27C KOLOM KROMATOGRAFI GAS DAN FASE

STATIONARY

Studi kromatografi gas-cair perintis di awal 19505 dilakukan Pada kolom yang
dikemas di mana fase diam adalah film tipis cairan yang ditahan oleh adsorpsi
pada permukaan penyangga padat lembam yang terbagi halus. Dari studi teoritis
yang dilakukan selama periode awal ini, menjadi jelas bahwa kolom yang tidak
dibungkus memiliki diameter dalam beberapa persepuluh dari a milimeter dapat
memberikan pemisahan yang lebih baik daripada yang ada pada kolom yang
dikemas dalam efisiensi kecepatan dan kolom. Dalam kolom kapiler tersebut, fase
diam adalah film cairan dengan ketebalan beberapa sepersepuluh mikrometer
yang secara seragam melapisi bagian dalam pipa kapiler. Pada akhir 1950-an,
kolom rubular terbuka seperti itu dibangun dan karakteristik kinerja yang
diprediksi dikonfirmasi secara eksperimental di beberapa laboratorium, dengan
kolom tubular terbuka yang memiliki 300.000 pelat atau lebih sedang dijelaskan. '
Hari ini. Kolom tubular terbuka mendominasi GC karena, tanpa pengemasan,
kolom dapat menjadi lebih sempit dan lebih panjang, yang mengarah ke efisiensi
yang lebih tinggi daripada kolom yang dikemas.
Meskipun memiliki karakteristik kinerja yang spektakuler, kolom kapiler
tidak digunakan secara luas sampai lebih dari dua dekade setelah penemuannya.
Ada beberapa alasan penundaan, termasuk kapasitas sampel yang kecil;
kerapuhan kolom; masalah mekanis
terkait dengan pengenalan sampel dan koneksi kolom ke detektor; kesulitan dalam
melapisi kolom secara berulang; umur pendek kolom yang dipersiapkan dengan
buruk; kecenderungan kolom untuk tersumbat; dan paten, yang membatasi
pengembangan komersial pada sebuah produsen tunggal (paten asli kedaluwarsa
pada 1977). Pada akhir 19705 masalah ini telah dapat dikelola dan beberapa
perusahaan instrumen mulai menawarkan kolom tubular terbuka dengan biaya
yang wajar. Akibatnya, kami telah melihat pertumbuhan besar dalam penggunaan
kolom kapiler sejak saat itu
27C-1 Kolom Tubular Terbuka
Kolom tubular terbuka, atau kapiler, terdiri dari dua tipe dasar: kolom tubular
terbuka berlapis dinding (WCOT) dan kolom SUppOrlcoated open rubular (SCOT
).9 Kolom berlapis dinding hanyalah tabung kapiler yang dilapisi dengan lapisan
tipis fase diam. Pada kolom tubular terbuka berlapis penyangga, permukaan
bagian dalam kapiler dilapisi dengan film tipis (-30 11m) dari bahan pendukung,
seperti tanah diatom. Jenis kolom ini menahan fase diam beberapa kali lebih
banyak daripada kolom berpelapis dinding dan dengan demikian memiliki
kapasitas sampel yang lebih besar. Umumnya, efisiensi kolom SCOT kurang dari
mthat kolom WCOT tetapi secara signifikan lebih besar daripada kolom yang
dikemas.
Kolom WCOT awal dibangun dari baja tahan karat, aluminium, tembaga,
atau plastik. Belakangan, kolom kaca mulai digunakan. Seringkali, kaca diukir
dengan gas asam klorida, asam klorida encer yang kuat, atau kalium hidrogen
fluorida untuk menghasilkan permukaan kasar, yang mengikat fase diam lebih
erat. Kolom kapiler yang paling banyak digunakan adalah kolom rubular terbuka
fused-silica wall-coated (FSWC). Kapiler silika leburan diambil dari silika yang
dimurnikan khusus yang mengandung sedikit oksida logam. Kapiler ini memiliki
dinding yang jauh lebih tipis daripada kolom kaca. Busur tabung diberi kekuatan
tambahan oleh lapisan polimida pelindung luar, yang diterapkan saat tabung
kapiler ditarik. Kolom yang dihasilkan cukup fleksibel dan dapat ditekuk menjadi
gulungan dengan diameter beberapa inci. Gambar 27-6 menunjukkan kolom
tubular terbuka silika leburan. Kolom tubular terbuka silika tersedia secara
komersial dan menawarkan beberapa keuntungan penting seperti kekuatan fisik,
reaktivitas yang jauh lebih rendah terhadap komponen sampel, dan fleksibilitas.
Untuk sebagian besar aplikasi, mereka telah menggantikan kolom kaca WCOT
tipe lama.
Kolom tubular terbuka silika yang paling banyak digunakan memiliki
diameter dalam 0,32 dan 0,25 mm. Kolom resolusi tinggi juga tersedia dengan
diameter 0,20 dan 0,15 mm. Kolom seperti itu lebih sulit digunakan dan lebih
menuntut pada sistem injeksi dan deteksi. Dengan demikian, pemisah sampel
harus digunakan untuk mengurangi ukuran sampel yang diinjeksikan ke kolom
dan diperlukan sistem detektor yang lebih sensitif dengan waktu respons yang
cepat.
Baru-baru ini, kapiler 530 llm, terkadang disebut megabore collimn, telah
muncul di pasaran. Kolom ini akan mentolerir ukuran sampel yang serupa dengan
kolom yang dikemas. Karakteristik kinerja kolom tubular terbuka megabore tidak
sebaik kolom berdiameter lebih kecil tetapi secara signifikan lebih baik daripada
kolom yang dikemas. Tabel 27-2 membandingkan karakteristik kinerja kolom
kapiler silika leburan dengan jenis kolom berpelapis dinding lainnya serta dengan
kolom berpelapis penopang dan pengepakan.

27C-2 Paket Kolom

Kolom dikemas modern dibuat dari kaca atau tabung logam; mereka
biasanya memiliki panjang 2 sampai 3 m dan memiliki diameter dalam 2 sampai 4
mm. Tabung-tabung ini dikemas padat dengan bahan pengemas yang seragam dan
terbagi halus, atau penyangga padat, dilapisi dengan lapisan tipis (0,05 sampai
111m) dari fase cair diam. Tabung biasanya dibentuk sebagai gulungan dengan
diameter sekitar 15 em untuk memungkinkan pengatur suhu yang nyaman dalam
oven.

Material Pendukung Padat

Pengepakan, atau penyangga padat dalam kolom yang dikemas, menahan fase
diam cair di tempatnya sehingga seluas mungkin area permukaan terpapar ke fase
gerak. Penopang ideal terdiri dari partikel kecil, seragam, bulat dengan kekuatan
mekanik yang baik dan luas permukaan spesifik minimal 1m '/ g. Selain itu,
materialnya harus inert pada suhu tinggi dan dibasahi secara merata oleh fase cair.
Belum ada materi yang memenuhi semua kriteria ini dengan sempurna.
Pengemasan paling awal, dan masih paling banyak digunakan, untuk GC
dibuat dari tanah diatom yang terbentuk secara alami, yang terdiri dari kerangka
ribuan spesies tumbuhan bersel tunggal yang pernah menghuni danau dan laut
purba. Gambar 27-16 adalah foto diatom yang diperbesar yang diperoleh dengan
'pemindaian mikroskop elektron. Tanaman tersebut menerima nutrisi dan
membuang limbahnya melalui difusi molekuler melalui pori-pori mereka.
Hasilnya, sisa-sisa mereka cocok sebagai bahan pendukung karena GC juga
didasarkan pada jenis difusi molekul yang sama.

Ukuran Partikel Pendukung

Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 26-11, efisiensi kolom kromatografi gas
meningkat dengan cepat dengan penurunan diameter partikel pengepakan.
Perbedaan tekanan yang diperlukan untuk mempertahankan laju aliran gas
pembawa yang dapat diterima, bagaimanapun, bervariasi secara terbalik sebagai
kuadrat diameter partikel; hubungan terakhir telah menempatkan batas bawah
pada ukuran partikel yang digunakan dalam GC karena tidak nyaman
menggunakan perbedaan tekanan yang lebih besar dari sekitar 50 psi. Akibatnya,
partikel pendukung biasa adalah 60 hingga 80 mesh (250 hingga 170 flm) atau 80
hingga 100 mesh (170 hingga 149 flm).

27C-3 Adsorpsi pada Kolom

Packings atau Capillary Walls Masalah yang telah mengganggu GC sejak awal
adalah adsorpsi fisik polar atau polarizable. spesies analit, seperti alkohol atau
hidrokarbon aromatik, pada permukaan silikat kemasan kolom atau dinding
kapiler. Adsorpsi menyebabkan puncak yang terdistorsi, yang melebar dan sering
menunjukkan ekor (ingat Gambar 26-5). Adsorpsi terjadi dengan gugus silanol
yang terbentuk di permukaan silikat melalui reaksi dengan uap air. Dengan
demikian, permukaan silikat terhidrolisis sepenuhnya.

27C-4 Fase Stasioner

Sifat yang diinginkan untuk fase cair yang tidak bergerak dalam kolom
kromatografi gas-cair meliputi (I) volatilitas yang rendah (idealnya. Titik didih
cairan harus paling sedikit 100 ° C lebih tinggi dari suhu operasi maksimum untuk
kolom); (2) stabilitas termal; (3) kelembaman kimiawi; (4) karakteristik pelarut
sehingga nilai k dan a (masing-masing Bagian 26B-5 dan 26B-6) untuk zat
terlarut yang akan diselesaikan berada dalam kisaran yang sesuai.
Banyak cairan telah diusulkan sebagai fase diam dalam pengembangan
GLC. Saat ini, kurang dari selusin yang biasa digunakan. Pemilihan fase diam
yang tepat seringkali sangat penting untuk keberhasilan pemisahan. Panduan
kualitatif untuk pemilihan fase diam dapat didasarkan pada tinjauan pustaka,
Internet, pengalaman sebelumnya, atau saran dari vendor perlengkapan dan suplai
kromatografi.
Waktu retensi analit pada kolom bergantung pada konstanta distribusinya,
yang selanjutnya terkait dengan sifat kimia dari fase diam cair. Untuk
memisahkan berbagai komponen sampel, konstanta distribusinya harus cukup
berbeda mencapai pemisahan yang bersih. Pada saat yang sama, konstanta ini
tidak boleh terlalu besar atau sangat kecil karena konstanta distribusi yang besar
menyebabkan waktu retensi yang sangat lama dan konstanta kecil menghasilkan
waktu retensi yang begitu singkat sehingga pemisahan menjadi tidak lengkap.
Untuk memiliki waktu tinggal yang wajar dalam kolom, \ analit harus
menunjukkan beberapa derajat kesesuaian (kelarutan) dengan fasa diam. Di sini,
prinsip "suka larut seperti" berlaku, di mana "suka" mengacu pada polaritas analit
dan cairan tak bergerak. Polaritas molekul, seperti yang ditunjukkan oleh momen
dipolnya, adalah ukuran medan listrik yang dihasilkan oleh pemisahan muatan di
dalam molekul tersebut.
Fase diam kutub mengandung gugus fungsi seperti itu sebagai -CN, -CO,
dan -OH. Fasa diam jenis hidrokarbon dan dialkil siloksan bersifat nonpolar,
sedangkan fasa poliester sangat polar. Analitik kutub meliputi alkohol, asam, dan
amina; zat terlarut dengan polaritas sedang termasuk eter, keton, dan aldehida.
Hidrokarbon jenuh bersifat nonpolar. Umumnya, polaritas fase diam harus sesuai
dengan komponen sampel. Jika kecocokannya bagus, urutan elusi ditentukan oleh
titik didih eluen.
Klasifikasi Fase Stasioner
Banyak skema berbeda telah dikirim ulang untuk mengklasifikasikan fase diam
dan dengan demikian menyederhanakan pemilihan fase diam. Sebagian besar
didasarkan pada probe zat terlarut yang menguji interaksi spesifik antara zat
terlarut dan fase cair dengan mengukur karakteristik rctensi zat terlarut, Dua
klasifikasi terpenting didasarkan pada karya Rohrschncider dan McReynolds, 1O
Hasilnya adalah produksi daftar fasa diam dan kelas senyawa yang dapat
dipisahkan oleh masing-masing fasa (lihat Tabel 27-3). Demikian pula, nilai
numerik, yang dikenal sebagai konstanta McReynolds, tersedia yang dapat
memandu pengguna dalam memilih fase diam untuk memisahkan analit yang
memiliki gugus fungsi berbeda, seperti alkohol dari aldehida atau ketonH

Beberapa Fase Stasioner yang Banyak Digunakan

Tabel 27-3 mencantumkan fasa diam yang paling banyak digunakan untuk
GC eolumn tubular yang dikemas dan terbuka dalam rangka meningkatkan
polaritas. Enam cairan ini mungkin dapat memberikan pemisahan yang
memuaskan untuk 90% atau lebih sampel yang ditemukan. Lima cairan yang
tercantum dalam Tabel 27-3 adalah polidimetil siloksan yang memiliki struktur
umum

Pada yang pertama, polidimetil siloksan, gugus - R semuanya -CH

"menghasilkan cairan yang relativel nonpolar. Dalam polisiloksan lain yang
ditunjukkan pada tabel, sebagian kecil dari gugus metil diganti dengan gugus
fungsi seperti fenil ( -c,; H5), sianopropil (-C, H6CN), dan triftuoropropil (-C, H
"CF,). Deskripsi persentase dalam setiap kasus memberikan jumlah substitusi
gugus nama untuk gugus metil pada tulang punggung polisiloksan. Jadi, misalnya,
fenil 5% -polidimetil siloksan memiliki cincin fenil yang diserahkan ke 5%
(menurut nomor) atom silikon dalam polimer.
Substitusi ini meningkatkan polaritas cairan ke berbagai derajat. Entri
kelima di Tahle 27-3 adalah polietilen glikol dengan struktur. Ditemukan
penggunaan luas untuk memisahkan spesies kutub. Gambar 27-17
mengilustrasikan penerapan fase tercantum dalam Tabel 27-3 untuk kolom tuhular
terbuka.

Fase Stasioner Berikat dan Berhubungan Silang

Kolom komersial diiklankan sebagai memiliki fase diam terikat atau silang.
Tujuan ikatan dan ikatan silang adalah untuk menyediakan fase diam yang tahan
lebih lama yang tidak terganggu pada suhu tinggi atau selama pemrograman suhu.
Dengan penggunaan, kolom yang tidak diberi perlakuan perlahan-lahan
kehilangan fase diamnya karena "pendarahan", di mana sejumlah kecil cairan
yang tidak dapat bergerak dikeluarkan dari kolom selama proses elusi. Kolom
seperti itu juga direkomendasikan untuk injeksi kolom di mana volume pelarut
yang besar digunakan. Memang, kolom hubung-silang atau berikat mungkin
dibelakang untuk menghilangkan kontaminan tanpa kehilangan fase diam yang
signifikan.
Pengikatan melibatkan pelekatan lapisan monomolekuler dari fase diam ke
permukaan silika kolom dengan reaksi kimia. Untuk kolom komersial, sifat reaksi
biasanya merupakan hak milik.
Hubungan silang dilakukan in situ setelah kolom dilapisi dengan salah satu
polimer yang tercantum dalam Tabel 27-3. Salah satu cara untuk menghubungkan
silang adalah dengan memasukkan peroksida ke dalam cairan aslinya. Saat film
dipanaskan, reaksi antara gugus metil dalam rantai polimer diawali oleh
mekanisme radikal bebas. Molekul polimer kemudian dihubungkan silang melalui
ikatan karbon-ke-karbon. Film yang dihasilkan kurang dapat diekstraksi dan
memiliki stabilitas termal yang jauh lebih besar daripada film yang tidak diberi
perlakuan. Hubungan silang juga telah dimulai dengan mengekspos kolom yang
dilapisi ke radiasi gamma.

Ketebalan Film
Kolom komersial tersedia dengan fase diam yang ketebalannya bervariasi dari 0,1
hingga 5 11m. Ketebalan film terutama mempengaruhi karakter retensi dan
kapasitas kolom seperti yang dibahas dalam Bagian 26C-3. Film tebal digunakan
dengan analit yang sangat mudah menguap karena film tersebut menahan zat
terlarut untuk waktu yang lebih lama, sehingga memberikan waktu yang lebih
lama untuk pemisahan berlangsung. Film tipis berguna untuk memisahkan spesies
dengan volatilitas rendah dalam jangka waktu yang wajar. Untuk sebagian besar
aplikasi dengan kolom 0,25- atau O.32-mm, ketebalan film dari 0,25 11mis
direkomendasikan. Dengan kolom megabore, film 1- hingga 1,5-l1 sering
digunakan. Saat ini, kolom dengan film 8-l1m dipasarkan.

Fase Stasioner Kiral

Dalam beberapa tahun terakhir, banyak upaya telah dicurahkan untuk
mengembangkan metode pemisahan enansiomer dengan gas atau kromatografi
cair. "Dua pendekatan telah digunakan. Salah satunya didasarkan pada
pembentukan turunan analit dengan reagen optik aktif yang membentuk sepasang
diastereomer yang dapat dipisahkan pada kolom achiral Metode alternatif adalah
dengan menggunakan chiralliquid sebagai fasa diam. Sejumlah fasa kiral turunan
asam amino telah dikembangkan untuk tujuan ini, dan lainnya menjadi tersedia
secara komersial.