LAPORAN AKHIR PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI

BLOK KELUHAN BERKAITAN DENGAN SISTEM UROGENITAL

DIVISI MIKROBIOLOGI
FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS LAMBUNG MANGKURAT

NAMA : UMMU NUR AINUN SAJIDA

NIM : 1910911120031
KELOMPOK :7
JUDUL PRAKTIKUM : PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI PEMERIKSAAN
KANDIDIASIS
MNAMA ASISTEN PRAKTIKUM : NURAZIZAH YUNUS
ALAT DAN BAHAN :
1. Alat yang digunakan: pot urin steril, pediatric bag, kateter dan kantung, loop urin steril
2. Bahan: sekret vagina/swab vagina.
3. Media steril untuk pembiakan urin: lempeng agar darah, MacConkey, Sabouraud

CARA KERJA :
Pemeriksaan Candida penyebab Vulvovaginitis:
1. Pemeriksaan mikroskopis, untuk melihat adanya blastokonidia, dapat dilakukan dengan
pembuatan preparat hapusan dengan pengecatan Giemsa atau Gram. Juga dilakukan uji
amin yang hasilnya negatif.
2. Pemeriksaan maksroskopis dengan biakan spesimen pada media isolasi:
a. Isolasi Candida sp. Pada media Sabauraud dekstose Agar (SGA+) yang diinkubasi pada
suhu kamar, selama 2-5 hari, akan memperlihatkan koloni “yeast like colony”.
b. Isolasi Candida albicans pada media Corn Meal Tween 80 Agar (CMT agar), akan
memperlihatkan stuktur blastokonidia Candida albicans.
c. Hasil fermentasi pada media gula-gula akan membedakan sifat jenis-jenis Candida sp
d. Untuk identifikasi jenis Candida pada suatu spesimen juga dapat menggunakan media
CHROM agar atau Pagano-Levin agar.
e. Tes germ- tube, merupakan tes yang cepat membedakan antara spesies C. albicans dan
C. dubliniensis dengan jenis Candida lainnya. Cara Tes Germ-Tube adalah sebagai
berikut:
 - Inokulum yeast/Candida sp. diinkubasi dalam serum selama 3 jam pada suhu 37°C.
- Dibuat preparat dan dilakukan pengecatan Gram atau Giemsa. Hasil pemeriksaan
secara mikroskopis jenis C. albicans dan C. dubliniensis akan memperlihatkan “germ
tube”.

Peragaan:
1. Alat yang digunakan: pot urin steril, pediatric bag,kateter dan kantung, loop urin steril
2. Media steril untuk pembiakan urin: lempeng agar darah, MacConkey, Sabouraud
3. Pewarnaan Gram dari sampel urin
4. Biakan bakteri yang diisolasi dari urin ditumbuhkan pada agar darah dan agar MacConkey
(Pemeriksaan makroskopis):
a. Escherichia coli
b. Staphylococcus aureus
c. Pseudomonas aeruginosa
d. Proteus mirabilis
e. Candida albicans
5. Pemeriksaan mikroskopik (pewarnaan Gram) dari:
a. Escherichia coli
b. Staphylococcus aureus
c. Pseudomonas aeruginosa
d. Proteus mirobilis
e. Candida albicans
6. Uji biokimia:
a. Uji biokimia dari Escherichia coli
b. Biakan Staphylococcus sp. pada MSA
c. Uji koagulase dan uji staphylase dari Staphylococcus sp.
d. Uji novobiocin dari Staphylococcus sp.
PEMBAHASAN

Beberapa spesies dari genus ragi Candida mampu menyebabkan kandidiasis.

Kandidiasis adalah mikosis sistemik yang paling umum, dan agen yang paling umum adalah C.
albicans, Candida parapsilosis, Candida glabrata, Candida tropicalis, Candida
guilliermondii, dan Candida dubliniensis. Dalam kultur atau jaringan, spesies Candida tumbuh
sebagai sel ragi tunas berbentuk oval (berukuran 3-6 m). Mereka juga membentuk pseudohifa
ketika kuncup terus tumbuh tetapi gagal melepaskan diri, menghasilkan rantai sel memanjang
yang terjepit atau menyempit pada sekat antar sel. Tidak seperti spesies Candida lainnya, C.
albicans bersifat dimorfik; selain ragi dan pseudohifa, juga dapat menghasilkan hifa sejati Pada
media agar atau dalam waktu 24 jam pada suhu 37°C atau suhu kamar, spesies Candida
menghasilkan koloni lembut berwarna krem dengan bau ragi. Pseudohyphae terlihat sebagai
pertumbuhan terendam di bawah permukaan agar-agar. Dua tes morfologi sederhana
membedakan C. albicans, patogen yang paling umum, dari spesies Candida lainnya: Setelah
inkubasi dalam serum selama sekitar 90 menit pada suhu 37°C, sel ragi C. albicans akan mulai
membentuk hifa sejati atau tabung kuman an pada media yang kekurangan nutrisi C. albicans
menghasilkan klamidospora yang besar dan bulat. Uji fermentasi dan asimilasi gula dapat
digunakan untuk mengkonfirmasi identifikasi dan spesiasi isolat Candida yang lebih umum,
seperti C. tropicalis, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Candida kefyr, C. krusei, dan C.
lusitaniae. Kandidiasis kulit atau mukosa terbentuk oleh peningkatan sensus lokal Candida dan
kerusakan pada kulit atau epitel yang memungkinkan invasi lokal oleh ragi dan pseudohifa.
Histologi lesi kulit atau mukokutan ditandai dengan reaksi inflamasi yang bervariasi dari abses
piogenik hingga granuloma kronis. Lesi mengandung banyak sel ragi tunas dan pseudohifa.
Pemberian antibiotik antibakteri spektrum luas sering menyebabkan peningkatan besar populasi
endogen Candida di saluran pencernaan serta mukosa mulut dan vagina. Kandidiasis sistemik
terjadi ketika Candida memasuki aliran darah dan pertahanan inang fagosit bawaan tidak
memadai untuk menahan pertumbuhan dan penyebaran ragi. Ragi dapat memasuki sirkulasi
dengan melintasi mukosa usus. Banyak kasus nosokomial disebabkan oleh kontaminasi
indwelling kateter intravena dengan Candida. Setelah dalam sirkulasi, Candida dapat
menginfeksi ginjal, menempel pada katup jantung prostetik, atau menghasilkan infeksi candida
hampir di mana saja (misalnya, radang sendi, meningitis, dan endoftalmitis). Pertahanan
pejamu yang kritis terhadap kandidiasis sistemik adalah jumlah neutrofil fungsional yang cukup
yang mampu menelan dan membunuh sel-sel ragi. Sel-sel Candida menguraikan polisakarida,
protein, dan glikoprotein yang tidak hanya merangsang pertahanan inang tetapi juga
memfasilitasi perlekatan dan invasi sel inang. C. albicans dan spesies Candida lainnya
menghasilkan famili glikoprotein permukaan aglutinin-like sequence (ALS), beberapa di
antaranya adalah adhesin yang mengikat reseptor membran sel inang dan memediasi perlekatan
pada sel epitel atau endotel. Tindakan pencegahan yang paling penting adalah untuk
menghindari gangguan keseimbangan normal mikrobiota dan pertahanan inang yang utuh.
Kandidiasis tidak menular, karena hampir semua orang biasanya mengandung organisme
tersebut. Namun, studi epidemiologi molekuler telah mendokumentasikan wabah yang
disebabkan oleh transmisi nosokomial strain tertentu untuk pasien yang rentan (misalnya,
leukemia, transplantasi, neonatus, dan pasien ICU). Spesies Candida adalah isolat kultur darah
keempat yang paling umum dan kematian yang disebabkan berkisar antara 30% hingga 40%.1
Diagnosis laboratorium kandidiasis melibatkan pengadaan bahan klinis yang sesuai diikuti
dengan mikroskopis langsung pemeriksaan dan kultur. Cara yang paling sensitif untuk
mendiagnosis infeksi jamur adalah biasanya dianggap sebagai isolasi jamur dalam kultur.
Kultur juga diperlukan dalam banyak hal untuk mengidentifikasi agen etiologi. Pemulihan
optimal jamur dari klinis bahan tergantung pada pengadaan klinis yang memadai spesimen dan
kemudian menggunakan metode kultur yang akan memastikan pemulihan organisme yang
biasanya ada di dalam jumlah kecil dan tumbuh lambat. Tidak ada kultur tunggal media cukup
untuk mengisolasi semua jamur yang penting secara medis, dan secara umum diterima bahwa
setidaknya dua jenis media, selektif dan nonselektif, digunakan. Medium non selektif akan
memungkinkan pertumbuhan ragi dan jamur yang tumbuh dengan cepat, serta jamur rewel yang
tumbuh lebih lambat. Jamur akan tumbuh di sebagian besar media yang digunakan untuk
bakteri; Namun, pertumbuhan mungkin lambat, dan media yang lebih diperkaya, seperti agar
brainheart infus (BHI) atau SABHI (Sabouraud dextrose dan BHI) agar, direkomendasikan.
CHROMagar Candida adalah salah satu media yang dapat digunakan untuk isolasi simultan
dan identifikasi dugaan Candida albicans, Candida tropicalis, dan Candida krusei.
CHROMagar selektif untuk jamur, dan penggunaan media ini mempersingkat waktu untuk
identifikasi dugaan organisme dan memungkinkan deteksi lebih mudah dari beberapa spesies
ragi hadir dalam spesimen berdasarkan warna karakteristik koloni yang dihasilkan oleh spesies
Candida yang berbeda. CHROMagar dapat digabungkan dengan rapid trehalosa test (RAT)
untuk identifikasi Candida glabrata dan telah terbukti berguna dalam identifikasi cepat dan
penentuan kerentanan flukonazol spesies Candida langsung dari kultur darah positif.
Kromogenik media lainnya dan rapid colorimetric test berdasarkan deteksi dari l-proline
aminopeptidase dan beta-galactose-aminidase telah dikembangkan secara khusus untuk
identifikasi cepat dari C. albicans. Jamur tumbuh optimal pada suhu 25°C hingga 30°C,
meskipun sebagian besar spesies Candida dapat dipulihkan dari kultur darah diinkubasi pada
suhu 35°C hingga 37°C. Bentuk seperti ragi yang sedang bertunas dan pseudohifa mudah
dideteksi saat pemeriksaan dengan mikroskop fluoresensi. Kultur aktif media mikologi standar
akan memungkinkan isolasi organisme untuk identifikasi selanjutnya menjadi spesies. Semakin
banyak, spesimen tersebut dilapisi langsung pada media kromogenik selektif seperti
CHROMagar Candida, yang memungkinkan deteksi spesies campuran Candida dalam
spesimen dan identifikasi cepat C. albicans (koloni hijau) dan C. tropicalis (koloni biru)
berdasarkan kenampakan morfologinya. Semua jenis infeksi lainnya memerlukan kultur untuk
diagnosis kecuali jaringan dapat diperoleh untuk pemeriksaan histopatologis. Bila
memungkinkan, lesi kulit harus dibiopsi dan bagian histologis diwarnai dengan GMS atau
pewarnaan khusus jamur lainnya. Visualisasi karakteristik ragi tunas dan pseudohifa cukup
untuk diagnosis kandidiasis. Kultur darah, jaringan, dan cairan tubuh yang biasanya steril juga
harus dilakukan. Identifikasi isolat Candida hingga tingkat spesies menjadi penting, mengingat
adanya perbedaan respon terhadap berbagai agen antijamur. Hal ini dapat dicapai dengan
menggunakan uji tabung germinal (C. albicans), berbagai media/uji kromogenik, asam nukleat
peptida-fluoresensi hibridisasi in situ (PNA-FISH), dan asimilasi gula yang tersedia secara
komersial panel.2 Pemeriksaan mikroskopis dapat dilakukan dengan larutan garam fisiologis,
kalium hidroksida 10% ( KOH), atau pewarnaan Gram dari discharge vagina atau
pseudomembran untuk mencari ragi tunas, pseudohifa atau hifa. Beberapa temuan pada
pemeriksaan mikroskopis adalah kandida gram positif, pseudohifa yang melimpah tetapi ragi
tunas jarang ditemukan. Patogen paling umum yang menyebabkan kandidiasis vulvovaginal
berulang adalah candida albicans. Pemeriksaan in vitro menunjukkan banyak pseudohifa yang
dapat dideteksi dengan pewarnaan gram dari discharge vagina. Pemeriksaan mikroskopis
dengan salin fisiologis dan KOH 10% memiliki sensitivitas sekitar 40-70%. Vagina dengan
kandidiasis vulvovaginal rekuren sebagian besar memiliki pH normal (4-4,5), namun
peningkatan pH harus dipertimbangkan sebagai infeksi lain seperti vaginosis bakteri,
trikomoniasis, atau infeksi ganda. Pemeriksaan kolpositologi dengan teknik Papanicolau akan
dapat menunjukkan pseudohifa/pseudomiselium dan blastospora. Pemeriksaan DNA homologi
akan menunjukkan hasil yang akurat dalam beberapa jam. Pemeriksaan lain untuk
mendiagnosis kandidiasis vulvovaginal rekuren adalah Polymerase Chain Reaction (PCR)
untuk mendeteksi spesies spesifik Candida. Sekitar 55% kasus kultur jamur positif akan
memiliki hasil pemeriksaan mikroskopis negatif. Media terbaik untuk kasus bergejala dengan
pH normal dan hasil mikroskopis negatif adalah agar Sabouraud.Tujuan kultur jamur adalah
untuk menentukan spesies spesifik sebagai etiologi dari setiap kasus. Kultur harus diikuti
dengan pemeriksaan mikrobiologi untuk menentukan sensitivitas agen azol terhadap candida
sp.3 Pada pemeriksaan germ tube, semua spesimen diangkut ke laboratorium tanpa penundaan,
sebaiknya dalam waktu 30 menit setelah pengumpulan, jika penundaan tidak dapat dihindari,
mereka disimpan pada suhu 4°C sampai diangkut ke laboratorium. Pewarnaan Gram langsung
dilakukan untuk skrining awal semua spesimen. Setelah itu digoreskan pada agar miring
Sabouraud dextrose agar (SDA) dan diinkubasi pada suhu 37 °C selama 48 jam sebelum
dibuang sebagai negatif. Pertumbuhan yang muncul pada SDA miring diidentifikasi dengan
metode konvensional-lactofenol cotton blue mount, pewarnaan Gram, uji tabung kuman,
pertumbuhan pada agar cornmeal tween 80, uji asimilasi karbohidrat dan uji fermentasi
karbohidrat. Meskipun berbagai metode morfologi, biokimia, dan molekuler tersedia untuk
identifikasi C. albicans, Tes germ tube formation adalah tes yang sederhana, cepat, dan sangat
andal yang telah digunakan sejak bertahun-tahun. Pembentukan germ tube C. albicans
menggunakan media pendukung yang berbeda dilakukan untuk mempelajari faktor-faktor yang
mengatur pembentukan germ tube. Kaldu kedelai trypticase adalah media terbaik untuk
produksi tabung kuman dan serum kuda lebih efektif untuk produksi germ tube.4 C.albicans
bergantung pada faktor virulensinya. Salah satu faktor virulensi Yang berkontribusi dalam
patogenesis C.albicans adalah germ tube. Struktur ini sering digunakan sebagai identifikasi
klinis dugaan dari C. albicans biasanya dibuat atas dasar kemampuannya untuk menghasilkan
struktur pendek, ramping, seperti tabung yang disebut germ tube ketika diinkubasi pada 35 ° C
hingga 37 ° C selama 2 hingga 4 jam dalam serum manusia yang dikumpulkan. Germinal tube
memiliki dinding paralel dan tidak ada penyempitan pada titik asal sel induk blastospora.Untuk
substrat uji tabung germinal yang digunakan untuk induksi tabung germinal pada isolat klinis:
C. albicans dalam penelitian ini adalah kaldu kedelai Trypticase, kaldu ekstrak ragi peptone
dextrose, infus jantung otak, Sukrosa 2%, air pepton dievaluasi dan dibandingkan dengan
substrat biasa yang menggunakan serum manusia yang dikumpulkan. Semua C. albicans isolat
disubkultur ke agar dekstrosa Sabouraud dan diinkubasi pada suhu 370C selama 24-48 jam
sebelum melakukan uji tabung kuman. Untuk uji tabung germinal, dilakukan inokulum ringan,
2-3 koloni masing-masing isolat dari biakan segar dalam 0,5 ml semua media di atas yang
diteteskan dalam tabung reaksi 12x75 mm. Kontrol positif (C. albicans ATCC 10231) dan
kontrol negatif (C. krusei) digunakan dengan setiap batch ragi yang diuji. Kemudian diinokulasi
tabung reaksi diinkubasi pada suhu 37°C selama 3 jam. Evaluasi pembentukan germ tube
dilakukan dengan meletakkan setetes suspensi yang telah diinkubasi pada kaca objek dan
ditutup kaca penutup. Pemeriksaan mikroskopis dilakukan dengan perbesaran 40X untuk
melihat adanya germ tube. Khas C. albicans mengungkapkan germ tube tipis dengan diameter
3 hingga 4 mm dan panjang hingga 20 mm; tidak seperti pseudohifa yang tidak menyempit
pada titik asalnya. Kriteria kepositifan germ tube adalah pengamatan minimal lima germ tube
pada seluruh sediaan basah. Hasil negatif dikonfirmasi dengan memeriksa setidaknya 10 lapang
pandang. Teknik ini merupakan metode yang sederhana, murah. Oleh karena itu dapat menjadi
metode yang sering dikerjakan di laboratorium.5
 DAFTAR PUSTAKA

1. Jawetz E, Melnick JL, Adelberg EA. Medical Microbiology. 27th ed. New York:
McGraw Hill Education Lange, 2017
2. Murray PR, Rosenthal KS, Pfaller MA. Medical Microbiology. 8th ed. Philadelphia:
Elsevier, 2016
3. Sovianti C, Devi M. Recurrent Vulvovaginal Candidiasis. Bioscientia Medicina.
2021;1(1):474-483.
4. Shaikh N, Dr. Mundhada S, Dr. Jahagirdar V, Dr. Ingole, K. Evaluation of germ tube
test in various media. Int J Appl Res 2019;5(2):114-117.
5. Mehta A, Kumar M, Bhumbla U, Vyas A, Dalal AS. Comparison of Different Media
for Germ Tube Production by Candida albicans: A Retrospective Study. Int J Curr
Microbiol Appl Sci. 2018;7(06):819–23.

LEMBAR PENGESAHAN

Banjarmasin, 24 November 2021

Asisten Praktikum Praktikan

Nurazizah Yunus Ummu Nur Ainun Sajida

NIM. 1810911220009 NIM. 1910911120031