Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

PENELITIAN ASLI
diterbitkan: 11 April 2018
doi: 10.3389/fmicb.2018.00708

Keanekaragaman Bacillus thuringiensis

Strain Dari Qatar seperti yang Ditunjukkan
oleh Morfologi Kristal, -Endotoksin dan
Menangis Konten Gen
Kavita Nair, Roda Al-Thani, Dhabia Al-Thani, Fatima Al-Yafei, Talaat Ahmed dan
Samir Jaoua*

Departemen Ilmu Biologi dan Lingkungan, Sekolah Tinggi Seni dan Sains, Universitas Qatar, Doha, Qatar

Bacillus thuringiensis (Formulasi insektisida berbasis Bt) telah diakui sebagai salah satu
metode pengendalian hama serangga yang paling sukses, aman bagi lingkungan dan
berkelanjutan. Tim peneliti di seluruh dunia sedang mencari keanekaragaman Bt yang
memberikan lebih banyak pilihan bio-insektisida dan alternatif untuk mengatasi
resistensi serangga. Faktanya, ada banyak ekologi yang belum dijelajahi yang dapat
menampung strain Bt baru. Studi ini merupakan inisiatif pertama untuk mengeksplorasi
Diedit oleh:
keragaman strain Bt di Qatar. Koleksi 700 isolat Bt dibangun. Pemindaian mikroskop
Marcus A. Horn, elektron kristal Bt menunjukkan bentuk kristal yang berbeda, dengan kelimpahan kristal
Universitas Leibniz Hanover,
sferis yang tinggi dibandingkan dengan kristal bipiramidal. Di antara kristal bulat, empat
Jerman
morfologi yang berbeda diamati. Kandungan -endotoksin kristal paraspora dari masing-
Diperiksa oleh:
M.Oves, masing isolat Bt mengungkapkan bahwa terdapat 16 profil protein yang berbeda di
Universitas Raja Abdulaziz, Arab Saudi antara isolat koleksi. Di sisi lain, analisis pola plasmid menunjukkan tujuh profil plasmid
Beatrix Stessl,
Veterinärmedizinische Universitt
yang berbeda. Aktivitas insektisida mereka diprediksi dengan menjelajahi gen pengkode
Wien, Austria -endotoksin dan melakukan bioassay insektisida kualitatif. 19 isolat penghasil kristal
* Korespondensi: bulat halus telah diidentifikasi yang dapat menjadi kandidat potensial untuk produksi
Samir Jaoua
endotoksin yang menargetkan serangga Dipteran. Kelompok lain yang terdiri dari 259
samirjaoua@qu.edu.qa
isolat yang menghasilkan kristal bipiramidal dan kuboid dapat menargetkan serangga
Bagian khusus: Lepidopteran dan Coleopteran. Sisanya 422 isolat memiliki profil baru. Kesimpulannya,
Artikel ini dikirimkan ke
ekologi tanah Qatar menyediakan koleksi dan keragaman isolat Bt yang baik.
Mikrobiologi Terestrial,
bagian dari jurnal
Frontiers in Microbiology
Kata kunci: Bacillus thuringiensis, kristal, profil -endotoksin, menangis gen, plasmid
Diterima: 15 Desember 2017
Diterima: 27 Maret 2018
Diterbitkan: 11 April 2018
PENGANTAR
Kutipan:
Nair K, Al-Thani R, Al-Thani D, Al- Bacillus thuringiensis (Bt) adalah bakteri entomopatogen, berbentuk batang, Gram positif, pembentuk spora dan
Yafei F, Ahmed T dan Jaoua S aerobik yang biasanya ditemukan di tanah, debu biji-bijian, serangga mati dan air (Lambert dan Peferoen, 1992).
(2018) Keanekaragaman Strain
Selama tahap sporulasi, mereka menghasilkan kristal protein insektisida paraspora atau - endotoksin (Jouzani
Bacillus thuringiensis Dari Qatar sebagai
dkk., 2008a,b). Bt dianggap sebagai alternatif bioinsektisida paling sukses yang tersedia bagi manusia saat ini,
Ditunjukkan oleh Morfologi Kristal,
-Endotoksin dan Konten Gen Menangis.
karena toksisitasnya terhadap berbagai hama serangga seperti Dipteran, Lepidopteran dan Coleopteran (Federici
Depan. Mikrobiol. 9:708. dkk., 2006; Lacey dkk., 2015). Berdasarkan serotipe dan fitur filogenetiknya, Bt diklasifikasikan ke dalam
doi: 10.3389/fmicb.2018.00708 subspesies; yang selanjutnya diklasifikasikan ke dalam serotipe dan

Perbatasan dalam Mikrobiologi | www.frontiersin.org 1 April 2018 | Jilid 9 | Pasal 708

Nair dkk.
strain (Seifinejad et al., 2008). Beberapa subspesies yang
dipelajari dengan baik termasuk Btisraelensis dan Bt kurstaki
yang saat ini digunakan sebagai sumber produksi protein
endotoksin pada tingkat komersial (Dambach dkk., 2014; Elleuch
dkk., 2015; Jeong dkk., 2017; Zhang dkk., 2017). BtIsrael (Bti)
menghasilkan kombinasi endotoksin (Cry) dan protein hemolitik
(Cyt) selama tahap sporulasi dan mengkristalkannya dalam
bentuk bola. Di sisi lain, Btkurstaki (Btk) menghasilkan kombinasi
endotoksin lain (Cry) dan mengkristalkannya menjadi bentuk
bipiramidal dan bentuk kuboid (Adang dkk., 2014). Endotoksin ini
bersifat spesifik sasaran, misalnya kristal bulat Bti beracun bagi
serangga Dipteran sedangkan kristal bipiramidal dan kuboid Btk
beracun bagi serangga Lepidopteran dan Coleopteran (Jain dkk.,
2017). Bentuk kristal paraspora merupakan indikasi kandungan
protein Cry dan karenanya digunakan sebagai kriteria pertama
klasifikasi isolat Bt (López-Meza dan Ibarra, 1996; Ben-Dov dkk.,
1997; Mahalakshmi dkk., 2012). Sesuai database endotoksin yang
diketahui dikelola olehCrickmore dkk. (2016), saat ini ada 74
keluarga yang diketahui menangis gen memiliki 770 berbeda
menangis gen dan tiga cyt keluarga memiliki 38 cyt gen (http://
www.lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/ diakses pada
8 Oktober 2017). Selain protein Cry dan Cyt, Bt juga
menghasilkan protein insektisida lain yang disebut Vip (protein
insektisida vegetatif); yang seperti namanya, diekspresikan
selama tahap vegetatif (Abdelkefi-Mesrati dkk., 2011; Abdelmalek
dkk., 2016) dan protein bermanfaat lainnya seperti Bakteriosin (
Jung dkk., 2008; Kamouneh dkk., 2011). Pemahaman tentang
isolat Bt dengan gen insektisida spesifik, menjadi lebih kompleks,
ketika seseorang menganggap bahwa gen ini sebagian besar
diekspresikan pada plasmid yang dapat ditransfer satu sama lain;
seluruhnya atau sebagian (Rolle et al., 2005). Oleh karena itu,
setiap ekologi mungkin memiliki isolat Bt dengan kombinasi unik
gen insektisida. Tim peneliti di seluruh dunia secara konstan
menyaring ekologi yang berbeda untuk menemukan isolat Bt
baru tersebut (Campanini dkk., 2012; Soares-da-Silva dkk., 2015;
El-Kersh et al., 2016).
Mengetahui bahwa program skrining Bt belum pernah dilakukan
sebelumnya di Qatar, ini adalah studi pertama di negara di mana 700
isolat Bt dikumpulkan dari tanah Qatar untuk mempelajari
keragaman dan karakteristik strain Bt Qatar. Untuk koleksi isolat yang
begitu besar, kriteria kategorisasi pertama adalah bentuk kristal dari
isolat. Pada akhirnya tujuan kami adalah untuk mempelajari
endotoksin yang dihasilkan oleh isolat.
Teknik yang umum digunakan, untuk mengelompokkan dan
memilih perwakilan yang benar, termasuk perbandingan pola
plasmid, amplifikasi PCR (polymerase chain reaction) dari gen
insektisida yang diketahui, analisis protein, Pulsed-Field Gel
Electrophoresis (PFGE), dan Ribotyping. (Saadaoui dkk., 2010; Sellami
dkk., 2013; Elleuch et al., 2015). Kemajuan terbaru dalam teknologi
telah melihat penggunaan sekuensing generasi berikutnya dan studi
"omics" seperti Genomics, Transcriptomik dan
Singkatan: Bt, Bacillus thuringiensis; Bti, Bacillus thuringiensis israelensis; Btk,
Bacillus thuringiensis kurstaki; PCR, reaksi berantai polimerase; PFGE,
elektroforesis gel bidang berdenyut; Plas, pola plasmid; Prot, pola protein; SDS-
PAGE, elektroforesis gel natrium dodesil sulfat-poliakrilamida.
Perbatasan dalam Mikrobiologi | www.frontiersin.org
Penjelajahan Qatar Bacillus thuringiensis
Proteomik. (Dong dkk., 2016). Meskipun semua teknik memiliki
kelebihan dan keterbatasan, selalu ada kebutuhan untuk
menggunakan urutan yang benar dari teknik ini untuk
menghindari kehilangan isolat unik; terutama ketika datang ke
koleksi besar isolat.
BAHAN DAN METODE
Pengumpulan, Isolasi, dan Pelestarian
Sampel Bt Qatar
Tujuh ratus isolat Bt dikumpulkan dari sampel tanah di Qatar. Isolat
pembentuk spora diperoleh dengan metode seleksi asetat dari
Travers dkk. (1987)dengan sedikit modifikasi. Satu gram masing-
masing sampel tanah disuspensikan dalam 10 ml kaldu Luria Bertini
(LB), disangga dengan 250mM Sodium Acetate (pH 6,8). Campuran
tersebut kemudian diinkubasi dalam shaker incubator pada suhu 30◦C
selama 4 jam. Setelah inkubasi, sampel dipanaskan pada suhu 80◦C
selama 15 menit. Dari masing-masing sampel ini, 100μl disebarkan
pada pelat agar T3 dan diinkubasi selama 72 jam pada suhu 30◦C.
Setiap isolat murni menjadi sasaran pengamatan mikroskopis untuk
mengkonfirmasi keberadaan spora dan kristal. Setiap kristal
paraspora yang membentuk isolat Bt diberi nama QBT diikuti nomor
serinya. Isolat Bt kemudian ditumbuhkan pada media sporulasi T3 (
Travers dkk., 1987) selama 96 jam dan campuran spora-kristal
disimpan dalam 30% gliserol pada 80◦C.
Identifikasi Morfologi Kristal
Setiap sampel ditumbuhkan pada pelat agar T3 dan diinkubasi pada suhu
30◦C selama 96 jam. Setelah sporulasi, campuran kristal spora diperiksa di
bawah mikroskop cahaya untuk mengidentifikasi bentuk kristal dan
mengelompokkan koleksi berdasarkan bentuk kristalnya: Bipyramidal,
Cuboidal dan Spherical. Kristal kemudian dipelajari secara rinci di bawah
FEI Nova NanoSem 450 Scanning Electron Microscope (SEM), USA untuk
mengidentifikasi rincian intrinsik dan perbedaan antara kristal dari isolat
yang berbeda.Bacillus thuringiensis israelensis (Bti) dan Bacillus
thuringiensis kurstaki (Btk) digunakan sebagai strain referensi.
Ribotyping Berdasarkan Gen 16s rRNA
DNA plasmid isolat Bt yang mewakili 4 kelas membentuk kristal
sferis yang berbeda digunakan sebagai template untuk
amplifikasi gen 16s rRNA menggunakan set primer Rib73 (5kan
-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3kan) dan Rib74 (5kan
-AGGAGGTGATCCAGCCGCA-3kan). Amplifikasi dilakukan
menggunakan polymerase chain reaction (PCR) di sumur Applied
Biosystems 96 Veriti Thermal Cycler dari Thermo Fisher, USA.
Produk yang diperkuat dijalankan pada gel agarosa 1,2%. Pita
yang diharapkan (1,5 kb) dimurnikan gel menggunakan kit
ekstraksi gel QIAquick dari Qiagen dengan mengikuti instruksi
manual. Produk yang telah dimurnikan diurutkan dengan
sekuensing Sangers menggunakan 3500 Series Genetic Analyzer
oleh Thermo Fisher Scientific, USA. Urutan DNA ribosom 16s
diserahkan ke database NCBI (National Center for Biotechnology
Information). Urutan yang diperoleh dibandingkan dengan
urutan yang dipublikasikan pada database NCBI.
2 April 2018 | Jilid 9 | Pasal 708
Nair dkk.
Pemurnian Protein Kristal
Setelah sporulasi lengkap, kultur T3 dengan campuran kristal spora
masing-masing isolat disentrifugasi dan pelet dicuci tiga kali dengan
1NNaCl. Pelet kemudian dicuci 3x dengan aquades. Pelet kristal spora
disuspensikan kembali dalam 50 mM NaOH dan diinkubasi pada suhu
kamar selama 1 jam untuk melarutkan protein kristal.
Mempelajari Pola Protein oleh SDS-PAGE
Protein kristal yang telah dimurnikan digabungkan dengan buffer
didih 2x (mengandung 0,1% -mercaptoethanol, 1% SDS, 0,025%
Bromophenol blue dan 10% gliserol) dengan perbandingan 2:1.
Sampel kemudian direbus selama 5 menit bersama dengan
penanda protein rentang luas GelPilot. Sampel dimuat pada gel
SDS-PAGE dengan gel pemisah 10% dan gel susun 3%.
Elektroforesis dijalankan pada 100 V selama 2 jam. Gel diwarnai
dengan larutan pewarnaan yang mengandung 0,025%
Coomassie Brilliant Blue R250. Destaining dilakukan semalaman
dengan larutan yang mengandung Etanol, Asam Asetat Glasial
dan Air dengan perbandingan masing-masing 5:7:88.
Isolasi DNA Plasmid dan Profil Plasmid
DNA plasmid total diisolasi dengan metode lisis basa yang
dikombinasikan dengan perlakuan lisozim dan dimurnikan
menggunakan presipitasi alkohol sesuai Sambrook dkk. (1989)dengan
sedikit modifikasi. Profil plasmid diperoleh dengan menjalankan gel
agarosa 1% dengan 0,5μg/ml Etidium bromida. Gel dimuat dengan 40
μl setiap sampel, dan dijalankan pada 10 V semalaman dalam buffer
tangki TAE 1%. Pola plasmid dari Bti dan Btk digunakan sebagai
referensi.
Investigasi Aktivitas Hemolitik
Pelat agar Nutrisi Darah disiapkan dengan menambahkan 5ml
darah domba segar ke media agar Nutrisi 100ml yang diautoklaf.
Pelat dibagi menjadi kisi-kisi dan masing-masing isolat diinokulasi
ke piring agar Darah menggunakan tusuk gigi steril. Plat
kemudian diinkubasi pada suhu 30◦C semalam. Zona klirens di
sekitar koloni masing-masing isolat diperiksa dan hasilnya
diinterpretasikan sesuai.
Amplifikasi PCR dari Gen Insektisida
DNA plasmid digunakan sebagai template untuk amplifikasi PCR gen
yang mengkode protein Cry dan Cyt yang bersifat insektisida
terhadap serangga Dipteran, Lepidopteran dan Coleopteran (Tabel 1
). Amplifikasi PCR dilakukan sesuaiJaoua dkk. (1996)menggunakan
Applied Biosystems 96 sumur Veriti Thermal Cycler dari Thermo
Fisher. Dua kelompok primer digunakan untuk amplifikasi. Kelompok
pertama terdiri dari gen spesifik Dipteran termasukcry4A/4B, cry11,
cry10, cyt1A, cyt1C, cyt2A, p19, danhal.20 Keduakelompok terdiri dari
gen spesifik Lepidopteran dan Coleopteran termasuk menangis1A,
menangis1IA, menangis1B, menangis1D, vip3a, danmenangis2.
Perbatasan dalam Mikrobiologi | www.frontiersin.org
Penjelajahan Qatar Bacillus thuringiensis
Persiapan Protein untuk Bioassay
Insektisida
Koloni tunggal dari pelat agar LB yang diinkubasi 24 jam
disuspensikan kembali dalam kaldu LB 50ml dalam labu 250ml dan
diinkubasi pada suhu 30◦C dalam inkubator shaker selama 24 jam. OD
kultur diperiksa setelah 24 jam dan 50ml kaldu T3 diinokulasi dengan
pra-kultur ini sehingga OD awal semua isolat adalah 0,1. Kultur kaldu
T3 diinkubasi pada suhu 30◦C dalam inkubator pengocok selama 96
jam, memastikan sporulasi lengkap. Kaldu disentrifugasi pada 10.000
rpm selama 10 menit dan pelet disuspensikan kembali dalam 10 ml
air suling. Campuran kristal spora kemudian diencerkan 5 kali dan
digunakan sebagai larutan uji untuk bioassay.
Bioassay Kualitatif Aktivitas Insektisida
Larva instar ketiga dan keempat dari Kompleks Culex pipiens
digunakan untuk bioassay. Untuk setiap pengujian, lima larva
dipindahkan ke larutan uji. Dan diinkubasi semalaman pada suhu
kamar. Semua 19 Bti seperti isolat dan perwakilan dari kelas lain
dengan kristal bola diuji untuk aktivitas insektisida. Jumlah larva
yang bertahan dihitung untuk setiap sampel isolat Bt
-endotoksin.
HASIL
Karakterisasi Isolat Bt Berdasarkan
Morfologi Kristal dan Filogeni
Pengamatan bentuk kristal dari 700 isolat yang dilakukan dengan
mikroskop cahaya memungkinkan koleksi diklasifikasikan
menjadi dua kelas utama.:441 isolat yang menghasilkan kristal
sferis dan 259 isolat yang menghasilkan kristal bipiramidal dan
kuboid. Kristal diamati dengan SEM untuk membuktikan
perbedaan lebih lanjut antara bentuk kristal yang sama dari
masing-masing kelas. Hasil penelitian menunjukkan bahwa
kristal bipiramidal dan kuboid menyerupai kristal standar Bt .
referensikurstaki HD1. Namun, kristal bola menunjukkan empat
bentuk yang berbeda ketika dipelajari pada perbesaran SEM yang
lebih tinggi. Faktanya, di antara koleksi 441 isolat penghasil
kristal sferis, empat kelompok diidentifikasi: sferis halus (seperti
referensi Bti), sferis dengan permukaan bergelombang, bentuk
balon sferis tetapi kempes, sferis dengan satu sisi cekung dan
bentuk ujung runcing (Gambar 1).
DNA plasmid dari isolat Bt yang mewakili 4 kelas yang
membentuk kristal sferis yang berbeda digunakan untuk
amplifikasi DNA ribosom 16s menggunakan primer Rib73 dan
Rib74. Produk PCR yang diperoleh dimurnikan dari gel
menggunakan kit ekstraksi gel QIAquick, mengikuti petunjuk
manual. Produk PCR yang telah dimurnikan kemudian diurutkan
dengan Sangers sequencing. Urutan diserahkan ke NCBI
GeneBank untuk 16s rRNA dan nomor aksesi yang sama
diperoleh sebagai MG995012, MG995013, MG995014, MG995015.
NSdalam silikon analisis sekuens ini menunjukkan bahwa mereka
memiliki kemiripan yang sangat tinggi (hingga 99%) dengan
sekuens gen rRNA Bt 16s yang diterbitkan dalam database NCBI.
Ini menegaskan bahwa isolat yang diidentifikasi dan
dikarakterisasi dalam koleksi ini pasti milik keluarga Bt.
3 April 2018 | Jilid 9 | Pasal 708
Nair dkk. Penjelajahan Qatar Bacillus thuringiensis

TABEL 1 | Primer yang digunakan dalam penelitian ini untuk eksplorasi gen penyandi endotoksin, protein aksesori dan Cyt.

gen Primer Urutan Referensi

menangis1A Lep1A 5kan CCGGTGCTGGATTTGTGTTA 3kan Carozzi dkk., 1991

Lep1B 5kan AATCCCGTATTGTACCAGCG 3kan
menangis1B Menangis1B1 5kan CTTCATCACGATGGAGTAA 3kan Cerron dkk., 1994
Menangis1B2 5kan CATAATTTGGTCGTTCTGTT 3kan

menangis1D Menangis1D1 5kan CTGCAGCAAGCTATCCAA 3kan Cerron dkk., 1994

Menangis1D2 5kan ATTTGAATTGTCAAGGCCTG 3kan
menangis1IA Menangis5A 5kan ATGAACTAAAGAATCAAGA 3kan Masson dkk., 1998
Menangis5B 5kan ACCTGTGCTATACCATTTCA 3kan
menangis2 Menangis2-1 5kan GTTATTCTTAATGCAGATGAATGGG 3kan Ben-Dov dkk., 1997
Menangis2-2 5kan CGGATAAAATAATCTGGAAATAG 3kan
vip3a vip1 5kan ATGAACAAGAATAATACTA 3kan Abdelkefi-Mesrati dkk., 2005
vip3 5kan TTACTTAATAGAGAGACATCGT 3kan

cry4A/4B Dip2A 5kan GGTGCTTCCTATTCTTTGGC 3kan Carozzi dkk., 1991

Celup1B 5kan ATGGCTTGTTTCGCTACATC 3kan
menangis10 Menangis10-1 5kan ATATGAAAATATTCAATGCTC 3kan Porcar et al., 1999
Menangis10-2 5kan ATAAATTCAAGTGCCAAGTA 3kan

menangis11 Menangis11-1 5kan TTGAAGATACGCCAGATCAAGC 3kan Bravo dkk., 1998

Menangis11-2 5kan CATTTGTACTTGAAGTTGTAATCCC 3kan
cyt1A Cyt1A1 5kan GTTGTAAGCTATGGAAAAT 3kan Zghal et al., 2008
Cyt1A2 5kan TTAGAAGCTTCCATTAATA 3kan

cyt1C Cyt1C1 5kan CAAAATCTACGGGAGCAAGG 3kan Dirancang untuk studi ini

Cyt1C2 5kan GGAAGGATCCCTTTGACTTTT 3kan

cyt2A Cyt2A1 5kan AATACATTTCAAGGAGCTA 3kan Guerchicoff et al., 1997
Cyt2A2 5kan TTTCATTTTAACTTCATATC 3kan

hal 19 hal19-1 5kan GCAGGAGGAACATCACCATT 3kan Dirancang untuk studi ini

hal19-2 5kan GGATTTGCTGAGCAGGTCAT 3kan

hal.20 hal20-1 5kan TGACGAGGAAACAGAGTATACGA 3kan Dirancang untuk studi ini

hal20-2 5kan TGAAAGGTTAAACGTTCCGATT 3kan

-Profil Endotoksin Di Antara Isolat Bt
Pola protein isolat yang menghasilkan kristal bipiramidal dan
kuboid serupa dengan subspesies referensikurstaki. Mereka
memiliki satu protein sekitar 130 kD, dua protein sekitar 65 kD
dan protein sekitar 40 kD. Namun, kristal bulat memiliki pola
protein yang berbeda jika dibandingkan dengan subspesies
referensiisraelensis. Faktanya, 15 pola protein berbeda (Gambar
2) terbukti. Satu pola protein cocok dengan referensi Bt
israelensis H14. Profil ini menunjukkan terutama adanya satu
protein 130 kD, dua protein sekitar 65 kD, tiga protein sekitar 45
kD dan dua protein sekitar 27 kD. Tetapi 14 jenis pola protein
lainnya diamati di antara koleksi tersebut. Protein utama sesuai
ukurannya tercantum diMeja 2. Oleh karena itu, sesuai dengan
pola protein, 16 kelompok (Prot 1 hingga Prot 16) dibuktikan
dalam koleksi: 256 isolat mirip Btk dengan satu pola protein (Tipe
11), 19 isolat mirip Bti dengan satu pola protein (Tipe 1) dan 14
pola protein ditunjukkan oleh 422 kristal sferis yang
menghasilkan isolat (bifurkasi ditunjukkan padaMeja 2).
Distribusi Koleksi Bt Berdasarkan Pola
Plasmid
Penyelidikan pola plasmid isolat Bt menunjukkan bahwa semua
isolat penghasil kristal bipiramidal dan kuboid memiliki
pola plasmid yang sama; mirip dengan referensi Btkurstaki
HD1. Selain itu, isolat penghasil kristal sferis 19 Bti memiliki
pola plasmid yang sama dengan pola plasmid Bt.israelensis
H14. Namun, di antara 422 isolat penghasil kristal sferis
lainnya, hanya 5 jenis pola plasmid yang diamati. Berlawanan
dengan 16 kelompok pola protein dalam koleksi kami, kami
hanya memiliki 7 jenis (Plas 1 hingga Plas 7) pola plasmid:
satu Btk like, satu Bti like dan 5 Non-Bti like (Gambar 3).
Temuan ini menunjukkan bahwa 700 isolat memiliki total
tujuh pola plasmid dan 16 pola protein yang berbeda.Meja 2).
Aktivitas Hemolitik Di Antara Isolat Bt
Qatar
Isolat mirip 19 Bti dengan kristal bulat halus, semuanya menunjukkan
hemolisis positif di sekitar koloninya setelah inkubasi semalam. Yang
lain menunjukkan derajat hemolisis yang berbeda. Di antara bentuk
kristal, isolat dengan kristal berbentuk balon kempis bulat tidak
menunjukkan aktivitas hemolitik. Di sisi lain, isolat dengan kristal
permukaan bergelombang bulat menunjukkan aktivitas hemolitik
yang berbeda. Beberapa tidak memiliki aktivitas sementara beberapa
memiliki aktivitas baik atau sedikit. Isolat dengan kristal sferis cekung
dan kristal sferis bermata runcing menunjukkan aktivitas hemolitik
yang baik.Gambar 4, Meja 2). Isolat

Perbatasan dalam Mikrobiologi | www.frontiersin.org 4 April 2018 | Jilid 9 | Pasal 708

Nair dkk. Penjelajahan Qatar Bacillus thuringiensis

GAMBAR 1 | Memindai gambar mikroskop elektron dari berbagai jenis morfologi kristal dan spora (S) yang dihasilkan oleh strain Bt dari koleksi.
(A) Regangan referensi Bacillus thuringiensis israelensis H14 dengan kristal bulat halus [ss] (B) Qatari Bti menyukai isolat QBT229 dengan kristal [ss] bulat halus
(C) Kristal bulat dengan permukaan bergelombang [us] QBT240 (D) Balon bulat tapi kempis [db] bentuk QBT34 (E) Kristal bulat dengan permukaan cekung [cs] QBT81
(F) kristal bulat dengan tepi runcing [pe] QBT99 (G) regangan referensi Bacillus thuringiensis kurstaki HD1 dengan kristal bipiramidal [bp] dan kuboid [c] (H) Qatari Btk
seperti isolat QBT375 dengan kristal bipiramidal [bp] dan kuboid [c].

GAMBAR 2 | Gel SDS-PAGE menunjukkan 16 pola protein yang berbeda di antara koleksi strain Bt (1-16). Jalur yang ditandai sebagai M adalah penanda protein rentang luas;
H14 adalah regangan referensiBacillus thuringiensis israelensis dan HD1 adalah regangan referensi Bacillus thuringiensis kurstaki; 1, QBT229; 2, QBT3; 3, QBT6; 4, QBT34; 5,
QBT39; 6, QBT212; 7, QBT240; 8, QBT320; 9, QBT418; 10, QBT555; 11, QBT375; 12, QBT41; 13, QBT43; 14, QBT56; 15, QBT81; 16, QBT99.

dengan kristal bipiramidal menunjukkan aktivitas hemolitik di antaranya
seperti referensi Bt kurstaki.
Aktivitas Insektisida melalui Investigasi
Gen -Endotoksin dan Bioassay
Ke-19 isolat yang menyerupai profil referensi Btisraelensis H14
memberikan produk PCR yang diharapkan untuk amplifikasi dengan
primer yang dirancang untuk mengeksplorasi gen yang mengkode
endotoksin spesifik Dipteran; kecuali untukmenangis10 dan cyt1C
gen. Oleh karena itu, isolat ini diuji aktivitas insektisidanya terhadap
Kompleks Culex pipiens. 259 isolat yang menyerupai profil referensi
Bt kurstaki HD1 memberikan semua produk PCR yang diharapkan
dengan primer yang dirancang untuk mengidentifikasi keberadaan
gen yang mengkode endotoksin spesifik Lepidopteran dan
Coleopteran. Sisa isolat dengan kristal sferis tidak memberikan
produk PCR yang diharapkan dengan primer yang kami uji.
Sebagai isolat seperti 19 Bti yang menunjukkan kemungkinan tidak
adanya dua gen pengkode endotoksin spesifik Dipteran yang penting,
bioassay insektisida dilakukan untuk memeriksa efeknya, jika ada,
terhadap aktivitas tersebut. Kelompok pertama terdiri dari 19 isolat sejenis
Bti yang mampu membunuh semua larva seperti yang diharapkan.
Kelompok kedua terdiri dari 14 perwakilan yang memiliki pola protein
berbeda; mereka tidak menunjukkan aktivitas insektisida (Meja 2).
DISKUSI
Sejak pertama kali diisolasi pada tahun 1902 oleh Ishiwata, Bt telah
diisolasi dari berbagai ekologi dan telah dipelajari secara luas. Terlepas
dari eksplorasi di seluruh dunia ini, penelitian tentang bakteri ini masih
belum lengkap (Melo dkk., 2016) karena banyaknya ekologi yang masih
belum tereksplorasi dan fakta bahwa insektisida berbasis Bt belum dapat
sepenuhnya menggantikan insektisida kimia berbahaya di pasaran. Dalam
penelitian ini, salah satu ekologi tersebut adalah

Perbatasan dalam Mikrobiologi | www.frontiersin.org 5 April 2018 | Jilid 9 | Pasal 708

Nair dkk. Penjelajahan Qatar Bacillus thuringiensis

TABEL 2 | Koleksi galur Bt Qatar diringkas menjadi 16 kelas dengan bantuan perwakilan sejati yang dipilih berdasarkan morfologi kristal, proteomik, dan karakteristik genom;
QBT229 adalah perwakilan dari isolat seperti Qatar Bti, QBT376 adalah perwakilan dari Qatar seperti isolat Btk, yang lain mewakili morfologi kristal sferis yang berbeda yang
diamati dengan berbagai protein dan pola plasmid.

Keluarga Bentuk kristal Protein Protein Plasmid jumlah dari hemolitik insektisida Bt menangis, cyt dan

perwakilan pola ukuran dalam pola mengisolasi aktivitas aktivitas gen aksesori
kelas (kD) hadiah

H14 Bulat halus - - Ya Ya menangis4A, menangis4B, menangis11,

cyt1A, cyt2A, menangis10,

cyt1C, p19, p20

QBT229 Prot 1 130, 65, 45, Plas 1 19 Ya Ya menangis4A, menangis4B, menangis11,

27 cyt1A, cyt2A, p19, p20

HD1 Bipiramidal dan - - Ya - menangis1A, menangis1IA, menangis1B,

berbentuk kubus menangis1D, vip3a, menangis2

QBT376 Prot 11 130, 65, 40 Plas 7 259 Ya - menangis1A, menangis1IA, menangis1B,

menangis1D, vip3a, menangis2

QBT6 Bulat Prot 3 100, 65, 40 Plas 2 7 Ya Tidak -

permukaan bergelombang

QBT43 Prot 13 85, 65, 55, Plas 3 33 Sedikit Tidak -

45, 30, 27, 22
QBT212 Prot 6 130, 90, 60, Plas 4 10 Tidak Tidak -
40, 22
QBT240 Prot 7 100, 80, 60, Plas 4 48 Sedikit Tidak -
45, 40,
QBT320 Prot 8 80, 60, 45, Plas 4 16 Sedikit Tidak -
40, 35
QBT418 Prot 9 150, 80, 60, Plas 4 9 Sedikit Tidak -
45, 40, 27
QBT555 Prot 10 180, 150, 80, Plas 4 203 Tidak Tidak -
60, 45, 40, 27
QBT3 Bulat kempes Prot 2 130, 90, 75, Plas 6 4 Tidak Tidak -
balon 65, 50, 40, 25
QBT34 Prot 4 180, 140, 90, Plas 6 19 Tidak Tidak -
80, 60, 45, 25
QBT39 Prot 5 140, 90, 80, Plas 6 12 Tidak Tidak -
60, 45, 25
QBT41 Prot 12 130, 90, 75, Plas 6 29 Tidak Tidak -
55, 40, 27, 22
QBT56 Prot 14 130, 100, 65, Plas 6 28 Tidak Tidak -
45, 27, 22
QBT81 cekung bulat Prot 15 65, 45, 35, 27 Plas 6 2 Ya Tidak -
permukaan

QBT99 Bulat runcing Prot 16 230, 150, 85, Plas 5 2 Ya Tidak -

bermata 70, 40, 27, 25

Total 700

dieksplorasi untuk pertama kalinya: tanah Qatar. Di antara isolat bakteri
dari tanah, 700 isolat diidentifikasi sebagai Bt karena semuanya
menghasilkan kristal paraspora selama sporulasi. Pengelompokan tingkat
pertama dilakukan dengan mikroskop cahaya, dimana ditemukan 259
isolat menghasilkan kristal bipiramidal dan kuboid sedangkan mayoritas
(441 isolat) menghasilkan kristal sferis. Ini bertentangan dengan
penyaringan Bt biasa dari sampel lingkungan, di mana mayoritas
menghasilkan kristal bipiramidal (Meadows dkk., 1992; Bernhard dkk.,
1997). Saat Qatar memulai kegiatan pertanian lokal baru-baru ini, tidak
tersedianya tanaman dan hama serangga terkait dapat menjadi alasan
untuk
jumlah yang relatif lebih rendah dari strain Bt spesifik
Lepidopteran yang menghasilkan kristal bipiramidal dan kuboid.
Dalam karya ini, Scanning Electron Microscopy digunakan untuk
tidak hanya mengkonfirmasi bentuk kristal, tetapi juga untuk
lebih memperbesar dan membedakan antara bentuk kristal bola.
Meskipun berbagai jenis kristal bola telah dilaporkan sebelumnya
(Noguera dan Ibarra, 2010), sudah jarang digunakan sebagai alat
untuk mengklasifikasikan koleksi Bt besar (Djenane dkk., 2017).
Dari citra SEM, ditemukan bahwa di antara kristal sferis, ada
empat jenis bentuk sferis dalam koleksi. Ini menunjukkan
keragaman yang luas di antara strain Bt Qatar. Identitas dari

Perbatasan dalam Mikrobiologi | www.frontiersin.org 6 April 2018 | Jilid 9 | Pasal 708

Nair dkk. Penjelajahan Qatar Bacillus thuringiensis

GAMBAR 3 | Gel elektroforesis menunjukkan tujuh pola plasmid berbeda yang diamati di antara koleksi Bt (1-7). L mewakili 1 kb plus tangga; H14 adalah strain
referensi Bacillus thuringiensisIsrael, HD1 adalah strain referensi Bacillus thuringiensis kurstaki; 1, QBT229; 2, QBT6; 3, QBT43; 4, QBT212; 5, QBT99; 6, QBT3; 7,
QBT375.

GAMBAR 4 | Berbagai jenis aktivitas hemolitik ditunjukkan oleh isolat Bt. (A) Aktivitas hemolitik positif QBT229 (B) Sedikit aktivitas hemolitik QBT43 (C) Aktivitas hemolitik
negatif QBT3.

isolat sebagai strain Bt dikonfirmasi oleh amplifikasi DNA
ribosom 16s, sequencing dan membandingkan dengan strain
yang diterbitkan dari database NCBI. Semua isolat milik keluarga
Bt. Ketika kandungan proteomik kristal paraspora dipelajari
dengan SDS-PAGE, ditemukan bahwa isolat dengan bentuk kristal
yang sama juga memiliki perbedaan kandungan proteinnya.
Faktanya, meskipun hanya ada enam jenis bentuk kristal dalam
koleksi, ada 14 jenis pola protein. Karena protein kristal
paraspora sering dikodekan oleh gen pada plasmid, jumlah pola
plasmid yang sama diharapkan. Tapi, bertentangan dengan karya
dan teori yang diterbitkan mengenai kristal paraspora Bt (
Aptosoglou dkk., 1997; Reyes-Ramírez dan Ibarra, 2008;
Fagundes dkk., 2011), hanya tujuh pola plasmid yang ditemukan
di antara isolat koleksi. Perbedaan antara pola protein dan
plasmid ini mengarah pada dua kesimpulan. Pertama,
penggunaan pola plasmid sebagai alat untuk mengidentifikasi
keragaman di antara isolat suatu ekologi memiliki keterbatasan.
Dalam penelitian ini, jika pola plasmid digunakan sebagai alat
utama pengelompokan koleksi, keragaman koleksi yang
sebenarnya tidak akan terbukti. Kedua, karena ketertarikannya
terletak pada protein kristal yang memiliki sifat insektisida
aktivitas, pola protein idealnya digunakan untuk mengklasifikasikan
koleksi ke dalam kelompok. Ini akan membantu seseorang memahami
keragaman nyata dan memilih perwakilan sejati untuk studi molekuler dan
genomik.
Aktivitas hemolitik dari perwakilan strain (isolat Bti like dan Btk
like) diuji dan koleksi menunjukkan berbagai tingkat aktivitas
hemolitik seperti yang diharapkan. Di antara mereka, kelompok yang
menarik adalah isolat dengan kristal sferis yang permukaannya
bergelombang. Perwakilan dari kelompok ini, memiliki aktivitas
hemolitik yang bervariasi. Kelompok tunggal ini memiliki isolat
dengan aktivitas hemolitik yang baik, aktivitas hemolitik sedikit dan
tidak ada aktivitas hemolitik. Hal ini menunjukkan untuk pertama
kalinya, polimorfisme antara isolat dengan bentuk kristal yang sama.
Amplifikasi PCR dilakukan dengan primer yang dirancang untuk
mengeksplorasi menangis dan cyt gen, untuk memprediksi aktivitas
insektisida mereka. Di antara koleksi Bt, 19 isolat menyerupaiBt Israel
H14 dalam morfologi kristal, pola plasmid dan pola protein.
Amplifikasi PCR menunjukkan bahwa mereka membawa gen
pengkode protein insektisida spesifik Dipteran seperticry4A/4B, cry11,
p19, p20, cyt1A, dan cyt2. 19 isolat ini di antara

Perbatasan dalam Mikrobiologi | www.frontiersin.org 7 April 2018 | Jilid 9 | Pasal 708

Nair dkk.
GAMBAR 5 | Diagram lingkaran menunjukkan keragaman di antara 700 isolat Bt Qatar. Distribusi utama dalam pie didasarkan pada bentuk kristal dan setiap bagian telah diklasifikasikan
lebih lanjut berdasarkan jenis protein dan profil plasmid yang diamati di antara mereka.
koleksi kami akan menjadi kandidat untuk diuji aktivitas
insektisidanya terhadap serangga Dipteran. Semua isolat seperti
Bti Qatar ini gagal memberikan amplifikasi PCR untuk primer
yang dirancang untukmenangis10 dan cyt1C gen. Mengetahui
bahwa kedua gen ini terletak bersebelahan pada plasmid pBtoxis
dari Bti (Berry dkk., 2002), diusulkan bahwa ada semacam
ketidakstabilan struktural di antara isolat seperti Bti Qatar di
wilayah plasmid ini. Oleh karena itu, perlu dilakukan pemeriksaan
aktivitas insektisida terhadap serangga Dipteran. Seperti yang
ditunjukkan padaMeja 2, isolat mirip Bti Qatar ini mampu
membunuh kelima larva Culex pipiens, seperti regangan
referensi Bt Israel H14. Aktivitas insektisida masih bertahan di
antara 19 isolat ini, meskipun mungkin tidak adamenangis10 dan
cyt1C gen. Eksplorasi wilayah plasmid yang bersangkutan akan
dilakukan dalam studi genomik lebih lanjut untuk memahami
ketidakstabilan struktural.
Isolat yang menghasilkan kristal bipiramidal dan kuboid membawa
semua gen penyandi protein insektisida spesifik Lepidopteran dan
Coleopteran yang diuji dengan PCR. Mereka berlabuhmenangis1A,
menangis1IA, menangis1B, menangis1D, vip3a, dan menangis2. Ke-259
isolat yang menghasilkan kristal bipiramidal dan kuboid yang menyimpan
gen yang mengkode -endotoksin esensial ini adalah kandidat untuk
produksi biolarvisidal melawan serangga Lepidopteran dan Coleopteran.
422 isolat lainnya tidak memberikan amplifikasi untuk semua set primer
yang diuji sejauh ini. Ini mengarah pada kesimpulan bahwa 422 isolat
memiliki gen -endotoksin baru dan/atau bentuk berbeda dari gen
endotoksin yang diketahui, yang tidak dapat dideteksi oleh PCR. Mereka
sangat menjanjikan dalam pencarian endotoksin baru. Isolat ini akan
dipelajari lebih lanjut
Perbatasan dalam Mikrobiologi | www.frontiersin.org
Penjelajahan Qatar Bacillus thuringiensis
genomik serta tingkat proteomik untuk mengidentifikasi jenis gen
delta-endotin yang disimpan oleh mereka.
Kesimpulannya, dalam studi pertama skrining Bt di Qatar, 700 isolat
dikarakterisasi dan dikelompokkan menjadi 16 kelas (Gambar 5, Meja 2).
Komunitas mikroba Qatar menawarkan keragaman isolat Bt yang baik
yang dapat menjadi kandidat potensial untuk produksi bio-larvisida lokal
terhadap banyak keluarga serangga. Morfologi kristal paraspora dan
kandungan protein kristal menjadi lebih penting ketika
mengklasifikasikannya. Studi ini menunjukkan keuntungan menggunakan
teknik proteomik dibandingkan teknik genomik saat menyaring dan
mempelajari koleksi besar Bt. Kami percaya bahwa dari setiap kelompok,
perwakilan yang kami pilih akan benar-benar mewujudkan kelompoknya
masing-masing dan memudahkan untuk menjalankan studi genomik dan
proteomik secara akurat dengan mereka di masa depan.
KONTRIBUSI PENULIS
KN, RA-T, DA-T, FA-Y, TA, dan SJ memberikan kontribusi yang
cukup besar terhadap desain pekerjaan, pengadaan data dan
perencanaan pekerjaan. KN dan SJ membuat analisis dan
interpretasi data, menulis versi final naskah ini,
mempertanggungjawabkan semua pekerjaan dalam memastikan
keakuratan dan keandalan pekerjaan.
PENDANAAN
Publikasi ini dimungkinkan oleh hibah GSRA No.
GSRA2-1-0604-14015 dan NPRP 09-705-4-025, dari
8 April 2018 | Jilid 9 | Pasal 708
Nair dkk.
Qatar National Research Fund (anggota yayasan Qatar).
Temuan yang dicapai di sini sepenuhnya menjadi
tanggung jawab penulis. Studi ini juga sebagian didukung
oleh hibah No. QUST-CAS-SPR-2017-31 dari College of Arts
and Sciences, Qatar University.
REFERENSI
Abdelkefi-Mesrati, L., Boukedi, H., Chakroun, M., Kamoun, F., Azzouz, H.,
Tounsi, S., dkk. (2011). Investigasi langkah-langkah yang terlibat dalam
perbedaan kerentananEphestia kuehniella dan Spodoptera littoralis ke
Bacillus thuringiensis Vip3Aa16 racun. J. Invertebr. Patol.107, 198-201. doi:
10.1016/j.jip.2011.05.014
Abdelkefi-Mesrati, L., Tounsi, S., dan Jaoua, S. (2005). Karakterisasi
dari gen tipe vip3 baru dari Bacillus thuringiensis dan bukti
keberadaannya pada plasmid besar. Mikrobiol FEMS. Lett.244, 353–358.
doi: 10.1016/j.femsle.2005.02.007
Abdelmalek, N., Sellami, S., Ben Kridis, A., Tounsi, S., dan Rouis, S. (2016).
Karakterisasi molekul dari Bacillus thuringiensis strain MEB4 sangat beracun bagi
ngengat tepung Mediterania Ephestia kuehniella Zeller (Lepidoptera: Pyralidae).
Penanggulangan Hama. Sci.72, 913–921. doi: 10.1002/ps.4066
Adang, MJ, Crickmore, N., dan Jurat-fuentes, JL (2014). KeanekaragamanBasil
thuringiensis toksin kristal dan mekanisme kerjanya. Adv. Fisiol Serangga.47, 39–87.
doi: 10.1016/B978-0-12-800197-4.00002-6
Aptosoglou, SG, Sivropoulou, A., dan Koliais, SI (1997). Distribusi dan
karakterisasi dari Bacillus thuringiensis di lingkungan zaitun di Yunani.
Mikrobiologi Baru 20, 69–76
Ben-Dov, E., Zaritsky, A., Dahan, E., Barak, Z., Sinai, R., Manasherob, R., dkk.
(1997). Skrining yang diperluas dengan PCR untuk tujuh gen crygroup dari galur
yang dikumpulkanBacillus thuringiensis. aplikasi Mengepung. Mikrobiol.63,
4883-4890. Bernhard, K., Jarrett, P., Meadows, M., Butt, J., Ellis, J., Roberts, GM, et al.
(1997). Isolat alami dariBacillus thuringiensis: distribusi di seluruh dunia,
karakterisasi dan aktivitas melawan hama serangga. J. Invertebr. Patol.70, 59–68
doi: 10.1006/jipa.1997.4669
Berry, C., O'Neil, S., Ben-Dov, E., Jones, AF, Murphy, L., Puyuh, MA, dkk.
(2002). Urutan lengkap dan organisasi pBtoxis, plasmid pengkode toksin dari
Bacillus thuringiensis subsp. israelensis. aplikasi Mengepung. Mikrobiol.68, 5082–
5095. doi: 10.1128/AEM.68.10.5082-5095.2002
Bravo, A., Sarabia, S., Lopez, H., Ontiveros, C., Abarca, A., Ortiz, M., et al.
(1998). Karakterisasi gen menangis di MeksikoBacillus thuringiensis koleksi
regangan. aplikasi Mengepung. Mikrobiol.64, 4965–4972
Campanini, EB, Davolos, CC, Alves, EC, da, C., dan Lemos, MV
F. (2012). Caracterizaçãode novo isolado de Bacillus thuringiensis para o
controle de importantes insetos-praga da agricultura. Bragantia 71, 362–369.
doi: 10.1590/S0006-87052012000300007
Carozzi, NB, Kramer, VC, Warren, GW, Evola, S., dan Koziel, MG (1991).
Prediksi aktivitas insektisida Bacillus thuringiensis strain oleh profil produk
reaksi berantai polimerase. aplikasi Mengepung. Mikrobiol.57, 3057–3061.
Cerron, J., Covarrubias, L., Quintero, R., Ortoz, A., Ortoz, M., Aranda, E.,
dkk. (1994). analisis PCR darimenangis aku gen keluarga insektisida dari Bacillus
thuringiensis. aplikasi Mengepung. Mikrobiol.60, 353–356.
Crickmore, N., Zeigler, DR, Schnepf, E., Van Rie, J., Lereclus, D., Baum, J., dkk.
(2016). Tatanama Racun Bacillus thuringiensis. Tersedia online di: http://
www.lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/vip.html (Diakses 5
Oktober 2017).
Dambach, P., Louis, VR, Kaiser, A., Ouedraogo, S., Sié, A., Sauerborn,
R., dkk. (2014). Khasiat dariBacillus thuringiensis var. israelensis
terhadap nyamuk malaria di barat laut Burkina Faso.parasit. Vektor
7:371. doi: 10.1186/1756-3305-7-371
Djenane, Z., Nateche, F., Amziane, M., dan Gomis-cebolla, J. (2017). Penilaian
aktivitas antimikroba dan potensi entomocidal dari Bacillus
thuringiensis. Racun9:139. doi: 10.3390/toksin9040139
Dong, Z., Li, J., Zheng, J., Geng, C., Peng, D., dan Sun, M. (2016).
Urutan genom lengkap dari Bacillus thuringiensis CTC—Strain yang khas
Perbatasan dalam Mikrobiologi | www.frontiersin.org
Penjelajahan Qatar Bacillus thuringiensis
UCAPAN TERIMA KASIH
Kami ingin mengucapkan terima kasih kepada Departemen Ilmu Biologi
dan Lingkungan Universitas Qatar atas dukungannya yang luar biasa.
Kami juga ingin mengucapkan terima kasih kepada Bapak Essam Attia atas
dukungan teknisnya untuk imajinasi SEM.
dengan produksi protein S-layer yang tinggi. J. Bioteknologi. 220, 100-101.
doi: 10.1016/j.jbiotec.2015.12.027
El-Kersh, TA, Ahmed, AM, Al-Sheikh, YA, Tripet, F., Ibrahim, MS, and
Metwalli, AAM (2016). Isolasi dan karakterisasi penduduk asliBacillus
thuringiensis strain dari Arab Saudi dengan toksisitas larvasida yang
ditingkatkan terhadap vektor nyamuk Anopheles gambiae (sl). parasit. Vektor
9:647 doi: 10.1186/s13071-016-1922-6
Elleuch, J., Zribi Zghal, R., Lacoix, MN, Chandre, F., Tounsi, S., dan Jaoua,
S. (2015). Bukti dari dua mekanisme yang terlibat dalamBacillus thuringiensis
israelensis penurunan toksisitas terhadap jentik nyamuk: dinamika genom dan
stabilitas toksin. Mikrobiol. Res.176, 48–54. doi: 10.1016/j.micres.2015.04.007
Fagundes, R., Picoli, E., Lana, U., dan Valicente, F. (2011). Pola plasmid dari
strain yang efisien dan tidak efisien dari Bacillus thruingiensis melawan Spodoptera
frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae). Neotrop. Entomol.40, 600–606. doi: 10.1590/
S1519-566X2011000500012
Federici, BA, Park, HW, dan Sakano, Y. (2006). “Kristal protein insektisida
dari Bacillus thuringiensis,” di dalam Inklusi dalam Prokariota, ed JM Shively ( Berlin;
Heidelberg; Springer-Verlag) 195–235.
Guerchicoff, A., Ugalde, RA, dan Rubinstein, CP (1997). Identifikasi dan
karakterisasi dari yang sebelumnya tidak dijelaskan cyt gen dalam Bacillus thuringiensis
subsp. israelensis. aplikasi Mengepung. Mikrobiol.63, 2716–2721.
Jain, D., Sita, Sunda, D., Sanadhya, S., Dhruba, Nath, J., dan Khandelwal,
SK (2017). Karakterisasi molekuler dan skrining gen cry berbasis PCR dari
Bacillus thuringiensis ketegangan. Biotek 7:4. doi: 10.1007/s13205-016-
0583-7
Jaoua, S., Zouari, N., Tounsi, S., dan Ellouz, R. (1996). Studi tentang -endotoksin
diproduksi oleh tiga strain baru-baru ini diisolasi dari Bacillus thuringiensis.
Mikrobiol FEMS. Lett.145, 349–354. doi: 10.1016/S0378-1097(96)00430-2
Jeong, H., Choi, S.-K., and Park, S.-H. (2017). Urutan genom dari
Bacillus thuringiensis Serovar kurstaki regangan BP865 dan B. thuringiensis
Serovar aizawai Saring HD-133. NS. Soc. Mikrobiol.5:e01544–16. doi: 10.1128/
genomeA.01544-16
Jouzani, GS, Pourjan Abad, A., Seifinejad, A., Marzban, R., Kariman, K., dan
Maleki, B. (2008a). Sebaran dan Keanekaragaman Dipteran Spesifikmenangis dan
cytgen asli Bacillus thuringiensis strain yang diperoleh dari ekosistem yang berbeda
dari Iran. J.Ind. Mikrobiol. Bioteknologi.35, 83-94. doi: 10.1007/s10295-007- 0269-6
Jouzani, GS, Seifinejad, A., Saeedizadeh, A., Nazarian, A., Yousefloo, M.,
Soheilivand, S., dkk. (2008b). Deteksi molekuler nematicidal crystalliferous
Bacillus thuringiensis strain Iran dan evaluasi toksisitas mereka pada hidup
bebas dan nematoda parasit tanaman. Bisa. J. Mikrobiol.54, 812–822. doi:
10.1139/W08-074
Jung, WJ, Mabood, F., Souleimanov, A., Zhou, X., Jaoua, S., Kamoun, F., dkk.
(2008). Stabilitas dan aktivitas antibakteri bakteriosin yang dihasilkan olehBacillus
thuringiensis dan Bacillus thuringiensis sp. kurstaki. J. Mikrobiol. Bioteknologi.18,
1836–1840.
Kamouneh, F., Fguira, IB, Hassen, NB, Ben, Mejdoub, H., Lereclus,
D., dkk. (2011). Pemurnian dan karakterisasi baruBacillus thuringiensis
bakteriosin aktif terhadap listeria monocytogenes, Bacillus cereusdan
Agrobacterium tumefaciens. aplikasi Biokimia. Bioteknologi.165, 300–314.
doi: 10.1007/s12010-011-9252-9
Lacey, LA, Grzywacz, D., Shapiro-Ilan, DI, Frutos, R., Brownbridge, M., dan
Goettel, MS (2015). Patogen serangga sebagai agen pengendali hayati: Kembali ke
masa depan.J. Invertebr. Patol.132, 1–41. doi: 10.1016/j.jip.2015.07.009 Lambert, B.,
dan Peferoen, M. (1992). Janji insektisidaBacillus thuringiensis.
Biosains 42, 112-122. doi: 10.2307/1311652
López-Meza, JE, dan Ibarra, JE (1996). Karakterisasi galur baru dari
Bacillus thuringiensis. aplikasi Lingkungan.Mikrobiol.62, 1306-1310.
9 April 2018 | Jilid 9 | Pasal 708
Nair dkk.
Mahalakshmi, A., Sujatha, K., Kani, P., dan Shenbagarathai, R. (2012).
Distribusi dari menangis dan cyt gen di antara penduduk asli Bacillus thuringiensis
isolat yang memiliki aktivitas anti nyamuk. Adv. Mikrobiol.2, 216–226. doi: 10.4236/
aim.2012.23026
Masson, L., Erlandson, M., Puzstai-Carey, M., Brousseau, R., Juan-rez-
Perrez, V., dan Frutos, R. (1998). Pendekatan holistik untuk menentukan potensi
entomopatogen dariBacillus thuringiensis ketegangan. aplikasi Mengepung.
Mikrobiol.64, 4782–4788.
Meadows, MP, Ellis, DJ, Butt, J., Jarrett, P., dan Burges, HD (1992).
Distribusi, frekuensi, dan keragaman Bacillus thuringiensis di pabrik pakan ternak.
aplikasi Mengepung. Mikrobiol.58, 1344-1350.
Melo, AL, de, A., Soccol, VT, dan Soccol, CR (2016). Bacillus thuringiensis:
mekanisme aksi, resistensi, dan aplikasi baru: review. Kritis. Pdt.
Bioteknologi.36, 317–326. doi: 10.3109/07388551.2014.960793
Noguera, PA, dan Ibarra, JE (2010). Deteksi barumenangis gen dari Basil
thuringiensis dengan menggunakan sistem primer PCR baru. aplikasi Mengepung. Mikrobiol.
76, 6150–6155. doi: 10.1128/AEM.00797-10
Porcar, M., Iriarte, J., Dumanoir, VC, Ferrandis, MD, Lecadet, MM, Ferrer, J.,
dkk. (1999). Identifikasi dan karakterisasi yang baruBacillus thuringiensis serovars
pirenaica (serotipe H57) dan iberia (serotipe H59). J. Aplikasi Mikrobiol.
87, 640–648. doi: 10.1046/j.1365-2672.1999.00863.x
Reyes-Ramirez, A., dan Ibarra, JE (2008). Pola plasmid dariBasil
Thuringiensis jenis strain. aplikasi Mengepung. Mikrobiol.74, 125–129. doi:
10.1128/AEM.02133-07
Rolle, RL, Ejiofor, AO, dan Johnson, TL (2005). Penentuan plasmid
ukuran dan lokasi gen - endotoksin dari Bacillus thuringiensis dengan elektroforesis
gel medan pulsa. Af. J. Bioteknologi.4, 580–585. doi: 10.5897/AJB2005.000-3106
Saadaoui, I., Al-Thani, R., Al-Saadi, F., Belguith-Ben Hassan, N., Abdelkefi-
Mesrati, L., Schultz, P., dkk. (2010). Karakterisasi tunisiaBacillus thuringiensis
strain dengan kelimpahan kurstaki subspesies yang memiliki aktivitas
insektisida terhadap serangga lepidopteran ephestia kuehniella. Curr.
Mikrobiol.61, 541–548. doi: 10.1007/s00284-010-9650-1
Sambrook, J., Fritsch, EF, dan Maniatis, T. (1989). Kloning Molekul. A
Manual Laboratorium, 2nd Edn., Cold Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor
Laboratory Press.
Perbatasan dalam Mikrobiologi | www.frontiersin.org
Penjelajahan Qatar Bacillus thuringiensis
Seifinejad, A., Jouzani, GRS, Hosseinzadeh, A., dan Abdmishani, C.
(2008). Karakterisasi gen menangis dan vip Lepidoptera-aktif di Iran
Bacillus thuringiensis koleksi regangan. Biol. Kontrol44, 216–226. doi:
10.1016/j.biocontrol.2007.09.010
Sellami, S., Zghal, T., Cherif, M., Zalila-Kolsi, I., Jaoua, S., dan Jamoussi, K.
(2013). Penyaringan dan identifikasi aBacillus thuringiensis strain S1/4 dengan
aktivitas insektisida yang besar dan efisien. J. Mikrobiol Dasar. 53, 539–548. doi:
10.1002/jobm.201100653
Soares-da-Silva, J., Pinheiro, VCS, Litaiff-Abreu, E., Polanczyk, RA, dan Tadei,
WP (2015). Isolasi dariBacillus thuringiensis dari negara bagian Amazonas, di Brasil,
dan penyaringan terhadap Aedes aegypti (Diptera, Culicidae). Pdt. Bras. Entomol.59,
1–6. doi: 10.1016/j.rbe.2015.02.001
Travers, RS, Martin, PAW, dan Reihelderfer, CF (1987). Selektif
proses untuk isolasi tanah yang efisien Basil sp. aplikasi Mengepung. Mikrobiol.53,
1263–1266.
Zghal, RZ, Trigui, H., Ben Ali, M., dan Jaoua, S. (2008). Bukti dari
pentingnya Met 115 untuk Bacillus thuringiensis subsp. israelensis aktivitas
sitolitik protein Cyt1Aa di Escherichia coli. mol. Bioteknologi.38, 121–127. doi:
10.1007/s12033-007-9015-6
Zhang, J., Pan, ZZ, Xu, L., Liu, B., Chen, Z., Li, J., dkk. (2017).
Aktivasi proteolitik dari Bacillus thuringiensis Protein Vip3Aa oleh Spodoptera
exigua protease usus tengah. Int. J.Biol. Makromol.107(Pt A), 1220–1226. doi:
10.1016/j.ijbiomac.2017.09.101
Pernyataan Benturan Kepentingan: Para penulis menyatakan bahwa
penelitian dilakukan tanpa adanya hubungan komersial atau keuangan yang
dapat ditafsirkan sebagai potensi konflik kepentingan.
Hak Cipta © 2018 Nair, Al-Thani, Al-Thani, Al-Yafei, Ahmed dan Jaoua. Ini adalah
artikel akses terbuka yang didistribusikan di bawah ketentuan Lisensi Atribusi
Creative Commons (CC BY). Penggunaan, distribusi atau reproduksi di forum lain
diperbolehkan, asalkan penulis asli dan pemilik hak cipta dikreditkan dan
publikasi asli dalam jurnal ini dikutip, sesuai dengan praktik akademik yang
diterima. Penggunaan, distribusi, atau reproduksi tidak diizinkan yang tidak
mematuhi ketentuan ini.
10 April 2018 | Jilid 9 | Pasal 708