REVIEW JURNAL INTERNASIONAL

Judul : Engineered Recombinant Protein Production Systems Originated from

Escherichia coli atau Sistem Produksi Protein Rekombinan Rekayasa Escherichia coli

Oleh : Javad Ranjbari dari Department of Biotechnology, School of Advanced

Technologies in Medicine, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran.

Reviewer : Aulia ‘Azzam Jihad

Dari jurnal ini penulis berusaha untuk membuat pemilihan strain inang yang cocok dalam
produksi rekombinan protein heterolog. Karena sistem prokariotik dan terutama sel Escherichia
coli (E. coli) adalah inang yang paling menarik dalam produksi protein terapeutik, berbagai
turunan dari organisme ini sudah dikembangkan untuk mengatasi keterbatasan yang ada dalam
produksi protein rekombinan, seperti ekspresi yang tidak efisien dan pelipatan target protein
dengan asal eukariotik. Jurnal ini merangkum strategi kunci untuk rekayasa E. coli dan
memperkenalkan beberapa jenis E. coli rekayasa baru yang dapat diterapkan yang menghasilkan
protein yang lebih kompleks untuk penggunaan terapi dan penelitian di masa depan. Disisi lain
penulis berpikiran karena secara umum, isolasi protein dari sumber-sumber alam seperti yang
telah dilakukan di masa lalu, adalah pekerjaan berat dan tidak efisien serta memiliki tantangan
keamanan dan ketersediaan. Pengenalan teknologi rekombinan menyingkirkan keterbatasan ini
melalui kloning DNA protein coding dalam vektor yang sesuai dan ekspresi asing di host yang
cocok. Karena biaya rendah, kemudahan manipulasi genetik, pertumbuhan yang cepat, hasil
yang tinggi dari produk, efektivitas biaya, dan proses skala-up yang mudah, E. coli dianggap
sebagai pilihan pertama untuk produksi skala besar industri protein terapeutik, terutama yang
non-glikosilasi.

Ada beberapa strategi berbeda dalam rekayasa E. coli yang menghasilkan peningkatan
sintesis dan / atau pelipatan protein. Daripada pemilihan regangan, beberapa masalah lain harus
dipertimbangkan dalam produksi protein yang efisien dalam E. coli menggunakan teknologi
DNA rekombinan. Beberapa konsen ini yaitu :

1. Penggunaan Codon dalam E. coli

2. Stabilitas mRNA yang ditingkatkan
3. Strategi koekspresi pendamping
4. Ekspresi protein berikat disulfida menggunakan E. coli

Tujuan akhir dari rekayasa mikroorganisme adalah untuk mendesain strain yang dapat
menghasilkan protein aktif dengan penyesuaian yang sesuai dalam skala industri. Rekayasa
regangan adalah pendekatan yang sangat menjanjikan dalam hal ini yang dapat mengembangkan
strain E. coli yang direkayasa dengan fitur yang ditingkatkan secara signifikan untuk produksi
protein rekombinan yang efisien (Makino et al., 2011). Saat ini, para ilmuwan menggunakan
metode yang berbeda untuk menghasilkan galur dengan peningkatan kapasitas produksi,
penurunan toksisitas yang disebabkan oleh kelebihan produksi, optimalisasi jalur seluler dan
fisiologi (Santos dan Stephanopoulos, 2008). Mutagenesis klasik dan metode rekayasa genom
adalah dua kelompok penting dari strategi rekayasa regangan. Beberapa mutagenesis klasik
strategi dalam bakteri melalui peningkatan produksi protein rekombinan terdiri dari mutagenesis
kromosom spontan (Miroux dan Walker, 1996), mutagenesis kromosom menggunakan mutagen
kimia atau gen mutator (Massey-Gendel et al., 2009), transposon mutagenesis (Makino et al.,
2011), dan ekspresi bersama dari perpustakaan ASKA (satu set lengkap arsip E. coli K -12 ORF)
(Skretas dan Georgiou, 2009). Juga, ada beberapa strategi rekayasa genom seperti, rekayasa
mesin transkripsi global (gTME) (Alper dan Stephanopoulos, 2007; Lee et al., 2008; Klein
Marcuschamer et al., 2009), Perpustakaan jari zin buatan (Park et al., 2003; Park et al., 2005; Lee
et al., 2008), rekombinan multipleks yang dapat dilacak (TRMR) (Warner et al., 2010) dan
pengocokan genom (Patnaik et al., 2002; Zhang et al., 2002; Dai dan Copley, 2004) yang dapat
meningkatkan produksi protein rekombinan pada E. coli.

Dari jurnal ini didapat strain yang cocok untuk merekayasa replikasi E.Coli yang unggul
dan lebih baik dari strain replikasi standar E.Coli (BL21), yaitu :

1. Lemo21 (DE3)
2. NiCo21 (DE3) strain
3. NEB Express Competent E. coli
4. Rossetta strain
5. Origami strain
6. BL21-CodonPlus

Sehingga pada hasil akhir penulis mengambil kesimpulan bahwa dengan memilih pasangan
strain yang berbeda meningkatkan sistem ekspresi prokariotik yang saat ini digunakan dalam
produksi protein rekombinan. Pemilihan strain dapat disesuaikan dengan tujuan penelitian dan
identitas protein, yang masing-masing memiliki efek penting pada kemanjuran ekspresi dalam
hasil dan bioaktivitas akhir dari protein yang diekspresikan.