Penelitian

JAMANeurology | asli Investigasi

Mendiagnosis Penyakit sporadis Creutzfeldt-Jakob oleh Deteksi Abnormal

Prion Protein di Urine Pasien
Connie Luk, PhD; Samantha Jones, BSc; Claire Thomas, BSc; Nick C. Fox, MD; Tze H. Mok, MBChB; SimonMead, PhD; John
Collinge, FRS; Grahams. Jackson, PhD

konten tambahan

PENTINGNYA Penyakit Creutzfeldt-Jakob (CJD) adalah gangguan neurodegeneratif yang fatal terkait dengan akumulasi
CMEQuiz di
menular protein prion normal melalui mekanisme templatedmisfolding. Sebuah laporan baru-baru ini telah dijelaskan jamanetworkcme.com
deteksi protein prion abnormal dalam urin pasien dengan varian CJD (vCJD) menggunakan proteinmisfolding oleh
amplifikasi siklik, yang tampaknya absen di themore umum sporadis formof CJD (SCJD). Sebuah tes diagnostik
non-invasif dapat meningkatkan diagnosis dini SCJD dan, oleh sumbangan skrining, mengurangi potensi risiko
penularan prion melalui obat-obatan urine yang diturunkan manusia. Di sini, kita menggambarkan adaptasi dari uji
deteksi langsung, dikembangkan awalnya sebagai tes darah untuk vCJD, untuk mendeteksi protein prion penyakit
terkait dalam sampel urin frompatients dengan SCJD.

OBJEKTIF Untuk menentukan kelayakan diagnosis SCJD dengan adaptasi dari sebuah vCJD tes darah diagnostik

didirikan untuk urin.

DESAIN, SETTING, DAN PESERTA , Studi cross-sectional retrospektif ini termasuk anonim sampel urin fromhealthy

individu kontrol nonneurological (n = 91), pasien dengan penyakit neurodegenerative non-prion (n = 34), dan
pasien dengan penyakit prion (n = 37) yang 20 memiliki SCJD. sampel urin yang diperoleh selama themedical
Research Council prion-1 Trial, yang PrionMonitoring Cohort Study Nasional, dan / atau dirujuk ke National Prion
Klinik atau Dementia Research Center di Rumah Sakit Nasional untuk Neurologi dan Bedah Saraf di Inggris.

MAINOUTCOMES ANDMEASURES Adanya infeksi SCJD ditentukan oleh assay yang menangkap, memperkaya,

dan mendeteksi penyakit-terkait isoform protein prion.

HASIL Sebanyak 162 sampel dianalisis, terdiri dari 91 individu normal kontrol (51 laki-laki, 33 perempuan, dan 7 tidak tercatat),

34 individu pengendalian penyakit neurologis (19male dan 15 perempuan), dan 37 dengan penyakit prion (22male dan 15

perempuan) . spesifisitas uji untuk penyakit prion adalah 100% (95% CI, 97% -100%), dengan tidak ada reaksi positif palsu

dari 125 individu kontrol, termasuk 34 dari berbagai penyakit neurodegenerative. Berbeda dengan penelitian sebelumnya,

yang menggunakan metode yang berbeda, kepekaan terhadap infeksi vCJD rendah (7,7%; 95% CI, 0,2% -36%), dengan
Penulis Afiliasi: MRC Prion Unit, Departemen
hanya 1 dari 13 pasien dengan hasil tes positif, sedangkan kepekaan terhadap sCJDwas tak terduga tinggi pada 40% (95%
Penyakit neurodegenerative, University College
CI, 19% -64%).
London Institute of Neurology, London, Inggris
(Luk, Jones, Thomas, Mead, Collinge, Jackson);
Demensia Research Center, Departemen
neurodegenerative Penyakit, University College
KESIMPULAN DAN RELEVANSI Kami ditentukan 40% dari hasil sampel urine SCJD sebagai positif. Untuk pengetahuan kita,
London Institute of Neurology, London, Inggris
ini adalah demonstrasi pertama dari sebuah assay yang dapat mendeteksi infeksi SCJD dalam urin atau sasaran analit di (Fox); Nasional Prion Klinik, Rumah Sakit Nasional
luar sistem saraf pusat. deteksi urin dapat memungkinkan pengembangan yang cepat, diagnostik molekuler untuk SCJD dan untuk Neurology dan Bedah Saraf, University

memiliki implikasi untuk penyakit neurodegenerative lain di mana majelis penyakit terkait protein gagal melipat mungkin juga College London Hospitals NHS Foundation Trust,
London, Inggris (Mok, Mead, Collinge).
hadir dalam urin.

Penulis yang sesuai: Grahams. Jackson, PhD,

MRC Prion Unit, Departemen Penyakit
neurodegenerative, University College London
Institute of Neurology, Queen Square,
LondonWC1N 3BG, Inggris Raya ( gsjackson@prion.ucl.ac.uk
JAMA Neurol. 2016; 73 (12): 1454-1460. doi: 10,1001 / jamaneurol.2016.3733 ).
Diterbitkan online 3 Oktober 2016. terakhir diperbaiki pada tanggal 3 Oktober 2016.

1454 (Dicetak ulang) jamaneurology.com

Copyright 2016 American Medical Association. Seluruh hak cipta.

Download Dari: https://jamanetwork.com/ pada 2020/02/05

 Diagnosis sporadis Creutzfeldt-Jakob Penyakit Menggunakan Prion Protein
P kondisi tive manusia dan hewan disebabkan bymis- lipat dan agregasi protein
prion (PrP). 1,2 Ini rion
penyakit adalah transmissibility
yang penyakitneurodegenera-
mematikan, menular yang merupakan ciri kelompok dan telah
menghasilkan beberapa epidemi-profil tinggi acquiredpriondisease, termasuk, misalnya,
kuru inhu- mans, sapi spongiformencephalopathy incattle, dan itshu- pria rekan varian
Creutzfeldt-Jakob (vCJD). 3
penyakit prion juga dapat terjadi sebagai CJD sporadis (SCJD) tanpa paparan anyobvious
toan sumber infeksi, yang drome syn klinis yang cepat progresif dengan kelangsungan
hidup rata-rata sekitar 4 bulan. 4 Pusat patogenesis prion dis- kemudahan adalah
autokatalitik, templated renovasi dari PrP sel normal inang, menyebabkan akumulasi PrP
normal isoform typifiedby insolubleaggregatesoftentermed PrP Sc. 5-8
Hal ini semakin diakui thatmore erativediseases neurodegen- umum, penyakit
suchasAlzheimer, juga melibatkan lar Serupa penyemaian proses dan upaya di seluruh
dunia sekarang sedang dilakukan untuk membangun peran yang tepat dari
prionlikemechanisms dalam berbagai penyakit manusia. 9-12
Sebagai konsekuensi dari paparan luas untuk spongiformencephalopathyprions sapi,
diperkirakan asmany bahwa 1 di 2000of theUKpopulationmay menjadi pembawa prion. 13 masalahhampir setengah dari sampel pasien, demonstrasi pertama dari tes yang mampu
kesehatan masyarakat nifikan Sig- adalah associatedwith yang missibility trans- penyakit
prion, dan prevalensi potensi infeksi vCJD telah diperlukan luas pencegahan Measures
untuk membatasi transmisi iatrogenik. Risiko penularan iatrogenik dari individu dengan
SCJD telah lama es- tablished, dengan sumber utama adalah instrumen rosurgical
contaminatedneu- dan perangkat 14 dan oleh donor kadaver berasal bahan-bahan seperti
dura mater dan hormon pertumbuhan hipofisis. 15 The incidenceof SCJD adalah
around2persons permil- singa per tahun, yang biasanya terjadi dengan meningkatnya
SEWAKTU fromlatemiddleageonwards dence ANDHAS auniformsexand distribusi
geografis. Risiko seumur hidup untuk SCJD adalah sekitar 1 di 5000 di Inggris. Sayangnya,
kira--kira setengah dari pasien hanya didiagnosis memiliki kemudahan dis- di negara klinis
lanjutan. 16
Thepresence dari PrP sc andother isoform abnormal PrP adalah spesifik dan indikator
diagnostik berpotensi sensitif untuk penyakit prion dan metode untuk deteksi mereka telah
veloped de- yang canbe diterapkan toa jaringan rangeof dan cairan. 17-21
Dorongan untuk pengembangan metode diagnostik telah theemergenceof vCJD, yang
merupakan characterizedbyawide- penyebaran perifer patologi 22 dan infeksi darah 23,24
dan urin. 25 Meskipun perkembangan assay untuk agnosis di- darah vCJDusing 21,26 dan
pelaporan vCJD di- inurine fectionbeingdetectable, 25 theapplicationof suchtech- tehnik untuk
SCJD telah dikacaukan oleh pembatasan patologi yang signifikan terhadap sistem saraf
pusat. penyok Coinci- dengan pelaporan deteksi dalam urin pasien dengan vCJD adalah
kegagalan untuk mendeteksi tanda-tanda infeksi pada sampel patientswithsCJDusing teknik
yang sama. 25
Namun, themethodusedhas tidak pernah beenconvincinglydem- onstrated todetect kontrol
sCJDandnotably ada positif perorangan- perorangan dilibatkan dalam penelitian ini.
Sedangkan penerapan amyloidseedingassays tocerebrospinal cairan (CSF) haveproved
efektif untuk diagnosis SCJD, sifat invasif ini
jamaneurology.com
Copyright 2016 American Medical Association. Seluruh hak cipta.
Download Dari: https://jamanetwork.com/ pada 2020/02/05
asli Investigasi Penelitian
Poin kunci
Pertanyaan Apakah normal prion protein hadir dalam urin pasien dengan
penyakit Creutzfeldt-Jakob sporadis?
temuan Dalam studi cross-sectional ini, 40% dari pasien dengan penyakit
Creutzfeldt-Jakob sporadis diekskresikan protein prion abnormal dalam urin mereka,
sebuah absen indikasi pada individu pengendalian penyakit yang sehat dan
neurologis.
Berarti Penyakit Creutzfeldt-Jakob sporadis dapat didiagnosis dengan menggunakan
pengujian berbasis urine dan pemeriksaan urin digunakan untuk produksi obat-obatan
dimungkinkan.
procedurehas terbatas aplikasi mereka topatientswithahigh indeks kecurigaan penyakit
prion. 27
Tes Anoninvasivepremortembiochemical untuk sCJDdiag- nosis secara signifikan bisa
mengurangi waktu diperpanjang saat ini diambil untuk membangun firmdiagnosis, yang
dapat menulis sebagian besar hidup yang tersisa apatient ini 16 andreduce ambang batas
untuk ing Test- pada pasien dengan relatif awal, nonspesifik membangun struktur kendala
pada aspek klinis. Di sini kita melaporkan aplikasi untuk tes urin dari uji darah diadaptasi,
awalnya dikembangkan untuk vCJD. 21 Strik- ingly, uji ini mampu mendeteksi infeksi SCJD di
mendiagnosis SCJD dari urin atau analit perifer.
metode
Sumber Sampel Urine
studywas ini approvedby yang researchethics lokal tee Committee dari University College
London Institute of Neurology dan theNationalHospital forNeurologyandNeurosurgery. Pa-
rawat andcontrol urine sampleswereobtainedwithwritten persetujuan di- terbentuk dari
pasien yang terdaftar dalam Kedokteran Re- mencari Council prion-1 Trial, 28 Prion Nasional
Pemantauan Cohort Study, dan / atau dirujuk ke nasional Prion Klinik atau Dementia
Research Center di Rumah Sakit Nasional untuk neutrofil
rologyandNeurosurgery.Diagnosesof CJDweremadeaccord- ing toestablishedcriteria. 27,29 Semua
sampleswerecollectedusing pengawet urinalisis standar (asam borat, natrium untuk- mate,
dan sodiumborate) dan tersimpan dibekukan pada -70 ° C inmul- tiple aliquot dari 2 mL dan
dicairkan sebelum digunakan. Sampel analyzedblind ke operator andonlydecoded setelah
analisi sis dan tekad status positif atau negatif.
pengujian Prosedur
Sampel diuji menggunakan amodification dari amethod previ- menerus dijelaskan. 21 Secara
singkat, 400 uL masing-masing samplewas diencerkan 1: 1 ke 400-uL penyangga (200mm
Tris; 4% berat / volume Bo-pohon anggur serumalbumin; 4% berat / volume 3 -
[(3-Cholamidopro- PYL) dimethylammonio] -1- propanesulfonate; 2 tablet com- plete
protease inhibitor [Roche], dan 80 unit Benzonase [kelas II, Merck]) yang mengandung 23
mg Tangkap Matrix (CM) (sub-45-m partikel stainless steel; Goodfellow) dan incu- tertahan
semalam. The CMwas diisolasi menggunakan rak magnetik, supernatan dibuang, dan dicuci
berulang kali dengan 1 mL
(Dicetak ulang) JAMANeurology Desember 2016 Volume 73, Nomor 12 1455
 Penelitian asli Investigasi Diagnosis sporadis Creutzfeldt-Jakob Penyakit Menggunakan Prion Protein

phosphate-buffered saline (PBS) ditambah 0,05% volume / volume yang Tween-20 (PBST). diuji di sumur rangkap tiga di 2 berjalan independen. Sebuah Berlawanan cutoff arbi-

Setelah mencuci akhir, semua cairan itu kembali movedand theCMheatedat 110 ° C. ditentukan dari rata-rata ditambah 5 SD dari panel dari 5 sampel normal pada panel kontrol

Toeach tabung, 50μLof bio tinylatedprimary antibodi (ICSM18; D-GenLtd) disiapkan pada 1 kualitas. Sebuah ra- tiofor themeanchemiluminescenceof eachsample totheplate cutoff

mg / mL inPBS ditambah 1% volume / volumeTween-20 (PBST *) adalah addedand dihitung untuk setiap sampel dan, jika lebih besar dari 1, sebuah samplewas classifiedas

incubatedat 37 ° C selama 1 jam. Sampleswerewashed berulang kali dengan 1 mL PBST, reaktif. Hanya sampel thatwere ulang gambut reaktif di kedua tes berjalan dicetak sebagai

mengisolasi CM setiap kali. Setiap samplewas kemudian positif. Dari 162 sampel buta diuji, 15 dan 22 sampleswere mencetak gol sebagai reaktif

incubatedwithHighSensitivityNeutrAvidin- HRP (Pierce) preparedat 1: 100000dilution dalam berjalan tes pertama dan kedua, masing-masing, dengan 10 sampel mencetak ulang

inPBST * pada 37 ° C selama 45 menit. Sampel lagi dicuci berulang kali dengan 1 mL reactiveacross tes The 2 berjalan ( Gambar 1).

PBST, mengisolasi CM setiap kali. Untuk setiap sampel, 60 uL SuperSignal enzyme-linked

immunosorbent assayFemtoche- miluminescent substrat (Pierce) ditambahkan dan CM

adalah evenlydistributed into3 replicatewellsof ablack96-baik piring (Greiner). sampel Semua 10 sampel positif dari pasien dengan penyakit prion (1 dari kasus vCJD, 1 dari

Eachplate includedasetof6quality-control (5 kontrol negatif sampel urin normal dan 1 sampel hormon pertumbuhan terkait caseof iatrogenicCJD, and8 frompatientswith SCJD).

kontrol positif). Tambahan 80 uL chemiluminescent sub Strate ditambahkan ke setiap baik Asummaryof temuan klinis themajor inall 37casesof prion penyakit disediakan di Etable di Suplemen

segera sebelum piring scan.Thetotal luminescentoutputovera fixedintegrationtime . Tidak ada asosiasi yang jelas dengan aspek klinis sejarah, diseaseprogression, atau

wasmeasuredforeachwellusingaM1000platereader (TECAN). investigasi. TheNa- tional Prion Clinic telah mengembangkan berorientasi fungsional skala

ing rat tomeasureCJDdiseaseprogression disebut theMRC PrionDiseaseRating Skala. 4 ThemeanMRC

​Skala scorewas 4 dari 20 untuk kasus positif and5 untuk kasus-kasus negatif ( P = . 57; t uji).

Thepatientwith setidaknya diseaseprogressionof sCJDhadanMRC ​Skala skor dari 10 dari

20. Namun, saat ini, sebagian besar kasus SCJD di Inggris yang didiagnosis pada tahap

klinis lanjutan untuk berbagai alasan; kami tidak punya sampel dari setiap pasien dengan

SCJD pada tahap penyakit sebelumnya. Semua genotipe di polimorfik kodon 129 gen

Kriteria positif dan Analisis Data protein prion, sebuah impor- tant kerentanan faktor dan penyakit modifier, 32 yang diwakili di

Sampel mencetak reaktif jika mean chemilumines- cence lebih baik DDA positif dan kasus negatif. Khas temuan in vestigation, sharpwavecomplexes

from3replicatewellsexceededanon-platecutoff threshold lama themean ditambah 5 SD includingperiodic pada electroencephalography, sinyal abnormal pada difusi pencitraan

kontrol 5 negatif sampel urin normal. Dengan demikian, sampel dengan rasio relatif resonansi weightedbrainmagnetic di korteks dan basal ganglia, dan abnormal 14-3-3 tingkat

terhadap cutoff lebih besar than1were mencetak reaktif. Semua sampleswere diuji twicewith protein dalam CSFwere ditemukan dalam proporsi yang diharapkan dari DDA positif dan

mereka yang reaktif berulang (yaitu, reaktif di kedua analisis consideredpositive untuk kasus tive nega- (Etable di Suplemen ). Berdasarkan kriteria sampel makhluk ulangi reaktif

priondisease) .Nonreactiveandsingle- sampel reaktif dianggap negatif. dalam 2 berjalan independen, 10 dari 37 (27%) dari sampel urin penyakit prion yang

diidentifikasi dalam tidak adanya reaksi positif palsu. Namun, mengingat SCJD dalam

isolasi, sensitivitas ofdetectionwas8of 20samples (40%; 95% CI, 19% -64%), dengan 100%

spesifisitas (95% CI, 97% -100%).

ConductivityMeasurements
Untuk mengendalikan kemungkinan dehidrasi pada pasien dengan penyakit prion

memproduksi langsung assay deteksi (DDA) sinyal urine lebih tinggi, perkiraan untuk tingkat

konsentrasi sampel urine ditentukan oleh konduktivitas ukur yang ment. Konduktivitas

diketahui correlatewithurine osmolal- ity dan berat jenis 30,31 dan bertekad menggunakan

rendah volume yang meter konduktivitas (Horiba LaQua Twin B-771). Kalibrasi dari meteran

konduktivitas dilakukan dengan menggunakan

1,41-mS / cm larutan standar dan konduktivitas urin samplesdeterminedby mengambil

themeanof 3 independentmea- surements from3 aliquot yang terpisah dari sampel urin Perbandingan mean DDA hasil dinyatakan sebagai rasio tocutoffs relatif untuk the4

100μLof, mencuci elektroda dengan air suling ganda antara pembacaan. typesof priondiseaseanalyzedcon- perusahaan secara signifikan peningkatan kadar PrP

normal di kedua SCJD dan iatrogenicCJDwith terhadap kontrol ( P < . 001), butwith tingkat di

kedua vCJD dan penyakit prion mewarisi gagal signifikansi achievestatistical, possiblyowing

ke bers lownum- dari sampel yang dianalisis ( Gambar 2).

hasil

DDAAnalysis dari Urine FromPatientsWith Prion Penyakit Konduktivitas Sampel Urine Sebagai aMeasure
Sebuah panel sampel urin yang diperoleh dari total 37 pasien Konsentrasi
withconfirmedpriondiseaseand125control individu, baik dari individu normal dan pasien Konduktivitas, ukuran disederhanakan dari osmolalitas yang konsentrasi lateswithurine

dengan penyakit neurologis thanpriondisease lainnya, yang dianalisis dengan sebuah corre-, 30,31 wasmeasured di kira--kira sepertiga dari sampel (n = 55), di mana vol- umewas

aptation ad- dari tes darah DDA dilaporkan sebelumnya untuk vCJD in fection. available.Nocorrelationwasobservedbetweenurine konsentrasi yang cukup sinyal andDDA,

Thesampleswere diuji ingroupsof 12, panel kontrol withaquality- pada setiap lempeng terdiri membenarkan hidrasi pasien bukanlah penyebab dari peningkatan sinyal PrP abnormal

dari 5 negatif kontrol normal sample.Eachsamplewas samplesand1positivecontrol dalam urin ( Gambar 3).

1456 JAMANeurology Desember 2016 Volume 73, Nomor 12 ( dicetak ulang) jamaneurology.com

Copyright 2016 American Medical Association. Seluruh hak cipta.

Download Dari: https://jamanetwork.com/ pada 2020/02/05

 Diagnosis sporadis Creutzfeldt-Jakob Penyakit Menggunakan Prion Protein asli Investigasi Penelitian

Gambar 1. Umur pengujian suatu Blind Panel dari 162 Sampel Urine

SEBUAH

12

Kontrol (normal dan neurologis)

10 iCJD vCJD

IPD SCJD
Rasio Sehubungan dengan cutoff Mean (SEM)

2 Run 1

Sampel Pasien Individu

12

10
Rasio Sehubungan dengan cutoff Mean (SEM)

2 Run 2

Sampel Pasien Individu

Pengujian dilakukan pada 2 tes independen pada panel buta dari 162 sampel urine frompatients dengan
diagnosa penyakit Creutzfeldt-Jakob sporadis (SCJD; n = 20), varian CJD (vCJD; n = 13), mewarisi
penyakit prion (IPD; n = 2), dan hormon pertumbuhan terkait iatrogenik CJD (iCJD; n = 2) dan sehat
normal dan neurologis pengendalian penyakit individu (n = 91 dan n = 34, masing-masing). Neurologis
individu pengendalian penyakit terdiri orang-orang dengan penyakit Alzheimer
Penyakit (n = 21), penyakit Huntington (n = 3), demensia frontotemporal (n = 3), penyakit Alzheimer familial
(n = 2), dan demensia awal-awal (n = 1) dan rujukan ke Prion Klinik Bangsa ditentukan sebagai non-prion
penyakit (n = 4). Berjalan 1 dan 2 mewakili data dari berjalan uji individu sampel buta. Data ditampilkan
sebagai rasio sinyal chemiluminescent relatif cutoff ditentukan dari rata-rata 5 x SD individu kontrol normal
(lihat bagian theMethods).

penyemaian tes mampu mendeteksi adanya infeksi penyakit prion ina jaringan varietyof dan

Diskusi cairan. 18,19,33 Bagaimana- pernah, thedetectionof sCJDprion infectionhas telah terbatas pada

tissuesof thecentral systemandCSF saraf. Inonestudy, analisis CSF diperoleh frompatients

Darah adalah commonlyusedanalyte untuk rangeof tes diagnostik dan prognostik, menjadi dengan SCJD menggunakan amy- pembenihan loid menunjukkan batas deteksi cukup

risiko mudah accessiblewithminimal di hampir semua patients.Wehavepreviously dilaporkan untuk cellent mantan discriminationof individu yang terkena fromcontrol individu, dengan

thedevelop- ment dan validasi tes darah untuk vCJD, 21,26 yang de- meskipun karakteristik sensitivitas sekitar 90%. 34 Namun, persyaratan untuk CSF membatasi penerapan uji,

kinerja yang sangat baik terhadap vCJDwas dapat mendeteksi infeksi dalam darah pasien sebagai suchsamples collectionof adalah invasiveprocedure yang gen- erally dilakukan

dengan SCJD. Anaccuratediagnosisof sCJDinpatientswithadvancedsymp- tomatic penyakit hanya ketika signifikan tom symp- neurologis dan tanda-tanda yang jelas.

canusuallybe dicapai 16 tanpa bantuan diagnosticsbut molekul theability todiagnosedisease

inpa- tients jauh lebih awal akan memiliki manfaat yang jelas, khususnya sehubungan

dengan awal masuk ke uji terapi.

Analternative analit tobloodasaperipheral, Andone yang canbe readilyobtained untuk

routinediagnosticuse, studi isurine.Our telah menunjukkan untuk pertama kalinya, untuk

Kemampuan penyakit terkait PrP normal untuk cata- lyze konversi PrP rekombinan ke pengetahuan kita, bahwa itu adalah layak untuk identifysCJDusingaurine samplebycaptureof

amyloid confor- mations telah dimanfaatkan dalam pengembangan amyloid- dis kemudahan terkait PrP pada matriks stainless steel dan deteksi

jamaneurology.com (Dicetak ulang) JAMANeurology Desember 2016 Volume 73, Nomor 12 1457

Copyright 2016 American Medical Association. Seluruh hak cipta.

Download Dari: https://jamanetwork.com/ pada 2020/02/05

 Penelitian asli Investigasi
Gambar 2. Diskriminasi Berbagai Bentuk Individu Penyakit Prion FromNormal
andNeurological Kontrol
5 8
Sebuah
4
3
Sehubungan dengan cutoff (SEM)
Sebuah
1
0
kontrol vCJD IPD SCJD
Data yang ditampilkan adalah rasio groupmean relatif celana untuk kedua berjalan assay gabungan untuk
kelompok sampel ditunjukkan; 91 individu kontrol normal dan 34 individu pengendalian penyakit
neurologis (untuk rincian lihat Gambar 1 legenda), 13 dengan varian Creutzfeldt-Jakob (vCJD), 20with
penyakit Creutzfeldt-Jakob sporadis (SCJD), 2 dengan penyakit prion mewarisi (IPD), dan 2 dengan
penyakit prion mewarisi iatrogenik (iCJD). Kesalahan bar mewakili SEM. 2-tailed P Nilai untuk
perbandingan sampel kontrol dengan kohort penyakit prion mendukung perbedaan yang signifikan untuk
kedua SCJD dan iCJD.
Sebuah P < . 001.
menggunakan anti-PrPmonoclonal antibodies.While diagnosis sensitivityof relatif rendah,
pada 40%, sinyal highmean ob- dirawat dengan seksama dalam uji menyarankan ini dapat
ditingkatkan mempertimbangkan- cakap dengan pretreatment atau memproses volume
besar urin toassay sebelumnya. Kemungkinan sensitivitycould thecurrentdiagnostic
besignificantlyenhancedby perbaikan sensitifitas intheanalyticsen- dari uji tetapi tidak jelas
apakah ini bisa ap- proach 100%, karena ada kemungkinan akan variabilitas dalam ence
Pres- dan konsentrasi PrP normal dalam urin pasien. Sinyal rata tinggi diamati dalam 2
sampel fromcasesof terkait growthhormone iatrogenicCJD menyarankan assaymay seperti
juga memiliki sensitivitas yang signifikan untuk casesof secondaryCJDinfection,
althoughthiswill memerlukan analisis angka yang lebih besar dari sampel. Deteksi ab-
normalmisfoldedPrP intheurineof patientswithCJDis kadang apa yang tak terduga dan rasa
ingin tahu menunjukkan penyakit generatif neurode- lain yang terkait dengan misfolding
protein mungkin memiliki tanda tangan urin diagnostik. Keunggulan tak tertandingi urin
sebagai analit adalah ketersediaan mudah volume sampel yang besar untuk penelitian,
whichwill memfasilitasi thedevelopment protokol untuk isolasi dan karakterisasi cific dengan
spesialisasi formof hadir PrP normal, yang menyebabkan peningkatan sensitivitas nostic
diag-.
Asal penyakit terkait PrP dalam urin tients pa- dengan SCJD tidak diketahui, tetapi
jelas bahwa urine laser mengandung PrP seluler, sebagian besar dalam dipotong formthat
hanya membawa jangkar glycosylphosphatidylinositol parsial kurang bagian lipid yang
terkait 35,36 dan, karena itu, ada esensial poten- untuk replikasi prion in situ serta akumulasi
dari darah filtrationof glomerulus. Althoughurine biasanya dianggap kurang protein
terdeteksi dalam ketiadaan neydisease kid-, infact, kidneyfunctionresults yang normal
intracepro-
1458 JAMANeurology Desember 2016 Volume 73, Nomor 12 ( dicetak ulang)
Copyright 2016 American Medical Association. Seluruh hak cipta.
Download Dari: https://jamanetwork.com/ pada 2020/02/05
Diagnosis sporadis Creutzfeldt-Jakob Penyakit Menggunakan Prion Protein
Gambar 3. Korelasi Urine Contoh Direct Detection Assay Nilai dan Conductivity
6
Rasio Sehubungan dengan celana Ratio
Berarti Langsung Deteksi Assay Hasil,
2
00
iCJD
10 20 30 40
Berarti Konduktivitas, mS / cm
Konduktivitas dari 55 sampel urin dihitung sebagai milliSiemens per cm dan diplot vs themean dari rasio
ditentukan sebelumnya relatif terhadap nilai-nilai cutoff pada sumbu y. koefisien korelasi A Pearson
dihitung sebagai 0,058 untuk asosiasi antara 2 nilai, yang tidak berbeda nyata from0 ( P = . 68; 2-tailed t uji).
Garis biru ditumpangkan pada data yang paling cocok dari regresi linear, menyoroti kurangnya korelasi
dengan gradien 0,002.
konsentrasi Tein antara 50 dan 200 μgmL -1, yang cukup untuk menghasilkan akumulasi PrP
normal de- rived dari darah. Perlu dicatat bahwa meskipun PrP normal hadir dalam urin,
tidak mudah terdeteksi dalam darah. Penjelasan sible plau- adalah pengayaan normal
PrPby tion ac- filtrasi di ginjal untuk konsentrasi yang tectable de-, tapi ini bisa juga
dijelaskan dengan replikasi prion aktif dalam ginjal atau saluran kemih. Tentu saja semua
quirements ulang untuk prion amplifikasi yang hadir: normal cellu- lar PrP, penyakit terkait
PrP normal, dan sedikit dena- turingenvironment providedbyurea.However, penting untuk
dicatat bahwa studi transmisi telah menunjukkan poten- esensial prion titer dalam urin asli
rendah (<0,38 unit menular / mL -1) 37 atau tidak ada, dan ada areno reportedcases dari CJD
dihasilkan transmisi fromsexual, withtheevidence perimentalmodels fromex- menunjukkan
bahwa tooccur isunlikely ini. 38,39
Milieu kompleks berkontribusi darah ke hubungan difficul- lebih besar dalam khusus
mendeteksi sinyal terkait penyakit sedangkan urine adalah relatif “bersih” analit, dengan
lowbackground lev- els dari protein, yang mungkin cukup untuk akun untuk orangtua
perbedaan ap- saja.
protein prion sebelumnya telah diidentifikasi di commer- secara resmi tersedia suntik
urine yang diturunkan gonadotropin ucts-produk yang digunakan untuk infertilitas pada
wanita memperlakukan 40 dan unde- scended testis inboys 41 andare tersedia untuk terlarang
menggunakan bangunan inbody dan sebagai obat meningkatkan kinerja. 42 Fakta ini,
coupledwith thedetectionof PrP abnormal pada theurineof pa- tientswithvCJD, 25 memiliki
raisedquestionsabout thesafetyof produk tersebut harus yang purificationmethods
menghasilkan rification copu- prion seperti diketahui telah terjadi untuk azasi mancadaveric
hipofisis-derivedhormones. 15 Biasanya, urin bersumber
frompostmenopausalwomenwithamedianageof
jamaneurology.com
 Diagnosis sporadis Creutzfeldt-Jakob Penyakit Menggunakan Prion Protein asli Investigasi Penelitian

lebih tua dari 50 tahun, kohort usia di mana SCJD dapat mantan pected, yang ada (Protein misfolding oleh amplifikasi siklik) tidak pernah meyakinkan ditunjukkan untuk

althoughexclusioncriteria untuk sumbangan, analo- gous dengan yang di tempat untuk mendeteksi SCJD dan memang kontrol tidak ada yang positif dilibatkan dalam penelitian ini.

menyumbangkan darah. Meskipun sionstudies transmis- menunjukkan thepotential prion Paralel CJD perbedaan strain-dependent yang diamati dengan metode pengujian lainnya,

titer innativeurine rendah, 37 dapat dibayangkan bahwa purificationof komersial moneproducts beberapa di antaranya disebabkan perbedaan dalam pe- ripheral patogenesis 21,22,43,44 tetapi

hor- bisa bersamaan memperkaya untuk prion infectiv- ity. Temuan kami, bahwa urine beberapa yang tetap tidak dapat dijelaskan. 45

pasien dengan SCJD mengandung PrP normal konsisten dengan kekhawatiran bahwa

produk kesuburan urine yang diturunkan bisa mengandung prion menular sebagai induk

SCJD ulang themost umum formof penyakit prion dan memiliki uni formworldwide kejadian.

kesimpulan

Temuan kami berbeda dengan mereka yang baru-baru ini kembali portedusing yang Deteksi PrPs terkait penyakit dalam urin pasien dengan SCJD adalah demonstrasi pertama

techniqueof proteinmisfoldingby siklik am- plification, di mana sensitivitas tinggi untuk yang SCJD dapat diag- berhidung dari urin dari setiap analit perifer dengan cara biokimia.

mendeteksi infeksi vCJD dalam urin diamati dan belum satu pun dari 68 sampel rawat pa- Ini menawarkan kemungkinan peningkatan earlydiagnosis dari SCJD dan pencegahan

dari SCJD positif. 25 Sebuah tiontothe limita- kritis interpretationof temuan ini adalah potensi skrining obat-obatan urine yang diturunkan manusia.

theassaymethod bahwa

INFORMASI PASAL
Diterima untuk Publikasi: 28 Juli 2016.
Koreksi: articlewas ini dikoreksi onOctober 3,
2016, untuk memperbaiki kesalahan ketik dalam judul.
PublishedOnline: 3 Oktober 2016. doi: 10,1001
/ jamaneurol.2016.3733
Penulis Kontribusi: Dr Jackson memiliki akses penuh ke semua
data dalam penelitian dan mengambil tanggung jawab untuk
integritas data dan akurasi analisis data.
Richard Newton, BSc, atas bantuannya mempersiapkan angka, dan
JonathanWadsworth, PhD, untuk diskusi membantu. Mereka tidak
menerima kompensasi.
REFERENSI
1. Penyakit Collinge J. prion dari manusia dan hewan: penyebabnya
secara andmolecular. Annu Rev Neurosci.
2001; 24: 519-550 .
2. Prusiner SB. Prion. Proc Natl Acad Sci AS A. 1998; 95 (23):
13.363-13.383 .
epidemi encephalopathy: survei skala besar. BMJ.
2013; 347: f5675 .
14. Bernoulli C, Siegfried J, Baumgartner G, et al. Bahaya
disengaja penularan dari orang ke orang penyakit
Creutzfeldt-Jakob dengan operasi. Lanset. 1977; 1 (8009):
478-479 .
15. Powell-Jackson J, Weller RO, KennedyP, PreeceMA,
WhitcombeEM, Newsom-Davis J.
Creutzfeldt-Jakobdiseaseafteradministrationofhuman growthhormone.
Lanset. 1985; 2 (8449): 244-246 .

3. Bukit AF, Desbruslais M, Joiner S, et al. Prion strain yang sama
Konsep dan desain: Collinge, Jackson.
menyebabkan vCJD dan BSE. Alam.
Akuisisi, analisis, atau interpretasi data: Semua Penulis.
1997; 389 (6650): 448-450, 526 .
16. Paterson RW, Torres-Chae CC, Kuo AL, et al. Diagnosis
penyakit Jakob-Creutzfeldt.
Arch Neurol. 2012; 69 (12): 1578-1582 .

Penyusunan naskah: Luk, Thomas, Jackson.
revisi kritis dari naskah untuk konten intelektual penting: Luk,
Jones, Fox, Mok, Mead, Collinge, Jackson.
Analisis statistik: Thomas, Jackson.
Mendapatkan dana: Collinge, Jackson.
Administratif, teknis, atau bahan pendukung: Luk, Jones, Thomas,
Fox, Collinge.
pengawasan studi: Mead, Collinge, Jackson.
Benturan Kepentingan Pengungkapan: Prof Collinge adalah direktur
dan Prof Collinge dan Dr Jackson adalah pemegang saham dari D-Gen
Limited (London), sebuah perusahaan spinout akademik yang bekerja di
bidang diagnosis penyakit prion, dekontaminasi, dan terapi. D-Gen
disediakan antibodi ICSM18 digunakan dalam penelitian ini. Tidak ada
pengungkapan lainnya dilaporkan.
4. Thompson AG, Lowe J, Fox Z, et al. Themedical Research Council
Prion Penyakit Rating Scale: a outcomemeasure baru untuk penyakit
prion uji coba terapi dikembangkan dan divalidasi menggunakan studi
observasional yang sistematis. Otak. 2013; 136 (pt 4): 1116-1127 .
5. Griffith JS. Replikasi diri dan scrapie. Alam.
1967; 215 (5105): 1043-1044 .
6. Prusiner SB. Novel partikel menular protein menyebabkan
scrapie. Ilmu. 1982; 216 (4542): 136-144 .
7. Oesch B, Westaway D, WALCHLI M, et al. Sebuah mengkodekan gen
seluler scrapie PrP 27-30 protein. Sel. 1985; 40 (4): 735-746 .
8. Büeler H, Aguzzi A, Sailer A, et al. Tikus tanpa PrP tahan terhadap
scrapie. Sel. 1993; 73 (7): 1339-1347 .
17. Saborio GP, Permanne B, Soto C. deteksi Sensitif protein prion
patologis oleh amplifikasi siklik dari proteinmisfolding. Alam. 2001;
411 (6839): 810-813 .
18. Colby DW, Zhang Q, Wang S, et al. Deteksi Prion oleh assay
amiloid penyemaian. Proc Natl Acad Sci AS A. 2007; 104 (52):
20.914-20.919 .
19. Atarashi R, Moore RA, SimVL, et al. deteksi ultrasensitif
scrapie protein prion menggunakan konversi unggulan dari
protein prion rekombinan. Metode Nat. 2007; 4 (8): 645-650 .
20. Edgeworth JA, Jackson GS, Clarke AR, Weissmann C, Collinge J.
Sangat sensitif, uji berbasis sel kuantitatif untuk prion diserap ke
permukaan padat. Proc Natl Acad Sci AS A. 2009; 106 (9): 3479-3483 .

9. Jucker M, Walker LC. Self-propagasi agregat protein

Pendanaan / Support: Penelitian ini didanai oleh Dewan Riset
UKMedical. Departemen Kesehatan (Inggris) dan Rumah Sakit
Institut National University College London Penelitian Kesehatan
Biomedical Research Center mendanai studi National
PrionMonitoring Cohort.
Peran Penyandang Dana / Sponsor: Para sponsor memberikan
dukungan keuangan untuk penelitian, tetapi tidak terlibat dalam
desain dan pelaksanaan penelitian; pengumpulan, manajemen,
analisis, dan interpretasi data; persiapan, review, atau persetujuan
dari themanuscript; dan keputusan untuk mengirimkan themanuscript
untuk publikasi.
Kontribusi tambahan: Kami berterima kasih kepada pasien dan keluarga
yang menderita penyakit neurodegenerative atas dukungan mereka dari
pekerjaan ini, Gill Rumsby, FRCPath, untuk menyediakan sampel urin
anonim,
21. Edgeworth JA, Farmer M, Sicilia A, et al. Deteksi infeksi
patogen pada penyakit neurodegeneratif. Alam. 2013; 501
prion di varian Creutzfeldt-Jakob: alat tes berbasis darah.
(7465): 45-51 .
Lanset. 2011; 377 (9764): 487-493 .
10. Prusiner SB. Biologi dan genetika dari prion menyebabkan
22. Wadsworth JD, Joiner S, Bukit AF, et al. distribusi jaringan
neurodegeneration. Annu Rev Genet. 2013; 47: 601-623 .
protease protein prion tahan di varian Creutzfeldt-Jakob
menggunakan alat tes imunoblotting yang sangat sensitif. Lanset. 2001;
11. Goedert M. Neurodegenerasi: Alzheimer dan penyakit
358 (9277): 171-180 .
Parkinson: konsep prion dalam kaitannya dengan berkumpul Aβ,
tau, dan α-synuclein.
23. Llewelyn CA, Hewitt PE, Ksatria RS, et al. transmisi
Ilmu. 2015; 349 (6248): 1.255.555 .
kemungkinan varian Creutzfeldt-Jakob oleh transfusi darah. Lanset. 2004;
12. Jaunmuktane Z, Mead S, Ellis M, et al. Bukti untuk transmisi
363 (9407): 417-421 .
manusia amiloid-β patologi dan angiopati amiloid serebral. Alam. 2015;
525 (7568): 247-250 .
24. Wroe SJ, Pal S, Siddique D, et al. Presentasi klinis dan
pra-mortemdiagnosis dari varian Creutzfeldt-Jakob darah penyakit
13. Gill ON, Spencer Y, Richard-Loendt A, et al. Lazim protein
associatedwith
prion abnormal pada manusia Apendiks setelah spongiform
sapi

jamaneurology.com (Dicetak ulang) JAMANeurology Desember 2016 Volume 73, Nomor 12 1459

Copyright 2016 American Medical Association. Seluruh hak cipta.

Download Dari: https://jamanetwork.com/ pada 2020/02/05

 Penelitian asli Investigasi
transfusi: laporan kasus. Lanset. 2006; 368 (9552):
2061-2067 .
25. Moda F, Gambetti P, Notari S, et al. Prion dalam urin pasien
dengan penyakit varian Creutzfeldt-Jakob. N Engl J Med. 2014; 371
(6): 530-539 .
26. Jackson GS, Burk-Rafel J, Edgeworth JA, et al. Populasi skrining
untuk varian Creutzfeldt-Jakob menggunakan tes darah baru: akurasi
diagnostik dan studi kelayakan. JAMA Neurol. 2014; 71 (4): 421-428 .
27. Zerr saya, Kallenberg K, Summers DM, et al. Diperbarui kriteria
diagnostik klinis untuk penyakit Creutzfeldt-Jakob sporadis. Otak. 2009;
132 (pt 10): 2659-2668 .
28. Collinge J, GorhamM, Hudson F, et al. Keamanan dan
kemanjuran quinacrine pada penyakit prion manusia (prion-1 studi):
uji coba pasien-preferensi. Lancet Neurol. 2009; 8 (4): 334-344 .
29. Poser S, Mollenhauer B, Kraubeta A, et al. Bagaimana
meningkatkan diagnosis klinis penyakit Creutzfeldt-Jakob. Otak. 1999;
122 (pt 12): 2345-2351 .
30. Wang JM, Wen CY, Lin CY, Li JY, Lee CH, WuMF.
Mengevaluasi kinerja konduktivitas urin sebagai skrining untuk
tahap awal penyakit ginjal kronis. Clin Lab. 2014; 60 (4): 635-643 .
31. Genain C, Tellier P, Syrota A, Pocidalo JJ, Hans M. Tak Terbatas
dilusi conductimetry dari plasma dan urin: osmolalitas correlationwith. Clin 39. Sarradin P, Melo S, Barc C, et al. Air mani dari ekor domba jantan
ChimActa.
1978; 88 (1): 177-182 .
1460 JAMANeurology Desember 2016 Volume 73, Nomor 12 ( dicetak ulang)
Copyright 2016 American Medical Association. Seluruh hak cipta.
Download Dari: https://jamanetwork.com/ pada 2020/02/05
Diagnosis sporadis Creutzfeldt-Jakob Penyakit Menggunakan Prion Protein
32. Palmer MS, Dryden AJ, Hughes JT, Collinge J. homozigot protein
prion genotipe predisposisi penyakit Creutzfeldt-Jakob sporadis. Alam.
1991; 352 (6333): 340-342 .
33. Atarashi R, Wilham JM, Christensen L, et al.
Disederhanakan deteksi prion ultrasensitif oleh konversi PrP
rekombinan dengan gemetar. Metode Nat. 2008; 5 (3): 211-212 .
34. McGuire LI, Peden AH, Orru CD, et al. Real time analisis
bergoyang-diinduksi konversi cairan serebrospinal pada penyakit
Creutzfeldt-Jakob sporadis. Ann Neurol. 2012; 72 (2): 278-285 .
35. Narang HK, Dagdanova A, Xie Z, Yang Q, Chen SG. deteksi
sensitif dari protein prion dalam urin manusia. Exp Biol Med
(Maywood). 2005; 230 (5): 343-349 .
36. Dagdanova A, Ilchenko S, Notari S, et al. Karakterisasi protein
prion dalam urin manusia. J Biol Chem. 2010; 285 (40):
30.489-30.495 .
37. Notari S, Qing L, Pocchiari M, et al. Menilai prion infektivitas urin
manusia pada penyakit Creutzfeldt-Jakob sporadis. Emerg Infect Dis. 2012;Creutzfeldt-Jakob sporadis.
18 (1): 21-28 .
38. Morales R, Pritzkow S, Hu PP, Duran-Aniotz C, Soto C.
Kurangnya transmisi prion oleh rute seksual atau orangtua dalam
hamster eksperimental terinfeksi. Prion. 2013; 7 (5): 412-419 .
scrapie yang terinfeksi tidak mengirimkan prion
infeksi tikus transgenik. Reproduksi. 2008; 135 (3): 415-418 .
40. Van Dorsselaer A, Carapito C, Delalande F, et al. Deteksi protein
prion dalam produk suntik kesuburan urine yang diturunkan oleh
ditargetkan pendekatan proteomik. PLoS One. 2011; 6 (3): e17815 .
41. Pyörälä S, Huttunen NP, Uhari M. Sebuah tinjauan dan
meta-analisis pengobatan hormonal kriptorkismus. J Clin
Endocrinol Metab. 1995; 80 (9): 2795-2799 .
42. Handelsman DJ. tinjauan klinis: alasan untuk melarang human
chorionic gonadotropin dan estrogen blocker dalam olahraga. J Clin
Endocrinol Metab.
2006; 91 (5): 1646-1653 .
43. Glatzel M, Abela E, MaissenM, Aguzzi A. extraneural patologis
protein prion pada penyakit Creutzfeldt-Jakob sporadis. N Engl J
Med. 2003; 349 (19): 1812-1820 .
44. Douet JY, Zafar S, Perret-Liaudet A, et al. Deteksi infektivitas
dalam darah orang dengan varian dan penyakit
Emerg Infect Dis. 2014; 20 (1): 114-117 .
45. Orru CD, Groveman BR, Raymond LD, et al. Bank tikus prion
protein sebagai substrat tampaknya universal untuk deteksi berbasis
RT-quic dan diskriminasi strain prion. PLoS Pathog. 2015; 11 (6):
e1004983 .
jamaneurology.com