MODUL PRAKTIKUM TEKNIK PEMISAHAN

KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI

WULAN TRI WAHYUNI

MOHAMAD RAFI

DIVISI KIMIA ANALITIK

DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2021
 KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI

Pendahuluan

Kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT atau HPLC) digunakan untuk pemisahan
komponen yang tidak mudah menguap dan tidak tahan terhadap pemanasan. Komponen
dipisahkan berdasarkan mekanisme partisi, adsorpsi, eksklusi, atau pertukaran ion. Fase diam
yang digunakan dapat berupa padatan atau cairan, sementara fase geraknya ialah cairan.
Pemisahan pada kromatografi, termasuk KCKT didasarkan pada perbedaan
kesetimbangan komponen sampel di antara fase diam dan fase gerak. Kesetimbangan ini
secara kuantitatif diekspresikan sebagai koefisien partisi K yang dihitung dengan persamaan
berikut
K = Cs atau K = k’ Vm
Cm Vs
Cs dan Vs masing-masing menyatakan konsentrasi (molar) komponen pada fase diam
dan volume fase diam, Cm dan Vm menyatakan konsentrasi (molar) komponen dalam fase gerak
dan volume fase gerak, k’ menyatakan faktor retensi. Faktor retensi dapat ditentukan dengan
persamaan
k’ = tr – tm tr ialah waktu retensi sampel, tm ialah dead time waktu yang dibutuhkan
tm agar komponen yang tidak tertahan terelusi keluar kolom.
Fase gerak pada KCKT dapat berupa eluen tunggal atau campuran eluen dengan
komposisi yang tetap selama elusi, dikenal sebagai elusi isokratik. Dapat juga menggunakan
campuran beberapa fase gerak dengan konsentrasi bervariasi selama proses elusi sehingga
menghasilkan gradien konsentrasi, prosesnya disebut elusi gradien.
KCKT dibedakan menjadi dua jenis, yaitu KCKT fase normal dan fase terbalik. KCKT
fase normal menggunakan fase diam lebih polar dibandingkan fase geraknya, sementara pada
KCKT fase terbalik digunakan fase diam lebih nonpolar dibandingkan fase geraknya.
Komponen instrumentasi KCKT yang penting meliputi reservoir fase gerak, sistem
pompa, sistem injeksi sampel, kolom, dan detektor (Gambar 2).

Gambar 2 Instrumen kromatografi cair kinerja tinggi.

2
 Tujuan percobaan
Percobaan bertujuan mempelajari komponen, prinsip kerja, dan cara pengoperasian
kromatografi cair kinerja tinggi.

Alat dan Bahan

Bahan praktikum berupa video praktikum yang dapat anda akses pada tautan berikut:
1. https://www.youtube.com/watch?v=eCj0cRtJvJg
2. https://www.youtube.com/watch?v=kz_egMtdnL4&t=3s
3. https://www.youtube.com/watch?v=51DSl8BHUjg
4. https://www.youtube.com/watch?v=YaabRXcm4M4

Prosedur Percobaan
Simaklah video praktikum kromatografi cair kinerja tinggi, diskusikan dalam kelompok bersama
asisten