutasi resesif dan dominan dapat dikenali oleh efeknya pada fenotipe organisme di mana mereka
terjadi. Dalam organisme diploid seperti lalat buah dan manusia, mutasi resesif akan mengubah
fenotipe hanya ketika hadir dalam kondisi homozigot. Dengan demikian, di diploid, mutasi paling
resesif tidak akan diakui pada saat terjadinya mereka karena mereka akan hadir di negara heterozigot.
X-linked mutasi resesif adalah pengecualian; mereka akan dinyatakan dalam keadaan hemizygous di
heterogamet seks (misalnya, laki-laki pada manusia dan lalat buah; betina pada burung).

GAMBAR 13,17 Perubahan

rasio jenis kelamin oleh mutasi mematikan resesif terkait-X. Betina heterozigot untuk X-linked resesif
mematikan akan menghasilkan perempuan dan keturunan laki-laki dalam rasio 2: 1.
MUTASI DENGAN EFEK FENOTIPIK: BIASANYA merusak dan resesif

Sebagian besar mutasi yang telah diidentifikasi dan dipelajari oleh ahli genetika yang merusak dan
resesif. Hasil ini diharapkan jika kita mempertimbangkan apa yang diketahui tentang kontrol genetik
metabolisme dan teknik yang tersedia untuk mengidentifikasi mutasi. Sebagaimana kita bahas pada
Bab 4, metabolisme terjadi dengan urutan dari reaksi kimia, dengan setiap langkah dikatalisasi oleh
enzim spesifik dikodekan oleh satu atau lebih gen. Mutasi pada gen ini sering menghasilkan blok di
jalur metabolik (Gambar 13.18). blok ini terjadi karena perubahan dalam urutan pasangan basa gen
sering menyebabkan perubahan dalam urutan asam amino polipeptida (Gambar 13.19), yang dapat
mengakibatkan produk nonfungsional (Gambar 13.18). Memang, ini adalah efek yang paling umum
diamati dari mutasi dengan mudah terdeteksi. Mengingat alel wildtype pengkodean enzim aktif dan
alel mutan pengkodean enzim kurang aktif atau sama sekali tidak aktif, itu jelas mengapa sebagian
besar mutasi diamati akan resesif. Jika sel mengandung kedua bentuk aktif dan tidak aktif dari enzim
tertentu, bentuk aktif biasanya akan mengkatalisis reaksi yang bersangkutan. Oleh karena itu, alel
menentukan produk yang aktif biasanya akan dominan, dan alel pengkodean produk yang tidak aktif
akan resesif (Bab 4).

GAMBAR 13,18 alel mutan

resesif sering mengakibatkan blok di jalur metabolik. Jalur dapat hanya beberapa langkah panjang,
seperti digambarkan di sini, atau banyak langkah panjang. The alel wild type dari setiap gen biasanya
mengkodekan enzim fungsional yang mengkatalisis reaksi yang tepat. Kebanyakan mutasi yang terjadi
pada gen tipe liar menghasilkan bentuk yang berubah enzim dengan mengurangi atau tidak ada
aktivitas. Dalam keadaan homozigot, alel mutan yang menghasilkan produk yang tidak aktif
menyebabkan blok metabolik (O \\ n) karena kurangnya aktivitas enzim yang diperlukan.
GAMBAR 13.19 Ikhtisar proses mutasi dan ekspresi tipe liar dan alel mutan. Mutasi mengubah urutan
pasang nukleotida dalam gen, yang, pada gilirannya, menyebabkan perubahan dalam urutan asam
amino dari polipeptida dikodekan oleh gen ini. AG: Pasangan C dasar (atas, kiri) telah bermutasi ke A:
pasangan basa T (atas, kanan). Mutasi ini mengubah satu kodon mRNA dari GAG ke AAG dan satu
asam amino dalam produk polipeptida dari asam glutamat (glu) ke lisin (lys). Perubahan seperti itu
sering menghasilkan produk gen berfungsi.

Karena degenerasi dan ketertiban dalam kode genetik (Bab 12), banyak mutasi tidak berpengaruh
pada fenotipe organisme; mereka disebut mutasi netral. Tapi kenapa harus yang paling mutasi dengan
efek fenotip dikenali mengakibatkan aktivitas gen-produk menurun atau tidak ada aktivitas gen-
produk? Sebuah alel wildtype dari gen yang mengkode enzim wildtype atau protein struktural akan
dipilih untuk kegiatan yang optimal selama evolusi. Dengan demikian mutasi yang menyebabkan
perubahan acak dalam sekuens asam amino yang sangat disesuaikan, biasanya akan menghasilkan
produk kurang aktif atau sama sekali tidak aktif. Anda dapat membuat analogi dengan kompleks,
mesin dengan hati-hati direkayasa seperti komputer atau mobil. Jika Anda secara acak memodifikasi
komponen penting, mesin tidak mungkin untuk melakukan serta itu sebelum dilakukan perubahan.

EFEK mutasi pada gen globin MANUSIA

hemoglobin manusia mutan memberikan ilustrasi yang baik dari efek buruk dari mutasi. Dalam Bab 1
dan 12, kita membahas struktur hemoglobin dan efek traumatis dari hemoglobin satu hemoglobin
varian, sel-sabit. Ingat bahwa bentuk utama dari hemoglobin pada orang dewasa (hemoglobin A) berisi
dua alpha identik () rantai dan dua identik beta () rantai. Setiap polipeptida terdiri dari urutan spesifik
141 asam amino, sedangkan masing-masing rantai adalah 146 asam amino panjang. Karena kesamaan
dalam sekuens asam amino mereka, semua rantai globin (dan, dengan demikian, gen struktural
mereka) diyakini telah berevolusi dari nenek moyang yang sama.

Banyak varian yang berbeda dari hemoglobin dewasa telah diidentifikasi dalam populasi manusia, dan
beberapa dari mereka memiliki efek fenotipik yang parah. Banyak varian awalnya terdeteksi oleh
perilaku elektroforesis berubah mereka (gerakan dalam medan listrik karena mengisi perbedaan-lihat
Bab 14). Varian hemoglobin memberikan ilustrasi yang sangat baik dari efek mutasi pada struktur dan
fungsi dari produk gen dan, akhirnya, pada fenotipe dari individu yang terkena.
Ketika urutan asam amino dari rantai hemoglobin A dan hemoglobin pada pasien dengan penyakit sel
sabit (hemoglobin S) ditentukan dan dibandingkan, hemoglobin S ditemukan berbeda dari hemoglobin
A hanya pada satu posisi. Asam amino keenam dari ujung amino dari rantai hemoglobin A adalah asam
glutamat (asam amino bermuatan negatif). Rantai hemoglobin S mengandung valin (tanpa biaya pada
pH netral) di posisi itu. Rantai hemoglobin A dan hemoglobin S adalah identik. Dengan demikian,
perubahan dari asam amino tunggal dalam satu polipeptida dapat memiliki efek yang parah pada
fenotip.

Dalam kasus hemoglobin S, substitusi valin untuk asam glutamat pada posisi keenam dalam rantai
memungkinkan ikatan baru untuk membentuk, yang mengubah konformasi protein dan
menyebabkan agregasi dari molekul hemoglobin. Perubahan ini mengakibatkan (sabit) bentuk terlalu
abnormal sel-sel darah merah. Perubahan mutasi dalam alel HBBA yang memunculkan HBBS adalah
substitusi dari T: Sepasang dasar untuk A: pasangan basa T, dengan T dalam untai ditranskripsi dalam
kasus pertama dan A dalam untai ditranskripsi dalam kasus kedua (lihat Gambar 1.9). A ini: T → T: A
substitusi pasangan basa pertama kali diprediksi dari urutan protein data dan tugas kodon yang
dikenal, dan kemudian diverifikasi oleh sekuensing alel HBBA dan HBBS.

Lebih dari 100 varian hemoglobin dengan perubahan asam amino dalam rantai dikenal (lihat Genomics
pada pertanyaan Web di akhir bab ini). Sebagian besar dari mereka berbeda dari rantai normal
hemoglobin A dengan substitusi asam amino tunggal. Beberapa berbeda oleh dua asam amino.
Banyak varian polipeptida juga telah diidentifikasi.

Contoh-contoh hemoglobin menunjukkan bahwa mutasi adalah proses di mana perubahan dalam
struktur gen, sering berubah dalam satu atau beberapa pasangan basa, dapat menyebabkan
perubahan dalam urutan asam amino dari produk gen polipeptida. Perubahan ini dalam struktur
protein, pada gilirannya, menyebabkan perubahan fenotip yang dikenali sebagai mutan.

MUTASI PADA MANUSIA: BLOK DI JALUR METABOLIK

Dalam Bab 4, kita membahas kontrol genetik dari jalur metabolisme, di mana setiap langkah dalam
jalur dikatalisis oleh enzim dikodekan oleh satu atau lebih gen. Ketika mutasi terjadi pada gen tersebut,
mereka sering menyebabkan blok metabolik (lihat Gambar 13.18) yang menyebabkan fenotipe
abnormal. Gambar ini dari kontrol genetik metabolisme berlaku untuk semua organisme hidup,
termasuk manusia (lihat Pada Cutting Edge: Screening Delapan Sel Pra-Embrio untuk Tay-Sachs
Mutasi).

Kita bisa menggambarkan efek mutasi pada metabolisme manusia dengan mempertimbangkan
hampir semua jalur metabolisme. Namun, metabolisme aromatik asam amino phenylalanine dan
tyrosine memberikan contoh sangat baik karena beberapa studi awal mutasi pada manusia
mengungkapkan blok di jalur ini (lihat Bab 4 Milestone dalam Genetika: Kesalahan bawaan Garrod ini
Metabolisme pada Companion Mahasiswa situs). Fenilalanin dan tirosin adalah asam amino esensial
yang diperlukan untuk sintesis protein; mereka tidak disintesis de novo pada manusia karena mereka
dalam mikroorganisme. Dengan demikian, baik asam amino harus diperoleh dari diet protein.

cacat mewarisi paling terkenal dalam metabolisme fenilalanin-tirosin adalah fenilketonuria, yang
disebabkan oleh tidak adanya fenilalanin hidroksilase, enzim yang mengubah fenilalanin menjadi
tirosin. Bayi yang baru lahir dengan fenilketonuria, penyakit resesif autosomal, mengembangkan
keterbelakangan mental yang berat jika tidak ditempatkan pada diet rendah fenilalanin (lihat Bab 4
Milestone di situs Companion Mahasiswa). kelainan bawaan yang pertama di jalur metabolisme
fenilalanin-tirosin untuk dipelajari pada manusia adalah alkaptonuria, yang disebabkan oleh mutasi
resesif autosomal yang menonaktifkan enzim homogentisat oksidase asam. Alkaptonuria memainkan
peran penting dalam evolusi konsep gen (lihat Bab 4 Milestone di situs Companion Mahasiswa).

Dua kelainan bawaan lainnya disebabkan oleh mutasi pada gen yang mengkode enzim yang
dibutuhkan untuk katabolisme tirosin; keduanya diturunkan sebagai resesif autosomal. Tyrosinosis
dan hasilnya tyrosinemia dari kurangnya transaminase enzim tirosin dan oksidase asam p-
hydroxyphenylpyruvic, masing-masing. Kedua enzim yang diperlukan untuk menurunkan tirosin untuk
CO2 dan H2O. Tyrosinosis sangat jarang; hanya beberapa kasus telah dipelajari. Individu dengan
tyrosinosis acara diucapkan peningkatan kadar tirosin dalam darah dan urin mereka dan memiliki
berbagai kelainan bawaan. Individu dengan tyrosinemia mengalami peningkatan kadar kedua tirosin
dan asam p-hydroxyphenylpyruvic dalam darah dan urin mereka. Kebanyakan bayi baru lahir dengan
tyrosinemia meninggal dalam waktu enam bulan setelah lahir karena kegagalan hati.

Albinisme, tidak adanya pigmentasi di kulit, rambut, dan mata, hasil dari blok mutasi dalam konversi
tirosin ke melanin pigmen gelap. Salah satu jenis albinisme disebabkan oleh tidak adanya tirosinase,
enzim yang mengkatalisis langkah pertama dalam sintesis melanin dari tirosin. Jenis lain dari albinisme
hasil dari blok dalam langkah-langkah berikutnya dalam konversi tirosin ke melanin. Albinisme
diwariskan sebagai sifat resesif autosom; heterozigot biasanya memiliki tingkat normal pigmentasi.
Oleh karena itu, dua albino yang memiliki mutasi pada gen yang berbeda akan menghasilkan anak-
anak biasanya berpigmen.

Dengan demikian, studi dari jalur metabolisme tunggal, metabolisme fenilalanin-tirosin, telah
mengungkapkan lima kelainan bawaan yang berbeda, semua disebabkan oleh mutasi pada gen yang
mengontrol langkah-langkah di jalur ini. contoh serupa dari kontrol genetik metabolisme dapat
diperoleh dengan memeriksa dasarnya setiap jalur metabolik lainnya pada manusia.

CONDITIONAL MUTASI Lethal: ALAT KUAT UNTUK STUDI GENETIKA

Dari semua mutasi-dari isoalleles ke lethals-kondisional mutasi mematikan yang paling berguna untuk
studi genetik. Ini adalah mutasi yang (1) mematikan dalam satu lingkungan, kondisi membatasi, tetapi
(2) layak dalam lingkungan kedua, kondisi permisif. mutasi mematikan bersyarat memungkinkan ahli
genetika untuk mengidentifikasi dan mempelajari mutasi pada gen penting yang mengakibatkan
hilangnya lengkap aktivitas gen-produk bahkan dalam organisme haploid. Mutan membawa lethals
bersyarat dapat diperbanyak dalam kondisi permisif, dan informasi tentang fungsi produk gen dapat
disimpulkan dengan mempelajari konsekuensi dari ketidakhadiran mereka di bawah kondisi terbatas.
mutasi mematikan bersyarat telah digunakan untuk menyelidiki array yang luas dari proses biologis
dari pembangunan untuk fotosintesis.

Tiga kelas utama mutan dengan fenotipe mematikan bersyarat adalah (1) mutan auksotrofik, (2)
mutan sensitif temperatur, dan (3) mutan suppressorsensitive. Auxotrophs adalah mutan yang tidak
dapat mensintesis metabolit esensial (asam amino, purin, pirimidin, vitamin, dan sebagainya) yang
disintesis oleh tipe liar atau organisme prototrofik dari spesies yang sama. The auxotrophs akan
tumbuh dan berkembang biak ketika metabolit yang diberikan dalam medium (kondisi permisif);
mereka tidak akan tumbuh ketika metabolit penting tidak hadir (kondisi restriktif). mutan sensitif
temperatur akan tumbuh pada satu suhu tetapi tidak pada yang lain. Kebanyakan mutan sensitif
temperatur sangat sensitif terhadap panas; Namun, beberapa dingin-sensitif. Sensitivitas suhu
biasanya hasil dari peningkatan panas atau labilitas dingin dari gen produk-misalnya mutan, enzim
yang aktif pada suhu rendah tetapi sebagian atau seluruhnya tidak aktif pada suhu yang lebih tinggi.
Kadang-kadang, hanya sintesis produk gen sensitif terhadap suhu, dan sekali disintesis, produk gen
mutan mungkin stabil seperti produk gen tipe liar. mutan penekan-sensitif yang layak ketika faktor
genetik kedua, penekan, hadir, tetapi mereka nonviable dengan tidak adanya penekan tersebut. Gen
supresor dapat memperbaiki atau mengkompensasi cacat dalam fenotipe yang disebabkan oleh
mutasi penekan-sensitif, atau dapat menyebabkan produk gen diubah oleh mutasi menjadi tidak
penting. Kita telah membahas satu kelas mutasi penekan-sensitif, mutasi kuning, dalam Bab 12.
Sekarang, mari kita secara singkat mempertimbangkan bagaimana mutasi mematikan bersyarat dapat
digunakan untuk menyelidiki proses-biologis membedah proses biologi menjadi bagian-bagian
masing-masing atau langkah-langkah. Mari kita mulai dengan jalur biosintesis sederhana:

Menengah Y dihasilkan dari prekursor X oleh aksi enzim A, produk dari gen A, tapi menengah Y dapat
dengan cepat dikonversi menjadi produk Z oleh enzim B, produk dari gen B. Jika demikian, menengah
Y mungkin hadir di menit jumlah dan sulit untuk mengisolasi dan mengkarakterisasi. Namun, dalam
organisme mutan yang memiliki mutasi pada gen B, yang mengakibatkan sintesis baik bentuk tidak
aktif enzim B atau tidak ada enzim B, menengah Y dapat menumpuk untuk konsentrasi yang lebih
tinggi, memfasilitasi isolasi dan karakterisasi. Demikian pula, mutasi pada gen A dapat membantu
dalam identifikasi prekursor X. Dengan cara ini, urutan langkah-langkah dalam jalur metabolisme
tertentu sering dapat ditentukan.

Morfogenesis dalam organisme hidup terjadi sebagian oleh penambahan berurutan protein dengan
struktur makromolekul untuk menghasilkan konformasi tiga dimensi akhir, dan urutan penambahan
protein sering dapat ditentukan dengan mengisolasi dan mempelajari organisme mutan dengan cacat
pada gen yang mengkode protein yang terlibat . Karena mutasi yang tepat akan menghilangkan
aktivitas polipeptida tunggal, mutasi menyediakan alat yang ampuh yang dapat digunakan untuk
membedah proses-biologis memecah proses menjadi langkah-langkah individu.

Kekuatan pemecahan diseksi mutasi dari proses biologis telah elegan didokumentasikan oleh
penelitian dari Robert Edgar, Jonathan Raja, William Wood, dan rekan, yang bekerja keluar jalur
lengkap morfogenesis untuk T4 bakteriofag. proses yang kompleks ini melibatkan produk-produk dari
sekitar 50 dari sekitar 200 gen dalam genom T4. Setiap gen mengkode protein struktural virus atau
enzim yang mengkatalisis satu atau lebih langkah-langkah dalam jalur morphogenetic. Dengan (1)
mengisolasi strain mutan dari fag T4 dengan mutasi suhu-sensitif dan suppressorsensitive mematikan
kondisional di masing-masing sekitar 50 gen, dan (2) menggunakan mikroskop elektron dan teknik
biokimia untuk menganalisis struktur yang menumpuk saat ini strain mutan yang tumbuh di bawah
kondisi restriktif, Edgar, Raja, Wood,

Banyak proses biologis lainnya juga telah berhasil membedah oleh penelitian mutasi. Contohnya
termasuk rantai transpor elektron fotosintesis pada tanaman dan jalur fiksasi nitrogen pada bakteri.
Saat ini, diseksi mutasi yang menghasilkan wawasan baru ke dalam proses diferensiasi dan
pembangunan di tanaman dan hewan (Bab 20) yang lebih tinggi. Para peneliti juga menggunakan
mutasi untuk membedah perilaku dan pembelajaran di Drosophila. Pada prinsipnya, para ilmuwan
harus dapat menggunakan mutasi untuk membedah proses biologis. Setiap gen dapat bermutasi ke
keadaan berfungsi. Dengan demikian, diseksi mutasi dari proses biologis hanya dibatasi oleh
kecerdikan peneliti dalam mengidentifikasi mutasi dari jenis yang diinginkan.
GAMBAR 13,20 Disingkat jalur morfogenesis di T4 bakteriofag. Kepala, ekor, dan serat ekor diproduksi
melalui cabang terpisah dari jalur dan kemudian bergabung dalam tahap akhir morfogenesis. Nomor
mengidentifikasi gen T4 yang produknya dibutuhkan pada setiap langkah di jalur tersebut. Urutan
langkah-langkah awal di kepala dan ekor formasi dikenal tapi dihilangkan di sini untuk menjaga
diagram ringkas.

POIN KUNCI

Efek dari mutasi pada fenotipe organisme hidup berkisar dari kecil untuk perubahan mematikan.

Kebanyakan mutasi mengerahkan efek mereka pada fenotip dengan mengubah urutan asam amino
polipeptida, produk gen utama.

Polipeptida mutan, pada gilirannya, menyebabkan blok di jalur metabolik.

mutasi mematikan bersyarat menyediakan alat-alat yang sangat penting untuk membedah proses
biologis.

Menetapkan Mutasi ke Gen-gen dengan Uji Complementation

The komplementasi atau tes trans dapat digunakan untuk menentukan apakah dua mutasi terletak
pada gen yang sama atau dalam dua gen yang berbeda.

Dengan munculnya satu gen-satu konsep polipeptida (Bab 12), ilmuwan bisa menentukan gen
biokimia, tetapi mereka tidak memiliki alat genetik untuk digunakan dalam menentukan apakah dua
mutasi berada di gen yang sama atau berbeda. kekurangan ini diselesaikan pada 1940-an ketika
Edward Lewis mengembangkan tes komplementasi untuk allelism fungsional. Sebelum kita
membahas kerja Lewis, kita perlu mendefinisikan beberapa istilah baru. Sebuah heterozigot ganda,
yang membawa dua mutasi dan alel wild type mereka, yaitu, m1 dan m1 bersama dengan m2 dan m2,
bisa eksis dalam salah satu dari dua pengaturan (Gambar 13.21). Ketika dua mutasi yang pada
kromosom yang sama, pengaturan disebut kopling atau konfigurasi cis, dan heterozigot dengan
genotipe ini disebut cis heterozigot (Gambar 13.21a). Ketika dua mutasi yang pada kromosom yang
berbeda, Susunan ini disebut tolakan atau konfigurasi trans. Organisme dengan genotipe ini adalah
heterozigot trans (Gambar 13.21b).
 GAMBAR 13.21 Susunan penanda genetik di cis dan
heterozigot trans.

Pada tahun 1940 dan 1950-an, Lewis mengamati bahwa lalat buah yang membawa mutan tertentu
dalam cis dan konfigurasi trans memiliki fenotip yang berbeda. Kami akan memeriksa hasil dengan
dua mutasi warna mata resesif putih (w) dan apricot (April). Lalat yang homozigot untuk mutasi X-
linked Apr dan w memiliki mata berwarna aprikot dan mata putih, masing-masing, berbeda dengan
mata merah tipe liar Drosophila. Ketika Lewis diproduksi heterozigot cis dengan genotipe April w /
April w, mereka memiliki mata merah seperti lalat wildtype (Gambar 13.22a). Ketika ia dibangun
heterozigot trans dengan genotipe April w / April w, mereka memiliki mata aprikot berwarna light
(Gambar 13.22b). Kedua genotipe berisi informasi mutan dan wild-type yang sama genetik tetapi
dalam pengaturan yang berbeda. Ketika organisme yang mengandung penanda genetik yang sama,
tetapi dalam pengaturan yang berbeda, memiliki fenotipe yang berbeda, penanda dikatakan
menunjukkan efek posisi. Jenis efek posisi itu Lewis diamati disebut efek posisi cis-trans.

GAMBAR 13,22 The cis-trans efek posisi diamati oleh Edward Lewis dengan April dan w mutasi
Drosophila.
Penemuan Lewis efek posisi cis-trans menyebabkan perkembangan dari tes komplementasi atau tes
trans untuk allelism fungsional. Tes ini memungkinkan ahli genetika untuk menentukan apakah mutasi
yang menghasilkan fenotipe yang sama atau serupa pada gen yang sama atau dalam gen yang
berbeda. Mutasi harus diuji berpasangan dengan menentukan fenotip dari heterozigot trans. Artinya,
heterozigot trans harus dibangun untuk setiap pasangan mutasi dan diperiksa untuk menentukan
apakah mereka memiliki mutan atau tipe liar fenotipe.

Idealnya, komplementasi atau tes trans harus dilakukan dalam hubungannya dengan cis tes-kontrol
yang sering diabaikan. tes cis dilakukan dengan membangun heterozigot cis dengan masing-masing
pasangan mutasi sedang dipelajari dan menentukan apakah heterozigot memiliki mutan atau tipe liar
fenotipe. Bersama-sama, komplementasi atau tes trans dan uji cis disebut sebagai tes cis-trans. Setiap
heterozigot cis, yang berisi satu tipe liar kromosom, harus memiliki tipe liar fenotipe apakah mutasi
dalam gen yang sama atau dalam dua gen yang berbeda. Memang, heterozigot cis harus memiliki tipe
liar fenotipe untuk hasil tes trans valid. Jika heterozigot cis memiliki fenotipe mutan, tes trans tidak
dapat digunakan untuk menentukan apakah dua mutasi dalam gen yang sama. Demikian,

Dengan organisme diploid, heterozigot trans diproduksi hanya dengan menyeberangi organisme yang
homozigot untuk masing-masing mutasi yang menarik. Dengan virus, heterozigot trans diproduksi
oleh bersamaan menginfeksi sel inang dengan dua mutan yang berbeda. Terlepas dari bagaimana
heterozigot trans dibangun, hasil tes trans atau komplementasi memberikan informasi yang sama.

1. Jika heterozigot trans memiliki fenotipe mutan (fenotipe organisme atau sel homozigot untuk salah
satu dari dua mutasi), maka dua mutasi berada di unit yang sama fungsi, gen yang sama.

2. Jika heterozigot trans memiliki tipe liar fenotipe, maka dua mutasi berada di dua unit yang berbeda
fungsi, dua gen yang berbeda.

Ketika dua mutasi hadir dalam heterozigot trans keduanya pada gen yang sama, kedua kromosom
akan membawa salinan rusak dari gen itu. Akibatnya, heterozigot trans akan berisi produk hanya
nonfungsional dari gen yang terlibat dan akan memiliki fenotip mutan.

Ketika heterozigot trans memiliki tipe liar fenotipe, dua mutasi yang dikatakan menunjukkan
komplementasi atau untuk saling melengkapi dan terletak di gen yang berbeda. Dalam hal ini,
heterozigot trans akan berisi produk-produk fungsional dari gen dan, karena itu, akan menunjukkan
tipe liar fenotipe.

Mari kita menggambarkan konsep ini dari komplementasi dengan memeriksa tes trans dilakukan
dengan beberapa mutasi kuning baik ditandai dari T4 bakteriofag. mutasi Amber pada gen penting
adalah mutasi yang mematikan bersyarat (lihat bagian bab ini berjudul Bersyarat Lethal Mutasi: Alat
Powerfull untuk Studi genetik). Ketika hadir dalam bakteri inang membatasi seperti E. coli galur B,
fenotipe mereka adalah mematikan-yang, tidak ada keturunan yang dihasilkan. Namun, ketika hadir
dalam sel inang permisif seperti E. coli galur CR63, fenotipe mereka adalah tipe liar-yang, sekitar 300
keturunan fag yang diproduksi per sel yang terinfeksi. Dengan mutasi mematikan bersyarat,
perbedaan antara mutan dan wild-type fenotipe maksimal: mematikan terhadap pertumbuhan
normal.

mutasi Amber menghasilkan kembar tiga terjemahan terminasi dalam daerah coding gen (lihat
Gambar 12.24). Akibatnya, produk-produk dari gen mutan yang polipeptida dipotong, yang hampir
selalu benar-benar berfungsi. Oleh karena itu, tes komplementasi dilakukan dengan mutasi kuning
biasanya ambigu.
Dua dari tiga mutasi amber bahwa kita akan mempertimbangkan (amB17 dan amH32) terletak di gen
23, yang mengkode protein struktural utama dari kepala fag; mutasi lainnya (amE18) dalam gen 18,
yang menentukan protein struktural utama dari ekor fag (lihat Gambar 13.20).

Dalam heterozigot trans yang mengandung mutasi amB17 (gen kepala) dan amE18 (gen ekor), tipe liar
salinan dari kedua gen yang hadir, memproduksi fungsional kepala dan ekor protein (Gambar 13.23a).
Akibatnya, heterozigot trans ini menunjukkan tipe liar fenotipe (hasil normal keturunan fag). Mutasi
amB17 dan amE18 melengkapi satu sama lain karena mereka berada di dua gen yang berbeda.

GAMBAR 13,23 Komplementasi dan noncomplementation pada heterozigot trans. (A) Komplementasi
antara mutasi amB17 di gen 23, yang mengkode protein struktural utama dari kepala fag T4, dan
mutasi amE18 di gen 18, yang mengkode protein struktural utama dari ekor fag. kepala fag dan ekor
keduanya disintesis dalam sel, dengan hasil yang infektif keturunan fag diproduksi. (B) Bila heterozigot
trans berisi dua mutasi (amB17 dan amH32) di gen 23, tidak ada kepala diproduksi, dan tidak ada
keturunan fag infektif dapat dirakit.

Dalam heterozigot trans yang mengandung mutasi amB17 dan amH32 (baik dalam gen kepala 23), di
sisi lain, tidak ada fungsional gen 23 protein kepala dibuat (Gambar 13.23b). Dengan demikian,
heterozigot trans ini memiliki fenotipe mutan (mematikan, atau tidak ada keturunan). Mutasi amB17
dan amH32 tidak melengkapi satu sama lain karena keduanya terletak pada gen yang sama.

Dengan menggunakan uji komplementasi, seorang peneliti dapat menentukan apakah mutasi
independen yang menghasilkan fenotipe yang sama pada gen yang sama atau gen yang berbeda.
mutasi sepuluh kuning, misalnya, semua bisa dalam satu gen, atau satu dalam satu gen dan sembilan
gen kedua, dan seterusnya, dengan kemungkinan akhir adalah bahwa setiap mutasi bisa berada dalam
gen terpisah. Dalam kasus terakhir, 10 mutasi akan mengidentifikasi 10 gen yang berbeda. Untuk
menguji pemahaman Anda tentang konsep ini, coba Memecahkan Ini: Bagaimana Cara Menetapkan
Mutasi ke Gen?

Komplementasi adalah hasil dari fungsi produk gen yang ditentukan oleh kromosom membawa dua
mutasi yang berbeda ketika mereka hadir dalam protoplasma yang sama. Komplementasi tidak
tergantung pada rekombinasi dari dua kromosom. Komplementasi, atau kurangnya itu, dinilai oleh
fenotip (wildtype atau mutan) masing-masing heterozigot trans. Rekombinasi, sebaliknya, melibatkan
kerusakan sebenarnya dari kromosom dan reuni bagian untuk menghasilkan tipe liar dan kromosom
double-mutan.

Perhatikan bahwa complemetation atau tes trans mendefinisikan allelism fungsional, yaitu, apakah
dua mutasi adalah pada gen yang sama atau dalam dua gen yang berbeda. Dua mutasi yang tidak
saling melengkapi dalam heterozigot trans berada di unit yang sama fungsi, gen yang sama. allelism-
struktural terjadinya dua atau lebih mutasi yang berbeda di lokasi yang sama pada kromosom-
ditentukan oleh uji rekombinasi. Dua mutasi yang tidak bergabung kembali secara struktural alel;
mutasi baik terjadi pada situs yang sama atau tumpang tindih situs umum.

Mutasi yang baik struktural dan fungsional alel disebut homoalleles; mereka tidak melengkapi atau
bergabung kembali dengan satu sama lain. homoalleles mutan memiliki cacat di tempat yang sama,
atau cacat yang tumpang tindih situs umum, pada gen yang sama. Mutasi yang secara fungsional alel,
tapi secara struktural nonallelic, yang disebut heteroalleles; mereka bergabung kembali dengan satu
sama lain tetapi tidak melengkapi satu sama lain. heteroalleles mutan terjadi pada situs yang berbeda
tetapi dalam gen yang sama.

POIN KUNCI

Tes komplementasi dapat digunakan untuk menentukan apakah dua mutasi yang menghasilkan
fenotipe yang sama pada gen yang sama atau dalam dua gen yang berbeda.

Homoalleles mutasi di lokasi yang sama pada gen yang; heteroalleles mutasi di lokasi yang berbeda di
gen.

Skrining Kimia untuk mutagenik: The Ames Uji

Tes Ames menyediakan metode sederhana dan murah untuk mendeteksi mutagenisitas bahan kimia.

agen mutagenik juga karsinogen; yaitu, mereka menginduksi kanker. Salah satu karakteristik bahwa
ratusan jenis kanker memiliki kesamaan adalah bahwa sel-sel ganas terus membelah setelah
pembelahan sel akan berhenti di sel-sel normal. Tentu saja, pembelahan sel, seperti semua proses
biologis lainnya, adalah di bawah kontrol genetik. gen-gen tertentu mengkodekan produk yang
mengatur pembelahan sel dalam menanggapi intraseluler, antar, dan sinyal lingkungan. Ketika gen ini
bermutasi ke negara nonfungsional, pembelahan sel yang tidak terkendali kadang-kadang hasil. Jelas,
kami ingin menghindari terkena agen mutagenik dan karsinogenik. Namun, masyarakat teknologi kita
tergantung pada penggunaan ekstensif bahan kimia di kedua industri dan pertanian. Ratusan bahan
kimia baru yang diproduksi setiap tahun,

Secara tradisional, carcinogenicity bahan kimia telah diuji pada tikus, biasanya tikus yang baru lahir.
Studi ini melibatkan makan atau menyuntikkan zat yang diuji dan kemudian memeriksa hewan untuk
tumor. tes mutagenisitas telah dilakukan dengan cara yang sama. Namun, karena mutasi adalah
peristiwa frekuensi rendah dan karena mempertahankan populasi besar tikus adalah suatu usaha
mahal, tes telah relatif tidak sensitif; yaitu, rendahnya tingkat mutagenisitas tidak dapat terdeteksi.

Bruce Ames dan rekan-rekannya mengembangkan teknik sensitif yang memungkinkan mutagenisitas
sejumlah besar bahan kimia yang akan diuji dengan cepat dengan biaya yang relatif rendah. Ames dan
rekan kerja dibangun strain auksotrofik dari bakteri Salmonella typhimurium membawa berbagai jenis
mutasi-transisi, transversi, dan frameshifts-dalam gen diperlukan untuk biosintesis asam amino
histidin. Mereka memantau pengembalian ini mutan auksotrofik untuk prototrophy dengan
menempatkan sejumlah dikenal bakteri mutan pada media kurang histidin dan mencetak jumlah
koloni yang dihasilkan oleh revertants prototrofik. Karena beberapa bahan kimia bersifat mutagenik
hanya untuk mereplikasi DNA, mereka menambahkan sejumlah kecil histidin-cukup untuk
memungkinkan pembelahan sel beberapa tetapi tidak pembentukan koloni-to terlihat medium.
Mereka mengukur mutagenisitas kimia dengan membandingkan frekuensi pengembalian dalam
kehadirannya dengan frekuensi pengembalian spontan (Gambar 13.24). Mereka menilai
kemampuannya untuk menginduksi berbagai jenis mutasi dengan menggunakan satu set strain tester
yang membawa berbagai jenis mutasi-satu strain dengan transisi, satu dengan mutasi frameshift, dan
sebagainya.

GAMBAR 13,24 Tes Ames untuk mutagenisitas. Media di setiap cawan petri berisi jejak histidin dan
sejumlah dikenal sel nya dari Salmonella typhimurium “tester ketegangan” tertentu menyimpan
mutasi frameshift. Piring kontrol ditampilkan di sebelah kiri memberikan perkiraan frekuensi
pengembalian spontan ketegangan tester tertentu. Piring percobaan di sebelah kanan menunjukkan
frekuensi pengembalian disebabkan oleh potensi mutagen, dalam hal ini, karsinogen 2-
aminofluorene.

Selama periode beberapa tahun di mana mereka diuji ribuan bahan kimia yang berbeda, Ames dan
rekan-rekannya mengamati korelasi lebih besar dari 90 persen antara mutagenisitas dan
karsinogenisitas dari zat diuji. Awalnya, mereka menemukan beberapa karsinogen potensial untuk
menjadi nonmutagenic alunan tester. Selanjutnya, mereka menemukan bahwa banyak dari
karsinogen ini dimetabolisme untuk kuat derivatif mutagenik pada sel eukariotik. Dengan demikian,
Ames dan rekan-rekannya menambahkan ekstrak hati tikus dengan sistem uji mereka dalam upaya
untuk mendeteksi mutagenisitas derivatif metabolisme zat yang diuji. Kopling sistem aktivasi hati tikus
dengan tes mutagenisitas mikroba memperluas utilitas sistem jauh. Sebagai contoh, nitrat (ditemukan
dalam daging hangus) bukan merupakan mutagenik atau karsinogenik. Namun, dalam sel-sel
eukariotik, nitrat diubah menjadi nitrosamin, yang sangat mutagenik dan karsinogenik. tes
mutagenisitas Ames ini menunjukkan adanya mutagen frameshift di beberapa komponen kimia
difraksinasi kondensat asap rokok. Dalam beberapa kasus, aktivasi dengan persiapan ekstrak hati
diperlukan untuk mutagenisitas; dalam kasus lain, aktivasi tidak diperlukan. Tes Ames menyediakan
prosedur yang cepat, murah, dan sensitif untuk menguji mutagenisitas bahan kimia. Sejak bahan kimia
mutagenik juga karsinogen, tes Ames dapat digunakan untuk mengidentifikasi bahan kimia yang
memiliki kemungkinan tinggi menjadi karsinogenik. tes mutagenisitas Ames ini menunjukkan adanya
mutagen frameshift di beberapa komponen kimia difraksinasi kondensat asap rokok. Dalam beberapa
kasus, aktivasi dengan persiapan ekstrak hati diperlukan untuk mutagenisitas; dalam kasus lain,
aktivasi tidak diperlukan. Tes Ames menyediakan prosedur yang cepat, murah, dan sensitif untuk
menguji mutagenisitas bahan kimia. Sejak bahan kimia mutagenik juga karsinogen, tes Ames dapat
digunakan untuk mengidentifikasi bahan kimia yang memiliki kemungkinan tinggi menjadi
karsinogenik. tes mutagenisitas Ames ini menunjukkan adanya mutagen frameshift di beberapa
komponen kimia difraksinasi kondensat asap rokok. Dalam beberapa kasus, aktivasi dengan persiapan
ekstrak hati diperlukan untuk mutagenisitas; dalam kasus lain, aktivasi tidak diperlukan. Tes Ames
menyediakan prosedur yang cepat, murah, dan sensitif untuk menguji mutagenisitas bahan kimia.
Sejak bahan kimia mutagenik juga karsinogen, tes Ames dapat digunakan untuk mengidentifikasi
bahan kimia yang memiliki kemungkinan tinggi menjadi karsinogenik. dan prosedur sensitif untuk
menguji mutagenisitas bahan kimia. Sejak bahan kimia mutagenik juga karsinogen, tes Ames dapat
digunakan untuk mengidentifikasi bahan kimia yang memiliki kemungkinan tinggi menjadi
karsinogenik. dan prosedur sensitif untuk menguji mutagenisitas bahan kimia. Sejak bahan kimia
mutagenik juga karsinogen, tes Ames dapat digunakan untuk mengidentifikasi bahan kimia yang
memiliki kemungkinan tinggi menjadi karsinogenik.

INTI

Bruce Ames dan rekan kerja mengembangkan metode murah dan sensitif untuk menguji
mutagenisitas bahan kimia dengan histidin mutan auksotrofik Salmonella.

Mekanisme Perbaikan DNA

organisme hidup mengandung banyak enzim yang memindai DNA mereka untuk kerusakan dan
memulai proses perbaikan ketika kerusakan terdeteksi.
Banyaknya mekanisme perbaikan yang telah berevolusi dalam organisme mulai dari bakteri ke
manusia tegas mendokumentasikan pentingnya menjaga mutasi pada tingkat ditoleransi. Sebagai
contoh, sel-sel E. coli memiliki lima mekanisme baik ditandai untuk perbaikan cacat dalam DNA: (1)
perbaikan tergantung cahaya atau photoreactivation, (2) perbaikan eksisi, (3) perbaikan mismatch, (4)
perbaikan postreplication, dan (5) kesalahan-rawan sistem perbaikan (respon SOS). Selain itu,
setidaknya ada dua jenis perbaikan eksisi, dan jalur perbaikan eksisi dapat diprakarsai oleh beberapa
enzim yang berbeda, masing-masing bertindak atas jenis tertentu kerusakan pada DNA. Mamalia
tampaknya memiliki semua mekanisme perbaikan yang ditemukan dalam E. coli kecuali
photoreactivation. Karena sebagian besar sel mamalia tidak memiliki akses terhadap cahaya,

Pentingnya jalur perbaikan DNA untuk kesehatan manusia jelas. kelainan bawaan seperti xeroderma
pigmentosum, yang telah dibahas pada awal bab ini, jelas mendokumentasikan konsekuensi serius
cacat dalam perbaikan DNA. Kami membahas beberapa gangguan ini diturunkan dalam bagian
berikutnya dari bab ini.

LIGHT-DEPENDENT PERBAIKAN

perbaikan lampu-dependent atau photoreactivation DNA pada bakteri dilakukan oleh enzim
lightactivated disebut DNA photolyase. Ketika DNA terkena sinar ultraviolet, dimer timin diproduksi
oleh kovalen silang hubungan antara residu timin yang berdekatan (lihat Gambar 13.12b). DNA
photolyase mengakui dan mengikat dimer timin di DNA, dan menggunakan energi cahaya untuk
memecah kovalen cross-link (Gambar 13.25). Photolyase akan mengikat dimer timin pada DNA dalam
gelap, tetapi tidak dapat mengkatalisis pembelahan obligasi bergabung dengan gugus timin tanpa
energi yang berasal dari cahaya tampak, khususnya cahaya dalam daerah biru dari spektrum.
Photolyase juga membagi dimer sitosin dan dimer sitosin-timin. Dengan demikian, ketika cahaya
ultraviolet digunakan untuk menginduksi mutasi pada bakteri,
 GAMBAR 13.25 Pembelahan timin dimer
cross-link dengan photolyase cahaya-diaktifkan. Tanda panah menunjukkan polaritas berlawanan dari
untai komplementer DNA.

eksisi PERBAIKAN

perbaikan eksisi dari DNA yang rusak melibatkan setidaknya tiga langkah. Pada langkah 1, sebuah
endonuklease perbaikan DNA atau endonuklease yang mengandung kompleks enzim mengakui,
mengikat, dan cukai dasar yang rusak atau basa dalam DNA. Pada langkah 2, DNA polimerase mengisi
celah dengan menggunakan untai komplementer rusak DNA sebagai template. Pada langkah 3, ligase
DNA enzim segel istirahat ditinggalkan oleh polimerase DNA untuk menyelesaikan proses perbaikan.
Ada dua jenis utama dari perbaikan eksisi: sistem perbaikan dasar eksisi menghapus basis abnormal
atau dimodifikasi secara kimia dari DNA, sedangkan jalur perbaikan eksisi nukleotida menghapus cacat
yang lebih besar seperti dimer timin. Kedua jalur eksisi yang operatif dalam gelap, dan keduanya
terjadi dengan mekanisme sangat mirip dalam E. coli dan manusia.

F
saya

Gambar 13.26 Perbaikan DNA oleh jalur dasar eksisi. perbaikan eksisi dasar dapat diprakarsai oleh
salah satu dari beberapa glycosylases DNA yang berbeda. Dalam contoh yang ditunjukkan, urasil DNA
glikosilase memulai proses perbaikan.

Dasar perbaikan eksisi (Gambar 13.26) dapat dimulai oleh sekelompok enzim yang disebut
glycosylases DNA yang mengakui basa abnormal pada DNA. Setiap glikosilase mengakui jenis tertentu
dasar berubah, seperti basis dideaminasi, basis teroksidasi, dan sebagainya (langkah 2). The
glycosylases membelah ikatan glikosidik antara basis abnormal dan 2-deoksiribosa, membuat situs
apurinic atau apyrimidinic (situs AP) dengan basis hilang (langkah 3). situs AP diakui oleh enzim yang
disebut AP endonuklease, yang bertindak bersama-sama dengan fosfodiesterase untuk cukai
kelompok gula-fosfat pada situs ini (langkah 4). DNA polimerase kemudian menggantikan nukleotida
yang hilang sesuai dengan spesifikasi dari untai komplementer (langkah 5), dan segel DNA ligase nick
(langkah 6).
Nukleotida perbaikan eksisi menghilangkan lesi yang lebih besar seperti dimer timin dan basa dengan
besar sisi-kelompok dari DNA. Dalam nukleotida perbaikan eksisi, aktivitas nuklease eksisi unik
menghasilkan luka di kedua sisi nukleotida yang rusak (s) dan cukai oligonukleotida yang berisi dasar
yang rusak (s). nuklease ini disebut excinuclease untuk membedakannya dari endonuklease dan
exonucleases yang memainkan peran lain dalam metabolisme DNA.

GAMBAR 13,27
Perbaikan DNA oleh eksisi nukleotida jalur di E. coli. The excinuclease (eksisi nuklease) aktivitas
membutuhkan produk dari tiga genes- uvrA, UvrB, dan uvrC. Eksisi nukleotida terjadi dengan jalur
yang sama pada manusia, kecuali bahwa banyak protein yang terlibat dan oligomer 24-to-32-
nukleotida panjang yang dipotong.

E. coli nukleotida perbaikan eksisi jalur ditunjukkan pada Gambar 13.27. Dalam E. coli, aktivitas
excinuclease membutuhkan produk dari tiga gen, uvrA, UvrB, dan uvrC (UVR ditunjuk untuk perbaikan
UV). Sebuah protein trimerik berisi dua polipeptida UvrA dan satu polipeptida UvrB mengakui cacat
dalam DNA, mengikat, dan menggunakan energi dari ATP menekuk DNA di lokasi yang rusak. The UvrA
dimer kemudian dilepaskan, dan protein UvrC mengikat kompleks UvrB / DNA. The UvrC membelah
protein keempat atau kelima fosfodiester obligasi dari nukleotida yang rusak (s) pada 3 sisi dan
fosfodiester linkage kedelapan dari kerusakan pada 5 sisi. The uvrD produk gen, DNA helikase II,
melepaskan dodecamer dipotong. Dalam dua langkah terakhir dari jalur, DNA polimerase I mengisi
kesenjangan, dan segel DNA ligase sisanya nick dalam molekul DNA.

Nukleotida perbaikan eksisi pada manusia terjadi melalui jalur yang sama dengan yang ada di E. coli,
tetapi melibatkan sekitar empat kali lebih banyak protein. Pada manusia, aktivitas excinuclease
mengandung 15 polipeptida. Protein XPA (untuk xeroderma pigmentosum protein A) mengakui dan
mengikat nukleotida yang rusak (s) dalam DNA. Kemudian merekrut protein lain yang diperlukan
untuk kegiatan excinuclease. Pada manusia, oligomer yang dipotong 24-32 nukleotida panjang
daripada 12-mer dihapus dalam E. coli. kesenjangan yang diisi oleh salah polimerase DNA atau ε pada
manusia, dan DNA ligase menuntaskan pekerjaan.

LAIN MEKANISME DNA PERBAIKAN

Selama beberapa tahun terakhir, penelitian tentang mekanisme perbaikan DNA telah menunjukkan
kehadiran tentara enzim perbaikan DNA yang terus-menerus memindai DNA untuk kerusakan mulai
dari kehadiran dimer timin yang disebabkan oleh sinar ultraviolet untuk modifikasi terlalu beragam
dan banyak untuk menjelaskan di sini. Hasil kerja baru ini telah menunjukkan bahwa beberapa
polimerase DNA yang tidak diketahui sebelumnya memainkan peran penting dalam berbagai proses
perbaikan DNA. diskusi rinci dari proses-proses perbaikan DNA penting adalah di luar lingkup teks ini.
Namun demikian, pentingnya mekanisme perbaikan tersebut tidak dapat dilebih-lebihkan. Apa yang
lebih penting untuk kelangsungan hidup spesies dari menjaga integritas cetak biru genetik?

Dalam Bab 10, kita meneliti mekanisme dimana 3 → 5 aktivitas exonuclease dibangun ke polimerase
DNA proofreads untai DNA selama sintesis mereka, menghapus setiap nukleotida serasi di 3 termini
tumbuh helai. Lain postreplication perbaikan DNA jalur, perbaikan mismatch, menyediakan cadangan
untuk proofreading replikatif ini dengan memperbaiki nukleotida cocok tersisa di DNA setelah
replikasi. Ketidaksesuaian sering melibatkan normal empat pangkalan di DNA. Sebagai contoh, T dapat
mispaired dengan G. Karena kedua T dan G adalah komponen normal DNA, sistem perbaikan
mismatch perlu beberapa cara untuk menentukan apakah T atau G adalah dasar yang benar di situs
tertentu. Sistem perbaikan membuat perbedaan ini dengan mengidentifikasi untai template, yang
berisi urutan nukleotida asli, dan untai baru disintesis, yang berisi dasar misincorporated (kesalahan).
Pada bakteri, perbedaan ini dapat dibuat berdasarkan pola metilasi DNA baru direplikasi. Dalam E.
coli, A di urutan GATC adalah termetilasi setelah sintesis. Dengan demikian, interval waktu terjadi
selama untai template termetilasi, dan untai yang baru disintesis adalah unmethylated. Sistem
perbaikan mismatch menggunakan perbedaan ini dalam keadaan metilasi untuk cukai nukleotida
cocok di untai baru lahir dan menggantinya dengan nukleotida yang benar dengan menggunakan untai
orangtua alkohol dari DNA sebagai template. interval waktu terjadi selama untai template termetilasi,
dan untai yang baru disintesis adalah unmethylated. Sistem perbaikan mismatch menggunakan
perbedaan ini dalam keadaan metilasi untuk cukai nukleotida cocok di untai baru lahir dan
menggantinya dengan nukleotida yang benar dengan menggunakan untai orangtua alkohol dari DNA
sebagai template. interval waktu terjadi selama untai template termetilasi, dan untai yang baru
disintesis adalah unmethylated. Sistem perbaikan mismatch menggunakan perbedaan ini dalam
keadaan metilasi untuk cukai nukleotida cocok di untai baru lahir dan menggantinya dengan
nukleotida yang benar dengan menggunakan untai orangtua alkohol dari DNA sebagai template.
Dalam E. coli, perbaikan mismatch membutuhkan produk dari empat gen, Muth, mutL, muts, dan
Mutu (uvrD). The muts protein mengakui ketidaksesuaian dan mengikat mereka untuk memulai
proses perbaikan. Muth dan MutL protein kemudian bergabung kompleks. Muth berisi aktivitas
endonuklease GATC khusus yang memotong untai unmethylated di hemimethylated (yaitu setengah
alkohol) situs GATC baik 5 atau 3 untuk ketidakcocokan. Situs sayatan mungkin 1000 pasang
nukleotida atau lebih dari ketidakcocokan. Proses eksisi selanjutnya membutuhkan muts, MutL, DNA
helikase II (Mutu), dan exonuclease yang tepat. Jika sayatan terjadi pada GATC urut 5 mismatch, 5 →
3 exonuclease seperti E. coli exonuclease VII diperlukan. Jika sayatan terjadi 3 sampai ketidakcocokan,
kegiatan exonuclease 3 → 5 seperti itu dari E. coli exonuclease saya diperlukan.

Homolog dari E. coli muts dan protein MutL telah diidentifikasi pada jamur, tanaman, dan mamalia-
indikasi bahwa jalur perbaikan mismatch serupa terjadi pada eukariota. Bahkan, mismatch eksisi telah
dibuktikan secara in vitro dengan ekstrak nuklir dibuat dari sel manusia. Dengan demikian, perbaikan
mismatch mungkin mekanisme yang universal atau hampir universal untuk menjaga integritas
informasi genetik yang tersimpan dalam DNA untai ganda.

Dalam E. coli, perbaikan tergantung cahaya, perbaikan eksisi, dan perbaikan mismatch dapat
dihilangkan oleh mutasi pada psk (photoreactivation), UVR, dan gen mut, masing-masing. Dalam
mutan kekurangan lebih dari satu mekanisme perbaikan ini, masih lain sistem perbaikan DNA, disebut
perbaikan postreplication, adalah operasi. Ketika DNA polimerase III bertemu dengan dimer timin
dalam untai cetakan, kemajuannya diblokir. DNA polimerase restart sintesis DNA di beberapa posisi
terakhir dimer, meninggalkan celah di untai baru lahir sebaliknya dimer di untai cetakan. Pada titik ini,
urutan nukleotida asli telah hilang dari kedua untai keturunan double helix. molekul DNA yang rusak
diperbaiki oleh proses perbaikan rekombinasi tergantung dimediasi oleh E. coli produk gen recA. The
RecA protein, yang diperlukan untuk rekombinasi homolog, merangsang pertukaran untai tunggal
antara heliks ganda homolog. Selama perbaikan postreplication, protein RecA mengikat untai tunggal
DNA di celah dan memediasi pasangan dengan segmen homolog dari adik double helix. Kesenjangan
berlawanan dimer diisi dengan untai DNA homolog dari molekul adik DNA. kesenjangan yang
dihasilkan di adik helix ganda diisi oleh polimerase DNA, dan nick disegel oleh ligase DNA. The timin
dimer tetap di untai cetakan molekul DNA keturunan asli, tetapi untai komplementer sekarang utuh.
Jika dimer timin tidak dihapus oleh sistem perbaikan eksisi nukleotida, perbaikan postreplication ini
harus diulang setelah setiap putaran replikasi DNA. protein RecA mengikat untai tunggal DNA di celah
dan memediasi pasangan dengan segmen homolog dari adik double helix. Kesenjangan berlawanan
dimer diisi dengan untai DNA homolog dari molekul adik DNA. kesenjangan yang dihasilkan di adik
helix ganda diisi oleh polimerase DNA, dan nick disegel oleh ligase DNA. The timin dimer tetap di untai
cetakan molekul DNA keturunan asli, tetapi untai komplementer sekarang utuh. Jika dimer timin tidak
dihapus oleh sistem perbaikan eksisi nukleotida, perbaikan postreplication ini harus diulang setelah
setiap putaran replikasi DNA. protein RecA mengikat untai tunggal DNA di celah dan memediasi
pasangan dengan segmen homolog dari adik double helix. Kesenjangan berlawanan dimer diisi dengan
untai DNA homolog dari molekul adik DNA. kesenjangan yang dihasilkan di adik helix ganda diisi oleh
polimerase DNA, dan nick disegel oleh ligase DNA. The timin dimer tetap di untai cetakan molekul
DNA keturunan asli, tetapi untai komplementer sekarang utuh. Jika dimer timin tidak dihapus oleh
sistem perbaikan eksisi nukleotida, perbaikan postreplication ini harus diulang setelah setiap putaran
replikasi DNA. Kesenjangan berlawanan dimer diisi dengan untai DNA homolog dari molekul adik DNA.
kesenjangan yang dihasilkan di adik helix ganda diisi oleh polimerase DNA, dan nick disegel oleh ligase
DNA. The timin dimer tetap di untai cetakan molekul DNA keturunan asli, tetapi untai komplementer
sekarang utuh. Jika dimer timin tidak dihapus oleh sistem perbaikan eksisi nukleotida, perbaikan
postreplication ini harus diulang setelah setiap putaran replikasi DNA. Kesenjangan berlawanan dimer
diisi dengan untai DNA homolog dari molekul adik DNA. kesenjangan yang dihasilkan di adik helix
ganda diisi oleh polimerase DNA, dan nick disegel oleh ligase DNA. The timin dimer tetap di untai
cetakan molekul DNA keturunan asli, tetapi untai komplementer sekarang utuh. Jika dimer timin tidak
dihapus oleh sistem perbaikan eksisi nukleotida, perbaikan postreplication ini harus diulang setelah
setiap putaran replikasi DNA.

Sistem perbaikan DNA dijelaskan sejauh ini cukup akurat. Namun, ketika DNA dari sel E. coli yang rusak
berat oleh agen mutagenik seperti sinar UV, sel-sel mengambil beberapa langkah-langkah drastis
dalam usaha mereka untuk bertahan hidup. Mereka pergi melalui apa yang disebut respon SOS, di
mana seluruh baterai perbaikan DNA, rekombinasi, dan protein replikasi disintesis. Dua dari protein
ini, dikodekan oleh umuC dan umuD (UV bisa berubah) gen, adalah subunit DNA polymerase V, enzim
yang mengkatalisis replikasi DNA di daerah yang rusak dari kromosom-daerah di mana replikasi oleh
DNA polimerase III diblokir. DNA polimerase V memungkinkan replikasi untuk melanjutkan di segmen
rusak helai Template, meskipun urutan nukleotida di wilayah yang rusak tidak dapat direplikasi secara
akurat.

Mekanisme yang sistem SOS diinduksi oleh kerusakan DNA telah bekerja secara rinci. Dua peraturan
protein-Lexa dan RecA- kunci mengontrol respon SOS. Keduanya disintesis di tingkat latar belakang
rendah dalam sel tanpa adanya DNA yang rusak. Dalam kondisi ini, Lexa mengikat ke daerah DNA yang
mengatur transkripsi gen yang diinduksi selama respon SOS dan menjaga tingkat ekspresi mereka
rendah. Ketika sel-sel yang terkena cahaya ultraviolet atau agen lainnya yang menyebabkan kerusakan
DNA, protein RecA mengikat daerah untai tunggal DNA yang disebabkan oleh ketidakmampuan DNA
polimerase III untuk meniru daerah yang rusak. Interaksi RecA dengan DNA mengaktifkan RecA, yang
kemudian merangsang Lexa untuk menonaktifkan dirinya dengan diri belahan dada. Dengan Lexa tidak
aktif, tingkat ekspresi SOS gen-termasuk recA, Lexa,

Tanggapan SOS tampaknya menjadi upaya agak putus asa dan berisiko untuk melarikan diri dari efek
mematikan dari DNA rusak berat. Ketika sistem perbaikan rawan kesalahan adalah operasi, tingkat
mutasi meningkat tajam.

Penelitian terbaru tentang mekanisme perbaikan DNA menunjukkan bahwa banyak proses perbaikan
baru tetap harus dijelaskan. Selama beberapa tahun terakhir, beberapa polimerase DNA baru yang
memiliki peran unik dalam perbaikan DNA telah ditandai. Hasil studi ini menunjukkan bahwa kita harus
banyak belajar tentang mekanisme yang menjaga integritas informasi genetik kita.

POIN KUNCI

Beberapa sistem perbaikan DNA telah berevolusi untuk menjaga integritas informasi genetik dalam
organisme hidup.

Setiap jalur perbaikan mengoreksi jenis tertentu kerusakan pada DNA.

Mewarisi Penyakit Manusia dengan Cacat pada perbaikan DNA

Beberapa gangguan manusia mewarisi hasil dari cacat pada jalur perbaikan DNA.

Seperti yang kita bahas di awal bab ini, individu dengan xeroderma pigmentosum (XP) sangat sensitif
terhadap sinar matahari. Paparan hasil sinar matahari dalam frekuensi tinggi dari kanker kulit pada
pasien XP (Gambar 13,28). Sel-sel dari individu dengan XP kekurangan dalam perbaikan kerusakan UV-
induced DNA, seperti dimer timin. Sindrom XP dapat hasil dari cacat pada salah setidaknya delapan
gen yang berbeda. Produk-produk dari tujuh gen ini, XPA, XPB, XPC, XPD, XPE, XPF, dan XPG,
diperlukan untuk perbaikan eksisi nukleotida (Tabel 13.1). Mereka telah dimurnikan dan terbukti
penting untuk aktivitas excinuclease. Karena aktivitas excinuclease pada manusia membutuhkan 15
polipeptida, daftar gen XP mungkin akan berkembang di masa depan. Dua gangguan manusia lainnya,
sindrom Cockayne dan trichothiodystrophy, juga hasil dari cacat pada perbaikan eksisi nukleotida.
Individu dengan sindrom Cockayne menunjukkan pertumbuhan terbelakang dan keterampilan
mental, namun tingkat tidak meningkat dari kanker kulit. Pasien dengan trichothiodystrophy memiliki
perawakan pendek, rambut rapuh, dan kulit bersisik; mereka juga memiliki kemampuan mental
terbelakang. Individu dengan baik sindrom Cockayne atau trichothiodystrophy cacat dalam jenis
perbaikan eksisi yang digabungkan dengan transkripsi. Namun, rincian dari proses perbaikan
transkripsi-coupled ini masih sedang bekerja. Individu dengan baik sindrom Cockayne atau
trichothiodystrophy cacat dalam jenis perbaikan eksisi yang digabungkan dengan transkripsi. Namun,
rincian dari proses perbaikan transkripsi-coupled ini masih sedang bekerja. Individu dengan baik
sindrom Cockayne atau trichothiodystrophy cacat dalam jenis perbaikan eksisi yang digabungkan
dengan transkripsi. Namun, rincian dari proses perbaikan transkripsi-coupled ini masih sedang
bekerja.

Selain kerusakan sel-sel kulit, beberapa individu dengan XP mengembangkan kelainan neurologis,
yang muncul hasil dari kematian dini sel-sel saraf. Ini berpengaruh pada sel-sel saraf yang sangat
berumur panjang mungkin memiliki implikasi yang menarik sehubungan dengan penyebab penuaan.
Satu teori adalah bahwa hasil penuaan dari akumulasi mutasi somatik. Jika demikian, sistem perbaikan
yang rusak diperkirakan akan mempercepat proses penuaan, dan ini tampaknya menjadi kasus dengan
sel-sel saraf pasien XP. Namun, saat ini, ada sedikit bukti yang mengaitkan mutasi somatik untuk
penuaan.

kanker nonpolyposis usus turun temurun (juga disebut sindrom Lynch) diketahui hasil dari cacat
diwariskan dalam jalur DNA perbaikan mismatch. Hal ini dapat disebabkan oleh mutasi pada sedikitnya
tujuh gen yang berbeda, lima di antaranya tercantum dalam Tabel 13.1. Beberapa gen ini homolog E.
coli dan S. cerevisiae perbaikan mismatch gen. Dengan demikian, jalur perbaikan mismatch manusia
adalah sama dengan yang di bakteri dan jamur. Jenis kanker usus besar terjadi pada sekitar satu dari
setiap 200 orang, sehingga adalah jenis umum dari kanker. Setelah kita memahami cacat warisan yang
lebih baik, mungkin kita akan mampu mengembangkan metode yang efektif untuk mengobati kanker
ini selain operasi, kemoterapi, dan radioterapi.

Ataksia-telangiectasia, Fanconi anemia, sindrom Bloom, sindrom Werner, sindrom Rothmund-

Thomson, dan Nijmegan kerusakan sindrom enam penyakit warisan lainnya pada manusia terkait
dengan cacat dikenal dalam metabolisme DNA. Semua enam gangguan menunjukkan pola resesif
autosomal dari warisan, dan semua hasilnya dalam risiko tinggi keganasan, terutama leukemia dalam
kasus ataksia-telangiectasia dan Fanconi anemia. Sel pasien dengan ataksia-telangiectasia
menunjukkan kepekaan abnormal radiasi pengion, menunjukkan cacat dalam perbaikan kerusakan
DNA akibat radiasi.
Sel individu dengan Fanconi anemia terganggu pada penghapusan DNA interstrand cross-link, seperti
yang dibentuk oleh antibiotik mitomycin C. Individu dengan sindrom Bloom dan Nijmegan sindrom
kerusakan pameran frekuensi tinggi kromosom istirahat yang mengakibatkan penyimpangan
kromosom (Bab 6) dan kromatit pertukaran. Ataksia-telangiectasia disebabkan oleh cacat dalam
kinase yang terlibat dalam kontrol siklus sel, dan sindrom Bloom, sindrom Werner, dan Rothmund-
Thomson hasil sindrom dari perubahan dalam helikase DNA tertentu (anggota keluarga RecQ dari
helikase). Tabel 13.1 daftar beberapa penyakit manusia lebih dikenal akibat cacat diwariskan di jalur
perbaikan DNA.

POIN KUNCI

Pentingnya jalur perbaikan DNA didokumentasikan meyakinkan oleh gangguan manusia mewarisi
yang dihasilkan dari cacat dalam perbaikan DNA.

jenis kanker tertentu juga terkait dengan cacat di jalur perbaikan DNA.

DNA REKOMBINASI MEKANISME

Rekombinasi antara molekul DNA homolog melibatkan aktivitas berbagai enzim yang membelah,
bersantai, merangsang invasi tunggal-untai heliks ganda, perbaikan, dan bergabung untai DNA.

Kami membahas fitur utama dari rekombinasi antara kromosom homolog dalam Bab 7, tapi kami tidak
mempertimbangkan rincian molekul proses. Karena banyak dari produk gen yang terlibat dalam
perbaikan DNA yang rusak juga diperlukan untuk rekombinasi antara kromosom homolog, atau
menyeberang, sekarang kita akan memeriksa beberapa aspek molekul proses penting ini. Selain itu,
rekombinasi biasanya, mungkin selalu, melibatkan beberapa sintesis perbaikan DNA. Dengan
demikian, banyak informasi yang dibahas dalam bagian sebelumnya relevan dengan proses
rekombinasi.

Rekombinasi: belahan, dan bergabung kembali molekul DNA

Dalam Bab 7, kita membahas percobaan Creighton dan McClintock menunjukkan bahwa
menyeberang terjadi dengan kerusakan kromosom orangtua dan bergabung kembali dari bagian-
bagian dalam kombinasi baru. Bukti menunjukkan rekombinasi yang terjadi dengan kerusakan dan
bergabung kembali juga telah diperoleh oleh autoradiografi dan teknik lainnya. Memang, fitur utama
dari proses rekombinasi sekarang mapan, meskipun rincian spesifik tetap harus dijelaskan.

Banyak dari apa yang kita ketahui tentang rincian molekul menyeberang didasarkan pada studi mutan
rekombinasi-kekurangan dari E. coli dan S. cerevisiae. studi biokimia dari mutan ini telah menunjukkan
bahwa mereka kekurangan berbagai enzim dan protein lain yang diperlukan untuk rekombinasi.
Bersama-sama, hasil studi genetik dan biokimia telah memberikan gambaran yang cukup lengkap dari
rekombinasi pada tingkat molekuler.

Banyak model populer menyeberang berasal dari model yang diusulkan oleh Robin Holliday pada
tahun 1964. Model Holliday adalah salah satu yang pertama yang menjelaskan sebagian besar data
genetik tersedia pada saat itu dengan mekanisme yang melibatkan kerusakan, reuni, dan perbaikan
molekul DNA. Versi terbaru dari model Holliday ditunjukkan pada Gambar 13.29. Mekanisme ini,
seperti banyak orang lain yang telah dipanggil, dimulai ketika memotong endonuklease untai tunggal
masing-masing dua molekul DNA parental (kerusakan). Segmen dari alur tunggal pada satu sisi masing-
masing dipotong kemudian mengungsi dari untai komplementer mereka dengan bantuan helikase
DNA dan singlestrand mengikat protein. The helikase bersantai dua untai DNA di wilayah yang
berdekatan dengan sayatan untai tunggal. Dalam E. coli,
GAMBAR 13,29 Sebuah mekanisme untuk rekombinasi antara molekul DNA homolog. Jalur
ditampilkan didasarkan pada model awalnya diusulkan oleh Robin Holliday pada tahun 1964.

alur tunggal pengungsi kemudian bertukar pasangan mitra, dasar-pasangan dengan untai
komplementer utuh dari kromosom homolog. Proses ini dirangsang oleh protein seperti E. coli RecA
protein. RecA-jenis protein telah ditandai di banyak spesies, baik prokariotik dan eukariotik. RecA
protein dan homolog yang merangsang asimilasi untai tunggal, suatu proses dimana untai tunggal
DNA menggantikan homolog dalam heliks ganda DNA. RecA-jenis protein mempromosikan pertukaran
timbal balik dari untai tunggal DNA antara heliks ganda dua DNA dalam dua langkah. Pada langkah
pertama, untai tunggal dari satu double helix berasimilasi oleh, double helix homolog kedua,
menggusur untai yang sama atau homolog dan basis-pasangan dengan untai komplementer. Pada
langkah kedua, untai tunggal pengungsi juga sama berasimilasi dengan helix ganda pertama. The RecA
protein menengahi pertukaran ini dengan mengikat untai berpasangan DNA, membantu dalam
pencarian urutan DNA homolog, dan, sekali helix ganda homolog ditemukan, mempromosikan
penggantian satu untai dengan untai berpasangan. Jika urutan komplementer sudah ada sebagai untai
tunggal, kehadiran protein RecA meningkatkan tingkat renaturasi oleh lebih dari 50 kali lipat.
GAMBAR 13.30 mikrograf elektron (a) dan diagram (b) dari bentuk chi. Dua molekul DNA telah
tertangkap dalam proses rekombinasi genetik menggunakan mikroskop elektron. mikrograf elektron
ini memberikan bukti fisik langsung untuk keberadaan rekombinasi Holliday menengah. Perhatikan
bagaimana molekul ini sesuai persis dengan struktur teoritis yang muncul di panel (g) dari prototipe
model yang rekombinasi Holliday, yang ditunjukkan pada Gambar 13.29. Mikrograf Courtesy of H.
Potter, University of South Florida dan D. Dressler, Harvard University.

Untaian dibelah kemudian kovalen tergabung dalam kombinasi baru (reuni) oleh ligase DNA. Jika
istirahat asli dalam dua helai tidak terjadi tepat pada situs yang sama dalam dua homolog, beberapa
menjahit akan diperlukan sebelum ligase DNA dapat mengkatalisis langkah reuni. menjahit ini
melibatkan eksisi nukleotida oleh exonuclease dan perbaikan sintesis oleh polimerase DNA. Urutan
kejadian yang digambarkan sejauh akan menghasilkan berbentuk X-intermediet rekombinasi disebut
bentuk chi, yang telah diamati dengan mikroskop elektron pada beberapa spesies (Gambar 13.30).
Bentuk-bentuk chi diselesaikan oleh kerusakan enzim-katalis dan bergabung kembali dari untaian DNA
komplementer untuk menghasilkan dua molekul DNA rekombinan. Dalam E. coli, struktur chi dapat
diatasi dengan produk baik gen RECG atau gen ruvC (perbaikan kerusakan imbas UV).

Sebuah tubuh besar bukti menunjukkan bahwa rekombinasi homolog terjadi dengan lebih dari satu
mekanisme-mungkin oleh beberapa mekanisme yang berbeda. Dalam S. cerevisiae, ujung molekul
DNA yang dihasilkan oleh istirahat untai ganda sangat recombinogenic. Fakta ini dan bukti lain
menunjukkan bahwa rekombinasi dalam ragi sering melibatkan istirahat untai ganda di salah satu
heliks ganda orangtua. Dengan demikian, pada tahun 1983, Jack Szostak, Franklin Stahl, dan rekan
mengusulkan model istirahat untai ganda dari menyeberang. Menurut model mereka, rekombinasi
melibatkan istirahat untai ganda di salah satu heliks ganda orangtua, bukan hanya istirahat untai
tunggal seperti pada model Holliday. Istirahat awal kemudian diperbesar kesenjangan di kedua helai.
Dua termini beruntai tunggal diproduksi di celah untai ganda double helix yang rusak menyerang helix
ganda utuh dan menggantikan segmen untai homolog di wilayah ini. Kesenjangan kemudian diisi oleh
sintesis perbaikan. Proses ini menghasilkan dua kromosom homolog bergabung dengan dua jembatan
untai tunggal. Jembatan yang diselesaikan dengan belahan dada endonucleolytic, seperti dalam model
Holliday. Kedua model untai ganda-break dan model Holliday baik menjelaskan produksi kromosom
yang rekombinan untuk penanda genetik mengapit daerah di mana crossover terjadi. seperti dalam
model Holliday. Kedua model untai ganda-break dan model Holliday baik menjelaskan produksi
kromosom yang rekombinan untuk penanda genetik mengapit daerah di mana crossover terjadi.
seperti dalam model Holliday. Kedua model untai ganda-break dan model Holliday baik menjelaskan
produksi kromosom yang rekombinan untuk penanda genetik mengapit daerah di mana crossover
terjadi.

GENE KONVERSI: DNA PERBAIKAN SINTESIS BERHUBUNGAN DENGAN rekombinasi

Sampai saat ini, kita telah membahas hanya peristiwa rekombinasi yang dapat dijelaskan oleh
kerusakan dari kromatid homolog dan pertukaran timbal balik dari bagian. Namun, analisis tetrad
produk meiosis jamur tertentu mengungkapkan bahwa pertukaran genetik tidak selalu timbal balik.
Sebagai contoh, jika persilangan dilakukan antara dua mutasi terkait erat dalam cetakan Neurospora,
dan ASCI mengandung tipe liar rekombinan dianalisis, ASCI ini sering tidak mengandung timbal balik,
rekombinan double-mutan.

Pertimbangkan lintas yang melibatkan dua mutasi terkait erat, m1 dan m2. Dalam sebuah salib dari
m1 m2 dengan m1 m2, ASCI dari jenis berikut diamati:

Pasangan Spore 1: m1 m2

Spore pasangan 2: m1 m2

Pasangan Spore 3: m1 m2

Pasangan Spore 4: m1 m2

Wild-jenis spora m1 m2 yang hadir, tetapi m1 m2 spora double-mutan tidak hadir dalam ascus.
rekombinasi timbal balik akan menghasilkan kromosom m2 m1 setiap kali kromosom m1 m2
diproduksi. Dalam ascus ini, m2: rasio m2 adalah 3: 1 bukan 2: 2 seperti yang diharapkan. Salah satu
alel m2 tampaknya telah “diubah” ke bentuk m2 alel. Dengan demikian, jenis ini rekombinasi
nonreciprocal disebut konversi gen. Kita mungkin menganggap bahwa hasil konversi gen dari mutasi,
kecuali bahwa itu terjadi pada frekuensi yang lebih tinggi dari peristiwa mutasi yang sesuai, selalu
menghasilkan alel hadir pada kromosom homolog, bukan alel baru, dan berkorelasi sekitar 50 persen
dari waktu dengan timbal balik rekombinasi mengapit spidol. Pengamatan terakhir sangat
menunjukkan bahwa hasil konversi gen dari peristiwa yang terjadi selama menyeberang. Memang,
konversi gen kini diyakini hasil dari sintesis perbaikan DNA terkait dengan kerusakan, eksisi, dan acara
reuni menyeberang.

Dengan spidol terkait erat, konversi gen lebih sering terjadi dari rekombinasi timbal balik. Dalam salah
satu penelitian terhadap gen his1 ragi, 980 dari 1081 ASCI yang mengandung rekombinan nya
dipamerkan konversi gen, sedangkan hanya 101 menunjukkan rekombinasi timbal balik klasik.

Fitur yang paling mencolok dari konversi gen adalah bahwa masukan rasio 1: alel 1 tidak
dipertahankan. Hal ini dapat dijelaskan dengan mudah jika segmen pendek DNA orangtua
terdegradasi dan kemudian resynthesized dengan untaian template yang disediakan oleh DNA
membawa alel lainnya. Mengingat mekanisme perbaikan eksisi dibahas sebelumnya dalam bab ini,
model Holliday dari menyeberang menjelaskan konversi gen untuk penanda genetik yang terletak di
sekitar langsung dari crossover. Pada Gambar 13.29d-i, ada segmen DNA antara a dan b lokus di mana
untai komplementer DNA dari dua kromosom homolog adalah dasar-dipasangkan. Jika sepasang
ketiga alel yang terletak di dalam segmen ini yang memisahkan di salib, ketidaksesuaian dalam dua
heliks ganda akan hadir. molekul DNA yang mengandung ketidaksesuaian tersebut, atau alel yang
berbeda dalam dua untai komplementer dari helix ganda, disebut heteroduplexes. molekul
heterodupleks tersebut terjadi sebagai perantara dalam proses rekombinasi.

Jika Gambar 13.29e dimodifikasi untuk menyertakan sepasang ketiga alel, dan dua kromatid lain
ditambahkan, tetrad akan memiliki komposisi sebagai berikut:
GAMBAR 13,31 Pembentukan baik rekombinan yang (kiri bawah) atau orangtua (kanan bawah)
kombinasi dari mengapit penanda dalam hubungan dengan konversi gen. rekombinasi menengah di
atas adalah setara dengan yang diilustrasikan pada Gambar 13.29g, tetapi menunjukkan kromatid
mismatch-diperbaiki dari tetrad digambarkan dalam teks. tetrad ini menghasilkan ascus menampilkan
3 m untuk 1 m konversi gen. Pembelahan jembatan untai tunggal dalam bidang vertikal (kiri)
menghasilkan rekombinan (ab dan ab) pengaturan mengapit spidol, sedangkan belahan dada pada
bidang horisontal menghasilkan susunan orangtua (ab dan ab) penanda mengapit.

Jika ketidaksesuaian diselesaikan oleh perbaikan eksisi nukleotida (lihat Gambar 13.27), di mana
untaian m dipotong dan resynthesized dengan untaian m pelengkap sebagai template, yang tetrad
berikut akan menghasilkan:

Sebagai hasil dari replikasi DNA semikonservatif selama pembelahan mitosis berikutnya, tetrad ini
akan menghasilkan ascus berisi enam m ascospores dan dua m ascospores, 3: rasio konversi gen 1.

Misalkan bahwa hanya satu dari dua ketidaksesuaian dalam tetrad hanya dijelaskan diperbaiki
sebelum pembelahan mitosis. Dalam hal ini, replikasi semikonservatif dari heterodupleks yang tersisa
akan menghasilkan satu m homoduplex dan satu m homoduplex, dan ascus yang dihasilkan akan berisi
5m: 3m rasio ascospores. 5 seperti: 3 rasio konversi gen terjadi. Mereka hasil dari postmeiotic (mitosis)
pemisahan heteroduplexes unrepaired.

konversi gen terkait dengan rekombinasi timbal balik dari mengapit spidol sekitar 50 persen dari
waktu. Korelasi ini baik dijelaskan oleh model Holliday rekombinasi disajikan pada Gambar 13.29. Jika
dua kromatid rekombinan dari tetrad hanya digambarkan diambil dalam bentuk setara dengan yang
ditunjukkan pada Gambar 13.29g, asosiasi konversi gen dengan rekombinasi timbal balik dari
mengapit spidol dapat dengan mudah dijelaskan (Gambar 13.31). Jembatan untai tunggal yang
menghubungkan dua kromatid harus diselesaikan oleh pembelahan endonucleolytic untuk
menyelesaikan proses rekombinasi. pembelahan ini dapat terjadi baik horisontal maupun vertikal
pada formulir chi ditarik pada Gambar 13.31. pembelahan vertikal akan menghasilkan ascus
menunjukkan baik konversi gen dan rekombinasi timbal balik dari mengapit spidol. pembelahan
horizontal akan menghasilkan ascus menunjukkan konversi gen dan kombinasi orangtua mengapit
spidol. Jadi, jika pembelahan terjadi di vertikal pesawat setengah dari waktu dan di horisontal pesawat
setengah dari waktu, konversi gen akan dikaitkan dengan rekombinasi timbal balik dari mengapit
spidol sekitar 50 persen dari waktu, seperti yang diamati.

POIN KUNCI

Menyeberang melibatkan kerusakan molekul DNA homolog dan bergabung kembali bagian-bagian
dalam kombinasi baru.

Ketika penanda genetik yang terkait erat, rekombinasi nonreciprocal, atau konversi gen, sering terjadi,
menghasilkan 3: 1 rasio alel segregasi.

Hasil konversi gen dari sintesis perbaikan DNA yang terjadi selama proses rekombinasi.