BIodas 2020 - Kelompok XV - ACC

LAPORAN PRAKTIKUM
BIOKIMIA DASAR
HALAMAN JUDUL
Disusun oleh :
Kelompok
XV
Asisten pendamping : Felicia Swithenia
LABORATORIUM BIOKIMIA NUTRISI

DEPATERMEN NUTRISI DAN MAKANAN TERNAK
FAKULTAS PETERNAKAN
UNIVERSITAS GADJAH MADA
YOGYAKARTA
2020
LAPORAN PRAKTIKUM
BIOKIMIA DASAR
Disusun oleh :
Kelompok XV
Yulizar Bramundito Aji PT/08034
Erra Fazirra Seravica Putri Ajaka PT/08103
Intan Nur Laila PT/08121
Rifaldo PT/08162
De Lavida Padma Terrakota PT/08264
Savero Hassan Ash Shiddiq PT/08322
Asisten pendamping : Felicia Swithenia

FAKULTAS PETERNAKAN
YOGYAKARTA
2020
ii
HALAMAN PENGESAHAN
Laporan praktikum Biokimia Dasar ini disusun untuk memenuhi

salah satu syarat mengikuti mata kuliah Biokimia Dasar di Fakultas
Peternakan Universitas Gadjah Mada Yogyakarta.
Laporan praktikum ini telah dikoreksi dan disetujui oleh asisten
pendamping pada tanggal Mei 2020.
Yogyakarta, Mei 2020

Asisten Pendamping
Felicia Swithenia
iii
KATA PENGANTAR
Puji syukur kehadirat Allah SWT atas rahmat dan hidayah-Nya

sehingga Laporan Praktikum Biokimia Dasar ini dapat diselesaikan.
Laporan ini dibuat untuk memenuhi salah satu persyaratan mengikuti
mata kuliah Biokimia Dasar.
Ucapan terima kasih penyusun berikan kepada :
1. Prof. Dr. Ir. Ali Agus, DAA., DEA., IPU., ASEAN Eng. sebagai
Dekan Fakultas Peternakan Universitas Gadjah Mada
Yogyakarta.
2. Prof. Dr. Ir. Lies Mira Yusiati, SU., IPU., ASEAN Eng., Prof. Dr.
Ir. Zaenal Bachruddin, M.Sc., ASEAN Eng., Dr. Ir. Chusnul
Hanim, M.Si., IPM., Ir. Muhlisin, S.Pt., M.Agri, Ph.D., IPP., dan
Muhsin Al Anas, S.Pt. sebagai dosen pengampu mata kuliah
Biokimia Dasar.
3. Asisten Biokimia Dasar yang telah memberikan bimbingan
dalam melaksanakan praktikum dan menyelesaikan laporan.
4. Semua rekan-rekan yang telah bersedia membantu dalam
penyusunan laporan.
Penyusun mengharapkan kritik dan saran demi kesempurnaan
laporan praktikum ini. Semoga laporan ini bisa bermanfaat bagi para
pembaca.
Yogyakarta, Mei 2020
Penyusun
iv
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ..................................................................................... i
HALAMAN PENGESAHAN...................................................................... iii
KATA PENGANTAR ................................................................................ iv
DAFTAR ISI ............................................................................................... v
DAFTAR TABEL ..................................................................................... vii
DAFTAR GAMBAR ................................................................................ viii
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... ix
ACARA I KARBOHIDRAT ........................................................................ 1
Tujuan Praktikum .................................................................................... 2
Teori dan Prinsip Kerja ........................................................................... 2
Materi dan Metode .................................................................................. 8
Hasil dan Pembahasan......................................................................... 11
Kesimpulan ........................................................................................... 24
Daftar Pustaka ...................................................................................... 25
ACARA II PROTEIN ............................................................................... 62
Tujuan Praktikum .................................................................................. 63
Teori dan Prinsip Kerja ......................................................................... 63
Materi dan Metode ................................................................................ 68
Kesimpulan ........................................................................................... 83
Daftar Pustaka ...................................................................................... 84
ACARA III LIPIDA .................................................................................. 88
Tujuan Praktikum .................................................................................. 89
Teori dan Prinsip Kerja ......................................................................... 89
Materi dan Metode ................................................................................ 94
Kesimpulan ......................................................................................... 105
Daftar Pustaka .................................................................................... 106
ACARA IV PENCERNAAN .................................................................. 114
Tujuan Praktikum ................................................................................ 115
Teori dan Prinsip Kerja ....................................................................... 115
Materi dan Metode .............................................................................. 119
Hasil dan Pembahasan....................................................................... 122
v
Kesimpulan ......................................................................................... 132
Daftar Pustaka .................................................................................... 133
ACARA V URIN KUALITATIF .............................................................. 141
Kesimpulan ......................................................................................... 168
Daftar Pustaka .................................................................................... 169
ACARA VI URIN KUANTITATIF .......................................................... 210
Kesimpulan ......................................................................................... 219
Daftar Pustaka .................................................................................... 220
RESUME MATERI ................................................................................. 236
Darah .................................................................................................. 236
Susu dan Telur ................................................................................... 248
vi
DAFTAR TABEL
Tabel 1.
Tabel 1.1 Hasil Uji Benedict ..................................................................... 11
Tabel 1.2 Hasil Uji Luff ............................................................................. 13
Tabel 1.3 Hasil Uji Molisch ....................................................................... 14
Tabel 1.4 Hasil Uji Seliwanoff .................................................................. 16
Tabel 1.5 Hasil Uji Benedict ..................................................................... 19
Tabel 1.6 Hasil Uji Seliwanoff .................................................................. 21
Tabel 1.7 Hasil Uji Hasil Hidrolisis Amilum .............................................. 22
Tabel 2.
Tabel 2.1 Hasil Uji pengendapan dengan menggunakan logam berat ..... 72
Tabel 2.2 Hasil Uji pengendapan dengan menggunakan alkaloid ........... 73
Tabel 2.3 Hasil Uji dengan menggunakan garam netral dan alkohol ....... 74
Tabel 2.4 Hasil Uji Xanthoprotein............................................................. 76
Tabel 2.5 Hasil Uji Albumin dan Globlulin ................................................ 78
Tabel 2.6 Hasil Uji gelatin ........................................................................ 80
Tabel 2.7 Hasil Uji reaksi pengendapan .................................................. 82
Tabel 3.
Tabel 3.1 Hasil Uji kelarutan dan terjadinya emulsi ................................. 96
Tabel 3.2 Hasil Uji angka yod .................................................................. 98
Tabel 3.3 Hasil Uji akrolein .................................................................... 101
Tabel 3.4 Hasil Uji angka asam ............................................................. 102
Tabel 3.5 Hasil Uji noda lemak .............................................................. 104
vii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1.
Gambar 1.1 Struktur glukosa dan fruktosa ................................................ 3
Gambar 1.2 Proses pembentukan karbohidrat .......................................... 5
Gambar 1.3 Glukosazon .......................................................................... 17
Gambar 1.4 Fruktosazon ......................................................................... 17
Gambar 1.5 Arabinosazon ....................................................................... 18
Gambar 3.
Gambar 3.1 Struktur Asam Lemak Jenuh ................................................ 90
Gambar 3.2 Struktur Asam Lemak Tidak Jenuh ...................................... 90
Gambar 3.3 Reaksi Kimia Saponifikasi .................................................... 91
Gambar 3.4 Reaksi saponifikasi lemak .................................................... 97
viii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1.
Lampiran 1.1. Dokumentasi ..................................................................... 28
Lampiran 1.2. Laporan Inhal .................................................................... 32
Lampiran 2.
Lampiran 2.1. Dokumentasi Uji ................................................................ 85
Lampiran 3.
Lampiran 3.1. Perhitungan Angka Asam ............................................... 109
Lampiran 3.2. Dokumentasi praktikum ................................................... 109
Lampiran 3.3. Lembar Kerja................................................................... 111
Lampiran 4.
Lampiran 4.1 Dokumentasi Hasil Uji ...................................................... 135
Lamiran 5.
Lampiran 5.1. Dokumentasi ................................................................... 173
Lampiran 5.3. Laporan Inhal .................................................................. 181
Lampiran 6.
Lampiran 6.1. Perhitungan ..................................................................... 221
Lampiran 6.2. Dokumentasi ................................................................... 222
Lampiran 6.4. Laporan Inhal .................................................................. 225
ix
LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA DASAR
ACARA I
KARBOHIDRAT
Disusun oleh:
Kelompok XV
Erra Fazira Saravica Putri Ajaka PT/08103
Rifaldo PT/08162
Asisten : Felicia Swithenia

DEPARTEMEN NUTRISI DAN MAKANAN TERNAK
FAKULTAS PETERNAKAN
YOGYAKARTA
2020
1
ACARA I
KARBOHIDRAT
Tujuan Praktikum
Praktikum ini bertujuan untuk mengetahui adanya gugus reduksi
dan gugus reduksi bebas, mengetahui pengaruh asam, dan mengetahui
adanya gugus keton yang terdapat pada karbohidrat. Praktikum ini juga
bertujuan untuk mengidentifikasi karbohidrat berdasarkan bentuk fisik,
mengetahui hasil hidrolisis dengan melihat adanya gugus reduksi pada
karbohidrat. Praktikum ini juga bertujuan untuk mengetahui adanya gugus
keton pada hasil hidrolisis karbohidrat, serta mengetahui hasil hidrolisis
amilum.
Teori dan Prinsip Kerja

Karbohidrat adalah komponen bahan pangan yang tesusun oleh 3
unsur utama, yaitu karbon (C), hidrogen (H), dan oksigen (O) (Pramitha,
2018). Susunan atom-atom tersebut dan ikatannya membedakan
karbohidrat satu dengan lainnya, sehingga ada karbohidrat yang masuk
kelompok struktur sederhana seperti monosakarida dan disakarida dan
dengan struktur kompleks atau polisakarida seperti pati, glikogen,
selulosa, dan hemiselulosa. Analisis kualitatif karbohidrat karbohidrat
umumnya didasarkan atas reaksi-reaksi warna yang dipengaruhi oleh
produk-produk hasil penguraian gula dalam asam-asam kuat dengan
berbagai senyawa organik, sifat mereduksi dari gugus karbonil dan sifat
oksidasi dari gugusan hidroksi yang berdekatan (Kusbandary, 2015).
Reaksi dengan asam-asam kuat seperti asam sulfat, hidroklorat,
dan fosfat pada karbohidrat menghasilkan pembentukan produk terurai
dan berwarna (Andarwulan et al., 2011). Analisis kuantitatif karbohidrat
dalam suatu bahan yaitu dengan cara kimiawi, cara fisik, cara enzimatik,
atau biokimiawi dan cara kromatografi. Penentuan karbohidrat yang
termasuk polisakarida maupun oligosakarida memerlukan perlakuan
2
pendahuluan yaitu dihidrolisa terlebih dahulu sehingga diperoleh
monosakarida. Penentuan karbohidrat dengan cara kromatografi adalah
dengan mengisolasi dan mengidentifikasi karbohidrat dalam suatu
campuran. Isolasi karbohidrat ini berdasarkan prinsip pemisahan suatu
campuran berdasarkan atas perbedaan distribusi rationya pada fase diam
dan fase gerak (Wulandari et l., 2012).
Karbohidrat dibagi menjadi 3 sub golongan berdasarkan jumlah
satuan dasar penyusunnya. Tiga golongan karbohidrat yaitu
monosakarida, oligosakarida, dan polisakarida. Monosakarida adalah jenis
karbohidrat yang paling sederhana dan tidak dapat dihidrolis menjadi
karbohidrat yang lebih kecil lagi. Contoh dari monosakarida yaitu glukosa
dan galaktosa. Oligosakarida adalah karbohidrat yang terdiri dari 2 sampai
10 satuan dasar. Contoh dari oligosakarida yaitu disakarida dan
trisakarida. Polisakarida adalah gabungan lebih dari 10 unit
monosakarida. Contoh dari monosakarida yaitu amilum dan glikogen
(Firani, 2017). Berdasarkan gugus karbonil fungsionalnya, maka
monosakarida dibedakan menjadi aldosa jika mengandung gugus
aldehida, dan ketosa jika mengandung gugus keton (Wibawa, 2017).
Gambar 1.1 Struktur glukosa dan fruktosa

(McDonald et al., 2010)
Karbohidrat mempunyai beberapa sifat antar lain sifat mereduksi,
pengaruh asam, pengaruh basa, dan pembentukan osazon. Sifat
mereduksi disebabkan adanya gugus aldehid atau keton bebas dalam
3
molekul karbohidrat. Sifat ini tampak pada reduksi ion-ion logam misalnya
ion Cu2+ dan ion Ag2+ yang terdapat pada pereaksi tertentu (Poedjiadi dan
Supriyanti, 2006).
Peranan utama karbohidrat di dalam tubuh adalah untuk
menyediakan glukosa bagi sel-sel tubuh, yang kemudian akan diubah
menjadi energi kelebihan glukosa akan disimpan di hati dalam bentuk
glikogen. Ketika persediaan glukosa darah menurun, hati akan mengubah
sebagian dari glikogen menjadi glukosa dan mengeluarkannya ke aliran
darah. Glukosa ini akan dibawa oleh darah ke seluruh bagian tubuh yang
memerlukan seperti otak, sistem saraf, jantung ,dan organ tubuh lain. Sel-
sel otot dan sel-sel lain di samping menggunakan glukosa juga
menggunakan lemak sebagai sumber energi. Sel-sel otot juga menyimpan
glukosa dalam bentuk glikogen. Glikogen ini hanya digunakan sebagai
energi untuk keperluan otot saja dan tidak dapat dikembalikan sebagai
glukosa dalam aliran darah (Almatsier, 2004).
Golongan senyawa karbohidrat dapat dibagi menjadi tiga sub
golongan atas dasar jumlah satuan dasar yang menyusunnya. Sakarida
yang hanya terdiri dari sebuah satuan dasar maka karbohidrat itu
terkategorikan dalam sub golongan monosakarida (Wibawa, 2017). Sub
golongan dinamakan oligo-sakarida, karena mengandung dua sampai
sepuluh satuan dasar. Terakhir adalah polisakarida, mengandung satuan
dasar yang jumlahnya lebih dari sepuluh (Robertfroid, 2007).
Sumber utama karbohidrat adalah tumbuhan (Noriko dan Pambudi,
2014). Zat tersebut terbentuk melalui proses fotosintesis yang melibatkan
hijauan daun dan cahaya matahari. Tanaman terdapat zat warna hijau
atau klorofil yang dapat menyerap energi dari sinar matahari dan
menyebabkan tanaman dapat membentuk karbohidrat dari CO2 di udara
dan H2O atau air di tanah. Proses pembentukan karbohidrat dapat
dinyatakan dengan persamaan sebagai berikut:
4
Gambar 1.2 Proses pembentukan karbohidrat
(Hendaryono, 1994)
Berdasarkan sifat-sifat karbohidrat dan reaksi-reaksi kimia yang
spesifik, karbohidrat dapat dianalisis dengan uji kualitatif dan uji kuantitatif.
Analis kualitatif pada karbohidrat dapat dilakukan dengan zat tertentu
sehingga akan mengahasilkan warna tertentu. Contohnya karbohidrat
ditambah atau direaksikan dengan larutan naftol dalam alkohol, kemudian
ditambah H2SO4(aq) pekat secara hati-hati melewati dinding tabung maka
pada batas cairan akan berwarna ungu. Analisis kuantitatif oligosakrida
dan polisakarida memerlukan reaksi hidrolis menjadi monosakarida dan
kemudian ditentukan dengan regen CuSO4 atau kupri-sulfat (Lestari et al.,
2014).
Karbohidrat merupakan sumber gizi energi paling penting didalam
tubuh (Mukti et al., 2018). Karbohidrat merupakan sumber daya utama
bagi manusia selain protein dan lemak. Karbohidrat juga mempunyai
peranan penting dalam menentukan karakteristik bahan misal warna,
rasa, tekstur, dan lain-lain. Karbohidrat berguna untuk mencegah
timbulnya pemecahan protein tubuh yang berlebihan, kehilangan mineral,
dan berguna untuk membantu metabolisme lemak dan protein
(Risnoyatiningsih, 2011). Proses metabolisme protein, mula-mula, protein
dicerna oleh hormon yang berada di dalam lambung atau enzim pepsin,
dan ketika protein telah meninggalkan lambung biasanya dalam bentuk
pepton. Kemudian, pepton akan masuk ke dalam usus dan bercampur
5
dengan enzim pancreas untuk dipecah menjadi polipeptida kecil (Marewa,
2015). Pencernaan lemak mulai terjadi di dalam usus. Lemak yang keluar
dari lambung menuju usus merangsang sebuah hormon yang disebut
sebagai hormon kolesistokinin. Hormon ini menyebabkan kantung
empedu bereaksi sehingga mengeluarkan cairan empedu ke dalam usus
dua belas jari atau duodenum. Absorpsi hasil pencernaan lemak sebagian
besar terjadi di usus halus. (Marewa, 2015). Faktor-faktor yang
mempengaruhi jumlah kadar glukosa didalam tubuh yaitu banyaknya
aktivitas yang dilakukan, fungsi hati, adanya penyakit yang dialami,
penggunaan obat-obat tertentu, serta apakah anda mengonsumsi alkohol
(Tandra, 2008).
Prinsip dari uji Benedict adalah menggunakan senyawa yang
mengandung tembaga (Cu) dengan muatan +2. Kondisi alkalis akan
terjadi reduksi kupri (Cu2+) menjadi kupro (Cu+) oleh gugus aldehid atau
keton bebas dari gula hasil positif dari uji benedict ini yaitu adanya
endapan merah pada larutan (Atma, 2018). Prinsip kerja dari uji Luff
adalah Cu2+ yang terdapat dalam reagen Luff, dapat direduksi oleh gugus
reduksi bebas pada monosakarida menjadi Cu + yang terlihat dengan
terbentuknya endapan merah bata (Cu2O) (Sunarya dan Setiabudi, 2004).
Uji Molisch dilakukan mengetahui pengaruh asam pada
karbohidrat. Prinsip kerja dari uji ini adalah monosakarida apabila
dipanaskan dengan asam kuat akan mengalami dehidrasi menghasilkan
furfural yang kemudian bereaksi dengan alfa-naftol atau timol dalam
alkohol membentuk senyawa yang berwarna (Al-kayyis dan Susanti,
2016). Semua karbohidrat akan membentuk osazon apabila dalam
keadaan asam dipanaskan dan diberi fenilhidrazin berlebih. Supardjo
(2009) menyatakan bahwa osazon adalah suatu kristal berwarna kuning
yang sukar larut larut dalam air dan terbentuk apabila memanaskan
monosakarida atau disakrida dengan fenilhidrazin.
Prinsip kerja uji seliwanof adalah pada reaksi Seliwanoff, fruktosa
akan diubah menjadi hidroksimetilfurfural yang selanjutnya bereaksi
6
dengan resorsinol membentuk senyawa berwarna merah (Robert, 1996).
Prinsip kerja dari uji fenilhidrazin adalah monosakarida dalam keadaan
asam dengan pemanasan 100°C dan penambahan fenilhidrazin berlebih
akan bereaksi membentuk fenil-osazon. Sumardjo (2009) menyatakan
bahwa monosakarida atau disakarida apabila dipanaskan dengan
fenihidrazina akan membentuk kristal berwarna kuning yang sukar larut
dalam air yang disebut osazon.
Prinsip kerja dari uji Benedict adalah pada suasana basa, reduksi
ion Cu2+ dari CuSO4 oleh gula pereduksi akan berlangsung dengan cepat
dan membentuk Cu2O berupa endapan berwarna merah bata (Nurjannah
et al., 2017). Prinsip kerja dari uji Seliwanof ini adalah fruktosa akan
diubah menjadi hidroksimetilfurfural yang selanjutnya bereaksi dengan
resorsinol membentuk senyawa berwarna merah. Penambahan resorsinol
menyebabkan terjadinya kondensasi membentuk kompleks berwarna
merah orange. Hasil produk berwarna ini disebabkan oleh adanya reaksi
antara gula dengan asam-asam kuat (Sumardjo, 2009).
Prinsip kerja dari ujii hasil hidrolisis amilum adalah perubahan
amilum (Polisakarida) menjadi monosakarida berupa glukosa. Hidrolisis
amilum atau pati adalah proses pemecahan molekul amilum menjadi
molekul yang lebih sederhana. Molekul tersebut misalnya dekstrin,
isomaltosa, maltosa, dan glukosa (Rindit et al, 1998).
7
Materi dan Metode
Materi
Alat. Alat yang digunakan pada praktikum karbohidrat adalah
tabung reaksi, rak tabung reaksi, deck glass, object glass, drop plate,
bekker glass, pipet ukur, pipet tetes, bunsen, penangas air, penjepit
tabung, pengaduk, gelas ukur, mikroskop, dan stopwatch.
Bahan. Bahan yang digunakan pada praktikum karbohidrat antara
lain glukosa 0,01 M, glukosa 0,02 M, glukosa 0,04 M, laktosa 0,02M,
fruktosa 0,02 M, sukrosa 0,02 M, selulosa 0,01 M, selulosa 0,02 M,
furfural 0,01 M, fruktosa 0,1 M, arabinosa 0,01M, sakarosa, maltosa,
laktosa, amilum 1%, reagen Benedict, aquades, reagen Luff, larutan 5%
naftol dalam alkohol, asam asetat anhidrat, fenilhidrazin padat, Na asesat
padat, timol merah, HCl encer, 2% larutan Na2CO3, HCl pekat, larutan
HCl, yod 0,1 M, dan Na2CO3, reagen seliwanof, asam asetat glasial,
reagen molisch, dan H2SO4 pekat.
Metode
Daya Mereduksi
Uji Benedict. Tiga buah tabung reaksi masing-masing diisi dengan
larutan Benedict sebanyak 3 ml. Masing-masing tabung ditambahkan 1 ml
glukosa 0,01 M, glukosa 0,02 M, dan glukosa 0,04 M, tabung dipanaskan
di atas bunsen yang menyala selama 10 menit. ketiga tabung tersebut
dibandingkan satu sama lain dan perubahan yang terjadi pada ketiga
tabung diamati. Besaran endapan yang muncul pada bagian dasar tabung
dicatat.
Uji Luff. Larutan fruktosa 0,02 M, larutan glukosa 0,02 M, laktosa
0,02 M, sukrosa 0,02 M, dan amilum 1% masing-masing sebanyak 2 ml
dimasukkan ke dalam 5 tabung reaksi yang berbeda. Masing-masing
tabung ditambahkan 1 ml reagen Luff. Kelima tabung dimasukkan ke
dalam penangas air dan dididihkan selama 15 menit. Kelima tabung
8
tersebut kemudian diamati perubahannya. Perubahan warna serta
besaran endapan yang muncul kemudian dicatat.
Pengaruh Asam
Uji Molisch. Larutan glukosa 0,02 M sebanyak 1 ml, 1 ml selulosa
0,02 M, 1 ml amilum %, 1 ml furfural 0,01 M dimasukkan ke dalam 4
tabung berbeda. Keempat tabung itu ditambahkan 2 tetes reagen Molisch
5% dan dihomogenkan. Keempat tabung tersebut ditambahkan 3 ml
H2SO4 pekat melalui dinding tabung. Perubahan warna yang terjadi pada
keempat tabung tersebut diamati sedemikian rupa.
Uji Seliwanoff. Larutan glukosa 0,02 M sebanyak 2 ml dan 2 ml
fruktosa 0,01 M dimasukkan ke dalam 2 tabung berbeda dan ditambah
dengan 2 ml larutan HCl pekat. Larutan tersebut dicampur dan
dipanaskan dengan penangas air selama 30 menit. Sebanyak 0,5 ml
reagen Seliwanoff 0,5% ditambahkan dan perubahan yang terjadi pada
kedua tabung itu diamati.
Pembentukan Osazon
Uji Fenilhidrazina. Larutan glukosa 0,02 M sebanyak 5 ml, 5 ml
fruktosa 0,02 M, dan 5 ml arabinosa 0,03 M dimasukkan ke dalam 3
tabung berbeda dan ditambah 10 tetes asam asetat glasial, 1 sendok
pengaduk fenilhidrazina padat, dan Na asetat padat sebanyak dua kali
jumlah fenilhidrazina. Ketiga tabung tersebut dipanaskan dalam penangas
air mendidih selama 30 menit. Tabung reaksi kemudian didinginkan.
Kristal yang terbentuk dilihat dengan mikroskop dan digambar sesuai
dengan kristal yang terbentuk.
Hasil Hidrolisis
Uji Benedict. Larutan maltosa 0,02 M sebanyak 5 ml dan 5 ml
larutan laktosa 0,02 M dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambah
1 tetes timol biru dan 1 sampai 2 tetes HCl 10% hingga warna berubah
menjadi merah muda. Larutan dibagi ke dalam dua tabung dan didihkan
tabung yang satu selama 30 menit lalu didinginkan. Kedua tabung yang
telah dididihkan tersebut dinetralkan dengan larutan Na 2CO3 2% lalu
9
dilakukan uji Benedict. Proses tersebut dilakukan kembali pada tabung
satunya tanpa adanya proses dididihkan. Perubahan yang terjadi pada
kedua tabung tersebut diamati, kemudian hasil dari kedua tabung
dibandingkan.
Uji Seliwanoff. Larutan sukrosa 0,02 M sebanyak 2 ml, larutan
maltosa 0,02 M sebanyak 2 ml, dan larutan laktosa 0,02 M sebanyak 2 ml
dimasukkan ke dalam 3 tabung reaksi berbeda dan ditambah 2 ml HCl
pekat. Larutan dididihkan selama 30 menit dan didinginkan. Ketiga tabung
tersebut ditambahkan reagen Seliwanoff 0,5% sebanyak 0,5 ml.
Perubahan yang terjadi diamati dengan sedemikian rupa dan hasil yang
muncul dicatat.
Polisakarida
Uji Hasil Hidrolisis Amilum. Larutan amilum 1% sebanyak 10 ml
dicampur dengan 3 ml larutan HCl 3 M. Larutan tersebut dipanaskan di
dalam penangas air dan setiap 1 menit diambil setetes untuk diuji Iod.
Pengambilan dihentikan setelah uji Iod negatif dengan ditandai warna
larutan berubah mendekati warna kontrol (Iod + aquades). Waktu dicatat
dan diamati perubahan warnanya. Larutan dinetralkan dengan Na2CO3
sebanyak 5 tetes dan diuji dengan uji Benedict. Perubahan yang terjadi
pada larutan diamati dan hasil yang muncul dicatat.
10
Hasil dan Pembahasan
Daya Mereduksi
Uji Benedict. Praktikum Uji Benedict ini bertujuan untuk
mengetahui adanya gugus reduksi pada karbohidrat. Prinsip kerja dari
praktikum ini yaitu Cu++ yang terdapat di dalam reagen benedict akan
direduksi oleh gugus reduksi dari monoskarida sehingga menjadi Cu +
yang ditandai oleh terlihatnya endapan berwarna merah bata. Kusbandary
(2015) menyatakan bahwa Cu2+ yang terdapat dalam reagen Benedict,
dapat direduksi oleh gugus reduksi pada monosakarida menjadi Cu + yang
terlihat dengan terbentuknya endapan merah bata (Cu 2O). Fungsi reagen
Benedict adalah sebagai penyedia Cu2+ untuk direduksi oleh gugus
reduksi pada monosakarida. Mukaromah (2010) menyatakan bahwa
penambahan reagen Benedict berfungsi sebagai larutan yang
mengandung ion Cu2+ yang akan tereduksi dan bereaksi dengan gugus
reduksi pada monosakarida membentuk endapan merah bata Fungsi
pemanasan pada uji Benedict adalah untuk mempercepat reaksi upaya
perubahan warna dan endapan cepat terbentuk. Hafid et al. (2017)
menyatakan bahwa fungsi pemanasan pada reaksi ini sebagai
mempercepat reaksi. Hasil uji Benedict dapat dilihat pada Tabel 1.1.
Tabel 1.1 Hasil Uji Benedict
No. Tabung Konsentrasi Glukosa Hasil Uji (Endapan)
1. 0,01 M (++) endapan merah bata
2. 0,02 M (-) tidak ada endapan
3. 0,04 M (+++) endapan merah bata
Berdasarkan tabel di atas, endapan merah bata yang terdapat pada
tabung ketiga lebih banyak dibandingkan dengan tabung pertama dan
kedua karena konsentrasi glukosa yang terdapat pada tabung ketiga lebih
besar dibanding dua tabung lainnya. Tabung 1 yang berisi glukosa 0,01
M terdapat endapan merah bata yang jumlahnya sedang. Glukosa pada
tabung 2 yang berisi 0,02 M tidak terdapat endapan. Hasil uji
mengindikasikan bahwa semakin tinggi konsentrasi larutan yang diberikan
11
maka semakin banyak endapan yang terbentuk. Percobaan di atas
membuktikan bahwa glukosa memiliki gula reduksi yang memiliki
kemampuan mereduksi ion Cu2+ yang mengendap menjadi Cu2O,
endapan yang diperoleh berupa endapan merah bata. Banyak sedikitnya
endapan merah bata dipengaruhi oleh konsentrasi glukosa. Percobaan di
atas menjelaskan bahwa perbedaan konsentrasi berpengaruh pada hasil
endapan, semakin besar konsentrasi glukosa yang ditambahkan maka
semakin banyak endapan merah bata yang diperoleh.
Kusbandari (2015) menyatakan bahwa semakin besar konsentrasi
suatu larutan maka endapan yang dihasilkan akan semakin banyak,
sehingga menyebabkan hasil yang diperoleh tidak sesuai dengan teori.
Faktor-faktor yang menyebabkan hasil tidak sesuai dengan teori
diantaranya adalah konsentrasi larutan dan lama waktu pemanasan.
Kumardinah (2017) menyatakan semakin tinggi konsentrasi reaktan, maka
semakin banyak jumlah partikel reaktan yang bertumbukan, sehingga
semakin tinggi frekuensi terjadinya tumbukan dan lajunya meningkat. Di
sisi lain, Kusmardinah (2017) menyatakan semakin tinggi temperatur
(lama waktu pemanasan), maka semakin tinggi energi kinetik dari partikel
reaktan, sehingga frekuensi tumbukan dan energi tumbukan meningkat.
Tabung 3 yang berisi glukosa 0,04 M terdapat endapan merah bata yang
lebih banyak dari tabung yang lain.
Uji Luff. Praktikum Uji Luff ini bertujuan untuk mengetahui adanya
gugus reduksi bebas pada karbohidrat. Prinsip kerja dari uji ini adalah
Cu2+ yang terdapat dalam reagen Luff, dapat direduksi oleh gugus reduksi
bebas pada monosakarida menjadi Cu+ yang terlihat dengan terbentuknya
endapan merah bata (Cu2O). Sunarya dan Setiabudi (2004) menyatakan
bahwa gugus reduktif bebas akan mereduksi ion Cu2+ menjadi Cu+ yang
mengendap sebagai Cu2O yang berwarna merah. Suarni (2009)
menyatakan bahwa kelebihan CuO akan direduksikan dengan KI berlebih,
sehingga dilepaskan I2. I2 yang dibebaskan tersebut dititrasi dengan
larutan Na2S2O3. Trisunaryanti (2018) menyatakan fungsi reagen Luff
12
adalah mereduksi CuO menjadi Cu2O dan fungsi pemanasan pada uji Luff
adalah untuk meningkatkan energi kinetik dari molekul-molekul zat terlarut
sehingga meningkatkan terjadinya tumbukan. Pengukuran karbohidrat
yang merupakan gula pereduksi dengan metode Luff ini didasarkan pada
reaksi monosakarida yang akan mereduksikan CuO dalam larutan Luff
menjadi Cu2O. Hasil uji Luff dapat dilihat pada Tabel 1.2.
Tabel 1.2 Hasil Uji Luff
No.Tabung Sampel Hasil uji (endapan)
1 Fruktosa 0,02 M (++) endapan merah bata
2 Glukosa 0,02 M (+) endapan merah bata
3 Laktosa 0,02 M (++) endapan merah bata
4 Sukrosa 0,02 M (+++) endapan merah bata
5 Amilum 1% (-) tidak terdapat endapan
Berdasarkan tabel di atas, pada tabung 1 dan 2 terdapat endapan
merah bata banyak karena Marks (1996) menyatakan bahwa fruktosa
merupakan suatu monosakarida yang memiliki 2 gugus hidrokarbon (C-H-
O) atau gugus fungsi keton yang terikat. Glukosa (aldosa) mempunyai
gugus reduksi bebas yang dapat mereduksi Cu++ menjadi Cu+ membentuk
Cu2O. Tabung 3, laktosa tersusun atas glukosa dan galaktosa yang masih
mempunyai gugus reduksi bebas (aldehid) sehingga dapat mereduksi
Cu++ menjadi Cu+ membentuk Cu2O. Tabung 4, sukrosa menghasilkan
sedikit endapan. Sukrosa tersusun atas glukosa dan fruktosa dengan
ikatan 1-2-α-glikosidik sehingga tidak mempunyai gugus reduksi bebas.
Tabung 5, amilum tidak terbentuk endapan dikarenakan amilum
merupakan polisakarida yang harus dihidrolisis menjadi disakarida dan
monosakarida.
Amilum dapat muncul endapan merah bata jika menjadi disakarida
atau monosakarida terlebih dahulu baru menjadi furfural baru bisa menjadi
endapan merah bata. Iswari dan Ari (2006) menyatakan bahwa amilum
termasuk golongan polisakarida yang harus dihidrolisis terlebih dahulu
untuk mendapatkan struktur yang lebih sederhana yaitu monosakarida
dan disakarida, hal ini menunjukkan bahwa hasil praktikum yang diperoleh
telah sesuai dengan teori.
13
Pengaruh Asam (Dehidrasi)
Uji Molisch. Praktikum Uji Molisch ini bertujuan untuk mengetahui
pengaruh asam pada karbohidrat. Prinsip kerja dari uji ini adalah
monosakarida apabila dipanaskan dengan asam kuat akan mengalami
dehidrasi menghasilkan furfural yang kemudian bereaksi dengan alfa-
naftol atau timol dalam alkohol membentuk senyawa yang berwarna (Al-
kayyis dan Susanti, 2016). Fungsi reagen Molisch adalah sebagai
pembentuk senyawa kompleks karbohidrat karena di dalam pereaksi
terdapat alfa-naftol dalam alkohol yang akan bereaksi dengan furfural
pada karbohidrat yang telah terdehidrasi oleh asam sulfat sehingga hasil
reaksi akan berwarna ungu. Fungsi alfa-naftol adalah sebagai pembentuk
cincin yang berwarna ungu (Sumardjo, 2006). Penambahan H2SO4
bertujuan untuk kondensing agen dan pembentuk senyawa multifurfural
sehingga terbentuk rantai karbon yang semakin pendek. Sumardjo (2006)
menyatakan bahwa furfural yang bereaksi dengan reagen molisch
membentuk α-naftol yang membentuk cincin berwarna ungu. Hasil uji
Molisch dapat dilihat pada Tabel 1.3.
Tabel 1.3 Hasil Uji Molisch
No.Tabung Sampel Hasil Uji (cincin)
1 Glukosa 0,02 M (+++) cincin ungu banyak
2 Selulosa 0,02 M (++) cincin ungu sedang
3 Amilum 1% (+) cincin ungu sedikit
4 Furfural 0,01 M (++++) cincin ungu sangat banyak
Berdasarkan tabel di atas, semua tabung menghasilkan cincin
warna ungu. Cincin warna ungu paling banyak terdapat pada furfural, dan
cincin warna ungu paling sedikit pada amilum. Tabung 1, cincin ungu yang
dihasilkan lebih sedikit daripada furfural, hal ini dikarenakan glukosa
merupakan monosakarida yang ketika terdehidrasi membentuk furfural.
Tabung 2, cincin ungu yang dihasilkan lebih sedikit daripada glukosa, hal
ini dikarenakan selulosa merupakan polisakarida yang ketika terdehidrasi
menjadi monosakarida kemudian baru menjadi furfural. Tabung 3, cincin
ungu yang dihasilkan paling sedikit dari tabung lainnya, hal ini
14
dikarenakan amilum merupakan polisakarida yang ketika terdehidrasi
menjadi monosakarida kemudian baru menjadi furfural. Tabung 4, cincin
yang dihasilkan paling banyak daripada tabung lainnya, hal ini
dikarenakan furfural merupakan bentuk paling sederhana di mana furfural
merupakan turunan dari gugus aldehid. Furfural yang kemudian langsung
bereaksi dengan alfa-naftol atau timol dalam alkohol akan membentuk
senyawa yang berwarna berupa cincin ungu yang banyak, sedangkan
larutan yang lain harus dipecah terlebih dahulu agar menjadi bentuk paling
sederhana (furfural).
Sumardjo (2009) yang menjelaskan bahwa larutan karbohidrat
yang telah dicampur dengan reagen Molisch kemudian ditambah asam
sulfat pekat akan menghasilkan warna violet yang menunjukkan adanya
karbohidrat dan terdapat tiga tahapan untuk mencapai furfural pada
polisakarida yaitu polisakarida dihidrolisis, diikuti dehidrasi kemudian
kondensasi. Banyaknya cincin ungu yang terbentuk tergantung pada jenis
sakaridanya. Furfural akan membentuk cincin ungu lebih banyak daripada
yang lain, hal ini dikarenakan furfural merupakan bentuk paling
sederhana. Glukosa, selulosa, dan amilum harus diubah terlebih dahulu
sesuai tahapan untuk mencapai furfural, hal ini menunjukkan bahwa hasil
praktikum yang diperoleh telah sesuai dengan teori.
Uji Seliwanoff. Praktikum Uji Seliwanoff ini bertujuan untuk
mengetahui adanya gugus keton pada karbohidrat, sehingga dapat
digunakan untuk membedakan glukosa dan fruktosa. Prinsip kerja dari uji
ini adalah pada reaksi Seliwanoff, fruktosa akan diubah menjadi
hidroksimetilfurfural yang selanjutnya bereaksi dengan resorsinol
membentuk senyawa berwarna merah (Robert, 1996). Fungsi reagen
Seliwanoff adalah sebagai penyedia larutan resorsinol yang akan
berikatan dengan gugus keton dan membentuk warna merah. Sumardjo
(2009) menyatakan bahwa fungsi penambahan reagen seliwanoff yaitu
sebagai pembentuk warna merah apabila bereaksi dengan fruktosa yang
mengandung ketosa. Pemanasan pada uji Seliwanoff berfungsi untuk
15
mempercepat proses dehidrasi fruktosa dan kondensasi
hidroksimetilfurfural supaya warna cepat terbentuk. Atma (2018)
menyatakan bahwa uji Seliwanoff dilakukan dengan mereaksikan bahan
atau poduk pangan yang diduga mengandung karbohidrat dengan
pereaksi Seliwanoff dalam keadaan asam dan panas seperti HCl panas.
Hasil uji Seliwanoff dapat dilihat pada Tabel 1.4.
Tabel 1.4 Hasil Uji Seliwanoff
Tabung Sampel Hasil uji (warna)
Tidak terjadi perubahan warna menjadi
1 Glukosa 0,01 M
merah.
Terjadi perubahan warna menjadi
2 Fruktosa 0,02 M
kuning sedikit kemerah-merahan
Berdasarkan tabel di atas, larutan glukosa 0,01 M tidak berubah
menjadi merah (tetap bening), hal ini dikarenakan di dalam glukosa tidak
terdapat gugus keton melainkan gugus aldehid. Tabung 2, larutan fruktosa
menghasilkan warna kuning sedikit kemerah-merahan, hal ini dikarenakan
di dalam fruktosa terdapat gugus keton yang dengan reaksi Seliwanoff
akan membentuk hidroksimetilfurfural yang ditunjukkan dengan
berubahnya warna larutan yang bening menjadi merah. Poedjiadi et al.
(2006) menyatakan bahwa terbentuknya warna merah disebabkan
fruktosa bereaksi dengan resorsinol (1,3 dihidroksi-benzena) hal ini
menunjukkan bahwa hasil praktikum yang diperoleh telah sesuai dengan
teori.
Pembentukan Osazon
Uji Fenilhidrazina. Praktikum Uji Fenilhidrazina ini bertujuan untuk
identifikasi karbohidrat berdasarkan bentuk fisik. Prinsip kerja dari uji ini
adalah monosakarida dalam keadaan asam dengan pemanasan 100°C
dan penambahan fenilhidrazin berlebih akan bereaksi membentuk fenil-
osazon. Sumardjo (2009) menyatakan bahwa monosakarida atau
disakarida dipanaskan dengan fenihidrazina akan membentuk kristal
berwarna kuning yang sukar larut dalam air yang disebut osazon. Fungsi
reagen fenilhidrazina adalah untuk mengikat osazon pada larutan
sehingga terbentuk fenilosazon. Aziz (2017) menyatakan bahwa fungsi
16
penambahan reagen fenilhidrazin adalah untuk mengikat osazon pada
larutan sehingga terbentuk fenil-osazon. Penambahan Na-asetat padat
berfungsi sebagai karier, yaitu membantu fenilhidrazina mengikat osazon.
Apabila Na-asetat padat tidak ditambahkan maka tidak akan terbentuk
gumpalan setelah pemanasan. Pemanasan dalam percobaan ini bertujuan
untuk melarutkan padatan. Sumardjo (2009) menyatakan bahwa
pemanasan maltosa dengan fenilhidrazin akan membentuk maltosazon
yang berwarna uning dan sukar larut dalam air. Hasil uji Fenilhidrazina
dapat dilihat pada Gambar 1.3, Gambar 1.4, dan Gambar 1.5.
Hasil Praktikum Sumardjo (2008)

Gambar 1.3 Glukosazon

Gambar 1.4 Fruktosazon
17
Gambar 1.5 Arabinosazon
Berdasarkan gambar 1.3, 1.4, dan 1.5, dapat dijelaskan bahwa
glukosa mempunyai bentuk seperti kembang api tetapi pada fruktosa
mempunyai bentuk garis-garis. Hal itu disebabkan glukosa mempunyai
gugus aldehid sedangkan pada fruktosa mempunyai gugus keton.
Arabinosa mempunyai bentuk bulat-bulat dikelilingi garis-garis karena
arabinosa bukan monosakarida tetapi turunan parsial dari selulosa.
Chatterjea dan Shinde (2012) menyatakan bahwa bentuk fisik fruktosa
dan glukosa memilki garis yang bertumpuk tumpuk dalam jumlah banyak,
sedangkan arabinosa memiliki bentuk fisik relatif seperti lumut, hal ini
teori.
Hasil Hidrolisis
Uji Benedict. Praktikum Uji Benedict ini bertujuan untuk
karbohidrat. Prinsip kerja dari uji Benedict adalah pada suasana basa,
reduksi ion Cu2+ dari CuSO4 oleh gula pereduksi akan berlangsung
dengan cepat dan membentuk Cu2O berupa endapan berwarna merah
bata (Nurjannah et al., 2017). Perlakuan pertama dengan pemanasan
dan perlakuan kedua tidak dengan pemanasan. Trisunaryanti (2018)
menyatakan bahwa pemanasan berfungsi mempercepat proses hidrolisis
gugus reduksi pada karbohidrat sehingga gugus reduksi bebas jumlahnya
18
menjadi banyak. Fungsi reagen Benedict adalah sebagai penyedia Cu 2+
untuk direduksi oleh gugus reduksi pada monosakarida. Kusbandari
(2015) menyatakan bahwa penambahan reagen benedict berfungsi untuk
mengetahui adanya gula pereduksi dalam suatu larutan. Fungsi
penambahan HCl adalah untuk memberi suasana asam dan sebagai
katalisator Penambahan Na2CO3 bertujuan untuk menetralkan kembali
larutan. Choirunnisa (2017) menyatakan bahwa penambahan HCl
berfungsi sebagai pemberi suasana asam dan sebagai katalisator untuk
proses hidrolisis.
Uji Benedict dilakukan pada suasana asam yang menyebabkan
transformasi isomerik. Suasana basa menyebabkan terjadinya reduksi ion
Cu2+ dari CuSO4 oleh gula pereduksi akan berlangsung dengan cepat dan
membentuk Cu2O yang merupakan endapan merah bata. Nurjannah et al.
(2017) menyatakan bahwa pereaksi Benedict terdiri atas larutan Cu2+
yang dapat tereduksi dalam suasana basa kuat, hal ini menunjukkan
bahwa hasil praktikum yang diperoleh telah sesuai. Hasil uji Benedict
dapat dilihat pada Tabel 1.5.
Tabel 1.5 Hasil Uji Benedict
Tabung Larutan Hasil Uji (endapan)
1 Maltosa 0,02 M (dididihkan) (+) gugus reduksi sedikit
Maltosa 0,02 M (tidak
2 (++) gugus reduksi banyak
dididihkan)
3 Laktosa 0,02 M (dididihkan) (++) gugus reduksi banyak
Laktosa 0,02 M (tidak
4 (+) gugus reduksi sedikit
dididihkan)
Berdasarkan tabel di atas, larutan maltosa yang dididihkan
menghasilkan endapan merah bata yang terlihat lebih sedikit
dibandingkan dengan larutan maltosa yang tidak dididihkan. Larutan
laktosa yang dididihkan menghasilkan banyak endapan merah bata, hal ini
dikarenakan dengan adanya penambahan HCl encer dan pendidihan
menyebabkan terjadinya proses hidrolisis sempurna sehingga gugus
reduksi bebas jumlahnya banyak. Larutan laktosa tidak dididihkan, akan
menghasilkan sedikit endapan merah bata. Hal ini dikarenakan dengan
19
penambahan HCl encer tanpa pemanasan menyebabkan tetap terjadinya
proses hidrolisis tetapi tidak sempurna sehingga hanya mempunyai sedikit
gugus reduksi bebas. Hames (2005) menyatakan bahwa laktosa adalah
disakarida yang terbentuk antara karbon anomerik (C-1) dari D-galaktosa
dan C-4 dari D-glukosa. Maltosa adalah disakarida yang terbentuk antara
posisi C-1 dan C-4 dari dua unit glukosa. Laktosa dan maltosa, satu dari
atom karbon anomerik telah digunakan untuk membentuk ikatan,
meninggalkan satu karbon anomerik yang bebas, baik laktosa dan
maltosa memiliki gugus mereduksi.
Pereaksi yang positif akan menghasilkan warna merah bata setelah
dilakukan proses pemanasan. Warna merah bata disebabkan karena
terjadinya reduksi pada ion Cu2+ menjadi Cu+. Ifmaily (2018) menyatakan
bahwa endapan merah bata terjadi karena Benedict yang memiliki ion
Cu2+ akan direduksi menjadi ion Cu+ yang dalam suasana basa akan
diendapkan berwarna merah bata (Cu2O). Berdasarkan hasil uji yang
diperoleh, maka hasil uji belum sesuai. Hal ini dikarenakan gugus reduksi
maltosa yang dididihkan lebih sedikit dari pada maltosa yang tidak
dididihkan. Trisunaryanti (2018) menyatakan bahwa pemanasan berfungsi
mempercepat proses hidrolisis gugus reduksi pada karbohidrat sehingga
gugus reduksi bebas jumlahnya menjadi banyak.
Uji Seliwanoff. Praktikum Uji Seliwanoff ini bertujuan untuk
mengetahui adanya gugus keton pada hasil hidrolisis karbohidrat. Prinsip
kerja dari uji ini adalah fruktosa akan diubah menjadi hidroksimetilfurfural
yang selanjutnya bereaksi dengan resorsinol membentuk senyawa
berwarna merah. Sumardjo (2009) menyatakan bahwa penambahan
resorsinol menyebabkan terjadinya kondensasi membentuk kompleks
berwarna merah orange. Hasil produk berwarna ini disebabkan oleh
adanya reaksi antara gula dengan asam-asam kuat. Kusbandari (2015)
menyatakan bahwa HCl pekat digunakan untuk mendehidrasi fruktosa
menghasilkan hidroksimetil furfural dan penambahan resorsinol untuk
membentuk kompleks berwarna oranye karena mengalami kondesasi.
20
Atma (2018) menyatakan bahwa kondisi alkalis akan terjadi reduksi kupri
(Cu2+) menjadi kupro (Cu+) oleh gugus aldehid atau keton bebas dari gula.
Hasil uji Seliwanoff dapat dilihat pada Tabel 1.6.
Tabel 1.6 Hasil Uji Seliwanoff
Tabung Sampel Hasil uji (warna)
1. Sukrosa 0,02 M (++)terjadi banyak degradasi warna
2. Maltosa 0,02 M (-) tidak terjadi degradasi warna
3. Laktosa 0,02 M (-) tidak terjadi degradasi warna
Berdasarkan tabel di atas, pada tabung 1 dihasilkan warna merah
dan terjadi banyak degradasi warna, hal ini dikarenakan sukrosa terdiri
atas glukosa dan fruktosa di mana fruktosa mempunyai gugus keton yang
positif dengan uji Seliwanoff. Tabung 2 dihasilkan warna merah bening,
sedangkan tabung 3 dihasilkan warna kuning bening, tidak terbentuk
warna merah, hal ini dikarenakan maltosa terdiri atas glukosa dan glukosa
di mana glukosa tidak mempunyai gugus keton, dan laktosa terdiri atas
glukosa dan galaktosa yang tidak mengandung gugus keton, melainkan
gugus aldehid. Hasil ini sesuai dengan Poedjiadi et al. (2006) yang
menyatakan bahwa sifat mereduksi pada karbohidrat disebabkan oleh
adanya gugus aldehida atau keton bebas dalam molekul karbohidrat..
Sukrosa apabila dipanaskan akan mengalami proses hidrolisis menjadi
fruktosa dan glukosa dimana fruktosa memiliki gugus keton yang positif
pada uji Seliwanoff dengan ditunjukkan warna merah. Maltosa dan laktosa
tidak memiliki gugus keton meskipun dipanaskan dan mengalami proses
hidrolisis.
Polisakarida
Uji Hasil Hidrolisis Amilum. Praktikum uji hasil hidrolisis amilum
ini bertujuan untuk mengetahui tahapan hidrolisis amilum. Atma (2018)
menyatakan bahwa prinsip kerja dari uji hidrolisis amilum dengan uji Iod
yaitu terjadinya kondensasi iodin dengan karbohidrat sehingga
menghasilkan warna yang khas. Hidrolisis amilum atau pati adalah proses
pemecahan molekul amilum menjadi molekul yang lebih sederhana.
Molekul tersebut misalnya dekstrin, isomaltosa, maltosa, dan glukosa
21
(Rindit et al, 1998). Choirunnisa (2017) menyatakan bahwa penambahan
HCl pekat berfungsi untuk menghidrolisis polisakarida menjadi disakarida
dan monosakarida penyusunnya. Hal ini di karenakan penambahan HCl
dalam larutan berfungsi sebagai pemberi suasana asam dan sebagai
katalisator untuk proses hidrolisis. Anggraeni (2013) menyatakan bahwa
pemanasan berfungsi untuk membantu proses hidrolisis amilum menjadi
bentuk yang lebih sederhana. Penambahan reagen Iod berfungsi sebagai
indikator tahap-tahap hidrolisis amilum yang dilakukan. Hasil uji hasil
hidrolisis amilum dapat dilihat pada Tabel 1.7.
Tabel 1.7 Hasil Uji Hasil Hidrolisis Amilum
Menit ke- Warna Tahap Hidrolisis Amilum
1 Biru tua kehitaman Amilum
2 Biru tua gelap Amilum
3 Biru tua gelap Amilum
4 Ungu Amilodekstrin
6 Ungu tua Amilodekstrin
8 Biru kemerahan Eritrodekstrin
9 Merah Eritrodekstrin
10 Tidak berwarna Akrodekstrin/maltosa/glukosa
Berdasarkan tabel di atas, pada satu menit pertama diuji dengan
iod mempunyai warna biru tua kehitaman. Menit kedua terjadi warna biru
tua gelap sampai pada menit ketiga. Menit keempat warna menjadi
keunguan, pada tahap ini amilum sudah terhidrolisis menjadi amilodextrin.
Menit keempat sampai menit ketujuh warna menjadi ungu, pada tahap ini
amilum menjadi amilodekstrin. Menit ke delapan warna berubah menjadi
biru kemerahan pada tahap ini amilodekstrin terhidrolisis menjadi
eritrodekstrin. Menit ke sepuluh warna kembali seperti warna Iod semula
(yang telah ditambah akuades). Ketika hasil iod negative, larutan
ditambah 5 tetes Na2CO3, kemudian diuji benedict. Hasil yang didapatkan
tidak terdapat endapan di dalam larutan karena larutan tersebut termasuk
larutan hidrolisis akrodekstrin.
Sumardjo (2009) menyatakan bahwa tiga buah dekstrin yang
penting sebagai hasil dari hidrolisis amilum adalah amilodekstrin, yang
22
dengan iodium memberikan warna ungu, eritrodekstrin, yang dengan
iodium memberikan warna merah, dan akrodekstrin, yang dengan iodium
tidak memberikan warna. Larutan yang telah memberikan uji negatif pada
uji Iod kemudian diuji Benedict yang ternyata memberikan hasil positif
dengan adanya endapan merah bata. Uji Benedict akan positif apabila
sampel terbentuk endapan merah bata dan hasilnya negatif apabila hasil
uji tidak menghasilkan endapan. Hasil uji Benedict yang diperoleh yaitu
terdapat endapan merah bata yang menunjukan bahwa di dalam sampel
tersebut terdapat gugus reduksi karbohidrat dan hasil akhir dari uji Iod
tidak berwarna yang menandakan sampel tersebut sampai pada tahap
akrodekstrin atau maltosa atau glukosa, hal ini telah sesuai dengan
literatur.
23
Kesimpulan
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan dapat disimpulkan

bahwa karbohidrat mengandung gugus reduksi dan gugus reduksi bebas.
Karbohidrat mengandung gugus keton berupa fruktosa dan gugus aldehid
berupa glukosa. Glukosa berbentuk seperti kembang api, fruktosa
berbentuk garis-garis, sedangkan arabinosa berbentuk bulat-bulat
dikelilingi garis-garis. Di dalam maltosa, laktosa, dan sukrosa terdapat
gugus reduksi bebas, tetapi maltosa dan laktosa tidak terdapat gugus
keton, sedangkan di dalam sukrosa terdapat gugus keton. Berdasarkan uji
polisakarida diperoleh hasil akhir sampai tahap akrodekstrin atau maltosa
atau glukosa dengan ditandai perubahan warna yang tidak signifikan
(seperti warna Iod ditambah akuades). Hasil akhir praktikum dapat
dipengaruhi oleh beberapa faktor, diantaranya konsentrasi larutan, dan
lama waktu pemanasan.
24
Daftar Pustaka
Al-Kayyis, H. K. dan H. Susanti. 2016. Perbandingan metode somogyi

nelson dan anthronesulfat pada penetapan kadar gula pereduksi
dalam umbi cilembu (Ipomea batatas L.). Jurnal Farmasi Sains dan
Komunikasi. 13(2). 81-89.
Almatsier, S. 2004. Prinsip Dasar Ilmu Gizi. PT Gramedia Pustaka Utama.
Jakarta.
Andarwulan, N. F. Kusnandar. dan D. Herawati. 2011. Analisis pangan.
Dian Rakyat. Jakarta.
Anggraeni, P. Z. Addarojah. dan D. D. Anggoro. 2013. Hidrolisis selulosa
Eceng Gondok (Eichhornia crassipe) menjadi glukosa dengan
katalis arang aktif tersulfonasi. Jurnal Teknologi Kimia dan Industri.
2(3): 65-66.
Atma, Y. 2018. Prinsip Analisis Komponen Pangan Makro dan Mikro
Nutrien. Deepublish. Yogyakarta.
Aziz, I. A. 2017. Isolasi dan Karakteristik Inulin dari Umbi Yakon
(Smallanthus sonchifolius). Skripsi. Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Choirunnisa, U. 2017. Karakteristik Amilum Biji Durian (Durio zibethinus L)
dan Uji Aktivitas Antioksidan secara In-Vitro. Perpustakaan
Universitas Esa Unggul. Jakarta.
Firani, N. K. 2017. Metabolisme Karbohidrat. UB Press. Malang.
Haﬁd, H. S.,N. A. Rahman, U.K. Shah, A. S. Baharuddin, dan A. B. Ariff,
2017. Feasibility of using kitchen waste as future substrate for
bioethanol, production, A review. Renewable and sustainable
energy reviews. 671-686.
Hendaryono, D. P. S., A. Wirjayani. 1994. Teknik kultur jaringan
pengenalan dan petunjuk perbanyakan tanaman secara vegetative-
modern. Penerbit Kanisius. Yogyakarta.
Ifmaily. 2018. Penetapan kadar pati buah sukun (Artocarpus artilis L)
dengan metode Luff Schoolr. Chempublish Journal. 3(1): 2-10.
Kusbandary, A. 2015. Analisis kualitatif kandungan sakarida dalam tepung
dan pati umbi ganyong (Cannya edulis K). Pharmaciana. 5(1): 35-
42.
Kusmardinah, 2017. Pembelajaran kooperatif Index Card Match disertai
laboratorium virtual untuk meningkatkan kualitas proses dan hasil
belajar kimia materi pokok laju reaksi pada siswa kelas XI-MIA SMA
25
Muhammadiyah 3 Surakarta Semester Gasal Tahun Pelajaran
2017/2018. Jurnal Empirisme. 1(1): 170-171.
Lestari, L. A. Utami. dan Lestari. 2014. Kandungan Zat Gizi Makanan
Khas Yogyakarta. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta.
Marewa, L. W. 2015. Kencing Manis (Diabetes Mellitus) di Sulawesi
Selatan. Yayasan Pustaka Obor Indonesia. Jakarta
McDonald, P. R., A. Edward., J. F. D. Greenhalgh., C. A. Morgan., L. A.
Sinclair. dan R. G. Wilkinson. 2010. Animal Nutrition 7 th ed.
Pearson Prentice Hall. England.
Mukti, K. S. A. Rahmawati, dan Sulistiyani. 2018. Analisis kandungan
karbohidrat, Glukosa, dan uji daya terima pada nasi bakar, nasi
panggang, dan nasi biasa. Jurnal Agroteknologi. 12(1): 248-252.
Murray, R. K., D. K. Granner. dan V. W. Rodwell. 2009. Biokimia Herper.
Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Noriko, Nita., dan Pambudi. 2014. Difersifikasi pangan sumber
karbohidrat. Jurnal Al-Azhar Indonesia Seri Sains dan Teknologi.
2(4): 248-252.
Nurjannah, L., Suryani, S. A. Suminar, A. Azmi. 2017. Produksi asam
laktat oleh Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus dengan
sumber karbon tetes tebu. Jurnal Teknologi dn Industri Pertanian
Indonesia. 9(1): 2-9.
Poedjiadi, Anna, dan Supriyanti. 2006. Dasar-Dasar Biokimia. Universitas
Indonesia Press. Jakarta.
Pramitha, S. R. dan Wardhani. 2018. Gizi Dasar Plus 30 Resep Masakan
Lezat Nan Praktis untuk Pemula. Diandra Kreatif. Yogyakarta.
Rindit, P. 1998. Laporan Penelitian : Mempelajari hidrolisis pari gadung
(Diosioreahispida dernst) dengan enzim α-amilase dan gluko
amilase untuk pembuatan sirup glukosa. Universitas Sriwijaya.
Palembang.
Risnoyatiningsih, Sri. 2011. Hidrolisis pati ubi jalar kuning menjadi glukosa
secara enzimatis. Jurnal Teknik Kimia. 5(20): 417-424.
Robert, W. 1996. Biokimia Pendekatan Fungsional. Airlangga University
Press. Surabaya.
Robertfroid. 2007. Prebiotics: The concept revisited. The Jurnal Of
Nutrition. 137:8305-8375.
Sumardjo, D. 2009. Pengantar Kimia Buku Panduan Kuliah Mahasiswa
Kedokteran. EGC. Jakarta.
Sunarya, Y. dan A. Setabudi. 2004. Mudah dan Aktif Belajar Kimia.
Erlangga. Jakarta.
26
Suwarni. 2013. Pengembangan Pangan Tradisional Berbasis Jagun
Mendukung Diversifikasi Pangan. Jurnal IPTEK Tanaman Pangan.
8(1): 39-47.
Trisunaryanti, W. 2018. Material Katalis dan Karakternya. Gadjah Mada
Univeristy Press. Yogyakarta.
Wibawa, A. A. P. P. 2017. Mata Kuliah Biokimia Karbohidrat. Universitas
Udayana. Bali.
Wulandari, E. Idiyanti, T. dan Sinaga, E. 2012. Limbah Moals:
Pemanfaatan sebagai sumber karbohidrat untuk
perkembangbiakan mikroorganisme. Jurnal Kimia Valensi. 2(5):
565-572.
27
Lampiran
Lampiran 1.1. Dokumentasi
Gambar 1. Hasil Uji Gambar 2. Hasil Uji Gambar 3. Hasil Uji

Benedict (daya Benedict (daya Benedict (daya
mereduksi) tabung 1) mereduksi) tabung 2 mereduksi) tabung 3
Gambar 4. Uji Luff (daya Gambar 5. Uji Luff Gambar 6. Uji Luff
reduksi) tabung 1 (daya reduksi) tabung (daya reduksi) tabung
2 3
28
Gambar 7. Uji Luff (daya Gambar 8. Uji Luff Gambar 9. Uji molisch
reduksi) tabung 4 (daya reduksi) tabung tabung 1
5
Gambar 10. Uji Gambar 11. Uji Molisch Gambar 12. Uji Molisch
Molisch tabung 2 tabung 3 tabung 4
29
Gambar 13. Uji Gambar 14. Uji Gambar 15. Uji
Seliwanoff (Pengaruh Seliwanoff (Pengaruh Benedict (Hasil
asam) tabung 1 asam) tabung 2 Hidrolisis) tabung 1a
dan 1b

Benedict (Hasil Seliwanoff (Hasil Seliwanoff (Hasil
Hidrolisis) tabung 2a hidrolisis) tabung 1 dan hidrolisis) tabung 3
dan 2b tabung 2
30
Seliwanoff (Hasil Seliwanoff (Hasil Seliwanoff (Hasil
hidrolisis) tabung 1 hidrolisis) tabung 2 hidrolisis) tabung 3
Gambar 22. Uji hasil hidrolisis

amilum (Polisakarida)
31
Lampiran 1.2. Laporan Inhal
ACARA I
KARBOHIDRAT
INHAL
Disusun oleh :

FAKULTAS PETERNAKAN
YOGYAKARTA
2020
32
ACARA I
KARBOHIDRAT
Tujuan Praktikum
Praktikum ini bertujuan untuk mengetahui adanya gugus reduksi
pada karbohidrat, mengetahui adanya gugus reduksi bebas pada
karbohidrat dan mengetahui pengaruh asam pada karbohidrat. Praktikum
ini juga bertujuan untuk adanya gugus keton pada karbohidrat sehingga
dapat membedakan glukosa dan fruktosa serta untuk mengidentifikasi
karbohidrat berdasarkan bentuk fisik. Tujuan lain dari praktikum ini adalah
karbohidrat, mengetahui adanya gugus keton pada hasil hidrolisis
karbohidrat, dan mengetahui tahapan hidrolisis pada amilum.

Karbohidrat adalah komponen bahan pangan yang tersusun oleh
tiga unsur utama, yaitu karbon (C), hidrogen (H), dan oksigen (O).
Susunan atom-atom tersebut dan ikatannya membedakan karbohidrat
satu dengan yang lainnya, sehingga ada karbohidrat yang masuk
kelompok struktur sederhana seperti monosakarida dan disakarida serta
dengan struktur kompleks atau polisakarida seperti amilum, gliogen, dan
selulosa. Analisis kualitatif karbohidrat umumnya didasarkan atas reaksi-
reaksi warna yang dipengaruhi oleh produk-produk hasil penguraian gula
dalam asam-asam kuat dengan senyawa organik, sifat mereduksi dari
gugus karbonil dan sifat oksidasi dari gugusan hidroksil yang berdekatan.
Reaksi dengan asam-asam kuat seperti asam sulfat, hidroklorat, dan
fosfat pada karbohidrat menghasilkan pembentukan produk terurai yang
berwarna (Andarwulan et al., 2011).
Analisis kuantitatif karbohidrat dalam suatu bahan dapat ditentukan
dengan cara kimiawi, cara fisik, cara enzimatik atau biokimiawi, dan cara
kromatografi. Penentuan karbohidrat yang termasuk polisakarida maupun
33
oligosakarida memerlukan perlakuan pendahuluan, yaitu dihidrolisa
terlebih dahulu sehingga diperoleh monosakarida. Penentuan karbohidrat
dengan cara kromatografi adalah dengan mengisolasi dan
mengidentifikasi karbohidrat dalam suatu campuran. Isolasi karbohidrat ini
berdasarkan prinsip pemisahan suatu campuran berdasarkan perbedaan
distribusi rasionya pada fase diam dan fase gerak (Wulandari et al., 2012).
Karbohidrat dibagi menjadi 3 golongan. Pembagian tersebut
didasarkan atas jumlah satuan dasar penyusunnya atau monomernya.
Tiga golongan karbohidrat, yaitu monosakarida, oligosakarida, dan
polisakarida. Monosakarida adalah karbohidrat yang terdiri dari satu
satuan dasar penyusun atau monomer. Monosakarida adalah jenis
karbohidrat yang paling sederhana dan tidak dapat terhidrolisis menjadi
karbohidrat yang lebih sederhana lagi. Contoh dari monosakarida adalah
glukosa, fruktosa, dan galaktosa. Monosakarida berdasarkan gugus
fungsionalnya dapat berupa aldosa ketika gugus fungsionalnya berada di
ujung membentuk gugs aldehid dan ketosa ketika guus fungsionalnya
membentuk gugus keton. Jenis monosakarida yang tergolong aldosa
adalah glukosa dan galaktosa, sedangkan yang tergolong ketosa adalah
fruktosa. Struktur monosakarida dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar 1. Struktur monosakarida

(Andriyani et al., 2015)
Oligosakarida adalah karbohidrat yang terdiri dari 2 sampai 10
satuan dasar penyusun atau monomer, contohnya disakarida dan
trisakarida. Disakarida tersusun dari dua satuan molekul monosakarida
34
yang digabungkan oleh ikatan glikosidik. Contoh disakarida yang banyak
tersedia di alam adalah sukrosa, laktosa, dan maltosa. Polisakarida
adalah karbohidrat yang memiliki lebih dari 10 satuan dasar penyusun
atau monomer, contohnya adalah amilum, selulosa, dan glikogen (Firani,
2017).
Karbohidrat mempunyai beberapa sifat diantaranya sifat mereduksi,
pengaruh asam (dehidrasi), pengaruh basa, dan pembentukan osazon.
Sifat mereduksi dari karbohidrat disebabkan adanya gugus aldehid atau
keton bebas dalam molekul karbohidrat. Sifat ini tampak pada pereduksi
ion-ion logam misalnya ion Cu2+ dan Ag2+ yang terdapat pada pereaksi
tertentu (Poedjiadi dan Supriyanti, 2006). Pengaruh asam karbohidrat
terjadi ketika karbohidrat dipanaskan dengan asam kuat pekat akan
mengalami dehidrasi dan menghasilkan furfural atau turunannya. Untuk
mengetahui pengaruh asam pada karbohidrat maka dapat dilakukan uji
Molisch dan uji Seliwanoff. Pembentukan osazon juga berpengaruh
terhadap karbohidrat. Semua karbohidrat akan membentuk osazon
apabila dalam keadaan asam dan melalui proses pemanasan 100 oC dan
ditambahkan fenilosazon berlebih. Osazon adalah suatu kristal berwarna
kuning yang sukar larut alam air dan terbentuk apabila memanaskan
monosakarida atau disakarida dan ditambahkan fenilhirdazin (Sumardjo
2009).
Fungsi karbohidrat yaitu sebagai sumber energi bagi sel-sel dan
jaringan penyusun tubuh, sebagai penyedia glukosa bagi sel-sel tubuh,
pembentuk protein dan lemak, dan pembentuk glukosa otot sebagai
cadangan energi (Djakani et al., 2013). Karbohidrat merupakan unsur
utama pada makanan hewani dan jaringan pada hewan, yang digolongkan
menggunakan tipe dan nomor dari monosakarida pada molekul (Murray et
al., 2003). Karbohidrat ini dapat mencegah pemecahan protein dalam
tubuh secara berlebihan. Hal ini karena 60% asam amino dalam tubuh
dapat diubah menjadi karbohidrat karena protein dibutuhkan untuk
pertumbuhan maka karbohidrat dalam tubuh tidak boleh kurang karena
35
nantinya jika mengalami kekurangan tidak akan terjadi reaksi perubahan
protein menjadi karbohidrat yang digunakan untuk energi (Devi, 2010).
Sumber utama karbohidrat adalah tumbuhan hijau (Noriko dan
Pambudi, 2014). Karbohidrat berasal dari tumbuhan berpigmen yang
terbentuk melalui proses fotosintesis dari bahan-bahan anorganik (CO2
dan H2O) dengan bantuan cahaya matahari dan pigmen fotosintesis (Ai,
2012). Karbohidrat yang ada dalam makanan yang dikonsumsi manusia
biasanya berupa amilum atau pati, suatu polisakarida yang dibuat oleh
tumbuhan dengan cara fotosintesis. Manusia maupun hewan juga
menyimpan cadangan karbohidrat yang disimpan di hati dan otot dalam
bentuk glikogen (Firani, 2017). Karbohidrat nantinya akan diuraikan
menjadi gula-gula sederhana yang masuk ke dalam aliran darah untuk
memberikan energi bagi sel-sel tubuh (Marshall, 2004).
Peranan utama karbohidrat di dalam tubuh adalah sebagai sumber
energi paling penting (Mukti et al., 2018). Karbohidrat merupakan sumber
daya utama bagi manusia selain protein dan lemak. Karbohidrat juga
memiliki peranan penting dalam menentukan karakteristik bahan misal
warna, rasa, tekstur, dan lain-lain. Karbohidrat yang berada di dalam
tubuh berguna untuk mencegah timbulnya pemecahan protein tubuh yang
berlebihan, kehilangan mineral, dan berguna untuk membantu tubuh
dalam proses metabolisme lemak dan protein (Risnoyatiningsih, 2011).
Kadar glukosa dalam tubuh dapat dipengaruhi oleh beberapa
faktor, yaitu asupan gizi makanan, kurang waktu tidur, kurang olahraga,
dosis dalam minum obat, dan kepatuhan diet. Karbohidrat merupakan
komponen utama dalam makanan yang mempengaruhi kadar glukosa
dalam darah dan kebutuhan insulin. Makanan yang termasuk dalam jenis
karbohidrat sederhana akan lebih cepat meningkatkan kadar glukosa
darah dibandingkan karbohidrat kompleks yang umumnya tinggi
kandungan seratnya. Glukosa yang diabsorbsi dari asupan makanan
memiliki kontribusi terbsesar dalam menaikkan kadar glukosa darah.
Perasan asupan protein pada umumnya mengendalikan kadar glukosa
36
darah hanya dilihat dari kontribusi asam amino yang menghasilkan
glukosa melalui proses glukoneogenesis (Astuti dan Asih, 2013)
Prinsip kerja uji Benedict adalah Cu2+ yang terdapat dalam reagen
Benedict dapat direduksi oleh gugs reduksi pada monosakarida Cu+ yang
terlihat dengan terbentuknya endapan merah bata (Cu 2O) (Kusbandari,
2015). Prinsip kerja uji Luff adalah Cu2+ yang terdapat dalam reagen Luff
dapat direduksi oleh gugus reduksi bebas pada monosakarida menjadi
Cu+ yang terlihat dengan terbentuknya endapan merah bata (Cu2O)
(Rahmawati, 2017).
Prinsip kerja uji Molisch adalah monosakarida apabila dipanaskan
dengan asam kuat akan mengalami dehidrasi menghasilkan furfural yang
kemudian bereaksi dengan alfa-naftol atau timol dalam alkohol sehingga
membentuk senyawa yang berwarna (Sumardjo, 2006). Prinsip kerja uji
Seliwanoff adalah pada reaksi Seliwanoff, fruktosa akan diubah menjadi
hidroksimetilfurfural yang selanjutnya beraksi dengan resorsinol
membentuk senyawa berwarna merah (Kusbandari, 2015).
Prinsip kerja uji Fenilhidrazin adlah monosakarida dalam keadaan
asam dengan pemanasan 100oC dan penambahan fenilhidrazin berlebih
akan bereaksi membentuk fenil-osazon atau kristal (Babu et al. 2015).
Prinsip kerja uji hasil hidrolisis amilum adalah amilum diuji tiap satu menit
dengan menggunakan uji Yod sehingga akan menunjukkan warna yang
berbeda-beda (Firdausi dan Zulaika, 2015).
37
Materi dan Metode
Materi
Alat. Alat yang digunakan dalam praktikum acara karbohidrat
antara lain tabung reaksi, rak tabung reaksi, pipet tetes, pipet ukur, pipet
pump, gelas ukur, kertas saring, mikroskop, deck glass, object glass,
pengaduk gelas, penjepit tabung, bunsen, drop plate, penangas air, dan
corong.
Bahan. Bahan yang digunakan dalam praktikum acara karbohidrat
antara lain larutan Glukosa 0,01 M, larutan Glukosa 0,02 M, larutan
Glukosa 0,04 M, larutan Fruktosa 0,02 M, larutan Sukrosa 0,02 M, larutan
Laktosa 0,02 M, larutan Arabinosa 0,03 M, larutan Maltosa 0,02, larutan
Amilum 1%, reagen Benedict, reagen Luff encer, reagen Molisch 5%,
reagen Seliwanoff, larutan timol biru, H2SO4 pekat, Na2CO3 2%, 5N HCl
pekat, HCl 10%, HCl 3 M, Asam asetat glasial, Fenilhidrazina padat, Na
asetat padat, dan Yod.
Metode
Daya Mereduksi
Uji Benedict. Sebanyak tiga tabung reaksi disiapkan dan diisi
Glukosa dengan konsentrasi masing-masing 0,01 M ; 0,02 M ; dan 0,04
M. Ketiga tabung reaksi tersebut ditambahkan 3 ml larutan Benedict dan
dipanaskan dengan bunsen selama 10 menit. Perubahan yang terjadi
diamati dan dibandingkan kecepatan perubahan hingga terbentuk
endapan merah bata.
Uji Luff. Sebanyak lima tabung reaksi disiapkan dan diisi masing-
masing dengan larutan fruktosa 0,02 M sebanyak 2 ml, larutan glukosa
0,02 M sebanyak 2 ml, larutan laktosa 0,02 M sebanyak 2 ml, larutan
sukrosa 0,02 M sebanyak 2 ml, dan larutan amilum 1% sebanyak 2 ml.
Masing-masing tabung kemudian ditambahkan 1 ml reagen Luff dan
dipanaskan di penangas air selama 15 menit. Perubahan yang terjadi
38
diamati dan dibandingkan kecepatan perubahan hingga terbentuk
endapan merah bata.
Uji Molisch. Sebanyak empat tabung reaksi disiapkan dan diisi
masing-masing 1 ml larutan glukosa 0,02 M, 1 ml larutan selulosa 0,02 M,
1 ml larutan amilum 1%, dan 1 ml larutan furfural 0,01 M. Masing-masing
tabung selanjutnya ditambahkan reagen Molisch 5% sebanyak 2 tetes dan
3 ml H2SO4 pekat melalui dinding tabung secara hati-hati jangan sampai
tergojok. Perubahan warna yang terjadi pada perbatasan kedua lapisan
larutan tersebut diamati.
Uji Seliwanoff. Sebanyak dua tabung reaksi disiapkan dan diisi
masing-masing 2 ml larutan glukosa 0,01 M dan 2 ml larutan fruktosa 0,02
M. Masing-masing tabung kemudian ditambahkan 2 ml HCl(aq) pekat dan
dididihkan di penangas air selama 30 menit. Masing-masing tabung
ditambahkan reagen Seliwanoff sebanyak 0,5 ml ketika pendidihan.
Perubahan warna yang terjadi diamati.
Pembentukan Osazon
Uji Fenilhidrazin. Sebanyak tiga tabung reaksi disiapkan dan diisi
masing-masing dengan 5 ml larutan glukosa 0,01 M, 5 ml larutan fruktosa
0,02 M, dan 5 ml larutan arabinosa 0,03 M. Masing-masing tabung
ditambahkan 10 tetes asam asetat glasial, satu sendok fenilhidrazin padat,
dan satu sendok Na asetat padat (jumlah Na asetat padat lebih banyak 2
kali dari fenilhidrazin padat). Masing-masing larutan kemudian
dicampurkan hingga larut dan dipanaskan di penangas air selama 30
menit. Masing-masing larutan diambil satu tetes lalu diteteskan pada
object glass dan ditutup menggunakan deck glass untuk diamati secara
mikroskopis. Kristal-kristal yang terlihat melalui mikroskop diamati, difoto,
dan digambar.
Hasil Hidrolisis
Uji Benedict. Sebanyak enam tabung disiapkan dan pada dua
tabung pertama diisi masing-masing dengan larutan maltosa 0,02 M dan
39
laktosa 0,02 M. Tabung pertama yang berisi 5 ml larutan maltosa
ditambahkan 1 tetes thimol blue serta 2 tetes HCl 10% sampai warna biru
berubah menjadi merah muda. Larutan dibagi menjadi dua bagian dan
dimasukkan ke tabung reaksi lainnya. Tabung pertama dididihkan dengan
penangas air selama 30 menit dan segera didinginkan. Kedua tabung
selanjutnya ditambahkan 5 tetes larutan Na2CO3 2% dan kedua tabung
tersebut di uji Benedict lalu diamati perubahan warna yang terjadi.
Percobaan dengan larutan laktosa 0,02 M dilakukan dengan cara yang
sama pada percobaan menggunakan larutan maltosa 0,02 M.
Uji Seliwanoff. Sebanyak 6 tabung reaksi disiapkan dan tiga
tabung pertama diisi masing-masing dengan larutan sukrosa 0,02 M,
maltosa 0,02 M, dan laktosa 0,02 M. Tabung pertama yang berisi 2 ml
larutan sukrosa 0,02 M ditambahkan 2 ml larutan HCl pekat kemudian
dididihkan menggunakan penangas air selama 30 menit dan segera
didinginkan kemudian ditambahkan 0,5 ml reagen Seliwanoff 0,5%.
Perubahan warna yang terjadi pada larutan diamati. Percobaan dengan
larutan maltosa 0,02 M dan laktosa 0,02 M diulangi dengan langkah yang
sama pada percobaan menggunakan larutan sukrosa 0,02 M.
Polisakarida
Uji Hasil Hidrolisis Amilum. Disiapkan satu tabung reaksi dan diisi
larutan amilum 1% sebanyak 10 ml dan 3 ml larutan HCl 3 M. Tabung
reaksi tersebut ditempatkan dididihkan menggunakan penangan air
kemudian larutan diuji yod setiap satu menit. Pengambilan dihentikan jika
uji yod sudah negatif atau warnanya mendekati kontrol, yaitu hasil warna
sama dengan aquades yang ditetesi yod. Waktu dan perubahan warna tetes
di catat. Larutan campuran tersebut kemudian ditambahkan 5 tetes Na2CO3 dan
dilakukan uji Benedict dengan perbandingan 1 ml : 1 ml. Hasil yang terjadi
diamati.
40
Daya Mereduksi
Uji Benedict. Tujuan dari uji Benedict adalah untuk mengetahui
adanya gugus reduksi pada karbohidrat. Prinsip kerja dari uji Benedict
yaitu ion Cu2+ yang berasal dari reagen Benedict yang mengandung
kuprisulfat tereduksi oleh gugus reduksi aldehid atau keton dalam larutan
glukosa menjadi ion Cu+. Kusbandari (2015) menjelaskan bahwa prinsip
kerja uji Benedict adalah Cu2+ yang terdapat dalam reagen Benedict dapat
direduksi oleh gugus reduksi pada monosakarida menjadi Cu+ yang
terlihat dengan terbentuknya endapan merah bata (Cu2O). Endapan
merah bata ini terbentuk karena pada larutan memiliki konsentrasi gula
reduksi yang tinggi sehingga ketika larutan dididihkan akan mengalami
reduksi dan membentuk endapan merah bata.
Perlakuan yang dilakukan pada uji Benedict adalah dengan
pendidihan larutan dan pemberian reagen Benedict. Perlakuan pendidihan
yang diberikan pada setiap tabung berguna untuk mempercepat reaksi
berupa hidrolisis larutan. Menurut Trisunaryanti (2018) bahwa fungsi
pendidihan larutan adalah untuk mempercepat reaksi yang terjadi karena
meningkatnya energi kinetik dari molekul zat terlarut. Reagen Benedict
yang ditambahkan pada setiap tabung berguna sebagai penyedia ion Cu 2+
yang akan bereaksi dengan gugus reduksi pada glukosa. Menurut
Sutresna (2007) bahwa reagen Benedict berfungsi untuk mengetahui
adanya gugus reduksi dari glukosa yang akan mereduksi ion Cu. Hasil uji
Benedict dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil uji Benedict
Tabung Sampel Hasil Uji (Endapan)
1 Glukosa 0,01 M + (sedikit)
2 Glukosa 0,02 M ++ (sedang)
3 Glukosa 0,04 M +++ (banyak)
Berdasarkan tabel diatas, tabung 1 yang berisi glukosa 0,01 M
kemudian dipanaskan menghasilkan endapan merah bata yang sedikit.
41
Tabung 2 yang berisi glukosa 0,02 M kemudian dipanaskan menghasilkan
endapan merah bata yang lebih banyak dibanding tabung 1. Tabung 3
yang berisi glukosa 0,03 M kemudian dipanaskan menghasilkan endapan
merah bata yang paling banyak dibandingkan dengan tabung 1 dan 2.
Hasil uji yang didapatkan, membuktikan bahwa glukosa memiliki gula
reduksi yang berkemampuan untuk mereduksi ion Cu2+ yang mengendap
menjadi Cu2O dengan endapan yang diperoleh berwarna merah bata.
Kusbandari (2015) menyebutkan bahwa banyak sedikitnya endapan
merah bata dipengaruhi oleh konsentrasi glukosa.
Percobaan ini menjelaskan bahwa dengan perbedaan konsentrasi
suatu larutan akan berpengaruh terhadap hasil endapan yang timbul.
Semakin besar konsentrasi glukosa yang ditambahkan maka semakin
banyak endapan merah bata yang diperoleh. Terdapatnya endapan merah
bata karena Cu2+ yang ada pada reagen Benedict direduksi oleh gugus
reduksi yang ada pada glukosa. Hal ini menunjukkan bahwa percobaan
yang telah dilakukan sesuai dengan pernyataan Kusbandari (2015), yaitu
semakin besar konsentrasi suatu larutan gula reduksi maka endapan yang
dihasilkan semakin banyak.
Uji Luff. Tujuan dari uji Luff adalah untuk mengetahui adanya
gugus reduksi bebas pada karbohidrat. Prinsip kerja uji Luff adalah ion
Cu2+ yang terdapat dalam reagen Luff dapat direduksi oleh gugus reduksi
pada monosakarida menjadi Cu+ yang terlihat dengan terbentuknya
endapan merah bata (Cu2O). Rahmawati (2017) menjelaskan bahwa
prinsip kerja uji Luff adalah Cu2+ yang terdapat dalam reagen Luff dapat
direduksi oleh gugus reduksi bebas pada monosakarida menjadi Cu + yang
terlihat dengan terbentuknya endapan merah bata (Cu2O). Endapan
merah bata terbentuk karena larutan dipanaskan terlebih dahulu.
Perlakuan yang diberikan pada uji Luff adalah dengan pemanasan
larutan dan pemberian reagen Luff pada masing-masing tabung uji.
Pemanasan larutan yang dilakukan pada masing-masing tabung berguna
untuk mempercepat terjadinya hidrolisis. Menurut Trisunaryanti (2018)
42
bahwa fungsi dari pemanasan larutan yaitu untuk mempercepat reaksi
Cu2+ dengan gugus reduksi monosakarida sehingga perubahan warna
cepat terbentuk. Penambahan reagen Luff pada masing-masing tabung
berfungsi sebagai larutan yang direduksi oleh gugus pereduksi bebeas
dari monosakarida karena mengangung ion Cu2+ dan akan menghasilkan
endapan merah bata (Cu2O). Ifmaily (2018) mengatakan bahwa reagen
Luff berfungsi untuk menetapkan kadar gula pereduksi. Masing-masing
tabung diisi larutan yang berbeda ini untuk mengetahui larutan yang
mempunyai gugus reduksi bebas. Berdasarkan uji yang telah dilakukan,
didapatkan hasil uji Luff seperti yang disajikan pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Uji Luff
1 Fruktosa 0,02 M + (endapan sedikit)
2 Glukosa 0,02 M +++ (endapan banyak)
3 Laktosa 0,02 M +++ (endapan banyak)
4 Sukrosa 0,02 M +++ (endapan banyak)
5 Amilum 1% - (tidak ada endapan)
Berdasarkan tabel hasil uji Luff, dapat dilihat bahwa tabung 1
menghasilkan sedikit endapan, sedangkan pada tabung 2, 3, dan 4
menghasilkan banyak endapan serta pada tabung 5 tidak menghasilkan
endapan sama sekali. Tabung 1 yang berisi fruktosa dan reagen Luff
menghasilkan endapan merah bata yang sedikit. Hal ini terjadi karena
fruktosa memiliki gugus keton (ketosa) yang mempunyai gugus reduksi
bebas dan dapat mereduksi Cu2+ menjadi Cu+ membentuk Cu2O. Menurut
Rahayu (2009) bahwa fruktosa mempunyai gugus keton (ketosa) yang
mempunyai gugus reduksi bebas yang dapat mereduksi Cu 2+ menjadi Cu+
dan akan mengendap membentuk Cu2O. Tabung 2 yang berisi glukosa
dan reagen Luff menghasilkan endapan merah bata yang banyak karena
glukosa mengandung gugus aldehid (aldosa) yang juga mempunyai gugus
reduksi bebeas yang dapat mereduksi Cu2+ menjadi Cu+ dan membentuk
Cu2O. Rahayu (2009) mengatakan bahwa glukosa mempunyai gugus
aldehid yang mempunyai gugus reduksi bebas, di mana Cu 2+ direduksi
menjadi Cu+ dan membentuk endapan Cu2O yang berwarna merah bata.
43
Tabung 3 yang berisi laktosa dan reagen Luff menghasilkan banyak
endapan merah bata. Rahayu (2009) menyebutkan bahwa laktosa
merupakan gabungan dari monosakarida galaktosa dan glukosa dengan
ikatan 1-4-α-glikosidik dan galaktosa serta glukosa mempunyai gugus
aldehid. Laktosa masih memiliki gugus reduksi bebas dari aldehid
sehingga dapat mereduksi Cu2+ menjadi Cu+ yang kemudian membentuk
endapan Cu2O berwarna merah bata. Tabung 4 yang berisi sukrosa dan
reagen Luff menghasilkan banyak endapan merah bata. Berdasarkan
pernyataan Poedjiadi dan Supriyanti (2006) bahwa molekul sukrosa
terdapat ikatan antara glukosa dan fruktosa antara karbon atom nomor 1
pada glukosa dengan atom karbon nomor 2 pada fruktosa melalui
oksigen. Kedua atom karbon tersebut adalah atom karbon yang
mempunyai gugus aldehid pada glukosa dan gugus keton pada fruktosa,
oleh karena itu sukrosa tidak mempunyai gugus aldehid maupun keton
bebas. Menurut Afriza dan Ismanilda (2019) bahwa sukrosa bukan
merupakan gula pereduksi sehingga seharusnya tidak terbentuk endapan
merah bata. Tabung 5 yang berisi amilum tidak terdapat endapan merah
bata karena amilum merupakan polisakarida yang harus direduksi terlebih
dahulu menjadi disakarida dan monosakarida terlebih dahulu.
Berdasarkan pernyataan Afriza dan Ismanilda (2019) bahwa amilum juga
bukan merupakan gula pereduksi sehingga tidak dapat membentuk
endapan merah bata. Menurut Marzuki et al. (2010) bahwa polisakarida
wujudnya berupa senyawa berwarna putih, tidak berbentuk kristal, tidak
mempunyai rasa manis dan tidak mempunyai sifat mereduksi.
Percobaan ini sedikit tidak sesuai dengan Astuti dan Rustanti
(2014) yang menyatakan bahwa reagen Luff akan direduksi oleh gula
pereduksi bahan yang dianalisis. Gula pereduksi berkemampuan untuk
mereduksi karena memiliki gugus aldehid dan keton bebas. Contoh yang
termasuk gula pereduksi adalah glukosa, fruktosa, maltosa, dan laktosa.
Berdasarkan pernyataan yang dikemukakan oleh Budiman (2011) sukrosa
dan amilum bukan merupakan gula pereduksi karena sukrosa ketika
44
berada di dalam air tidak berada dalam kondisi setimbang dengan bentuk
aldehid maupun keton sehingga sukrosa tidak dapat dioksidasi dan bukan
merupakan gula pereduksi. Menurut Diyah et al. (2016) bahwa dalam uji
Luff dipengaruhi oleh beberapa faktor antara lain jenis komponen
monosakarida yang terkandung dan jenis karbohidrat.
Uji Molisch. Tujuan dari uji Molisch adalah untuk mengetahui
pengaruh asam pada karbohidrat. Prinsip kerja uji Molisch yaitu apabila
monosakarida dipanaskan dengan asam kuat maka akan mengalami
dehidrasi yang menghasilkan furfural yang kemudian beraksi dengan alfa-
naftol atau timol dalam alkohol sehingga dapat membentuk senyawa yang
berwarna. Sumardjo (2006) mengatakan bahwa dalam uji Molisch
prinsipnya adalah monosakarida apabila dipanaskan dengan asam kuat
akan mengalami dehidrasi menghasilkan furfural yang kemudian bereaksi
dengan alfa-naftol atau timol dalam alkohol sehingga membentuk
senyawa yang berwarna.
Perlakuan yang dilakukan pada uji Molisch berupa penambahan
reagen Molisch dan H2SO4 pekat melalui dinding tabung secara perlahan.
Penambahan reagen Molisch tersebut untuk pembentukan senyawa
kompleks dan sebagai indikator warna. Penambahan H2SO4 pekat yang
ditambahkan bertujuan untuk menghasilkan furfural. Penambahan H 2SO4
yang dilakukan secara perlahan melalui dinding tabung bertujuan pada
permukaan lapisan atas larutan dapat terbentuk cincin berwarna ungu
yang sempurna. Menurut Abdillah et al. (2017) bahwa fungsi reagen
Molisch untuk pembentukan senyawa kompleks karbohidrat karena
pereaksi α-naftol atau timol dalam alkohol bereaksi dengan furfural pada
karbohidrat yang telah terdehidrasi oleh asam sulfat sehingga hasil reaksi
akan berwarna ungu dan fungsi penambahan asam sulfat pekat
digunakan untuk mendehidrasi karbohidrat. Menurut Sumardjo (2006)
bahwa fungsi alfa-naftol adalah sebagai pembentuk cincin yang berwarna
ungu. Hasil percobaan didapatkan bahwa semua larutan yang diuji
45
Molisch menghasilkan cincin berwarna ungu yang berbeda-beda
ketebalannya. Berdasarkan uji Molisch yang telah dilakukan, didapatkan
hasil pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil Uji Molisch
Tabung Sampel Hasil Uji (Cincin)
1 Glukosa 0,02 M +++ (banyak)
2 Selulosa 0,02 M ++ (sedikit)
3 Amilum 1% ++ (sedikit)
4 Furfural 0,01 M ++++ (paling banyak)
Berdasarkan tabel di atas, semua tabung menghasilkan cincin
warna ungu. Cincin warna ungu paling tebal terdapat pada tabung yang
berisi furfural 0,01 M. Tabung yang berisi selulosa 0,02 M dan amilum 1%
terbentuk cincin warna ungu yang paling tipis dibandingan dengan sampel
yang lainnya. Tabung yang berisi sampel glukosa 0,02 M juga terbentuk
cincin warna ungu yang lebih tebal dari sampel selulosa 0,02 M dan
amilim 1%.
Tabung 1 yang berisi larutan glukosa 0,02 M menghasilkan cincin
warna ungu lebih sedikit daripada tabung 4 yang berisi furfural 0,01 M. Hal
ini dikarenakan larutan glukosa merupakan monosakarida yang ketika
terdehidrasi akan membentuk furfural. Tabung 2 yang berisi selulosa 0,02
M dan tabung 3 yang berisi amilum 1% menghasilkan lebih sedikit cincin
warna ungu daripada tabung 1 yang berisi glukosa 0,02 M. Hal ini terjadi
karena selulosa dan amilum merupakan polisakarida yang ketika
terdehidrasi akan menjadi mosokarida terlebih dahulu baru menjadi
furfural.
Tabung 4 yang berisi furfural 0,01 M menghasilkan cincin warna
ungu yang paling banyak daripada tabung 1, 2, dan 3, hal ini karena
furfural merupakan bentuk karbohidrat yang paling sederhana dimana
furfural merupakan turunan dari gugus aldehid. Furfural yang kemudian
langsung bereaksi dengan alfa-naftol atau timol dalam alkohol akan
membentuk senyawa yang berwarna berupa cincin warna ungu yang
banyak, sedangkan larutan yang lainya harus dipecah terlebih dahulu agar
bisa menjadi bentuk paling sederhana berupa furfural.
46
Larutan karbohidrat yang telah dicampur dengan reagen Molisch
dan kemudian ditambah H2SO4 pekat akan menghasilkan warna ungu
yang menunjukkan adanya karbohidrat. Berdasarkan pernyataan yang
dikemukakan oleh Sumardjo (2008) bahwa untuk mencapai bentuk furfural
pada polisakarida terdapat tiga tahapan, yaitu polisakarida mengalami
hidrolisis, kemudian diikuti proses dehidrasi dan kondensasi). Reaksi yang
terjadi pada uji Molisch dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Reaksi uji Molisch

(Rohman dan Sumantri, 2018).
Banyaknya cincin ungu yang terbentuk tergantung pada jenis
sakarida yang terkandung. Contohnya glukosa, selulosa, dan amilum yang
harus mengalami dehidrasi terlebih dahulu sebelum menghasilkan furfural
yang merupakan bentuk paling sederhana. Glukosa, selulosa, dan amilum
harus diubah terlebih dahulu sesuai tahapan untuk mencapai furfural.
Berdasarkan hasil praktikum yang ada faktor yang mempengaruhi uji
Molisch adalah jenis larutan dan hasil hidrolisis larutan berupa furfural
maka hasil percobaan uji Molisch sesuai dengan literatur yang ada.
Uji Seliwanoff. Tujuan dari uji Seliwanoff adalah untuk mengetahui
adanya gugus keton pada karbohidrat (fruktosa) sehingga dapat
digunakan untuk membedakan glukosa dan fruktosa. Prinsip kerja dari uji
Seliwanoff yaitu fruktosa akan diubah menjadi hidroksimetilfurfural yang
selanjutnya akan beraksi dengan resorsinol yang membentuk senyawa
berwarna merah. Kusbandari (2015) mengatakan bahwa prinsip kerja uji
47
Seliwanoff adalah reaksi Seliwanoff (resorsinol dalam alkohol) akan
mengubah fruktosa menjadi hidroksi-metil-furfural yang selanjutnya akan
beraksi dengan resorsinol yang membentuk senyawa berwarna merah.
Perlakuan yang diberikan dalam uji Seliwanoff berupa pemanasan
larutan dan penambahan reagen Seliwanoff berupa larutan resorsinol
dalam alkohol. Pemanasan larutan dilakukan selama 30 menit agar
proses dehidrasi dapat berjalan optimal. Penambahan reagan Seliwanoff
pada setiap tabung berguna sebagai indikator pembentuk senyawa
berwarna antara hidroksi-metil-furfural dengan reagen yang berwarna.
Menurut Nurjannah et al. (2015) bahwa reagen Seliwanoff berfungsi untuk
membentuk warna merah jika bereaksi dengan fruktosa yang
mengandung ketosa. Trisunaryanti (2018) menyatakan bahwa fungsi dari
pemanasan yang dilakukan saat uji Seliwanoff adalah untuk mempercepat
reaksi hidrolisis pada karbohidrat. Berdasarkan uji Seliwanoff yang telah
dilakukan, didapatkan hasil uji yang disajikan pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil uji Selliwanof
Tabung Sampel Hasil Uji (Warna)
1 Glukosa 0,01 M Agak kemerahan
2 Fruktosa 0,02 M Merah coklat gelap
Berdasarkan tabel hasil uji Seliwanoff diatas, tabung 1 yang berisi
larutan glukosa 0,01 M tidak berubah menjadi merah (tetap tidak
berwarna), hal ini dikarenakan di dalam glukosa tidak terdapat gugus
keton melainkan gugus aldehid. Tabung 2 yang berisi larutan fruktosa
0,02 M berubah menjadi warna merah, hal ini dikarenakan di dalam
fruktosa terdapat gugus keton yang apabila dilakukan uji Seliwanoff akan
positif hasil ujinya, yaitu berubah warna menjadi merah. Berdasarkan
pernyataan Kusbandari (2015) bahwa ketika dipanaskan ketosa akan
lebih cepat terdehidrasi daripada aldosa sehingga sukrosa menghasilkan
uji positif karena sukrosa adalah disakarida yang terdiri dari fruktosa dan
glukosa.
Percobaan yang dilakukan sesuai dengan pernyataan Poedjiadi
dan Supriyanti (2006) yang menyatakan bahwa terbentuknya warna
48
merah pada fruktosa disebabkan karena gugs keton yang ada pada
fruktosa bereaksi dengan resorsinol (1,3 dihidroksi-benzena). Hal ini juga
sesuai dengan pernyataan Nurjannah et al. (2015) bahwa reaksi yang
positif akan terbentuk warna merah. HCl pekat akan mengubah heksosa
menjadi hidroksimetilfurfural yang kemudian akan bereaksi dengan
resorsinol yang membentuk senyawa berwarna merah.
Pembentukan Osazon
Uji Fenilhidrazin. Tujuan dari uji Fenilhidrazin adalah untuk
mengidentifikasi karbohidrat berdasarkan bentuk fisik. Prinsip kerja uji
Fenilhidrazin yaitu monosakarida yang dalam suasana asam dengan
pemanasan 100oC dan ditambahkan fenilhidraazin berlebih akan
membentuk fenil-osazon. Babu et al. (2015) menyebutkan bahwa prinsip
kerja uji Fenilhidrazin adalah monosakarida dalam keadaan asam dengan
pemanasan 100oC dan penambahan fenilhidrazin berlebih akan bereaksi
membentuk fenil-osazon.
Perlakuan yang dilakukan pada uji Fenilhidrazin adalah pemanasan
selama 30 menit dan penambahan asam asetat glasial, Na-asetat padat,
dan fenilhidrazin padat. Penambahan asam asetat glasial berfungsi untuk
mendehidrasi sampel. Fenilhidrazin padat ditambahkan pada setiap
tabung agar terbentuk osazon dari monosakarida atau disakarida
pereduksi. Na-asetat ditambahkan secara berlebih berguna agar terbentuk
endapan sehingga sampel mudah diamati. Menurut peryataan Aziz (2017)
bahwa fungsi dari reagen fenilhidrazin adalah untuk mengikat osazon
pada larutan sehingga terbentuk fenil-osazon. Atma (2018) menyebutkan
bahwa penambahan Na-asetat padat berfungsi untuk membantu
fenilhidrazin untuk mengikat osazon dan menghasilkan kristal-kristal
setelah pemanasan. Menurut Wijayanti et al. (2012) bahwa fungsi asam
asetat glasial untuk mengatur keasaman agar sesuai dengan kondisi yang
diinginkan. Pemanasan dalam percobaan ini bertujuan untuk melarutkan
padatan. Hasil uji Fenilhidrazin dapat dilihat pada Gambar 3, Gambar 4,
dan Gambar 5.
49
Hasil Praktikum Babu et al. (2015)
Gambar 3. Glukosazon

Gambar 4. Fruktosazon

Gambar 5. Arabinosazon
50
Berdasarkan hasil uji yang diamati melalui mikroskop, dapat dilihat
bahwa bentuk fisik dari glukosa dan fruktosa hampir sama. Bentuk
mikroskopis dari glukosa dan fruktosa seperti garis atau kembang api
yang saling bertumpukan dalam jumlah banyak. Menurut pernyataan dari
Chatterjea dan Shinde (2012) bahwa bentuk fisik arabinosa ketika dilihat
secara mikroskopis berbentuk seperti bulu babi, terdapat titik tebal dan
garis yang saling menyatu dan bertumpukan
Berdasarkan gambar di atas, dapat dijelaskan bahwa glukosa
mempunyai bentuk seperti kembang api tetapi pada fruktosa mempunyai
bentuk garis-garis. Hal itu disebabkan glukosa mempunyai gugus aldehid,
sedangkan pada fruktosa mempunyai gugus keton. Arabinosa mempunyai
bentuk bulat-bulat dikelilingi garis-garis seperti bulu babi karena arabinosa
bukan monosakarida tetapi turunan parsial dari selulosa. Dapat
disimpulkan bahwa hasil praktikum sesuai dengan pernyataan Chatterjea
dan Shinde (2012) yang menyatakan bahwa bentuk fisik fruktosazon dan
glukosazon memiliki bentuk garis yang bertumpuk-tumpuk dalam jumlah
banyak. Menurut Babu et al. (2015) bahwa pada arabinosazon memiliki
bentuk bola kristal berbentuk jarum yang kurang padat. Sesuai dengan
pernyataan Sumardjo (2009) bahwa tiap jenis karbohidrat memilik bentuk
kristal osazon yang spesifik, juga titik cair, dan kecepatan
pembentukannya serta osazon dapat dipakai untuk membedakan
beberapa jenis karbohidrat.
Hasil Hidrolisis
Uji Benedict. Tujuan dari uji Benedict adalah untuk mengetahui
hasil hidrolisis dengan melihat adanya gugus reduksi pada karbohidrat.
Prinsip kerja uji Benedict terhadap hasil hidrolisis adalah apabila gula
reduksi bebas maka Cu2+ akan direduksi menjadi Cu+ yang terlihat dengan
terbentuknya endapan merah bata. Kusbandari (2015) mengemukakan
bahwa prinsip kerja dari uji Benedict adalah Cu2+ yang terdapat dalam
reagen Benedict dapat direduksi oleh gugus reduksi pada monosakarida
51
menjadi Cu+ yang terlihat dengan terbentuknya endapan merah bata
(Cu2O).
Perlakuan pertama dengan dilakukannya pendidihan larutan
sedangkan perlakuan kedua tanpa dilakukan pendidihan. Fungsi
pendidihan larutan berguna untuk mempercepat reaksi hidrolisis.
Trisunaryanti (2018) menyebutkan bahwa pendidihan larutan berfungsi
untuk mempercepat proses hidrolisis sehingga gugus reduksi bebas
dalam keadaan berjumlah banyak. Perlakuan selanjutnya adalah
penambahan reagen Benedict dan Na2CO3 pada setiap tabung.
Penambahan reagen Benedict berguna sebagai penyedia Cu 2+ yang
digunakan gugus reduksi pada monosakarida untuk mereduksi dan HCl
berfungsi untuk memberikan suasana asam. Menurut Sutresna (2007)
bahwa reagen Benedict berfungsi untuk mengetahui adanya gugus
reduksi dari glukosa yang akan mereduksi ion Cu. Menurut Choirunnisa
(2017) bahwa fungsi penambahan HCl adalah untuk memberi suasana
asam dan sebagai katalisator untuk proses hidrolisis. Penambahan
Na2CO3 bertujuan untuk menetralkan kembali larutan. Hasil uji Benedict
dapat dilihat pada Tabel 5.
Tabel 5. Hasil Uji Benedict
1a Maltosa 0,02 M (dididihkan) +++ (endapan lebih banyak)
1b Maltosa 0,02 M (tidak dididihkan) + (endapan sedikit)
2a Laktosa 0,02 M (didihkan) + (endapan sedikit)
2b Laktosa 0,02 M (tidak dididihkan) ++ (endapan banyak)
Berdasarkan tabel di atas, diperoleh hasil pada tabung 1 terdapat
endapan merah bata yang cukup banyak daripada tabung 2 karena
tabung 1 mendapat perlakuan penambahan HCl dan pemanasan
sehingga terjadi proses hidrolisis yang menyebabkan gugus reduksi
bebas. Tabung 2 hasilnya timbul sedikit endapan karena tidak diberi
perlakuan pemanasan sehingga proses hidrolisis tidak terjadi secara
sempurna yang menyebabkan gugus reduksi sedikit dan endapan merah
bata hanya timbul sedikit. Tabung 3 terdapat endapan merah bata banyak
dan pada tabung 4 terdapat sedikit endapan merah bata. Hal ini
52
dikarenakan pada tabung 3 mendapat perlakuan penambahan HCl dan
pemanasan sehingga terhidrolisis dan terbentuk endapan merah bata.
Tabung 4 tidak mendapatkan perlakuan pemanasan sehingga proses
hidrolisis tidak sempurna dan menyebabkan endapat merah bata yang
timbul hanya sedikit.
Berdasarkan hasil percobaan menunjukkan bahwa proses
pemanasan dapat menambah jumlah gugus reduksi bebas (ikatan α-1-4-
glikosidik). Sesuai dengan pernyataan Heryanti et al. (2014) bahwa
pemanasan akan menyebabkan terjadinya penurunan kadar glukosa.
Hasil percobaan ini juga sesuai dengan pernyataan Sumardjo (2009) yang
menyatakan bahwa pemanasan karbohidrat pereduksi dengan pereaksi
Benedict akan terjadi perubahan warna dari biru, hijau, kuning, kemerah-
merahan, dan akhirnya terbentuk endapan Cu2O yang berwarna merah
bata. Berdasarkan hasil praktikum yang mempengaruhi uji Benedict
adalah perlakuan penambahan HCl dan pemanasan yang mempengaruhi
proses hidrolisis dan gugus pereduksi.
Uji Seliwanoff. Tujuan dari uji Seliwanoff adalah untuk mengetahui
adanya gugus keton pada hasil hidrolisis karbohidrat (sukrosa). Prinsip
kerja uji Seliwanoff terhadap hasil hidrolisis yaitu sukrosa akan terpisah
menjadi fruktosa dan glukosa, sehingga pada fruktosa yang terkandung
sukrosa akan diubah menjadi hidroksi-metil-furfural yang selanjutnya
bereaksi dengan resorsinol membentuk senyawa berwarna merah.
Senyawa berwarna merah tersebut dapat menunjukkan bahwa terdapat
gugus keton dan terbukti terjadi hidrolisis atau tidak. Kusbandari (2015)
menyatakan prinsip kerja dari uji Seliwanoff adalah pada reaksi
Seliwanoff, fruktosa akan diubah menjadi hidroksimetilfurfural yang
selanjutnya bereaksi dengan resorsinol membentuk senyawa berwarna
merah.
Perlakuan yang diberikan pada uji Seliwanoff terhadap hasil
hidrolisis berupa pendidihan larutan selama 30 menit kemudian
didinginkan, penambahan HCl pekat dan reagen Seliwanoff. Pendidihan
53
atau pemanasan larutan selama 30 menit berguna agar proses dehidrasi
dapat berjalan dengan optimal. Menurut Trisunaryanti (2018) bahwa
fungsi pemanasan pada uji Seliwanoff yaitu untuk mempercepat proses
hidrolisis yang terjadi pada karbohidrat. Penambahan reagen Seliwanoff
berguna sebagai indikator pembentuk senyawa berwarna antara hidroksi-
metil-furfural dengan reagen yang berwarna. Nurjannah et al. (2015)
menyebutkan bahwa reagen Seliwanoff yang ditambahkan berfungsi
untuk membentuk warna merah jika bereaksi dengan fruktosa sehingga
dapat menjadi pembeda antara gugus keton dan aldehid. Penambahan
HCl pekat pada setiap tabung berfungsi agar larutan dalam suasana
asam. Menurut Choirunnisa (2017) penambahan HCl pada percobaan ini
sebagai katalisator untuk proses hidrolisis. Berdasarkan percobaan yang
dilakukan, didapatkan hasil uji Seliwanoff dapat dilihat pada Tabel 6.
Tabel 6. Hasil Uji Seliwanoff
Tabung Sampel Hasil Uji (Warna)
1 Sukrosa 0,02 M Kuning agak gelap
2 Maltosa 0,02 M Kuning cerah
3 Laktosa 0,02 M Kuning cerah
Berdasarkan data hasil diatas, dapat diketahui bahwa semua
larutan berubah menjadi warna kuning. Tabung 1 yang berisi sukrosa 0,02
M menunjukkan hasil berwarna kuning agak gelap. Tabung 2 yang berisi
maltosa 0,02 M hasilnya menunjukkan warna kuning cerah. Tabung 3
yang berisi laktosa 0,02 M hasilnya menunjukkan warna kuning cerah
juga.
Seharusnya larutan sukrosa 0,02 M, maltosa 0,02 M, dan laktosa
0,02 M berubah warna menjadi merah. Sesuai dengan pernyataan
Soemardjo (2009) bahwa larutan fruktosa dengan reagen Seliwanoff
setelah pendidihan seharusnya berubah menjadi larutan warna paling
merah. Hal ini dikarenakan menurut Rahayu (2009) bahwa di dalam
sukrosa terdapat fruktosa dan glukosa dimana fruktosa memiliki gugus
keton yang kemudian bereaksi dengan resorsinol sehingga membentuk
hidroksimetilfurfural berwarna merah. Larutan maltosa dan laktosa tidak
54
membentuk warna merah karena maltosa tersusun atas dua molekul
glukosa sedangkan laktosa tersusun atas glukosa dan galaktosa. Kedua
larutan ini tidak membentuk warna merah karena tidak mengandung
gugus keton. Menurut Sumardjo (2009) bahwa karbohidrat yang
mempunyai gugus keton akan membentuk warna merah apabila dilakukan
uji Seliwanoff. Hasil praktikum uji Selowanoff tidak sesuai dengan literatur.
Faktor yang dapat mempengaruhi keberhasilan uji, yaitu lamanya waktu
pemanasan dan konsentrasi HCl sebagai katalisator hidrolisis.
Polisakarida
Uji Hasil Hidrolisis Amilum. Tujuan dari uji hasil hidrolisis Amilum
adalah untuk mengetahui tahapan hidrolisis Amilum. Prinsip kerja dari uji
hasil hidrolisis amilum yaitu amilum dalam suasana asam bila dipanaskan
akan terhidrolisis menjadi senyawa-senyawa yang lebih sederhana.
Firdausi dan Zulaika (2015) menjelaskan bahwa prinsip kerja dari uji ini
adalah amilum diuji tiap satu menit dengan menggunakan uji Yod
sehingga akan menunjukkan warna yang berbeda-beda. Perubahan
warna yang terjadi yakni biru (amilum ditambah Yod), ungu (amilodekstrin
ditambah Yod), merah (eritrodekstrin ditambah Yod), tidak berwarna
(akrodekstrin ditambah Yod), tidak berwarna (maltosa ditambah Yod), dan
tidak berwarna (glukosa ditambah Yod).
Uji hasil hidrolisis amilum ini menggunakan 10 ml amilum 1%
ditambah 3 ml HCl 3%, lalu dididihkan dan setiap 1 menit sekali di uji
dengan Yod. Choirunnisa (2017) menyebutkan bahwa penambahan HCl
berfungsi untuk menghidrolisis polisakarida menjadi disakarida dan
monosakarida penyusunnya. Menurut pemaparan Edahwati (2010) bahwa
pendidihan larutan berfungsi untuk membantu proses hidrolisis amilum
menjadi bentuk yang lebih sederhana. Penambahan reagen Yod menurut
Wulansari (2013) berfungsi sebagai indikator tahap-tahap hidrolisis
amilum yang dilakukan. Berdasarkan pernyataan Aniriani et al. (2018)
bahwa fungsi penambahan larutan Na2CO3 adalah sebagai penetralan
larutan. Menurut Sutresna (2007) bahwa fungsi penambahan reagen
55
Benedict adalah untuk mengetahui adanya gugus reduksi dari glukosa
yang akan mereduksi ion Cu pada Benedict. Berdasarkan praktikum yang
terlah dilakukan, dapat disajikan tabel berupa hasil uji hidrolisis amilum
pada Tabel 7.
Tabel 7. Hasil Uji Hasil Hidrolisis Amilum
Menit ke- Warna Tahap Hidrolisis Amilum
1 Biru pekat Amilum
2 Biru Amilum
3 Biru kehijauan pekat Amilodekstrin
4 Biru kehijauan muda Amilodekstrin
5 Kuning kehijauan pekat Amilodekstrin
6 Kuning kehijauan pudar Amilodekstrin
7 Coklat tua Eritrodekstrin
8 Coklat Eritrodekstrin
9 Oranye Akrodekstrin
10 Kuning Maltosa, Glukosa
11 Kuning Maltosa, Glukosa
Berdasarkan data diatas, dapat dilihat bahwa pada menit pertama

larutan amilum 1% ditambah 3 ml HCl 3% diuji dengan yod mempunyai
warna biru pekat. Menit kedua terjadi perubahan warna menjadi biru.
Memasuki menit ketiga terjadi perubahan dari amilum menjadi
amilodekstrin, sehingga warna berubah dari biru menjadi biru kehijauan
pekat. Menit keempat menunjukkan perubahan warna menjadi biru
kehijauan muda. Menit kelima menunjukkan warna berubah menjadi
kuning kehijauan pekat, dan pada menit keenam warna memudar menjadi
kuning kehijauan pudar. Menit ketuju menunjukkan perubahan dari
amilodekstrin menjadi eritrodekstrin sehingga warna berubah menjadi
coklat tua, dan pada menit kedelapan warna menjadi coklat. Menit
kesembilan terjadi perubahan tahapan dari eritrodekstrin menjadi
akrodekstrin dan warna berubah menjadi oranye. Menit kesepuluh
menunjukkan warna berubah menjadi kuning dan pada menit kesebelas
warna berubah menjadi tidak berwarna seperti warna yod semula yang
telah ditambahkan akuades.
Tahapan hidrolisis amilum menurut Sumardjo (2006) adalah
apabila amilum ditambah dengan yod terbentuk warna biru, amilodekstrin
56
ditambah yod menjadi ungu, eritrodekstrin ditambah yod menjadi merah
dan akrodekstrin ditambah yod menjadi tidak berwarna, maltosa ditambah
yod menjadi tidak berwarna dan glukosa ditambah yod menjadi tidak
berubah warna. Larutan amilum yang telah di uji menggunakan uji Yod
dan menunjukkan negatif ditambahkan dengan Na2CO3 dan reagen
Benedict kemudian di uji Benedict. Uji Benedict menunjukkan bahwa pada
larutan terdapat endapan merah bata yang berarti tahapan akhir hidrolisis
amilum tersebut adalah maltosa atau glukosa, karena maltosa atau
glukosa memiliki gugus reduksi. Sumardjo (2006) menyatakan bahwa
pereaksi Benedict (sebagai Cu2+) akan direduksi menjadi kupro-oksida,
dengan dipanaskan Cu+ akan berikatan dengan O dan kemudian akan
membentuk endapan Cu2O yang berwarna merah. Hasil praktikum yang
telah dilakukan masih sedikit belum sesuai dengan literatur yang ada.
57
Kesimpulan

bahwa karbohidrat mengandung gugus reduksi dan gugus reduksi bebas.
Karbohidrat mengandung gugus keton berupa fruktosa dan gugus aldehid
berupa glukosa. Glukosa berbentuk seperti kembang api, fruktosa
berbentuk garis-garis, sedangkan arabinosa berbentuk bulat-bulat
dikelilingi garis-garis seperti bulu babi. Maltosa, laktosa, dan sukrosa
terdapat gugus reduksi bebas tetapi maltosa dan laktosa tidak terdapat
gugus keton, sedangkan di dalam sukrosa terdapat gugus keton.
Polisakarida yang dilakukan uji hasil hidrolisis amilum diperoleh hasil akhir
sampai tahap akrodekstrin atau maltosa atau glukosa dengan ditandai
perubahan warna yang tidak signifikan. Faktor yang mempengaruhi uji
secara umum antara lain adalah konsentrasi sampel, waktu lamanya
pemanasa, penambahan larutan asam, penambahan larutan basa, dan
perlakuan pada tabung saat melakukan uji.
58
Daftar Pustaka
Afriza, R. Dan Ismanilda. 2019. Analisis perbedaan kadar gula pereduksi

dengan metode lane eynon dan luff schoorl pada buah naga
merah (Hylocereus polyrhizus). Jurnal Teknologi dan Manajemen
Pengelolaan Laboratorium (Temapela). 2(2) : 90-96.
Ai, N. S. 2012. Evolusi fotosintesis pada tumbuhan. Jurnal Ilmiah Sains.
12(1) : 28-34.
Andarwulan, N., F. Kusnandar, dan D. Herawati. 2011. Analisis pangan.
Dian Rakyat. Jakarta.
Andriyani, R., A. Triana, dan W. Juliarti. 2015. Biologi Reproduksi dan
Perkembangan. Deepublish. Yogyakarta.
Aniriani, G. W., N. F. Apriliani., dan E. Sulistiono. 2018. Hidrolisis
polisakarida xilan jerami menggunakan larutan asam kuat untuk
bahan dasar produksi bioetanol. Jurnal Ilmiah Sains. 18(2):113-
117.
Astuti, C. M. dan S. Asih. 2013. Faktor-Faktor yang Berhubungan dengan
Pengendalian Kadar Glukosa Darah Pasien DM Tipe 2 Rawat
Jalan di Poliklinik Penyakit Dalam RSJ Prof. Dr. Soerojo Magelang
Tahun 2013. Skripsi. Universitas Indonesia. Depok.
Astuti, I. M. dan Rustanti. 2014. Kadar protein, gula total, total padatan,
piskositas, dan nilai pH eskrim yang disubtitusikan inuli umbi
gembili. Journal of Nutrition College. 3(3): 331-336.
Nutrien. Deepublish. Yogyakarta.
Aziz, I. A. 2017. Isolasi dan Karakteristik Inulin dari Umbi Yakon
(Smallanthus sonchifolius). Skripsi. Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Babu, V., Silambanan, and Krithika. 2015. Osazones of the uncommonly
encountered reducing sugars. International Journal of
Interdisciplinary and Multidisciplinary Studies. 2(9): 24-29.
Budiman. 2011. Aplikasi Pati Singkong Sebagai Bahan Baku Edible
Coating Untuk Memperpanjang Umur Simpan Pisang Cavendish.
Skripsi. Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan Fakultas
Teknologi Pertanian IPB. Bogor.
Chatterjea, M. N. And R. Shinde. 2012. Textbook of medical biochemistry.
8th ed. Jaypee Brothers Medical Publisher Ltd. New Delhi.
Choirunnisa, U. 2017. Karakteristik Amilum Biji Durian (Durio zibethinus L)
dan Uji Aktivitas Antioksidan secara In-Vitro. Perpustakaan
Universitas Esa Unggul. Jakarta.
59
Devi, N. 2010. Nutrition and Food Gizi untuk Keluarga. PT Kompas Media
Nusantara. Jakarta.
Diyah, N. W., A. Ambarwati, G.M. Warsito, G. Niken, E. T. Heriwiyanti, R.
Windysari, D. Prismawan, R. F. Hartasari, dan Purwantoro.
Evaluasi kandungan glukosa dan indeks glikemik beberapa
sumber karbohidrat dalam upaya penggalian pangan ber-indeks
glikemik rendah. Jurnal Farmasi dan Ilmu Kefarmasian Indonesia.
3(2) : 67-73.
Djakani, H., T. V. Masinem, dan Y. M. Mewo. 2013. Gambaran kadar gula
darah puasa pada laki-laki usia 40-59 tahun. Jurnal e-Biomedik
(eBM). 1 (1):71-75.
Edahwati, L. 2010. Perpindahan masa karbohidrat menjadi glukosa. Jurnal
Penelitian Ilmu Teknik. 10(1):1-5.
Firani, N. K. 2017. Metabolisme Karbohidrat. UB Press. Malang.
Firdausi, W. Dan E. Zulaika. 2015. Potensi Azotobacter spp. Sebagai
pendegradasi karbohidrat. Jurnal Sains dan Seni ITS. 4(1) : 5-6.
Heryanti, P., R. Setyawati, dan R. Wicaksono. 2014. Pengaruh suhu dan
lama pemanasan pati serta konsentrasi butanol terhadap
karakteristik fisikokimia pati tinggi amilosa dari tapioka. Jurnal
Agritech. 34(3) : 308-315.
Ifmaily. 2018. Penetapan kadar pati buah sukun (Artocarpus altilis L)
dengan metode Luff Schoorl. Chempublish Journal. 3(1):1-10.
Kusbandari, A. 2015. Analisis kualitatif kandungan sakarida dalam tepung
dan pati umbi ganyong (Canna edulis Ker). Pharmaciana. 5(1): 35-
42.
Marshall, J. 2004. Power Food. Octopus Publishing Group Ltd. London.
Marzuki, I., Amirullah, dan Fitriana. 2010. Kimia dalam Keperawatan.
Pustaka As Salam. Makasar.
Mukti, K. S. A., Rahmawati, dan Sulistiyani. 2018. Analisis kandungan
karbohidrat, glukosa, dan uji daya terima pada nasi bakar, nasi
panggang, dan nasi biasa. Jurnal Agroteknologi. 12(1): 248-252.
Murray, R., O. K. Granner, P. A. Mayes, dan V. W. Rodwell. 2003.
Harper’s Illustrated Biochemistry. Medical Publishing Division.
USA.
Noriko, N. Dan A. Pambudi. 2014. Difersifikasi pangan sumber karbohidrat
Canna edulis Kerr. (Ganyong). Jurnal Al-Azhar Indonesia Seri
Sains dan Teknologi. 2(4): 248-252.
Nurjannah, L., Suryani, S. S. Achmadi., dan A. Azhari. 2015. Produksi
asam laktat oleh Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus
60
dengan sumber karbon tetes tebu. Jurnal Teknologi dan Industri
Pertanian Indonesia. 9(1) : 1-9.
Poedjiadi, A. dan Supriyanti. 2006. Dasar-Dasar Biokimia. Universitas
Indonesia Press. Jakarta.
Rahayu, I. 2009. Praktis Belajar Kimia. Pusat Perbukuan Depatermen
Pendidikan Nasional. Jakarta.
Rahmawati, A. A. 2017. Penentuan Kadar Glukosa pada Enjet-Enjet
dengan Metode Luff Schoorl. Thesis. Program Studi Analisis
Kesehatan Fakultas Ilmu Kesehatan. Universitas Setia Budi.
Surakarta.
Risnoyatiningsih, S. 2011. Hidrolisis pati ubi jalar kuning menjadi glukosa
secara enzimatis. Jurnal Teknik Kimia. 5(20): 417-424.
Rohman, A. dan Sumantri. 2018. Analisis Makanan. Gadjah Mada
University Press. Yogyakarta.
Kedokteran dan Program Strata I Fakultas Bioeksakta. Penerbit
Kedokteran EGC. Jakarta.
Kedokteran. EGC. Jakarta.
Sutresna, N. 2007. Cerdas Belajar Kimia. Grafindo Media Pratama.
Bandung.
Trisunaryanti, W. 2018. Material Katalis dan Karakternya. Gadjah Mada
Wijayanti, F., S. Kumalaningsih, dan M. Effendi. 2012. Pengaruh
penambahan sukrosa dan asam asetat glacial terhadap kualitas
nata dari whey tahu dan substrat air kelapa. Jurnal Industria 1 (2):
86-93.
Wulandari, E., T. Idiyanti, dan E. Sinaga. 2012. Limbah moals:
pemanfaatan sebagai sumber karbohidrat untuk
perkembangbiakan mikroorganisme. Jurnal Kimia Valensi. 2(5):
565-572.
Wulansari, F. D. 2013. Metode sederhana penentuan jumlah unit
pengulangan glukosa dalam amilosa sebagai media pembelajaran
materi karbohidrat. Jurnal Pengajaran MIPA. 18(2):185-190.
61
ACARA II
PROTEIN
Disusun oleh:
Kelompok XV
Erra Fazirra Saravica Putri Ajaka PT/08103
Rifaldo PT/08162
Asisten: Felicia Swithenia

FAKULTAS PETERNAKAN
YOGYAKARTA
2020
62
ACARA II
PROTEIN
Tujuan Praktikum
Praktikum Protein bertujuan untuk mengetahui pengendapan
protein dalam beberapa jenis larutan, untuk mengetahui adanya ikatan
peptida pada protein, untuk mengetahui adanya asam amino tirosin pada
protein, untuk mengetahui adanya asam amino tripophan pada protein,
untuk mengetahui adanya asam amino aromatik pada triptophan, untuk
mengidentifikasi gugus karbohidrat pada protein, mengetahui perbedaan
macam-macam protein, dan untuk mengetahui adanya fosfor dalam
protein.

Protein adalah makromolekul polipeptida yang tersusun dari
sejumlah L-asam amino yang dihubungkan oleh ikatan peptida. Protein
dalam makanan nabati terlindung oleh dinding sel yang terdiri atas
selulosa sehingga daya cerna sumber protein nabati pada umumnya lebih
rendah dibandingkan dengan sumber protein hewani (Probosari, 2019).
Sedangkan menurut Katili (2009) protein adalah makromolekul yang
tersusun dari bahan dasar asam amino. Protein terdapat dalam sistem
hidup semua organisme baik yang berada pada tingkat rendah maupun
organisme tingkat tinggi.
Protein dapat diklasifikasikan berdasarkan kelarutannya, antara lain
Albumin merupakan protein yang larut dalam air dan larutan garam encer.
Globulin merupakan protein yang tidak larut dalam air tetapi larut dalam
larutan encer garam. Globin mengandung arginin dan triptofan dalam
jumlah sama, mengandung histidin juga tetapi tidak mengandung
isoleusin. Glutelin adalah protein yang tidak larut dalam larutan netral tapi
larut dalam basa dan asam encer. Prolamin banyak terdapat pada
sayuran dan tidak larut dalam alkohol absolut.
63
Protein merupakan komponen dasar dari struktur utama hewan dan
jaringan manusia. Struktur protein dibagi menjadi empat, yaitu struktur
primer yang mengacu pada urutan asam amino, struktur sekunder dimana
alpha helix menjadi dasar protein, struktur tersier yaitu domain terkunci
pada tempat tertentu, dan struktur kuartener yaitu bagian terkecil atau
subunit protein. Struktur primer yang dimaksud adalah asam amino.
Struktur sekunder merupakan alpha helix yang menjadi dasar protein
(Mandle et al., 2012).
Protein memiliki sifat-sifat umum, yaitu pembentukan warna,
amfolit, dan denaturasi. Pembentukan warna artinya penambahan warna
tertentu pada larutan kemungkinan dapat mengakibatkan perubahan
warna pada larutan protein tersebut. Reaksi pembentukan warna ini juga
dapat digunakan untuk menunjukkan adanya kandungan protein dalam
suatu larutan. Sifat amfolit pada protein artinya protein dapat bersifat
asam maupun basa karena adanya radikal karboksil. Denaturasi dapat
diartikan sebagai suatu proses perubahan konfigurasi tiga dimensi
molekul protein tanpa menyebabkan kerusakan ikatan peptida (Sumardjo,
2009).
Struktur asam amino secara umum adalah satu atom C yang
mengikat empat gugus, yaitu gugus amina (NH2), gugus karboksil
(COOH), atom hidrogen (H), dan satu gugus sisa (R dan residu) atau
disebut juga gugus atau rantai samping yang membedakan satu asam
amino dengan asam amino lainnya (Suprayitno dan Sulistyani, 2017).
Protein berfungsi memindahkan berbagai senyawa melalui aliran darah
dan melewati membran. Fungsi terpentingnya yaitu sebagai enzim
(katalisator) untuk mempercepat reaksi biokimia. Fungsi lainnya yaitu
sebagai pemicu otot untuk berkontraksi. Protein dalam bentuk antibodi
dan komponen lain dalam sistem kekebalan, dapat melindungi dari infeksi
organisme asing. Protein juga mampu mencegah kehilangan darah
dengan membentuk serangkaian proses yang diakhiri dengan
pembentukan pembekuan darah.
64
Protein dapat diuji dengan beberapa percobaan, yang dapat
dipelajari dalam ilmu Biokimia. Pengujian protein antara lain uji
pengendapan protein, uji reaksi warna pada protein, dan pembedaan
macam-macam protein. Gelatin adalah protein yang terdapat dalam
kolagen (bahan penunjang utama dalam kulit, tulang rawan dan jaringan
ikat). Gelatin tersusun dari 18 asam amino yang saling terikat, terdiri dari
asam aspartat, asam glutamat, serin, valin, tirosin, lisin, treonin, arginin,
glisin, histidin, hidroksipiprolin, isoleusin, leusin, hidroksilisin, fenilalanin,
prolin, alanin dan metionin. Susunan asam amino gelatin berupa triplet
peptida, yaitu glisin-X-Y, dimana X umumnya adalah asam amino prolin
dan Y umumnya adalah asam amino hidroksiprolin. Senyawa gelatin
merupakan suatu polimer linier yang tersusun oleh satuan terulang asam
amino glisin-prolin-prolin dan glisin-prolin-hidroksiprolin yang bergabung
membentuk rangkaian polipeptida
Prinsip uji pengendapan protein oleh logam yaitu logam berat pada
protein akan membentuk endapan logam proteat. Ikatan logam yang kuat
dapat memutuskan jembatan. Garam logam berat umumnya mengandung
Hg+2, Pb+2, Ag+1, dan logam lainnya dengan atom yang besar. Reaksi
yang terjadi pada garam logam berat akan mengakibatkan terbentuknya
garam protein-logam yang tidak larut. Banyaknya endapan yang terbentuk
didasarkan pada tingkat reaktif dari logam tersebut. Semakin reaktif logam
tersebut, semakin banyak pula endapan protein yang akan terbentuk
(Wilson dan Walker, 2000).
Pada uji pengendapan protein oleh alkaloid, pereaksi alkaloid
merupakan molekul yang memiliki banyak anion, yang mana muatan
negatif dari anion akan bereaksi dengan muatan positif pada gugus amino
sehingga menyebabkan terjadinya pengendapan protein. Pengendapan
protein dengan alkaloid reagensia dapat menjadi reaksi balik apabila
protein dalam bentuk dwi kutub pada suasana asam. Ion negatif dari
alkaloid reagensia akan ikut tergabung dengan protein yang bermuatan
65
positif (kation) sehingga akan membentuk garam proteinat yang
mengendap (Saraswati, 2018).
Pada uji pengendapan protein oleh garam netral dan alkohol,
albumin akan mengendap pada garam pekat dan alkohol pekat. Tetapi,
akan larut pada garam encer dan alkohol encer. Protein yang larut dalam
air, seperti albumin miskin akan radikal-radikal polar bebas sehingga
cenderung mengendap pada penambahan alkohol dan garam netral.
Jenis dari sebuah zat akan mempengaruhi pengendapan suatu larutan
(Sumardjo, 2009).
Uji Biuret bertujuan untuk mengetahui ikatan peptida pada protein.
Prinsip dari Uji Biuret yaitu sampel yang direaksikan dengan pereaksi
Biuret akan berubah menjadi warna ungu jika larutan positif mengandung
senyawa peptida. Hal tersebut disebabkan karena terbentuk kompleks
antara Cu2+ dan N dari molekul ikatan peptida. Banyaknya warna yang
dihasilkan tergantung pada asam amino yang terikat pada ikatan peptida
(Bintang, 2010).
Uji Millon bertujuan untuk mengetahui adanya asam amino tirosin.
Prinsip kerja dari uji ini adalah Hg akan terjadi ikatan dengan gugus
hidroksifenil dari asam amino tirosin. Pereaksi Millon terbuat dari
campuran antara merkuri dan asam nitrat yang akan membentuk warna
merah karena membentuk garam merkuri sebagai akibat dari nitrasai fenol
pada tirosin (Nurlely et al., 2014).
Uji Hopskin-Cole, bertujuan untuk mengetahui adanya asam amino
triptophan. Prinsip kerja uji ini adalah terjadinya kondensasi antara gugus
aldehid dari formaldehid dengan gugus indol dari asam amino triptophan
yang terdapat pada albumin. Reaksi positif akan ditunjukkan dengan
adanya cincin ungu pada bidang batas. Asam glikosilat dan asam sulfat
pekat dapat membentuk larutan pekat berwarna violet pada penggojokan
dengan larutan protein yang mengandung residu triptophan dalam struktur
kimianya (Sumardjo, 2009).
66
Uji Xanthoprotein bertujuan untuk mengetahui adanya asam amino
aromatik. Prinsip kerja uji ini adalah mengidentifikasi adanya inti benzena
dalam suatu protein, seperti asam amino fenilalanin, tirosin, dan triptofan.
Uji ini mengandung asam nitrat pekat yang menunjukkan hasil positif
berwarna kuning karena adanya inti benzena yang ternitrasi oleh asam
nitrat membentuk nitrobenzene (Nurlely et al., 2014).
Uji Molisch bertujuan untuk mengidentifikasi gugus karbohidrat.
Prinsip kerja uji ini yaitu sakarida jika dipanaskan dengan asam kuat akan
mengalami dehidrasi dan menjadi furfural lalu akan bereaksi dengan alfa-
naftol atau timol dan membentuk senyawa berwarna. Karbohidrat yang
terbentuk dengan alfa-naftol dalam alkohol dan asam sulfat pekat
memberikan warna violet tua (Sumardjo, 2009).
Uji albumin dan globulin bertujuan mengetahui kandungan gula
dalam lemak. Bila endapan larut, maka di dalam serum encer tersebut
terdapat protein albumin dan globulin yang merupakan mayoritas dari
seluruh serum protein (Cote, 2011). Albumin dapat mengendap apabila
ditambah dengan larutan amonium sulfat jenuh.
Uji kasein memiliki prinsip kerja jika penambahan NaOH
menyebabkan warna biru. Penurunan pH disebabkan oleh asam asetat
sehingga terbentuk endapan karena mengalami koagulasi. Kasein adalah
fosfoprotein yang terdapat dalam susu dan jika dihidrolisis akan
menghasilkan protein sederhana dan asam fosfat penyusunnya
(Sumardjo, 2009).
Uji Neumann bertujuan untuk mengetahui adanya fosfor dalam
kasein. Ketika fosfor pada kasein terlepas dengan penambahan HNO3 dan
H2SO4 membentuk H(PO4)-. Fosfoprotein protein yang mengandung fosfor
salah satunya kasein pada susu (Suprayitno dan Sulistiyati, 2017).
67
Materi dan Metode
Materi
Alat. Alat yang digunakan dalam praktikum Protein antara lain
tabung reaksi, pipet tetes, corong, gelas ukur, penangas air, stopwatch,
sendok pengaduk, dan penjepit tabung reaksi.
Bahan. Bahan yang digunakan dalam praktikum Protein antara lain
albumin, kasein, larutan ZnSO4 encer, asam sulfosalisilat, larutan Esbach,
kalium ferosianida, asam wolframat, (NH4)2SO4 padat, alkohol pekat,
NaOH 10%, NH4OH, larutan peptida, larutan CuSO4 0,1%, larutan HgSO4
1%, NaNO3 kristal, larutan formaldehid encer, H2SO4, larutan HNO3,
reagen Molisch, serum encer, khlorofenol red, asam asetat 2%, Na2CO3
encer, aquades, brom kresol hijau,amonium molibdat, dan gelatin.
Metode
Pengendapan
Uji pengendapan dengan logam berat. Dua tabung reaksi
disiapkan. Tabung I diisi 1 ml albumin ditambahkan dengan beberapa
tetes 0,45% ZnSO4 encer, kemudian diamati yang terjadi pada larutan,
lalu ditambahkan lagi ZnSO4 encer berlebihan. Tabung II diisi 0,5 ml
larutan kasein 2% ditambah dengan 2 ml ZnSO4 encer, lalu ditambahkan
ZnSO4 encer berlebihan lagi. Perubahan yang terjadi diamati.
Uji pengendapan dengan alkaloid. Empat tabung reaksi disiapkan.
Tabung I diisi 1 ml larutan albumin ditambah dengan 5 tetes asam
sulfosalisilat 20%. Tabung II diisi 2 ml larutan albumin ditambah dengan 2
ml larutan Esbach. Tabung III diisi dengan 2 ml larutan albumin ditambah
dengan 2 ml kalium ferosianida dan 5 tetes asam asetat glasial. Tabung
IV diisi dengan 2 ml larutan albumin ditambah dengan 20% asam
wolframat hingga mengendap. Masing-masing tabung diamati.
Uji pengendapan dengan garam netral dan alkohol. Dua tabung
reaksi disiapkan. Tabung I diisi dengan 5 ml larutan albumin ditambah
68
sedikit (NH4)2SO4 padat, lalu diencerkan dengan aquades sampai larut.
Tabung II diisi dengan satu sampai dua tetes larutan albumin ditambah
dengan 2 ml alkohol pekat atau etanol, lalu diencerkan dnegan aquades.
Perubahan yang terjadi diamati.
Reaksi Warna
Uji biuret. Sebanyak 2 ml larutan peptida ditambah dengan 2 ml
NaOH 40% dan beberapa tetes CuSO4 0,5%, larutan digojok, perubahan
warna yang terjadi diamati dan dicatat.
Uji Millon. Sebanyak 2 ml larutan albumin ditambah dengan 1 ml
larutan HgSO4 1%, kemudian dipanaskan selama 10 menit dalam
penangas air, setelah dingin ditambahkan sedikit NaNO 3 kristal, lalu
dipanaskan lagi selama 10 menit di atas pembakar spirtus. Perubahan
Uji Hopskin-cole. Sebanyak 1 ml larutan albumin ditambah dengan
1 ml larutan formaldehid encer dan 1 ml H2SO4 pekat, lalu digojog.
Perubahan warna yang terjadi diamati dan dicatat.
Uji Xanthoprotein. Sebanyak 3 ml larutan albumin ditambah dengan
1 ml asam nitrat pekat, kemudian dipanaskan beberapa menit, setelah
dingin larutan dibagi menjadi dua tabung. Tabung I ditetesi NH4OH
beberapa tetes, sedangkan tabung II tidak. Perubahan warna pada kedua
tabung dibandingkan dan dicatat.
Uji Molisch. Sebanyak 1 ml larutan albumin ditambah dengan 2 ml
reagen molisch 5% dan dialiri 3 ml H2SO4 pekat lewat dinding. Perubahan
Perbedaan Sifat Protein
Uji Albumin dan Globulin. Sebanyak 2 ml serum encer dimasukkan
ke dalam 2 tabung reaksi yang masing– masing ditambahkan 2 tetes
asam sulfosalisilat pada tabung I dan 1 tetes khlorofenol red tabung II.
Perubahan warna dicatat, lalu pada tabung II ditambahkan 2% asam
asetat dengan hati–hati hingga warna larutan hilang, kemudian
dipanaskan di atas bunsen dan didinginkan, setelah dingin larutan dibagi
69
menjadi 2 tabung. Tabung II A ditambahkan 2 ml asam nitrat encer.
Tabung II B ditambahkan 2 ml Na2CO3 encer. Masing-masing tabung
diamati dan dicatat perubahan yang terjadi.
Uji Kasein. Tabung reaksi diisi dengan 2,5 ml larutan kasein encer
ditambah dengan 1 ml aquades dan 2 mL NaOH encer, kemudian diberi 2
tetes brom kresol hijau dan 2 tetes asam asetat glasial. Perubahan yang
terjadi diamati dan dicatat.
Uji Neuman. Tabung diisi dengan 2,5 ml larutan kasein cair dan
diberi 5 tetes HNO3 pekat dan 10 tetes H2SO4 pekat, lalu dipanaskan di
atas api kecil sambil digoyang sampai keluar asap putih, larutan
didinginkan, setelah dingin ditambahkan amonium molibdat, lalu
dipanaskan lagi selama 10 menit. Perubahan yang terjadi diamati dan
dicatat.
Gelatin
Uji Biuret. Sebanyak 2 ml larutan gelatin encer ditambahkan dengan
2 ml NaOH 40% dan beberapa tetes CuSO4 0,1% ke dalam tabung reaksi.
Larutan dicampur kemudian di catat perubahan warna yang terjadi.
Uji Millon. Satu sendok kecil gelatin ditambah dengan 10 ml
aquades lalu dilarutkan, kemudian dipanaskan selama 10 menit dalam
penangas air. Larutan didinginkan, setelah dingin dipanaskan kembali,
selanjutnya diuji warna yang meliputi uji biuret, uji millon, uji hopskin-cole,
uji xanthoprotein, dan uji molisch. Perubahan warna yang terjadi pada
masing-masing uji diamati dan dicatat.
Uji Hopskin-Cole. 1 ml larutan gelatin encer ditambahkan dengan 1
ml larutan formaldehid encer ke dalam tabung reaksi. H 2SO4 pekat
ditambahkan sebanyak 1 m dengan cara dialirkan pada dinding tabung
dan dicatat dan diamati warna yang terjadi.
Uji Xanthoprotein. 3 ml larutan gelatin encer ditambahkan dengan 1
ml HNO3 pekat ke dalam tabung reaksi. Kemudian larutan dipanaskan
dengan bunsen hingga mendidih. Lalu didinginkan dengan air mengalir
lalu larutan dibagi menjadi 2 tabung. Tabung pertama ditambahkan
70
beberapa tetes NH4OH dan tabung kedua tidak ditambahkan larutan
NH4OH. Kedua tabung dibandingkan.
Uji Molisch. 1 ml gelatin encer ditambahkan dengan 2 tetes larutan
alkohol 5 % ke dalam tabung reaksi. Kemudian digojok lalu ditambahkan 3
ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung. Cincin berwarna ungu di
antara dua lapisan diamati.
Reaksi Pengendapan
Sebanyak 2 tabung reaksi disiapkan. Tabung I diisi 2,5 ml larutan
gelatin ditambah dengan ammonium sulfat padat, kemudian diamati dan
dicatat yang terjadi. Tabung II diisi dengan 2,5 ml larutan gelatin ditambah
dengan kalium ferrosianida dan beberapa tetes asam asetat, kemudian
diamati dan dicatat yang terjadi.
71
Pengendapan Protein
Pengendapan protein dengan menggunakan logam berat.
Bertujuan untuk mengetahui adanya pengendapan protein dengan
penambahan logam berat. Prinsip kerja dari pengujian ini adalah protein
menggumpal ketika mencapai titik isoelektrik. Penambahan ZnSO 4
berlebih menyebabkan protein telah lewat titik isoelektrik dan ikatan Zn
dengan protein menjadi terlepas. Berdasarkan praktikum yang dilakukan,
diperoleh hasil pada tabel 2.1.
Tabel 2.1 Hasil Uji pengendapan dengan menggunakan logam berat
Tabung Perlakuan Hasil
1 Albumin 1% + 3 tetes 0,45% Warna agak keruh
ZnSO4 + ZnSO4 berlebih dan tidak memiliki
gumpalan
2 0,5 ml kasein 1% + 2 ml 0,45% Warna putih keruh
ZnSO4 encer lalu ditambah ZnSO4 dan terdapat
berlebih gumpalan
Tabung pertama menghasilkan cairan berwarna putih keruh
kemudian ditambah dengan ZnSO4 0,45% berlebih (15 tetes) sehingga
warnanya menjadi lebih bening dari sebelumnya. Begitu pula pada tabung
kedua menghasilkan cairan berwarna putih keruh lalu ditambah ditambah
dengan ZnSO4 0,45% berlebih sebanyak 20 tetes hingga warnanya
berubah menjadi bening. Hal ini terjadi karena larutan ZnSO 4 merupakan
jenis logam berat yang dapat mengaktifkan reaksi pada protein yaitu
mempengaruhi titik pH isoelektrik sehingga menyebabkan terjadinya
penggumpalan. Penambahan ZnSO4 berlebih akan kembali larut karena
saat sudah melewati titik pH isoelektrik. Hasil praktikum sesuai dengan
Saraswati (2018) yang menyatakan bahwa larutan garam logam berat
dapat digunakan untuk mengendapkan protein.
Pengendapan protein dengan menggunakan alkaloid. Bertujuan
untuk mengetahui pengendapan protein dengan penambahan pereaksi
alkaloid. Prinsip kerja dari pengujian ini adalah pereaksi alkaloid
72
merupakan molekul yang memiliki banyak anion. Muatan negatif dari
anion tersebut bereaksi dengan muatan positif pada gugus amino
menyebabkan terjadinya pengendapan. Percobaan ini dilakukan dengan 4
buah tabung dengan perlakuan yang berbeda. Berdasarkan praktikum
yang dilakukan, diperoleh hasil pada tabel 2. 2.
Tabel 2.2 Hasil Uji pengendapan dengan menggunakan alkaloid
1 1 ml albumin 1% + 5 tetes Endapan warna
asam sulfosalisilat 20% putih keruh
2 2 ml albumin 1% + 2 ml Endapan warna
larutan Esbach kuning pekat
3 2 ml albumin 1% + 2 ml kalium Endapan warna
ferosianida + 5 tetes asam kuning pucat
asetat glasial
4 2 ml albumin 1% + 20% asam Warna putih
Wolframat hingga mengendap bening terdapat
endapan
Sesuai hasil pada tabel, tabung 1 diisi dengan campuran antara 1
ml larutan albumin 1% dengan 5 tetes asam sulfosalisilat 20%
menghasilkan endapan berwarna keruh. Tabung 2, 2 ml larutan albumin
1% ditambahkan 2 ml larutan Esbach terbentuk endapan berwarna kuning
pekat. Tabung 3, 2 ml larutan albumin ditambahkan 2 ml kalium
ferosianida dan 5 tetes asam asetat glasial menghasilkan larutan
berwarna kuning pucat. Tabung 4, 2 ml larutan albumin 1% ditambahkan
20% asam Wolframat menghasilkan endapan putih.
Reagen yang bersifat alkaloid ketika direaksikan dengan protein
maka akan membentuk endapan. Zat alkaloid menghasilkan ion negatif
saat bereaksi dengan protein dan akan bereaksi dengan gugus amin
positif dari protein sehingga terbentuk endapan. Hasil praktikum sudah
sesuai dengan pernyataan Sumardjo (2009) yang menyatakan bahwa
pereaksi alkaloid adalah pereaksi yang biasa dipakai untuk
menggumpalkan larutan protein.
Pengendapan protein dengan garam netral dan alkohol.
Bertujuan untuk mengetahui pengendapan protein dengan penambahan
garam netral dan alkohol. Prinsip kerja dari pengujian ini adalah albumin
73
mengendap pada garam pekat dan alkohol pekat tetapi larut dalam garam
encer dan alkohol encer. Percobaan ini dilakukan pada 2 buah tabung
yang berbeda. Berdasarkan praktikum yang dilakukan, diperoleh hasil
pada tabel 2. 3.
Tabel 2.3 Hasil Uji dengan menggunakan garam netral dan alkohol
1 5 ml albumin 1% + 1 sendok Endapan larut
pengaduk (NH4OH)SO4 padat setelah diencerkan
lalu digojok dan diencerkan
2 1 – 2 albumin 1% + 2 ml alkohol Endapan larut
lalu diencerkan setelah diencerkan
Perlakuan pada tabung 1, 5 ml larutan albumin 1% ditambahkan 1
sendok pengaduk (NH4)SO4 padat lalu digojok. Awalnya terjadi endapan,
dan saat diencerkan dengan aquades beberapa tetes endapan tersebut
larut kembali. Tabung 2, dicampurkan 1 sampai 2 tetes albumin
ditambahkan 2 ml alkohol pekat membentuk endapan, saat diencerkan
dengan aquades, endapan tersebut juga larut. Kedua tabung
memperlihatkan hal yang sama karena sifat dari albumin yang
mengendap pada garam dan alkohol pekat, dan akan larut pada garam
dan alkohol encer. Hasil tersebut sesuai dengan pernyataan Sumardjo
(2009) yang menyatakan bahwa protein yang larut dalam air cenderung
mengendap pada penambahan alkohol dan garam netral.
Reaksi Warna
Uji Biuret. Bertujuan untuk mengetahui ikatan peptida pada
protein. Prinsip kerja dari uji biuret adalah ikatan Cu dari CuSO 4 dengan
N dari peptida dan larutan basa kuat membentuk cupripotasium biuret
atau cuprisodium biuret yang berwarna ungu. Percobaan dilakukan
dengan cara mencampurkan 2 ml larutan peptida dengan 2 ml NaOH 40%
dan beberapa tetes CuSO4 0,1%. Hasil yang diperoleh yaitu warna dalam
tabung reaksi berubah warna menjadi ungu. Hal ini terjadi karena Cu dari
CuSO4 dan larutan basa kuat bereaksi dengan N dari peptida yang akan
menimbulkan Cupripotasium biuret yang kemudian akan mengubah warna
zat menjadi ungu. Hal ini membuktikan adanya ikatan peptida pada
74
protein. Hasil tersebut sudah sesuai dengan teori menurut Sumardjo
(2009) yang menyatakan bahwa larutan encer yang dibuat basa dengan
larutan natrium hidroksida ditambah beberapa tetes larutan sulfat encer,
larutan tersebut akan berwarna violet.
Uji Millon. Bertujuan untuk mengetahui adanya asam amino
tirosin. Prinsip kerja uji millon adalah terjadi ikatan antara Hg dengan
gugus hidroksifenil dari asam amino tirosin. Penambahan NaNO 2
mengakibatkan substitusi Hg dengan NO2 yang karena pemanasan
membentuk nitrosophenol yang berwarna merah. Percobaan ini dilakukan
dengan cara mencampurkan 2 ml larutan albumin 1% dan 1 ml larutan
HgSO4 1% lalu dipanaskan sampai mendidih pada bunsen selama 10
menit membentuk larutan berwarna putih berserat bening. Setelah itu,
didinginkan dengan mengalirkan air kran pada permukaan luar tabung dan
setelah dingin ditambah dengan sedikit NaNO3 kristal (ujung sendok
pengaduk), dipanaskan 10 menit dengan bunsen.
Berdasarkan hasil praktikum, tabung 1 menghasilkan endapan
berwarna merah. Hal ini terjadi karena terbentuk ikatan antara Hg dengan
gugus hidroksifenil dari asam amino tirosin. Penambahan NaNO2
mengakibatkan substitusi Hg dengan NO2 yang karena pemanasan
membentuk nitrosophenol yang berwarna merah. Hasil uji menunjukkan
ada asam amino tirosin di dalam albumin. Hasil sudah sesuai dengan
Makfoeld et al (2002) yang menyatakan bahwa analisis protein yang
mengandung tirosin membentuk endapan merah dengan adanya
reagensia Millon.
Uji Hopskins-Cole. Bertujuan untuk mengetahui adanya asam
amino triptofan. Prinsip kerja dari uji Hopskins-Cole adalah terjadi
kondensasi antara gugus aldehid dari formaldehid dengan gugus indol
dari asam amino triptofan yang terdapat pada albumin. Percobaan ini
dilakukan dengan mereaksikan antara 1 ml larutan albumin 1% dan 1 ml
larutan formaldehid encer menghasilkan larutan berwarna bening dengan
endapan putih. Hasil reaksi kemudian ditambahkan 1 ml H2SO4 pekat
75
dialirkan lewat dinding tabung sehingga membentuk larutan berwarna
putih bening.
Hasil dari percobaan ini negatif, dikarenakan tidak menunjukkan
cincin berwarna ungu dan tidak terbukti adanya asam amino triptofan.
Hasil ini negatif disebabkan oleh H2SO4 yang diberikan sudah
terkontaminasi oleh zat lain atau H2SO4 yang ditambahkan tidak
mengandung residu triptofan pada struktur kimianya. Hasil ini tidak sesuai
dengan pernyataan Poedjiadi (2006) yang menyatakan bahwa triptophan
dapat berkondensasi dengan beberapa aldehid dengan bantuan asam
kuat dan membentuk senyawa yang berwarna.
Uji Xanthoprotein. Bertujuan untuk mengetahui adanya asam
amino aromatik (tritophan, tirosin, dan fenilalanin). Prinsip kerja dari uji
xanthoprotein adalah penambahan asam nitrat menyebabkan terjadinya
nitrasi pada inti benzene dari asam amino aromatik sehingga menjadi
kuning. Larutan pada kondisi basa (penambahan NH4OH berlebih), warna
akan berubah menjadi orange karena ionisasi gugus fenol. Percobaan ini
dilakukan pada tabung reaksi yang diisi 3 ml albumin 1% ditambahkan 1
ml HNO3 pekat lalu dipanaskan hingga mendidih. Warna yang dihasilkan
dari perlakuan tersebut adalah putih berserat bening, setelah itu isi tabung
dibagi menjadi dua. Hasil dari larutan yang telah dibagi tersebut dapat
dilihat pada tabel 2. 4.
Tabel 2.4 Hasil Uji Xanthoprotein
1 Ditambah beberapa tetes NH4OH Terjadi endapan,
warna menjadi
kuning bening
2 Tanpa penambahan NH4OH Berwarna putih
bening
Hasil pada tabung 1 terbentuk endapan dan warna berubah
menjadi kuning bening, sedangkan pada tabung 2 warna menjadi putih
bening. Hasil pada percobaan ini tidak sesuai disebabkan oleh proses
pemanasan yang tidak mencapai titik didih atau tarlalu lama dipanaskan.
Suprayitno dan Sulistiyati (2017) menyatakan bahwa larutan asam nitrat
76
setelah dicampurkan dalam larutan protein akan terjadi endapan putih
yang dapat berubah warna menjadi kuning apabila dipanaskan.
Uji Molisch. Bertujuan untuk mengidentifikasi adanya gugus
karbohidrat. Prinsip kerja dari uji Molisch adalah sakarida jika dipanaskan
dengan asam kuat akan mengalami dehidrasi menjadi furfural dan
membentuk senyawa berwarna jika bereaksi dengan alfa naftol atau timol.
Reaksi antara albumin dengan reagen Molisch dan ditambah dengan
H2SO4 pekat menghasilkan warna hitam keunguan. Penambahan reagen
Molisch berfungsi sebagai indikator alfa naftol atau timol, sedangkan
Penambahan H2SO4 pekat bertujuan untuk mendehidrasi sakarida yang
dipanaskan dalam H2SO4 pekat. Hasil percobaan terdapat warna ungu
kehitaman, yang menunjukkan terdapat sakarida di dalam albumin.
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan, hasil yang diperoleh sudah
sesuai dengan literatur. Sumardjo (2009) yang menyatakan bahwa larutan
protein majemuk yang memiliki radikal prostetik karbohidrat pada
penggojokannya pada larutan alfa naftol dalam alkohol dan asam sulfat
pekat akan membentuk larutan berwarna violet.
Perbedaan Sifat Protein
Albumin dan Globulin. Bertujuan untuk membedakan macam
protein berdasarkan kelarutan. Prinsip kerja dari uji albumin dan globulin
adalah berdasarkan pada kelarutan. Albumin adalah protein yang larut
dalam air dan garam encer, sedangkan globulin larut dalam garam encer
namun tidak atau sedikit larut dalam air. Praktikum uji albumin dan
globulin dilakukan dengan penambahan klorofenol merah sebagai
indikator warna, setelah itu fungsi pemanasan supaya albumin dapat
terkoagulasi, fungsi penambahan HNO3 adalah pemberi suasana asam
yang menjadikan globulin tidak dapat larut, dan asam sulfosalisilat
berperan sebagai alkaloid yang bersifat asam dan mengikat protein.
Praktikum albumin dan globulin dilakukan dengan penambahan asam
sulfosalisilat sebagai pereaksi alkaloid untuk mengendapkan protein (pada
tabung 1), penambahan khlorofenol merah yang berfungsi sebagai
77
indikator warna (pada tabung 2), kemudian ditambah asam asetat
sebagai penetral suasana basa. Tabung 2 kemudian dipanaskan sampai
mendidih lalu isi tabung 2 dibagi menjadi 2 bagian. Tabung 2a larutan
ditambahkan HNO3 encer sebagai indikator asam dan pada tabung 2b
dilakukan penambahan Na2CO3 encer sebagai indikator garam.
Berdasarkan praktikum yang dilakukan, diperoleh hasil yang disajikan
pada tabel 2. 5.
Tabel 2.5 Hasil Uji Albumin dan Globlulin
1 2 ml serum encer + 2 Terbentuk endapan
tetes asam coklat muda
sulfosalisilat
2 2 ml serum encer + 1 Warna merah
tetes khlorofenol kecoklatan
merah
2a + HNO3 encer Warna kuning keruh
2b + 2 ml NaCO3 encer Warna ungu
Berdasarkan hasil yang ada dalam tabel 5, diketahui bahwa hasil
uji albumin dan globulin diketahui bahwa tabung 1 menghasilkan endapan
yang mengindikasikan tabung 1 mengandung albumin. Hasil pada tabung
2, tabung 3, dan tabung 4 dapat diketahui bahwa hasil uji albumin dan
globulin menghasilkan endapan sehingga larutan tersebut positif terdapat
albumin. Hasil yang diperoleh sesuai dengan Makfoeld et al (2002) yang
menyatakan bahwa albumin dapat terkoagulasi atau terdenaturasi oleh
panas, alkohol, atau asam.
Kasein. Bertujuan untuk mengetahui kandungan kasein. Prinsip
kerja dari uji kasein adalah penambahan NaOH menyebabkan warna biru.
Brom kresol hijau sebagai indikator warna. Asam asetat menyebabkan
terjadi penurunan pH, mencapai titik isoelektrik kasein (pH 4,6) sehingga
terbentuk endapan (berwarna kehijauan) karena mengalami koagulasi.
Koagulasi atau penggumpalan ini hanya terjadi apabila larutan protein
berada pada titik isoelektriknya. Protein mengalami penggumpalan atau
koagulasi karena mengalami perubahan konformasi serta posisinya,
sehingga aktivitasnya berkurang atau kemampuannya menunjang
78
aktivitas organ tubuh tertentu hilang. Hasil yang diperoleh yaitu larutan
berwarna biru laut kehijauan, yang mengindikasikan bahwa terdapat
kandungan kasein. Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan, hasil
yang diperoleh sudah sesuai dengan literatur. Sumardjo (2009)
menyatakan bahwa kasein memiliki pH isoelektrik sebesar 4,6.
Uji Neuman terhadap kasein. Bertujuan untuk mengetahui adanya
phospor dalam kasein. Prinsip dari uji ini adalah phosphor pada kasein
terlepas dengan penambahan HNO3 dan H2SO4 membentuk H(PO4).
Ammonium molibdat berkaitan dengan H(PO4) membentuk endapan
ammonium fosfomolibdat yang berwarna kuning. Praktikum ini dilakukan
dengan tabung diisi kasein cair ditambah HNO3 pekat lalu dipanaskan.
Setelah larutan dingin, ditambah ammonium molibdat dan dipanaskan
kembali.
Hasil dari percobaan ini menghasilkan larutan kuning dengan
endapan. Hal ini disebabkan karena ammonium molibdat berikatan
dengan HPO4 dan menghasilkan endapan ammonium fosfomolibdat. Hasil
dari uji Neuman ini adalah larutan berubah warna menjadi kuning,
sehingga dapat disimpulkan larutan mengandung disimpulkan bahwa
kasein tersebut terdapat kandungan fosfor. Hasil ini sesuai dengan
pernyataan Sumardjo (2009) yang menyatakan bahwa kasein memiliki
kandungan fosfor yang tinggi. Tingginya kandungan fosfor maka kasein
bersifat asam dengan titik isoelektris pH 4,6. Kondisi pH netral
menyebabkan kasein akan larut dalam bentuk kaseinat alkali atau kalsium
yang tidak dapat dikoagulasikan dengan pemanasan sehingga dengan
adanya fosfor dalam kasein maka dapat dikoagulasikan.
Gelatin
Uji Gelatin. Bertujuan untuk mengetahui asam amino komponen
penyusun gelatin. Prinsip kerja dari uji gelatin adalah gelatin merupakan
protein yang tidak sempurna hanya mengandung asam amino triptofan
dan sistein. Praktikum uji gelatin dilakukan dengan penambahan NH4OH
yang berfungsi membentuk warna disebabkan karena terjadi nitrasi yang
79
lebih pada inti benzena pada asam aromatik dan menandakan bahwa
gelatin mengandung asam amino aromatik. Uji Gelatin ini dilakukan
dengan gelatin dilarutkan dengan akuades. Proses pelarutan dilakukan
dengan cara dipanaskan menggunakan penangas air, proses pemanasan
ini berfungsi untuk mempercepat proses pelarutan sampai gelatin larut
kemudian didinginkan. Setelah larutan dingin, lalu dilakukan uji warna.
Berdasarkan uji gelatin yang dilakukan pada saat praktikum, didapatkan
hasil yang dapat dilihat pada tabel 2. 6.
Tabel 2.6 Hasil Uji gelatin
1 Uji biuret Ungu
2 Uji Millon Merah kekuningan
3 Uji Hopskins-Cole Bening kekuningan
4 Uji xanthoprotein a. Putih telur (tanpa
NH4OH)
b. Kuning menyala
(dengan NH4OH)
5 Uji Molisch Hitam keunguan dengan
cincin di tengah
Berdasarkan tabel 2.6 diketahui bahwa tabung 1 dilakukan uji
biuret. Hasil pada tabung 1 terbentuk warna ungu yang menandakan
adanya ikatan peptida. Warna ungu terjadi karena Cu dari CuSO 4
bereaksi dengan N dari peptida sehingga membentuk ikatan Cu-N
berwarna ungu. Hasil praktikum sesuai dengan Machin (2012) yang
menyatakan bahwa reagen biuret mengandung CuSO 4. Biuret dibentuk
dengan pemanasan urea dan mempunyai struktur mirip dengan struktur
peptida dari protein. Fungsi reagen biuret adalah untuk membentuk
kompleks agar yang dikandung dapat diidentifikasi.
Millon. Tabung 2 dengan uji Millon terbentuk merah kekuningan yang
menandakan bahwa gelatin mengandung asam amino tirosin. Warna
tersebut terjadi karena ikatan Hg dengan gugus hidroksil dari asam amino
tirosin. Hasil praktikum sesuai dengan Sumardjo (2009) yang menyatakan
bahwa jika larutan protein ditambahkan dengan pereaksi Millon, gumpalan
80
berwarna putih akan terbentuk dan segera berubah menjadi merah pada
pendidihan.
Hopskins-Cole. Tabung 3 dengan uji Hopskins-Cole terbentuk warna
bening kekuningan. Hasil tersebut menandakan bahwa dalam gelatin tidak
mengandung asam amino triptofan. Hasil praktikum sesuai dengan
Sumardjo (2009) yang menyatakan bahwa gelatin dan protein-protein lain
yang tidak mempunyai residu triptofan dalam struktur kimianya, dengan
reaksi Hopskins-Cole tidak dapat membentuk warna violet pada
pengojokannya. Tjay dan Rahardja (2007) menyatakan bahwa gelatin
mengandung asam amino kecuali triptophan, camitin, citrulin, dan ornitin.
Xanthoprotein. Tabung 4 dengan uji Xanthoprotein terbentuk warna putih
telur (tanpa penambahan NH4OH) kuning menyala (dengan penambahan
NH4OH). Perbedaan warna tersebut karena NH4OH yang berfungsi
membentuk warna yang terjadi karena nitrasi pada inti benzena pada
asam aromatik, hal ini menandakan bahwa gelatin mengandung asam
amino aromatik. Hasil ini sesuai dengan Suprayitno dan Sulistiyati (2017)
yang menyatakan bahwa larutan asam nitrat setelah dicampurkan dalam
larutan protein akan terjadi endapan putih yang dapat berubah warna
menjadi kuning apabila dipanaskan.
Molisch. Tabung 5 dengan uji Molisch terbentuk cincin hitam keunguan.
Cincin ungu tersebut menandakan bahwa gelatin yang dipanaskan
dengan asam kuat akan mengalami dehidrasi menjadi furfural membentuk
senyawa berwarna jika bereaksi dengan alfa naftol atau timol dan
menandakan bahwa gelatin teridentifikasi adanya gugus karbohidrat. Hasil
ini sesuai dengan Sumardjo (2009) yang menyatakan bahwa larutan
protein majemuk yang memiliki radikal prostetik karbohidrat pada
penggojokannya pada larutan alfa naftol dalam alkohol dan asam sulfat
pekat akan membentuk larutan berwarna violet.
81
Uji Reaksi Pengendapan. Reaksi pengendapan bertujuan untuk
mengetahui reaksi pengendapan larutan gelatin dengan penambahan
ammonium sulfat dan pereaksi kalium ferosianida. Prinsip kerja dari uji
reaksi pengendapan adalah penambahan larutan (NH4)2SO4 bersifat
higroskopis dan dapat menetralkan larutan sekaligus dehidrasi sehingga
terbentuk endapan. Fungsi penambahan (NH4)2SO4 untuk mengikat air
sehingga dapat menetralkan larutan sekaligus mendehidrasi sehingga
terbentuk endapan. Percobaan ini dilakukan dengan menggunakan
larutan gelatin. Tabung 1 larutan gelatin ditambah dengan (NH 4)2SO4 dan
tabung 2 ditambahkan kalium ferosianida dan ditetesi asam asetat glasial.
Berdasarkan hasil praktikum, diperoleh hasil pada tabel 7.
Tabel 2.7 Hasil Uji reaksi pengendapan
1 2,5 ml larutan gelatin + 1 Putih keruh
sendok pengaduk Ammonium
Sulfat
2 2,5 ml larutan gelatin + 2 ml Kuning cerah tidak
kalium ferosianida + 3 – 5 ada endapan
tetes asam asetat glasial
Berdasarkan hasil dari percobaan ini, tabung 1 yang ditambah
dengan ammonium sulfat diperoleh larutan bewarna putih keruh tanpa
adanya endapan. Tabung 2 berisi gelatin ditambah dengan kalium
ferosianida dan asam asetat glasial. Reaksi ini terdapat ikatan gugus amin
dari gelatin yang bersifat negatif dengan kalium ferosianida yang bersifat
alkaloid sebagai gugus amin positif, maka reaksi antara positif dengan
negatif tidak menghasilkan endapan. Hasil pada uji reaksi pengendapan
ini sesuai dengan Poedjiadi (2006) yang menyatakan bahwa uji
pengendapan dengan penambahan ammonium sulfat menghasilkan
endapan putih karena ketika protein ditempatkan pada suasana yang tidak
sesuai atau terdapatnya garam pada lingkungan maka ikatan kimia yang
lemah akan terganggu dan mengalami denaturasi.
82
Kesimpulan

bahwa protein dapat diendapkan menggunakan logam berat, alkaloid,
garam netral, serta alkohol pada titik isoelektriknya. Protein memiliki ikatan
peptida, asam amino tirosin, asam amino triptophan, asam amino
aromatik serta mengandung gugus karbohidrat. Perbedaan sifat albumin,
globulin, dan kasein terletak pada titik isoelektriknya. Kasein mengandung
phosphor dan gelatin menggumpal pada reaksi pengendapan dengan
garam amonium sulfat dan larut pada reaksi dengan alkaloid dalam
kondisi asam.
83
Daftar Pustaka
Bintang, M. 2010. Biokimia Teknik Penelitian. Erlangga. Bogor.

Cote, E. 2011. Clinical Veterinary Advisor Dogs and Cats Second Edition.
Elsevier Mosby. USA.
Katili, A. S. 2009. Struktur dan fungsi protein kolagen. Jurnal Pelangi Ilmu.
12(5):19
Mandle, A. K., P. Jain, dan S. K. Shrivastava. 2012. Protein structure
prediction using support vector machine. International Journal on
Soft Computing. 3(1): 67-69.
Nurlely, Muslimah, dan L. Triyasmono. 2014. Pengujian daya cerna
protein ikan haruan (Channa striata) asal kota Banjarmasin. Jurnal
Pharmascience. 1(12): 76-80.
Poedjiadi, A. 2006. Dasar-Dasar Biokimia. UI Press. Jakarta.
Probosari, E. 2019. Pengaruh protein diet terhadap indeks glikemik. JNH
(Journal of Nutrition and Health). 7(1): 33-39
Saraswati, I. 2018. Panduan Praktikum Kimia. Deepublish. Yogyakarta.
Sastrohamidjojo, H. 2009. Sintesis Senyawa Organik. Erlangga. Jakarta
Simanjuntak, M. T. dan J. Silalahi. 2000. Penuntun Praktikum Biokimia.
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Jurusan Farmasi
USU Press. USU
Sumardjo, D. 2009. Pengantar Kimia : Buku Panduan Mahasiswa
Kedokteran dan Program Strata 1 Fakultas Bioeksata. Buku
Suprayitno, E. dan T. D. Sulistiyati. 2017. Metabolisme Protein.
Universitas Brawijaya Press. Malang.
Tjay, T. H. dan K. Rahardja. 2007. Obat-Obat Penting Khasiat,
Penggunaan, dan Efek-Efek Sampingnya. Gramedia. Jakarta.
Wilson, K. dan J. Walker. 2000. Principles and Techniques of Practical
Biochemistry 5th Edition. Cambridge University Press. Cambridge.
84
Lampiran
Lampiran 2.1. Dokumentasi Uji
Gambar 1. Hasil uji Gambar 2. Hasil uji Gambar 3. Hasil uji

pengendapan dengan pengendapan dengan pengendapan dengan
logam berat pada logam berat pada alkaloid pada tabung 1
tabung 1 tabung 2

pengendapan dengan pengendapan dengan pengendapan dengan
alkaloid pada tabung 2 alkaloid pada tabung 3 alkaloid pada tabung 4
85
pengendapan dengan pengendapan dengan Biuret
garam netral dan garam netral dan
alkohol pada tabung 1 alkohol tabung 2
Milon Hopskin-Cole Xanthoprotein
Molisch Albumin dan Globulin Albumin dan Globulin
pada tabung 1 pada tabung 2a & 2b
86
kasein Neuman terhadap Biuret pada gelatin
kasein
Milon pada gelatin Hopskin-Cole pada Xanthoprotein pada
gelatin gelatin
Molisch pada gelatin reaksi pengendapan reaksi pengendapan
pada tabung 1 pada tabung 2
87
ACARA III
LIPIDA
Disusun oleh :
Kelompok XV
Rifaldo PT/08162

FAKULTAS PETERNAKAN
YOGYAKARTA
2020
88
ACARA III
LIPIDA
Tujuan Praktikum
Praktikum lipida bertujuan untuk mengetahui adanya kelarutan
lipida pada beberapa macam pelarut, mengetahui derajat ketidakjenuhan
asam lemak, dan mengetahui asam lemak bebas yang terdapat dalam
suatu lemak atau minyak. Praktikum lipida juga bertujuan untuk
mengetahui terjadinya dehidrasi gliserol dan untuk mengetahui adanya
lemak.

Lipida adalah sekumpulan senyawa dalam tubuh yang memiliki ciri-
ciri yang serupa dengan malam, gamuk (grease), atau minyak. Lipida
merupakan ester asam lemak yang tersebar di alam dalam bentuk nabati
ataupun hewani (Susanti et al., 2011). Lipida di definisikan sebagai
senyawa yang tak larut dalam air yang di ekstraksi dari makhluk hidup
dengan menggunakan pelarut yang kurang polar atau pelarut non polar.
Istilah lipida mencakup golongan senyawa, senyawa memiliki
keanekaragam struktur, dan tidak ada skema penggolongan lipida yang
bisa diterima di seluruh dunia (Kuchel dan Ralston, 2006).
Fungsi lemak dalam tubuh ialah sebagai pelindung tubuh, berperan
sebagai pelarut vitamin A, D, E, dan K, dan sebagai prekursor untuk
sintesis senyawa-senyawa esensial dalam tubuh seperti hormon, vitamin,
dan enzim. Lipida juga berfungsi sebagai sumber energi yang utama
untuk proses metabolisme tubuh. Lemak yang beredar di dalam tubuh
diperoleh dari dua sumber yaitu dari makanan dan hasil produksi organ
hati, yang bisa disimpan di dalam sel-sel lemak sebagai cadangan energi
(Mamuaja, 2017). Lemak merupakan salah satu bahan penyusun dalam
membran sel (Santika, 2016). Lipida berfungsi sebagai pelindung seluler,
karena lipida merupakan bagian integral dari membran sel. Lipida juga
89
sebagai pelindung aseluler karena lipida merupakan pelindung organisme
dalam bentuk jaringan intergumen.
Lipida memiliki ciri khas yang umum antara lain kandungan pada
hidrokarbonnya diturunkan dari polimerasi asetat yang diikuti dengan
reduksi rantai itu terbentuk. Lipida menghasilkan produk yaitu asam
lemak yang terdiri dari asam lemak jenuh dan asam lemak tidak jenuh.
Asam lemak jenuh yaitu asam lemak yang semua ikatan atom karbon
pada rantai karbonnya beruba ikatan tunggal (jenuh), contohnya adalah
asam palmitat, asam laurat dan asam stearat. Asam lemak tidak jenuh
yaitu asam lemak yang mengandung ikatan rangkap pada rantai
karbonnya, contohnya adalah asam oleat, asam linoleat dan asam
linolenat (Khucel dan Ralston, 2002). Asam amino rantai lurus dan rantai
bercabang yang ditemukan di alam dalam bentuk siklik baik jenuh maupun
tak jenuh (Susanti et al., 2011). Struktur asam lemak jenuh dan tidak
jenuh dapat dilihat pada gambar 3.1 dan 3.2.
Gambar 3.1 Struktur Asam Lemak Jenuh

(Sartika, 2010)
Gambar 3.2 Struktur Asam Lemak Tidak Jenuh

(Sartika, 2010)
Sifat asam lemak ditentukan oleh rantai hidrokarbonnya (Susanti et
al., 2011). Lipida umumnya bersifat nonpolar atau hidrofobik, oleh karena
itu dibutuhkan suatu zat pelarut non polar seperti khloroform, eter,
benzena, dan heksana. Lipida merupakan golongan senyawa tersendiri
tetapi seringkali lipida bergabung dengan senyawa lain seperti karbohidrat
dan protein. Gabungan dari senyawa karbohidrat bernama glikolipid,
sedangkan gabungan dari senyawa protein bernama lipoprotein.
90
Lipoprotein merupakan partikel berbentuk bola yang berfungsi
mentranspor lipida dalam darah, antara lain kolesterol dan trigliserida.
Lipida mengalami hidrolisis yang menghasilkan asam lemak yang
berperan dalam metabolisme tumbuhan maupun hewan.
Reaksi-reaksi lipida antara lain penyabunan atau saponifikasi
dimana proses reaksi hidrolisis ester dengan penambahan basa kuat
NaOH dan KOH yang akan membentuk asam karboksilat dan alkohol.
Saponifikasi adalah proses hidrolisis basa terhadap lemak atau minyak
(Naomi et al., 2013). Saponifikasi terbagi menjadi dua yaitu jenis
saponifikasi triasilgliserol, fosfolipid, gliserolphospolipid, sfingoglikolipid
dan lilin. Jenis kedua adalah non saponifikasi yaitu kolestrol, hormon
steroida, asam empedu, eicosanoic acid (Stoker, 2013). Reaksi kimia
saponifikasi adalah sebagai berikut :
(C17H35COO)3 + 3 KOH → 3 C17H35COOK + C3H5(OH)3

Gambar 3.3 Reaksi Kimia Saponifikasi
(Naomi et al., 2013)
Reaksi adisi yaitu reaksi rekasi terjadinya penambahan atau
penangkapan, dalam reaksi adisi senyawa ikatan rangkap suatu zat
ditambahkan sehingga ikatan rangkap tersebut menjadi ikatan tunggal
(Sumardjo, 2006). Reaksi hidrogenasi mengubah lemak tidak jenuh
menjadi lemak jenuh. Reaksi hidrogenasi akan dipercepat dengan proses
pemanasan dan adanya katalisator (Mamuaja, 2017). Ketengikan atau
ransiditas terjadi karena kecepatan ketengikan oksidatif dipengaruhi oleh
jumlah kandungan asam lemak tidak jenuh dan jumlah ikatan ganda asam
lemak dalam minyak jika semakin tinggi kandungan asam lemak tidak
jenuh dan jumlah ikatan ganda maka semakin cepat terjadinya proses
ketengikan oksidatif (Alamsyah, 2005). Semakin cepat proses oksidasi,
maka semakin besar peroksida yang terbentuk dan menyebabkan minyak
semakin cepat tengik (Maharani et al., 2012).
Lipida diklasifikasikan menjadi tiga golongan yaitu lipida sederhana,
lipida kompleks, dan derivat lipida. Lipida sederhana merupakan ester
91
asam-asam lemak dengan bermacam-macam alkohol misalnya yaitu
lemak, minyak, dan lilin. Kelompok lipida kompleks merupakan ester
asam-asam lemak yang pada hidrolisis mengasilkan asam lemak, alkohol,
dan juga zat-zat lain. Fosfolipid dan glikolipid merupakan golongan lipida
yang termasuk dalam lipid kompleks. Kemudian yang terakhir yaitu derivat
lipida, yaitu semua senyawa yang dihasilkan pada hidrolisis lipida
sederhana dan lipida majemuk yang masih mempunyai sifat-sifat seperti
asam lemak. Derivat lipida yaitu asam-asam lemak, alkohol, dan
hidrokarbon (Setyawati, 2018).
Penentuan yang penting dari keseluruhan nilai nutrisi setiap bahan
penyusun pakan adalah kandungan lemaknya. Komponen penting lemak
adalah trigriserida, fosfolemak, wax, steriod, dan spigomieli. Trigriseirda
merupakan ester asam lemak dan gliserol serta merupakan cara utama
dimana hewan menyimpan energi. Fosfolemak merupakan ester dari
asam lemak dan asam fosfolibdat serta merupakan komponen utama dari
membran selular. Wax merupakan ester asam lemak dari alkohol
monohidrat berat molekul tinggi, dan sebagaimana trigiseralida yang
merupakan komponen simpanan energi dalam tanaman dan hewan.
Steroid secara biologis penting dalam berbagai proses reproduksi. Lemak
jenis ini biasanya ini biasanya alkohol polisiklik rantai panjang dan
merupakan prekusor dari hormon sex atau lainnya pada ikan serta udang.
Spigomielin merupakan ester asam lemak dari spigosin dan merupakan
komponen-komponen lemak dari otak serta jaringan syaraf (Subandiyono
& Sri Hastuti, 2016).
Prinsip kerja dari uji kelarutan dan terjadinya emulsi adalah lipida
merupakan senyawa biomolekul organik yang tidak larut dalam air namun
larut dalam pelarut nonpolar seperti khloroform, eter, benzena, dan aseton
(Stanfield, 2006). Prinip kerja uji angka yod adalah terjadi reaksi adisi
karena adanya ikatan rangkap pada asam lemak. Semakin banyak minyak
yang dibutuhkan maka semakin asam lemak semakin jenuh atau makin
sedikit memiliki ikatan rangkap (Ketaren, 2005).
92
Prinsip dari uji akrolein adalah lemak akan dihidrolisis menjadi
asam lemak dan gliserol. Griserol bereaksi dengan KHSO 4 akan
terdehidrasi menjadi akrolein dan H2O yang menimbulkan bau yang
sangat menyengat ketika dipanaskan (Ketaren, 2005). Prinsip kerja dari uji
angka asam adalah semakin banyak KOH yang dibutuhkan, maka
semakin banyak asam lemak bebas yang dihasilkan dan semakin tinggi
angka asam (Rohman dan Sumantri, 2018). Prinsip kerja percobaan noda
lemak ini adalah jika terdapat noda pada kertas minyak menandakan
bahwa tepung tersebut mengandung lemak (Faisal et al., 2016).
93
Materi dan Metode
Materi
Alat. Alat yang digunakan dalam praktikum lipida antara lain tabung
reaksi, rak tabung reaksi, pipit tetes, timbangan digital, statis, buret,
lempeng tetes, tabung erlenmeyer, stopwatch, lampu bunsen, corong
gelas, penjepit tabung, pump pipet, dan korek api.
Bahan. Bahan yang digunakan dalam praktikum lipida antara lain
larutan eter, kertas minyak, air, larutan khloroform, Na2CO3 1%, larutan
empedu encer, minyak kelapa, minyak zaitun (olive), minyak hewan,
minyak jagung, pelarut lemak, pereaksi Hubl, indikator phenolptalein,
tepung gandum, tepung kedelai, margarin, KOH 0,1 N, NaHSO4, dan
larutan gliserol.
Metode
Kelarutan dan terjadinya emulsi
Uji Kelarutan. Disiapkan lima tabung reaksi dan masing-masing
tabung reaksi diisi 2 ml khloroform, 2 ml eter, 2 ml akuades, 2 ml larutan
1% Na2CO3, dan 2 ml larutan empedu encer. Kemudian ke dalam masing-
masing tabung reaksi ditambahkan tiga tetes minyak kelapa. Selanjutnya
masing-masing tabung digojok dan dibiarkan selama 5 menit. Dicatat
perubahan yang terjadi pada setiap larutan.
Ketidak-jenuhan
Uji Angka Yod. Larutan khloroform sebanyak 9 ml dan 10 tetes
pereaksi Hubl-Yod dicampurkan. Kemudian larutan campuran tersebut
dibagi menjadi dalam empat tabung reaksi. Selanjutnya pada tabung
pertama ditambahkan setetes minyak zaitun (olive), tabung kedua
ditambahkan setetes minyak kelapa, tabung ketiga ditambahkan setetes
minyak jagung, dan tabung keempat ditambahkan setetes minyak hewan.
Setiap tabung digojok dan diamati perubahan warnanya. Apabila warna
merah muda pada larutan belum hilang, ditambahkan setetes demi
94
setetes larutan sesuai dengan apa yang ditambahkan sebelumnya.
Selanjutnya dicatat jumlah minyak yang ditambahkan hingga warna
hilang.
Uji Angka Asam. Ditimbang 2,5 gram sampel kemudian dicairkan
dan dimasukkan kedalam 12,5 ml pelarut lemak (eter). Selanjutnya
ditambahkan 0,25 ml larutan phenolptalein dan dihomogenkan. Setelah
itu, campuran larutan tersebut dititrasi dengan 0,1 N KOH sampai
berwarna pink. Jumlah ml alkali standar yang diperlukan dicatat dan
dihitung angka asam dari lemak dengan persamaan angka asam.
Dehidrasi Gliserol
Uji Akrolein. Disiapkan dua tabung reaksi dengan masing-masing
tabung diisi beberapa tetes minyak kelapa pada tabung pertama dan
gliserol pada tabung kedua. Selanjutnya ditambahkan pada setiap tabung
1 ml KHSO4. Kedua tabung tersebut kemudian dipanaskan dan diamati
bau yang timbul.
Ada Tidaknya Lemak atau Minyak
Uji Noda Lemak. Bahan yang akan diteliti kandungan minyak atau
lemak dimasukkan ke tabung reaksi sedikit saja. Kemudian ditambahkan 4
ml eter dan digojok. Selanjutnya lapisan eter diambil lalu diteteskan ke
lempengan tetes (plat tetes) dan dibiarkan hingga lapisan eter menguap.
Setelah itu, sisa lapisan eter diusap menggunakan kertas minyak dan
diamati ada atu tidaknya noda lemak.
95
Uji Kelarutan dan Terjadinya Emulsi

Uji kelarutan dan terjadinya emulsi bertujuan untuk mengetahui
adanya kelarutan lipida pada beberapa macam pelarut. Prinsip kerja dari
uji kelarutan dan terjadinya emulsi adalah lipida merupakan senyawa
biomolekul organik yang tidak larut dalam air namun larut dalam pelarut
nonpolar seperti khloroform, eter, benzena, dan aseton (Stanfield, 2006).
Lipida yang dilarutkan dalam larutan basa akan mengalami saponifikasi
dan lipida yang dilarutkan dalam larutan asam akan mengalami emulsi
(Mamuaja, 2017). Reagen yang digunakan dalam uji ini yaitu larutan
khloroform, eter, akuades, larutan 1% Na2CO3, dan larutan empedu encer.
Larutan empedu encer berfungsi sebagai pelarut yang menguji kelarutan
dan terjadinya emulsi pada lipida. Penambahan khloroform dan eter
berfungsi sebagai pelarut lemak (Yuliana, 2018). Penambahan Na 2CO3
1% bertujuan untuk mengkatalis dan sebagai emulsifier (Destiana et al.,
2009). Minyak kelapa berfungsi sebagai lipida yang akan diuji reaksi apa
yang saat dicampur dengan beberapa macam pelarut. Hasil yang
dipeloreh berdasarkan percobaan uji kelarutan yang telah dilakukan dapat
disajikan pada tabel 3.1.
Tabel 3.1 Hasil Uji kelarutan dan terjadinya emulsi
Tabung Larutan Hasil
1 Khloroform Larut
2 Eter Larut
3 Akuades Tidak larut
4 Na2CO3 Terjadi saponifikasi
5 Empedu encer Terjadi emulsi
Berdasarkan hasil praktikum, diketahui khloroform dan eter
merupakan pelarut nonpolar sehingga minyak kelapa pada tabung 1 dan 2
larut dalam kedua larutan tersebut. Akuades memiliki fungsi sebagai
pelarut polar yang tidak dapat melarutkan senyawa lipida, sehingga
minyak kelapa pada tabung 3 tidak dapat larut. Pada tabung 4 yang berisi
Na2CO3 terjadi saponifikasi. Na2CO3 merupakan garam basa yang
96
menyebabkan terjadinya saponifikasi karena minyak kelapa yang
direaksikan dengan Na2CO3 akan menghasilkan garam Na asam lemak
(sabun) dan gliserol. Pada tabung 5 yang berisi larutan empedu cair
kemudian dicampurkan dengan minyak kelapa mengalami emulsi.
Lipida merupakan golongan senyawa hidrokarbon alifatik nonpolar
dan hidrofobik sehingga lipida tidak larut dalam polar seperti akuades,
tetapi larut dalam pelarut nonpolar atau organik seperti khloroform dan
eter (Sembiring, 2010). Sumardjo (2009) menjelaskan bahwa reaksi
saponifikasi adalah reaksi hidrolisis antara triasilgliserol dengan basa kuat
seperti NaOH atau KOH sehingga menghasilkan garam Na asam lemak
atau sabun dan gliserol. Reaksi saponifikasi atau saponifikasi yang terjadi
dapat disajikan pada gambar 3.4.
Gambar 3.4 Reaksi saponifikasi lemak

(Sumardjo, 2009)
Emulsi yang terjadi akibat reaksi larutan empedu encer dengan
minyak kelapa terjadi karena empedu tidak mengandung enzim
pencernaan, tetapi mengandung garam empedu yang berfungsi
membantu dalam pencernaan dan penyerapan lemak. Garam empedu
berperan melarutkan lemak dalam air, dengan cara membuat stabil emulsi
lemak yang berasal dari makanan dan apabila garam empedu bergabung
dengan kolesterol, gliserida, dan asam lemak (Sumardjo, 2008). Karena
itu kekurangan cairan empedu dapat menurunkan pencernaan lemak dan
97
kekurangan vitamin-vitamin yang hanya larut dalam lemak seperti vitamin
A, D, E, dan K.
Faktor-faktor yang mempengaruhi hasil uji antara lain tingkat
kepolaran larutan, jenis pelarut dan derajat kelarutan, kehomogenan
larutan, dan kadar pH yang terkandung pada larutan (Hidayanto, 2017).
Lemak hanya dapat larut pada pelarut nonpolar saja dan pada pelarut
polar tidak akan larut. Ketka suatu larutan dalam keadaan asam dan
dicampurkan dengan lemak maka akan terjadi emulsi, sedangkan ketika
larutan dalam suasana basa dicampurkan dengan lemak maka akan
terjadi reaksi penyabunan atau saponifikasi. Hasil yang diperoleh sesuai
dengan literatur yang ada karena senyawa nonpolar seperti lemak hanya
larut dalam senyawa nonpolar dan proses saponifikasi terjadi antara
triasilgliserol dan basa serta larutan empedu yang dapat mengemulsi
lemak agar diserap oleh tubuh.
Uji Angka Yod
Percobaan uji angka yod bertujuan untuk mengetahui derajat
ketidakjenuhan asam lemak. Prinip kerja uji angka yod adalah terjadi
reaksi adisi karena adanya ikatan rangkap pada asam lemak. Semakin
banyak minyak yang dibutuhkan maka semakin asam lemak semakin
jenuh atau makin sedikit memiliki ikatan rangkap (Ketaren, 2005). Menurut
Anggraini dan Tjahjani (2012) bahwa penambahan khloroform berfungsi
untuk melarutkan lemak, sedangkan HgCl2 berfungsi sebagai katalisator
reaksi. Berdasarkan Uji angka yod yang telah dilakukan, diperoleh hasil
yang disajikan pada Tabel 3.2.
Tabel 3.2 Hasil Uji angka yod
Tabung Larutan Hasil (tetes)
1 Minyak kelapa 9
2 Minyak jagung 8
3 Minyak hewan 6
4 Minyak zaitun (olive) 5
Larutan khloroform sebanyak 12 ml yang dicampurkan dengan 12
tetes pereaksi Hubl akan dan dihomogenkan akan berubah warna menjadi
pink. Pada tabung 1 larutan campuran tersebut setelah diteteskan satu
98
tetes minyak kelapa dan digojok tetap berwarna pink, kemudian larutan
tersebut akan berubah menjadi bening atau tidak berwarna ketika
ditambahkan 9 tetes minyak kelapa lagi. Pada tabung 2 yang berisi larutan
campuran dan ditambahkan satu tetes minyak jagung dan digojok tetap
berwarna pink, kemudian larutan ditambahkan 8 tetes minyak jagung
berubah warna menjadi tidak berwarna. Pada tabung 3 yang berisi larutan
campuran dan ditambahkan satu tetes minyak hewan dan digojok tetap
berwarna pink, kemudian larutan berubah menjadi tidak berwarna ketika
ditambahkan 6 tetes minyak hewan. Pada tabung 4 yang berisi larutan
campuran dan ditambahkan satu tetes minyak zaitun dan digojok tetap
berwarna pink, kemudian larutan akan berubah warna menjadi tidak
berwarna ketika larutan ditambahkan 5 tetes minyak zaitun.
Banyaknya tetesan minyak yang ditambahkan pada masing-masing
tabung menunjukkan bahwa semakin banyak minyak yang ditambahkan
maka semakin jenuh minyak tersebut dan kualitas minyak semakin bagus.
Kualitas minyak yang bagus membuat angka iod yang terukur semakin
rendah dan menunjukkan bahwa minyak dengan kejenuhan yang tinggi
baik untuk kesehatan karena tidak meningkatkan kolesterol. Hasil uji yang
dilakukan, dapat dikatakan tidak sesuai dengan literatur. Hal ini
dikarenakan minyak hewan seharusnya yang paling banyak diteteskan,
karena kadar asam lemak tidak jenuh dalam lemak hewani lebih sedikit
dibandingkan lemak nabati (Ketaren, 2008). Hal ini dapat terjadi karena
kondisi minyak yang kurang baik, baik dalam kandungan nutrientnya atau
lama dan cara penyimpanan. Semakin banyak angka yod yang terukur,
maka semakin banyak pula kandungan asam lemak tak jenuh yang ada
dalam minyak yang mengindikasikan bahwa semakin baik kualitas dari
suatu minyak.
Asam lemak merupakan penyusunan lemak dan minyak, asam
lemak tidak jenuh mampu mengikat yod dan membentuk senyawa jenuh.
Menurut Dewi dan Nurul (2012), ketidakjenuhan asam lemak dapat
ditentukan berdasarkan angka yod. Banyaknya yod yang diikat
99
menunjukkan banyaknya ikatan rangkap yang ada. Angka yod dinyatakan
sebagai banyaknya gram yod yang diikat oleh 100 gram minyak atau
lemak, sehingga semakin banyak angka yod yang terukur, maka semakin
banyak kandungan asam lemak tak jenuh yang terdapat dalam suatu
minyak dan dapat mengindikasikan kualitas minyak tersebut semakin baik.
Poedjiadi (1994) menyebutkan bahwa pada suhu ruangan lemak pada
hewan umumnya berupa zat padat, sedangkan minyak dari tumbuhan
berupa zat cair, lemak yang mempunyai titik lebur tinggi mengandung
asam lemak jenuh, sedangkan lemak cair atau minyak mengandung asam
lemak tidak jenuh. Mappiratu (2005) menyebutkan bahwa asam lemak
jenuh tidak memiliki ikatan ganda, contohnya asam palmitat sedangkan
asam lemak tak jenuh tunggal memiliki satu ikatan ganda, contohnya
asam oleat, asam lemak tak jenuh jamak memiliki lebih dari satu ikatan
ganda, contohnya asam lemak omega-3 dan omega-6. Faktor-faktor yang
dapat mempengaruhi hasil uji angka yod salah satunya adalah kondisi
minyak yang digunakan, ketika minyak sebenarnya memiliki kualitas yang
bagus namun saat penyimpanan terkontaminasi dengan bahan lain dapat
membuat minyak tersebut berubah kualitasnya. Menurut Dewi dan Hidajati
(2012) bahwa kualitas minyak dapat berpengaruh dalam hasil uji angka
yod, dimana semakin baik kualitas minyak maka semakin banyak angka
yod yang terhitung.
Uji Akrolein
Uji Akrolein bertujuan untuk mengetahui terjadinya dehidrasi
gliserol. Prinsip dari Uji Akrolein adalah lemak akan dihidrolisis menjadi
asam lemak dan gliserol kemudian griserol yang bereaksi dengan KHSO 4
akan terdehidrasi menjadi akrolein dan H2O yang menimbulkan bau yang
sangat menyengat ketika dipanaskan (Ketaren, 2005). Fungsi
penambahan KHSO4 untuk mengkatalis minyak kelapa dan gliserol,
seedangkan minyak kelapa dan gliserol sebagai bahan yang akan
digunakan untuk uji akrolein (Agusta, 2017). Fungsi pemanasan yang
dilakukan untuk mempercepat proses dehidrasi yang terjadi (Susanti,
100
2012). Berdasarkan uji akrolein yang telah dilakukan, diperoleh hasil yang
dapat dilihat pada Tabel 3.3.
Tabel 3.3 Hasil Uji akrolein
Tabung Perlakuan Bau
1 Minyak kelapa Menyengat
2 Gliserol Sangat menyengat
Berdasarkan hasil yang diperoleh, pada tabung 1 0,5 ml minyak
kelapa yang ditambahkan 1 ml KHSO4 kemudian dipanaskan selama 5
menit menimbulkan bau menyengat sedangkan pada tabung 2 0,5 ml
gliserol yang ditambahkan 1 ml KHSO4 kemudian dipanaskan selama 4
menit menimbulkan bau yang lebih menyengat berupa ketengikan. Bau
ketengikan yang muncul pada tabung 2 disebabkan gliserol ketika
ditambahkan KHSO4 dan dipanaskan akan terhidrolisis menjadi akrolein
yang menimbulkan bau tengik yang lebih menyengat. Minyak kelapa yang
ditambahkan KHSO4 kemudian dipanaskan terlebih dahulu menjadi
gliserol dan kemudian baru menjadi asam lemak, hal inilah yang membuat
tabung 1 menimbulkan bau yang tidak terlalu menyengat dibandingkan
dengan tabung 2. Chairunnisa (2013) menyatakan bahwa minyak akan
terhidrolisis menjadi griserol dan asam lemak bebas.
Penyebab munculnya bau tengik pada suatu lipida menurut Angelia
(2016) dibagi menjadi tiga golongan, yaitu ketengikan oleh oksidasi,
ketengikan oleh enzim, dan ketengikan oleh hidrolisis. Ketengikan oleh
oksidasi ini disebabkan oleh otooksidasi radikal asam lemak tidak jenuh
dalam lemak yang dimulai dengan pembentukan radikal-radikal bebas
yang disebabkan oleh cahaya, panas, peroksida lemak atau
hodroperoksida, logam-logam berat, dan enzim lipoksidase. Ketengikan
oleh enzim terjadi karena suatu bahan yang memiliki kadar air dan
kelembapan tertentu akan menjadi tempat pertumbuhan jamur. Jamur
tersebut akan mengeluarkan enzim lipoclastic yang menguraikan
trigeliserida menjadi asam lemak bebas dan gliserol. Disamping itu, enzim
peroksida dapat mengoksidasi asam lemak jenuh pada ikatan karbonatom
sehingga akan membentuk asam ketin dan akhirnya metil keton.
101
Ketengikan oleh hidrolisis ini akan mengubah minyak atau lemak menjadi
bermacam-macam asam lemak bebas dan gliserol.
Bau tengik yang dihasilkan pada percobaan ini karena beberapa
faktor, yaitu jenis lipida yang terkandung pada larutan dan adanya
kandungan oksigen pada larutan. Faktor lain yang berpengaruh pada
percobaan ini menurut Winarni et al. (2010) adalah waktu lamanya
pemanasan. Pemanasan yang dilakukan agar terjadi reaksi hidrolisis.
Reaksi hidrolisis ini dapat menyebabkan kerusakan minyak atau lemak
karena adanya kandungan air dalam minyak atau lemak akan
menyebabkan munculnya bau ketengikan. Hasil percobaan yang
didapatkan sesuai dengan literatur yang ada.
Uji Angka Asam
Percobaan uji angka asam bertujuan untuk mengetahui banyaknya
asam lemak bebas yang terdapat dalam suatu lemak atau minyak. Prinsip
kerja dari uji angka asam adalah semakin banyak KOH yang dibutuhkan,
maka semakin banyak asam lemak bebas yang dihasilkan dan semakin
tinggi angka asam (Rohman dan Sumantri, 2018). Fungsi dari larutan eter
untuk melarutkan lemak pada margarin dan minyak kelapa yang
digunakan sebagai sampel. Eter merupakan pelarut nonpolar yang
mampu melarutkan lemak (Daud, 2018). Penambahan larutan
phenolptalein sebagai indikator pembanding bahwa larutan telah
mencapai titik puncak titrasi yang ditandai dengan perubahan warna
(Apriani et al., 2016). Hasil uji angka asam, dapat disajikan pada Tabel
3.4.
Tabel 3.4 Hasil Uji angka asam
Tabung Perlakuan Angka asam (mg KOH/ gr)
1 Minyak Kelapa 1,792
2 Margarin 2,68
Berdasarkan percobaan yang telah dilakukan, dapat diketahui KOH
yang dibutuhkan untuk mentitrasi tabung 1 berisi sampel minyak kelapa
sebanyak 0,8 ml sedangkan tabung 2 berisi sampel margarin sebanyak
1,2 ml. Dari jumlah KOH yang dibutuhkan, diperoleh hasil dari perhitungan
102
angka asam dari sampel minyak kelapa sebesar 1,792 mg KOH/gram
sedangkan pada sampel margarin diperoleh hasil sebesar 2,68 mg
KOH/gram. Hasil percobaan ini menyatakan bahwa angka asam pada
sampel margarin lebih besar daripada angka asam pada sampel minyak
kelapa. Hal ini menunjukkan hasil percobaan uji angka asam sudah sesuai
dengan literatur.
Margarin lebih banyak menghasilkan asam lemak daripada minyak
kelapa. Asam lemak bebas adalah asam yang dibebaskan pada hidrolisis
lemak. Kadar asam lemak bebeas dengan minyak kelapa sawit biasanya
dibawah 1%, jika dicicipi akan terasa pada permukaan lidah dan tidak
berbau tengik. Pengaruh kadar asam lemak bebas yang tinggi terhadap
mutu produksi minyak akan dapat menimbulkan ketengikan pada minyak
dan meningkatnya kadar kolesterol dalam minyak (Sopianti et al., 2017).
Menurut Ramakrishnan et al. (2001) bahwa faktor yang mempengaruhi
perbedaan angka asam pada hasil percobaan yaitu dekomposisi lemak
selama penyimpanan, tindakan bakteri, dan bahan kimia yang terdapat
pada sampel minyak kelapa dan margarin.
Noda Lemak
Percobaan uji noda lemak bertujuan untuk mengetahui adanya
lemak. Sampel yang digunakan dalam percobaan yaitu tepung kedelai
dan tepung gandum. Prinsip kerja percobaan noda lemak ini adalah jika
terdapat noda pada kertas minyak menandakan bahwa tepung tersebut
mengandung lemak (Faisal et al., 2016). Jika noda pada kertas minyak
semakin banyak maka semakin banyak pula kandungan lemak pada
sampel tersebut. Eter yang digunakan dalam pengujian ini berfungsi
sebagai pelarut lemak karena larutan eter bersifat nonpolar yang dapat
melarutkan lemak (Sumardjo, 2008). Tepung gandum dan tepung kedelai
berfungsi sebagai bahan yang digunakan untuk mengetahui ada atau
tidaknya lemak. Pengusapan kertas minyak bertujuan untuk mengetahui
ada atau tidaknya noda pada kertas karena minyak. Tepung kedelai akan
memiliki kadar lemak lebih tinggi daripada tepung gandum. Berdasarkan
103
uji noda lemak yang telah dilakukan, diperoleh hasil yang disajikan pada
Tabel 3.5.
Tabel 3.5 Hasil Uji noda lemak
1 tepung gandum Sedikit noda lemak
2 tepung kedelai Banyak noda lemak
Berdasarkan uji yang telah dilakukan, bahwa pada tetesan di plat
tetes dari tabung pertama yang berisi eter dan tepung gandum ketika
diusap menggunakan kertas minyak didapatkan sedikit noda lemak. Pada
tetesan di plat tetes dari tabung kedua yang berisi eter dan tepung kedelai
ketika diusap menggunakan kertas minyak didapatkan banyak noda
lemak. Tepung gandum memiliki sedikit lemak, sehingga ketika bereaksi
dengan pelarut lemak (eter) noda lemak yang dihasilkan sedikit. Berbeda
dengan tepung kedelai yang memiliki banyak lemak, ketika bereaksi
dengan pelarut lemak (eter) noda lemak yang dihasilkan lebih banyak.
Adanya noda lemak pada kertas minyak menurut Sumardjo (2009)
dikarenakan kandungan lemak pada tepung kedelai adalah 6,26%
sedangkan kandungan lemak pada tepung gandum adalah 1,3%. Menurut
Rukmana (1997) bahwa kandungan lemak pada kedelai lebih banyak
daripada gandum karena sebagian besar kandungan pada gandum adalah
karbohidrat sedangkan pada kedelai adalah protein dan lemak. Hasil
percobaan sesuai dengan literatur yang ada. Faisal et al. (2016) bahwa
faktor-faktor yang mempengaruhi banyaknya noda lemak pada kertas
saring salah satunya adalah banyak sedikitnya kandungan lemak pada
suatu bahan. Hal ini dikarenakan ketika pada suatu bahan terdapat banyak
lemak, maka endapan yang timbul pada kertas minyak juga banyak.
104
Kesimpulan
Berdasarkan praktikum lipida yang telah dilakukan dapat

disimpulkan bahwa lipida tidak dapat larut dalam akuades dan pelarut
polar tetapi lipida dapat larut pada pelarut nonpolar yaitu khloroform dan
eter, terjadi saponifikasi atau saponifikasi apabila lipida bereaksi dengan
basa dan akan teremulsi apabila bereaksi dengan asam. Semakin banyak
minyak yang diperlukan maka semakin sedikit ikatan rangkapnya
sehingga suatu larutan akan semakin jenuh. Sampel margarin
mengandung angka asam sebesar 2,68 mg KOH/gram sedangkan minyak
kelapa 1,792 mg KOH/gram. Semakin banyak basa (KOH) yang
dibutuhkan maka akan semakin banyak asam lemak bebas dan akan
semakin tinggi angka asam pada suatu larutan. Lemak akan terhidrolisis
menjadi asam lemak dan gliserol, kemudian gliserol akan bereaksi dengan
KHSO4 yang kemudian terdehidrasi menjasi akrolein dan H2O yang
menimbulkan bau menyengat. Semakin banyak terdapat noda lemak
maka semakin banyak pula kandungan lemak atau minyak pada suatu
sampel.
105
Daftar Pustaka
Agusta, E. 2017. Analisis Lipid secara Kimia dan Triasetin dengan
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi pada Filter Rokok. Skripsi Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Institut Pertanian Bogor.
Bogor.
Alamsyah, N. A. 2005. Virgin coconut oil: minyak penakluk aneka
penyakit. AgroMedia Pustaka. Jakarta.
Angelia, I.O. 2016. Reduksi tingkat ketengikan minyak kelapa dengan
pemberian antioksidan ekstrak duan sirih. Jtech. 4(1) : 32-36.
Anggraini, K. D. dan S. Tjahjani. 2012. Karakteristik piropilit teraktivasi
asam sulfat dan penetapan titik jenuh adsropsi asam lemak bebas
dan bilangan peroksida. UNESA’s Journal of Chemistry. 1(2) :45.
Apriani, F., N. Indiawati, dan L. Destiarti. 2016. Ekstrak metanol buah
lakum (Cayratia trifolia (L.) Domin) sebagai indikator alami pada
titrasi basa kuat asam kuat. JKK. 5(4) : 74.
Daud, M. Z. 2018. Teknologi Formulasi Ransum Unggas. Syiah Kuala
University Press. Banda Aceh.
Destiana, A. N., Ismiyarto, dan Ngadiwiyana. 2009. Sintesis emulsifier
ester sukrosa asam lemak (FACE) dari minyak jagung
menggunakan Na2CO3. Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi. 12 (3) : 88-
92.
Dewi, M. T. Indah, dan N. Hidajati. 2012. Peningkatan mutu minyak
goreng curah menggunakan adsorben bentonit teraktiavsi. UNESA
Journal of Chemistry. 1 (2) : 4-5.
Faisal, R., R. Purwanti, dan N. Chotijatun. 2016. Pengaruh jenis adsorben
dalam proses enfleurasi minyak atsiri daun kemangi (Ocimum
Sanctum L.). Jurnal Permata Indonesia. 7(1) : 50-55.
Hidayanto, A. P. 2017. Modul Praktikum Biokimia. Universitas Esa Unggul.
Jakarta.
Ketaren, S. 2005. Pengantar Teknologi Minyak dan Lemak Pangan. UI
Press : Jakarta.
Ketaren, S. 2008. Pengantar Teknologi Minyak dan Lemak Pangan. UI
Press. Jakarta.
Kuchel, P. dan G.B. Ralston. 2006. Schaum’s Easy Outlines. Erlangga.
Jakarta.
Kuchel, P. W. and B. Gregory., Ralston. 2002. Biokimia. Alih Bahasa
Lestari. Erlangga. Jakarta.
Maharani, D. M., N. Bintoro, dan B. Rahardjo. 2012. Kinetika perubahan
ketengikan (rancidity) kacang goreng selama proses penyimpanan.
Agritech. 23(1) : 15-22.
106
Mamuaja, C. F. 2017. Lipida. Unsrat Press. Manado.
Mappiratu. 2005. Lipida Pangan: Kimia, Biokimia, dan Bioteknologi.
Tadulako University Press. Palu.
Naomi, P., A. M. L. Gaol., dan M. Y. Toha. 2013. Pembuatan sabun lunak
dari minyak goreng bekas ditinjau dari kinetika reaksi kimia. Jurnal
Teknik Kimia. 19(2) : 42 – 48.
Poedjiadi, A. 1994. Dasar-Dasar Biokimia. UI Press. Jakarta.
Ramakrishnan, S., K.G. Prasannan, dan R. Rajan. 2001. Textbook Of
Medical Biochemistry third ed. Orient Logman. New York.
Rohman, A. S. dan Sumantri. 2018. Analisis Makanan. Gadjah Mada
Rukmana, R. 1997. Kacang Hijau dan Budidaya Pasca Panen. Kanisius.
Yogyakarta.
Santika, I. G. P. N. A. 2016. Pengukuran tingkat kadar lemak tubuh
melalui jogging selama 30 menit mahasiswa putera semester IV
FPOK IKIP PGRI Bali tahun 2016. Jurnal Pendidikan Kesehatan
Rekreasi. 1 : 89-91.
Sartika, R. A.D. 2010. Pengaruh asam lemak jenuh, tidak jenuh dan asam
lemak trans terhadap kesehatan. Jurnal Kesehatan Masyarakat
Nasional 2(4): 154-160.
Sopianti, D. S., Herlina., dan H. T. Saputra. 2017. Penetapan kadar asam
lemak bebas pada minyak goreng. Jurnal Katalisator Akademi
Farmasi Al-Fatah Bengkulu. 2(2) : 104.
Stroker, H. S. 2013. General, Organic, and Biological Chemistry.
Brooks/Cole. USA.
Subandiyono dan Sri Hastuti. 2016. Buku Ajar Nutrisi Ikan. Lembaga
Pengembangan dan Penjaminan Mutu Pendidikan Undip.
Semarang.
Sumardjo, D. 2006. Pengantar Kimia: Buku Paduan Mahasiswa
Kedokteran dan Program S1 Fakultas Bioeksat. Buku Kedokteran
EGC. Jakarta.
Sumardjo, D. 2008. Pengantar Kimia : Buku Panduan Kuliah Mahasiswa
Sumardjo, D. 2009. Pengantar Kimia : Buku Panduan Kuliah Mahasiswa.
EGC. Jakarta.
Susanti, W., N. W. Jiniana., D. Rositasari., N. Firti., dan N. Purnama.
2011. Kelarutan lipida serta pengaruh emulgator terhadap kelarutan
lipida. Jurnal Biokimia Praktikum ke-3 Universitas Islam Negeri
Syarif Hidayatullah. 1(1) :1.
107
Winarni, W. Sunarto, dan S. Martini. 2010. Penetralan dan adsorbsi
minyak goreng bekas menjadi minyak goreng layak konsumsi.
Jurnal Kimia FMIPA UNNES. 8(1) : 46-56.
Yuliana, D. A. 2018. Buku Ajar Biokimia Farmasi. Jakad Publishing.
Surabaya.
108
Lampiran
Lampiran 3.1. Perhitungan Angka Asam
𝑚𝑙 𝑡𝑖𝑡𝑟𝑎𝑠𝑖 (𝐾𝑂𝐻 0,1𝑁) × 5,6
𝑅𝑢𝑚𝑢𝑠 𝐴𝑛𝑔𝑘𝑎 𝐴𝑠𝑎𝑚 =
𝑚𝑙 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
1,2 ×5,6
• 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑚𝑎𝑟𝑔𝑎𝑟𝑖𝑛 = 2,5 = 2,68 𝑚𝑔 𝐾𝑂𝐻⁄𝑔𝑟𝑎𝑚
0,8 ×5,6
• 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑚𝑖𝑛𝑦𝑎𝑘 𝑘𝑒𝑙𝑎𝑝𝑎 = = 1,792 𝑚𝑔 𝐾𝑂𝐻⁄𝑔𝑟𝑎𝑚
2,5
Lampiran 3.2. Dokumentasi praktikum
Gambar 1. Hasil Uji Kelarutan Gambar 2. Hasil Uji Angka Yod

dan terjadinya emulsi
Gambar 3. Hasil Uji Akrolein Gambar 4. Hasil Uji Akrolein

pada minyak kelapa pada Gliserol
109
Gambar 5. Hasil Uji Angka Asam pada Minyak Kelapa dan
Margarin
Gambar 6. Hasil Uji Noda Lemak pada Tepung Kedelai dan Tepung
Gandum
110
Lampiran 3.3. Lembar Kerja
111
112
113
ACARA IV
PENCERNAAN
Disusun oleh :
Rifaldo PT/08162

FAKULTAS PETERNAKAN
YOGYAKARTA
2020
114
ACARA IV
PENCERNAAN
Tujuan Praktikum
Praktikum biokimia dasar acara pencernaan bertujuan untuk
mengetahui kemampuan hidrolisis enzim amilase saliva terhadap amilum,
mengetahui enzim pepsin dalam menghidrolisis protein, mengetahui
kemampuan enzim amilase pankreas dalam menghidrolisis amilum, dan
mengetahui kemampuan enzim lipase pankreas dalam menghidrolisis
lemak. Praktikum biokimia dasar acara pencernaan juga bertujuan untuk
mengetahui tegangan permukaan oleh garam kholat dan untuk
mengetahui pigmen-pigmen empedu dengan metode Fouchet dan metode
Gmelin.

Pencernaan adalah sebuah proses metabolisme suatu makhluk
hidup dapat memproses sebuah zat untuk diubah secara kimiawi dan
mekanik menjadi nutrisi. Pencernaan adalah proses pemecahan makanan
menjadi molekul yang lebih sederhana (Wardhani, 2019). Pencernaan
terjadi pada organisme multi seluler, sel, dan sub-seluler yang biasanya
pada hewan. Pencernaan dibagi menjadi tiga, yaitu secara kimiawi atau
enzimatis, mekanik, dan biologis. Kebanyakan vertebrata mengalami
proses pencernaan sebagai suatu proses banyak tingkat dalam sebuah
sistem pencernaan setelah ingesti dari bahan mentah.
Fungsi dasar pencernaan yaitu pemasukan, pendorongan,
pencernaan mekanik, pencernaan kimiawi, penyerapan, dan defekasi.
Pemasukan atau menelan adalah suatu proses masuknya makanan
kedalam tubuh. Pendorongan adalah pergerakan makanan dalam saluran
pencernaan atau disebut gerak peristaltik. Gerakan peristaltik merupakan
gerakan beriak seperti gelombang yang mendorong makanan dan cairan
melalui saluran pencernaan (Bull dan Richard, 2013). Pencernaan
115
mekanik adalah proses pemecahan makanan menjadi molekul yang lebih
kecil secara fisik, sedangkan pencernaan kimiawi adalah hidrolisis secara
enzimatik dari molekul makanan menjadi zat yang dapat diserap oleh
tubuh seperti monosakarida, asam amino, dan asam lemak. Penyerapan
adalah masuknya hasil akhir proses digestif seperti vitamin, mineral, dan
air dari saluran pencernaan kedalam darah atau limfa. Defekasi adalah
proses pembuangan material yang tidak tercerna sebagai feses. Defekasi
merupakan salah satu usaha suatu ternak untuk mengatur proses
keseimbangan tubuh dengan cara mengeluarkan feses (Budisatria et al.
2019).
Sistem enzimatis pencernaan dihasilkan dari pencernaan mulut,
pencernaan lambung, kelenjar pankreas dan empedu. Pada pencernaan
mulut terdapat organ aksesori yang membantu pencernaan makanan,
yaitu lidah, gigi, dan kelenjar air liur. Mulut berfungsi untuk mengunyah
makanan menjadi lebih halus dan lunak agar lebih mudah untuk ditelan
dan dicerna. Gigi momotong makanan menjadi potongan-potongan kecil
yang dibasahi oleh air liur sebelum lidah dan otot-otot lain yang
mendorong makanan ke dalam faring dan melewati kerongkongan. Faring
merupakan pipa berotot seperti cerobong atau cincin yang letaknya
bermula dari bagian dasar tengkorak seperti persambungan dengan
esofagus pada ketinggian tulang rawan atau kartilago krikoid (Wiyanto et
al. 2015). Air liur mulai memecah makanan, melembabkan dan membuat
makanan lebih mudah ditelan. Air liur mulai memecah karbohidrat dengan
bantuan enzim yang dihasilkan berupa enzim amilase.
Makanan yang dikonsumsi akan masuk kedalam lambung setelah
melewati mulut dan kerongkongan. Lambung memiliki peran sebagai
tempat penyimpanan dan pemecahan makanan. Lambung melanjutkan
proses pencernaan secara kimiawi dan mekanik. Lambung atau
ventrikulus berupa kantong yang terletak di bawah sekat rongga badan
(Murni dan Riandari, 2018). Dilihat dari bentuknya, lambung terlihat
sederhana namun pada dasarnya lambung terbagi menjadi beberapa
116
bagian dan strukturnya tersusun dari beberapa lapisan. Struktur lambung
terdiri atas lapisan serosa, lapisan otot, lapisan submukosa, dan lapisan
mukosa. Bagian lambung terdiri dari kardiak lambung, fundus, badan
lambung, dan pilorus.
Pankreas dapat didefinisikan sebagai organ kelenjar yang hadir
dalam endokrim dan sistem pencernaan dari semua vertebrata. Pankreas
seperti spons dengan warna kekuningan. Pankreas memiliki panjang
sekitar 15 cm dan lebar 3,8 cm. Pankreas meluas sampai ke bagian
belakang perut dan melekat ke bagian pertama dari usus yang disebut
duodenum. Duodenum adalah salah satu segmen usus yang berperan
dalam absorbsi nutrien dan menetralkan asam lambung (Vincent et al.
2014). Sebagai kelenjar endokrin, pankreas menghasilkan hormon seperti
insulin, somatostalin dan glukagon. Selain itu, pankreas mampu
mensintesis dan mengeluarkan cairan pankrras yang mengandung enzim
pencernaan yang diteruskan ke usus halus.
Cairan empedu diproduksi oleh hati dan disimpan di dalam kantong
empedu. Kantong ini terletak di bawah organ hati dan memproduksi 500
sampai 600 mililiter cairan empedu setiap hari. Cairan empedu adalah
cairan lengket dan kental berwarna kuning kehijauan yang membantu
dalam proses pencernaan makanan secara kimiawi. Fungsi empedu
adalah untuk memecah lemak menjadi asam lemak yang kemudian
diserap oleh tubuh. Selama mencerna makanan, empedu dialirkan dari
kantong empedu melalui saluran empedu dan menuju hati. Saluran
empedu menghubungkan kantong empedu melalui saluran empedu dan
hati dengan usus halus. Cairan empedu kemudian membantu proses
penceernaan lemak di usus halus. Cairan empedu sendiri terbuat dari
garam empedu yang sering disebut asam empedu, air, tembaga,
kolesterol, dan pigmen.
Prinsip kerja uji daya amolitik saliva adalah yaitu enzim bekerja
optimal pada suhu tubuh kisaran 37oC menyebabkan terjadi hidrolisis
amilum menjadi maltosa atau glukosa. Prinsip kerja uji hidrolisis protein
117
oleh pepsin adalah fibrin karmen akan terhidrolisis menjadi lebih kecil dan
larutan menjadi warna merah karena suasana asam akibat penambahan
HCl yang dapat mengaktifkan pepsin sehingga protein akan terhidrolisis.
Prinsip kerja uji hidrolisis protein oleh pankreas adalah fibrin yang
mengembang dan terjadi perubahan warna larutan membuktikan adanya
enzim tripsin dan khimotripsin dalam larutan pankreas yang dapat
mengidrolisis protein. Prinsip kerja uji hidrolisis amilum oleh pankreas
adalah pankreas mensekresikan enzim amilase untuk menghidrolisis
oligosakarida menjadi monosakarida dan enzim tersebut bekerja secara
optimal pada suasana basa, karena pH di usus halus bersifat alkalis akibat
adanya garam natrium bikarbonat dari pankreas.
Prinsip kerja uji hidrolisis lemak oleh pankreas adalah perubahan
warna larutan dari merah menjadi kuning menunjukkan bahwa terjadi
hidrolisis lemak oleh enzim lipase pankreas yang mengubah lemak
menjadi asam lemak dan gliserol. Penggunaan larutan empedu adalah
untuk membantu mengemulsi lemak sehingga lemak akan terhidrolisis
menjadi lebih sempurna. Prinsip kerja uji penuruan tegangan permukaan
oleh garam kholat adalah serbuk belerang yang mengendap menunjukkan
bahwa dalam larutan empedu terdapat garam empedu berupa garam
kholat yang mampu menurunkan tegangan permukaan larutan.
Prinsip kerja uji Fouchet adalah reagen Fouchet yang diteteskan
pada endapan akan mengoksidasi pigmen empedu bilirubin menjadi
biliverdin. Endapan tersebut adalah reaksi dari MgSO 4 dan BaCl2 10%
yang membentuk endapan BaSO4 berwarna hijau pekat. Prinsip kerja uji
Gmelin adalah cincin warna yang terdiri dari warna hijau, biru, ungu,
merah, dan kuning kemerahan terbentuk karena HNO 3 mengoksidasi
pigmen empedu. Empedu mengandung pigmen-pigmen warna berupa
bilirubin, biliverdin, urobilin, dan urobilinogen yang dikeluarkan melalui
feses (Yuliana, 2018).
118
Materi dan Metode
Materi
Alat. Alat yang digunakan dalam praktikum acara pencernaan ini
antara lain tabung reaksi, rak tabung reaksi, labu takar, pipet tetes, pipet
ukur, pipet pump, penangas air, lampu bunsen, koreak api, erlenmeyer,
kertas saring, inkubator, dan penjepit tabung.
Bahan. Bahan yang digunakan dalam praktikum acara pencernaan
ini antara lain akuades, NaCl 20%, saliva encer, HCl encer, amilum 1%,
larutan yod, reagen Benedict, larutan pepsin, HCl 0,4%, fibrin karmen,
ekstrak pankreas netral, Na2CO3 2%, kongo-merah-fibrin, larutan empedu,
air susu, fenol merah, serbuk belerang, asam asetat, larutan pepton,
larutan MgSO4 jenuh, larutan BaCl2 10%, pereaksi Fouchet, dan HNO3
pekat.
Metode
Fungsi Saliva dalam Mulut
Daya Amolitik Saliva. Salah satu praktikan, kumur-kumur dengan
air besih kemudian kumur-kumur kembali menggunakan 20 ml NaCl
0,89%. Hasil kumuran ditampung pada sebuah labu, digojok, dan disaring
menjadi saliva encer. Tiga tabung reaksi disiapkan dan masing-masing
tabung reaksi diisi 2,5 ml saliva encer. Tabung 1 dididihkan dan
didinginkan kemudian ditambahkan dengan 5 ml HCl encer dan 2,5 ml
amilum 1%. Tabung 2 ditambahkan 2,5 ml HCl encer dan 2,5 amilim 1%.
Tabung 3 ditambahkan 2,5 ml amilum 1%. Ketiga tabung tersebut
diinkubasi pada suhu 37oC dan dilakukan uji Yod setiap satu menit satu
tetes. Jika pengujian sudah tidak menunjukkan hasil positif, perlakuan
dihentikan dan dilakukan uji Benedict. Bila hasilnya positif, ketiga tabung
reaksi tersebut dilakukan uji Osazon. Hasil pengujian dicatat pada lembar
kerja.
119
Pencernaan oleh Lambung
Hidrolisis Protein oleh Pepsin. Tabung reaksi sebanyak tiga buah
disiapkan. Tabung 1 diisi 1 ml pepsin lalu ditambahkan 1 ml HCl 0,4%
dan satu potong fibrin karmen. Tabung 2 diisi dengan akuades kemudian
ditambahkan 1 ml HCl 0,4% dan satu potong fibrin karmen. Tabung 3 diisi
1 ml pepsin lalu dididihkan dan didinginkan, kemudian ditambahkan 1 ml
HCl 0,4% dan satu potong fibrin karmen. Masing-masing tabung kemudian
diinkubasi di waterbath pada subu 37oC selama 10 menit. Hasil percobaan
diamati dan dicatat pada lembar kerja.
Pencernaan oleh Pankreas
Hidrolisis Protein. Tabung reaksi sebanyak tiga buah disiapkan.
Tabung 1 diisi 1 ml ekstrak pankreas netral, 2 tetes Na 2CO3 2 %, dan 1
potong kongo-merah-fibrin. Tabung 2 diisi 1 ml ekstrak pankreas netral, 2
tetes Na2CO3 2%, 1 potong kongo-merah-fibrin, dan 2 tetes larutan
empedu. Tabung 3 diisi 1 ml akuades, 2 tetes Na2CO3 2%, dan 1 potong
kongo-merah-fibrin. Ketiga tabung tersebut diletakkan pada waterbath
dengan suhu 37oC selama 10 menit. Hasil percobaan yang terjadi diamati
dan dicatat pada lembar kerja. Warna merah pada larutan berarti terjadi
pencernaan.
Hidrolisis Amilum. Tabung reaksi sebanyak tiga buah disiapkan.
Tabung 1 diisi 1 ml ekstrak pankreas netral, 2 tetes Na 2CO3 2%, dan 1 ml
amilum 1%. Tabung 2 diisi 1 ml ekstrak pankreas netral, 2 tetes Na 2CO3
2%, 1 ml amilum 1%, dan 2 tetes larutan empedu. Tabung 3 diisi 1 ml
akuades, 2 tetes Na2CO3 2%, dan 1 ml amilum 1%. Ketiga tabung
tersebut diletakkan pada waterbath dengan suhu 37 oC selama 10 menit.
Selanjutnya pada tabung 1 dan 2 dilakukan uji Benedict, pada tabung 3
dilakukan uji Yod dan uji Benedict.
Hidrolisis Lemak. Tabung reaksi sebanyak tiga buah disiapkan.
Tabung 1 diisi 2 ml air susu, 1 ml ekstrak pankreas netral, 4 tetes fenol
merah, dan 2 tetes Na2CO3 2%. Tabung 2 diisi 2 ml air susu, 1 ml ekstrak
pankreas netral, 2 tetes larutan empedu, 4 tetes fenol merah, dan 2 tetes
120
Na2CO3 2%. Tabung 3 diisi 2 ml air susu, 1 ml akuades, 4 tetes fenol
merah, dan 2 tetes Na2CO3 2%. Selanjutnya ketiga tabung tersebut
diletakkan pada waterbath dengan suhu 37oC selama 10 menit. Hasil
percobaan yang terjadi diamati dan dicatat pada lembar kerja.
Fungsi Empedu
Penurunan Tegangan Muka oleh Garam Kholat. Tabung reaksi
sebanyak dua buah disiapkan. Tabung 1 diisi 2 ml akuades dan tabung 2
diisi 2 ml larutan empedu. Selanjutnya masing-masing tabung reaksi
ditambahkan satu sendok serbuk belerang. Keadaan serbuk diamati dan
dicatat hasilnya.
Uji Gmelin. Sebuah tabung reaksi diisi 3 ml HNO3 pekat dan
ditambahkan 1 ml larutan empedu melalui dinding tabung secara hati-hati
jangan sampai tergojok. Lapisan cincin yang terbentuk diamati dan dicatat
hasilnya pada lembar kerja.
Uji Fouchet. Tabung reaksi diisi 2,5 ml larutan empedu yang
dipanaskan hingga mendidih. Setelah mendidih, ditambahkan 2 tetes
MgSO4 dan 2,5 ml BaCl2 10% lalu dipanaskan kembali hingga mendidih.
Larutan campuran tersebut kemudian disaring dengan kertas saring
hingga endapan tersisa pada kertas saring tersebut. Selanjutnya endapan
pada kertas saring ditetesi larutan pereaksi Fouchet sebanyak 1 tetes.
Perubahan warna biru kehijauan diamati dan dicatat hasilnya pada lembar
kerja.
121
Fungsi Saliva dalam Mulut

Uji Daya Amilolitik Saliva. Tujuan uji daya amolitik saliva adalah
untuk mengetahui adanya daya amolitik saliva. Prinsip kerja dari uji daya
amolitik saliva yaitu enzim bekerja optimal pada suhu tubuh 37oC
menyebabkan terjadi hidrolisis amilum menjadi maltosa atau glukosa.
Hasil yang diperoleh adalah tabung pertama setelah saliva dididihkan dan
didinginkan lalu ditambah larutan amilum selanjutnya tabung reaksi
dimasukkan pada waterbath selama 10 menit pada suhu 37oC, dan diuji
dengan reagen Benedict maka warna larutan tidak mengalami perubahan
warna dan tidak terdapat endapan. Hal ini dikarenakan adanya perlakuan
pemanasan dan pendinginan yang menyebabkan enzim menjadi rusak
dan tidak dapat menghidrolisis amilum sehingga tidak terdapat endapan.
Saliva mengandung 99,5% H2O dan 0,5% elektrolit dan protein (Qalbi et
al, 2018). Menurut Wuryanti (2004), enzim adalah suatu protein, maka
kenaikan suhu dapat menyebabkan terjadinya proses denaturasi, maka
bagian aktif enzim akan terganggu, dengan demikian konsentrasi efektif
enzim menjadi berkurang dan kecepatan reaksinya akan menurun.
Sebagian besar enzim terdenaturasi pada suhu 60oC.
Tabung kedua, sebanyak 2,5 ml amilum 1% dan 2,5 ml saliva
dicampurkan lalu ditambahkan HCl encer sebanyak 2,5 ml. Tabung reaksi
dimasukkan ke dalam waterbath dengan suhu 37 oC selama 10 menit, lalu
di uji Benedict. Setelah di uji Benedict, didapatkan hasil terjadi perubahan
warna menjadi warna biru keruh dan terdapat sedikit endapan pada
bagian bawah tabung reaksi. Hal ini disebabkan karena penambahan HCl
encer mengakibatkan suasana menjadi asam. Enzim hanya dapat bekerja
secara optimum pada pH tertentu, sehingga ketika diberi penambahan
HCl mengakibatkan pH larutan menjadi turun karena HCl bersifat asam
(Wuryanti, 2004). Saliva mempunyai pH antara 6,5 sampai 7,4 (Qalbi et al,
2018).
122
Tabung ketiga, sebanyak 2,5 ml saliva dicampurkan dengan
amilum 1% sebanyak 2,5 ml. larutan kemudian dimasukkan pada
waterbath dengan suhu 37oC selama 10 menit. Larutan mula-mula diuji
dengan menggunakan uji Yod. Hasil yang didapatkan adalah positif. Hal
ini dibuktikan ketika dilakukan penetesan pada druplet, tetesan pertama
memiliki warna yang sama dengan titik kontrol yaitu warna jingga dan
pada penetesan ke sepuluh, larutan berubah warna menjadi tidak
berwarna yang menandakan larutan tersebut termasuk diantara tahapan
akrodekstrin, maltosa, dan glukosa. Hal ini terjadi karena larutan pada
tabung 3 telah mengalami pemanasan setelah dimasukkan pada
waterbath dengan suhu 37oC sehingga pada penetesan pertama di
druplets, larutan langsung bereaksi terhadap larutan Yod dengan sangat
cepat sehingga menyebabkan warna larutan menjadi serupa dengan titik
kontrol (Wuryanti, 2004). Larutan kemudian di uji Benedict dan didapatkan
hasil warna larutan berubah menjadi kehijauan dan terdapat endapan
berwarna merah bata. Hal ini menunjukkan adanya kandungan gula
pereduksi pada produk akhir hidrolisis pati (Permanasari dan Yulistiani,
2015).
Pencernaan oleh Lambung
Hidrolisis Protein oleh Pepsin. Tujuan dari uji hidrolisis protein
oleh pepsin adalah untuk mengetahui kemampuan enzim pepsin dalam
menghidrolisis protein. Prinsip kerja uji hidrolisis protein oleh pepsin
adalah fibrin karmen akan terhidrolisis menjadi lebih kecil dan larutan
menjadi warna merah karena suasana asam akibat penambahan HCl
yang dapat mengaktifkan pepsin sehingga protein akan terhidrolisis.
Larutan HCl berfungsi sebagai pemberi suasana asam sehingga enzim
pepsin menjadi aktif. Pemanasan menggunakan waterbath dengan suhu
37oC bertujuan untuk menyesuaikan dengan suhu tubuh manusia yang
merupakan suhu optimal enzim pepsin. Fibrin karmen berfungsi sebagai
substrat atau sumber protein. Campbell et al., (2002) menyatakan bahwa
setiap enzim memiliki suatu suhu dan nilai pH optimal di mana laju
123
reaksinya berjalan paling cepat. Enzim manusia rata-rata memiliki suhu
optimal sekitar 35°C sampai 40°C (mendekati suhu tubuh manusia).
Pepsin bekerja paling baik pada pH 2.
Tabung I yang berisi larutan pepsin ditambahkan HCl dengan
tujuan untuk menurunkan nilai pH sehingga enzim pepsin menjadi aktif.
Fibrin karmen ditambahkan sebagai sumber protein yang akan dihidrolisis
oleh enzim pepsin. Pemanasan menggunakan waterbath dengan suhu
37oC bertujuan untuk menyesuaikan dengan suhu tubuh manusia yang
merupakan suhu optimal enzim pepsin. Campbell et al., (2002)
menyatakan bahwa setiap enzim memiliki suatu suhu dan nilai pH optimal
di mana laju reaksinya berjalan paling cepat. Enzim manusia rata-rata
memiliki suhu optimal sekitar 35°C sampai 40°C. pH 2 merupakan pH
paling baik Enzim pepsin bekerja. Larutan pada tabung I berubah warna
menjadi bening kemerahan dan fibrin karmen menyusut. Hal tersebut
membuktikan bahwa penambahan HCl dapat mengaktifkan enzim pepsin
sehingga fibrin Karmen akan terhidrolisis. Hal tersebut membuktikan
bahwa hasil dari praktikum telah sesuai dengan literatur.
Tabung II yang berisi larutan air ditambahkan HCl dan fibrin
karmen. Pemanasan menggunakan waterbath dengan suhu 37oC
bertujuan untuk menyesuaikan dengan suhu tubuh manusia yang
merupakan suhu optimal enzim pepsin. Campbell et al., (2002)
menyatakan bahwa enzim manusia rata-rata memiliki suhu optimal sekitar
35°C sampai 40°C (mendekati suhu tubuh manusia). Hasil yang
didapatkan pada tabung II berupa larutan tidak berubah warna dan ukuran
fibrin karmen tetap. Hal tersebut terjadi karena pada tabung II tidak
terdapat sumber enzim pepsin sehingga fibrin karmen tidak dapat
terhidrolisis. Hal tersebut membuktikan bahwa hasil dari praktikum telah
sesuai dengan literatur.
Tabung III yang berisi enzim pepsin dididihkan, lalu didinginkan,
kemudian ditambahkan HCl dan fibrin karmen. Pemanasan menggunakan
waterbath dengan suhu 37oC bertujuan untuk menyesuaikan dengan suhu
124
tubuh manusia yang merupakan suhu optimal enzim pepsin bekerja. Hasil
yang diperoleh dari tabung III warna larutan tetap dan ukuran fibrin
karmen tidak berubah. Hal tersebut terjadi karena enzim pepsin
mengalami denaturasi akibat pendidihan yang dilakukan. Campbell et al.,
(2002) menyatakan bahwa peningkatan suhu akan mengganggu ikatan
hidrogen, ikatan ionik, dan interaksi lemah lainnya yang menstabilkan
konformasi aktifnya, sehingga enzim tersebut mengalami denaturasi. Hal
tersebut membuktikan bahwa hasil dari praktikum telah sesuai dengan
literatur.
Pencernaan oleh Pankreas
Hidrolisis Protein. Tujuan uji hidrolisis protein oleh enzim getah
pankreas adalah untuk mengetahui kemampuan enzim protease pankreas
dalam menghidrolisis protein. Prinsip kerja dari uji hidrolisis protein oleh
enzim getah pankreas adalah enzim getah pankreas akan menghasilkan
enzim tripsin dan khimotripsin yang dapat bekerja secara optimal pada
suasana basa. Penambahan substrat berupa kongo merah fibrin berfungsi
sebagai indikator tingkat kemampuan enzim protease pankreas bekerja.
Na2CO3 berfungsi sebagai pemberi suasana basa. Pemanasan berfungsi
untuk mengetahui mengembang atau tidaknya kongo merah fibrin yang
digunakan sebagai indikator adanya enzim tripsin dan khimotripsin pada
larutan pankreas. Apabila kongo merah fibrin mengembang, maka dalam
larutan pankreas terbukti mengandung enzim tripsin dan khimotripsin,
sedangkan apabila kongo merah fibrin, maka pada larutan pankreas tidak
terbukti mengandung enzim tripsin dan khimotripsin. Hasil yang diperoleh
adalah tabung pertama ditambahkan 1 ml ekstrak pankreas, 2 tetes
Na2CO3 2%, dan 1 potong kongo merah fibrin. Kemudian tabung tersebut
dipanaskan pada suhu 37⁰C selama 10 menit dan diperoleh perubahan
warna yang tadinya putih keruh menjadi putih bening dan kongo merah
fibrin mengembang. Hal tersebut membuktikan adanya enzim tripsin dan
khimotripsin dalam larutan pankreas yang dapat menghidrolisis protein.
125
Protein tersebut terhidrolisis karena penambahan HCl yang memberikan
suasana asam sehingga pepsin menjadi aktif.
Tabung kedua yang berisi 1 ml ekstrak pankreas, 2 tetes Na 2CO3
2%, 1 potong kongo merah fibrin, dan 2 tetes larutan empedu dipanaskan
pada suhu 37⁰C selama 10 menit. Setelah dipanaskan selama 10 menit,
diperoleh perubahan warna yang tadinya kuning keruh menjadi kuning
bening dan kongo merah fibrin utuh. Hal tersebut membuktikan tidak
terjadi reaksi meskipun suasananya asam dengan penambahan HCl,
tetapi karena tidak adanya enzim sehingga tidak terjadi hidrolisis. Na 2CO3
berfungsi sebangai pemberi suasana basa. Na2CO3 merupakan larutan
garam perpaduan antara basa kuat dan asam lemah, sehingga pH yang
dihasilkan tidak sekuat seperti NaOH karena ionisasi dari basa akan
terhambat akibat adanya unsur asam, dalam cairan Na 2CO3 (Zusagka et
al., 2014). Penambahan laturan empedu pada tabung kedua bertujuan
untuk menambah suasana basa. Penambahan suasana basa pada
tabung 2 bertujuan untuk menambah kemampuan enzim protease dalam
menghidrolisis protein. Enzim protease akan bekerja secara optimum
pada suasana basa. Jika suasana basa ditambahkan pada tabung 2
berupa larutan empedu, maka kemampuan enzim protease dalam
menghidrolisis protein akan maksimal.
Tabung ketiga yang berisi 1 ml akuades, 2 tetes Na 2CO3 2%, dan 1
potong kongo merah fibrin kemudian dipanaskan pada suhu 37⁰C selama
10 menit. Hasil yang terjadi tidak diperoleh perubahan warna dan kongo
merah fibrin tidak berkembang atau utuh. Hal tersebut membuktikan tidak
adanya enzim tripsin dan khimotripsin dalam tabung ketiga yang dapat
menghidrolisis protein. Pada tabung ketiga tidak terdapat sumber enzim
berupa ekstrak pankreas sehingga proses hidrolisis protein tidak terjadi.
Akuades hanya berfungsi sebagai bahan pengganti ekstrak pankreas
yang tidak mengandung enzim dalam kandungannya. Akuades
merupakan senyawa kimia yang tersusun atas dua atom hidrogen dan
satu atom oksigen (H₂O). Sebuah molekul air akan terbentuk karena
126
adanya ikatan kovalen antara ion hidrogen yang bermuatan positif dan ion
oksigen yang bermuatan negatif (Yona et al., 2017). Oleh karena itu, di
dalam air tidak terdapat kandungan enzim.
Hidrolisis Amilum. Tujuan dari uji hidrolisis amilum oleh pankreas
adalah untuk mengetahui kemampuan enzim amilase pankreas dalam
menghidrolisis amilum. Prinsip kerja dari uji hidrolisis amilum oleh
pankreas adalah pankreas akan mensekresikan enzim amilase untuk
menghidrolisis oligosakarida menjadi monosakarida dan enzim tersebut
bekerja secara optimal pada suasana basa, karena menurut Sumardjo
(2009) bahwa pH di usus halus bersifat alkalis akibat adanya garam
natrium bikarbonat dari pankreas dan bekerja optimal pada suhu 37oC.
Ekstrak pankreas netral yang ditambahakan pada tabung satu dan dua
berfungsi sebagai penghasil enzim amilase. Menurut Pearce (2002)
bahwa pankreas merupakan salah satu kelenjar pencernaan yang
mensekresikan enzim amilase, lipase, dan protease untuk pencernaan
enzimatis di duodenum usus halus. Penambahan Na2CO3 2% pada setiap
tabung berfungsi untuk menciptakan suasana basa karena enzim yang
disekresikan pankreas bekerja optimum pada suasana basa.
Penambahan amilum 1% pada setiap tabung adalah sebagai substrat.
Amilum digunakan sebagai substrat karena enzim amilase hanya
bekerja spesifik pada sakarida (Marks et al., 2000). Setiap tabung
diletakkan pada waterbath dengan suhu 37oC dengan tujuan untuk
mengoptimalkan kerja enzim, Sumardjo (2009) juga menjelaskan bahwa
enzim memiliki suhu optimal untuk mengkatalis suatu reaksi dan suhu
optimal enzim amilase pankreas adalah 37 oC.
Tabung pertama yang berisi 1 ml ekstrak pankreas netral, 2 tetes
Na2CO3 2% dan 1 ml amilum 1% kemudian diletakkan pada waterbath
bersuhu 37oC selama 10 menit berubah warna dari biru menjadi hijau.
Selanjutnya pada saat dilakukan uji Benedict didapatkan hasil positif yang
berarti bahwa larutan campuran pada tabung pertama mengandung enzim
amilase. Tabung kedua yang berisi 1 ml ekstrak pankreas netral, 2 tetes
127
Na2CO3 2%, 1 ml amilum 1%, dan 2 tetes larutan empedu kemudian
diletakkan pada waterbath bersuhu 37oC salama 10 menit berubah warna
menjadi biru pekat. Selanjutnya dilakukan uji Benedict dan didapatkan
hasil positif bahwa larutan campuran pada tabung kedua juga
mengandung enzim amilase. Tabung ketiga yang berisi 1 ml akuades, 2
tetes Na2CO3 2%, dan 1 ml amilum 1% kemudian diletakkan pada
waterbath bersuhu 37oC selama 10 menit. Selanjutnya larutan campuran
pada tabung ketiga dilakukan uji Yod dan terjadi perubahan warna
menjadi biru tua yang berarti larutan tersebut tidak memiliki enzim
amilase. Setelah dilakukan uji Yod dan hasilnya negatif, dilakukan uji
Benedict yang mengakibatkan perubahan warna menjadi biru muda yang
berarti hasilnya negatif.
Hasil positif pada tabung pertama dan kedua ketika dilakukan uji
Benedict dihasilkan endapan berwarna merah bata. Hal ini sesuai dengan
pernyataan Kusbandari (2015) bahwa endapan merah bata yang terbentuk
saat uji Benedict adalah akibat dari tereduksinya ion Cu 2+ dari reagen
Benedict menjadi Cu + oleh gugus pereduksi maltosa atau glukosa.
Berdasarkan percobaan yang dilakukan hasil dari uji Yod pada tabung ketiga
adalah negatif karena warna sampel yang ditetesi reagen Yod tidak
kembali seperti warna kontrol.
Hidrolisis Lemak. Tujuan dari uji hidrolisis lemak oleh pankreas
adalah untuk mengetahui kemampuan enzim lipase pankreas dalam
menghidrolisis lemak. Prinsip kerja dari uji hidrolisis lemak oleh pankreas
adalah perubahan warna larutan dari merah menjadi kuning menunjukkan
bahwa terjadi hidrolisis lemak oleh enzim lipase pankreas yang mengubah
lemak menjadi asam lemak dan gliserol. Penggunaan larutan empedu
adalah untuk membantu mengemulsi lemak sehingga lemak akan
terhidrolisis menjadi lebih sempurna. Ekstrak pankreas netral yang
ditambahakan pada tabung satu dan dua berfungsi sebagai penghasil
enzim lipase. Penggunaan susu pada setiap tabung berfungsi sebagai
substrat lemak. Indikator phenol red yang digunakan dalam uji ini
128
berfungsi sebagai indikator warna larutan asam atau basa. Penambahan
Na2CO3 2% berfungsi untuk memberikan suasana basa, karena enzim
lipase bekerja optimal pada pH basa. Pemanasan pada suhu 37 oC
didalam waterbath berguna untuk mengoptimalkan kerja enzim agar
optimal pada suhu tubuh.
Tabung pertama yang berisi 2 ml susu, 1 ml ekstrak pankreas
netral, 4 tetes indikator fenol merah, dan 2 tetes Na 2CO3 2% kemudian
diletakkan pada waterbath bersuhu 37oC selama 10 menit menimbulkan
perubahan warna larutan dari merah muda menjadi kuning. Tabung kedua
yang berisi 2 ml susu, 1 ml ekstrak pankreas netral, 2 tetes larutan
empedu, 4 tetes indikator fenol merah, dan 2 tetes Na 2CO3 2% kemudian
diletakkan pada waterbath bersuhu 37oC selama 10 menit menimbulkan
perubahan warna larutan dari merah muda menjadi kuning. Warna kuning
yang terjadi lebih kuning daripada warna kuning pada tabung pertama.
Tabung ketiga yang berisi 2 ml susu, 1 ml akuades, 4 tetes indikator fenol
merah, dan 2 tetes Na2CO3 2% kemudian diletakkan pada waterbath
bersuhu 37oC selama 10 menit tidak menimbulkan perubahan warna
sehingga warna larutan tersebut tetap merah muda.
Perubahan warna yang terjadi dari warna merah muda menjadi
kuning pada tabung pertama dan kedua ini menunjukkan adanya reaksi
hidrolisis lemak oleh enzim lipase pankreas menjadi asam lemak dan
gliserol. Pernyataan yang dikemukakan oleh Sumardjo (2009)
menyebutkan bahwa pankreas terdapat enzim lipase yang mampu
mengemulsikan lemak menjadi asam lemak dan gliserol. Menurut James
et al. (2008) bahwa pankreas merupakan kelenjar pencernaan penghasil
enzim amilase, tripsin, dan lipase yang bekerja optimal pada suhu 37 0C
dan bekerja sama dengan getah empedu yang membuat suasana menjadi
basa dengan rentang pH 5,5 sampai 7,7 yang kemudian getah empedu
disekresikan oleh hati untuk mengemulsi lemak dan menurunkan
tegangan permukaan sehingga nutrient dapat diserap. Hasil uji
hidrolisis lemak oleh lipase pankreas sesuai dengan literatur
129
Fungsi Empedu
Penurunan Tegangan Muka oleh Garam Kholat. Tujuan dari uji
penurunan tegangan muka oleh garam kholat adalah untuk mengetahui
adanya garam kholat pada larutan empedu yang dapat menurunkan
tegangan permukaan. Prinsip kerja dari uji penuruan tegangan muka oleh
garam kholat adalah serbuk belerang yang mengendap menunjukkan
bahwa dalam larutan empedu terdapat garam empedu berupa garam
kholat yang mampu menurunkan tegangan permukaan larutan. Menurut
Pearce (2002) menjelaskan bahwa empedu mengandung garam kholat
yang berfungsi membantu penyerapan nutrien di usus halus dengan cara
menurunkan tegangan permukaan.
Berdasarkan uji yang telah dilakukan, tabung pertama yang berisi 2
ml akuades dan ditambahkan serbuk belerang menunjukkan hasil berupa
serbuk belerang tidak turun ke dasar permukaan. Tabung kedua yang
berisi 2 ml empedu dan ditambahkan serbuk belerang menunjukkan hasil
berupa serbuk belerang turun dan mengendap di dasar permukaan. Uji
yang dilakukan sudah sesuai dengan pernyataan Pearce (2002) yang
menyebutkan bahwa empedu mengandung garam kholat yang membantu
penyerapan nutrien dengan cara menurunkan tegangan permukaan dan
juga pernyataan Rahmanto (2012) yang menyatakan bahwa garam
empedu (garam kholat) mengandung natrium karbonat yang
mengakibatkan empedu bersifat alkali. Garam empedu juga berfungsi
menurunkan tegangan permukaan lemak dan air (mengemulsikan lemak).
Akuades tidak memiliki kandungan garam kholat sehingga ketika
ditambahkan serbuk belerang pada akuades, serbuk belerang tersebut
akan tetap berada di permukaan larutan.
Uji Gmelin. Tujuan uji gmelin adalah untuk mengetahui pigmen-
pigmen empedu pada cairan empedu dengan menggunakan metode
Gmelin. Prinsip kerja yang terjadi yaitu penambahan cairan empedu pada
asam pekat akan terbentuk cincin warna yang terdiri dari warna hijau,
130
kuning, biru, ungu, merah, dan kuning kemerahan, cincin terbentuk karena
HNO3 pekat mengoksidasi pigmen empedu.
Berdasarkan uji yang dilakukan, setelah 3 ml HNO 3 pekat
dicampurkan dengan 1 ml empedu melalui dinding tabung dengan hati-
hati didapatkan hasil berupa terbentuknya cincin yang berwarna hijau, biru
keunguan, merah, dan kuning. Sesuai dengan pernyataan Yuliana (2018)
yang menjelaskan bahwa cincin warna tersebut terbentuk karena HNO3
pekat mengoksidasi pigmen empedu sehingga menimbulkan cincin yang
berwarna hijau, biru, ungu, merah, dan kuning kemerahan.
Uji Fouchet. Tujuan uji Fouchet adalah untuk mengetahui adanya
pigmen-pigmen empedu dengan menggunakan metode Fouchet. Prinsip
kerja dari uji Fouchet adalah reagen Fouchet akan mengoksidasi pigmen
empedu bilirubin menjadi biliverdin yang bewarna biru kehijauan.
Berdasarkan pernyataan Gibson (2003) bahwa empedu mengandung
pigmen-pigmen warna berupa bilirubin, biliverdin, urobilin, dan
urobilinogen yang dikeluarkan melalui feses.
Tabung yang berisi 2,5 ml larutan empedu dipanaskan hingga
mendidih dan dicampurkan dengan MgSO4 dan BaCl2 10% membentuk
endapan BaSO4 yang berwarna hijau pekat. Endapan BaSO4 disaring
dengan kertas saring dan ditetesi reagen Fouchet. Endapan tersebut
berubah warna menjadi biru kehujauan. Hal ini terjadi karena reagen
Fouchet akan mengoksidasi pigmen empedu bilirubin menjadi biliverdin
yang menyebabkan perubahan warna menjadi bitu kehijauan. Menurut
Sumardjo (2009) bahwa bilirubin akan mengalami oksidasi menjadi
urobilin dan memberi warna coklat pada feses dan bau tidak sedap
merupakan hasil pembusukan bakteri. Hasil uji Fouchet ini sesuai dengan
pernyataan Poedjiadi (2006) bahwa hasil uji Fouchet adalah terbentuknya
endapan warna hijau dan ketika diteteskan reagen Fouchet menjadi biru
kehijauan.
131
Kesimpulan
. Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan, dapat
disimpulkan bahwa kemampuan hidrolisis enzim amilase optimal pada pH
6,6 dengan suhu 37oC. Kemampuan hidrolisis protein enzim pepsin
lambung optimal pada pH asam 2, dengan suhu 37 oC. Kemampuan
hidrolisis protein enzim protease pankreas optimal pada pH basa dengan
suhu 37 oC. Kemampuan hidrolisis amilum enzim amilase pankreas
optimal pada pH basa dengan suhu 37oC. Kemampuan hidrolisis lemak
enzim lipase pankreas optimal pada pH basa dengan suhu 37oC. Empedu
mengandung garam kholat yang mampu menurunkan tegangan
permukaan dan mengandung pigmen warna berupa bilirubin, biliverdin,
urobilin, urobilinogen.
132
Daftar Pustaka
Budisatria, G., Panjono, D. Maharani, dan A. Ibrahim. 2019. Kambing
Peranakan Etawa : Kepala Hitam atau Cokelat. UGM Press.
Yogyakarta. Pp. 82-84.
Bull, E., dan R. Stevens. 2013. Sindrom Usus Rengsa. Gramedia Pustaka
Utama. Jakarta. Pp. 11-13.
Campbell, N. A., Reece, J. B., dan Mitchell, L. G. 2002. Biologi Jilid 1 Edisi 5.
Erlangga. Jakarta. Pp. 102.
Gibson J. 2003. Modern Physiology and Anatomy for Nurses. Penerbit
Buku Kedokteran RGC. Jakarta.
James J., C. Baker, H. Swain. 2008. Principles of Scince for Nurses.
Erlangga. Jakarta.
Kusbandari, A. 2015. Analisis kualitatif kandungan sakarida dalam tepung
dan pati umbi ganyong. Jurnal Pharmaciana. 5(1): 35-42.
Marks D. B., A. Marks, C. Smith. 2000. Basic Medical Biochemistry: A
Clinical Approach. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Murni, S dan F. Riandari. 2018. Penerapan metode teorema bayes pada
sistem pakar untuk mendiagnosa penyakit lambung. Jurnal
Penelitian Teknik Informatika. 1(1) : 19-28.
Pasaribu, E., T. Nurhayati, M. Nurilmala. 2018. Ekstraksi dan karakterisasi
enzim pepsin dari lambung ikan tuna (Thunnus albacares). Jurnal
Pengelolaan Hasil Perikanan Indonesia. 21(3) : 486-496.
Pearce E. C. 2002. Anatomi dan Fisiologi untuk Paramedis. Gramedia.
Jakarta.
Permanasari, R. A., F. Yulistiani. 2015. Pembuatan gula cair dari pati
singkong dengan menggunakan hidrolisis enzimatis. Jurnal
Fluida. 11(2): 9-14.
Poedjadi, A. 2006. Dasar-Dasar Biokimia Edisi Revisi. UI Press. Jakarta.
Qalbi, Z. M., M. Irramah, dan Asterina. 2018. Perbedaan derajat
keasaman (pH) saliva antara perokok dan bukan perokok pada
siswa SMA PGRI 1 Padang. Jurnal Kesehatan Andalas. 7(3) :
358-363.
Rahmanto. 2012. Struktur Histologik Usus Halus dan Efisiensi Pakan
Ayam Kampung dan Broiler S1 Thesis. UNY. Yogyakarta.
Sumardjo D. 2009. Pengantar Kimia : Buku Panduan Kuliah Mahasiswa
Kedokteran dan Program Strata 1 Fakultas Bioeksakta. Penerbit
Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
133
Vincent, A., H. Trianto, Fajar, dan M. Ilmiawan. 2014. Pengaruh pajanan
monosodium glutamat terhadap histologi duodenum tikus putih.
Jurnal Kedokteran Indonesia. 2(3) : 166-172.
Wardhani, S. 2019. Intisari Biologi Dasar. Diandra Kreatif. Yogyakarta. Pp.
142-144.
Wiyanto, R., O. Pekalo, dan R. Tumbol. 2015. Survei kesehatan
tenggorokan di desa tinoor dua. Jurnal E-clinic. 3(1) : 594-597.
Wuryanti. 2004. Isolasi dan penentuan aktivitas spesifikasi enzim bromelin
dari buah nanas (Ananas comusus L.). Jurnal Kimia Sains dan
Aplikasi. 7(3) : 78-82.
Yona, D., et al. 2017. Fundamental Oseanografi. UB Press. Malang.
Yuliana A. 2018. Biokimia Farmasi. Jakad Publishing. Surabaya.
Zusagka, E., H. Sutanto, dan Z. Arifin. 2014. Pengaruh peningkatan pH
cairan developer dengan penambahan antara NaOH dan Na2CO2
terhadap densitas citra. Youngster Physics Journal. 3(3) : 203-
208.
134
Lampiran
Lampiran 4.1 Dokumentasi Hasil Uji
Gambar 1. Hasil Uji Daya Amilolitik Gambar 2. Hasil Uji Benedict pada
Saliva Uji Daya Amilolitik Saliva
Gambar 3. Hasil Uji Hidrolisis Gambar 4. Hasil Uji Hidrolisis

Protein oleh Pepsin Protein oleh Pankreas
135
Gambar 5. Hasil Uji Hidrolisis Gambar 6. Hasil Uji Hidrolisis
Amilum oleh Pankreas Lemak oleh Pankreas
Gambar 7. Hasil Uji Penuruan Gambar 8. Hasil Uji Gmelin

Tegangan Muka oleh Garam
Kholat
136
Gambar 9. Hasil Uji Fouchet Gambar 10. Hasil Uji Fouchet
setelah dipanaskan setelah ditetesi Reagen Fouchet
137
138
139
140
ACARA V
URIN KUALITATIF
Disusun oleh :
Kelompok XV
Rifaldo PT/08162

FAKULTAS PETERNAKAN
YOGYAKARTA
2020
141
ACARA V
URIN KUALITATIF
Tujuan Praktikum
Praktikuma acara urin kualitatif bertujuan untuk mengetahui adanya
senyawa organik yaitu ikatan peptida, adanya ureum, adanya garam urat
(senyawa mereduksi), adanya asam urat, adanya daya mereduksi asam
urat, adanya kreatinin, adanya garam amonium. Praktikum urin kualitatif
juga bertujuan untuk mengetahui adanya zat-zat anorganik dalam urin
berupa khlor, kalsium dan fosfat, serta sulfat. Praktikum urin kualitatif juga
bertujuan untuk mengetahui adanya gula mereduksi, adanya albumin,
adanya pigmen darah, adanya pigmen empedu, adanya garam kholat,
dan adanya indikan dalam urin abnormal.

Urin adalah zat sisa dari proses penyaringan darah yang dilakukan
oleh ginjal dan hasil penyaringan tersebut berupa zat cair yang ditampung
di dalam kandung kemih yang akan dikeluarkan dari tubuh melalui saluran
kemih (Davey, 2002). Warna urin secara umum adalah kuning, kuning
kecoklatan, atau tidak berwarna. Semakin banyak air yang terkandung
dalam urin makan warna urin akan semakin jernih. Urin normal merupakan
cairan dengan pH diantara 4,6 sampai 7,4. Urin dipengaruhi oleh
beberapa faktor, yaitu tekanan darah, temperatur, kondisi mental, dan
kondisi kesehatan (Tamsuri, 2000).
Urin terbentuk dalam ginjal dan dikeluarkan dari tubuh lewat
saluran. Urin terdiri dari 98% air dan yang lainnya terdiri dari pembentukan
metabolisme nitrogen (urea, asam urat, kreatinin, dan juga produk lain dari
metabolisme protein). Urin yang sehat memiliki berat jenis berkisar 1,010
sampai 1,020 tergantung dengan perbandingan larutan dengan air.
Banyaknya urin yang dikeluarkan dalam 1 hari sebanyak 1.200 hingga
1.500 cc (40 sampai 50 oz) (Mukaromah et al., 2010).
142
Normalnya 180 liter cairan pada tubuh manusia difiltrasi melalui
glomeruli setiap hari, sementara volume urin harian rata-rata sekitar 1 liter.
Dengan demikian beban solut yang sama dapat diekskresikan per 24 jam
ke dalam volume urin 500 ml dengan konstentrasi 1400 mosm/L atau
dalam volumer 23,2 liter dengan konsentrasi 80 mosm/L. Ada beberap
ahal yang berkaitan dengan proses pembentukan urin, ketika terjadi
ketidaknormalan antara satu dengan yang lain akan timbul berbagai
macam penyakit (Wahidi, 2015).
Ginjal membentuk urin melalui proses fertilisasi, reabsorbsi, dan
sekresi. Tubulus proksimal mereabsorbsi berbagai zat yang masih
dibutuhkan oleh tubuh dan sekresi urea ke urin hingga terbentuk urin yang
pekat. Reabsorbsi merupakan proses kedua setelah filtrasi. Tahap
penyerapan kembali zat masih diperlukan oleh tubuh menghasilkan urin
sekunder. Tahap terakhir adalah tahap ekskresi yang akan menghasilkan
urin sebenarnya (Salvo, 2016).
Urin mengandung garam-garam anorganik dan senyawa-senyawa
organik. Senyawa anorganik yang terdapat dalam urin sebagian besar
merupakan sampah dari proses metabolisme antara lain ureum, asam
urat, kreatin, asam hipurat, indikan, asam-asam amino, asam-asam
organik (asam asetat, asam format, asam butirat, asam sitrat, asam
oksalat, asam laktat, asam glukoronat, dana sam benzoat). Dalam urin
terdapat enzim antara lain amilase, tripsin, lipase, beberapa hormon
(hormon kelamin), vitamin C, dan vitamin B (Sumardjo, 2009)
Uji Biuret terhadap Ureum. Prinsip kerjanya yaitu jika dipanaskan
akan lebur dan melepaskan satu NH3 sehingga terbentuk asam sianat dan
urea aktif. Sukeco et al (2016) menjelaskan bahwa NH3 dipanaskan unsur
N nya akan terurai dan berperan sebagai donor elektron sehingga
terbentuklah asam sianat dan urea aktif. Urea aktif akan bereaksi dengan
reagen biuret membentuk warna ungu. Muthawali (2018) menjelaskan
bahwa ureum mengandung unsur N sehingga saat bertemu dengan Cu 2+
dari reagen biuret atau CuSO4 terbentuk warna ungu yang kepekatannya
143
berbanding lurus dengan konsentrasi ureum, semakin tinggi konsentrasi
ureum maka warna ungun semakin pekat.
Uji Enzimatik terhadap Ureum. Prinsip kerjanya yaitu menggunakan
enzim urease. Enzim urease akan menghidrolisis ureum sehingga
menghasilkan ion amonium yang kemudian dapat diukur. Suhu 60oC
adalah suhu optimum enzim bekerja. Fahisyah (2019) suhu
mempengaruhi aktivitas katalis enzim. Fatma (2018) menyatakan bahwa
suhu tidak optimum menyebabkan aktivitas tidak maksimal. Urease pada
urea ditambahkan dengan 2H2O2, NH4+.
Uji Benedict terhadap Garam Urat. Prinsip kerjanya yaitu endapan
merah bata yang terbentuk karena senyawa CuO pada reagen Benedict
direduksi oleh garam urat dalam urin menjadi Cu2O yang berwarna merah
bata. Nurjannah (2017) menyatakan bahwa reduksi ion Cu2+ dari CuSO4
oleh gula pereduksi akan berlangsung dengan cepat pada suasana basa.
Uji Murexida. Prinsip kerjanya yaitu asam urat direduksi oleh HNO3
menjadi dialurat dan. Saraswati (2002) menyatakan bahwa dialurat dan
alloxan akan berkondensasi membentuk alloxantin dan bereaksi dengan
ammonium hidroksida yanga kan membentuk asam purpurat.
Uji Daya Mereduksi Asam Urat. Prinsip kerjanya yaitu Prinsip kerja
uji adalah noda hitam menunjukkan bahwa Ag + dari AgNO3 telah direduksi
oleh asam urat menjadi Ag. Asam urat sangat sukar larut dalam air namun
membentuk garam-garam yang larut dalam alkali, sehingga pada urin
asam jika dibiarkan maka asam urat akan mengendap.
Uji Pikrat. Prinsip kerjanya yaitu asam pikrat berwarna kuning, jika
bereaksi dengan kreatinin (dalam urin) dalam suasana basa (NaOH)
membentuk kompleks kreatinin-pikrat yang berwarna jingga. Kreatinin
merupakan salah satu senyawa yang terdapat dalam urin. Fungsi
penambahan NaOH agar asam pikrat dan NaOH bereaksi membentuk
larutan berwarna kuning tua.
Uji terhadap Garam Amonium. Prinsip kerjanya yaitu garam
ammonium dipanaskan akan melepas NH3 dan ditangkap oleh indikator
144
PP (pada kaca) sehingga membentuk warna merah muda. Indikator PP
jika dalam keadaan basa akan membentuk warna merah, kemudian
penambahan Na2CO3 2% berfungsi untuk memebuat suasana basa dalam
urin. Sumarlin et al (2007) menyatakan bahwa ammonium dalam urin
dengan zeolit dikarakerisasi dalam bentuk garam ammonium (NH4+), dan
pemanasan bertujuan untuk menghilangkan molekul air dari dalam rongga
permuikaan kristal zeolit.
Uji Khlorida. Prinsip kerjanya yaitu NaCl yang ditambahkan dengan
HNO3 dan AgNO3 akan membentuk endapan putih yang menandakan
adanya AgCl pada larutan tersebut. AgCl merupakan hasil reaksi pada
urin dengan AgNO3, lalu NH4OH yang ditambahkan menyebabkan
endapan AgCl larut. Ganong (2008) menyatakan bahwa AgCl yang
membentuk endapan putih terjadi karena adanya ion Cl yang berada pada
urin yang diikat oleh Ag+ dari AgNO3 penambahan amoniak akan
mengurangi endapan warna putih.
Uji Fosfat dan Kalsium. Prinsip kerjanya yaitu endapan amonium
fosfomolibdat yang berwarna kuning menunjukkan adanya fosfat dalam
urin. Endapan kalsium oksalat yang berwarna putih menunjukkan adanya
kandungan kalsium dalam urin.
Uji Sulfat. Prinsip kerjanya yaitu adanya endapan BaSO 4 yang
berwarna putih dihasilkan dari reaksi antara (SO4)2- (dalam urin) dan Ba2+
dari BaCl. Fungsi BaCl2 adalah untuk membentuk endapan BaSO4 apabila
terdapat sulfat dalam urin.
Uji Benedict terhadap Urin Abnormal. Prinsip kerjanya yaitu urin
sapi PO dan sapi PFH yang mengandung glukosa(sakarida), ketika diuji
benedict akan terbentuk endapan merah bata. Hal tersebut karena
glukosa akan mereduksi ion Cu2+ dari reagen benedict menjadi Cu+
membentuk senyawa Cu2O yang terlihat sebagai endapan merah bata.
Larutan CuSO4 yang ditambahkan berfungsi sebagai sumber Cu2+ yang
akan direduksi glukosa.
145
Uji Heller. Prinsip kerjanya yaitu cincin putih keruh adalah koagulasi
albumin karena penambahan asam nitrat pekat. Sumardjo (2009)
menyatakan bahwa asam nitrat sebagai pemberi suasana asam. Albumin
akan mengalami denaturasi karena penambahan asam nitrat pekat yang
mampu menurunkan pH sehingga albumin mencapai titik isoelektriknya.
HNO3 pekat berfungsi agar protein pada bahan uji akan terdenaturasi
dengan dilakukannya pemanasan. Umam (2017) menyatakan bahwa
denaturasi terjadi karena pengaruh sifat asam dari asam nitrat (HNO 3),
karena denaturasi dapat dipengaruhi pH, suhu, tekanan dan lain-lain.
Uji Benzidin terhadap Pigmen Darah. Prinsip kerjanya yaitu H 2O2
akan mengalami dekomposisi menjadi 2H2O dan O2 sehingga O2 dapat
mengoksidasi benzidin menjadi derivatnya berwarna hijau atau biru.
Marks et al (2000) menyatakan bahwa hidrogen peroksida mengalami
dekomposisi menjadi H2O dan oksigen yang mampu mengoksidasi
benzidin.
Uji Gmelin terhadap Pigmen Empedu. Prinsip kerjanya yaitu urin
abnormal ditambahkan HNO3 pekat membentuk warna hijau, biru, merah,
atau kuning kemerahan. Penambahan HNO3 pekat bertujuan untuk
mengkondensasi pigmen empedu yang terdapat dalam urin menjadi
bilirubin, biliverdin, urobilin, dan urobilinogen.
Uji Hay untuk Garam Kholat. Prinsip kerjanya yaitu tenggelamnya
serbuk belerang dalam urin menunjukkan bahwa dalam urin terdapat
garam kholat yang menurunkan tegangan permukaan cairan. Fungsi
penambahan serbuk belerang yaitu untuk mengetahui kemampuan gaeam
kholat untuk menurunkan tegangan permukaan cairan. Rahmanto (2012)
menyatakan bahwa garam empedu berfungsi menurunkan tegangan
permukaan lemak dan air (mengemulsikan lemak).
Uji Obermeyer terhadap Indikan. Prinsip kerjanya yaitu obermeyer
dapat bereaksi dengan indikan dalam urin abnormal maka akan berubah
warna menjadi indigo blue yang larut dalam khloroform. Poedjiadi (2005)
menyatakan bahwa indikan dapat merubah pereaksi obermeyer menjadi
146
berwarna indigo blue. Indikan berasal dari penguraian triptophan yang
masuk dalam darah lalu diekskresikan lewat urin. Fungsi dari
penambahan khloroform yaitu sebagai pelarut. Saraswati (2002)
menyatakan bahwa khloroform berfungsi sebagai pelarut dan obermeyer
dapat mengubah indikan menjadi indigo blue.
147
Materi dan Metode
Materi
Alat. Alat yang digunakan pada praktikum acara urin kualitatif
antara lain tabung reaksi, rak tabung reaksi, pipet pump, gelas ukur, gelas
beker, sendok kimia, pipet tetes, waterbath, stopwatch, lampu bunsen,
penjepit tabung, cawan porselen, spatula, kertas saring, dan potongan
kaca.
Bahan. Bahan yang digunakan pada praktikum acara urin kualitatif
antara lain urin sapi (PO dan PFH) normal, urin sapi abnormal, kristal
ureum, NaOH encer, CuSO4, phenol red, larutan Na2CO3 bebas air,
Na2CO3 20%, HNO3 pekat, asam urat padat, NH4OH, larutan AgNO3,
NaOH 10%, asam pikrat jenuh, asam asetat glasial, indikator fenolftalein,
larutan BaCl2, asam asetat panas 2%, larutan amonium molibdat, larutan
kalium oksalat, HCl encer, larutan H2O2, serbuk belerang, pereaksi
Obermeyer, khloroform, dan larutan HNO3.
Metode
Senyawa Organik dalam Urin
Uji Biuret terhadap Ureum. Ureum sebanyak 2 mg dimasukkan ke
dalam tabung reaksi. Tabung reaksi dipanaskan dengan api kecil hingga
ureum lebur dan memadat kembali. Tabung reaksi didinginkan dan
ditambahkan 1 ml NaOH encer dan 1 ml larutan CuSO4. Perubahan warna
yang terjadi diamati dan dicatat.
Uji Enzimatik terhadap Ureum. Tabung reaksi sebanyak dua buah
disiapkan. Tabung satu diisi dengan 2 ml urin normal, dan tabung dua diisi
dengan 2 ml akuades. Phenol red ditambahkan sebanyak 3 tetes dan
Na2CO3 2% sebanyak 1 ml pada masing-masing tabung. Larutan asam
asetat 2% ditambahkan sebanyak 1 ml pada kedua tabung. Larutan
dipanaskan 60oC menggunakan waterbath selama 5 menit. Tepung
148
kedelai ditambahkan ke dalam tabung reaksi dan digojok. Perubahan
Uji Benedict terhadap Garam Urat. Tabung reaksi diisi 2 ml urin,
3 sampai 5 tetes pereaksi Benedict dan satu sendok kristal Na2CO3 bebas
air. Larutan dipanaskan dengan bunsen selama 10 menit. Perubahan
warna yang terjadi dicatat dan diamati.
Uji Murexida. Cawan porselen diberi 3 tetes HNO3 pekat dan satu
sendok asma urat padat. Cawan porselen dipanaskan menggunakan
bunsen sampai kering. NH4OH sebanyak satu tetes ditambahkan dan
diamati perubahan warna yang terjadi.
Uji Daya Mereduksi Asam Urat. Asam urat dilarutkan pada tabung
reaksi pertama dengan 1 ml larutan Na2CO3 (L1). Larutan (L1) diteteskan
diatas kertas saring yang telah dibasahi dengan AgNO 3. Warna yang
timbul pada bekas tetesan pada kertas saring diamati dan dicatat
hasilnya.
Uji Pikrat. Tabung reaksi diisi 1 ml asam pikrat jenuh dan 0,5 ml
10% NaOH. Isi tabung dibagi menjadi dua bagian, pada tabung satu diisi
dengan 1 ml akuades, sedangkan pada tabung dua diisi dengan 2 ml urin.
Perubahan warna yang terjadi pada kedua tabung diamati dan dicatat.
Uji terhadap Garam Amonium. Tabung reaksi diisi dengan 2 ml
urin, 3 tetes fenolftalein, dan 3 tetes Na2CO3 2%. Tabung reaksi kemudian
dipanaskan dengan bunsen dan uapnya ditampung dengan sepotong
kaca yang sebelumnya telah dibasahi oleh fenolftalein. Perubahan warna
yang timbul diamati dan dicatat.
Zat-Zat Anorganik dalam Urin
Uji Khlorida. Urin sebanyak 1 ml ditambahkan dengan 3 sampai 5
tetes HNO3 dan 1 ml AgNO3 0,171 N (L2). Warna endapan yang terjadi
dicatat dan larutan (L2) ditambahkan larutam NH4OH. Perubahan yang
terjadi diamati dna dicatat.
Uji Fosfat dan Kalsium. Urin sebanyak 10 ml dibuat dialkali
dengan 3 sampai 5 tetes larutan NH4OH, kemudian dipanaskan dengan
149
bunsen dan disaring. Endapan dicuci dengan air dan larutan ditambah
dengan 1 ml asam astetat 2% kemudian dipanaskan dengan bunsen
sampai mendidih. Larutan dibagi menjadi dua bagian, tabung 1
ditambahkan satu tetes HNO3 pekat dan 3 tetes larutan amonium molibdat
lalu dipanaskan. Tabung 2 ditambahkan 2 tetes kalium oksalat, kemudian
perubahan yang timbul pada masing-masiing tabung diamati dan dicatat
hasilnya.
Uji Sulfat. Urin sebanyak 1 ml ditambah dengan 5 tetes HCl encer
kemudian ditambahkan dengan 1 ml BaCl2 10%. Perubahan yang terjadi
diamati dan hasilnya dicatat.
Keabnormalan Urin
Uji Benedict terrhadap Urin Abnormal. Urin abnormal sebanyak
0,5 ml ditambahkan dengan 3 ml pereaksi Benedict. Tabung dipanaskan
dan didinginkan. Perubahan yang terjadi diamati dan hasilnya dicatat.
Uji Heller. Sebuah tabung diisi dengan 1 ml urin kemudian
ditambahkan dengan HNO3 pekat melalui dinding tabung menggunakan
pipet tetes hingga terbentuk dua lapisan. Perubahan pada bidang batas
tersebut diamati dan hasilnya dicatat.
Uji Benzidin terhadap Pigmen Darah. Benzidin sebanyak 1 ml
dicampur dengan 1 ml H2O2, lalu dibagi menjadi dua tabung. Tabung 1
ditambahkan dengan 1 ml urin abnormal dan tabung 2 ditambah 1 ml urin
normal. Perubahan warna yang timbul diamati dan dibandingkan hasilnya.
Uji Gmelin terhadap Pigmen Empedu. Larutan HNO3 pekat
sebanyak 1 ml dicampurkan dengan hati-hati dengan 1 ml urin abnormal.
Penambahan dialirkan melalui dinding tabung hingga terbentuk dua
lapisan. Perubahan yang terjadi bada bidang batas dicatat dan diamati
hasilnya.
Uji Hay untuk Garam Kholat. Dua tabung reaksi disiapkan, tabung
1 diisi dengan urin abnormal dan tabung 2 diisi dengan air suling. Masing-
masing tabung ditaburi serbuk belerang diatas permukaannya. Perubahan
yang terjadi diamati dan dicatat hasilnya.
150
Uji Obermeyer terhadap Indikan. Tabung reaksi berisi urin
abnormal sebanyak 4 ml dicampur dengan 5 ml pereaksi Obermeyer dan
2 ml khloroform. Tabung digojok secara hati-hati dan diinkubasi di suhu
ruang. Perubahan warna yang terjadi diamati dan dicatat hasilnya.
151

Uji Biuret terhadap Ureum Tujuan dari uji Biuret terhadap urin
adalah untuk mengetahui adanya ureum dalam urin. Prinsip kerja uji
Biuret terhadap urin adalah jika dipanaskan akan lebur dan melepaskan
satu NH3 sehingga terbentuk asam sianat dan urea aktif. Sukeco et al
(2016) menjelaskan bahwa NH3 dipanaskan unsur N nya akan terurai dan
berperan sebagai donor elektron sehingga terbentuklah asam sianat dan
urea aktif. Urea aktif akan bereaksi dengan reagen biuret membentuk
warna ungu. Muthawali (2018) menjelaskan bahwa ureum mengandung
unsur N sehingga saat bertemu dengan Cu2+ dari reagen biuret atau
CuSO4 terbentuk warna ungu yang kepekatannya berbanding lurus
dengan konsentrasi ureum, semakin tinggi konsentrasi ureum maka warna
ungun semakin pekat. Uji biuret adalah reaksi antara tembaga sulfat
dalam alkali dengan senyawa yang berisi dua atau lebih ikatan peptida
yang memberikan warna ungu biru yang khas.
Praktikum ini dilakukan dengan menambahkan NaOH kedalam
larutan, hal ini dilakukan untuk memberikan suasana basa. Muthawali
(2018) menyatakan bahwa adanya penambahan NaOH kedalam larutan
digunakan untuk memberikan suasana basa. Penambahan CuSO4
dimaksudkan agar Cu2+ dari CuSO4 dapat bereaksi dengan NH4 dari
ureum dan urin. Chang (2005) menyatakan bahwa larutan didalam tabung
reaksi digojok agar larutan menjadi homogen dan reaksi dapat
berlangsung dengan sempurna.
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan, digunakan dua
tabung, tabung pertama yang berisi kristal ureum, NaOH 10% dan CuSO 4
0,5% berubah warnanya menjadi ungu jernih. Hal ini menunjukkan adanya
reaksi antara Cu2+ dengan N dalam ureum. Tabung kedua yang berisi
urine sapi PFH, NaOH 10% dan CuSO4 0,5% warnanya yang terbentuk
yaitu ungu. Hal ini menunjukkan ada reaksi antara Cu 2+ dengan N dalam
152
ureum. Berdasarkan praktikum uji biuret diperoleh hasil bahwa pada urin
sapi PO warna larutan berubah menjadi ungu. Putri et al. (2016)
menyatakan bahwa uji biuret digunakan untuk uji protein, karena uji ini
dapat mendeteksi adanya ikatan peptida yang diperoleh hasil reaksi
berupa warna ungu pada larutan yang menunjukkan adanya protein. Hasil
pada urin sapi PFH larutan berubah warna menjadi ungu, yang berarti
dalan urin sapi PO dan urin sapi PFH mengandung ikatan peptida (asam
amino). Hasil uji biuret terhadap ureum pada sapi PO dan sapi PFH
tersebut tidak sesuai dengan Arifin (2015) menyatakan bahwa kandungan
yang terdapat dalam urin adalah nitrogen 1%, fosfor 0,5%, kalium 1,5%,
karbon 1,1%, dan air 92%. Asam amino adalah zat abnormal dalam urin
karena masih berguna untuk tubuh. Faktor praktikum tidak sesuai dapat
terjadi, karena urin yang digunakan urin sapi yang tidak sehat.
Uji Enzimatik terhadap Ureum. Tujuan dari uji enzimatik terhadap
ureum adalah untuk mengetahui adanya ureum dalam urin. Prinsip
kerjanya yaitu menggunakan enzim urease. Zusfahair (2018) menyatakan
bahwa enzim urease sebagai katalis akan menghidrolisis ureum sehingga
menghasilkan ion amonium yang kemudian dapat diukur. Suhu 60oC
adalah suhu optimum enzim bekerja. Fahisyah (2019) suhu
mempengaruhi aktivitas katalis enzim. Fatma (2018) menyatakan bahwa
suhu tidak optimum menyebabkan aktivitas tidak maksimal. Urease pada
urea ditambahkan dengan 2H2O2, NH4+. Penambahan tepung kedelai
menyebabkan warna larutan menjadi ungu dan terdapat endapan. Tepung
kedelai digunakan sebagai sumber enzim urease. Makfoeld et al. (2002)
menyatakan bahwa tepung kedelai merupakan sumber enzim urease
sehingga terjadi reaksi enzimatik yang berperan dalam menghidrolisis
urea dalam urin.
tabung, tabung pertama diisi urin yang ditambahkan indikator phenol red.
Fungsi penambahan indikator phenol red untuk membentuk warna merah
pada suhu optimum. Yazid (2018) menyatakan bahwa indikator phenol red
153
sebagai pembanding yang memiliki trayek pH 8,3 sampai 10. Larutan
kemudian ditambahkan Na2CO3 sebagai pemberi suasana basa. Shaqour
et al. (2017) menyatakan bahwa Na2CO3 berfungsi sebagai pemberi
suasana basa. Larutan ditambahkan asam asetat lalu dipanaskan dengan
waterbath. Cahyaninggalih et al. (2018) menyatakan bahwa fungsi
penambahan asam asetat agar larutan kembali pada keadaan semula.
Larutan kemudian ditambah tepung kedelai lalu terjadi perubahan warna
menjadi merah.
Hasil dari urin sapi PO dan sapi PFH sama–sama menunjukkan
warna merah keunguan dan terdapat endapan. Adanya endapan
menunjukkan dalam urin terdapat urea. Hal ini karena tepung kedelai
mengandung enzim urease bereaksi dengan urea dalam urin, sehingga
terjadi reaksi enzimatik. Warna yang terjadi menunjukkan kandungan urea
dalam urin sedikit. Indarto (2010) menyatakan bahwa hasil hidrolisis urea
akan menghasilkan warna ungu agak jingga.
Pada tabung yang berisi akuades tidak terjadi perubahan warna
dan hanya terdapat endapan. Hal ini karena dalam akuades tidak
mengandung urea sehingga tidak terjadi reaksi enzimatik. Joshi dan
Saraswari (2002) menyatakan bahwa warna yang terbentuk karena
adanya amonia hasil reaksi urea dengan enzim urease. Warna yang
ditunjukkan tidak pekat karena pada urin sapi yang digunakan sedikit
mengandung urea. Hasil sesuai dengan literatur.
Uji Benedict terhadap Garam Urat. Tujuan dari uji Benedict
terhadap garam urat adalah untuk mengatahui adanya garam urat
(senyawa mereduksi). Prinsip kerja dari uji Benedict terhadap garam urat
adalah endapan merah bata yang terbentuk karena senyawa CuO pada
reagen Benedict direduksi oleh garam urat dalam urin menjadi Cu2O yang
berwarna merah bata. Fungsi penambahan reagen Benedict sebagai
pembentuk endapan merah bata (Cu2O) setelah dilakukannya
pemanasan. Kristal Na2CO3 berfungsi untuk memberi suasana basa yang
menyebabkan reduksi berlangsung dengan cepat. Shaqour et al., (2017)
154
menyatakan bahwa Na2CO3 berfungsi sebagai pemberi suasana basa.
Nurjannah (2017) menyatakan bahwa reduksi ion Cu2+ dari CuSO4 oleh
gula pereduksi akan berlangsung dengan cepat pada suasana basa.
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan, urin normal sapi PO
dan sapi PFH yang ditambah dengan reagen Benedict dan Kristal Na 2CO3
warnanya menjadi biru, kemudian dipanaskan dengan bunsen selama 10
menit warnanya berubah menjadi merah kecoklatan dengan endapan
merah bata. Endapan merah bata disebabkan oleh CuO pada reagen
Benedict direduksi oleh garam urat dalam urin. Berdasarkan praktikum uji
Benedict terhadap garam urat pada urin PO dan PFH diperoleh hasil yang
sama yaitu endapan merah bata. Warna larutan tidak berubaah namun
adanya endapan merah bata menunjukkan adanya garam urat dalam urin.
Nurjannah (2017) menyatakan bahwa reduksi ion Cu2+ dari CuSO4 oleh
gula pereduksi akan berlangsung dengan cepat dan membentuk Cu2O
yang merupakan endapan merah bata.
Hasil yang diperoleh endapan merah bata karena reagen benedict
direduksi garam urat membentuk Cu2O. Sumardjo (2009) yang
menyatakan bahwa pemanasan karbohidrat pereduksi akan merubah
warna dan membentuk endapan merah bata. Faktor yang mempengaruhi
yaitu adanya gugus pereduksi pada garam urat. Hasil sesuai dengan
literatur.
Uji Murexida. Tujuan dari uji Murexida adalah untuk mengetahui
adanya asam urat dalam urin. Prinsip kerja dari uji Murexida adalah asam
urat direduksi oleh HNO3 menjadi dialurat dan alloxan. Fungsi
penambahan HNO3 yaitu sebagai zat yang mereduksi asam urat dalam
urin. Muhtadi et al. (2012) menyatakan bahwa HNO3 merupakan oksidator
yang kuat sehingga asam urat dapat menjadi asam dialurat dan alloxan.
Penambahan NH4OH ke dalam larutan bertujuan agar NH4OH dapat
mereduksi alloxan. Aldina (2018) menyatakan bahwa NH4OH dapat
mereduksi alloxan menjadi ammonium purpurat.
155
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan,digunakan dua cawan
porselen. Cawan porselen pertama adalah asam urat yang ditambah
dengan HNO3 pekat lalu dipanaskan sampai kering dan ditambah NH4OH
warnanya yang awalnya bening berubah menjadi warna ungu yang
merupakan amonium purfurat (Murexida) asam urat yang dalam jumlah
banyak tersebut direduksi oleh HNO3 menjadi dialurat dan alloxan
kemudian senyawa tersebut direduksi oleh NH4OH membentuk amonium
purpurat yang berwarna ungu. Joshi dan Saraswati (2002) menyatakan
bahwa dialurat dan alloxan akan berkondensasi membentuk alloxatin dan
beraksi dengan ammonium hidroksida yang akan membentuk asam
purpurat. Cawan porselen kedua adalah urin sapi PFH yang ditambah
HN03 pekat lalu dipanaskan sampai kering dan ditambah NH4OH menjadi
warna kuning, sedangkan pada sapi PO berwarna jingga. Hal ini
disebabkan karena menurut pernyataan Khoiriyah et al. (2017)
menyatakan bahwa didalam urin yang digunakan sedikit kandungan asam
uratnya, sehingga tidak mampu membentuk warna ungu. Hasil tersebut
berarti sesuai dengan literatur.
Uji Daya Mereduksi Asam Urat. Tujuan dari uji daya mereduksi
asam urat adalah untuk mengetahui daya mereduksi asam urat. Prinsip
kerja uji adalah noda hitam menunjukkan bahwa Ag+ dari AgNO3 telah
direduksi oleh asam urat menjadi Ag. Asam urat sangat sukar larut dalam
air namun membentuk garam-garam yang larut dalam alkali, sehingga
pada urin asam jika dibiarkan maka asam urat akan mengendap. Fungsi
penambahan AgNO3 yaitu sebagai sumber dari ion Ag+ yang kemudian
senyawa tersebu direduksi oleh asam urat dalam urin menjadi Ag.
Sumardjo (2009) menyatakan bahwa Na2CO3 yaitu larutan basa alkali
yang dapat menghasilkan warna terang dan AgNO3 sebagai daya reduksi
oleh larutan asam urat. Fungsi penambahan Na2CO3 untuk membentuk
endapan warna putih. Mulyono (2001) menyatakan bahwa penambahan
satu ml Na2CO3 berfungsi sebagai soda pembersih yang larut dalam air
untuk melarutkan asam urat sehingga terbentuk endapan. Praktikum
156
dilakukan dengan melarutkan urin dengan Na2CO3, hal ini dilakukan
karena Na2CO3 merupakan larutan alkali yang dapat melarutkan asam
urat. Ningtyas dan Ramadhian (2016) menyatakan bahwa asam urat larut
dalam gliserol dan alkali hidroksida. Praktikum dilakukan dengan
membasahi kertas saring dengan AgNO3, hal ini dilakukan agar Ag+ dari
AgNO3 dapat direduksi oleh asam urat. Ningtyas dan Ramadhian (2016)
menyatakan bahwa hal ini dimaksudkan agar Ag + dari AgNO3 dapat
direduksi oleh asam urat yang terdapat dalam urin.
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan, pada urin sapi PFH
setelah ditetesi pada kartas saring, timbul sedikit bercak hitam pada kertas
saring. Hal ini dapat terjadi karena daya mereduksi asam urat dalam urin
kecil. Noda hitam lebih banyak terbentuk pada urin sapi PO. Lingga (2012)
menyatakan bahwa sebenarnya asam urat merupakan bagian normal
dalam darah dan urin. Hasil sesuai dengan literatur.
Uji Pikrat. Tujuan dari uji Pikrat adalah untuk mengetahui adanya
kreatinin dalam urin. Prinsip kerja dari uji Pikrat adalah asam pikrat
berwarna kuning, jika bereaksi dengan kreatinin (dalam urin) dalam
suasana basa (NaOH) membentuk kompleks kreatinin-pikrat yang
berwarna jingga. Kreatinin merupakan salah satu senyawa yang terdapat
dalam urin. Fungsi penambahan NaOH agar asam pikrat dan NaOH
bereaksi membentuk larutan berwarna kuning tua. Sumardjo (2009)
menyatakan bahwa melalui proses mekanisme kimiawi NaOH sebagai
reaksi basa untuk mempengaruhi dalam pencampuran sehingga terjadi
perombakan kimia, jika ditambahkan reaksi kreatinin akan menghasilkan
warna kuning keruh.
Berdasarkan praktikum yang sudah dilakukan diperoleh asam
pikrat yang ditambahkan dengan NaOH terbentuk warna kuning pada
larutan. Larutan tersebut dibagi menjadi dua tabung. Tabung pertama
yang ditambahkan akuades menghasilkan warna kuning, karena dalam
akuades tidak terdapat kreatinin. Tabung kedua yang ditambahkan urin
menghasilkan warna jingga, karena dalam urin mengandung kreatinin.
157
Hasil dari percobaan urin sapi PO dan sapi PFH sama-sama
menghasilkan warna jingga. Rinda (2015) menyatakan bahwa kreatinin
merupakan produk akhir dari metabolisme kreatin yang diekskresikan dari
tubuh melalui filtrasi glomerular. Hasil sesuai dengan literatur.
Uji terhadap Garam Ammonium. Tujuan dari uji terhadap garam
ammonium ini garam ammonium dipanaskan akan melepas NH 3 dan
ditangkap oleh indikator PP (pada kaca) sehingga membentuk warna
merah muda. Indikator PP jika dalam keadaan basa akan membentuk
warna merah. Yazid (2018) menyatakan bahwa indikator phenol red
sebagai pembanding yang memiliki trayek pH 8,3 sampai 10. kemudian
penambahan Na2CO3 2% berfungsi untuk membuat suasana basa dalam
urin. Warsiki et al. (2016) menyatakan bahwa Jika basa ditambahkan ke
dalam fenolftalein, kesetimbangan molekul ion bergeser ke kanan,
menyebabkan ionisasi lebih banyak karena pembebasan ion H +. Sumarlin
et al. (2007) menyatakan bahwa ammonium dalam urin dengan zeolit
dikarakerisasi dalam bentuk garam ammonium (NH4+), dan pemanasan
bertujuan untuk menghilangkan molekul air dari dalam rongga permuikaan
kristal zeolit. Praktikum dilakukan dengan memanaskan urin, hal ini
dilakukan agar NH3 dapat lepas dari urin. Indriyati dan Anas (2013)
menyatakan bahwa urin yang dipanaskan akan melepaskan NH 3.
Praktikum dilakukan dengan membasahi kaca dengan indikator PP yang
digunakan sebagai indikator warna. Padmaningrum et al. (2012)
menyatakan bahwa indikator PP digunakan untuk indikator warna
sehingga dapat menunjukkan kandungan suatu zat dalam uap tersebut.
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan, urin sapi PO dan sapi
PFH yang ditambah dengan indikator PP dan Na 2CO3 2% yang kemudian
dipanaskan, uapnya yang ditampung dengan kaca yang dibasahi dengan
fenolftalien membentuk warna merah muda keunguan. Hal ini diakibatkan
oleh NH4 yang dilepaskan oleh garam ammonium saat terjadi pemanasan.
Terbentuknya warna merah muda ini membuktikan adanya ammonium
dalam urin. Sumarlin et al (2008) menyatakan bahwa amonium dalam urin
158
dengan zeolit dikarakterisasi dalam bentukgaram amonium (NH4+). Hasil
Uji Khlorida. Tujuan dari uji khlorida adalah untuk mengetahui
adanya khlor dalam urin. Prinsip kerja uji khlor adalah yaitu NaCl yang
ditambahkan dengan HNO3 dan AgNO3 akan membentuk endapan putih
yang menandakan adanya AgCl pada larutan tersebut. AgCl merupakan
hasil reaksi pada urin dengan AgNO3, lalu NH4OH yang ditambahkan
menyebabkan endapan AgCl larut. Perdana dan Susanti (2013)
menyatakan bahwa penambahan NH4OH bertujuan untuk mendispersi
kembali endapan dan memperkecil ukuran partikel. Fungsi penambahan
HNO3 untuk pemberi suasana asam dan mengubah warna larutan
menjadi putih. Misnadiarly (2007) menyatakan bahwa HNO 3 berfungsi
memberikan suasana asam dalam larutan. Fungsi penambahan AgNO 3
untuk membentuk endapan dengan Ag+ dari AgNO3 bereaksi dengan NaCl
dalam urin sapi PO dan sapi PFH dan membentuk endapan AgCl. Addin
(2016) menyatakan bahwa AgNO3 sebagai senyawa yang bereaksi
dengan asam nitrat pekat dan menyediakan ion Ag +. Ganong (2008)
menyatakan bahwa AgCl yang membentuk endapan putih terjadi karena
adanya ion Cl yang berada pada urin yang diikat oleh Ag + dari AgNO3
penambahan amoniak akan mengurangi endapan warna putih.
PFH yang ditambah dengan HNO3 dan AgNO3 sama-sama menghasilkan
endapan putih dan larutan berwarna putih keruh. Hal tersebut
membuktikan bahwa dalam urin sapi PO dan urin sapi PFH mengandung
khlor. Widiarti (2017) menyatakan bahwa terbentuknya endapan putih
mengindikasikan adanya gugus Cl dalam sampel. Endapan terbentuk
karena Ag pada AgNO3 bereaksi dengan Cl sehingga terlalu jenuh.
Penambahan NH4OH berlebihan ke dalam larutan yang telah ada,
mengakibatkan endapan kembali larut dan warna berubah menjadi
kuning. Soedarmo (1998) menyatakan bahwa endapan putih tersebut
159
menunjukkan adanya khlorida pada larutan. Hal ini berarti bahwa hasil
praktikum telah sesuai dengan literatur.
Uji Fosfat dan Kalsium. Tujuan dari uji fosfat dan kalsium yaitu
endapan amonium fosfomolibdat yang berwarna kuning menunjukkan
adanya fosfat dalam urin. Endapan kalsium oksalat yang berwarna putih
menunjukkan adanya kandungan kalsium dalam urin. Urin sapi PO dan
PFH ditambahkan NH4OH dan dilakukan pemanasan dengan tujuan untuk
membentuk endapan Ca-Mg-fosfat. Day (2002) menyatakan bahwa fungsi
perlakuan pemanasan dengan bunsen untuk mempercepat reaksi. Sari
(2014) menyatakan bahwa gas amoniak dapat terlarut dalam air dan
NH4OH akan terpecah menjadi amonium (NH4+) dan ion hidroksida (OH-).
Perdana dan Susanti (2013) menyatakan bahwa penambahan NH 4OH
bertujuan untuk mendispersi kembali endapan dan memperkecil ukuran
partikel. Fungsi penambahan HNO3 pekat adalah untuk melepaskan
asam fosfat menjadi fosfat dan penambahan amonium molibdat pada
tabung adalah untuk melepas ikatan dari fosfat atau fosfor. Praktikum uji
fosfat dilakukan dengan menambahkan ammonium molibdat, agar
ammonium molibdat dapat bereaksi dengan fosfat dalam urin. Budiarso et
al. (2017) menyatakan bahwa ammonium molibdat dapat bereaksi dengan
fosfat membentuk ammonium fosfomolibdat. Praktikukum uji kalsium
dilakukan dengan penambahan kalium oksalat, hal ini dilakukan agar
kalsium dapat mengikat oksalat pada kalium oksalat.
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan, urin sapi PO dan
NH4OH yang dipanaskan membentuk endapan. Endapan lalu dicuci
dengan air. Tambah dengan asam asetat 2%. Cahyaninggalih et al.
(2018) menyatakan bahwa fungsi penambahan asam asetat agar larutan
kembali pada keadaan semula. Larutan lalu dipanaskan. Day (2002)
menyatakan bahwa fungsi perlakuan pemanasan dengan bunsen untuk
mempercepat reaksi. Larutan kemudian dibagi ke dalam dua tabung.
Tabung pertama ditambah HNO3 pekat dan amonium molibdat, perubahan
yang terjadi yaitu warna berubah menjadi hijau dan terdapat sedikit
160
endapan, hal ini terjadi karena dalam urin kandungan fosfatnya sedikit
sehingga tidak terdeteksi. Tabung dua ditambah kalium oksalat,
perubahan yang terjadi yaitu warna berubah menjadi putih keruh dan ada
endapan putih yang menunjukkan dalam urin terkandung kalsium.
Sumarlin et al. (2008) menyatakan bahwa komposisi urin adalah 96% air,
Natrium, pigmen empedu, 1,5% garam, kalium, toksin, 2,5% urea,
kalsium, bikarbonat, kreatinin N, magnesium, kreatinin, khlorida, asam urat
N, sulfat anorganik, asam urat, fosfat anorganik, amino N, sulfat, amonia
N dan hormon.
Tabung pertama untuk urin sapi PFH yang ditambahkan HNO 3
pekat dan amonium molibdat menghasilkan warna kekuningan dan
setelah dipanaskan warna menjadi hijau tanpa endapan yang berarti tidak
ada fosfat di dalam urin sapi PFH. Hal ini dapat terjadi karena kurang
optimalnya kerja ginjal, sehingga tidak mampu mengekskresikan fosfat
berlebih dalam tubuh ternak.Tabung dua yang berisi urin sapi PFH
terbentuk endapan putih yang menunjukkan dalam urin sapi PFH terdapat
kalsium. Hasil tersebut berarti bahwa hasil percobaan dan literatur sudah
sesuai.
Uji Sulfat. Tujuan dari uji sulfat adalah untuk mengetahui adanya
sulfat dalam urin. Prinsip kerja dari uji sulfat adalah adanya endapan
BaSO4 yang berwarna putih dihasilkan dari reaksi antara (SO 4)2- (dalam
urin) dan Ba2+ dari BaCl. Fungsi BaCl2 adalah untuk membentuk endapan
BaSO4 apabila terdapat sulfat dalam urin. Utami (2017) menyatakan
bahwa ion sulfat dalam suasana asam akan bereaksi dengan BaCl 2
membentuk kristal BaSO4. Fungsi penambahan HCl encer adalah untuk
membuat suasana asam.
PFH yang ditambah dengan HCl encer dan BaCl2 sama-sama membentuk
larutan berwarna putih keruh dan ada endapan putih. Endapan ini
merupakan endapan BaSO4 yang dihasilkan dari reaksi antara SO4 2-
(dalam urin) dan Ba2+ dari BaCl. Wahab (2000) menyatakan bahwa sulfit
161
dioksidasi menjadi sulfat oleh sulfit oksidase, dan sulfat diekskresikan
melalui urin. Hal tersebut berarti bahwa hasil percobaan telah sesuai
dengan literatur.
Keabnormalan Urin
Uji Benedict terhadap Urin Abnormal. Tujuan dari uji Benedict
terhadap urin abnormal adalah untuk mengetahui adanya gula mereduksi
dalam urin abnormal. Prinsip kerja uji Benedict terhadap urin abnormal
adalah adanya endapan menunjukkan dalam urin abnormal terdapat
glukosa yang mampu mereduksi Cu2+ menjadi Cu+. Endapan merah bata
tersebut adalah Cu2O. Fungsi penambahan reagen benedict adalah
sebagai sumber dari ion Cu2+ yang kemudian direduksi oleh glukosa
dalam urin abnormal menjadi Cu+. Ratna dan Yulistiani (2010)
menyatakan bahwa terbentuknya endapan merah bata menunjukkan
adanya kandungan glukosa pereduksi. Praktikum dilakukan dengan
mendidihkan urin abnormal dan reagen Benedict. Hal ini dilakukan agar
glukosa dalam urin abnormal dapat mereduksi Cu 2+ dalam reagen
Benedict dapat berjalan optimum. Indarti dan Asnawati (2011) menyataan
bahwa benedict mengandung ion Cu2+ yang akan direduksi oleh gula
menjadi ion Cu+ melalui pemanasan sehingga menghasilkan endapan
merah bata. Day (2002) menyatakan bahwa fungsi perlakuan pemanasan
dengan bunsen untuk mempercepat reaksi.Glukosa dalam urin abnormal
dapat mereduksi Cu2+ menjadi Cu+ dalam reagen benedict dalam suhu
optimum. Sumardjo (2006) menyatakan bahwa reaksi reduksi dapat
berjalan dengan baik pada suhu dan tekanan tinggi.
Berdasarkan praktikum yang dilakukan, urin abnormal yang
ditambah dengan reagen Benedict lalu dididihkan menunjukkan adanya
endapan yang berwarna hijau kekuningan, sedangkan warna larutan hijau
kebiruan. Hasil praktikum terdapat endapan, namun bukan endapan
merah bata. Indarti dan Asnawati (2011) menyataan bahwa benedict
mengandung ion Cu2+ yang akan direduksi oleh gula menjadi ion Cu +
162
melalui pemanasan sehingga menghasilkan endapan merah bata. Hasil
Penyakit glikosuria yaitu kondisi dimana di dalam urin terdapat
kandungan gula atau gula darah yang berlebih. Kondisi ini terjadi akibat
kadar gula darah tinggi atau kerusakan ginjal. Welliangan et al. (2019)
menyatakan bahwa glukosuria adalah kondisi dimana glukosa ditemukan
dalam urin (biasanya saat glukosa serum >180mg/dL). Ekskresi glukosa
dalam urin terjadi bila kadar glukosa dalam darah meningkat dan tidak
dapat direabsorbsi.
Uji Heller. Tujuan dari uji Heller adalah untuk mengetahui adanya
albumin dalam urin abnormal. Prinsip kerja uji Heller adalah cincin putih
keruh tersebut adalah koagulasi albumin karena penambahan asam nitrat
pekat. Sumardjo (2009) menyatakan bahwa asam nitrat sebagai pemberi
suasana asam. Albumin akan mengalami denaturasi karena penambahan
asam nitrat pekat yang mampu menurunkan pH sehingga albumin
mencapai titik isoelektriknya. HNO3 pekat berfungsi agar protein pada
bahan uji akan terdenaturasi dengan dilakukannya pemanasan. Umam
(2017) menyatakan bahwa denaturasi terjadi karena pengaruh sifat asam
dari asam nitrat (HNO3), karena denaturasi dapat dipengaruhi pH, suhu,
tekanan dan lain-lain. Naga et al. (2010) menyatakan bahwa albumin akan
mengalami denaturasi ketika mencapai pH tertentu.
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan, urin abnormal
ditambah HNO3 pekat, penambahan HNO3 pekat dilakukan dengan
dialirkan pada dinding tabung. Penambahan ini membentuk dua lapisan,
lapisan atas berwarna putih dan lapisan kedua berwarna kuning dengan
cincin putih keruh diantara dua lapisan tersebut. Cincin putih keruh
tersebut merupakan koagulasi albumin karena albumin mengalami
denaturasi saat bereaksi dengan HNO3. Hal ini membuktikan bahwa
dalam urin abnormal terkandung albumin. Sumardjo (2006) menyatakan
bahwa dalam urin abnormal mengandung komposisi antara lain albumin
163
atau protein, glukosa, eritrosit, leukosit, birilubin, urobilirubin dan urobilin.
Hasil praktikum sesuai dengan literatur.
Penyakit albuminuria adalah suatu kondisi dimana urin
mengandung albumin. Albumin merupakan zat yang masih diperlukan
oleh tubuh sehingga tidak dikeluarkan. Nmaun, ketika ginjal mengalami
kerusakan dalam menyaring, maka albumin dan protein lain dapat bocor
ke dalam urin. Cendra et al. (2014) menyatakan bahwa albuminuria
merupakan faktor penurunan kerja ginjal.
Uji Benzidin terhadap Pigmen Darah. Tujuan dari uji Benzidin
terhadap pigmen darah adalah untuk mengetahui adanya pigmen darah
(Hb) dalam urin abnormal. Prinsip kerja uji Benzidin terhadap pigmen
darah adalah H2O2 akan mengalami dekomposisi menjadi 2H2O dan O2
sehingga O2 dapat mengoksidasi benzidin menjadi derivatnya berwarna
hijau atau biru. Marks et al (2000) menyatakan bahwa hidrogen peroksida
mengalami dekomposisi menjadi H2O dan oksigen yang mampu
mengoksidasi benzidin. Benzidin adalah sebagai indikator warna.
Suhartina dan Purnama (2018) menyatakan bahwa fungsi reagen
Benzidin dalam uji Benzidin yaitu untuk memunculkan warna hijau atau
biru pada larutan.
tabung. Kedua tabung diisi dengan benzidin dan H 2O2 larutan berwarna
coklat. Tabung satu ditambah dengan urin normal, warna berubah dari
coklat menjadi bening, hal tersebut menunjukkan bahwa dalam urin
normal tidak terdapat pigmen darah, atau pigmen darahnya sedikit
sehingga tidak terdeteksi. Tabung dua ditambah dengan urin abnormal,
warna berubah dari coklat menjadi biru tua, hal ini membuktikan bahwa
dalam urin abnormal mengandung banyak pigmen darah. Sumardjo
(2006) menyatakan bahwa dalam urin abnormal mengandung komposisi
antara lain albumin atau protein, glukosa, eritrosit, leukosit, birilubin,
urobilirubin dan urobilin. Hasil praktikum sesuai dengan literatur.
164
Penyakit hematuria secara sederhana disebut kencing berdarah.
Airlangga (2018) menyatakan bahwa hematuria yaitu adanya darah dalam
urin. Hematuria dapat terjadi karena adanya kelainan dalam ginjal dan
saluran kemih.
Uji Gmelin terhadap Pigmen Empedu. Tujuan dari uji Gmelin
terhadap pigmen empedu adalah untuk mengetahui pigmen empedu
dalam urin abnormal. Prinsip dari uji Gmelin terhadap pigmen empedu
adalah urin abnormal jika ditambah HNO3 maka akan membentuk warna
hijau, biru, ungu, merah, kuning kemerahan sebab HNO3 mengkondensasi
pigmen empedu yang terdapat dalam urin. Yuliana (2018) menyatakan
bahwa HNO3 pekat berfungsi untuk mengoksidasi pigmen empedu yang
terdapat dalam urin.
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan, urin abnormal yang
ditambah dengan HNO3 pekat menghasilkan warna kuning kemerah-
merahan. Hal ini menunjukkan bahwa dalam urin tersebut mengandung
urobilin. Pratama (2016) menyatakan bahwa tersumbatnya saluran
empedu dan kerusakan hati akan mengakibatkan adanya kandungan
urobilin pada urin abnormal. Hasil praktikum sesuai dengan literatur.
Penyakit bilirubinuria yaitu mengindikasikan gangguan hati atau
saluran empedu. Bilirubinuria adalah penyakit karena adanya bilirubin
berlebih pada urin. Makay et al., (2016) menyatakan bahwa kerusakan sel
hati akan menyebabkan berkurangnya bilirubin yang diekskresikan ke
dalam usus. Bilirubin akan terkonjugasi dalam darah kemudian di
ekskresikan ginjal dalam urin.Pada urin akan ditemukan menurunnya
kadar urobilinogen urin dan terdapat bilirubin urin.
Uji Hay untuk Garam Kholat. Tujuan dari uji Hay untuk garam
kholat adalah untuk mengetahui adanya garam kholat dalam urin
abnormal. Prinsip kerja uji Hay untuk garam kholat adalah tenggelamnya
serbuk belerang dalam urin menunjukkan bahwa dalam urin abnormal
terdapat garam kholat yang menurunkan tegangan permukaan cairan.
Fungsi penambahan serbuk belerang yaitu untuk mengetahui kemampuan
165
garam kholat untuk menurunkan tegangan permukaan cairan. Poedjiadi
(2005) menyatakan bahwa serbuk belerang sebagai tanda bahwa di
dalam urin terdapat garam kholat. Rahmanto (2012) menyatakan bahwa
garam empedu berfungsi menurunkan tegangan permukaan lemak dan air
(mengemulsikan lemak).
tabung, tabung pertama urin ditambah serbuk belerang. Tabung kedua
diisi aquades ditambah serbuk belerang. Kedua tabung terdapat endapan
dari serbuk, serbuk belerang pada tabung urin mengendap cepat,
sedangakan serbuk pada tabung aquades tetap berada di permukaan dan
mengendapnya lebih lambat. Hal ini menunjukkan bahwa pada air tidak
terdapat garam kholat sehingga tegangan permukaan cairan air tidak
turun. Andriyani et al. (2015) menyatakan bahwa garam kholat dapat
mengurangi tegangan permukaan isi usus dan membantu membentuk
emulsi dari lemak yang dimakan. Hasil praktikum sesuai dengan literatur.
Uji Obermeyer terhadap Indikan. Tujuan dari uji Obermeyer
terhadap indikan yaitu untuk mengetahui adanya indikan dalam urin
abnormal. Prinsip kerjanya yaitu obermeyer dapat bereaksi dengan
indikan dalam urin abnormal maka akan berubah warna menjadi indigo
blue yang larut dalam khloroform Poedjiadi (2005) menyatakan bahwa
indikan dapat merubah pereaksi obermeyer menjadi berwarna indigo blue.
Indikan berasal dari penguraian triptophan yang masuk dalam darah lalu
diekskresikan lewat urin. Fungsi dari penambahan khloroform yaitu
sebagai pelarut. Saraswati (2002) menyatakan bahwa khloroform
berfungsi sebagai pelarut dan obermeyer dapat mengubah indikan
menjadi indigo blue.
Berdasarkan praktikum yang dilakukan, urin ditambah dengan
pereaksi obermeyer dan khloroform menghasilkan warna coklat. Larutan
digojok agar homogen. Larutan yang telah digojok menghasilkan dua
lapisan warna yaitu warna coklat dan warna indigo blue. Hal ini
menunjukkan dalam urin abnormal terdapat indikan. Poedjiadi (2005)
166
menyatakan bahwa indikan dapat merubah pereaksi Obermeyer menjadi
berwarna indigo blue. Hasil praktikum sesuai dengan literatur.
167
Kesimpulan
Berdasarkan praktikum acara urin kualitatif yang telah dilakukan
dapat disimpulkan bahwa di dalam urin normal sapi PO dan sapi PFH
terdapat senyawa organik, yaitu protein, urea, asam urat, garam
amonium, dan garam urat, sedangkan senyawa anorganik, yaitu fosfat,
asam sulfat, kalsium, dan khlorida. Keabnormalan pada urin berupa
adanya kandungan gula mereduksi, albumin, pigmen darah, pigmen
empedu, garam kholat, dan indikan. Faktor yang mempengaruhi kadar
senyawa dalam urin adalah pakan yang dimakan, fungsi ginjal, suhu,
psikologis dan kesehatan ternak.
168
Daftar Pustaka
Addin, I dan S. Yamtinah. 2016. Pembuatan perak nitrat (AgNO 3) teknis

dari limbah penyepuhan perak. Seminar Nasional Pendidikan Sains.
429-438.
Airlangga, E. 2018. Hematuria pada anak. Buletin Farmatera. 3(1): 17-19
Aldina, P. 2015. Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Kulit Buah
Rambutan terhadap kadar glukosa darah dan histologi pankreas
mencit yang diinduksi aloksan. Skripsi. Fakultas Farmasi Universitas
Jember. Jawa Barat.
Alam, S dan I. Hadibroto. 2007. Gagal Ginjal. PT Gramedia Pusaka
Utama. Jakarta.
Andriyani, R., T. Ani, dan J. Widya. 2015. Buku Ajar Biologi Reproduksi
dan Perkembangan. Deepublish. Yogyakarta.
Anggraini, T. 2015. Potency of citrus water as inhibitor calcium
lithogenesis on urinary tract. Jurnal Majority. 4(1) : 99-103.
Arifin, M. 2015. Kiat Jitu Menggemukkan Sapi Secara Maksimal.
Agromedia Pustaka. Jakarta Selatan
Budiarso, F. S., E. Suryanto, dan A. Yudhistira. 2017. Ekstraksi dan
aktivitas antioksidan dari biji jagung manado kuning. Jurnal Ilmiah
Farmasi. 6(3): 98-103.
Cendra, S., E. Moeis, dan Y. Langi. 2014. Gambaran kadar albuminuria
pada subjek diabetes melitus dengan dan tanpa penyakit jantung
koroner. Jurnal e-Clinic (eCl). 2(2): 27-29.
Chang, R. 2005. Kimia Dasar Konsep-Konsep Inti Edisi Ketiga Jilid 2.
Penerbit Erlangga. Jakarta.
Davey, P. 2002. At a Glance Medicine. Jakarta: Erlangga.
Day, R. A., dan A. L. Underwood. 2002. Analisis Kimia Kuantitatif.
Erlangga. Jakarta
Fahisyah, R. N., N. Nurlia, dan Z. Armah. 2019. Pengaruh variasi lama
penyimpanan reagen 1a terhadap hasil pemeriksaan ureum arah
metode bertelot. Jurnal Media Analisis Kesehatan. 10(1) : 23-25.
Ganong, W. F. 2008. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Edisi 22. Jakarta
Indarti, D. dan Asnawati. 2011. Karakteristik film nata de coco Benedict
secara adopsi untuk sensor glukosa dalam urin. Jurnal Ilmu Dasar.
12(2) : 200-209.
Indriyati, L. T. dan I. Anas. 2013. Terapan nitrogen urin oleh zeolit dan
pengaruhnya terhadap pertumbuhan tanaman jagung. Jurnal Tanah
Lingkungan. 15(2) : 84-90.
169
Joshi, R. A. dan S. Manju. 2002. Practical of Biochemistry. B. Jain
Publisher. New Delhi.
Khoiriyah, M., A. Sutanto, dan W. S. Sulistiani. 2017. Pengaruh macam
konsorsia bakteri indigen terhadap kualitas pupuk cair urin sapi.
Prosiding Seminar Nasional Pendidikan. Universitas Muhammadiyah
Metro. Metro.
Lanywati, E. 2001. Diabetes Melitus. Penerbit Kanisius. Yogyakarta.
Lingga, L. 2012. Bebas Penyakit Asam Urat Tanpa Obat. Agromedia.
Jakarta.
Machin, A. 2012. Potensi hidrolisat tempe sebagai penyedap rasa melalui
pemanfaatan ekstrak buah nanas. Biosantifika. 4(2) : 75-76.
Makay, F., G. I. Rambert, dan M. F. Wowor. 2016. Gambaran bilirubin dan
urobilinogen pada pasien tuberkulosis paru dewasa di RSUP Prof.
Dr. R. D. Kandou Manado. Jurnal e-Biomedik (eBm). 4(2).
Makfoeld, D., W. M. Djagal, H. Pudji, R. Sri, S. Sudarmanto, Suhardi, M.
Soeharsono, H. Suwedo, dan Tranggono. 2002. Kamus Istilah
Pangan dan Nutrisi. Kanisius. Yogyakarta.
Marks, D. B., D. M. Allan, dan M. S. Collens. 2000. Biokimia Kedokteran
Dasar: Sebuah Pendekatan Klinis. Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Jakarta.
Misnadiarly.2007. Asam Urat-Hiperurisemia-Arthritis Gout. Pustaka Obor.
Populer. Jakarta.
Muhtadi, A. Suhendi, Nurcahyanti, dan . M. Sutrisna. 2012. Potensi daun
salam (Syzigium polyanthum Walp.) dan biji jinten hitam (Nigella
Sativa Linn) sebagai kandidat obat herbal terstandar asam urat.
Pharmacon. 13(1): 30-36.
Mulyono. 2001. Kamus Kimia. PT Gramedia Pustaka Utama. Bandung.
Muthawali, D. I. 2018. Penetapan kadar biuret dalam pupuk urea prill
dengan metode spektometri. Jurusan Kimia FMIPA USU. 31(2) : 78-
80.
Naga, W. S., B. Adiguna, E. S. Retnoningtyas, dan A. Ayucitra. 2010.
Koagulasi protein dari ekstrak biji kecipir dengan metode
pemanasan. Jurnal Teknik Kimia. 4(1) : 44-51.
Ningtyas, I. F., dan M. R. Ramadhian. 2016. Efektivitas ekstrak daun
salam untuk menurunkan kadar asam urat pada penderita
artritisgout. Jurnal Majority. 3(2) : 106-112.
Nurjannah, L., S. Suryani, S. Achmadi, dan A. Azhari. 2017. Produksi
asam laktat oleh Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus dengan
sumber karbon tetes tebu. Jurnal Teknologi dan Industri Pertanian
Indonesia. 1(9) : 1-9.
170
Padmaningrum, R. T., S. Marwati, dan A. Wiyarsi. 2012. Karakter ekstrak
zat warna kayu secang sebagai indikator titrasi asam basa. Jurnal
Kimia. 4(15) : 28-32.
Patrick, D. 2005. Medicine at a Glance. Erlangga. Jakarta.
Perdana, A . S dan D. Susanti. 2013. Pengaruh variasi tempersture post
hydrothermal terhadap sensitivitas sensor gas Co darimaterial Wo3
hasil pross sol gel. Jurnal Teknik Pomits. 2(1): 19-22.
Poedjiadi, A. 2005. Dasar-Dasar Biokimia. Penerbit Universitas Indonesia.
Jakarta.
Putri, A. A. B., Yuliet, dan Jamaluddin. 2016. Analisis kadar albumin ikat
sidat (Anguilla marmorata dan Anguilla bicolor) dan uji aktivitas
penyembuhan luka terbuka pada kelinci (Oryctolagus cuniculus).
Galenika Journal of Pharmacy. 2(2) : 90-95.
Ratna, A. dan F. Yulistiani. 2010. Pembuatan gula cair dari patu singkong
dengan menggunakan hidrolisis enzimatis. Jurnal Kimia. 2(1) : 22-26.
Rinda, A. S. 2015. Pengaruh Konsentrasi Asam Pikrat pada Penentuan
Kreatinin menggunakan Sequential Injection Analysis. Jurnal
Penelitian. 1(1):587-591.
Salvo G., Susan. 2016. Massage therapy fifth edition. Elsevier. London.
Saquor, F., Ismeik, dan Esaifan. 2017. Alkali activation of natural clay
using a Ca(OH)2 / Na2CO3 alkaline mixture. Clay Minerals. 5294):
485-496.
Setyaningrum, A dan Sukesi. 2013. Preparasi penentuan Ca, Na, dan K
dalam nugget ayam-rumput laut (Eucheuma cottonii). Jurnal Sains
dan Seni Pomits. 2 (1): 62.
Sukeco, F. A., B. S. Rahardja, dan A. Manan. 2016. Pengaruh Pemberian
Probiotik Berbeda dalam Sistem Akuaponik terhadap FCR (Feed
Convertion Ratio) dan Biomassa Ikan Lele ( Clarias sp.). Journal of
Aquaculture and Fish Health .6(1): 24-31.
Sumardjo, D. 2006. Pengantar Kimia. Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Jakarta.
Sumardjo, D. 2009. Pengantar Kimia: Buku Panduan Kuliah Mahasiswa
Buku Kedokteran: EGC. Jakarta.
Sumarlin, L. O., S. Muharam., dan A. Vitaria. 2008. Pemerangkapan NH4+
dari urin dengan zeolit pada berbagai urin. Universitas Islam Negeri
Jakarta. Jakarta.
Tamsuri, A. 2000. Seri Asuhan Keperawatan: Klien Gangguan
Keseimbangan Cairan dan Elektrolit. Penerbit Buku Kedokteran.
Jakarta.
171
Umam, K. 2017. Protein Pangan Hasil Ternak dan Aplikasinya.
Universitas Brawijaya Press. Malang.
Utami, A. R. 2017. Verifikasi metode pengujian sulfat dalam air dan air
limbah sesuai SNI. Jurnal Teknologi Proses dan Inovasi Industri. 2(1)
: 19-22.
Wahab, A. S. 2000. Ilmu Kesehatan Anak. Penerbit Buku Kedokteran
EGC. Jakarta.
Warsiki, E., M. Rahayuningsih, dan R. R. Anggarani. 2016. Media
Berindikator Warna sebagai Pendeteksi Salmonella typhimurium.
Jurnal Teknologi Industri Pertanian. 26(3): 276-283.
Welliangan, M., M. F. Wowor, dan A. E. Mongan. 2019. Gambaran kadar
urin pada primigravida dengan orang tua penyandang diabetes
mellitus di Kota Manado. Jurnal e-Biomedik(eBm). 7(1): 19-22.
Yazid, E. A dan M. Misbachul. 2018. Potensi Antosianin dari Ekstrak
Bunga Rosella (Hibiscus sabdariffa L.) Sebagai Alternatif Indikator
Titrasi Asam Basa. Jurnal Sains. 8(15):56-61.
Yuliana, A. 2018. Buku Ajar Biokimia Farmasi. Jakad Publishing.
Surabaya.
Zusfahair., D. R. Ningsih, A. Fatoni, dan D. S. Pertiwi. 2018. Pemurnian
Parsial dan Karakterisasi Urease dari Biji Kacang Panjang (Vigna
unguiculata subsp sesquipedalis L.). Alchemy Jurnal Penelitian
Kimia. 14(1).
172
Lampiran
Gambar 1. Hasil Uji Biuret Gambar 2. Hasil Uji Enzimatik

terhadap Ureum terhadap Ureum
Gambar 3. Hasil Uji Benedict Gambar 4. Hasil Uji Murexida pada

terhadap Garam Urat Asam Urat Padat
173
Gambar 5. Hasil Uji Murexida pada Gambar 6. Hasil Uji Daya
Urin Normal Mereduksi Asam Urat
Gambar 7. Hasil Uji Daya Gambar 8. Hasil Uji Khlorida

Mereduksi Asam Urat dengan Urin
174
Gambar 9. Hasil Uji Fosfat dan Gambar 10. Hasil Uji Sulfat
Kalsium
Gambar 11. Hasil Uji Benedict Gambar 12. Hasil Uji Heller
terhadap Urin Abnormal
175
Gambar 13. Hasil Uji Benzidin Gambar 14. Hasil Uji Gmelin
terhadap Pigmen Darah terhadapn Pigmen Empedu
Gambar 15. Hasil Uji Hay untuk Gambar 16. Hasil Uji Obermeyer
Garam Kholat terhadap Indikan
176
177
178
179
180
ACARA V
URIN KUALITATIF
INHAL
Disusun oleh:
LABORATORIUM BOIKIMIA NUTRISI

FAKULTAS PETERNAKAN
YOGYAKARTA
2020
181
ACARA V
URIN KUALITATIF
Tujuan Praktikum
Praktikum acara urin kualitatif bertujuan untuk mengetahui senyawa
organik, senyawa anorganik dan mengetahui keadaan abnormal dalam
urin. Praktikum urin kualitatif juga bertujuan untuk mengetahui senyawa
organik diantaranya mengetahui adanya ikatan peptida dalam urin, untuk
mengetahui adanya ureum,garam urat, asam urat, kreatinin, dan garam
amonium. Praktikum urin kualitatif juga bertujuan untuk mengetahui
senyawa anorganik diantaranya mengetahui adanya khlor, kalsium, fosfat
dan sulfat dalam urin. Keadaan abnormal diantaranya mengetahui adanya
gula mereduksi, albumin, pigmen darah, pigmen empedu, garam kholat,
dan indikan pada urin sapi PO dan PFH.

Urin merupakan produk sisa metabolisme yang sudah tidak
digunakan lagi oleh tubuh dan bersifat toxic (Astuti, 2017). Warna urin
bervariasi, dari yang jernih tanpa warna sampai berwarna kuning tua.
Makanan atau obat-obatan tertentu bisa membuat warna urin menjadi
merah muda, cokelat, hijau, dan lain-lain. Urin orang normal memiliki ph
4,5 sampai 8 sampai bisa sedikit asam. Berat jenis urin lebih tinggi dari
air, karena urin mengandung 90 sampai 95% air dan sisanya adalah
bahan-bahan hasil penyaringan seperti natrium dan kalium (Tandra,
2018). Air merupakan komponen terbesar dari urin yang didalamnya
terkandung garam-garam anorganik dan senyawa-senyawa organik.
Senyawa-senyawa anorganik yang berupa kation: Na+, K+, Ca2+, Mg2+,
NH4+, sedikit Fe3+, Cu2+, Zn2+ sedangkan yang berupa anion: Cl−, PO43-,
SO42-, CO32-, dan sedikit NO3-. Sebagian besar senyawa organik yang
terdapat dalam urin merupakan sampah dari proses metabolisme, antara
182
lain ureum, asam urat, kreatin, kreatinin, asam hipurat, indikan, asam-
asam amino, asam-asam organik (asam asetat, asam format, asam
butirat, asam sitrat, asam oksalat, asam laktat, asam glukuronat, asam
benzoat). Beberapa enzim (amilase, tripsin, lipase),beberapa hormon
(hormon-hormon kelamin), dan vitamin (vitamin B dan C) terdapat juga
dalam urin (Sumardjo, 2008).
Proses pembentukan urin berkaitan dengan organ ekskresi yaitu
ginjal. Ginjal merupakan organ penting dalam sistem metabolisme tubuh,
di dalam ginjal terjadi proses filtrasi, reabsorpasi, sampai augmentasi dari
zat-zat makanan yang di bawah ke ginjal melalui darah (Azhar et al.,
2014). Ginjal terdiri dari Bagian Korteks yang berisi Nefron (terdiri dari
Glomerulus dan Kapsula Bowman) dan Bagian Medula yang berisi
Tubulus Ginjal (Wahidi, 2015). Tahapan pembentukan urin meliputi reaksi
filtrasi, reabsorbsi, dan ekskresi (augmentasi) (Sherwood and Lauralee,
2006).
Proses pembentukan urin diawali dengan darah difiltrasi menjadi
filtrat glomerulus (urin primer) yang komposisinya serupa dengan darah
tapi tidak mengandung protein. Darah yang telah difiltrasi pada filtrat
glomerulus masih dapat ditemukan asam amino, glukosa, natrium, kalium,
dan garam-garam lainnya. Urin primer selanjutnya diabsorbsi di tubulus
kontortus proksimal menjadi filtrat tubulus (urin sekunder) yang
komposisinya sangat berbeda dengan urin primer. Zat-zat yang masih
diperlukan tidak akan ditemukan lagi pada urin sekunder. Proses terakhir
yaitu augmentasi di tubulus kontortus distal barulah terbentuk urin
(Wahidi, 2015).
Uji Biuret terhadap Ureum. Prinsip kerjanya yaitu ureum jika
dipanaskan akan lebur dan melepaskan satu NH3 sehingga terbentuk
asam sianat dan urea aktif, kemudian urea aktif akan bereaksi dengan
reagen biuret membentuk warna ungu. Warna ungu terbentuk karena
adanya ikatan antara ion Cu+ dari CuSO4 dengan N dari ureum.
183
Uji Enzimatik terhadap Ureum. Prinsip kerjanya yaitu indikator
phenol red akan berwarna merah dalam kondisi basa. Suhu 60̊C adalah
suhu optimum enzim bekerja. Urea akan dihidrolisis oleh enzim urease
menjadi NH3 dan CO2.
Uji Benedict terhadap Garam Urat. Prinsip kerjanya yaitu endapan
merah bata terbentuk karena senyawa CuO pada reagen benedict
direduksi oleh garam urat dalam urin menjadi Cu2O yang berwarna merah
bata. Endapan merah bata terjadi karena senyawa CuO pada reagen
Benedict direduksi oleh garam urat dalam urin menjadi Cu 2O yang
berwarna merah bata. Fungsi dari benedict adalah untuk mereduksi Cu2O
menjadi CuO.
Uji Murexida. Prinsip kerjanya yaitu asam urat direduksi oleh HNO3
menjadi dialurat dan alloxan, kemudian senyawa tersebut direduksi
menjadi amonium purpurat (murexida) yang berwarna ungu. Perubahan
yang terjadi disebabkan terbentuknya purpurat. Fungsi penambahan
HNO3 yaitu sebagai zat yang mereduksi asam urat dalam urin.
Uji Daya Mereduksi Asam Urat. Prinsip kerjanya yaitu noda hitam
menunjukkan bahwa Ag+ dari AgNO3 telah direduksi oleh asam urat
menjadi Ag. Asam urat sangat sukar larut dalam air namun membentuk
garam-garam yang larut dalam alkali, sehingga pada urin asam jika
dibiarkan maka asam urat akan mengendap. Fungsi penambahan AgNO3
yaitu sebagai sumber dari ion Ag+ yang kemudian senyawa tersebu
direduksi oleh asam urat dalam urin menjadi Ag.
Uji Pikrat. Prinsip kerjanya yaitu asam pikrat yang berwarna kuning
jika bereaksi dengan kreatinin (dalam urin) pada suasana basa (NaOH)
membentuk kompleks kreatin-pikrat yang berwarna jingga. Kreatinin
merupakan salah satu senyawa yang terdapat dalam urin. Fungsi
Penambahan NaOH sebagai pemberi suasana basa.
Uji terhadap Garam Amonium. Prinsip kerjanya yaitu garam
amonium saat dipanaskan melepaskan NH3 dan ditangkap oleh indikator
PP (pada kaca) sehingga membentuk warna merah muda. Terbentuknya
184
warna merah muda membuktikan adanya amonium dalam urin. Fungsi
penambahan indikator PP adalah sebagai indikator yang berwarna merah
muda.
Uji Khlorida. Prinsip kerja uji khlor adalah NaCl dalam urin jika
ditambah dengan HNO3 dan AgNO3 akan menghasilkan endapan AgCl
(warna putih). AgCl adalah hasil reaksi antara Cl dalam urin dengan
AgNO3. Penambahan NH4OH berfungsi untuk melarutkan endapan AgCl.
Uji Fosfat dan Kalsium. Prinsip kerja uji fosfat dan kalsium adalah
endapan amonium fosfomolibdat yang berwarna kuning menunjukkan
adanya fosfat dalam urin. Endapan kalsium oksalat yang berwarna putih
menunjukkan adanya kandungan kalsium dalam urin. Fungsi penambahan
HNO3 pekat dan amonium molibdat pada tabung satu adalah untuk
melepas ikatan dari fosfat atau fosfor.
Uji Sulfat. Prinsip kerja uji sulfat adalah endapan BaSO4 yang
berwarna putih dihasilkan dari reaksi antara SO42- (dalam urin) dan Ba2+
dari BaCl2. Warna putih dihasilkan dari reaksi antara SO42- (dalam urin)
dan Ba2+ dari BaCl2. Fungsi penambahan BaCl2 adalah sebagai sumber
dari ion Ba2+ yang kemudian bereaksi dengan SO42- dalam urin. Fungsi
penambahan HCl untuk mengendapkan BaSO4.
Uji Benedict terhadap Urin Abnormal. Prinsip kerja uji Benedict
terhadap urin abnormal adalah adanya endapan berwarna merah bata
yang menunjukkan dalam urin abnormal terdapat glukosa yang mampu
mereduksi Cu2+ menjadi Cu+. Endapan merah bata tersebut adalah Cu2O.
Fungsi penambahan reagen benedict adalah sebagai sumber dari ion
Cu2+ yang kemudian direduksi oleh glukosa dalam urin abnormal menjadi
Cu+.
Uji Heller. Prinsip kerja uji heller adalah terbentuknya cincin putih
keruh yang merupakan koagulasi albumin karena penambahan asam
nitrat pekat. Albumin akan mengalami denaturasi karena penambahan
asam nitrat pekat. Fungsi penambahan HNO3 pekat adalah untuk
mengkoagulasi albumin.
185
Uji Benzidin terhadap Pigmen Darah. Prinsip kerja uji Benzidin
terhadap pigmen darah adalah H2O2 akan mengalami dekomposisi
menjadi 2 H2O dan O2 karena adanya Hb. Lalu O2 yang bebas akan
mengoksidasi Benzidin menjadi derivatnya yang berwarna hijau/biru.
Fungsi penambahan Benzidin adalah sebagai zat yang direduksi oleh O2
hasil dekomposisi dari H2O2 karena adanya Hb.
Uji Gmelin terhadap Pigmen Empedu. Prinsip dari uji Gmelin
terhadap pigmen empedu adalah urin jika ditambah HNO3 maka akan
membentuk warna hijau, biru, kuning kemerahan sebab HNO3
mengkondensasi pigmen empedu yang terdapat dalam urin. HNO3 pekat
berfungsi untuk mengoksidasi pigmen empedu.
Uji Hay untuk Garam Kholat. Prinsip kerja uji Hay untuk garam
kholat adalah tenggelamnya serbuk belerang dalam urin menunjukkan
bahwa dalam urin terdapat garam kholat yang menurunkan tegangan
permukaan cairan. Fungsi penambahan serbuk belerang adalah sebagai
indikator ada tidaknya garam kholat yang menurunkan tegangan
permukaan.
Uji Obermeyer terhadap Indikan. Prinsip kerja uji Obermeyer
terhadap indikan adalah adanya penambahan obermeyer maka indikan
berubah warna menjadi Indigo blue yang larut dalam khloroform. Indikan
berasal dari penguraian triptophan yang masuk dalam darah lalu
diekskresikan lewat urin.
186
Materi dan Metode
Materi
Alat. Alat yang digunakan pada acara urin kualitatif antara lain
tabung reaksi, rak tabung reaksi, pipet pump, pipet tetes, gelas ukur, gelas
beker, waterbath, stopwatch, bunsen, penjepit tabung, cawan porselin,
kertas saring, spatulla dan gelas obyek.
Bahan. Bahan yang digunakan pada praktikum acara urin kualitatif
antara lain urin sapi PO atau PFH, urin abnormal, kristal ureum, NaOH
10%, CuSO4 0,5%, phenol red, Na2CO3 2%, asam asetat 2%, tepung
kedelai, akuades, reagen Benedict, kristal Na2CO3, HNO3 pekat, asam
urat padat, NH4OH, larutan Na2CO3 , larutan AgNO3 , asam pikrat jenuh,
indikator fenolftalin, HNO3, ammonium molibdat, kalium oksalat, HCl
encer, BaCl2, benzidin, H2O2, serbuk belerang, pereaksi Obermeyer, dan
khloroform.
Metode
Uji Biuret terhadap Ureum. Satu buah tabung reaksi disiapkan.
Sebanyak dua sendok Kristal ureum dan 1 ml NaOH 10% serta 1 ml
CuSO4 0,5% dimasukkan ke dalam tabung. Warna yang terjadi dicatat.
Uji Enzimatik terhadap Ureum. Dua tabung reaksi disiapkan,
tabung satu diisi 2 ml urin, 3 tetes Phenol red, 1 ml Na2CO3 2%, 1 ml
asam asetat 2%, lalu dipanaskan dengan waterbath pada suhu 60oC
selama lima menit, setelah itu ditambahkan tepung kedelai dan digojok.
Tabung dua diisi 2 ml air, 3tetes phenol red, 1 ml Na2CO3 2%, 1 ml asam
asetat 2%, lalu dipanaskan dengan waterbath pada suhu 60oC selama
lima menit, setelah itu ditambahkan tepung kedelai dan digojok.
Perbedaan warna pada kedua tabung diamati.
Uji Benedict terhadap Garam Urat. Tabung reaksi disiapkan, diisi
2 ml urin. Tiga sampai lima tetes reagen Benedict dan satu sendok kristal
187
Na2CO3 ditambahkan ke dalam tabung. Tabung kemudian dipanaskan
dengan bunsen selama sepuluh menit. Warna yang terjadi dicatat.
Uji Murexida. Sebanyak dua buah cawan porselen disiapkan.
Cawan porselin satu diisi 1 ml urin, 3 tetes HNO3 pekat lalu dipanaskan
dengan bunsen sampai kering kemudian ditetesi tiga tetes NH 4OH. Warna
yang terjadi dicatat. Cawan porselin dua diisi asam urat padat seujung
sendok pengaduk, lalu dipanaskan dengan bunsen sampai kering
kemudian ditetesi tiga tetes NH4OH. Warna yang terjadi dicatat.
Uji Daya Mereduksi Asam Urat. Tabung reaksi diisi dengan asam
urat sebanyak seujung spatula dan dilarutkan dengan 1 ml larutan
Na2CO3. Kertas saring dibasahi dengan larutan AgNO3, lalu L.1 ( larutan
asam urat dengan Na2CO3 ) diteteskan ke atas kertas tadi. Warna yang
terjadi dicatat.
Uji Pikrat. Tabung reaksi diisi dengan asam pikrat jenuh sebanyak
1 ml dicampur dengan 0,5 ml NaOH 10%, lalu dibagi ke dalam dua
tabung. Tabung satu ditambah 3 ml air, sedangkan tabung dua
ditambahkan 3 ml urin. Warna yang muncul dibandingkan dan dicatat.
Uji terhadap Garam Amonium. Tabung reaksi diisi dengan urin
sebanyak 2 ml dan ditambah indikator fenolftalin dan sedikit Na 2CO3 2%
sampai berwarna merah. Tabung kemudian dipanaskan dengan bunsen
lalu uapnya dikenakan ke kaca yang telah dibasahi fenolftalin. Warna kaca
diamati.
Zat – Zat Anorganik dalam Urin
Uji Khlorida. Tabung reaksi diisi dengan 1 ml urin, tiga sampai lima
tetes HNO3, dan 1 ml AgNO3. Warna yang terjadi dicatat. Larutan L.2
(larutan 1 ml urin, tiga sampai lima tetes HNO3, dan 1 ml AgNO3)
ditambah NH4OH berlebih. Warna yang terjadi dicatat.
Uji Fosfat dan Kalsium. Tabung reaksi diisi dengan 10 ml urin,
tiga sampai lima tetes NH4OH, lalu didihkan dan kemudian disaring.
Endapan dicuci dengan air lalu ditambah 1 ml asam asetat 2% dan
dipanaskan kembali, setelah itu dibagi ke dalam dua tabung. Tabung satu
188
ditambah dengan satu tetes HNO3 pekat dan tiga tetes ammonium
molibdat dan dipanaskan. Warna dan endapan yang terjadi diamati.
Tabung dua diisi dengan tiga tetes kalium oksalat. Warna dan endapan
yang terjadi dicatat.
Uji Sulfat. Tabung reaksi diisi dengan 1 ml urin. Beberapa tetes
HCl encer dan 1 ml BaCl2 ditambahkan ke dalam tabung. Warna yang
terjadi dicatat .
Keabnormalan Urin
Uji Benedict terhadap Urin Abnormal. Tabung reaksi diisi dengan
0,5 ml urin abnormal dan tiga ml reagen Benedict. Tabung reaksi
kemudian dipanaskan dengan bunsen lalu didinginkan. Warna yang terjadi
dicatat.
Uji Heller. Tabung reaksi diisi dengan 1 ml urin. Melalui dinding
tabung dialirkan HNO3 pekat. Warna dan bentuk yang terjadu dicatat.
Uji Benzidin terhadap Pigmen Darah. Tabung reaksi diisi dengan
1 ml benzidin dan 1 ml H2O2 lalu dibagi dua. Tabung satu ditambah
dengan 1 ml urin normal, tabung dua ditambah dengan 1 ml urin
abnormal. Kedua tabung dibandingkan dan warna yang terjadi dicatat.
Uji Gmelin terhadap Pigmen Empedu. Satu buah tabung reaksi
disiapkan. Tabung reaksi diisi dengan 3 ml HNO3 pekat dan 1 ml urin.
Warna yang terbentuk dicatat.
Uji Hay untuk Garam Kholat. Dua tabung reaksi disiapkan.
Tabung satu diisi dengan 1 ml urin dan serbuk belerang, tabung dua diisi
dengan 1 ml air dan serbuk belerang. Kedua tabung diamati apa yang
terjadi dan dibandingkan warnanya.
Uji Obermeyer terhadap Indikan. Tabung reaksi diisi dengan 4 ml
urin, 5 ml pereaksi Obermeyer, dan 2 ml Khloroform. Tabung digojok dan
dibiarkan. Warna yang terjadi diamati.
189

Uji Biuret terhadap Ureum. Tujuan dari uji Biuret terhadap ureum
adalah untuk mengetahui adanya ikatan peptida pada urin. Prinsip kerja
uji Biuret terhadap urin adalah ureum jika dipanaskan akan lebur dan
melepaskan satu NH3 sehingga terbentuk asam sianat dan urea aktif,
kemudian urea aktif akan bereaksi dengan reagen biuret membentuk
warna ungu. Warna ungu terbentuk karena adanya ikatan antara ion Cu+
dari CuSO4 dengan N dari ureum. Fungsi penambahan NaOH adalah
pemberi suasana basa pada larutan yang akan diuji. Robert (1995)
menyatakan bahwa fungsi penambahan NaOH encer adalah sebagai
pemberi suasana basa dalam larutan. Peningkatan intensitas warna
(semakin gelap) menunjukkan semakin banyak ikatan peptida (kadar
ureum tinggi). Fungsi penambahan ureum adalah sebagai substrat yang
akan berpasangan dengan sisi aktif enzim atau sumber dari ikatan
peptida. Hartono (2008) menjelaskan bahwa ureum berasal dari protein
makanan yaitu dari gugus amida dalam asam amino atau peptida yang
menghubungkan asam-asam amino yang artinya dalam ureum terdapat
ikatan peptida yang berfungsi sebagai substrat. CuSO4 berperan sebagai
indikator dan sumber dari ion Cu2+ yang kemudian berikatan dengan N
dari ureum. Indrawan et al. (2016) menyatakan bahwa reagen biuret
mengandung CuSO4 yang berperan sebagai sumber ion Cu2+. Larutan
berwarna bening sebelum dilakukan penambahan CuSO4 lalu setelah
ditambahkan CuSO4 larutan berubah warna menjadi keunguan.
tabung, tabung pertama yang berisi kristal ureum, NaOH 10% dan CuSO4
0,5% pada sampel urin PO dan PFH berubah warnanya menjadi biru
keunguan. Hal ini menunjukkan adanya reaksi antara Cu 2+ dengan N
dalam ureum. Tabung kedua yang berisi urin sapi PO, NaOH 10% dan
CuSO4 0,5% berubah warnanya menjadi kuning. Hal ini menunjukkan ada
190
sedikit reaksi antara Cu2+ dengan N dalam ureum. Ikatan yang terjadi
antara Cu2+ dari CuSO4 dengan N dari ureum yang menyebabkan
terbentuknya warna biru keunguan. Putri et al. (2016) menyatakan bahwa
uji biuret digunakan untuk uji protein, karena uji ini dapat mendeteksi
adanya ikatan peptida yang diperoleh hasil reaksi berupa warna ungu
pada larutan yang menunjukkan adanya protein. Hasil percobaan telah
Uji Enzimatik terhadap Ureum. Tujuan dari uji enzimatik terhadap
ureum adalah untuk mengetahui adanya ureum dalam urin. Prinsip kerja
uji enzimatik terhadap ureum adalah indikator phenol red akan berwarna
merah dalam kondisi basa. Suhu 60oC adalah suhu optimum enzim
bekerja. Nurkhotimah (2017) menyatakan bahwa peningkatan suhu
optimal dari 55 sampai 65oC, saat suhu tersebut aktivitas enzim juga naik
dan memungkinkan terjadinya tumbukan molekul yang paling banyak dan
perubahan reaktan menjadi produk yang paling cepat. Urea akan
dihidrolisis oleh enzim urease menjadi NH3 dan CO2. Fungsi penambahan
phenol red sebagai pemberi warna merah. Warsiki et al. (2016)
menyatakan bahwa fungsi penambahan phenol red yaitu sebagai indikator
yang memberi warna merah. Fungsi penambahan Na2CO3 sebagai
pemberi suasana basa. Asam asetat 2% berfungsi untuk memberi
suasana asam. Menurut Nurjannah et al. (2017) Penambahan Na2CO3
menjadikan suasana basa yang membuat indikator phenol red akan
berwarna merah. Tepung kedelai berfungsi sebagai sumber enzim.
Penambahan tepung kedelai menyebabkan warna larutan berubah
menjadi ungu dan terdapat endapan. Hal ini dikarenakan tepung kedelai
yang mengandung enzim urease bereaksi dengan urea yang terdapat
pada urin. sehingga terjadi reaksi enzimatik, yaitu hidrolisis urea dalam
urin oleh urease yang terdapat pada tepung kedelai. Makfoeld et al.
(2002) menyatakan bahwa endapan terjadi karena di dalam tepung
kedelai mengandung glikosida, saponin, enzim urease, dan tripsin
inhibitor.
191
Berdasarkan praktikum uji enzimatik terhadap ureum pada urin PO
dan PFH terdapat endapan dan berwarna merah, sedangkan untuk
pengujian tabung yang berisi akuades mengalami pengendapan, dan
larutannya berwarna kuning. Hal ini dikarenakan akuades tidak
terkandung urea sehingga tidak ada reaksi enzimatik antara enzim urease
pada tepung kedelai dengan air. Zusfahair (2018) menyatakan bahwa
urease merupakan enzim yang berperan penting sebagai katalis hidrolisis
urea menjadi amoniak dan asam karbamat kemudian mengalami reaksi
hidrolisis secara spontan membentuk amoniak dan asam karbonat, hal ini
teori.
Uji Benedict terhadap Garam Urat. Tujuan dari uji Benedict
terhadap garam urat adalah untuk mengetahui adanya garam urat
(senyawa mereduksi). Prinsip kerja uji Benedict terhadap garam urat
adalah endapan merah bata terbentuk karena senyawa CuO pada reagen
benedict direduksi oleh garam urat dalam urin menjadi Cu2O yang
berwarna merah bata. Fungsi penambahan reagen Benedict sebagai
pembentuk endapan merah bata (Cu2O) setelah dilakukannya
pemanasan. Sumardjo (2009) menyatakan bahwa fungsi pereaksi
Benedict yaitu sebagai reagen reduksi. Penambahan Na2CO3 berfungsi
sebagai pemberi suasana basa pada larutan. Nurjannah (2017)
menyatakan bahwa Kristal Na2CO3 berfungsi untuk memberi suasana
basa yang menyebabkan transformasi isomerik. Reduksi ion Cu2+ dari
CuSO4 oleh gula pereduksi akan berlangsung dengan cepat pada
suasana basa.
Larutan sampel urin PO berwarna hijau bukan merah bata dan
tidak terjadi endapan yang terbentuk, sedangkan urin sapi PFH berwarna
hijau dan terdapat sedikit endapan merah bata. Endapan terjadi karena
reagen Benedict mengandung Cu2+ yang dapat direduksi oleh garam urat
dalam urin membentuk Cu2O yang berwarna merah bata. Atma (2018)
menyatakan bahwa hasil positif pada uji Benedict ditunjukan dengan
192
terbentuknya endapan merah bata yang terkadang disertai dengan larutan
yang kemudian berwarna hijau, merah ataupun jingga. Percobaan uji
benedict ini terjadi ketidaksesuaian dengan teori. Faktor yang
mempengaruhi terbentuknya endapan yaitu pemanasan, larutan kurang
tercampur sehingga ion Cu2+ tidak dapat tereduksi. Hasil praktikum yang
diperoleh tidak sesuai dengan pernyataan Nurjannah (2017) yaitu reduksi
ion Cu2+ dari CuSO4 oleh gula pereduksi akan berlangsung dengan cepat
dan membentuk Cu2O yang merupakan endapan merah bata.
Berdasarkan praktikum uji Benedict terhadap garam urat pada urin PO
tidak sesuai dengan teori, sedangkan pada urin sapi PFH sesuai dengan
teori.
Uji Murexida. Tujuan dari uji murexida adalah untuk mengetahui
adanya asam urat dalam urin. Muhtadi et al. 2012 menyatakan bahwa
prinsip kerja uji murexida adalah asam urat direduksi oleh HNO3 menjadi
dialurat dan alloxan, kemudian senyawa tersebut direduksi menjadi
amonium purpurat (murexida) yang berwarna ungu. Fungsi penambahan
HNO3 dan NH4OH yaitu sebagai zat yang mereduksi asam urat dalam
urin. Verdiansah (2016) menyatakan bahwa penambahan HNO 3 dan
NH4OH berfungsi sebagai pereduksi asam urat. Penambahan NH4OH
juga menyebabkan larutan berubah warna menjadi ungu.
Larutan berwarna kuning sebelum dilakukan pemanasan lalu
setelah dipanaskan hingga kering dan ditambah tiga tetes NH4OH maka
berubah menjadi kemerahan pada cawan dengan sampel urin PO dan
PFH. Hal ini terjadi karena kandungan asam urat dalam urin jumlahnya
hanya sedikit sehingga tidak mampu membentuk warna ungu. Cawan
yang berisi sampel asam urat padat setelah dipanaskan hingga kering dan
ditambah tiga tetes NH4OH maka berubah menjadi warna ungu. Hal ini
karena asam urat yang dalam jumlah banyak tersebut direduksi oleh
HNO3 menjadi dialurat dan alloxan kemudian senyawa tersebut direduksi
oleh NH4OH membentuk amonium purpurat yang berwarna ungu. Hasil
yang diperoleh sesuai dengan pernyataan Sumardjo (2008) yang
193
menyatakan bahwa sebagian besar senyawa organik dalam urin
merupakan sisa hasil metabolisme salah satunya adalah asam urat.
Berdasarkan praktikum uji murexida pada cawan urin PO dan PFH
berwarna ungu kemerahan yang artinya positif mengandung asam urat.
Joshi dan Saraswati (2002) menyatakan bahwa dialurat dan alloxan akan
berkondensasi membentuk alloxantin dan bereaksi dengan ammonium
hidroksida yang akan membentuk asam purpurat. Hasil tersebut berarti
bahwa hasil percobaan dan literatur sudah sesuai.
Uji Daya Mereduksi Asam Urat. Tujuan dari uji daya mereduksi
asam urat adalah untuk mengetahui daya mereduksi asam urat. Prinsip
kerja uji adalah noda hitam menunjukkan bahwa Ag+ dari AgNO3 telah
direduksi oleh asam urat menjadi Ag. Asam urat sangat sukar larut dalam
air namun membentuk garam-garam yang larut dalam alkali, sehingga
pada urin asam jika dibiarkan maka asam urat akan mengendap. Fungsi
senyawa tersebu direduksi oleh asam urat dalam urin menjadi Ag.
Verdiansah (2016) menyatakan bahwa fungsi penambahan AgNO3 yaitu
sebagai sumber dari ion Ag+ yang kemudian senyawa tersebu direduksi
oleh asam urat dalam urin menjadi Ag. Na2CO3 berfungsi sebagai larutan
yang memiliki suasana basa yang dapat melarutkan asam urat. Mulyono
(2001) menyatakan bahwa penambahan 1 ml Na2CO3 berfungsi sebagai
soda pembersih yang larut dalam air untuk melarutkan asam urat
sehingga terbentuk endapan.
Terbentuknya noda hitam pada kertas saring menunjukkan adanya
asam urat dalam urin. Berdasarkan praktikum uji daya mereduksi asam
urat diperoleh hasil bahwa pada urin sapi PO dan PFH terbentuk noda
hitam pada kertas saring. Misnadiarly (2007) menyatakan bahwa asam
urat adalah senyawa yang normal terdapat dalam urin karena asam urat
adalah zat hasil produksi tubuh, hal ini menunjukkan bahwa hasil
praktikum yang diperoleh telah sesuai dengan teori.
194
Uji Pikrat. Tujuan dari uji pikrat adalah untuk mengetahui adanya
kreatinin dalam urin. Prinsip kerja uji pikrat adalah asam pikrat yang
berwarna kuning jika bereaksi dengan kreatinin (dalam urin) pada
suasana basa (NaOH) membentuk kompleks kreatin-pikrat yang berwarna
jingga adalah. Kreatinin merupakan salah satu senyawa yang terdapat
dalam urin. Fungsi penambahan NaOH sebagai pemberi suasana basa.
Sumarlin et al. (2007) menyatakan bahwa fungsi penambahan NaOH
adalah untuk memberi suasana basa sehingga membentuk kompleks
kreatin-pikrat. Penambahan aquades berfungsi sebagai pembukti ada
tidaknya ikatan kreatinin dengan asam pikrat. Susana (2013) menyatakan
bahwa kandungan dalam air hanya Hidrogen dan Oksigen yang nantinya
akan berikatan dengan asam pikrat.
Tabung satu berisi air menghasilkan larutan yang berwarna kuning
karena dalam air tidak terdapat kreatinin yang akan berekasi dengan
asam pikrat membentuk kreatin-pikrat. Tabung dua berisi urin
menghasilkan larutan berwarna jingga karena dalam urin tedapat kreatinin
yang akan berekasi dengan asam pikrat. Hasil tersebut berarti bahwa
hasil percobaan dan literatur sudah sesuai. Berdasarkan praktikum uji
pikrat pada tabung satu urin PO dan PFH terbentuk warna kuning dan
pada tabung dua diperoleh larutan berwarna jingga. Harr (2002)
menyatakan bahwa asam pikrat dapat mengoksidasi kreatinin dalam basa
yang menjadi pikrat kreatinin, hal ini menunjukkan bahwa hasil praktikum
yang diperoleh telah sesuai dengan literatur.
Uji terhadap Garam Amonium. Tujuan dari uji terhadap garam
amonium adalah untuk mengetahui adanya garam amonium dalam urin.
Prinsip kerja uji terhadap garam amonium adalah garam amonium saat
dipanaskan melepaskan NH3 dan ditangkap oleh indikator pp (pada kaca)
sehingga membentuk warna merah muda. Na2CO3 yang ditambahkan
berfungsi untuk memberikan suasana basa sehingga larutan berwarna
merah muda. Mulyono (2001) menyatakan bahwa penambahan satu ml
Na2CO3 berfungsi sebagai soda pembersih yang larut dalam air untuk
195
melarutkan asam urat sehingga terbentuk endapan. Menurut Warsiki et al.
(2016) menyatakan bahwa larutan yang dipanaskan menyebabkan garam
amonuim melepaskan NH3 dan akan berikatan dengan uap air
membentuk NH4OH yang suasananya basa, sehingga pada kaca yang
telah dibasahi dengan indikator pp akan berwarna merah atau merah
muda. Terbentuknya warna merah muda membuktikan adanya amonium
dalam urin. Fungsi penambahan indikator PP adalah sebagai indikator
yang berwarna merah muda. Nuryanti et al. (2010) menyatakan bahwa
fungsi penambahan indikator PP adalah sebagai indikator yang memberi
warna merah muda.
Larutan berwarna merah muda pekat sebelum dilakukan
pemanasan dan setelah kaca yang sudah dibasahi dengan indikator PP
dikenai uap tersebut, terbentuklah warna merah muda pada kaca. Hal
tersebut karena urin mengandung garam amonium sehingga melepaskan
NH3. Berdasarkan praktikum uji terhadap garam amonium pada urin PO
dan PFH terbentuk warna merah muda. Mukaromah et al. (2012)
menyatakan bahwa terbentuknya warna merah membuktikan adanya
amonium dalam urin. Sumarlin et al. (2007) menjelaskan bahwa
ammonium dalam urin dengan zeolit dikarakterisasi dalam bentuk garam
ammonium (NH4+), hal ini menunjukkan bahwa hasil praktikum yang
diperoleh telah sesuai dengan literatur.

Uji Khlorida. Tujuan dari uji khlorida adalah untuk mengetahui
adanya khlor dalam urin. Prinsip kerja uji khlor adalah NaCl dalam urin jika
ditambah dengan HNO3 dan AgNO3 akan menghasilkan endapan AgCl
(warna putih). Cahyono et al. (2016) menyatakan bahwa AgCl adalah hasil
reaksi antara Cl dalam urin dengan AgNO3. Golongan dari ion-ion Pb2+,
Hg2+, dan Ag+ mengendap menjadi AgCl, PbCl2, dan Hg2Cl2. Achmad
(2012) menyatakan bahwa pengendapan golongan ini apabila
ditambahkan dengan basa lemah NH4OH dan dengan adanya ion Cl-
196
berlebih, membuat endapan lebih sempurna. Fungsi penambahan NH 4OH
sebagai pelarut endapan AgCl. Fungsi penambahan AgNO 3 untuk
membentuk endapan yaitu dengan Ag+ dari AgNO 3 bereaksi dan
membentuk endapan AgCl. HNO3 berfungsi untuk mencegah terjadinya
endapan perak-fosfat. Huang et al. (2015) menyatakan bahwa
penambahan NH4OH maka endapan AgCl akan larut. Fungsi
berikatan dengan Cl pada urin membentuk endapan AgCl. HNO3 berfungsi
untuk mencegah terbentuknya endapan perak-fosfat (Ag₃PO₄).
Penambahan NH4OH berfungsi untuk melarutkan endapan AgCl
kemudian dilakukan penggojokan. Penggojokan dilakukan bertujuan agar
terbentuknya larutan yang homogen (homogenisasi). Fellows (2000)
menyatakan bahwa homogenisasi adalah proses penyeragaman ukuran
partikel dalam upaya mempertahankan kestabilan dari sebuah campuran.
Endapan putih (AgCl) menjadi larut setelah larutan ditambahkan NH4OH.
Larutan berwarna putih keruh sebelum ditambah dengan NH4OH dan
terdapat endapan putih karena terdapat khlor dalam urin.
Berdasarkan praktikum uji khlorida pada urin PO dan PFH
diperoleh hasil yang sama yaitu terbentuk endapan putih dan setelah
ditambah NH4OH maka endapan larut. Soedarmo (1998) menyatakan
bahwa endapan putih tersebut menunjukkan adanya khlorida pada
larutan. Yaswir dan Ferawati (2012) menyatakan bahwa uji khlorida
bergantung pada generasi Ag+ dari elektroda perak yang konstan dan saat
bereaksi pada khlorida membentuk AgCl (perak khlorida) yang tidak larut.
Hal ini menunjukkan bahwa hasil praktikum yang diperoleh telah sesuai
dengan literatur.
Uji Fosfat dan Kalsium. Tujuan dari uji fosfat dan kalsium adalah
untuk mengetahui adanya fosfat dan kalsium dalam urin. Prinsip kerja uji
fosfat dan kalsium adalah endapan amonium fosfomolibdat yang berwarna
kuning menunjukkan adanya fosfat dalam urin. Endapan kalsium oksalat
yang berwarna putih menunjukkan adanya kandungan kalsium dalam urin.
197
Fungsi penambahan HNO3 pekat dan amonium molibdat pada tabung
satu adalah untuk melepas ikatan dari fosfat atau fosfor. Menurut Chang
(2003) menyatakan bahwa penambahan HNO3 memiliki tujuan untuk
memberi suasana asam pada larutan. NH4OH berfungsi untuk membentuk
endapan Ca-Mg-F. Anggraini et al. (2015) menyatakan bahwa NH4OH
berfungsi sebagai reagen pengendapan. Amonium molibdat berfungsi
sebagai pengikat fosfat menjadi amonium fosfomolibdat . Ngibad (2019)
menyatakan bahwa fungsi penambahan amonium molibdat yaitu untuk
mengikat fosfat menjadi amonium fosfomolibdat. Tabung satu sebelum
dipanaskan berwarna putih bening tidak ada endapan namun setelah
dipanaskan berwarna kuning bening dan terbentuk endapan. Adanya
endapan kuning tersebut menandakan adanya fosfat dalam urin. Fungsi
penambahan kalsium oksalat pada tabung dua yaitu untuk melepaskan
kalium lalu berikatan dengan kalsium. Hasin dan Zain (2019) menyatakan
bahwa oksalat dapat mengendapkan kalsium dan membentuk kalsium
oksalat. Tabung yang belum dipanaskan berwarna putih bening tidak ada
endapan namun setelah ditetesi kalium oksalat berwarna bening dan
terdapat endapan putih. Pemanasan dilakukan untuk mempercepat
terjadinya reaksi. Chang (2003) menyatakan bahwa pemanasan dilakukan
untuk mempercepat reaksi yang terjadi karena laju rekasi meningkat
dengan meningkatnya suhu. Adanya endapan putih tersebut menandakan
adanya kalsium dalam urin.
Berdasarkan praktikum uji fosfat dan kalsium pada urin PO dan
PFH terbentuk endapan kuning yang menandakan adanya fosfat dan
pada tabung dua diperoleh hasil yang sama yaitu endapan putih yang
menandakan adanya kalsium. Sumarlin et al. (2007) menyatakan bahwa
komposisi urin adalah 96% air, Natrium, pigmen empedu, 1,5% garam,
kalium, toksin, 2,5% urea, kalsium, bikarbonat, kreatinin N, magnesium,
kreatini, khlorida, asam urat N, sulfat anorganik, asam urat, fosfat
anorganik, amino N, sulfat, amonia N dan hormon. Hal ini menunjukkan
bahwa hasil praktikum yang diperoleh telah sesuai dengan literatur.
198
Uji Sulfat. Tujuan dari uji sulfat adalah untuk mengetahui adanya
sulfat dalam urin. Prinsip kerja uji sulfat adalah endapan BaSO4 yang
berwarna putih dihasilkan dari reaksi antara SO42- (dalam urin) dan Ba2+
dari BaCl2. Fungsi penambahan BaCl2 adalah sebagai sumber dari ion
Ba2+ yang kemudian bereaksi dengan SO42- dalam urin. Fungsi
penambahan HCl untuk mengendapkan BaSO4. Hiskia (2012)
menyatakan bahwa penambahan HCl bertujuan untuk mengendapkan
SO42- menjadi BaSO4 yang berwarna putih. Erviana et al. (2018)
menyatakan bahwa penambahan BaCl2 berfungsi agar SO2- dalam urin
dapat diikat oleh ion Ba2+ pada BaCl2, sehingga membentuk endapan
putih yaitu BaSO4.
Berdasarkan praktikum uji khlorida pada urin PO dan PFH
diperoleh hasil yaitu terbentuk endapan putih yang menandakan adanya
sulfat. Adanya endapan putih BaCl2 menandakan adanya sulfat dalam
urin. Wahab (2000) menyatakan bahwa sulfit dioksidasi menjadi sulfat
oleh sulfit oksidase, dan sulfat diekskresikan melalui urin. Hal ini
literatur.
Keabnormalan Urin
Uji Benedict terhadap Urin Abnormal. Tujuan dari uji Benedict
terhadap urin abnormal adalah untuk mengetahui adanya gula mereduksi
dalam urin abnormal. Prinsip kerja uji Benedict terhadap urin abnormal
adalah adanya endapan menunjukkan dalam urin abnormal terdapat
glukosa yang mampu mereduksi Cu2+ menjadi Cu+. Endapan merah bata
tersebut adalah Cu2O. Fungsi penambahan reagen benedict adalah
sebagai sumber dari ion Cu2+ yang kemudian direduksi oleh glukosa
dalam urin abnormal menjadi Cu+. Yuliana (2018) menyatakan bahwa
fungsi dari reagen Benedict adalah menguji kemampuan gula mereduksi
urin abnormal karena reagen Benedict mengandung Cu2SO4. Cu++ dari
Cu2SO4 direduksi menjadi Cu+ kemudian membentuk Cu2O dan
199
mengendap. Pemanasan dilakukan untuk mempercepat terjadinya reaksi.
Chang (2003) menyatakan bahwa pemanasan dilakukan untuk
mempercepat rekasi yang terjadi karena laju rekasi meningkat dengan
meningkatnya suhu.
Larutan sebelum dipanaskan berwarna biru lalu setelah dipanaskan
tetap berwarna hijau kebiruan dan terdapat endapan merah bata namun
sedikit. Hal ini menandakan adanya glukosa dalam urin abnormal. Amalia
et al. (2017) menyatakan bahwa di dalam urin yang dalam keadaan
normal tidak ada atau negatif mengandung glukosa. Hal ini menunjukkan
bahwa hasil praktikum yang diperoleh telah sesuai dengan literatur.
Menurut Fatimah (2015), adanya karbohidrat dalam urin termasuk
indikator dari penyakit Diabetes mellitus 2. Penyakit Diabetes mellitus 2
adalah penyakit gangguan metabolik yang ditandai oleh kenaikan gula
darah akibat penurunan sekresi insulin oleh sel beta pankeas dan atau
gangguan fungsi insulin. Faktor resiko dari Diabetes mellitus tipe 2 yaitu
usia, jenis kelamin, obesitas, hipertensi genetik, dan kurangnya aktivitas.
Uji Heller. Tujuan dari uji heller adalah untuk mengetahui adanya
albumin dalam urin abnormal. Prinsip kerja uji heller adalah cincin putih
keruh tersebut adalah koagulasi albumin karena penambahan asam nitrat
pekat. Albumin akan mengalami denaturasi karena penambahan asam
nitrat pekat. Fungsi penambahan HNO3 pekat adalah untuk
mengkoagulasi albumin. Alelo et al. (2018) menyatakan bahwa
penambahan HNO3 pekat berfungsi agar protein pada bahan uji akan
terdenaturasi dengan dilakukannya pemanasan.Urin abnormal yang telah
dicampur dengan HNO3 tidak terbentuk cincin putih keruh diantara kedua
lapisan. Hal tersebut menandakan bahwa dalam urin abnormal tidak
terdapat albumin. Marks et al. (2000) menyatakan bahwa protein makanan
dicerna menjadi asam amino yang kemudian dioksidasi untuk
menghasilkan energi, dan nitrogen diubah menjadi urea dan produk
ekskretorik lain yang mengandung nitrogen sehingga di dalam urin tidak
mengandung albumin. Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan,
200
diperoleh hasil pada sapi PO tidak terdapat cincin putih namun terjadi
koagulasi, sedangkan pada sapi PFH terdapat cincin berwarna putih keruh
pada permukaan larutan. Tidak terjadinya cicin putih pada urin sapi PO
disebabkan karena albumin tidak terdenaturasi dengan sempurna.
Sumardjo (2009) menyatakan bahwa dalam urin abnormal mengandung
komposisi antara lain albumin atau protein, glukosa, eritrosit, leukosit,
birilubin, urobilirubin dan urobilin.
Penyakit yang ditandai dengan adanya albumin dalam urin yaitu
albuminuria. Surya et al. (2018) menyatakan bahwa Adanya albumin
dalam urin menandakan indikasi penyakit albuminuria. Penyakit ini
disebabkan oleh adanya kerusakan ginjal pada bagian glomerulus. Laju
filtrasi glomerulus yang tidak mampu menyerap zat sisa berupa protein
yang masih diperlukan oleh tubuh, sehingga albumin ikut keluar bersama
urin.
Uji Benzidin terhadap Pigmen Darah. Tujuan dari uji Benzidin
terhadap pigmen darah adalah untuk mengetahui adanya pigmen darah
(Hb) dalam urin abnormal. Prinsip kerja uji Benzidin terhadap pigmen
darah adalah H2O2 akan mengalami dekomposisi menjadi 2H2O dan O2
karena adanya Hb. O2 yang bebas akan mengoksidasi Benzidin menjadi
derivatnya yang berwarna hijau atau biru. Fungsi penambahan Benzidin
adalah sebagai zat yang direduksi oleh O2 hasil dekomposisi dari H2O2
karena adanya Hb. Yuliana (2018) menyatakan bahwa reagen Benzidin
berfungsi untuk mengetahui adanya darah. Penggojokan dilakukan
bertujuan agar terbentuk larutan yang homogen (homogenisasi). Fellows
(2000) menyatakan bahwa homogenisasi adalah proses penyeragaman
ukuran partikel dalam upaya mempertahankan kestabilan dari sebuah
campuran.
Tabung satu setelah ditambah urin normal, larutan berwarna jernih.
Hal tersebut karena dalam urin normal tidak ditemukan pigmen darah
(Hb). Tabung dua setelah ditambah urin abnormal dan dilakukan
penggojogan maka larutan menjadi keruh. Hal ini berarti bahwa pada urin
201
abnormal positif mengandung pigmen darah. Hasil postitif sudah sesuai
dengan teori Marks et al. (2000) yang menyatakan bahwa hidrogen
peroksida mengalami dekomposisi menjadi air (H2O) dan oksigen yang
menjadi mampu mengoksidasi benzidin oleh katalase dan glutation
peroksidase.
Penyakit yang ditandai adanya pigmen darah pada urin merupakan
penyakit hematuria. Airlangga (2018) menyatakan bahwa hematuria yaitu
adanya darah dalam urin. Hematuria disebabkan karena adanya kelainan
ginjal pada saluran kemih. Hematuria biasanya terdeteksi adanya
perubahan warna urin.
Uji Gmelin terhadap Pigmen Empedu. Tujuan dari uji Gmelin
terhadap pigmen empedu adalah untuk mengetahui pigmen empedu
dalam urin abnormal. Prinsip dari uji Gmelin terhadap pigmen empedu
adalah urin jika ditambah HNO3 maka akan membentuk warna hijau, biru,
kuning kemerahan sebab HNO3 mengkondensasi pigmen empedu yang
terdapat dalam urin. HNO3 pekat berfungsi untuk mengoksidasi pigmen
empedu. Yuliana (2018) menyatakan bahwa HNO3 pekat berfungsi untuk
mengoksidasi pigmen empedu yang terdapat dalam urin. Empedu
mengandung berbagai pigmen. Yuliana (2018) menyatakan bahwa
pigmen empedu yang utama adalah biliverdin yang berwarna hijau dan
bilirubin yang berwarna jingga atau kuning coklat.
Terbentuk dua lapisan setelah penambahan HNO3 pekat. Bagian
atas berwarna kuning dan bagian bawah berwarna putih. Adanya warna
kuning tersebut menandakan dalam urin abnormal terdapat pigmen
empedu. Marks et al. (2000) menyatakan bahwa senyawa berkondensasi
dengan mengeliminasi air, uji gmelin urin dikondensasi oleh HNO 3
membentuk larutan berwarna hijau, biru, ungu, merah dan kuning
kemerahan. Hasil dari percobaan positif menghasilkan warna kuning dan
telah sudah sesuai dengan literatur.
Firdayanti et al. (2019) menyatakan bahwa adanya bilirubin
berlebihan dalam urin menandakan adanya kerusakan hepar. Kerusakan
202
hepar ini biasanya efek samping penggunaan Obat Anti Tuberkulosis
(OAT). Pemakaian OAT dapat menyebabkan gangguan fungsi hati, yang
termasuk ke dalam fungsi hati salah satunya adanya bilirubin. Bilirubin
disaring dari darah oleh hati dan dikeluarkan pada cairan empedu.
Sebagai mana jika hati rusak maka bilirubin akan meningkat.
Uji Hay untuk Garam Kholat. Tujuan dari uji Hay untuk garam
kholat adalah untuk mengetahui adanya garam kholat dalam urin
abnormal. Prinsip kerja uji Hay untuk garam kholat adalah tenggelamnya
serbuk belerang dalam urin menunjukkan bahwa dalam urin terdapat
garam kholat yang menurunkan tegangan permukaan cairan. Fungsi
penambahan serbuk belerang adalah sebagai indikator ada tidaknya
garam kholat yang menurunkan tegangan permukaan. Sinala (2016)
menyatakan bahwa fungsi penambahan serbuk belerang yaitu sebagai
indikator untuk mengetahui ada atau tidaknya garam kholat dengan
tegangan permukaan.
Tabung satu berisi urin dan serbuk belerang menyebabkan serbuk
belerang tenggelam karena dalam urin abnormal terdapat garam kholat
yang menurunkan tegangan permukaan. Andriyani et al. (2015)
menyatakan bahwa garam kholat dapat mengurangi tegangan permukaan
isi usus dan membantu membentuk emulsi dari lemak yang dimakan.
Garam kholat dapat menurunkan tegangan permukaan karena pada
garam kholat terdapat dua sisi yaitu hidrofilik dan hidrofobik. Sisi
hidrofobik mengikat garam kholat lalu menariknya turun kebawah
sehingga serbuk belerang tenggelam. Tabung dua berisi air dan serbuk
belerang menghasilkan belerang yang tidak tenggelam karena pada air
tidak terdapat garam kholat yang mampu menurunkan tegangan
permukaan. Hal ini menunjukkan bahwa hasil praktikum yang diperoleh
telah sesuai dengan literatur. Sumardjo (2008) menyatakan bahwa garam
kholat pada urin menandakan adanya kerusakan pada ginjal. Kerusakan
ini menyebabkan penyakit ginjal yang disebabkan oleh beberapa faktor
203
salah satunya penyakit metabolik. Penyakit metabolik pada ternak
disebabkan oleh gangguan biologi atau biokimia pada ternak.
Uji Obermeyer terhadap Indikan. Tujuan dari uji Obermeyer
terhadap indikan adalah untuk mengetahui adanya indikan dalam urin
abnormal. Prinsip kerja uji Obermeyer terhadap indikan adalah adanya
penambahan obermeyer maka indikan berubah warna menjadi Indigo blue
yang larut dalam khloroform. Indikan berasal dari penguraian triptophan
yang masuk dalam darah lalu diekskresikan lewat urin. Fungsi
penambahan pereaksi obermeyer adalah untuk memunculkan warna
Indigo blue. Rubenstein (2007) menyatakan bahwa triptophan terpecah
menghasilkan indikan dalam urin menjadikan larutan berwarna indigo blue
yang diakibatkan karena pereaksi obermeyer mengandung FeCl 2 yang
dapat mengoksidasi gugus indoksil. Fungsi penambahan chloroform yaitu
sebagai pelarut. Surbakti et al. (2016) menyatakan bahwa kloroform
berfungsi sebagai pelarut. Indikan berasal dari penguraian triptophan yang
masuk dalam darah lalu diekskresikan melalui urin. Suharyanto (2012)
menyatakan bahwa triptophan berperan penting dalam metabolisme.
Larutan pada bagian bawah setelah dilakukan penggojokan dan
didiamkan tidak terdapat warna indigo blue yang menandakan bahwa
dalam urin abnormal tidak terdapat indikan. Fungsi penggojokan yaitu
agar terbentuk larutan yang homogen (homogenisasi). Fellows (2000)
menyatakan bahwa homogenisasi adalah proses penyeragaman ukuran
partikel dalam upaya mempertahankan kestabilan dari sebuah campuran.
Triptophan terpecah menghasilkan indikan dalam urin menjadikan larutan
berwarna indigo biru. Hal tersebut berarti bahwa hasil percobaan tidak
sesuai dengan literatur. Faktor yang menyebabkan tidak terbentuknya
warna indigo blue yaitu kurang homogennya larutan saat di gojok, dan
kurangnya pemanasan, sehingga warna yang diinginkan tidak timbul
(Bradley, 2012). Poedjiadi (2009) menyatakan bahwa garam empedu
berfungsi untuk mengemulsikan lemak dengan menurunkan tegangan
permukaan lemak dan membantu kerja enzim lipase.
204
Kesimpulan

bahwa dalam urin sapi PO positif mengandung senyawa organik yaitu
urea, asam urat, kreatinin, dan garam amonium namun tidak
ditemukannya garam urat, namun urin sapi PFH positif untuk semua uji
yang dilakukan. Urin sapi PO dan PFH juga positif mengandung senyawa
anorganik yaitu khlor, fosfat, kalsium, dan sulfat. Urin abnormal positif
mengandung glukosa, pigmen darah (Hb), pigmen empedu, garam kholat,
namun tidak ditemukan albumin atau negatif saat dilakukan uji Heller dan
tidak ditemukan indikan. Kadar urin ternak dapat berbeda-beda karena
dipengaruhi oleh faktor jenis ternak, kondisi fisiologis ternak, hormon, dan
pakan yang diberikan pada ternak.
205
Daftar Pustaka
Achmad, H. 2012. Kimia Analitik Kualitatif. PT Citra Aditya Bakti. Jakarta.

Anggraini, M., B. Sarono, S. Waluyo, Rusydi, dan Sujono. Pengendapan
Uranium dan Thorium Hasil Pelarutan Slag II. Eksplorium.
36(2):125-132.
Amalia, F., Roslizawaty, Rusli, A. Sayuti, M. Hasan, Amiruddin, dan
Zuraida. 2017. Glucose levels OF Canis familiaris urin in Lamposi
Tigo Nagori Payakumbuh using semiquantitative striptest. Jurnal
Medika Veterinaria. 11(1): 10-14.
Andriyani, R., A. Triana, dan W. Juliarti. 2015. Buku Ajar Biologi
Reproduksi dan Perkembangan. Deepublish. Yogyakarta.
Astuti, D. S. 2017. Kadar Protein Urin Menggunakan Uji Asam Asetat
pada Mahasiswa Pendidikan Biologi Semester VI FKIP UMS 2017.
Jurnal Pendidikan Biologi. 1(14): 36-38.
Nutrien. Budi Utama. Yogyakarta.
Azhar, S., H. L. Sari, dan L. N. Zulita. 2014. Sistem Pakar Penyakit Ginjal
pada Manusia Menggunakan Metode Forward Chaining. Jurnal
Media Infotama. 1(10): 16-26.
Bradley, J.R., M. Gurnell, dan D. F. Wood. 2007. Lecture notes: Clinical
Medicine. Erlangga. Jakarta.
Cahyono, H. B., N. Mahmida, dan R. Yuliastuti. 2016. Pengaruh Khlorida
pada Logam (Ag, Pb, Hg, Fe, Cr, Ni, Zn) terhadap Sedimentasi Di
Kolam Equalisasi Ipal. Jurnal Riset Teknologi Industri. 10(2) : 94-
104.
Cendra, S. Moesis dan E. Langi. 2014. Gambar Kadar Albuminuria pada
subjek Diabetes Mellitus dengan dan Tanpa Penyakit Jantung
Coroner. Jurnal e-Clinic. 2(2): 1-6.
Chang, R. 2003. Kimia Dasar Konsep-Konsep Inti Jilid 2 Edisi Ketiga.
Erlangga. Jakarta.
Erviana, D., A. W. Budaya, S. Hariani, A. Winda, dan L.Y.Sari. 2018.
Analisis Kualitatif Kandungan Sulfat dalam Aliran Air dan Air Danau
di Kawasan Jakabaring Sport City Palembang. Jurnal Ilmu Kimia
dan Terapan. 2(2):1-4.
Fatimah, R.N. 2015. Diabetes mellitus tipe 2. Jurnal Majority. 4(5): 93-101.
Fellows, P. J. 2000. Food Processing Technology. Woodhead Publishing.
England.
206
Firdayanti, A. Fusvita, dan A. Umar. 2019. Gambaran Kadar Bilirubin Total
pada Penderita tuberkulosis Paru dengan Terapi Obat Anti
Tuberkulosis (Oat) di Puskesmas Poasia Kota Kendari. Jurnal
Kesehatan Vokasional. 4(3) : 118-121.
Harr, R. R. 2002. Resensi Ilmu Labaratorium Klinis. Penerbit Buku
Hartono, A. 2008. Rawat Ginjal, Cegah Cuci Darah. Kanisius. Yoygakarta.
Hasin, A., dan R. Zain. Analisis Kadar Kalsium Oksalat(CaC2O4) Pada
Daun dan Batang Tanaman Bayam Di Pasar Tradisional Kota
Makassar. Jurnal Media Laboran. 9(1) : 6-11.
Huang, K., L. Yaohui, W. Zhang, S. Sun, B. Yang, F. Chi, S. Ran, dan X.
Liu. 2015. One-Step Synthesis of Ag3PO4 Photocatalyst with
Visible-light Photocatalytic Activity. Material Research. 18(5) : 939-
945.
Indrawan, M. R., R. Agustina, dan L. Rijai. 2016. Ekstrasi Gelatin dari Kaki
Ayam Broiler Melalui Berbagai Larutan Asam dan Basa dengan
Variasi Lama Perendaman. Journal Tropical Pharmacy Chemistry.
3(4): 313-321.
Joshi, R. A. dan S. Manju. 2002. Practical of Biochemistry. Jain Publisher.
New Dehli.
Marks, D. B., D. M. Allan., dan M. S. Collens. 2000. Biokimia Kedokteran
Dasar: Sebuah Pendekatan Klinis. Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Jakarta.
Makfoeld, D., D.W. Marseno, P.Hastuti, S. Anggrahini, S. Raharjo, S.
Sastrosuwignyo, Suhardi, S. Martoharsono, S. Hadiwiyoto, dan
Tranggono. 2002. Kamus Istilah Pangan dan Nutrisi. Kanisius.
Yogyakarta.
Misnadiarly. 2007. Rematik, Asam Urat, Hiperurisemia, Arthritis Gout.
Pustaka Obor Populer. Jakarta.
Muhtadi, A. Suhendi, Nurcahyanti, dan E. M. Sutrisna. 2012. Potensi daun
salam (Syzigium polyanthum Walp.) dan biji jinten hitam (Nigella
Sativa Linn) sebagai kandidat obat herbal terstandar asam urat.
Jurnal Pharmacon. 13(1): 30-36.
Mukaromah, A. H., Yusrin, dan E. Mubiarti. 2012. Degradasi Zat Warna
Rhodamin B secara Advance Oxidation Proocesses Metode Fenton
Berdasarkan Variasi Konsentrasi H 2O2. Jurnal LPPM Unimus. 6(2) :
189-195.
Mulyono. 2001. Kamus Kimia. PT Gramedia Pustaka Utama. Bandung.
Ngibad, K. 2019. Analisis Kadar Fosfat dalam Air Sungai Ngelom
Kabupaten Sidoarjo Jawa Tengah. Pijar MIPA. 14(3) : 197-201.
207
Nurjannah, L., S. Suryani, S. S. Achmadi, dan A. Azhari. 2017. Produksi
asam laktat oleh Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus dengan
sumber karbon tetes tebu. Jurnal Teknologi dan Industri Pertanian
Indonesia. 1(9): 1-9.
Nurkhotimah. 2017. Pengaruh suhu dan pH terhadap aktivitas enzim
fosfatase bakteri termofilik sungai gendol pasca erupsi merapi.
Jurnal Prodi Biologi. 6(8): 465-471.
Nuryanti, S., S. Matsjeh, C. Anwar, dan T. J. Raharjo. 2010. Indikator
Titrasi Asam Basa dari Ekstrak Bunga Sepatu (Hubiscus rosa
sinensis L). Jurnal Agritech. 30(3) : 22-37.
Putri, A. A. B., Yuliet., dan Jamaluddin. 2016. Analisis kadar albumin ikan
sidat (Anguilla marmorata dan Anguilla bicolor) dan uji aktivitas
penyembuhan luka terbuka pada kelinci (Oryctolagus cuniculus).
Galenika Journal of Pharmacy. 2(2): 90-95.
Poedjiadi, A. 2009. Dasar-dasar biokimia. UI Press: Jakarta.
Sherwood, L. 2006 Text Book of Human Phsyiology. Edisi 2. Jakarta :
EGC.
Sinala, S. 2016. Farmasi Fisik. Pusdik SDM Kesehatan. Jakarta Selatan.
Suharyanto dan D. I Yudhistira. 2012. Aplikasi Triptophan dan Glisin
dalam Pakan Rucah serta Pengaruhnya terhadap Tingkat
Kanibalisme Pertumbuhan dan Sintasan Krablet Kepiting Bakau
(Scylaserrata). Jurnal Perikanan 14(1): 11-19.
Buku EGC. Jakarta.
Sumarlin, L.O., S. Muharam, dan A. Vitaria. 2008. Pemerangkapan NH4+
dari urin dengan zeolit pada berbagai urin. Universitas Islam Negeri
Jakarta. Jakarta.
Surbakti, W. M., G. M. H Rico, dan M. S. Sinaga. 2016. Pengaruh Pelarut
Kloroform dalam Pemurnian Gliserol dengan Proses Asidifikasi
Asam Klorida. Jurnal Teknik Kimia USU. 5(3) : 38-43.
Surya, A. M., D. Pratiwi, dan Masrul. 2018. Hubungan Protein Urin dengan
Laju Filtrasi Glomerulus pada Penderita Penyakit Ginjal Kronik
Dewasa di RSUP Dr. Djamil Padang tahun 2015-2017. Jurnal
Kesehatan Andalas. 7(4) : 469-474.
Susana, T. 2013. Air sebagai Sumber Kehidupan. Jurnal Oseana. 28(3) :
17-25.
Tandra, H. 2018. Dari Diabetes Menuju Ginjal. PT Gramedia Pustaka.
Jakarta.
208
Verdiansah. 2016. Pemeriksaan Fungsi Ginjal. Cermin Dunia Kedokteran.
43(2):148-154.
Wahab, A. S. 2000. Ilmu Kesehatan Anak. Penerbit Buku Kedokteran
EGC. Jakarta.
Wahidi. 2015. Konsep urin menurut Ibnu Sina: kajian atas Kitab Al-
Qanuun Fith-Thibb. Jurnal Pendidikan Islam. 2(4): 339-372.
Warsiki, E., M. Rahayuningsih, dan R. R. Anggarani. 2016. Media
berindikator warna sebagai pendeteksi Salmonella typhimurium.
Jurnal Teknologi Industri Pertanian. 26 (3): 276-283.
Yuliana, A. 2018. Buku Ajar Biokimia Farmasi. Jakad Publishing.
Surabaya.
Yazwir , R., dan I. Ferawati. 2012. Fisiologi dan Gangguan Keseimbangan
Natrium , Kalium, dan Khlorida serta Pemeriksaan Laboratorium.
Jurnal Kesehatan Andalas. 1(2) : 48-60.
Zusfahair, D. R. Ningsih, A. Fatoni., dan D. S. Pertiwi. 2018. Pemurnian
parsial dan karakterisasi urease dari biji kacang panjang (Vigna
unguiculata subsp sesquipedalis L.). Alchemy Jurnal Penelitian
Kimia, Vol. 14(1): 72-83.
209
ACARA VI
URIN KUANTITATIF
Disusun oleh :
Kelompok XV
Rifaldo PT/08162

FAKULTAS PETERNAKAN
YOGYAKARTA
2020
210
ACARA VI
URIN KUANTITATIF
Tujuan Praktikum
Praktikum biokimia dasar acara urin kuantitatif bertujuan untuk
menentukan kadar khlor (Cl) dalam urin PO dan PFH menggunakan
metode Volhard.

Urin adalah zat-zat yang disekresikan melalui ginjal, zat-zat yang
didapat di dalamnya adalah zat-zat makanan yang sudah dicerna,
kemudian diserap, dan dikeluarkan melalui ginjal dan saluran urin
(Kustyorini dan Hidayati, 2018). Eliminasi urin merupakan salah satu dari
proses metabolisme tubuh yang bertujuan untuk mengeluarkan bahan
sisa dari tubuh. Eliminasi urin bergantung kepada fungsi ginjal, ureter,
kandung kemih, dan uretra. Ginjal berfungsi menyaring produk limbah dari
darah untuk membentuk urin. Ureter berfungsi mentranspot urin dari ginjal
ke kandung kemih. Kandung kemih berguna untuk menyimpan urin
sampai timbul keinginan untuk berkemih (Yuwono dan Hidayati, 2012).
Urin mengandung garam-garam anorganik dan senyawa-senyawa
organik. Senyawa anorganik yang terdapat di dalam urin sebagian besar
merupakan sampah dari proses metabolisme antara lain ureum, asam
urat, kreatin, asam hipurat, indikan, asam-asam amino, asam-asam
organik (asam asetat, asam format, asam butirat, asam sitrat, asam
oksalat, asam laktat, asam glukoronat, dan asam benzoat). Di dalam urin
terdapat beberapa enzim antara lain amilase, tripsin, lipase, beberapa
hormon (hormon-hormon kelamin) vitamin C, dan vitamin B (Sumardjo,
2009).
Proses pembentukan urin diawali dengan proses filtrasi darah di
glomerulus. Filtrasi merupakan perpindahan cairan dari glomerulus
menuju ke ruang kapsula bowman dengan menembus membran filtrasi.
211
Glomerulus menyarig darah melalui dinding-dindingnya menuju komponen
kedua nefron (Fried dan Hademenos, 2005). Selanjutnya adalah
reabsorpsi. Urin yang dihasilkan setelah proses reabsorpsi disebut urin
sekunder (filtrat tubulus). Reabsorpsi adalah proses penyerapan kembali
filtrat glomerulus yang masih bisa digunakan oleh tubuh. Bagian yang
berperan dalam proses ini meliputi sel-sel epitalium pada tubulus
kontrotus proksimal, lengkung henle dan tubulus distal. Reabsorpsi zat-zat
tertentu dapat terjadi secara transfor aktif dan difusi. Zat-zat penting bagi
tubuh yang secara aktif direabsorpsi adalah garam-garam tertentu, asam
amino, glukosa, asam asetoasetat, hormon dan vitamin. Zat-zat tersebut
direabsorpsi secara aktif di tubulus proksimal sehingga tidak ada lagi di
lengkung henle (Fried dan Hademenos, 2005).
Proses yang ketiga adalah augmentasi yang berlangsung di tubulus
distal. Augmentasi merupakan proses penyerapan air dan penambahan
zat-zat seperti H+, K+, keratin, dan urea dalam urin sehingga urin hanya
berisi zat-zat yang benar-benar sudah tidak berguna lagi. Urin
dikumpulkan melalui pembuluh pengumpul dan selanjutnya masuk ke
pelvis (rongga ginjal), kemudian dialirkan ke kandung kemih atau vesica
urinaria melalui saluran ureter. Kandung kemih memiliki fungsi sebagai
tempat penampungan urin sementra. Zat-zat yang sudah tidak berguna
bagi tubuh akan dibuang ke tubulus-tubulus nefron ginjal. Zat-zat yang
sudah tidak diperlukan tubuh atau konsentrasinya terlalu banyak di dalam
aliran darah, akan dikeluarkan bersama urin tersier atau urin
sesungguhnya. Proses pembentukan urin dipengaruhi oleh dua faktor
yaitu faktor internal yang menyangkut hormon antideuretik dan insulin,
serta faktor eksternal yaitu menyangkut jumlah air yang diminum, melalui
proses augmentasi inilah akan terbentuk urin sesungguhnya yang
mengandung urea, asam urat, sisa-sisa pembongkaran dan zat-zat yang
berlebihan dalam darah seperti vitamin C, obat-obatan, hormon dan
garam-garam lainnya (Fried dan Hademenos, 2005).
212
Salah satu faktor yang mempengaruhi hasil urin adalah pakan.
Pakan yang banyak mengandung banyak nitrogen, fosfor atau kalium
menyebabkan ternak menghasilkan urin yang juga mengandung banyak
zat zat tersebut. Urin hewan ternak memiliki kandungan hara yang
berbeda beda tergantung pada spesies dan jenis pakan (Nurmilawati dan
Solikin, 2017). Pemberian pakan konsentrat dengan level yang berbeda
akan memberikan konsumsi protein yang berbeda sehingga berpengaruh
terhadap jumlah produksi N mikroba dalam rumen. Urin di bentuk di
daerah ginjal setelah dieliminasi dari tubuh melalui saluran kencing dan
berasal dari metabolisme nitrogen dalam tubuh (urea, asam urat, dan
keratin) serta 90% urin terdiri dari air. Urin yang dihasilkan ternak
dipengaruhi oleh makanan, aktivitas ternak, suhu eksternal, konsumsi air,
musim dan lain sebagainya (Rinekso et al., 2011). Kandungan urin
berfungsi dalam metabolisme dan ekskresi, dalam ginjal, hati, dan
pankreas (Astuti, 2017).
Khlor merupakan salah satu unsur yang terkandung dalam urin.
Kdar khlor dalam urin dipengaruhi oleh konsumsi pakan. Semakin besar
kandungan khlor dalam pakan maka kadar khlor dalam urin meningkat.
Kadar khlor yang tinggi dapat berbahaya bagi kesehatan, diantaranya
merusak kulit dan sistem pernafasan (Wulandari, 2017).
Sapi PO pakan utamanya adalah konsntrat sebagai sumber protein
karena memiliki kebutuhan protein yang tinggi untuk proses penggemukan
sedangkan untuk sapi perah (PFH) padah utamanya adalah hijauan untuk
proses produksi susu dalam tubuh. Pakan bisa menjadi salah satu faktor
perbedaan kadar maupun wujud urin sapi PO dan PFH. Jenis pakan yang
dikonsumsi sapi sangat berpengaruh terhadap hasil urin seperti jerami
fermentasi, karena di dalam jerami fermentasi banyak mengandung
nitrogen bukan protein yang tidak dapat dimanfaatkan oleh mikrobia
rumen. Hasil pengeluaran urin lebih banyak (Ganong, 2003).
Urin pada sapi menandung berbagai senyawa dalam bentuk
terlarut yang dihasilkan oleh ginjal. Urin sapi mengandung auksin sebagai
213
salah satu zat yang terkandung di dalam makanan hijau yang tidak
tercerna dalam tubuh sapii dan akhirnya akan terbuang bersama urin .
urin sai mengandung hara yang lengkap walaupun tersediia dalam jumlah
yang kecil. Selain itu, urin sapi mengandung nitrogen yang sebagian besar
dalam bentuk urea serta hormone yang sangat baik untuk merangsang
pertumbuhan tanaman. Kadar auksin dalam urin sapi betina lebih tinggi
daripada sapi jantan. Kandungan kimia urin sapi sangat komplek seperti
nitrogen, kalsium, fosfor, dan lainnya (Ika et al., 2019).
Pengujian urin secara kuantitatif bertujuan untuk mengetahui
adanya khlor dalam urin. Selain itu, uji ini juga bertujuan untuk mengetahui
kondisi ternak dan penyakit yang diderita oleh ternak melalui urin. Prinsip
kerja dari uji khlor adalah larutan yang mengandung ion Cl ditambah
AgNO3 berlebih dan diasamkan dengan HNO3 akan membentuk endapan
AgCl. Penambahan HNO3 untuk mencegah adanya endapan Ag3PO4
(perak fosfat). Sukmawaty (2015) menyatakan bahwa kelebihan AgNO3
dititrasi dengan larutan amonium tiosianat dan feri amonium sulfat yang
akan membentuk kompleks feri sulfosianat yang berwarna merah.
214
Materi dan Metode
Materi
Alat. Alat yang digunakan dalam praktikum ini antara lain labu
takar, pipet tetes, pipet ukur, buret, kertas saring, gelas piala, dan gelas
erlenmeyer.
Bahan. Bahan yang digunakan dalam praktikum ini antara lain urin
sapi, HNO3 pekat, AgNO3 0,171 N, aquades, indikator feri-amonium-sulfat,
larutan amonium tiosinat.
Metode
Penentuan uji khlor (metode Volhard) dalam urin. Labu takar 50 ml
diisi dengan 5 ml urin sapi. Larutan ditambah dengan 0,5 ml HNO 3 pekat
dan 10 ml larutan AgNO3 0,171 N. Larutan tersebut diencerkan dengan
aquades sampai batas tanda. Larutan disarin dan filtrat ditampung pada
gelas piala. Larutan tersebut diambil 25 ml dan dimasukkan ke dalam
elenmeyer, kemudian ditambah dengan 2,5 ml indikator feri-amonium-
sulfat. Larutan dititrasi dengan larutan amonium tiosinat sampai warnanya
berubah menjadi merah muda. Jumlah larutan ammonium tiosianat yang
digunakan untuk titrasi dicatat. Perhitungan gram NaCl. Untuk mengetahui
berapa gram NaCl yang terdapat dalam 5 mL urin dipergunakan rumus
sebagai berikut:
(10 - 2x) × 0,010 = gram NaCl
Keterangan:
10 = ml AgNO3
2 = Jumlah filtrat yang dititrasi setengah dari total filtrat
X = Jumlah ml tiosianat yang dipergunakan untuk menitrasi
215
BA Cl
Kadar Cl = × gram NaCl
BM NaCl
Keterangan:
BA Cl : berat atom Cl
BM NaCl : berat molekul senyawa NaCl
216
Penentuan uji khlor (metode Volhard) dalam urin. Tujuan dari

praktikum biokimia dasar acara urin kuantitatif adalah untuk menentukan
kadar khlor (Cl) dalam urin. Prinsip kerja dari uji khlor adalah larutan yang
mengandung ion Cl ditambah AgNO3 berlebih dan diasamkan dengan
HNO3 akan membentuk endapan AgCl. Penambahan HNO 3 untuk
mencegah adanya endapan Ag3PO4 (perak fosfat). Kelebihan AgNO3
dititrasi dengan larutan amonium tiosianat dan feri amonium sulfat yang
akan membentuk kompleks feri sulfosianat yang berwarna merah
(Sukmawaty, 2015). Fungsi penambahan AgNO3 agar terbentuk HNO3
pekat yang berfungsi sebagai mencegah terjadinya endapan perak fosfat
(Ag3PO4). Penambahan indikator feri aluin agar terbentuk komplek feri
sulfosianat, dan titrasi menggunakan larutan ammonium tiosianat agar
terbentuk endapan merah bata. Fungsi perlakuan penyaringan
menggunakan kertas saring adalah memisahkan endapan AgCl dengan
filtrat.
Berdasarkan uji yang dilakukan diperoleh data pada urin yang
ditetesi HNO3 lalu di tambah dengan larutan standar AgNO3 larutan
menjadi endapan AgCl berwarna putih keruh. Fungsi penambahan HNO 3
adalah untuk mencegah terjadinya endapan perak fosfat (Ag3PO4),
sehingga perak menjadi cenderung untuk mengikat Cl dan terbentuklah
endapan AgCl berwarna putih. Reaksi yang terjadi adalah sebagai berikut:
NaCl + AgNO3 → AgCl(s) + NaNO3
Larutan disaring dengan kertas saring sehingga endapan tertinggal
pada kertas saring dan mengakibatkan larutan berwarna jernih. Kelebihan
AgNO3 dititrasi menggunakan larutan standar amonium tiosianat
(indikator) nantinya akan terbentuk kompleks feri sulfosianat yang
berwarna merah muda. Barret et al., (2003) menyatakan bahwa
penambahan amoniak akan mengurangi endapan AgCl. Hasil dari
percobaan yang telah dilakukan adalah endapan warna putih dari AgCl
217
baik pada sapi PO maupun sapi PFH. Hal ini membuktikan bahwa hasil
dari titrasi tersebut telah sesuai dengan literatur yang ada.
Uji khlorida terhadap urin sapi PO sama dengan uji khlorida pada
sapi PFH. Berdasarkan hasil perhitungan dengan rumus menentukan
kadar Cl dalam urin, didapatkan pada urin sapi PO berat Cl sejumlah
0,024 gram dan kadar Cl sejumlah 0,48 % . Kadar Cl untuk urin sapi PFH
diperoleh hasil berat Cl 0,004 gram dan kadar Cl 0,081 %. Kadar Cl dalam
urin sapi PO lebih tinggi dari kadar Cl sapi PFH. Sumardjo (2009)
menyatakan bahwa pada sapi dalam keadaan normalnya terkandung 1,5
gram sampai 1,6 gram NaCl dalam 100 ml urin, sehingga apabila
dikonversikan sebesar 1,8%. Jadi kadar Cl pada urin sapi PO dan PFH
yang diuji masih normal.
Faktor yang dapat mempengaruhi jumlah khlor dalam urin
diantaranya adalah jenis pakan, jumlah air yang diminum ternak, tingkat
kesetresan atau psikologis ternak, cuaca, dan kondisi ternak hewan.
Salah satu faktor yang dapat mempengaruhi jumlah khlor urin adalah jenis
pakan ternak, beberapa khlor yang terdapat dalam pada urin sebagian
besar berasal dari makanan yang dimakan ternak. Semakin besar
kandungan khlor dalam bahan pakan maka kadar khlor yang kadar khlor
dalam urin juga akan meningkat. Ganong (2003) menyatakan bahwa
faktor-faktor yang mempengaruhi jumlah khlor dalam urin yaitu
perbedaan temperatur lingkungan ternak, cuaca, konsumsi air dan pakan
juga oleh perbedaan aktifitas ginjal, misalnya perubahan jumlah zat yang
difiltrasi dan yang diabsorbsi dalam tubulus, kadar kaldostreron dalam
darah dan hormon-hormon adrenokorteksialin serta hormon neuratik
lain.
218
Kesimpulan
Berdasarkan hasil praktikum yang diperoleh dapat disimpulkan
bahwa dalam urin sapi PO kadar khlor daam urin sejumlah 0,48 % dan
dalam urin sapi PFH sejumlah 0,081%. Kadar Cl dalam urin sapi PO lebih
tinggi dari kadar Cl sapi PFH. Faktor yang mempengaruhi kadar urin
antara lain perbedaan temperatur lingkungan ternak, musim atau cuaca,
konsumsi air dan pakan juga oleh perbedaan aktifitas ginjal, misalnya
perubahan jumlah zat yang difiltrasi dan yang diabsorbsi dalam tubulus,
kadar kaldostreron dalam darah dan hormon-hormon adrenokorteksialin
serta hormon neuratik lain. Selain itu pH juga sangat berpengaruh yaitu
bahwa pH urin tergantung pada kualitas berbagai ion yang terdapat di
dalam urin hewan tersebut.
219
Daftar Pustaka
Astuti, D. S. 2017. Kadar protein urin menggunakan uji asam asetat pada
mahasiswa pendidikan biologi semester VI FKIP UMS. Proceeding
Biology Educaton Conference. 14(1): 36-38.
Barrett, K. E., S. M. barman, S. Boitano, dan H. L. Brooks. 2003.
Experiments in Michrobiology, Plant Pathology, and Biotechnology.
New Age International. New Delhi.
Fried, G. H. dan G. J. Hademenos. 2005. Schaums Outlines Biologi Edisi
Kedua. Erlangga. Jakarta.
Ganong, W. F. 2003. Fisiologi Kedokteran. Penerbitan Buku kedokteran.
Jakarta.
Ika, Y., F. Nisak, dan B. Gunawan. 2019. Peningkatan Manfaat Pupuk
Organik Cair Urine Sapi. Uwais Inspirasi Indonesia. Ponorogo.
Kustyorini, T. I. W., dan P. I. Hidayati. 2018. Pengaruh perendaman pada
beberapa jenis larutan urine terhadap daya tumbuh kecambah
kaliandra (Calliandra calothyrsus). Jurnal Sains Peternakan
Fakultas Peternakan Univeritas Kanjuruhan Malang. 6(1): 47-52.
Nurmilawati, M. dan N. Solikin. 2017. Pengaruh perbedaan ransum pakan
terhadap kadar unsur hara makro (NPK) pada urin kelinci. Simki-
Techsain. 1(3):1-6
Rinekso, K. B., Sutrisno, dan Sumiyati. 2011. Studi pembentukan pupuk
organik cair dari fermentasi urin sapi (Ferisa) dengan variasi lokasi
peternakan yang berbeda. Progam Studi Teknik Lingkungan
Universitas Diponegoro. 3(1): 1-11.
Sukmawaty, E. 2015. Penuntun Praktikum Biokimia. Universitas Islam
Negeri Alauddin. Makassar.
Kedokteran dan Program Strata I Fakultas Bioeksakta. EGC.
Jakarta.
Wulandari, D. D. 2017. Analisa kesadahan total dan kesadahan klorida air
di Kecamatan Tanggolan Sidoharjo, Surabaya. Medical Technology
and Public Health Journal. 1(1): 14-19.
Yuwono, K. P., dan Hidayati. 2012. Study deskriptif volume urin 24 jam
pada ibu hamil. Jurnal Nursing Studies. 1(1): 124-131.
220
Lampiran
Lampiran 6.1. Perhitungan

1. Urin sapi PO
(10 - 2x) × 0,010 = gram NaCl
[10 - (2)(3)] × 0,010 = 0,04 gram NaCl
Berat Atom Cl × gram NaCl
Berat Cl =
Berat Molekul NaCl
35,5 × 0,04
=
58,5
= 0,024 gram
100
Kadar Cl = 0,024 ×
5
= 0,48%
2. Urin sapi PFH
(10 - 2x) × 0,010 = gram NaCl
[10 - (2)(1,6)] × 0,010 = 0,068 gram NaCl
Berat Atom Cl × gram NaCl
Berat Cl =
Berat Molekul NaCl
35,5 × 0,068
=
58,5
=0,004 gram
100
Kadar Cl = 0,004 ×
5
= 0,081%
221
Gambar 1. Hasil uji khlor dalam urin sapi PO
Gambar 2. Hasil uji khlor dalam sapi PFH
222
223
224
ACARA VI
URIN KUANTITATIF
INHAL
Disusun oleh:

FAKULTAS PETERNAKAN
YOGYAKARTA
2020
225
ACARA VI
URIN KUANTITATIF
Tujuan Praktikum
Praktikum biokimia dasar acara urin kuantitatif bertujuan
untuk menentukan kadar khlor (Cl) dalam urin PO dan PFH menggunakan
metode Volhard.

Urin merupakan cairan sisa yang diekskresikan dari proses
penyaringan darah yang dilakukan oleh ginjal. Urin dikeluarkan dari dalam
tubuh melalui proses urinasi. Zat cair buangan yang terhimpun didalam
kandung kemih dan dikeluarkan oleh tubuh melalui saluran kemih.
Ekskresi urin diperlukan untuk membuang molekul sisa dalam darah yang
disaring oleh ginjal dan untuk menjaga homeostatis cairan tubuh (Mistar,
2015).
Organ vital yang paling penting dalam proses pembentukan urin
adalah ginjal. Ginjal merupakan organ tubuh yang berfungsi mengatur
keseimbangan cairan tubuh dengan cara membuang sampah-sampah
sisa metabolisme dan menahan zat-zat yang dibutuhkan tubuh. Sistem
eskresi sendiri terdiri dari dua buah ginjal dan saluran kemih. Ginjal akan
mengambil zat-zat yang berbahaya dalam darah dan membuangnya
bersama urin. Urin lalu akan dikumpulkan dan dialirkan ke ureter. Dari
ureter, urin akan ditampung dahulu ke kandung kemih. Bila orang tersebut
merasakan ingin micturisi dan keadaan memungkinkan maka urin yang
ditampung dikandung kemih akan dikeluarkan melalui uretra (Guyton,
2014). Kandungan yang terdapat dalam urin diantaranya yaitu nitrogen
1%, fosfor 0,5%, kalium 1,5%, karbon 1,1%, air 92%. Menurut Astuti
(2017) menyebutkan bahwa kandungan urin berfungsi dalam metabolisme
dan ekskresi dalam ginjal, hati, dan pancreas. Proses sekresi pada ginjal
ada 3 tahapan yaitu filtrasi, adsorbsi, dan sekresi (Ganong, 2003).
226
Warna urin yang dikeluarkan tergantung dari konsentrasi dan sifat
bahan yang larut dalam urin. Warna merah, menunjukkan adanya
pendarahan dalam saluran kemih, warna urin coklat kehitaman
menunjukkan adanya hemoglobin dalam urin sedangkan warna kuning
coklat menunjukkan adanya bilirubin dalam urin (Izhar et al., 2007).
Perbedaan kandungan khlor dalam urin disebabkan oleh perbedaan ginjal,
misalnya perubahan jumlah yang difiltrasi dan yang direabsorbsi dalam
tubulus, kadar aldesteron dalam darah dan hormon-hormon adreno-
korteksialin dan hormon neuratik (Kiyokawa et al., 2011).
Khlorida merupakan suatu elektrolit yang memiliki peranan penting
dalam menjaga keseimbangan cairan di dalam dan di luar sel-sel tubuh
serta mempertahankan volume darah normal, tekanan darah, dan pH
cairan tubuh. Sebagian besar khlor di dalam tubuh berasal dari garam
NaCl yang terdapat dalam makanan yang dikonsumsi. Khlorida diabsorbsi
dalam saluran gastrointestinal, dan kelebihannya akan dikeluarkan melalui
urin (Izhar et al., 2007).
Penentuan kadar Cl dalam urin dapat diketahui apabila dalam
sejumlah larutan yang mengandung ion Cl ditambahkan larutan AgNO 3
berlebih (namun diketahui jumlahnya) dan diasamkan dengan HNO 3,
maka akan terbentuk endapan AgCl. HNO3 digunakan untuk mencegah
terjadinya endapan perak-fosfat (Ag3PO4). AgNO3 kemudian dititrasi
dengan menggunakan larutan standar amonium tiosianat dan feri-
amonium sulfat (indikator) sehingga terbentuk kompleks feri sulfosianat
yang berwarna merah (Nurpialawati et al., 2014).
Kelainan yang dapat ditemukan dalam sistem urinaria diantaranya
yaitu disuria, poliuria, dan urinaria supresi. Disuria adalah rasa sakit dan
kesulitan dalam berkemih. Hal ini sering ditemukan pada penyakit infeksi
saluran kemih, trauma, dan struktur uretra. Poliuria merupakan produksi
urine abnormal dalam jumlah besar oleh ginjal tanpa adanya asupan
cairan. Biasanya hal ini dapat ditemukan pada penyakit diabetes mellitus
dan penyakit ginjal kronis. Urinaria supresi adalah berhentinya produksi
227
urin secara mendadak (Ardhiyanti et al., 2014). Manfaat analisis kuantitatif
pada urin diantaranya yaitu mengetahui kadar dan kandungan urin
khususnya zat anorganik yaitu Khlor(Yaswir dan Ferawati, 2012).
Mengetahui faktor yang mempengaruhi jumlah khlor dalam urin.
Mengetahui kelainan pada ginjal yang disebabkan oleh khlor yaitu
hipokloremia dan hiperkloremia (Tambajong et al., 2016).
228
Materi dan Metode
Materi
Alat. Alat yang digunakan dalam praktikum urin kuantitatif adalah
labu takar 50 ml dan labu erlenmeyer.
Bahan. Bahan yang digunakan dalam praktikum ini antara lain urin
sapi, HNO3 pekat, AgNO3 0,171 N, aquades, indikator feri-amonium-sulfat,
dan larutan amonium tiosianat.
Metode
Penentuan kadar khlor dalam urin. Urin sebanyak 5 ml dimasukkan
dalam labu takar 50 ml, lalu ditambahkan dengan 0,5ml HNO 3 pekat dan
ditambahkan 10 ml AgNO3. Campuran tersebut diencerkan dengan
aquades sampai tanda batas dan disaring dengan kertas saring, lalu
filtratnya ditampung. Filtrat diambil 25ml kemudian dimasukkan ke dalam
erlenmeyer dan ditambahkan 2,5ml indikator feri-amonium-sulfat. Larutan
dalam erlenmeyer tersebut dititrasi dengan amonium tiosianat sampai
larutan menjadi warna orange. Untuk mengetahui berapa gram NaCl yang
terdapat dalam 5 ml urin digunakan rumus sebagai berikut :
(10 - 2X) x 0,010 = gram NaCl
Keterangan:
10 = ml AgNO3
2 = jumlah filtrat yang dititrasi setengah dari total filtrat
0,01 = (N AgNO3X BM NaCl)/1000
X = jumlah ml tiosianat yang dipergunakan untuk menitrasi
Berat Cl (gram) dalam 10 ml urin = BA Cl x gram NaCl

BM NaCl
Keterangan:
BA Cl : berat atom Cl
BM NaCl : berat molekul senyawa NaCl
Kadar Cl (%) : berat Cl x (100:5)
229
Penentuan kadar khlor dalam urin. Percobaan ini bertujuan untuk

mengetahui kadar khlor dalam urin sapi PO dan PFH. Prinsip kerja dari uji
kadar khlor adalah ketika dalam sejumlah larutan yang mengandung ion
khlor ditambahkan larutan AgNO3 berlebihan dan diasam kan dengan
asam nitrat maka endapan AgCl akan terbentuk. Asam nitrat yang
digunakan dalam uji ini bertujuan untuk mencegah terjadinya endapan
perak-fosfat. Kelebihan AgNO3 dititrasi dengan menggunakan larutan
standar ammonium tiosianat yang berfungsi sebagai titran dan feri-
amonium-sulfat akan membentuk kompleks feri-sulfosianat yang berwarna
merah (Nurpialawati et al., 2014). Fungsi penambahan senyawa asam
yaitu untuk membentuk endapan AgCl agar tidak terbentuk endapan perak
fosfat. Fungsi perlakuan penyaringan menggunakan kertas saring adalah
memisahkan endapan AgCl dengan filtrat. Adapun reaksi yang terjadi
dalam uji urin kuantitatif adalah sebagai berikut.
NaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3
putih
AgNO3 (sisa) + NH4CNS AgNCS + NH4NO3
NH4CNS + Ferri ammonium sulfat Ferri sulfosianat
(indikator) (berwarna merah)
Berdasarkan uji yang dilakukan diperoleh data pada urin yang
ditetesi HNO3 lalu di tambah dengan larutan standar AgNO3 larutan
menjadi endapan AgCl berwarna putih keruh. Fungsi penambahan HNO 3
adalah untuk mencegah terjadinya endapan perak fosfat (Ag 3PO4),
sehingga perak menjadi cenderung untuk mengikat Cl dan terbentuklah
endapan AgCl berwarna putih.
Larutan disaring dengan kertas saring sehingga endapan tertinggal
pada kertas saring dan mengakibatkan larutan berwarna jernih. Kelebihan
AgNO3 dititrasi menggunakan larutan standar ammonium tiosianat
(indikator) yang nantinya akan terbentuk kompleks feri sulfosianat yang
230
berwarna merah muda. Hal ini membuktikan bahwa hasil dari titrasi
tersebut telah sesuai dengan literatur yang ada.
Berdasarkan hasil percobaan didapatkan berat Cl pada sampel urin
sapi PO adalah 0,02 gram dan kadar Cl adalah 0,242 %. Angka ini
menunjukkan bahwa di dalam 5 ml sampel urin sapi PO yang digunakan,
terdapat 0,0121 gram khlor yang berarti 0,242% dari sampel. Uji
penentuan Cl yang dilakukan, didapatkan bahwa kadar Cl pada sampel
urin sapi PO adalah 0,242 %, sedangkan pada sampel urin sapi PFH
didapatkan kadar Cl adalah 0,12%.
Umumnya sapi dalam keadaan normal terkandung 1,5 gram
sampai 1,6 gram NaCl dalam 100 ml urin, sehingga apabila dikonversikan
sebesar 1,8% (Sumardjo, 2008). Jadi, kadar Cl pada urin sapi PO dan
PFH yang diuji masih normal. Hal ini dapat disebabkan oleh beberapa
faktor diantaranya adalah jumlah dan jenis makanan yang dikonsumsi.
Ganong (2003) menyatakan bawa sebagian besar khlor yang terdapat
dalam urin berasal dari makanan yang dimakan ternak. Semakin besar
kandungan khlor dalam bahan pakan maka kadar khlor dalam urin juga
akan meningkat.
Faktor-faktor yang mempengaruhi jumlah khlor dalam urin yaitu
perbedaan temperatur lingkungan ternak, cuaca, konsumsi pakan dan air
serta perbedaan aktifitas ginjal, misalnya perubahan jumlah zat yang
difiltrasi dan yang diabsorbsi dalam tubulus, kadar kaldostreron dalam
darah dan hormon-hormon adrenokorteksialin serta hormon neuratik lain.
Selain itu pH juga berpengaruh terhadap urin, tergantung pada kualitas
berbagai ion yang terdapat di dalam urin hewan tersebut. Peningkatan
bikarbonat dalam urin dapat menyebabkan adanya peningkatan
kebebasan dalam urin. Urin yang bersifat asam dapat dihasilkan dari
pertukaran Na dengan ion-ion hidrogen atau amonium klorida (Ganong,
2003). Salah satu faktor yang dapat mempengaruhi kadar Cl adalah
perbedaan jenis pakan. Pakan sapi PO berupa hijauan dan konsentrat
231
tambahan, sementara untuk sapi PFH hanya diberikan pakan berupa
pakan hijauan saja sehingga urin sapi PO lebih banyak mengandung Cl.
232
Kesimpulan
Berdasarkan praktikum urin kuantitatif yang telah dilakukan, dapat
disimpulkan bahwa kadar khlor dalam urin sapi PO sebesar 0,242% dan
sapi PFH sebesar 0,12%. Hal ini menunjukkan bahwa kadar khlor pada
urin sapi PO lebih besar daripada sapi PFH. Faktor yang mempengaruhi
jumlah khlor dalam urin yaitu perbedaan temperatur lingkungan ternak,
cuaca, konsumsi pakan dan air, serta jumlah zat yang difiltrasi, diabsorbsi
dalam tubulus, kadar kaldostreron dalam darah dan hormon-hormon
adrenokorteksialin serta hormon neuratik.
233
Daftar Pustaka
Ardhiyanti, Y., R. Pitriani, dan I. P. Damayanti. 2014. Panduan Lengkap
Keterampilan Dasar Kebidanan I. Deepublish. Yogyakarta.
Astuti, D. S. 2017. Kadar protein urin menggunakan uji asam asetat pada
mahasiswa pendidikan biologi semester VI FKIP UMS. Proceeding
Biology Educaton Conference. 14(1): 36-38.
Ganong, W. F. 2003. Buku Ajar: Fisiologi Kedokteran.Buku Kedokteran
EGC.Jakarta.
Guyton, A. C. dan J. E. Hall. 2014. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Edisi
12. EGC. Jakarta.
Izhar, M. Dody, K. Haripurnomo, dan D. Suhardi. 2007. Hubungan antara
kesadahan air minum, kadar kalsium, dan sedimen kalsium oksalat
urin pada anak usia sekolah dasar. Berita Kedokteran Masyarakat.
23(4): 200-209.
Kiyokawa I., K. Sogawa, K. Ise, F. Iida, M. Satoh, T. Miura, R. Kojima, K.
Katayama, dan F. Nomura. 2011. Adsorption of urinary proteins on
the conventionally used urine collection tubes: possible effects on
urinary proteome analysis and prevention of the adsorption by
polymer coating. Hindawi Publishing Corporation. 1(1) : 1-8.
Mistar, A. 2015. Kiat Jitu Menggemukkan Sapi Secara Maksimal.
Agromedia Pustaka. Jakarta Selatan.
Nurpialawati, I., I. D. P. Sari, M. I. Fillah., dan S. Masitoh. 2014. Titrasi
Pengendapan Metode Volhard. Pendidikan Kimia Fakultas Ilmu
Tarbiyah dan Keguruan. UIN Syarif Hidayatullah.Jakarta.
Buku EGC. Jakarta.
Tambajong, R. Y., G. I. Rambert, dan M. F. Wowor. 2016. Gambaran
kadar natrium dan klorida pada pasien penyakit ginjal kronik stadium
5 non-dialisis. Jurnal eBiomedik. 4(1) : 1-6.
Yaswir, R., dan I. Ferawati. 2012. Fisiologi dan Gangguan Keseimbangan
Natrium, Kalium dan Klorida serta Pemeriksaan Laboraturium. Jurnal
Kesehatan Andalas. 1(2) : 1-6.
234
Lampiran
Lampiran 1. Perhitungan
1. Urin sapi PO
(10 – 2X ) X 0,010 = gram NaCl
(10-(2)(4)) X 0,010 = 0,02 gram NaCl
Berat Atom Cl X gram NaCl

Berat Cl = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡𝑀𝑜𝑙𝑒𝑘𝑢𝑙𝑁𝑎𝐶𝑙
35,5 𝑋 0,02
=
58,5
= 0,0121 gram
Kadar Cl = Berat Cl X (100:5)

= 0,0121 X (100:5)
= 0,242 %
2. Urin sapi PFH

(10 – 2X ) X 0,010 = gram NaCl
(10-(2)(4,5)) X 0,010 = 0,01 gram NaCl
Berat Atom Cl X gram NaCl

Berat Cl = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡𝑀𝑜𝑙𝑒𝑘𝑢𝑙𝑁𝑎𝐶𝑙
35,5 𝑋 0,01
= 58,5
= 0,006 gram
Kadar Cl = Berat Cl X (100:5)

= 0,006 X (100:5)
= 0,12 %
235
RESUME MATERI
Darah
236
237
238
239
240
241
242
243
244
245
246
247
Susu dan Telur
248
249
250
251
252
253
254
255
256
257
258
259
260
261

BIodas 2020 - Kelompok XV - ACC

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Deskripsi Asli:

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

BIodas 2020 - Kelompok XV - ACC

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

LAPORAN PRAKTIKUM

LABORATORIUM BIOKIMIA NUTRISI

LABORATORIUM BIOKIMIA NUTRISI

Laporan praktikum Biokimia Dasar ini disusun untuk memenuhi

Yogyakarta, Mei 2020

Puji syukur kehadirat Allah SWT atas rahmat dan hidayah-Nya

Yogyakarta, Mei 2020

Asisten : Felicia Swithenia

LABORATORIUM BIOKIMIA NUTRISI

Teori dan Prinsip Kerja

Gambar 1.1 Struktur glukosa dan fruktosa

Hasil Praktikum Sumardjo (2008)

Hasil Praktikum Sumardjo (2008)

Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan dapat disimpulkan

Al-Kayyis, H. K. dan H. Susanti. 2016. Perbandingan metode somogyi

Lampiran 1.1. Dokumentasi

Gambar 1. Hasil Uji Gambar 2. Hasil Uji Gambar 3. Hasil Uji

Gambar 16. Uji Gambar 17. Uji Gambar 18. Uji

Gambar 22. Uji hasil hidrolisis

Asisten : Felicia Swithenia

LABORATORIUM BIOKIMIA NUTRISI

Teori dan Prinsip Kerja

Gambar 1. Struktur monosakarida

Gambar 2. Reaksi uji Molisch

Hasil Praktikum Babu et al. (2015)

Hasil Praktikum Babu et al. (2015)

Berdasarkan data diatas, dapat dilihat bahwa pada menit pertama

Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan dapat disimpulkan

Afriza, R. Dan Ismanilda. 2019. Analisis perbedaan kadar gula pereduksi

LABORATORIUM BIOKIMIA NUTRISI

Teori dan Prinsip Kerja

Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan dapat disimpulkan

Bintang, M. 2010. Biokimia Teknik Penelitian. Erlangga. Bogor.

Lampiran 2.1. Dokumentasi Uji

Gambar 1. Hasil uji Gambar 2. Hasil uji Gambar 3. Hasil uji

Gambar 4. Hasil uji Gambar 5. Hasil uji Gambar 6. Hasil uji

LABORATORIUM BIOKIMIA NUTRISI

Teori dan Prinsip Kerja

Gambar 3.1 Struktur Asam Lemak Jenuh

Gambar 3.2 Struktur Asam Lemak Tidak Jenuh

(C17H35COO)3 + 3 KOH → 3 C17H35COOK + C3H5(OH)3

Uji Kelarutan dan Terjadinya Emulsi

Gambar 3.4 Reaksi saponifikasi lemak

Berdasarkan praktikum lipida yang telah dilakukan dapat

Lampiran 3.2. Dokumentasi praktikum

Gambar 1. Hasil Uji Kelarutan Gambar 2. Hasil Uji Angka Yod

Gambar 3. Hasil Uji Akrolein Gambar 4. Hasil Uji Akrolein

LABORATORIUM BIOKIMIA NUTRISI

Teori dan Prinsip Kerja

Fungsi Saliva dalam Mulut

Gambar 3. Hasil Uji Hidrolisis Gambar 4. Hasil Uji Hidrolisis

Gambar 7. Hasil Uji Penuruan Gambar 8. Hasil Uji Gmelin

LABORATORIUM BIOKIMIA NUTRISI

Teori dan Prinsip Kerja

Senyawa Organik dalam Urin

Addin, I dan S. Yamtinah. 2016. Pembuatan perak nitrat (AgNO 3) teknis

Gambar 1. Hasil Uji Biuret Gambar 2. Hasil Uji Enzimatik

Gambar 3. Hasil Uji Benedict Gambar 4. Hasil Uji Murexida pada

Gambar 7. Hasil Uji Daya Gambar 8. Hasil Uji Khlorida

Asisten: Felicia Swithenia

LABORATORIUM BOIKIMIA NUTRISI

Teori dan Prinsip Kerja