TEKNIK ASEPTIK BIAKAN MIKROB

Ahmad Shaufi1, Gusti Nur Aida Fasha2, dan Hasrul Satria Nur2,3
1. Program studi D3 Analisis Farmasi dan Makanan, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A. Yani
Km 36, Banjarbaru, 70713, Indonesia
2. Program Studi Biologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A. Yan Km 36, Banjarbaru, 70713
3. Laboratorium Mikrobiologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A. Yani Km 35,8 Banjabaru,
70713, Indonesia

E-mail: ashaufiberuntung9@gmail.com

_____________________________________________________________________
Abstrak
Sebelum benar-benar dilakukan proses kultur mikroorganisme, pertama kali kita harus mempertimbangkan bagaimana agar
tidak terjadi kontaminasi. Mikroorganisme ada dimana-mana. Karena ukurannya yang sangat kecil, mereka mudah lepas
dalam udara dan permukaan. Maka dari itu, kita harus mensterilisasikan medium kultur secepatnya setelah preparasi untuk
pemindahan mikroorganisme siap dikontaminasikan, ini biasanya terbunuh. Bagaimanapun, itu sama pentingnya untuk
tindakan pencegahan sampai penanganan berikutnya mediun kultur harus tetap steril. Demikian materi yang lain yang akan
kontak juga harus tetap terjaga kesterilannya. Teknik yang digunakan dalam pencegahan kontaminasi hingga kultur
manipulasi dan media kultur steril disebut teknik aseptik. Keunggulan itu dibutuhkan keberhasilan
dalam laboratorium mikrobiologi, dan salah satu cara belajar dengan pendamping mikrobilogi. teknik pemindahan biakan
mikrob murni yaitu dari sumber : media cair (broth), media agar miring (slant), media agar tegak (agar deep), media cawan
agar. Jadi, jika kita ingin memindahkan biakan kultur murni, kita harus tahu dan paham tentang teknik pemindahan bakteri
yang biasa disebut dengan teknik aseptik biakan mikrob.

Keywords: teknik aseptik, borth, slant, agar deep, cawan agar

___________________________________________________________________________________________________

1. Pendahuluan molekul misalnya dengan senyawasenyawa fenolik,

Mikroorganisme terdapat di berbagai tempat seperti
tanah, debu, air, udara, kulit dan selaput lendir.
Mikroorganisme dapat berupa bakteri, fungi, protozoa
dan lain-lain. Mikroorganisme mudah terhembus udara
dan menyebar ke mana-mana karena ukuran selnya kecil
dan ringan. Untuk itu perlu dilakukan usaha-usaha
pengendalian dengan teknik aseptik biakan mikrob.
Mikroorganisme dapat menyebabkan banyak kerusakan.
Pengendalian mikroorganisme ditujukan untuk mencegah
penyebaran penyakit, membasmi mikroorganisme pada
inang, serta mencegah pembusukan dan kerusakan bahan.
Mikroorganisme dapat dihambat atau dibunuh secara
fisik dan kimia. Secara fisik melalui suhu, tekanan,
radiasi dan penyaringan, misalnya sterilisasi, pembakaran
atau sanitasi. Secara kimia melalui perubahan komposisi
alkohol, klor, iodium dan etilen oksida. Keefektifan zat
antimikrobialtergantung konsentrasi, jumlah dan
jenis mikroorganisme, suhu, bahan organik terlarut dan
pH [3].
Sebelum benar-benar dilakukan proses kultur
mikroorganisme, pertama kali kita harus
mempertimbangkan bagaimana agar tidak terjadi
kontaminasi. Mikroorganisme ada dimana-mana. Karena
ukurannya yang sangat kecil, mereka mudah lepas dalam
udara dan permukaan. Maka dari itu, kita harus
mensterilisasikan medium kultur secepatnya setelah
preparasi untuk pemindahan mikroorganisme siap
dikontaminasikan, ini biasanya terbunuh. Bagaimanapun,
itu sama pentingnya untuk tindakan pencegahan sampai
penanganan berikutnya mediun kultur harus tetap steril.

1
Demikian materi yang lain yang akan kontak juga harus
tetap terjaga kesterilannya [1].
Teknik yang digunakan dalam pencegahan kontaminasi
hingga kultur manipulasi dan media kultur steril disebut
teknik aseptik. Keunggulan itu dibutuhkan keberhasilan
dalam laboratorium mikrobiologi, dan salah satu cara
belajar dengan pendamping mikrobilogi. Kontaminasi
udara paling sering menjadi masalah karena udara selalu
kontak dengan partikel debu dan umumnya banyak
komunitas mikroorganisme didalamnya. Ketika wadah
dibuka maka segera ditangani agar tidak terkontaminasi
dengan udara sekitar. Transfer aseptik pada kultur dari
salah satu medium ke medium yang lain harus lihai
dengan loop inokulasi atau jarum harus disterilkan oleh
pembakaran pada nyala api. Dalam pertumbuhan kultur
dibutuhkan tempat yang mudah dipindahkan ke
permukaan agar datar, dimana pertumbuhan suatu koloni
berasal dari pertumbuhan dan pembelahan sel tunggal
[1].
Media adalah suatu substansi yang terdiri dari campuran
zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan untuk
pertumbuhan dan perkembang biakan jasad renik
(mikroorganisme) . Media dapat berbentuk padat, cair
dan semi padat (semi solid). Didalam laboratorium
mikrobiologi, kultur media sangat penting untuk isolasi,
pengujian sifat-sifat phisis dan biokhemis bakteria serta
untuk diagnosa suatu penyakit. Zat makanan yang
dibutuhkan bakteri pada umumnya sangat bervariasi,
dapat berbentuk senyawa-senyawa organik sederhana
atau senyawa-senyawa organik komplek (majemuk).
Untuk menumbuhkan bakteri pada tanah cukup dengan
mempergunakan senyawa organik sederhana, tetapi
bakteri patogen membutuhkan media yang mengandung
ekstrak daging bagi pertumbuhan dan perkembang
biakannya. Ekstrak daging mengandung antara lain :
asam-asam amino dan pepton [4].
Identifikasi biakan mikroorganisme seringkali
memerlukan pemindahan ke biakan segar tanpa terjadi
pencemaran. Pemindahan mikroorganisme ini dilakukan
dengan teknik aseptik untuk mempertahankan kemurnian
biakan selama pemindahan berulangkali.
Mikroorganisme dapat ditumbuhkan dalam biakan cair
atau padat. Kekeruhan dalam kaldu menunjukkan
terjadinya pertumbuhan mikroorganisme. Bila
mikroorganisme menumpuk pada dasar tabung maka
akan membentuk sedimen, sedangkan pada permukaan
kaldu pertumbuhannya terlihat sebagai pelikel [2].
Pertumbuhan mikroorganisme dalam kaldu seringkali
menggambarkan aktivitas metabolismenya. Mikroba
aerob obligat berkembang biak pada lapisan permukaan
2
karena pada bagian ini kandungan oksigen tinggi. Selain
dalam media cair, mikroorganisme juga memperlihatkan
pertumbuhan dengan ciri tertentu dalam biakan padat
seperti agar miring atau lempengan agar. Agar miring
lazimnya digunakan untuk menyimpan biakan murni
sedangkan agar lempengan lazimnya digunakan untuk
memurnikan mikroorganisme [2].
Setetes inokolum diletakan dalam sebuah medium agar
nutrien dalam cawan petridish dan dengan menggunakan
batang kaca yang bengkok dan steril. Inokulasi itu
disebarkan dalam medium batang yang sama dapat
digunakan dapat menginokulasikan pinggan kedua untuk
dapat menjamin penyebaran bakteri yang merata dengan
baik. Pada beberapa pinggan akan muncul koloni koloni
yang terpisah-pisah [5].
Isolasi menggunakan media cair dengan cara
pengenceran. Dasar melakukan pengenceran adalah
penurunan jumlah mikroorganisme sehingga pada suatu
saat hanya ditemukan satu sel di dalam tabung. Metode
tusuk yaitu dengan dengan cara meneteskan atau
menusukan ujung jarum ose yang didalamnya terdapat
inokolum, kemudian dimasukkan ke dalam media [5].
2. Metode Praktikum
Metode praktikum yang digunakan pada teknik aseptic
biakan mikrob ini umumnya biakan murni mikrob yang
diperoleh dari tahapan yang relative panjang yaitu
dimulai dari tahap isolasi bakteri, tahap sub-kultur
bakteri, hingga diperolehnya kultur murni. Kultur murni
mikrob yang diperoleh dari hasil pemurnian dengan
berbagai teknik yaitu dengan teknik cawan tuang, cawan
tebar, dan cawan gores. Setelah biakan mikrob ini
diperoleh, selanjutnya biakan murni mikrob ini disimpan
pada media penyimpanan, sehingga mikrob dapat tetap
hidup dengan aktifitas fisiologi yang tidak mengalami
perubahan. Biakan murni mikrob ini disimpan dengan
waktu simpan yang pendek hingga puluhan tahun,
kesemuanya ini tergantung pada metode penyimpan
mikrob. Setelah penyimpanan biakan mikrob perlu
dilakukan peremajaan biakkan secara berkala.
Peremajaan ini dilakukan dengan cara memindahkan
biakan murni mikrob kemedia pertumbuhan mikrob yang
baru. Teknik pemdahan aseptic dapat dilakukan dari
sumber mikrob pada media agar miring, media cawan
agar, media cair, dan media agar tegak dalam.
Pada praktikum ini teknik pemindahan biakan mikrob
murni yaitu dari sumber : media cair (broth) dipindahkan
kemedia agar miring (slant) *isolate BTB, media agar
miring (slant) dipindahkan kemedia cari (broth) *isolate
BRT, media agar miring (slant) dipindahkan kemedia
agar tegak (agar deep) *isolate BRT, media cawan agar
dipindahkan kemedia agar piring (slant) *isolate SJSK
Prosedur kerja
1. Cara menggunakan laminar flow cabinet
Pertama sebelum meggunakan nyalakan terlebih dahulu
UV laminar dengan cara menekan tombol UV. Diamkan
selama 30 menit, fungsinya untuk mensterilkan udara.
Kemudian dimatikan setelah itu nyalakan kembali lampu
blower (berbarengan pada saat membuka kaca laminar)
fungsinya untuk udara masuk. Setelah dinyalakan
semprot meja dengan alcohol 70% letakkan alat-alat yang
ingin digunakan dan semprot juga tangan menggunakan
alcohol 70%. Setelah alat dan bahan siap, nyalakan api
spiritus (pada saat bekerja, usahakan spiritus yang
menyala tidak ditinggalkan) dan mulailah bekerja dengan
prosedur yang telah ditetapkan.
2. Cara memindahkan bakteri media cair (broth)
kemedia agar miring (slant)
Semprot terlebih dahulu meja dan tangan menggunakan
alcohol 70%. Kemudian sterilkan jarum ose dengan cara
dicelupkan ke alcohol sebanyak 3x. Setiap pemasukan
pertama pada alcohol langsung disterilkan dibawah nyala
api bunsen sampai jarum ose berwarna merah berpijar,
lakukan pengerjaan ini sebanyak 3x, hal tersebut
dilakukan untuk memastikan jarum ose steril dan tidak
ada mikroorganisme yang menempel pada jarum ose
yang berakibat pada terkontaminasinya bakteri murni,
kemudian jarum ose didinginkan sebentar agar pada saat
pengambilan bakteri tidak mati karena jarum ose yang
panas. Setelah itu, panaskan mulut tabung reaksi diatas
nyala api spiritus kemudian ambil biakan bakteri murni
dengan ujung jarum ose dan goreskan pada media agar
miring secara zig-zag. Setelah selesai, panaskan kembali
mulut tabung reaksi dan jarum ose dengan mencelupkan
ujungnya kedalam alcohol 70% dan panaskan diatas
nyala api spiritus.
3. Cara memindahkan bakteri dari media agar miring
(slant) kemedia agar tegak dalam (agar deep)
Semprot terlebih dahulu meja dan tangan menggunakan
alcohol 70%. Kemudian sterilkan jarum ose dengan cara
dicelupkan ke alcohol sebanyak 3x. Setiap pemasukan
pertama pada alcohol langsung disterilkan dibawah nyala
api bunsen sampai jarum ose berwarna merah berpijar,
lakukan pengerjaan ini sebanyak 3x, hal tersebut
dilakukan untuk memastikan jarum ose steril dan tidak
ada mikroorganisme yang menempel pada jarum ose
yang berakibat pada terkontaminasinya bakteri murni,
kemudian jarum ose didinginkan sebentar agar pada saat
pengambilan bakteri tidak mati karena jarum ose yang
panas. Setelah itu, panaskan mulut tabung reaksi diatas
nyala api spiritus kemudian ambil biakan bakteri murni
dengan ujung jarum ose dan goreskan pada media agar
miring secara zig-zag. Panaskan kembali mulut tabung
3
reaksi, setelah selesai dipanaskan sumbat dengan
penyumbat. Ambil media agar tegak dalam, buka sumbat
lalu panaskan mulut tabung reaksi. setelah itu, tusuk
menggunakan jarum ose lurus yang sudah ada
bakterinya. Panaskan kembali mulut tabung reaksi
kemudian tutup dengan sumbat.
4. Cara memindahkan bakteri dari media cawan agar
kemedia agar miring (slant)
Semprot terlebih dahulu meja dan tangan menggunakan
alcohol 70%. Kemudian sterilkan jarum ose dengan cara
dicelupkan ke alcohol sebanyak 3x. Setiap pemasukan
pertama pada alcohol langsung disterilkan dibawah nyala
api bunsen sampai jarum ose berwarna merah berpijar,
lakukan pengerjaan ini sebanyak 3x, hal tersebut
dilakukan untuk memastikan jarum ose steril dan tidak
ada mikroorganisme yang menempel pada jarum ose
yang berakibat pada terkontaminasinya bakteri murni,
kemudian jarum ose didinginkan sebentar agar pada saat
pengambilan bakteri tidak mati karena jarum ose yang
panas. Panaskan ujung cawan agar disamping api spiritus
dengan cara diputar menggunakan lima jari tangan, ambil
bakteri pada media cawan agar seujung jarum ose yang
lurus. Ambil media agar miring, buka sumbat, panaskan
mulut tabung reaksi, sebarkan bakteri pada media agar
miring secara zig-zag. Kemudian panaskan kembali
mulut tabung reaksi, tutup mulut tanbung dengan sumbat.
Panaskan kembali jarum ose dengan mencelupkannya
kedalam alcohol 70% dan dibakar diatas api spiritus.
3. Hasil dan Pembahasan
Teknik aseptic biakan mikrob merupakan salah satu
upaya untuk mencegah terjadinya kontaminasi pada
biakan murni yang ingin dipindahkan kemedia lain dan
mencegah terjadinya infeksi dari mikroorganisme
tersebut selama pemindahan berlangsung. Selama
pemindahan biakan murni mikrob ini risiko terjadinya
kontaminasi sangat tinggi. Oleh karena itu diadakannya
dengan menguasai teknik aseptic ini selama pengerjaan
dilabarotorium mikrobiologi dan juga teknik aseptic ini
sebagai solusi untuk mencegah terjadinya factor
pengkontaminan. Teknik pemindahan aseptic ini dapat
dilakukan dari sumber mikrob pada media agar miring,
media cawan agar, media cair, media agar tegak dalam.
Gambar 1. Mensterilkan tangan dan meja menggunakan
alcohol 70%
Gambar 2. Mensterilkan jarum ose dengan mencelupkan
ke alkohol dan dipanaskan diatas nyala api
spiritus sampai berpijar sebanyak 3x
Gambar 3. Teknik pemindahan bakteri dari media cair
kemedia agar miring dengan cara zig-zag
(Isolat BTB)
Gambar 4. Teknik pemindahan bakteri dari media agar
miring kemedia cair dengan cara digoreskan
secara zig-zag (Isolat BRT)
4
Gambar 6. Teknik pemindahan bakteri dari media agar
miring kemedia agar tegak (Isolat BRT)
Gambar 7. Teknik pemindahan bakteri dari media
cawan agar kemedia agar miring dengan cara
digoreskan secara zig-zag (Isolat SJSK)
Pada praktikum kali ini yang digunakan adalah media
cair dan media padat. Media berdasarkan konsistensinya
dapat dibedakan menjadi tiga yaitu, media cair, media
semi-padat, dan media padat. Nutrient agar (NA)
merupakan media yang digunakan untuk menumbuhkan
bakteri, media ini dipanaskan agar mencair, kemudian
sedikit didinginkan dengan suhu sekitar 40-500C.
Pendinginan ini dilakukan untuk mendapatkan suhu yang
ideal sehingga tidak mengeras namun tidak terlalu panas
yang bisa mengakibatkan kematian pada pada koloni
yang dibiakan.
Teknik aseptic ini juga digunakan sepanjang kegiatan
berlangsung, baik alat, bahan, lingkungan sekitar maupun
personilnya (praktikan). Untuk alat dan bahan semua
praktikan dapat menerapkan metode sterilisasi.
Penguasaan teknik aseptik ini sangat diperlukan Karena
hal tersebut sangat diperlukan dalam keberhasilan
dilaboratorium mikrobiologi dan hal ini merupakan
metode awal yang dipelajari oleh ahli mikrobiologi.
4. Kesimpulan
Jadi, pada saat melakukan praktikum teknik aseptik
biakan mikrob ini harus memerlukan ketelitian dan
keakuratan yang tinggi serta kesterilan harus selalu
dijaga agar terbebas dari kontaminasi. Maka dari itu,
Penguasaan teknik aseptik ini sangat diperlukan Karena
hal tersebut sangat diperlukan dalam keberhasilan
dilaboratorium mikrobiologi.

Pemindahan dengan teknik aseptik yaitu memindahkan

mikroba kemedia cawan agar, agar miring, agar tegak
dalam, dan media cair harus dilakukan dengan hati-hati
agar bakteri yang akan dibiakan tidak terkontaminasi
oleh mikroorganisme lain, sehingga biakan yang tumbuh
dalam media benar biakan murni. Dalam hal pemindahan
biakan murni ada beberapa yang mempengaruhi
kegagalan pada saat pemindahan yaitu ketidakbersihan
dan keteledoran dalam praktikum yang dilakukan oleh
praktikan pada saat melakukan percobaan dan juga bisa
jadi karena kesalahan teknik dalam pemindahan bakteri,
kurangnya inkubasi, dan pengambilan bakteri yang
sangat sedikit bahkan tidak terambil.

Daftar Acuan
[1] Cappuccino, J.G and N. Sherman. 1983.
Microbiology: a Laboratory Manual.
AdisonWesley Publishing company: California.

[2] Lay, B. W. 1994. Analisis Mikroba di

Laboratorium. Raja Grafindo Persada. Jakarta.

[3] Pelczar, M.J. dan E.C.S. Chan. 1988. Dasar-dasar

Mikrobiologi. Jakarta: UI Press.

[4] Supar & Ibrohim. 1981. Kultur Media dan Cara

Pembuatannya. Balai Penelitian Penyakit Hewan
Bogor.

[5] Winarni, D. 1997. Diktat Teknik Fermentasi.

Program Studi D3 Teknik Kimia FTI-ITS :
Surabaya.