BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Urea merupakan produk akhir dari metabolisme asam amino yang bersifat racun

sehingga dapat membahayakan tubuh apabila menumpuk di dalam tubuh. Urea tersebut

terbentuk dari proses katabolisme protein yang dapat dipecah menjadi asam amino dan

deaminasi ammonia (Khairi,2005). Analisis konsentrasi urea sangat penting dilakukan

sebagai indeks awal kegagalan fungsi ginjal dalam tubuh (Rahman, 2007).

Kelainan fungsi ginjal adalah kelainan yang sering terjadi pada orang dewasa. Kelainan

fungsi ginjal berdasarkan durasinya dibagi menjadi 2 yaitu gagal ginjal akut dan gagal ginjal

kronik. Gagal ginjal akut (GGA) adalah kemunduran yang cepat dari kemampuan ginjal

dalam membersihkan darah dari bahan-bahan racun, yang menyebabkan penimbunan limbah

metabolik didalam darah, salah satu contohnya adalah urea. Gagal ginjal kronik (GGK) telah

menjadi masalah utama kesehatan di seluruh dunia, karena merupakan salah satu faktor

penyebab terjadinya penyakit jantung dan pembuluh darah yang akan meningkatkan angka

kesakitan dan kematian (Setyaningsih dkk, 2013).

Urea dalam darah atau disebut juga blood urea nitrogen (BUN) memliki kadar normal

5–25 mg/dl. Penetapan kadar urea dalam serum mencerminkan keseimbangan antara

produksi dan ekskresi (Shanmugam dkk, 2010). Pada gangguan ginjal yang parah kadar

blood urea nitrogen (BUN) dan kreatinin akan meningkat (Japaries, 1992). Untuk penderita

gagal ginjal, kadar urea memberikan gambaran tanda paling baik untuk timbulnya urea

toksik dan merupakan gejala yang dapat dideteksi dibandingkan kreatinin (Nasution, 2006).

1
 Metode – metode yang digunakan untuk analisis kadar urea dalam urin antara lain

Potensiometri, kalorimetri dan spektrofotometri (Fatima dan Mishra, 2011). Namun dalam

beberapa penelitian,penggunan metode-metode tersebut seringkali tidak akurat dimana

reagen yang digunakan relatif tidak stabil yang mengakibatkan kehilangan ammonia selama

proses berlangsung (Rho, 1972). Dari ketiga metode ini, metode yang paling sering

digunakan pada penelitian yang dilakukan untuk mendeteksi urea dengan perolehan hasil

yang akurat adalah dengan menggunakan metode kalorimetri yaitu kalorimetri secara

langsung.

Penentuan urea secara langsung memakai metode kalorimetri menggunakan reagen

diasetil monoksim (DAM) yang ditemukan oleh Fearon merupakan dasar dari berbagai

metode penentuan kadar urea dalam cairan-cairan biologis (Wybenga dkk, 1971).

Akan tetapi reaksi antara urea dengan diasetil monoksim (DAM) tidak begitu mudah

dipahami (Rho, 1972). Salah satu kesulitan dalam menggunakan metode DAM adalah pada

sensitivitas blanko dan stabilitas warna yang terbentuk sehingga memungkinkan untuk

memakai reagen tambahan seperti tiosemikarbazida dan logam besi (III) (Beale and

Croft,1961).

Salah satu metode analisis yang dikembangkan saat ini ialah dengan menggunakan

sensor berbasis kertas. Pengembangan sensor kertas ini telah diteliti oleh Martinez dkk.,

(2007) untuk menentukan kadar asam urat dan glukosa dalam urin. Selain itu penelitian

yang melibatkan sensor berbasis kertas telah dilakukan dengan menggunakan sampel seperti

glukosa (Yu dkk., 2011), urin dan air liur (Klasner dkk., 2010) maupun asam urat (Dungchai

dkk.,2009). Keunggulan dari sensor kertas ialah lebih praktis, murah dan sederhana serta

waktu analisis yang relatif singkat.

2
 Penelitian yang telah dilakukan oleh Fahmi (2011) melaporkan bahwa untuk

mendeteksi urea dapat dilakukan dengan menggunakan metode sensor kimia yang mudah,

aman, sensitif, dan spesifik. Pembuatan sensor urea dilakukan dengan immobilisasi reagen

DAM-TSC serta reagen asam fosfat dan asam sulfat ditambah dengan FeCl 3 pada plat silika

gel memakai metode adsorbsi fisika yang diharapkan dapat mengembangkan metode

penentuan urea secara kalorimetri dengan reagen tersebut. Namun metode tersebut masih

sangat mahal dan membutuhkan fasilitas laboratorium yang memadai. Pengukuran tersebut

juga dilakukan pada urea murni, sedangkan dalam sampel urin juga terdapat sekitar 95 % air

dan padatan terlarut di dalamnya seperti kreatinin, asam urat (C5H4N4O3) dan hormon.

Selain itu terdapat juga ion – ion seperti natrium (Na +), kalsium (Ca2+),magnesium

(Mg2+), kalium (K+), klorida (Cl-),oksalat (C2O42-), bikarbonat (HCO3-) serta senyawa lainnya

dalam jumlah kecil, seperti ammonium (NH4+), sulfat (SO42-), fosfat (H2PO4-,HPO42- PO43-)

(Guyton,1996). Adanya ion dan senyawa tersebut di dalam urin akan mempengaruhi proses

analisis ureum, dan hingga saat ini belum pernah dilakukan penelitian terkait pengaruh zat

pengganggu tersebut.

Oleh karena itu, perlu penelitian lebih lanjut untuk mengetahui pengaruh ion atau

senyawa pengganggu terhadap penentuan kadar urea. Beberapa ion pengganggu yang

diketahui antara lain Fosfat, Kalium dan Oksalat. Kadar fosfat dalam tubuh diatur oleh ginjal

yang akan biasanya diekskresikan melalui urin. Jika ginjal mengalami gangguan dan tidak

bisa berfungsi dengan baik, ginjal tidak mungkin dapat membuang sisa fosfat dari dalam

tubuh. Akibatnya, kadar fosfat dalam darah akan meningkat yang mengakibatkan

hiperfosfatemia. Selain fosfat (Ganong, dkk 2008).

3
 Kalium juga merupakan elektrolit yang sangat penting untuk fungsi saraf dan otot,

terutama otot jantung, dan juga berperan sebagai pengatur tekanan darah. Kadar kalium di

dalam tubuh dikendalikan oleh ginjal. Jika kadar kalium berlebihan, ginjal akan membuang

kalium dari dalam tubuh melalui keringat atau melalui urine. Jika kadar kalium dalam darah

kurang dari 2,5 mmol/L, maka kondisi ini dapat digolongkan sebagai hipokalemia berat

yang dapat membahayakan jiwa. Kekurangan kalium bisa disebabkan oleh beberapa hal,

namun faktor yang paling sering menjadi penyebab hilangnya kalium secara berlebihan

adalah penggunaan obat-obatan diuretik yang berfungsi untuk mempercepat pembentukan

urine dan factor lainnya adalah gagal ginjal kronis (Ganong, dkk 2008). Asam oksalat

bersama dengan mineral kalsium dalam tubuh manusia membentuk senyawa yang tak larut

dan tak dapat diserap tubuh berupa kristal seperti halnya jarum-jarum tajam. Kalsium dan

batu oksalat sebagai penyebab sekitar 80 persen penyakit batu ginjal pada orang dewasa.

Berdasarkan uraian di atas, maka peneliti tertarik untuk melakukan penelitian dengan judul

“Pengaruh Ion Fosfat, Kalium dan Oksalat pada Analisis Urea Menggunakan Sensor

Berbasis Kertas”

4
1.2 Rumusan Masalah

Pengembangan beberapa metode untuk menentukan kadar urea dalam urin telah berhasil

dilakukan. Akan tetapi, metode-metode tersebut membutuhkan waktu yang lama dan biaya

yang mahal. Oleh karena itu,telah dikembangkan suatu metode untuk menentukan kadar

urea yaitu metode sensor berbasis kertas. Namun, pengujian tersebut hanya dilakukan

dengan tujuan untuk mengembangkan metode, sementara dalam sampel urin dapat dilakukan

berbagai uji kadar zat atau senyawa kimia yang terkandung didalamnya salah satu contohnya

adalah urea. Selain itu juga, terdapat beberapa ion pengganggu di dalam sampel urin seperti

natrium, kalsium, kalium, okasalat, magnesium, fosfat, ammonia, bikarbonat, klorida, dll.

Oleh karena itu harus dilakukannya suatu uji yang dapat menunjukan adanya ion-ion

pengganggu tersebut.

Berdasarkan pernyataan tersebut maka permasalahan dalam penelitian ini adalah :

1. Bagaimana pengaruh variasi konsentrasi fosfat, kalium dan oksalat pada analisis

urea menggunakan sensor berbasis kertas ?

2. Bagaimana pengaruh variasi konsentrasi dari kombinasi pengganggu fosfat, kalium

dan oksalat pada analisis urea menggunakan sensor berbasis kertas ?

1.3 Tujuan Penelitian

Tujuan dari penelitian ini antara lain sebagai berikut :

1. Mempelajari pengaruh ion Fosfat, Kalium dan Oksalat pada analisis urea

menggunakan sensor berbasis kertas

2. Mempelajari pengaruh variasi konsentrasi ion Fosfat, Kalium dan Oksalat pada

analisis urea menggunakan sensor berbasis kertas.

5
1.4 Manfaat Penenlitian

Adapun manfaat dari penelitian ini adalah sebagai berikut :

1. Memberikan informasi kepada masyarakat tentang pengaruh zat- zat pengganggu

terhadap analisis urea menggunakan sensor berbasis kertas.

2. Sebagai bahan acuan dalam bidang kesehatan terutama untuk uji urea dalam

urin dengan cara yang lebih praktis, murah dan sederhana.

3. Meningkatkan kemampuan mahasiswa dalam melakukan penelitian sesuai dengan

teori yang diperoleh selama perkuliahan.

6
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Urea

Urea merupakan molekul dari amonia yang dibentuk pada proses deaminasi asam amino

dalam hati yang juga dikenal dengan istilah karbamide (Khairi, 2005). Pada dasarnya urea

merupakan limbah yang dihasilkan oleh metabolisme protein. Cairan tubuh kita terdiri dari

sebagian urea. Ketika berada pada level tidak normal mungkin akan menjadi beracun bagi tubuh

kita. Oleh karena itu perlu adanya pengawasan teratur yang digunakan untuk tujuan klinis

(Fatima dan Mishra, 20011).

Urea merupakan molekul kecil yang mudah mendifusi kedalam cairan ekstrasel, tetapi

akhirnya dipekatkan dalam urin dan diekskresikan. Jika keseimbangan nitrogen dalam keadaan

normal, ekskresi urea kira-kira 25 mg per hari (Widman K, 1995). Urea adalah produk akhir

metabolisme nitrogen yang penting pada manusia, yang disintesis dari ammonia, karbon dioksida

dan nitrogen amida aspartat (Murray dkk, 1999). Rumus struktur dari urea adalah sebagai

berikut:

Gambar 1. Struktur Molekul Urea

Dari uraian metabolisme asam amino diketahui bahwa NH 3 dapat dilepaskan dari asam

amino melalui reaksi transaminasi, deaminasi, dan dekarboksilasi. Pada reaksi transaminasi

7
gugus NH₂ yang dilepaskan diterima oleh asam keto, sehingga terbentuk asam amino baru dan

asam keto lain. Sedangkan pada reaksi deaminasi, gugus NH₂ dilepaskan dalam bentuk ammonia

yang kemudian dikeluarkan dari dalam tubuh dalam bentuk urea dalam urine. Beberapa produk

ammonia pada proses katabolisme asam amino digunakan untuk sintesis nitrogen bimolekul

seperti nukleotida. Kelebihan ammonia dirubah menjadi urea untuk proses ekskresi

(Miles,2003).

Urea atau karbamida merupakan suatu senyawa organik dengan rumus kimia (NH 2)2CO.

Molekul urea memiliki dua gugus amina (-NH2) yang digabungkan oleh gugus fungsi karbonil.

Urea pertama kali ditemukan dalam urin pada tahun 1773 oleh kimiawan perancis Hilaire Roulle.

Pada tahun 1828,seorang kimiawan Jerman Friedrich Wohler memperoleh urea dengan

mereaksikan perak tiosianat dengan ammonium klorida dalam sebuah percobaan yang gagal

untuk memperoleh ammonium tiosianat. Urea memiliki peran penting dalam metabolisme

senyawa yang mengandung nitrogen pada hewan mamalia. Urea berbentuk padat, tidak

berwarna, bersifat netral, sangat larut dalam air dan relatif tidak beracun. Urea disintesis didalam

tubuh berbagai organisme sebagai bagian dari siklus urea, yang dapat berasal dari oksidasi asam-

asam amino ataupun ammonia (Shanmugam dkk, 2010).

2.2 Urin dan Gagal Ginjal

2.2.1 Urin

Urin atau air seni adalah cairan sisa yang diekskresikan oleh ginjal yang kemudian akan

dikeluarkan dari dalam tubuh melalui proses urinalisasi. Urinalisasi merupakan suatu metode

analisa untuk mendapatkan bahan – bahan atau zat – zat yang dimungkinkan terkandung dalam

urin dan juga untuk melihat adanya kelainan pada urin. Urin disaring di dalam ginjal, dibawa

8
melalui ureter menuju kandung kemih, akhirnya dibuang keluar tubuh melalui uretra (Confer dan

panciera, 2003). Fungsi utama urin adalah untuk membuang zat sisa seperti racun atau obat-

obatan dari dalam tubuh.

Komposisi zat – zat dalam urin bervariasi tergantung jenis makanan serta air yang diminum.

Urin normal berwarna jernih transparan, sedangkan warna kuning muda pada urin berasal dari

zat warna empedu ( bilirubin dan biliverdin). Kandungan urin terdiri dari sekitar 95% air dan

padatan terlarut di dalamnya seperti urea (CON2H4) atau (NH2)2CO, kreatinin, asam urat

(C5H4N4O3), dan hormon. Selain itu terdapat juga ion : natrium (Na +), kalium (K+), klorida (Cl-),

magnesium (Mg2+), kalsium (Ca2+), oksalat (C2O42-) serta senyawa lainnya dalam jumlah kecil,

seperti ammonium (NH4+), sulfat (SO42-), fosfat (H2PO4-,HPO42-,PO43-) (Guyton, 1996).

Komposisi urin berubah sepanjang proses reabsorbsi ketika molekul yang penting bagi tubuh,

misalnya glukosa diserap kembali kedalam tubuh melalui molekul pembawa (Kus Irianto, 2004).

Terdapat 3 tahap pembentukan urin yaitu :

1. Proses Filtrasi

Filtrasi terjadi pada glomerulus yang disebabkan karena permukaan aferen lebih besar dari

permukaan eferen sehingga terjadi penyerapan darah. Cairan yang tersaring ditampung oleh

simpai bowman yang terdiri dari glukosa, air, natrium, klorida, sulfat, bikarbonat, dan lain – lain

yang akan diteruskan ke tubulus ginjal (Syaifuddin, 2003).

2. Proses Reabsorbsi

Fungsi utama tubulus proksimal adalah reabsorbsi yaitu proses dikembalikannya air bersama

glukosa, asam amino, asam urat, dan protein yang berhasil menembus filter glomerulus ke aliran

darah. Tubulus proksimal juga mengembalikan elektrolit, natrium, klorida dan bikarbonat.

Simpai henle mereabsorbsi air dan natrium.

9
 2.2.2 Gagal Ginjal

Gagal ginjal merupakan kondisi dimana ginjal kehilangan kemampuannya untuk menyaring

cairan dan sisa-sisa makanan. Kelainan fungsi ginjal berdasarkan durasinya dibagi menjadi 2

yaitu gagal ginjal akut dan gagal ginjal kronik. Gagal ginjal akut (GGA) adalah kemunduran

yang cepat dari kemampuan ginjal dalam membersihkan darah dari bahan-bahan racun, yang

menyebabkan penimbunan limbah metabolik didalam darah, salah satu contohnya adalah urea.

Gagal ginjal kronik (GGK) telah menjadi masalah utama kesehatan di seluruh dunia,

karena merupakan salah satu faktor penyebab terjadinya penyakit jantung dan pembuluh darah

yang akan meningkatkan angka kesakitan dan kematian (Setyaningsih dkk, 2013). Pada keadaan

ini kemampuan ginjal untuk mengeluarkan hasil-hasil metabolisme tubuh terganggu sehingga

sisa–sisa metabolisme tersebut terakumulasi dan menimbulkan gejala klinik sebagai sindrom

uremik (peningkatan kadar ureum dan kreatinin darah (Sidabutar dan Suhardjono,1992).

Kegagalan ginjal dikarenakan kerusakan ginjal ditandai dengan gejala adanya protein dalam

urin (proteinuria atau albuminuria), darah dalam urin (hematuria) dan kenaikan tingkat urea atau

kreatinin (sisa produksi metabolisme protein) dalam darah (Reksodiputro dan Prayoga, 2001).

2.3 Fosfat, Kalium dan Oksalat

2.3.1 Fosfat

2.3.2 Kalium (K+)

Kalium merupakan salah satu elektrolit yang berperan penting dalam tubuh. Kalium adalah

ion bermuatan positif dan terdapat di dalam sel. Kalium diabsorpsi di usus halus dan sebanyak

80-90% kalium yang dikonsumsi diekskresi melalui urin, sisanya dikeluarkan melalui feses,

10
keringat dan cairan lambung (Robert, 1988).

Kalium berfungsi dalam pemeliharaan keseimbangan cairan dan elektrolit, keseimbangan

asam basa, transmisi saraf dan relaksasi otot. Kalium juga berperan penting dalam penyampaian

implus-implus saraf ke serat-serat otot dan juga dalam kemampuan otot untuk berkontraksi

(Nasution dan Darwin, 1998). Kadar normal kalium dalam serum/plasma pada orang dewasa

adalah 3.5-5.1 mEq/L dan pada anak-anak adalah 3.4-4.7 mEq/L. Kadar normal kalium dalam

urin pada orang dewasa adalah 25-125 mEq/L/hari dan pada anak-anak adalah 10-60mEq/L/hari.

Penelitian Wulandari (2007) menyatakan bahwa kandungan kalium dalam daun tempuyung

adalah sebesar 8,2 %. Kadar kalium yang tinggi dalam daun tempuyung akan menyingkirkan

kalsium untuk bergabung dengan senyawa karbonat, oksalat atau urat yang merupakan

pembentuk batu ginjal, sehingga endapan batu ginjal dapat larut dan keluar bersama urine.

2.3.3 Oksalat (C2O42-)

Oksalat (C2O42-) merupakan anion dari senyawa asam oksalat (H2C2O4). Asam oksalat dalam

keadaan murni berupa senyawa kristal, larut dalam air (8% pada 10oC) dan larut dalam alkohol.

Asam oksalat membentuk garam netral dengan logam alkali (NaK),yang larut dalam air (5-25%),

sementara itu dengan logam dari alkali tanah, termasuk Mg atau dengan logam berat,

mempunyai kelarutan yang sangat kecil dalam air.

Gambar 2. Struktur asam oksalat

Pada umumnya oksalat dapat membentuk kristal dengan kalsium. Oksalat dalam air kemih

berasal dari dalam tubuh (endogen), dan juga berasal dari makanan yang kita makan serta hasil

11
metabolisme vitamin C. Membatasi konsumsi masukan kalsium berarti mengurangi makanan

yang mengandung kalsium tinggi (Cahanar dan Suhanda, 2006). Banyak ion logam yang

membentuk endapan tak larut dengan asam oksalat, misalnya kalsium oksalat (CaOOC-COOCa),

yaitu penyusun utama jenis batu ginjal yang sering ditemukan. Terjadinya kalsium oksalat

(CaC2O4) dalam batu ginjal atau kandung kemih dapat menyebabkan gagal ginjal.

Hal ini terjadi karena tidak adanya keseimbangan dalam kerja ginjal, sehingga garam-garam

pada ginjal tidak terangkut keluar bersama urin dan akhirnya mengendap dan mengumpul

menjadi kristal kapur. Endapan inilah yang menjadi batu ginjal (Jaka Sulaksana, dkk, 2004).

Tubuh yang kekurangan cairan dapat menyebabkan terjadinya batu ginjal karena urin

terlalu pekat sehingga terjadi kekeruhan dalam urin. Akibatnya terjadi penyumbatan pada saluran

dari ginjal menuju kandung kemih. Batu ginjal terbentuk dari bahan-bahan kimia seperti kalsium,

asam urat, fosfat, dan bahan kimia lain (Soenanto dan Sri Kuncoro, 2005).

2.4 Sensor Berbasis Kertas

Pengembangan sensor berbasis kertas didasarkan pada biayanya yang murah, mudah

didapat dan praktis untuk digunakan. Kertas dapat digunakan sebagai media reaksi kolorimetrik.

Kertas yang biasanya digunakan sebagai media utama reaksi ini adalah kertas saring Whatman.

Kertas saring Whatman banyak digunakan sebagai penyaring dalam pemisahan campuran zat

tertentu. Parameter penting dalam kertas saring ini adalah kekuatan serap, retensi partikel dan

kecepatan menyaring. Kecepatan menyaring berhubungan dengan seberapa cepat kertas menahan

retensi partikel sedangkan kekuatan serap berhubungan dengan ukuran porositas, dimana hal ini

akan mempengaruhi imobilisasi sampel. Komposisi utama kertas adalah selulosa.

12
 NO2


O H

O N O C N
C NH
O
 HC N
O2N H
CH3

Gambar 4. Struktur Selulosa ( Cahanar, 2006)

Dalam pengembangannya sebagai sensor, kertas digunakan sebagai sumbu fluida tempat

berlangsungnya reaksi antara analit dan reagen yang akan memberikan signal khusus untuk

kepentingan analisis. Pengembangan sensor kertas ini mulai diteliti oleh Martinez dkk., (2007)

untuk menentukan kadar asam urat dan glukosa dalam urin. Martinez dkk., (2007),

menggunakan teknik litografi dalam membuat saluran mikrofluida menggunakan Photoresist

Hydrophobic dimana akan dihasilkan dinding yang bersifat hidrofobik sehinga cairan terkurung

di dalamnya dan mengalir melalui aliran kapiler menuju zona pendeteksian protein dan glukosa.

Penelitian Khan dkk., (2010) melaporkan bahwa kertas dapat digunakan sebagai pendeteksi tipe

golongan darah (ABO).

Beberapa aplikasi sensor kertas yang telah berhasil dilakukan antara lain :

a. Diagnosa kesehatan

Dalam bidang kesehatan, kertas sangat menarik dan potensial dijadikan perangkat lab on a

chip sehingga mudah dibawa untuk keperluan deteksi serta diagnosis. Beberapa penelitian yang

melibatkan sensor berbasis kertas telah dilakukan dengan menggunakan sampel seperti glukosa

(Yu dkk., 2011), urin dan air liur (Klasner dkk.,2010) maupun asam urat (Dungchai dkk., 2009).

b. Pengontrol kualitas makanan

Sensor kertas digunakan dalam mengontrol kulaitas makanan karena lebih mudah dan praktis

13
digunakan di lapangan apabila dibandingkan dengan instrumen di laboratorium. Penelitian

berbasis kertas telah dilakukan Hossain dkk., (2009) untuk mendeteksi pestisida di dalam

makanan dan minuman.

c. Pemantauan lingkungan

Dalam pemantauan lingkungan, deteksi dari logam-logam berat maupun polutan lainnya

sangat diperlukan. Telah dilakukan untuk penentuan kadar nitrat, nitrit (Jayawardane dkk.,2014)

dan amoniak (Jayawardane dkk., 2015) dalam sampel air.

14
 BAB III
METODE PENELITIAN

3.1 Waktu dan Lokasi Penelitian

Penelitian ini akan dilaksanakan pada bulan Januari - April 2019 di Laboratorium

Kimia, Fakultas Sains dan Teknik Universitas Nusa Cendana.

3.2 Alat dan Bahan

Alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi peralatan gelas, pipet mikro, botol

semprot, handphone samsung (kualitas kamera 8 megapiksel) dan pelubang kertas.

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah urea sintetik, Diasetil Monoxim

(DAM), Tiosemikarbazide (TSC), Asam Sulfat (H2SO4), Fosfat, Kalium, Oksalat, kertas

saring, lakban hitam, dan aquades.

3.3 Skema Tahapan Penelitian

Pembuatan sensor

Pembuatan Larutan induk kalsium,

kalium dan oksalat

Pengaruh pengganggu (fosfat, kalium

dan oksalat) terhadap sensor berbasis
kertas pada penentuan kadar ureum

Validasi Metode

Analisis Data

15
3.4 Prosedur Kerja

3.4.1 Pembuatan Sensor

Sensor yang akan digunakan untuk menentukan kadar urea dibuat dari kertas saring

berlapis tunggal (Kertas saring Whatman 42) yang dipotong dengan diameter 0,6 cm

menggunakan pelubang kertas sebagai zona reaksi, kemudian diimobilasi dengan (DAM-

TSC) – Asam sulfat.

-------Kertas Saring Whatman 42

Dipotong dengan diameter 0,6 cm

Kertas terimobilisasi DAM-TSC dan H2SO4

3.4.2 Pembuatan larutan induk fosfat, kalium dan oksalat

Larutan induk dibuat dengan konsentrasi masing – masing pengganggu (fosfat, kalium

dan oksalat) sebesar 200 ppm. Larutan induk yang sudah tersedia kemudian diencerkan

menjadi beberapa konsentrasi dengan interval yang sama untuk masing – masing zat

pengganggu.

3.4.3 Karakterisasi sensor dan pengukuran sampel urea

Sensor berbasis kertas yang sudah dibuat dicobakan pada larutan standar urea dengan

konsentrasi 20, 40, 60, 80, 100, 120 dan 140 ppm. Intensitas warna yang tampak kemudian

difoto menggunakan HP kemudian dianalisis menggunakan aplikasi Microsoft Visual

16
c#2010 Express dan dibuat kurva standar dengan memplotkan nilai intensitas warna dengan

konsentrasi urea.

3.4.4 Pengaruh zat pengganggu terhadap sensor berbasis kertas pada penentuan

kadar urea

Masing – masing senyawa fosfat dengan konsentrasi 15, 20, 25, 30 dan 35 ppm, kalium

dengan konsentrasi 20, 25, 30, 35 dan 40 ppm, oksalat dengan 25, 30, 35, 40 dan 45

konsentrasi ditambahkan pada urea dengan kadar optimalnya, kemudian diukur intensitas

warnanya menggunakan sensor berbasis kertas. Intensitas warna yang tampak difoto

menggunakan HP lalu dianalisis menggunakan Microsoft Visual c# 2010 Express dan dibuat

kurva standarnya.

Tabel 1. Rancangan Acak Lengkap Variasi Konsentrasi Zat Pengganggu Ion Kalsium

Konsentrasi Ula
(ppm) ngan
U1 U2 U3 U4 U5
M1 M1U1 M1U2 M1U3 M1U4 M1U5
M2 M2U1 M2U2 M2U3 M2U4 M2U5
M3 M3U1 M3U2 M3U3 M3U4 M3U5
M4 M4U1 M4U2 M4U3 M4U4 M4U5
M5 M5U1 M5U2 M5U3 M5U4 M5U5

Dibuat perlakuan yang sama untuk kalium dan oksalat tetapi dengan variasi konsentrasi
yang berbeda.

Tabel 2. Rancangan Acak Lengkap Kombinasi Urea dan Pengganggu

17
 Konsentrasi Urea Pengganggu
(M)
A B C
K KA1 KB1 KC1
K KA2 KB2 KC2
K KA3 KB3 KC3
K KA4 KB4 KC4
K KA5 KB5 KC5
Keterangan : A = Fosfat + Kalium ; B = Kalium + Oksalat ; C = Fosfat + Oksalat

3.4.5 Validasi metode

Validasi metode analisis urea menggunakan sensor berbasis kertas dilakukan

dengan cara menentukan nilai presisi, akurasi, perolehan kembali dan limit deteksi.

- Uji presisi

Masing-masing ion fosfat dengan konsentrasi 15, 20, 25, 30 dan 35 ppm, kalium

dengan konsentrasi 20, 25, 30, 35 dan 40 ppm, oksalat dengan 25, 30, 35, 40 dan 45

konsentrasi ditambahkan pada urea dengan kadar 114 ppm.

Setelah itu dilakukan pengukuran untuk mengetahui kedekatan antar hasil

pengukuran tiap individual dan dibandingkan dengan nilai rata-rata hasil pengukuran.

Pengukuran dilakukan sebanyak 5 kali pengulangan untuk membandingkan kedekatan

nilai presisi tiap pengulangan.

Untuk memperoleh nilai presisi digunakan persamaan :

S
% RSD= × 100 %
x́

Dengan :
S : Standar Deviasi

18
 x́: Mean (rata-rata)
RSD : Relative Standart Deviation

- Uji akurasi
Masing-masing fosfat dengan konsentrasi 15, 20, 25, 30 dan 35 ppm, kalium

dengan konsentrasi 20, 25, 30, 35 dan 40 ppm, oksalat dengan 25, 30, 35, 40 dan 45

konsentrasi ditambahkan pada ureum dengan kadar 114 ppm.

Intensitas warna yang terjadi difoto menggunakan HP kemudian dianalisis

menggunkan aplikasi Microsoft Visual c# 2010 Express dan ditentukan kurva

standarnya. Dari kurva yang diperoleh diambil salah satu titik untuk diukur kemudian

dibandingkan dengan nilai sebenarnya pada pengukuran standar.

Nilai akurasi ditentukan dengan persamaan :

Ct
% Error=100 %− x 100 %
Cs

Dengan : Ct = konsentrasi hasil pengukuran

Cs = konsentrasi sebenarnya Perolehan kembali

- Perolehan kembali
Perolehan kembali ditentukan dari kurva kalibrasi hasil pengukuran yang dperoleh kemudian
ditentukan % R dengan menggunakan persamaan:

( C s−C u )
% Perolehan Kembali = ×100%
Ca

Dengan :
Cs : konsentrasi hasil pengukuran saat di spike

19
 Cu : konsentrasi sampel murni
Ca : konsentrasi ureum yang ditambahkan

- Limit deteksi
Limit deteksi ditentukan dengan membandingkan kurva standar pada pengukuran

urea murni dengan kurva standar pengukuran konsentrasi urea yang telah dicampur

variasi konsentrasi ion-ion pengganggu.

Penentuan limit deteksi dapat dilakukan dengan menggunakan persamaan :

( 3 X Sb )
Q=
Sl
Dengan:
Q : batas deteksi
Sb: Sy/x
Sb : simpangan baku blanko
Sl : Slope

DAFTAR PUSTAKA

Beale, R, N., Croft, D., 1961. A sensitive method for the colorimetric determination of urea. J.

20
 GUn. Pathol. 14, 418.

Brahmana, T., Lubis, H., 2013. Serum Blood Urea Nitrogen (BUN) sebagai Penanda
Independen Kematian di Rumah Sakit pada Penderita Infark Miokard Akut ST Elevasi
tanpa Reperfusi Dini, The Journal of Medical School, Fakultas Kedokteran, Universitas
Sumatera Utara, Medan.

Dungchai, W., Chailapakul, O., Henry, C.s., 2011. A Low-Cost, Simple, and Rapid Fabrication
Method for Paper-Based Microfluidics Using Wax Screen-Printing, Analytical
Chemistry, 136, 77-82.

Eggenstein, C., Borchdat, M., Diekmann, C., Grunding, B., Dumschat, C., Camman, K., Knoll,
M., & Spener, F. 1999. A Disposable Biosensor for Urea Determination in Blood Based
on an Ammonium-Sensitive Transduce. Biosensors & Bioelectronics 14: 33-41.

Fahmi, M., 2015. Performansi Analitik Sensor Urea Terimobilisasi Reagen Diasetil
Monoksim (DAM) dan Tiosemikarbazida (TSC) secara Adsorpsi pada Plat Silika Gel,
Skripsi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik
Ibrahim, Malang.

Fatima, I., Mishra, S., 2011. Development of Potentiometric Urea Biosensor For Clinical
Purpose, Indo Global Journal of Pharmaceutical Sciences, ISSN 2249 – 1023, India.

Guyton, A.C. 1996. Teksbook of Medical Physiology, philadelpia. Elsevier Saunders.

Johanes, R., Purwanto, S., Kaligis, M., 2010. Kadar Klorida Serum pada Latihan Fisik
Intensitas
Sedang Mahasiswa Fakultas Kedokteran Universitas Sam Ratulangi, Jurnal MIPA,
Fakultas Kedokteran Universitas Sam Ratulangi, Manado.

Loho, I., Rambert, G., Wowor, M., 2016. Gambaran kadar ureum pada pasien penyakit ginjal
kronik stadium 5 non dialisis, Jurnal e-Biomedik (eBm), Vol 4 No. 2

Khairi,. 2005, Perbandingan Metode Potensiometri Menggunakan Biosensor Urea Dengan

Metode Spektrofotometri Untuk Penentuan Urea. Jurnal Sains Kimia. Vol 9 No.2, 68-72.

Khan, M.s., Thouas, G., Shen, W., Whyte, G., Garnier, G., 2010. Paper diagnostic for
Instantaneous Blood Typing, Analytical Chemistry, 82, 4158-4164.

Klasner, S.A., Price, A.K., Hoeman, K.W., Wilson, R.S., Bell, K.J., Cullbertson, C.T., 2010.
Paper-Based Microfluidic Devices for Analysis of Clinically Relevant Analyst Present in
Urine and Saliva, Analytical Chemistry , 397, 1821-1829.

Martinez, A.W., Phillips, S.T., Butte, M.J., Whitesides, G.M., 2007. Patterned Paper As a
Platform for Inexpensive, Low Volume, Portable Bioassays, Angewandte Chemie

21
 International Edition 46, 1318–1320.

Rahmatullah, M., Boyde, T.R.C., 1980. Improvements In The Determination Of Urea Using
Diacetyl Monoxime; Method With And Without Deproteinasation, Clinical Chimica Acta,
107: 3-9.

Rho, J, H., 1971. Direct Flourometric Determination Of Urea In Urine. Clinical Chemistry. Vol.
18. No. 5.

Rupilu, R., 2015. Pengembangan Sensor Berbasis Kertas untuk Penentuan Kadar Kreatinin,
Skripsi, Fakultas Sains dan Teknik, Universitas Nusa Cendana, Kupang.

Setyaningsih, A., Puspita, D., Rosyidi, M., 2013. Perbedaan Kadar Ureum dan Kreatinin pada
Klien yang Menjalani Hemodialisa dengan Hollow Fiber Baru dan Hollow Fiber Re
Use di RSUD Ungaran, Jurnal Keperawatan Medikal Bedah . Vol 1 No. 1, 15-24.

Shanmugam, S., Kumar., Sathish, T., Selvam., Panneer, K., 2010. Laboratory Handbook On
Biochemistry. New Delhi: PHI Learning Private Limited.

Thenamijaya, Maggy., 1995. Dasar – Dasar Biokimia, Erlangga, Jakarta.

Widmann, F.K., 1995. Tinjauan klinis atas hasil pemeriksaan laboratorium. Ed. 9. Alih bahasa
Siti Boedina Kresno; Ganda Soebrata, J. Latu. Jakarta: EGC.

Yaswir Rismawati dan Ferawati Ira., 2012. Fisiologi dan Gangguan Keseimbangan Natrium,
Kalium dan Klorida serta Pemeriksaan Laboratorium, Jurnal Kesehatan Andalas, Vol 1
No. 2

Yu, J.H., Ge, L., Huang, J.D., Wang, S.M., Ge, S.G., 2011. Microfluidic Paper-Based
Chemiluninescence Biosensor for Simultaneous Determination of Glucosa and Uric
Acid, Lab on a chip, 11, 1286-129.

22