Topik 3

Produksi Protein Rekombinan

Bioteknologi modern adalah bioteknologi yang menghasilkan jasa dan barang dengan
menggunakan rekayasa genetika berupa DNA rekombinan. DNA rekombinan (rDNA) adalah untai
DNA yang dibentuk oleh kombinasi dua atau lebih sekuens DNA. Dengan menggunakan teknologi
DNA rekombinan, para ilmuwan dapat membuat sekuens DNA baru yang tidak secara alami ada dalam
keadaan normal dan kondisi lingkungan. DNA rekombinan yang di hasilkan dimasukan ke dalam sel
inang, di mana ia diekspresikan menjadi protein baru, yang disebut protein rekombinan. Protein
rekombinan adalah bentuk dari protein yang dimanipulasi, yang dihasilkan dengan berbagai cara untuk
menghasilkan protein dalam jumlah besar, memodifikasi sekuens gen dan membuat produk komersial
yang bermanfaat. Protein rekombinan dikodekan oleh DNA rekombinan, yang telah dikloning dalam
suatu system yang mendukung ekspresi gen dan terjemahan mRNA. Memilih system ekspresi protein
yang tepat adalah kunci keberhasilan ekspresi protein rekombinanan. Adapun beberapa system ekspresi
protein rekombinan atau produksi protein rekombinan yang umum digunakan adalah sebagai berikut:

1. Produksi protein di inang prokariotik

Untuk produksi berlebih protein rekombinana digunakan system ekspresi eukariotik dan prokariotik.
Memilih system yang tepat tergantung, antara lain, pada tingkat pertumbuhan dan kultur sel inang,
tingkat ekspresi gen target dan pemrosesan pascatranslasional dari protein yang disintesis. Terlepas
dari jenis system ekspresi, elemen dasarnya adalah vector dan host ekspresi. Sistem prokariotik
adalah system yang paling banyak digunakan untuk kelebihan protein, pada skala laboratorium dan
industry. System ini didasarkan terutama pada bakteri E.coli, meskipun semakin sering spesies
Bacillus digunakan. Sistem prokariotik memungkinkan seseorang untuk mendapat protein
rekombinan dalam jumlah besar dan waktu singkat. Biakan sel bakteri yang sederhana dan tidak
mahal serta mekanisme transkripsi dan terjemahan yang terkenal memudahkan pengguna
mikroorganisme ini. Kesederhanaan modifikasi genetic dan ketersediaan banyak mutan bakteri
adalah keuntungan tambahan dari system prokariotik.
2. Produksi protein di inang eukariotik
Gen eukariotik, dalam bentuk yang disederhanakan, dapat dimasukkan ke dalam bakteri, dan bakteri
tersebut dapat digunakan sebagai pabrik untuk menghasilkan produk protein yang diinginkan.
Bakteri yang digunakan adalah bakteri yang kekurangan enzim, diperlukan untuk melakukan
modifikasi posttranslasional seperti pembelahan spesifik polipeptida dan perlekatan unit karbohidrat.
Karena bakter merupakan prokariota, mereka tidak dilengkapi dengan mesin enzimatik penuh untuk
mencapai modifikasi pasca-translasi yang diperlukan atau pelipatan molekul. Oleh karena itu,
protein eukariotik multi-domain yang diekspresikan dalam bakteri seringkali tidak berfungsi. Juga,
banyak protein menjadi tidak dapat larut sebagai badan inklusi yang sulit untuk dipulihkan tanpa
denaturant yang keras dan pemurnian protein yang rumit berikutnya. Untuk mengatasi masalah ini,
system ekspresi menggunakan beberapa sel eukariotik dikembangkan untuk aplikasi yang
membutuhkan protein sesuai seperti sel tanaman (yaitu tembakau), serangga atau mamalia (yaitu
sapi) ditransfusikan dengan gen dan dikultur dalam suspense dan bahkan sebagian jaringan atau
seluruh organisme, untuk menghasilkan protein terlipat penuh.
 3. Rekayasa protein
Rekayasa protein adalah aplikasi ilmu teknik pada proses pengembangan protein. Terdapat dua strategi
umum pada rekayasa protein. Pertama dikenal dengan desain rasional. Ilmuwan menggunakan
pengetahuan yang detail dari struktur dan fungsi protein untuk membuat desain yang diinginkan.
Manfaat dari strategi ini adalah tidak mahal dan mudah dilakukan, tetapi terdapat banyak penolakan
dari pengetahuan struktur detail dari protein yang seringkali tidak tersedia, dan sangat sulit
memprediksi efek dari berbagai mutasi yang akan dilakukan. Strategi kedua adalah evolusi terarah
yang merupakan mutagenesis acak yang diaplikasikan untuk protein, dan bagian yang terpilih
digunakan untuk mengambil varian-varian yang memiliki kualitas yang diinginkan. Langkah
selanjutnyaa adalah mutasi dan penyeleksian. Manfaat besar dari teknik ini adalah tidak
membutuhkan pengetahuan banyak tentang struktur protein dan tidak perlu memprediksi apa efek
yang akan diberikan oleh proses hasil mutasi.

Topik 4

Hewan Transgenik

Tikus transgenic mengandung DNA asing tambahan di setiap sel yang memungkinkan mereka
untuk digunakan mempelajari fungsi gen atau peraturan dan untuk model penyakit manusia. Ada dua
metode utama dalam menghasilkan hewan transgenik. Pertama metode injeksi pronuclear, DNA asing
dimasukan kedalam telur tikus setelah pembuahan menggunakan jarum halus. Jika sel transgenic
berkontribusi pada daerah gamet, maka beberap telur atau sperma transgenic akan diproduksi dan
generasi berikutnya akan sepenuhnya tikus transgenic. Metode kedua adalah pengenalan DNA kedalam
sel induk embrionik (ES sel). DNA diperkenalkan ke sel-sel ES dapat mengintegrasikan secara acak
seperti dalam inejksi pronuclear. Namun, jika DNA diperkenalkan mirip di urutan ke bagian dari genom
tikus, mungkin menjalani rekombinasi homolog dan mengintegrasikan sebagai salinan tunggal pada
situs tertentu. Ketika sperma membuahi telur transgenic normal, tikus transgenic diproduksi dengan
DNA asing yang sama disetiap sel.

Tikus transgenic: metodologi

Tikus transgenic: aplikasi

Ternak transgenic

Unggas transgenic

Ikan transgenic