ELISA CRP

PENGGUNAAN YANG DIMAKSUDKAN

The Calbiotech, Inc (CBI) C-Reactive Protein Ultra Sensitive ELISA Kit dimaksudkan untuk
penentuan kuantitatif protein C-reactive (CRP) dalam serum manusia atau plasma.

IKHTISAR DAN PENJELASAN

C-Reactive protein (CRP) adalah globulin alfa dengan massa molekul sekitar 110.000 hingga
140.000 dalton, dan terdiri dari lima subunit identik, yang secara nonkoval dirakit sebagai
pentamer siklus. CRP disintesis di hati dan secara normal hadir sebagai trace konstituen
serum atau plasma pada kadar kurang dari 0,3 mg / dl. CRP adalah salah satu protein fase-
acule, tingkat serum atau plasma yang meningkat selama respon umum yang tidak spesifik
terhadap berbagai macam penyakit. Meskipun deteksi peningkatan kadar CRP dalam serum
tidak spesifik untuk penyakit tertentu, ini merupakan indikator yang berguna untuk proses
inflamasi. Selain itu, pengukuran CRP dengan tes CRP sensitivitas tinggi dapat menambah
nilai prediksi penanda jantung lainnya (mioglobin, creatine-kinase-MB, troponin I dan T),
yang digunakan untuk menilai risiko penyakit kardiovaskular dan penyakit pembuluh darah
perifer. Peradangan di arteri mungkin berperan dalam penyakit jantung dan HS-CRP dapat
menentukan risiko penyakit jantung pada mereka yang memiliki penyakit jantung yang tidak
dipilih dan risiko komplikasi bagi mereka yang sudah pernah memiliki kejadian jantung.

PRINSIP ASET
CRP ELISA Kit adalah metode sandwich langsung fase padat. Sampel yang diencerkan dan
reagen konjugat (anti-CRP Biotin & HRP) ditambahkan ke sumur yang dilapisi dengan
Streptavidin. CRP dalam sampel pasien membentuk sandwich antara dua antibodi spesifik
terhadap CRP. Protein Umbound dan konjugat HRP dicuci dengan buffer cuci. Setelah
penambahan substrat TMB, intensitas warna sebanding dengan konsentrasi CRP dalam
sampel. Kurva standar disiapkan terkait intensitas warna dengan konsentrasi CRP.

BAHAN YANG DIBERIKAN 96 tes

1. Microwell dilapisi dengan Streptavidin
2. Standar CRP: 6 vial (siap pakai)
3. CRP Conjugate Reagent: 1 botol (siap pakai)
4. Media TMB: 1 botol (siap pakai)
5. Stop Solution: 1 botol (siap pakai)
6. Sampel Pengencer
7. 20x Cuci konsentrat: 1 botol

MATERI YANG TIDAK DIBERIKAN

1. Air suling atau deionisasi
2. Pipet presisi
3. Tips pipet sekali pakai
4. ELISA reader mampu membaca daya serap pada 450 nm
5. Kertas serap atau handuk kertas
6. Kertas grafik

PENYIMPANAN DAN STABILITAS

1. Simpan kit di 2-8 oc
2. Simpan microwell dalam kantong kering dengan desikan
3. Reagen stabil hingga berakhirnya kit
4. Jangan memaparkan reagen uji terhadap panas, matahari, atau cahaya yang kuat

PERINGATAN DAN PENCEGAHAN

1. Bahan potensial biohazardouse
Kalibrator dan kontrol mengandung komponen sumber manusia yang telah diuji dan
ditemukan non-reaktif untuk antigen permukaan hepatitis B serta antibodi HIV dengan
reagen berlisensi FDA. Namun, tidak ada metode tes yang dapat menawarkan jaminan
lengkap bahwa HIV, virus Hepatitis B atau agen infeksi lain tidak ada. Pereaksi ini harus
ditangani di Biosafety Level 2, seperti yang direkomendasikan dalam pedoman Centers for
Disease / National Institutes of Health, "Biosafety di Laboratorium Mikrobiologi dan
Biomedis" 1984.
2. Jangan pipet melalui mulut. Jangan merokok, makan, atau minum di area di mana
spesimen atau reagen kit ditangani
3. Komponen dalam kit ini dimaksudkan untuk digunakan sebagai unit integral. Komponen
lot yang berbeda tidak boleh dicampur
4. Disarankan bahwa standar, kontrol dan sampel serum dijalankan dalam rangkap dua
5. Hasil optimal akan diperoleh dengan kepatuhan ketat pada protokol ini. Pemipaan yang
akurat dan tepat, serta mengikuti waktu dan suhu yang tepat yang ditentukan sangat penting.
Setiap penyimpangan dari ini dapat menghasilkan data yang tidak valid

PENANGANAN KOLEKSI SPESIMEN

1. Kumpulkan spesimen darah dan segera pisahkan serum
2. Spesimen dapat disimpan dalam lemari pendingin pada suhu (2-8 oc) selama 5 hari. Jika
waktu penyimpanan melebihi 5 hari, simpan beku di (-20 oc) hingga satu bulan.
3. Hindari beberapa siklus beku-cair
4. Sebelum pengujian, serum beku harus sepenuhnya dicairkan dan dicampur dengan baik
5. Jangan gunakan spesimen lipemia yang terlalu parah

PERSIAPAN REAGEN
1X Wash Buffer: Siapkan 1x Wash buffer dengan menambahkan isi botol (25 ml, 20x) ke
475 ml air suling atau deionisasi, Simpan pada suhu kamar (20-25 oc)

PROSEDUR ASSAY
Sebelum pengujian, biarkan reagen berdiri pada suhu kamar (20-25). Campur semua reagen
dengan lembut sebelum digunakan.
1. tempatkan jumlah strip yang diinginkan ke dalam tempatnya
2. Encerkan sampel pasien dan kontrol 1: 100 dengan menambahkan 5 ul sampel ke 495 ul
sampel siluen (STANDAR SIAP MENGGUNAKAN)
3. Keluarkan 10 ul sampel standar, encer, dan kontrol ke dalam sumur yang sesuai
4. Tambahkan 100 ul reagen konjugat ke semua sumur. ketuk dudukan untuk menghilangkan
gelembung udara dari cairan dan aduk rata.
5. inkubasi selama 60 menit pada suhu (20-25 oc)
6. Buang cairan dari semua sumur. cuci sumur tiga kali dengan 300 ul buffer cuci 1x.
mengotori handuk kertas penyerap
7. Tambahkan 100 ul media TMB ke semua sumur.
8. inkubasi selama 15 menit pada suhu kamar.
9. Tambahkan 50 ul solusi berhenti untuk semua sumur. kocok piring dengan lembut untuk
mencampur larutan.
10. Baca absorbansi pada pembaca ELISA pada 450 nm dalam waktu 15 menit setelah
menambahkan solusi penghentian
PERHITUNGAN HASIL
Kurva standar dikonstruksi sebagai berikut:
1. Periksa nilai standar CRP pada setiap botol standar. nilai ini mungkin bervariasi dari satu
lot ke lot lainnya. pastikan Anda memeriksa nilai pada setiap kit. lihat contoh standar
terlampir
2. untuk membangun kurva standar. plot absorbansi untuk standar CRF (sumbu vertikal)
versus konsentrasi standar CRP (sumbu horizontal) pada kertas grafik linier. Gambarlah
kurva terbaik melalui titik.
3. Baca absorbansi untuk kontrol dan masing-masing sampel sampel kurva. catat nilai untuk
setiap kontrol atau sampel yang tidak diketahui
4. nilai yang diperoleh dari sampel pasien dan serum kontrol harus dikalikan dengan faktor
dilusi 100 untuk mendapatkan hasil CRP dalam mg / l.
5. sampel pasien dengan konsentrasi CPR lebih besar dari 10 mg / l harus lebih lanjut dilulet
10 kali lipat pada pengenceran 100 kali lipat awal (total pengenceran 1: 1.000), dan nilai CRP
akhir harus dikalikan dengan 1.000 hingga pb untuk hasil crp dalam mg / L

Contoh Kurva Standar

NILAI-NILAI YANG DIHARAPKAN

Disarankan bahwa setiap laboratorium menetapkan kisaran normal sendiri berdasarkan
populasi pasien. Namun, berdasarkan literatur yang diterbitkan, individu yang sehat
diharapkan memiliki nilai CRP sebagai berikut; tingkat CRP dalam serum manusia normal
berkisar antara 0,2 hingga 10 mg / L, di mana 90% individu yang tampak sehat memiliki
kadar CRP <3 mg / L.

BATASAN UJI
1. Hasil tes yang diperoleh dengan menggunakan kit ini hanya berfungsi sebagai bantuan
untuk diagnosis dan harus ditafsirkan dalam kaitannya dengan riwayat pasien, temuan fisik
dan prosedur diagnostik lainnya.
2. Jangan gunakan natrium azida sebagai pengawet. Sodium azide menghambat aktivitas
enzim HRP.
KARAKTERISTIK KINERJA
1. Presisi
Intra-Assay
Serum
Jumlah Replika
Berarti
Standar deviasi
Koefisien variasi

Antar-Tes
2. Linearitas
Tiga sampel pasien yang berbeda diencerkan dengan kalibrator "0" menjadi 1: 2, 1: 4, 1: 8.
Nilai CRP diuji dan hasilnya benar dengan faktor dilusi. Hasil uji pengenceran ini adalah
sebagai

Nilai asli
Persentase Pemulihan

Contoh Kurva Standar

NILAI-NILAI YANG DIHARAPKAN

Disarankan bahwa setiap laboratorium menetapkan kisaran normal sendiri berdasarkan
populasi pasien. Namun, berdasarkan literatur yang diterbitkan, individu yang sehat
diharapkan memiliki nilai CRP sebagai berikut; tingkat CRP dalam serum manusia normal
berkisar antara 0,2 hingga 10 mg / L, di mana 90% individu yang tampak sehat memiliki
kadar CRP <3 mg / L.

BATASAN UJI
1. Hasil tes yang diperoleh dengan menggunakan kit ini hanya berfungsi sebagai bantuan
untuk diagnosis dan harus ditafsirkan dalam kaitannya dengan riwayat pasien, temuan fisik
dan prosedur diagnostik lainnya.
2. Jangan gunakan natrium azida sebagai pengawet. Sodium azide menghambat aktivitas
enzim HRP.
KARAKTERISTIK KINERJA
1. Presisi
Intra-Assay
Serum
Jumlah Replika
Berarti
Standar deviasi
Koefisien variasi

Antar-Tes
2. Linearitas
Tiga sampel pasien yang berbeda diencerkan dengan kalibrator "0" menjadi 1: 2, 1: 4, 1: 8.
Nilai CRP diuji dan hasilnya benar dengan faktor dilusi. Hasil uji pengenceran ini adalah
sebagai

Nilai asli
Persentase Pemulihan

4. Sensitivitas
Sensitivitas ditentukan dengan menghitung rata-rata plus 2SD dari titik nol standar yang diuji
24 kali dalam jangka yang sama

Serum
Berarti + 2SD (Sensitivitas)

5. Spiking Recovery
Sampel dibubuhi dengan jumlah CRP yang diketahui dan diuji dengan spiked dan unspiked
dalam rangkap dalam pengujian yang sama. Hasilnya adalah sebagai berikut:

CRP
CRP Spiked
Nilai yang diharapkan
Nilai yang terukur
Pemulihan