Astri Nur Indahsari, 19/444670/BI/10348

JURNAL 1
Developmental the pattern of embryogenic microspore of rice (Oryza sativa L.) based on
morphological characteristic
Pembentukan polen terdapat dua proses dalam perkembangannya yaitu sporognesis dan
gametogenesis. Kultur mikrospora tidak hanya digunakan dalam menyediakan banyak kandidat
sel tunggal dan menghasilkan tanaman tetpai juga stui molecular. Selama pergeseran
perkembangan, diferensiasi seluler dan interupsi aktivitas transkripsi dan translasimenyebabkan
pembentukan serbuk sari terjadi. Aktivitas sel dan organisasi struktural terpengaruh ketika
pemrograman ulang ke embriogenesis terjadi.
Pada padi, meskipun termasuk di antara spesies yang telah dikembangkan dan diterapkan
melalui produksi haploid ganda, sebuah studi terbatas yang mengeksplorasi seluruh perubahan
morfologis dan molekuler yang terkait dengan pembentukan pola kultur mikrospora dalam
embriogenesis terinduksi telah dicatat. Kultur antera utuh menjadi eksperimen yang umum
dilakukan untuk menghasilkan tanaman regenerasi dari kalus. Peristiwa morfologi dan struktural
selama androgenesis padi dijelaskan dalam penelitian ini untuk membedakan mikrospora
embriogenik dan pengembangan pola lebih lanjut di antara populasi mikrospora non-
embriogenik. Perbedaan fitur seluler dipelajari untuk mengkarakterisasi tahapan berurutan
embriogenesis mikrospora padi.
Pertama tanaman donor dan perawatan stress kepala sari dengan kultivar padi Segreng
dari Yogyakarta untuk tanaman donor. Pretreatmet pada malai diinkubasi pada suhu 4C selama
4-7 hari. Kemudian spikelet dipilih dan disterilkan, kemudian 180 kepala sari disepuh dalam
medium dan disterilisasi. Selanjutnya mikrospora di isolasi dan di analisis morfologi
embriogenik. Tidak seperti penelitian lain tentang barley, rapeseed, gandum dan tembakau,
penelitian tentang perkembangan embrio kultur mikrospora pada beras jarang dilaporkan. Dalam
penelitian ini, pemantauan deskriptif embriogenesis mikrospora dari fase ekskresi hingga
pembentukan struktur multiseluler didokumentasikan sebagai proses perkembangan paralel.
Perlakuan stres defisiensi karbohidrat pada medium B yang mengandung manitol dan
inkubasi pada suhu 33°C selama 4 hari pada kepala sari sudah cukup untuk memprogram ulang
jalur mikrospora. Mikrospora sensitif mengalami perubahan struktur sel, ditandai dengan
pembesaran dan fragmentasi. Atas dasar ini, mikrospora embriogenik melalui proses
perkembangan yang berkesinambungan, dimulai dengan mikrospora yang membesar mirip
dengan karakter ujung mononuklear dari perkembangan serbuk sari normal melalui sitoplasma
berbentuk bintang yang terfragmentasi dengan nukleus di pinggiran ( tipe 2) hingga sel pusat.
(tipe 3). Populasi mikrospora pada media kultur B dan A2 menunjukkan campuran tahap
perkembangan yang berbeda. Fenomena ini terkait dengan variabilitas keadaan perkembangan
serbuk sari individu. Karena padi memiliki struktur perbungaan, heterogenitas perkembangan
serbuk sari dalam malai secara bertahap berbeda dari pangkal ke atas. Ditekankan bahwa
persepsi sinyal yang diterima setiap mikrospora mungkin berbeda karena posisi di antera
berbeda. Oleh karena itu, respon setiap mikrospora berbeda-beda. Hasil serupa ditemukan untuk
mikrospora jagung yang diisolasi, di mana struktur heterogen dari tahap perkembangan yang
berbeda muncul antara mikrospora yang diisolasi pada hari ke 0 kultur dan struktur multiseluler
dengan waktu inkubasi yang lebih lama.
Campuran perkembangan yang berbeda dari mikrospora embriogenik Brassica napus L.
juga ditemukan setelah 8 jam perlakuan stres induktif pada 32 ° C. Mikrospora embriogenik
terus berkembang setelah dipindahkan ke media A2. Gambar 5 menunjukkan berbagai
perkembangan mikrospora embriogenik. Kesimpulannya, output penelitian ini memperlihatkan
bahwa perkembangan mikrospora embriogenik dalam kultivar padi Segreng memperlihatkan
pola yg sama menggunakan perkembangan embriogenesis zigotik awal menggunakan inkubasi
yg lebih usang dalam media A2. Struktur multiseluler yg berkembang menurut mikrospora
terfragmentasi misalnya bintang ditemukan dalam media A2 dalam hari ke-4 (dalam termin
pertumbuhan awal) melalui pembelahan simetris & asimetris. Mikrospora padi bisa dipakai
menjadi galat satu spesies contoh cara lain buat mengamati perkembangan mikrospora
embriogenik.
JURNAL 2
CHARACTERIZATION OF PUTATIVE RKD HOMOLOGOUS GENE WITH MICROSPORE
EMBRYOGENESIS IN THE LOCAL PIGMENTED RICE CULTIVAR ‘SEGRENG’
Padi kultivar `Segreng` berpigmen lokal asal Yogyakarta, Indonesia, berpotensi menjadi
bahan pokok sekaligus obat, karena mengandung pigmen merah dan karoten dalam jumlah
tinggi. Dibandingkan dengan metode konvensional, embriogenesis mikrospora adalah cara yang
lebih singkat untuk menghasilkan tanaman ganda haploid, yang penting dalam pemuliaan
tanaman. Studi tentang mekanisme yang terkait dengan jenis embriogenesis ini diperlukan untuk
meningkatkan efisiensinya. Gen RKD yang mengandung protein domain motif RWPXRK
(RWPRK) berperan penting dalam inisiasi embriogenesis pada tahap awal embriogenesis
zigotik dan somatik. Akan sangat membantu untuk mengeksplorasi keterlibatan gen RKD dalam
menginduksi embriogenesis mikrospora.
Dalam penelitian ini, kami mengisolasi gen RKD yang diduga homolog dari beras cv
berpigmen lokal. `Segreng` dan menganalisis ekspresinya pada tahap awal induksi
embriogenesis mikrospora. Urutan RKD homolog parsial diisolasi dari kultivar ini dan
ditemukan terdiri dari 563 bp yang mengkode 75 urutan asam amino. Analisis bioinformatika
menggunakan penelitian BLASTP menunjukkan bahwa protein RKD yang diduga memiliki
kemiripan yang tinggi dengan protein RKD1 Oryza sativa subsp. japonica cv. Nipponbare dan
protein hipotetis O. sativa subsp. menunjukkan bahwa itu berisi pola RWP-RK. Analisis protein
mengungkapkan adanya urutan asam amino yang dilestarikan di wilayah terminal-N dari protein
RKD Oryza sativa. Perubahan lipat tingkat ekspresi relatif di RKD dibandingkan dengan kontrol
meningkat dari hari pertama ke hari ketiga dan menurun pada hari keempat.
Perlakuan stres yang melibatkan kelaparan dalam medium B dan inkubasi pada 33 ° C
selama 4 hari untuk menginduksi embriogenesis mikrospora pada padi cv. `Segreng` telah
terbukti. Perlakuan stres gabungan ini juga telah dilaporkan memberikan frekuensi tertinggi
mikrospora embrio pada kultivar padi lainnya. Karakteristik mikrospora reaktif yang telah
memperoleh potensi embriogenik berbeda dengan mikrospora non-reaktif. Dia menyatakan
bahwa mikrospora embriogenik bertambah besar dan mengembangkan penampilan seperti
bintang dengan fragmentasi di sitoplasma. Inisiasi pembelahan sel yang menghasilkan struktur
multiseluler terjadi setelah perolehan potensi embriogenik dan kemudian dilanjutkan dengan
pembentukan pola. Dalam percobaan kami sebelumnya, struktur multiseluler diproduksi setelah
mikrospora embriogenik dipindahkan ke media pengembangan praembrionik (media bebas
stres).
Hasil yang telah diidentifikasi mekanisme molekuler pada tahap awal embriogenesis
mikrospora berdasarkan embriogenesis zigotik dan somatik di mana
interaksi regulasi utama telah diidentifikasi. Faktor transkripsi RWPRK yang diduga dikodekan
oleh gen RKD diekspresikan dalam embriogenesis awal untuk mengaktifkan gen yang
berhubungan dengan embriogenesis dan untuk bertindak secara kooperatif dalam membangun
polaritas embrionik. induksi kultur mikrospora padi embrio cv. `Segreng` dengan kondisi
kelaparan dan inkubasi pada suhu 33 C. Tingkat ekspresi gen ini meningkat dan mencapai 15
kali lipat pada hari ketiga dibandingkan dengan kontrol. Data ini mendukung peran keterlibatan
gen RKD dalam akuisisi embriogenik. Indrianto dkk. (2001) melaporkan bahwa setelah
perlakuan stres in vitro, mikrospora embriogenik diinduksi seperti yang ditunjukkan oleh
perbedaan karakteristik seluler yang mengarah pada kompetensi embrionik. Populasi mikrospora
embriogenik yang dikultur meningkat dan berkembang lebih jauh menjadi struktur multiseluler.
Senada dengan Febryanti dkk. (2020) yang menganalisis ekspresi gen AtRKD4 pada anggrek
transgenik Indonesia Dendrobium lineale Rolfe menemukan bahwa AtRKD4 dapat dideteksi
pada stadium yang sangat dini, yaitu 1 hari setelah induksi dengan deksametason dan
thidiazuron.
Analisis bioinformatika mengungkapkan bahwa cDNA sebagian diamplifikasi oleh cv.
`Segreng` yang digunakan dalam penelitian ini mengkodekan protein yang disimpulkan yang
sangat mirip dengan protein RKD1 dari O. sativa subsp. japonica cv. Nipponbar dengan domain
RWP-RK yang dilestarikan. Meskipun perubahan nukleotida tunggal dari urutan mRNA beras
cv. "Segreng" ditemukan setelah penyelarasan dengan urutan referensi, asam amino yang
dihasilkan identik. Oleh karena itu, kami berhipotesis bahwa gen OsRKD juga berperan dalam
embriogenesis mikrospora. Namun, penyelidikan lebih lanjut dari gen ini dan anggota lain dari
gen RKD diperlukan melalui analisis fungsional intensif untuk meningkatkan pemahaman dan
aplikasi.