IDENTIFIKASI MIKROBA PADA SAMPEL SUSU KEDELAI DAN CIMORI

DENGAN PEWARNAAN GRAM

MICROBIA IDENTIFICATION IN SOYA MILK AND CIMORI WITH GRAM STAINING
Bode Haryanto Tarigan, ST.,MT, Yamaniel Ginting, Charissa Dini Sofith
Departemen Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas Sumatera Utara
Jl. Almamater Kampus USU, Medan, 20155, Indonesia
Email: winny8@students.usu.ac.id

Abstrak
Identifikasi mikroba pada sampel susu kedelai dan cimori dengan menggunakan teknik pewarnaan
gram. Tujuan dari percobaan ini adalah mengidentifikasi morfologi dan fisiologi mikroba hasil susu
kedelai dan Cimori, menerangkan mekanisme pewarnaan serta memahami pewarnaan gram. Adapun
bahan yang digunakan pada percobaan ini adalah alkohol, aquadest, aseton, Cimori, iodin, kristal
violet, safranin, dan susu kedelai. Alat-alat yang digunakan pada percobaan ini adalah beaker glass,
erlenmeyer, gelas ukur, kaca objek, kawat inokulasi, lilin, mikroskop, penjepit tabung dan pipet tetes.
Percobaan ini dimulai dengan mengambil sampel dengan menggunakan kawat inokulasi yang telah
disterilkan terlebih dahulu. Bakteri diambil sebanyak 4 loop lalu digoreskan keatas kaca objek lalu
dibiarkan kering di udara terbuka kemudian difiksasi di atas api lilin. Diamati di bawah mikroskop
dan digambar hasil yang didapat. Kaca benda dibasahi dengan kristal violet lalu dimiringkan untuk
membuang cairan yang berlebih. Biarkan satu menit lalu dibilas dengan air. Lakukan percobaan yang
sama untuk iodin, alkohol-aseton, dan safranin. Kaca benda dikeringkan lalu diamati dengan
mikroskop dan hasilnya digambarkan. Hasil percobaan yang didapat adalah morfologi bakteri yang
terdapat pada susu kedelai adalah berbentuk bacillus sedangkan morfologi bakteri yang terdapat pada
Cimori adalah berbentuk coccus. Dari hasil pewarnaan gram, mikroba yang terdapat pada susu
kedelai dan Cimori merupakan bakteri gram negatif karena berwarna merah dan bakteri gram positif
karena berwarna ungu.

Kata kunci: Cimori, gram negatif, gram positif, pewarnaan gram, susu kedelai

Abstract
Identification of microbes has been done in soya milk andCcimori with Gram staining technique. The
purpose of this experiment is to identify microbia morphology and ficiology result from soya milk and
Cimori, to explain the staining mechanism also to understand the gram staining and to explain the
different between the reaction happened. The materials used for this experiment are acetone, alcohol,
aquadest, Cimori, iodine lyes, safranin, soya milk, and violet crystal. The equipments used for this
experiment are beaker glass, candle, drop pipette, erlenmeyer, inoculation wire, measuring cup,
microscope, object glass and tube clamp. This experiment start with take sample with inoculation
ware which has been sterilized first. Take the bacteria 4 loop and scraped onto object glass then
allowed to dry in the open air and then do fixation on a candle flame. Observed under a microscope
and drawn the results obtained. Glass objects moistened with violet crystals then tilted to remove
excess fluid. Let one minute then rinse with water.Done the same treatment for iodine, alcohol-
acetone, and safranin. The glass object is dried and then observed with a microscope and the results
are illustrated. The result of the experiment is that the bacterial morphology found in soya milk is
bacillus while the bacterial morphology found in Cimori is coccus. The results of gram staining,
microbes contained in the coconut oil with cane enzymes and orange juice is gram-negative bacteria
because it is red and gram-positive bacteria because it is purple.

Keywords: Cimori, gram staining, negative gram, positive gram, soya milk

Pendahuluan adalah eukariota. Bakteri adalah mikroorganisme

Mikroorganisme adalah sekelompok
makhluk hidup heterogen yang dari beberapa
kelas yang berbeda. Berdasarkan perbedaan
dalam organisasi seluler dan biokimia, Kingdom
Protista dibagi menjadi dua kelompok yaitu
prokariota dan eukariota. Bakteri dan ganggang
biru adalah prokariota, sedangkan jamur,
ganggang lainnya, jamur lendir, dan protozoa
prokariota yang tidak mengandung klorofil.
Bakteri merupakan uniseluler dan tidak
menunjukkan percabangan yang benar, kecuali
pada bakteri yang lebih tinggi seperti
actinomycetales [1].
Hampir semua bakteri mempunyai stuktur
dan organisasi dasar yang sama walaupun
bentuknya berbeda. Setiap sel terdiri atas lapisan
dinding sel bagian luar yang kaku dan
dibawahnya terdapat membran sel,
semipermiabel. Di dalam membran tersebut
terdapat isi dari sitoplasma termasuk di dalamnya
bahan inti dan berbagai komponen serta enzim
yang dibutuhkan untuk metabolisme dan
pertumbuhan. Tergantung dari jenisnya, bakteri
kadang-kadang mempunyai struktur tambahan
diantaranya yang penting adalah bulu cambuk
(flagella), kapsul (capsules) dan endospora
(endospores). Struktur tersebut sangat penting
untuk pengenalan dan identifikasi bakteri [2].
Bakteri selalu dipertimbangkan sebagai
kelompok yang sangat penting dalam
mikroorganisme, tidak hanya menjadi bagian
yang esensial dari mikrobio bumi tetapi juga
keterlibatannya dalam transformasi kimia, fisika,
dan biologi [3].
Tujuan dari percobaan ini adalah untuk
mengidentifikasi morfologi dan fisiologi mikroba
pada sampel susu kedelai dan Cimori dan untuk
menerangkan mekanisme pewarnaaan mikroba
dan memahami pewarnaan gram pada sampel
susu kedelai dan Cimori.
Pada percobaan ini, sampel susu kedelai
dan Cimori diteliti agar praktikan mampu
mengidentifikasi morfologi dan fisiologi suatu
mikroorganisme dan membuat pewarnaan gram.
Teori
Bakteri adalah sebuah kelompok
mikroorganisme bersel tunggal dengan
konfigurasi selular prokariotik (tidak mempunyai
selubung inti). Bakteri sebagai makhluk hidup
tentu memiliki informasi genetik berupa DNA,
tapi tidak terlokalisasi dalam tempat khusus
(nucleus) dan tidak ada membran inti. DNA pada
bakteri berbentuk sirkuler, panjang dan biasa
disebut nukleoid. DNA bakteri tidak mempunyai
intron dan hanya tersusun atas ekson saja.
Bakteri juga memiliki DNA ekstrakromosomal
yang tergabung menjadi plasmid yang berbentuk
kecil dan sirkuler [4].
Pada umumnya ukuran tubuh bakteri sangat
kecil, umumnya bentuk tubuh bakteri baru dapat
dilihat dengan menggunakan mikroskop dengan
pembesaran 1000 X atau lebih. Satuan ukuran
tubuh bakteri adalah mikrometer atau mikron.
Satu mikron sama dengan 1/1.000 milimeter.
Lebar tubuh umumnya antara 1 sampai 2 mikron
sedang panjangnya antara 2-5 mikron [5].
Bentuk dan ukuran sel bakteri
bervariasi, ukurannya berkisar 0,4-2,0 m.
Bentuk sel bakteri dapat terlihat di bawah
mikroskop cahaya, dapat berbentuk kokus
(bulat), basil (batang), dan spiral. Bentuk sel
kokus terdapat sebagai sel bulat tunggal,
berpasangan (diplokokkus), berantai
(streptokokkus), atau tergantung bidang
pembelahan, dalam empat atau dalam kelompok
seperti buah anggur (stafilokokkus). Bentuk sel
serupa batang biasanya bervariasi, memiliki
panjang mulai dari batang pendek sampai batang
panjang yang melebihi beberapa kali
diameternya. Ujung sel bakteri serupa batang
dapat berupa lingkaran halus, seperti pada
bakteri enterik Salmonella typhosa, atau
berbentuk kotak seperti pada Bacillus anthracis.
Bentuk batang serupa benang panjang yang tidak
dapat dipisahkan menjadi sel tunggal diketahui
sebagai filamen.Bentuk batang fusiform,
meruncing pada kedua ujungnya ditemukan pada
beberapa bakteri rongga mulut dan lambung.
Bakteri batang melengkung bervariasi mulai dari
yang kecil, bentuk koma, atau sedikit uliran
dengan suatu lengkungan tunggal, seperti Vibrio
cholerae, sampai bentuk spiroket panjang,
seperti Borrelia, Treponema, dan Leptospira,
yang memiliki banyak uliran
Faktor-faktor yang mempengaruhi
pertumbuhan bakteri, yaitu sebagai berikut:
a. Temperatur
Pertumbuhan bakteri sangat dipengaruhi oleh
temperatur. Setiap mikroorganisme mempunyai
temperatur optimum yaitu temperatur di mana
terjadi kecepatan pertumbuhan optimal dan
dihasilkan jumlah sel yang maksimal.
Temperatur yang terlalu tinggi dapat
menyebabkan denaturasi protein sedangkan
temperatur yang sangat rendah aktivitas enzim
akan terhenti. Berdasarkan batas temperatur
dibagi atas tiga golongan:
1. Psikrofil, tumbuh pada temperatur
-5 sampai 30 oC dengan optimum
10 sampai 20 oC.
2. Mesofil, tumbuh pada temperatur
10 sampai 45 oC dengan optimum
20 sampai 40 oC.
3. Termofil, tumbuh pada temperatur
25 sampai 80 oC dengan optimum
50 sampai 60 oC.
b. pH
pH optimum bagi kebanyakan bakteri
terletak antara 6,5 sampai 7,5. Namun ada
beberapa mikroorganisme yang dapat
tumbuh pada keadaan yang sangat asam
atau alkali.
c. Tekanan osmosis
Osmosis merupakan perpindahan air
melewati membran semipermeabel karena
ketidakseimbangan material terlarut
dalam media.Medium yang baik untuk
pertumbuhan sel adalah medium isotonis
terhadap sel tersebut. Dalam larutan
hipotonik air akan masuk ke dalam sel
 sehingga menyebabkan sel membengkak,
sedangkan dalam larutan hipertonik air
akan keluar dari sel sehingga membran
plasma mengerut dan lepas dari dinding
sel (plasmolisis)
d. Oksigen
Berdasarkan kebutuhan oksigen
dikenal mikroorganisme dibagi menjadi 2
golongan, yaitu:
1. Bakteri Aerob
Bakteri aerob adalah bakteri yang
memerlukan oksigen untuk memperoleh
energi.
2. Bakteri An-aerob
Bakteri an-aerob adalah bakteri yang
tidak memerlukan oksigen untuk
memperoleh energi. Energi diperoleh dari
perombakan senyawa organik melalui
proses fermentasi. Bakteri an-aerob
dibedakan menjadi bakteri an-aerob
obligat dan bakteri an-aerob fakultatif
e. Nutrisi
Nutrisi merupakan substansi yang
diperlukan untuk biosintesis dan pembentukan
energi. Berdasarkan kebutuhannya, nutrisi
dibedakan menjadi dua yaitu makroelemen
(elemen yang diperlukan dalam jumlah banyak)
dan mikroelemen (traceelement yaitu elemen
nutrisi yang diperlukan dalam jumlah sedikit)
Berdasarkan pewarnaan gram, bakteri dapat
dibedakan menjadi dua golongan, yaitu bakteri
gram positif dan bakteri gram negatif. Bakteri
gram negatif zat lipidnya akan larut selama
pencucian dengan alkohol, pori-pori pada
dinding sel akan membesar, permeabilitas
dinding sel menjadi besar, sehingga zat warna
yang sudah diserap mudah dilepaskan dan
kuman menjadi tidak berwarna. Sedangkan pada
bakteri gram positif akan mengalami denaturasi
protein pada dinding selnya oleh pencucian
dengan alkohol. Protein menjadi keras dan kaku,
pori-pori mengecil, permeabilitas kurang
sehingga kompleks ungu kristal - yodium
dipertahankan dan sel kuman tetap berwarna
ungu[6].
Tujuan dari pewarnaan adalah untuk
memudahkan melihat bakteri dengan mikroskop,
memperjelas ukuran dan bentuk bakteri, untuk
melihat struktur luar dan struktur dalam bakteri
seperti dinding sel dan vakuola, menghasilkan
sifat-sifat fisik dan kimia yang khas daripada
bakteri dengan zat warna, serta meningkatkan
kontras mikroorganisme dengan sekitarnya [7].
Pewarnaan gram merupakan pewarnaan
yang diferensial, yang membagi bakteri menjadi
bakteri gram positif (berwarna ungu) atau bakteri
gram negatif (berwarna pink). Reaksinya
bergantung pada konstitusi dari dinding sel
organisme. Pewarnaan ini hanya memerlukan
beberapa menit untuk mendapatkan hasilnya, dan
mempermudah kita untuk menempatkan bakteri
ke dalam satu atau dua kelompok, gram positif
atau gram negatif. Alasan untuk reaksi
diferensial ini terhadap pewarnaan tidak
dimengerti selama beberapa tahun, tetapi
sekarang terlihat menjadi refleksi dari perbedaan
dalam struktur dinding sel [8].
Dinding sel bakteri gram positif terdiri 40
lapis rangka dasar murein, meliputi 30-70 %
berat kering dinding sel bakteri. Senyawa lain
penyusun dinding sel gram positif adalah
polisakarida yang terikat secara kovalen, dan
asam teikoat yang sangat spesifik [9].
Gram negatif adalah bakteri yang tidak
mempertahankan zat warna metil ungu pada
metode pewarnaan gram. Bakteri gram positif
akan mempertahankan zat warna metil ungu
gelap setelah dicuci dengan alkohol, sementara
bakteri gram-negatif tidak. Pada uji pewarnaan
gram, suatu pewarna penimbal (counterstain)
ditambahkan setelah metil ungu, yang membuat
semua bakteri gram-negatif menjadi berwarna
merah atau merah muda. Pengujian ini berguna
untuk mengklasifikasikan kedua tipe bakteri ini
berdasarkan perbedaan [10].
Sampel yang akan dilihat konsidisi dan
bentuk bakterinya adalah minuman susu kedelai
dan Cimori.
Susu kedelai yang merupakan ekstrak cair
dari seluruh kacang kedelai kaya akan larut
dalam air, protein, karbohidrat dan minyak. Di
dalam susu kedelai terkandung Escherichia coli
merupakan bakteri Gram negatif berbentuk
batang pendek yang, memiliki panjang sekitar 2
m, diameter 0,7 m, lebar 0,4- 0,7m dan
bersifat anaerob fakultatif [11].
Yoghurt merupakan makanan dan minuman
tradisional yang penting di negara-negara Balkan
dan Timur Tengah dan juga sudah lama dikenal
di Eropa Selatan, Asia Selatan, Mesir dan di
sekitar Mediteran. Yoghurt bermanfaat bagi
orang yang tidak tahan terhadap gula susu
(lactose), yang dikenal sebagai penderita "lactose
intolerance" . Karena pada proses pembuatan
yoghurt dapat menurunkan seperempat kadar
gula susu yang ada, maka bagi orang yang
menderita "lactose intolerance", dapat
mengonsumsi yoghurt sebagai sumber bahan
makanan yang bergizi [11].
Metodologi Penelitian
Praktikum Mikrobiologi Teknik Modul
Identifikasi Mikroba ini dilaksanakan di
Laboratorium Mikrobiologi Teknik, Departemen
Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas
Sumatera Utara.
 Bahan-bahan yang digunakan dalam
percobaan adalah alkohol, aquadest, aseton,
Cimori, iodin, kristal violet, safranin, dan susu
kedelai. Peralatan yang digunakan dalam
percobaan adalah beaker glass, erlenmeyer, gelas
ukur, kaca objek, kawat inokulasi, lilin,
mikroskop, penjepit tabung dan pipet tetes
Prosedur percobaan pewarnaan gram
adalah preparat diambil dari susu kedelai dengan
kawat inokulasi yang telah disterilkan dengan
lilin. Bakteri digoreskan ke kaca objek lalu
dibiarkan kering di udara terbuka kemudian
difiksasi. Diamati di bawah mikroskop.
Digambarkan hasil yang didapat. Preparat
dibasahi dengan kristal violet lalu didiamkan 30-
60 detik kemudian dimiringkan untuk membuang
cairan berlebih lalu dicuci dengan air. Kemudian
dibasahi dengan iodin lalu didiamkan 30-60 detik
kemudian dimiringkan untuk membuang cairan
berlebih. Lalu dicuci dengan air dan dilanjutkan
dengan alkohol-aseton lalu didiamkan 30-60
detik kemudian dicuci dengan air. Kemudian
preparat dicuci dengan pewarna lengkap safranin
dan dibiarkan selama 30-60 detik. Preparat
dimiringkan untuk membuang larutan sisa dan
dicuci dengan air. Preparat dikeringkan dengan
tissue lalu diamati dengan mikroskop dan
hasilnya digambarkan. Ulangi prosedur untuk
Cimori.
Hasil dan Pembahasan
Berikut adalah hasil percobaan
Identifikasi Mikroba pada susu kedelai dan
Cimori
Tabel 1. Hasil Percobaan Identifikasi Mikroba
Gambar Bakteri
Morfologi
Sampel Sebelum Sesudah Keterangan
Pewarnaan Pewarnaan
Bakteri
Fermentasi
Susu
Coccus
Kedelai
24 jam
Fermentasi
Cimori Coccus
24 jam
Pewarnaan Gram adalah teknik umum
untuk membedakan bakteri gram positif dan
gram negative. Dalam kebanyakan contoh,
identifikasi awal dan klasifikasi dari bakteri yang
tidak diketahui dapat diketahui dengan
pewarnaan gram [12]. Bakteri gram negatif
adalah kelompok Pewarnaan pada bakteri
dibedakan dalam beberapa komposisi antara
gram positif dan gram negatif dari dinding
selnya. Dinding sel gram positif lebih tebal dari
gram negatif. Oleh karena itu, gram negative
memilki dinding sel yang tidak mampu mengikat
larutan Kristal violet [13]. Bakteri yang terdapat
pada susu kedelai adalah bakteri E. coli yang
merupakan bakteri gram negatif membentuk
koloni yang bundar, cembung, dan halus dengan
tepi yang nyata [13].
Pada percobaan pewarnaan gram, didapat
bahwa pada pewarnaan sampel susu kedelai,
mikroba yang terkandung adalah berbentuk
coccus dan berwarna kemerahan. Mikroba
tersebut tergolong ke dalam gram negatif karena
tidak dapat mempertahankan zat warna kristal
violetnya. Didalam susu kedelai terkandung
bakteri Escherechia coli yang merupakan bakteri
gram negatif. Sehingga, hasil yang didapat dari
percobaan sampel susu kedelai sesuai dengan
teori.
Pada percobaan pewarnaan gram, didapat
bahwa pada pewarnaan sampel Cimori, mikroba
yang terkandung adalah berbentuk coccus dan
berwarna keunguan. Mikroba tersebut tergolong
ke dalam gram positif karena dapat
mempertahankan zat warna kristal violetnya.
Didalam yogurt Cimori terkandung bakteri
Lactobacillus bulgaricus yang merupakan
bakteri gram positif. Sehingga, hasil yang
didapat dari percobaan sampel Cimori sesuai
dengan teori.
Kesimpulan
Mikroorganisme adalah jasad hidup yang
mempunyai ukuran yang sangat kecil. Sampel
yang digunakan dalam percobaan ini adalah susu
kedelai dan Cimori. Morfologi bakteri yang
terdapat pada sampel susu kedelai adalah
berbentuk coccus dan morfologi bakteri yang
terdapat pada sampel Cimori adalah berbentuk
Gram coccus. Dari hasil pewarnaan gram, mikroba
Negatif yang terdapat pada sampel susu kedelai
merupakan bakteri gram negatif karena berwarna
kemerahan dan dari hasil pewarnaan gram,
mikroba yang terdapat pada Cimori merupakan
Gram bakteri gram positif karena berwarna keunguan.
Positif
Ucapan Terima Kasih
Penulis ingin mengucapkan terima kasih
kepada pihak-pihak yang telah banyak
membantu penulis dalam penyusunan jurnal ini.
Pihak-pihak yang dimaksud antara lain adalah
orang tua yang telah memberikan dukungan baik
materil maupun spiritual, Kepala Laboratorium
Mikrobiologi Teknik, Ir. Lilis Sukeksi, M.Sc.,
Dosen Pembimbing penulis, Dr. Bode Haryanto
Tarigan, S.T., M.T., Ph. D., segenap asisten
Laboratorium Mikrobiologi Teknik khususnya
yang menangani modul Identifikasi Mikroba,
Charissa Dini Sofith, dan rekan-rakan mahasiswa [13] Nautiyal s, Jauhari S. Goel N. Nahawal B S.
seangkatan, secara teristimewa Kelompok V Current Trend of Nonfermenting Gram
(lima) Nisti Amalia Sholihah dan Winny yang Negative Bacili in a tectiary cane hospital in
membantu penulis dalam pelaksanaan percobaan Dehradun uttarakhand. Uttakhand,
dan dalam penulisan jurnal ini. SGRRIM&HS. International Journal of
Advanced Research. 2014
Daftar Pustaka
[1] NIOS, Diploma in Medical Laboratory
Technology. 2010. Microbiology:
Morphology and Classification of Bacteria.
[2] Olyvia, Osi Dwi. 2012. Pemeriksaan
Cemaran Mikroba Pada Biskuit Pop Corn
Crackers. Medan: Universitas Sumatera
Utara.
[3] Harwani, Dharmesh. 2013. Recent Advances
in Culturing The Unculturable Bacteria.
International Journal of Recent Scientific
Research Vol 4, Issue 10, pp 1488-1491.
India: Maharaja Ganga Singh University.
[4] Prasetyo U.W, Tommie. 2009. Pola
Resistensi Bakteri Dalam Darah Terhadap
kloramfenikol,Trimethoprim/Sulfametoksazo
l, dan Tetrasiklin Di Laboratorium
Mikrobiologi Klinik Fakultas Kedokteran
Universitas Indonesia (LMK FKUI) Pada
Tahun 2001-2006. Jakarta: Universitas
Indonesia.
[5] Halubangga, Nurwulan. 2013.
Perbandingan Uji Bakteri pada Produk
Fermentasi Jeroan Ikan Cakalang dengan
Lama Penyimpanan yang Berbeda.
Gorontalo : Universitas Negeri Gorontalo.
[6] Widyawati, Barokah Nugraheni. 2010. Uji
Sensitivitas Bakteri Gram Positif dan
Negatif Isolat Laboratorium Mikrobiologi
Unimus terhadap Penicilin, Tetrasiklin dan
Khloramfenikol. Semarang: Universitas
Muhammadiyah Semarang.
[7] Yulviza, Cut. 2013. Isolasi dan Identifikasi
Bakteri Probiotik pada Rastrelliger sp.
Biospecies. Vol. 6. No.2, hal. 1-7.
[8] Hogg, Stuart. 2005. Essential Microbiolgy.
England: John Wiley & Sons Ltd.
[9] Sumarsih, Sri. 2003. Mikrobiologi Dasar.
Fakultas Pertanian UPN VETERAN:
Yogyakarta .
[10] Kusmayani, Sari, Wida, Hanayasashi S.
MA., Faisal Datu Sefa. 2010. Identifikasi
Mikroba Berdasarkan Sifat Kimiawi.
Jatinangor: Universitas Padjajaran.
[11] Kusumah, Hendra. 2012. Analisis Optimasi
Produksi Yoghurt pada PT. Cimory Cisarua
Bogor. Bogor: Institut Pertanian Bogor.
[12] Dash, Chinmaa. Payyappili Rajan. J. KOH
String and Vancomycin Susceptibilty Test as
an Alternative Method to Gram Straining.
India, City Medical College. Journal of
International Medicine and Dentistry. 2016