Machine Translated by Google

Jurnal Mikrokimia 154 (2020) 104560

Daftar isi tersedia di ScienceDirect

Jurnal Mikrokimia
beranda jurnal: www.elsevier.com/locate/microc

Analisis densitometri HPTLC dari obat antidiabetes terpilih dengan adanya T

produk degradasinya
Hytham M. Ahmeda,, Mahmoud A. Omarb,c,ÿ Mohamed A. Abdel Hamidd , Hany A. Batakoushya ,
sebuah

Departemen Analisis Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Menoufia, Shebin Elkoum, Menoufia, Mesir
b
Departemen Farmakognosi dan Kimia Farmasi, Sekolah Tinggi Farmasi, Universitas Taibah, Medinah, Arab Saudi
c
Departemen Kimia Analitik, Fakultas Farmasi, Universitas Minia, Mesir d
Departemen Kimia Analitik Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Tanta, Mesir

INFORMASI ARTIKEL ABSTRAK

Kata kunci: Dalam beberapa tahun terakhir, banyak kombinasi pil tunggal (SPC) diproduksi dan digunakan sebagai pilihan
Dapagliflozin yang menjanjikan dalam pengobatan diabetes. Namun, tren ini menjadi tantangan serius bagi analis obat karena
saxagliptin kesulitan dalam analisis dua atau lebih obat di hadapan satu sama lain. Dalam penelitian ini, kromatografi lapis
Stabilitas menunjukkan
tipis kinerja tinggi baru yang divalidasi dikembangkan untuk penentuan dapagliflozin dan saxagliptin secara
Pemisahan
simultan dalam bentuk dan bentuk sediaan murninya dan juga secara berturut-turut diterapkan sebagai uji yang
Bentuk sediaan
menunjukkan stabilitas kedua obat. Metode yang diusulkan didasarkan pada kopling kromatografi lapis tipis
kinerja tinggi dengan deteksi panjang gelombang ganda masing-masing pada 225 dan 210 nm untuk dapagliflozin
dan saxagliptin. Pemisahan secara kromatografi dilakukan pada pelat aluminium silika gel 60-F254 dengan fase
gerak heksana/metanol/etil asetat (4:2:4, v/v/v). Nilai faktor retensi adalah 0,6, 0,18 dan koefisien korelasi 0,9994
dan 0,9995 untuk da pagliflozin dan saxagliptin, masing-masing dengan kisaran linier 50-550 ng/spot untuk kedua
obat. Kondisi kromatografi optimum diterapkan pada tablet komersial dengan nilai perolehan persen yang baik,
masing-masing (99,84 ± 1,43) dan (99,43 ± 0,63) untuk dapagliflozin dan saxagliptin. Metode yang disarankan
dapat diterapkan untuk obat yang dipelajari di laboratorium kontrol kualitas serta dalam studi farmakokinetiknya.

1. Perkenalan
Peningkatan kadar glukosa darah pada pasien diabetes biasanya
multifaktorial. Oleh karena itu, sulit untuk menormalkan konsentrasi glukosa
darah dengan mengganggu hanya satu mekanisme hipoglikemik.
Oleh karena itu, banyak kombinasi pil tunggal (SPC) yang digunakan saat ini
sebagai pilihan yang menjanjikan dalam pengelolaan diabetes. Tren
pengobatan itu membuatnya lebih perlu untuk menemukan metode analisis
yang cocok untuk penentuan simultan dari obat yang diberikan bersama [1].
Tujuan utama dari setiap terapi antidiabetes adalah untuk mendapatkan kadar
glukosa darah dalam kisaran normal tanpa penambahan efek samping yang
tidak dapat ditoleransi, yang dapat dicapai dengan menggabungkan obat-
obatan dengan mekanisme kerja yang berbeda. Dalam penelitian ini,
Dapagliflozin (DGF) dan Saxagliptin (SXG), (Gambar: S1) dipilih sebagai
contoh yang representatif [2-6]. DJP; secara kimia adalah (2S, 3R. 4R, 5S,
6R)ÿ2-[4ÿchloroÿ3-(4ethoxybenzyl) phenyl]ÿ6-(hydroxyl methyl) tetrahydro 2H-
pyran-3, 4, 5-triol). Ini bertindak sebagai penghambat natrium dari co-
transporter glukosa. SXG; ((1S, 3S, 5S)ÿ2- [(2S)ÿ2-amino-2-(3ÿhydroxy-1-
adamantyl) asetil]ÿ2 azabicyclo[3.1.0] heksana-3-karbonitril). Ini adalah dipeptidyl peptidase
Terapi kombinasi DGF dan SXG, yang diformulasi bersama dalam tablet
Qtern® terbukti lebih unggul dalam menurunkan glukosa darah bila
dibandingkan dengan salah satu rejimen monoterapi [7]. Namun, terapi
kombinasi ini membawa tantangan besar di bidang analisis farmasi dan
biomedis. Oleh karena itu, penting untuk mendapatkan metode analitik yang
valid yang cocok untuk analisis obat-obatan ini di hadapan satu sama lain.
Juga, analisis harus valid dengan adanya produk degradasinya [8-11] dan
juga dalam bentuk sediaan farmasi.
Tinjauan literatur mengungkapkan bahwa kuantifikasi DGF dalam bentuk
murni atau dalam bentuk sediaan farmasi. Metode ini termasuk fotometri
spektro [12-15], spektrofluorimetri [16], metode HPLC [17-22].
Juga, untuk SXG termasuk spektrofotometri [23-26], spektrofluorimetri [27,
28], metode HPLC [29-40]. Di sisi lain, kromatografi lapis tipis kinerja tinggi
(HPLC) adalah alternatif berkelanjutan yang menjanjikan untuk HPLC dalam
beberapa analisis. Sebagai HPTLC, pemisahan memiliki beberapa keunggulan,
yaitu membutuhkan waktu yang singkat untuk analisis. Selain itu, membutuhkan
sedikit volume injeksi nanoliter. Selanjutnya, penggunaan pelarut minimal dan
tidak diperlukan langkah ekstraksi sebelumnya dibandingkan dengan HPLC
[41-54]. Menurut
literatur
4-inhibitor ada dua metode HPTLC untuk analisis simultan dari
(DPP-4).

Penulis yang sesuai.

Alamat email: hmaahmed@menofia.edu.eg (HM Ahmed), momar71g@mu.edu.eg (MA Umar).

https://doi.org/10.1016/j.microc.2019.104560
Diterima 31 Agustus 2019; Diterima dalam bentuk revisi 19 Desember 2019; Diterima 19 Desember 2019
Tersedia online 23 Desember 2019 0026-265X/ © 2019 Elsevier BV Hak cipta dilindungi undang-undang.
Machine Translated by Google
HM Ahmad, dkk.
kedua obat [55, 56]. Namun, metode ini memiliki sensitivitas yang rendah
karena tidak dapat diterapkan untuk studi stabilitas atau farmakokinetik kedua
obat. Selain itu, fase gerak HPTLC yang dilaporkan mengandung kloroform,
yang bersifat hepatotoksik dan karsinogenik, atau, asetoni trile, yang beracun
dan berbahaya. Kedua pelarut harus ditangani dengan hati-hati karena
menyebabkan bahaya yang parah dan/atau kematian. Oleh karena itu, tujuan
utama dari penelitian ini adalah untuk mengembangkan metode HPTLC ramah
lingkungan yang sensitif untuk penentuan DGF dan SXG secara simultan di
kehadiran produk degradasinya dan juga dalam tabletnya yang menggunakan
komponen fase gerak hijau untuk mencegah penggunaan pelarut berbahaya
atau organik, yang mengarah pada metode analisis yang aman. Oleh karena
itu, dapat diterapkan untuk analisis kontrol kualitas rutin. Juga, ini dapat
digunakan sebagai metode penunjuk stabilitas dan untuk studi farmakokinetik
obat yang diuji.
2. Percobaan
2.1. Peralatan
Analisis kromatografi dilakukan pada HPTLC (CAMAG), TLC scanner 3
densitometer)Swiss) dengan software WINCATS, CAMAG 100-ÿL spuit
bandwidth 4 mm, laju aplikasi 15 s/ÿL, dimensi celah 3 × 0,45 mm. Tangki
kromatografi (25 × 25 × 9 cm).
Sampel diaplikasikan pada pelat aluminium 20 × 10 cm dengan ketebalan 250
m yang telah dilapisi sebelumnya dengan (gel silika, 60 F254, Merck, Jerman).
Sistem ini dilengkapi dengan lampu tungsten deuterium/halogen untuk mode
penyerap-pantulan. Lampu UV digunakan dengan panjang gelombang pendek,
254 nm (Jerman).
2.2. Bahan dan reagen
DGF propanediol monohydrate (kemurnian 99,8%) dan SXG (kemurnian
99,54%) diperoleh dari (NODCAR, Giza, Mesir). Semua reagen dan pelarut
adalah analitik (kelas HPLC). Komposisi fase gerak: Heksana, metanol dan
etil asetat (kemurnian 99%) dibeli dari (Sigma-Aldrich, USA). HCl, NaOH dan
H2O2 (30%) dipasok dari El Nasr Chemical, Co., (Mesir). Bentuk sediaan
farmasi diperoleh dari pasar lokal, tablet Farxiga® (No. batch NY924 P043383)
tablet salut selaput yang mengandung 10,0 mg DGF dari perusahaan
AstraZeneca dan tablet Onglyza® (Nomor batch 0J57932) yang diberi label
mengandung 5,0 mg SXG per tablet dipasok dengan baik oleh perusahaan
Bristol-Myers Squibb/. Tablet yang diformulasikan di rumah; terdiri dari SXG
setara dengan 5,0 mg dan DGF setara dengan 10,0 mg per tablet.
Eksipien tablet: (inti tablet) selulosa mikrokristalin, kroskarmel kehilangan
natrium, laktosa, magnesium stearat anhidrat, dan silika tipe gigi (pelapis film
sebagai polimer) polivinil alkohol, makrogol, titanium dioksida, dan Talc,
semuanya dipasok dari NODCAR, Mesir.
2.3. Solusi standar
Larutan standar DGF dan SXG (1,0 mg mLÿ1) dibuat dengan melarutkan
50,0 mg DGF atau SXG dalam 20,0 mL metanol. Volume yang dihasilkan
diatur menjadi 50,0 mL dengan pelarut yang sama. Pengenceran yang tepat
dibuat dengan metanol untuk mendapatkan larutan standar kerja dalam
kisaran 25-275 g mL-1 untuk setiap obat. Kemudian, dua mikroliter diterapkan
pada piring untuk mencapai kisaran konsentrasi 50-550 ng/spot untuk kedua
obat.
2.4. Prosedur umum dan kondisi kromatografi
Pelat silika gel 60 F254 HPTLC (ketebalan 0,2 mm, Merck Germany)
digunakan dalam semua studi eksperimental. 2,0 L volume sampel
diaplikasikan pada pelat aluminium HPTLC (potongan 20 × 10 cm) dalam
bentuk pita (lebar pita 6 mm). Plat dikeringkan di udara, kemudian
dikembangkan dalam tangki HPTLC yang berisi 100 mL sistem bergerak.
Pengembangan menaik selesai hingga jarak migrasi
2
Jurnal Mikrokimia 154 (2020) 104560
60 mm dari asal tercapai (sekitar 6 menit). Plat dipindahkan kembali dan
dikeringkan di udara. Setelah itu, scanning absorbansi diukur pada 225 dan
210 nm.
2.5. Aplikasi untuk tablet farmasi
2.5.1. Formulasi tablet in-house Karena
tablet Qtern® saat ini tidak tersedia di pasar lokal.
Jadi, sepuluh tablet disiapkan di rumah menggunakan jumlah berikut per
tablet; SXG setara dengan 5,0 mg dan DGF setara dengan 10,0 mg secara
akurat ditimbang dan dicampur dengan 14,1 mg laktosa anhidrat, 136 mg
selulosa mikrokristalin, 1,8 mg silikon dioksida dan 9 mg natrium
crosscarmellose per tablet. Serbuk dicampur secara konsisten, kemudian
dilewatkan melalui Saringan 60 diikuti dengan penambahan 1,8 mg magnesium
stearat dan campuran dicampur sekali lagi.
Campuran dikompresi dalam mesin tablet single-punch (Jerman).
2.5.2. Penentuan kandungan rata-rata tablet yang diracik sendiri Untuk
estimasi kandungan rata-rata, sepuluh tablet yang diformulasikan untuk tablet
yang diracik ditimbang secara akurat, digiling halus, dan dicampur dengan
baik. Jumlah akurat yang setara dengan 10 mg DGF dan 5 mg SXG ditimbang
dan dipindahkan ke labu ukur 100 mL, dilarutkan dalam sekitar 50 mL metanol.
Isi labu dibolak-balik, disonikasi selama 5 menit, kemudian dicukupkan
volumenya hingga 100,0 mL dengan metanol. Isi labu dicampur dengan baik
dan disaring. Bagian pertama dari filtrat ditolak. Solusi yang diperoleh terlihat
pada pelat HPTLC, dengan volume yang berbeda untuk memberikan
konsentrasi akhir dalam kisaran konsentrasi kalibrasi.
2.6. Degradasi paksa dari obat yang dipelajari
Solusi obat yang dipelajari (1,0 mg mL-1 untuk masing-masing) mengalami
degradasi paksa di bawah kondisi asam dan basa. Dilakukan dengan
menambahkan 10 mL larutan metanol 1 N HCl dan NaOH secara terpisah ke
dalam 10 mL larutan stok DGF atau SXG ke dalam labu alas bulat 100 mL.
Campuran direfluks pada suhu 70 °C selama 2 jam. Semua percobaan
dilakukan dalam gelap untuk mengecualikan kemungkinan degradasi karena
efek cahaya. Larutan yang dihasilkan dinetralkan kemudian diencerkan
dengan metanol sampai tanda batas. Kemudian diaplikasikan pada pelat
HPTLC dalam rangkap tiga dalam konsentrasi rentang kalibrasi. Kemudian,
kromatogram diperoleh seperti dijelaskan di atas.
Untuk studi degradasi oksidatif, sejumlah 10 mL 30% H2O2 ditambahkan
ke 10 mL larutan standar obat stok dalam labu alas bulat 100 mL. Kemudian,
larutan yang diperoleh direfluks selama 2 jam untuk memindahkan kelebihan
hidrogen peroksida. Larutan yang dihasilkan diencerkan dengan metanol.
Kemudian diaplikasikan pada pelat HPTLC dalam rangkap tiga dalam kisaran
konsentrasi kalibrasi. Kemudian, kromatogram diperoleh seperti dijelaskan di
atas.
Stabilitas fotokimia DGF dan SXG juga dipelajari dengan pemaparan 10
mL larutan stok obat di bawah sinar matahari langsung selama 3 hari (dari
jam 8:00 sampai 16:00 pada suhu 25 °C) yang kemudian diencerkan sampai
tanda batas dengan metanol, dan prosedur kromatografi diikuti. Untuk studi
degradasi UV, sejumlah 10 mL larutan obat metanol terkena radiasi UV pada
254 nm selama 24 jam. Solusi yang dihasilkan diencerkan sampai tanda
dengan metanol, dan prosedur kromatografi diikuti.
3. Hasil dan Pembahasan
3.1. Pengaruh variabel eksperimen
Teknik analisis yang diusulkan telah dijelaskan untuk pemisahan dan
penentuan simultan DGF dan SXG pada 25 C dan kelembaban ruangan.
Spektrum penyerapan obat yang dipelajari dipindai di
Machine Translated by Google

HM Ahmad, dkk. Jurnal Mikrokimia 154 (2020) 104560

Tabel 1
Parameter kuantitatif dan data analisis regresi dari metode yang diusulkan
untuk obat yang dipelajari.

Parameter metode
DGF SXG

panjang gelombang 225 210

Rf 0,65 0.18
Selektivitas (ÿ) K2/K1 8.43
Faktor kapasitas K=(1-Rf)/Rf 0,54 4.55
Rentang Linearitas (ng/spot) 50–550 50–550
mencegat (a) 650.25 347.03
SD Intersepsi (Sa) 102,91 8.534
Kemiringan (b) 20.32 1.976
SD Kemiringan (Sb) 0,3391 0,028
Koefisien korelasi (r) 0,9994 0,9995
Koefisien Determinasi (r2 ) 0,9989 0,9991
SD sisa (Sy/x) 132,25 10,967
nilai F 3592.25 4940.12
Signifikansi F 4.64×10ÿ7 2.45×10ÿ7
Batas deteksi (ng/spot) 16.70 14.25
Batas kuantitasi (ng/spot) 50.12 42,74

Gambar 1. Kromatogram HPTLC dua dimensi larutan standar DGF dan SXG (300 ng/spot).

3.2. Validasi metode

kisaran 200 hingga 400 nm (Gambar: S2). Hasil dari; 210 dan 225 nm
panjang gelombang dipilih sebagai yang terbaik untuk SXG dan DGF, masing-masing.
Sistem pengembangan yang berbeda dari komposisi dan rasio variabel
dicoba untuk mendapatkan kondisi optimum. Ponsel yang paling cocok
fase, heksana/etil asetat/metanol (4:4:2, v/v/v), digunakan. Ke
menghasilkan nilai Rf yang baik ; ruang yang digunakan jenuh dengan yang digunakan
mengembangkan sistem selama 25 menit sebelum digunakan. Kemudian dilakukan
pengembangan linear ascending. Pelat dikembangkan dari jarak
8 cm kemudian dikeringkan dengan udara. Pita yang dihasilkan kompak dan tajam
(Gbr. 1, S3). Pita yang terpisah dideteksi di bawah lampu UV pada
panjang gelombang yang dipilih. Nilai Rf adalah 0,65 dan 0,18 untuk DGF dan SXG,
masing-masing.
Metode yang diusulkan dipertimbangkan karena pedoman ICH [57]
termasuk; rentang linearitas, akurasi, presisi, LOD dan LOQ.
Linearitas dinilai dengan konstruksi kurva kalibrasi enam
konsentrasi (enam ulangan untuk setiap konsentrasi) dalam kisaran
50–550 ng/spot untuk DGF dan SXG. Konsentrasi yang dipelajari
obat diplot versus area puncak yang sesuai untuk menghasilkan
grafik kalibrasi.
Parameter kesesuaian sistem dari metode HPTLC yang diusulkan adalah
dihitung menunjukkan resolusi yang baik, selektivitas dan faktor kapasitas dengan
nilai koefisien korelasi yang dihasilkan tinggi seperti terlihat pada Tabel 1.
Untuk memperkirakan akurasi; lima konsentrasi DGF dan SXG di
rentang linier (50-550 ng/spot) diperiksa. Untuk setiap konsentrasi,

Gambar 2. Kromatogram atipikal (3D) untuk kalibrasi DGF dan SXG.

3
Machine Translated by Google

HM Ahmad, dkk. Jurnal Mikrokimia 154 (2020) 104560

Meja 2 3.3. Degradasi paksa dDGF dan SXG

Evaluasi keakuratan metode HPTLC yang diusulkan.

Sampel metode Kromatogram sampel degradasi asam pada (Tabel S3)

nomor DGF SXG menunjukkan empat puncak yang berbeda dengan nilai Rf yang berbeda (0,25, 0,29, 0,44
Diambil Ditemukan
sebuah

% Pemulihan Ditemukan
sebuah

% Pemulihan dan 0,64) dan lima puncak berbeda dengan nilai Rf berbeda (0,07, 0,13,
(dari/tempat) (dari/tempat) (dari/spot)
0.39, 0.48 dan 0.63) untuk produk degradasi asam yang berbeda untuk DGF
1 100 99.16 99.16 102.31 102.31 dan SXG, masing-masing. Sedangkan kromatogram degradasi basa
2 200 204.32 102,15 197,72 98.86 sampel menunjukkan tujuh puncak yang berbeda dengan nilai Rf yang berbeda (0,07,
3 300 296.86 98,95 303.39 101.13 0,19, 0,31, 0,33, 0,43, 0,46 dan 0,65 dan tujuh puncak berbeda (0,06,
4 400 404.94 101,24 414.19 103,55
0,10, 0,23, 0,30, 0,48 dan 0,54) untuk DGF dan SXG, masing-masing sebagai
5 500 502,94 100.59 507,55 101,51
Berarti 100.42 101,47
ditunjukkan pada (Gambar: S4).

SD 1.36 1.73 Kromatogram sampel degradasi oksidatif menunjukkan tiga

RSD 1.35 1.70 puncak yang berbeda dengan nilai Rf yang berbeda (0,30, 0,55 dan 0,69) untuk DGF
dan tiga puncak berbeda dengan nilai Rf berbeda (0,07, 0,13 dan 0,45)
sebuah

Rata-rata dari tiga pengukuran ulangan, SD: simpangan baku, RSD: relatif untuk SXG seperti yang ditunjukkan pada (Gambar: S4).
standar deviasi.
Kromatogram sampel degradasi siang hari menunjukkan dua
puncak yang berbeda dengan nilai Rf yang berbeda untuk setiap DGF dan SXG (0,09 dan
tiga ulangan diselidiki dan data yang dihasilkan disajikan
0,74), (0,09 dan 0,66) masing-masing. Degradasi yang tidak signifikan dari
sebagai persen pemulihan ± RSD seperti yang ditunjukkan pada Tabel 2. Hasil yang diperoleh
DGF dan SXG di siang hari diproduksi dan hasil yang diperoleh adalah
menunjukkan akurasi yang baik dari metode HPTLC. Untuk menguji ketepatan intra dan
ditunjukkan pada Tabel S2. Kromatogram sampel degradasi UV
antar hari; tiga penentuan ulangan dari tiga konsentrasi berbeda untuk obat yang
menunjukkan dua puncak yang berbeda dengan nilai Rf yang berbeda (0,09 dan 0,68) untuk
dipelajari (100, 300 dan 500 ng/spot) adalah
DGF dan (0,09 dan 0,36) untuk SXG. Jalur degradasi yang disarankan
diperiksa pada hari yang sama dan tiga kali pada hari berturut-turut (Tabel
dari DGF dan SXG diamati seperti yang ditunjukkan pada (Gbr. 3). Produk degradasi
S1). Hasil yang diperoleh membuktikan bahwa ketepatan metode yang sangat baik.
yang diperoleh dari obat yang dipelajari setelah pemanasan pada 70 ° C ditemukan
LOD dan LOQ dihitung untuk mengevaluasi sensitivitas metode sebagai sebagai 20% dengan 1 N HCL, 89% dengan 1 N NaOH, 6% dengan H2O2 dan stabil
ekspresi berikut; LOD sebesar 3,3 / S sedangkan LOQ sebesar 10 / S, dimana (S)
dengan lampu UV seperti yang ditunjukkan pada Tabel S2.
berarti kemiringan kurva kalibrasi dan (ÿ) berarti standar deviasi intersep. Nilai yang
dihasilkan adalah 16,70 dan 50,12 ng/spot untuk
3.4. Degradasi kinetik
DGF juga, 14,25 dan 42,74 ng/spot untuk SXG, masing-masing menunjukkan a
sensitivitas yang baik.
Pada penelitian ini kinetika DGF dan SXG pada hidrolisis basa adalah
Dalam kekokohan, variasi kecil dalam parameter eksperimental mengarah
dilakukan pada interval waktu yang berbeda; 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 menit. Dia
perubahan signifikan dalam nilai Rf dan/atau daerah puncak (Tabel 3).
ditemukan bahwa, penurunan konsentrasi obat yang dipelajari dengan
Oleh karena itu, metode yang diusulkan kuat.
bertambahnya waktu. Logaritma dari konsentrasi obat yang tersisa versus
Untuk mengevaluasi spesifisitas metode yang diusulkan, obat-obatan yang dipelajari
waktu yang diplot menunjukkan linearitas dengan koefisien korelasi yang baik
ditentukan dengan adanya produk degradasinya. Kromatogram yang diperoleh (Gambar:
(Gambar S5). Ekspresi konstanta laju (K), waktu paruh (t1/2) dan
S2) menunjukkan bahwa tidak ada interferensi pada nilai Rf DGF dan SXG. Selain itu,
umur simpan (t90) dihitung menurut persamaan berikut :
selektivitas
[58]:
metode yang disarankan diuji dengan perbandingan kromatogram dari
kosong versus bentuk sediaan (Gambar: S3). Hasil yang diperoleh membuktikan bahwa =]
Log [C] tlog[ CK / 2.303 0 t (1)
selektivitas dan spesifisitas metode yang baik. Selanjutnya, hasil metode yang diusulkan
kt 1/2= 0,639/ (2)
dibandingkan dengan metode yang dilaporkan
(Tabel S2). Perbandingan tersebut menunjukkan bahwa metode yang diusulkan adalah
t90 = 0.105/ k (3)
jauh lebih baik daripada yang dilaporkan dalam aspek yang berbeda.
Dimana K adalah konstanta laju, [C0] adalah konsentrasi DGF atau
SXG pada waktu t = 0 dan [Ct] adalah konsentrasinya pada waktu t. Dibawah
kondisi hidrolisis basa pada NaOH 1 N, dimana nilai K adalah
ditemukan menjadi yang tertinggi dibandingkan dengan degradasi asam dan oksidatif.
Tabel 3
Sedangkan t1/2 dan t90 pada kondisi basa ditemukan lebih rendah
Kekokohan metode yang diusulkan untuk obat yang dipelajari.
daripada kondisi lainnya.
Variasi metode
DGF Conc. (300ng/ SXG Conc. (300ng/
titik) titik) 4. Aplikasi
% Pemulihan ± SD % Pemulihan ± SD
4.1. Aplikasi untuk bentuk sediaan tablet
Tidak ada variasi (Kondisi optimal) 101,27 ± 0,82100,24 ± 0,73
Komposisi sistem bergerak (heksana/etil asetat/metanol, 4: 4: 2, v/v/v)
heksana +5% 100,40 ± 1,23 101,00 ± 0,74 Metode HPTLC yang diusulkan berhasil dievaluasi untuk menentukan DGF dan SXG
5% 97,18 ± 1,51 100,70 ± 0,79 di tablet yang disiapkan di rumah seperti yang ditunjukkan pada
Etil asetat +5% 99,30 ± 0,78 101,22 ± 1,13 Tabel S4. Nilai pemulihan rata-rata tablet yang disiapkan adalah 99,89%
5% 98,40 ± 1,72 99,68 ± 2,12
dengan RSD 1,43% dan 99,43% dengan RSD 0,63%, untuk DGF dan SXG
metanol +5% 101,00 ± 0,33 99,82 ± 1,55
5% 100,65 ± 0,89 98,63 ± 0,83 masing-masing, dibandingkan dengan metode yang dilaporkan. Baik uji t maupun uji F
Waktu jenuh +5 menit 99,50 ± 1,63 100,10 ± 0,63 menunjukkan tingkat presisi yang baik. Metode HPTLC yang diusulkan adalah tabel yang
5 menit. 102,00 ± 0,29 99,40 ± 0,54 cocok untuk aplikasi di laboratorium kendali mutu.
Perangsangan +5 nm 99,89 ± 0,83 101,20 ± 0,43
panjang gelombang 5 nm 103,01 ± 1,14 100,66 ± 1,71
5. Kesimpulan

Kondisi optimum: Komposisi fase gerak (heksana/etil asetat/me thanol, 4: 4: 2, v/v/v), waktu
saturasi: 30 menit. dan panjang gelombang eksitasi: 225, Dalam karya ini, metode HPTLC yang efisien dengan panjang gelombang ganda
210 nm untuk DGF, SXG, masing-masing. dikembangkan untuk estimasi simultan DGF dan SXG di

4
Machine Translated by Google
HM Ahmad, dkk.
Gambar 3. Jalur degradasi DGF dan SXG yang disarankan.
adanya produk degradasi. Metode yang diusulkan selektif untuk analisis obat
yang dikutip dalam formulasi farmasi dan dengan adanya produk degradasi. Dua
panjang gelombang digunakan, 225 dan 210 nm, untuk DGF dan SXG, masing-
masing untuk mendapatkan sensitivitas tinggi dalam rentang linier 50-550 ng/spot
untuk kedua obat. Nilai Rf yang diperoleh adalah 0,65, 0,18. Nilai F adalah
3592,25 dan 4940,12 dengan signifikansi F masing-masing 4,64×10ÿ7 dan
2,45×10ÿ7 untuk DGF dan SXG.
Karena metode ini memisahkan obat yang dipelajari dari perbedaannya,
5
Jurnal Mikrokimia 154 (2020) 104560
produk degradasi, dapat digunakan sebagai metode yang menunjukkan stabilitas.
Kondisi kromatografi optimum diterapkan pada tablet komersial dengan nilai
perolehan persen yang baik, masing-masing (99,84 ± 1,43) dan (99,43 ± 0,63)
untuk DGF dan SXG.
Pernyataan pendanaan
Penelitian ini tidak menerima hibah khusus dari pendanaan
lembaga di sektor publik, komersial, atau nirlaba.
Machine Translated by Google
HM Ahmad, dkk.
Informasi tambahan
Tidak ada informasi tambahan yang tersedia untuk makalah ini.
Pernyataan kontribusi kepenulisan CReditT
Hytham M. Ahmed: Konseptualisasi, Metodologi, Administrasi Proyek,
Pengawasan, Validasi, Visualisasi, Penulisan - draft asli, Penulisan - review & editing.
Mahmoud A. Omar: Konseptualisasi, Metodologi, Administrasi Proyek, Pengawasan.
Hany A. Batakoushy: Kurasi Data, Analisis Formal, Investigasi, Software, Validasi,
Penulisan - draft asli, Penulisan - review & editing. Mohamed A. Abdel Hamid:
Konseptualisasi, Investigasi, Metodologi, Pengawasan, Validasi, Visualisasi.
Pernyataan Kepentingan Bersaing
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan.
ucapan terima kasih
Penulis berterima kasih kepada NODCAR atas dukungan mereka selama studi
penelitian ini.
Bahan pelengkap
Materi tambahan yang terkait dengan artikel ini dapat ditemukan, di
versi online, di doi:10.1016/j.microc.2019.104560.
Referensi
[1] MD Sharma, Potensi untuk kombinasi inhibitor dipeptidyl peptidase-4 dan inhibitor co-
transporter-2 natrium-glukosa untuk pengobatan diabetes tipe 2, diabetes, Obe. Meta
17 (2015) 616–621.
[2] DJ Augeri, JA Robl, DA Betebenner, DR Magnin, A. Khanna, JG Robertson, A. Wang, LM
Simpkins, P. Taunk, Q. Huang, Penemuan dan profil praklinis Saxagliptin (BMS-477118):
a inhibitor dipeptidyl peptidase IV yang sangat kuat, kerja lama, aktif secara oral untuk
pengobatan diabetes tipe 2, J. Med. Kimia 48 (2005) 5025–5037.
[3] P. Fioretto, A. Giaccari, G. Sesti, Khasiat dan keamanan dapagliflozin, penghambat
cotransporter 2 (SGLT2) natrium glukosa, pada diabetes mellitus, Cardiovasc.
diabetes. 14 (2015) 142.
[4] JE Gerich, Peran ginjal dalam homeostasis glukosa normal dan dalam hiperglikemia
diabetes mellitus: implikasi terapeutik, Diabetic Med. 27 (2010) 136-142.
[5] A. Mather, C. Pollock, pengangkut glukosa ginjal: target baru untuk manajemen
hiperglikemia, Nature Review Nephrol. 6 (2010) 307.
[6] AJ Scheen, Farmakodinamik, kemanjuran dan keamanan natrium-glukosa co-trans
porter tipe 2 (SGLT2) inhibitor untuk pengobatan diabetes mellitus tipe 2, Obat 75 (2015)
33-59.
[7] D. Singh-Franco, Potensi untuk kombinasi pil tunggal dipeptidyl peptidase-4 inhibitor dan
sodium glucose cotransporter 2 inhibitor, Expert Rev. Endocrinol. Meta 10 (2015) 305–
317.
[8] MF Abdel-Ghany, O. Abdel-Aziz, MF Ayad, MM Tadros, Metode kromatografi cair yang
menunjukkan stabilitas untuk penentuan saxagliptin dan penjelasan struktur produk
degradasi utama menggunakan lc–ms, J. Chromatogr. Sci. 53 (2014) 554–564.
[9] HM Maher, AE Abdelrahman, NZ Alzoman, HI Aljohar, Indikasi-stabilitas
metode elektroforesis kapiler untuk penentuan metformin hidroklorida, saxagliptin
hidroklorida, dan dapagliflozin secara simultan dalam tablet farmasi , J. Liq. kromatografi
berhubungan teknologi. 42 (2019) 161–171.
[10] S. Surendran, D. Paul, S. Pokharkar, A. Deshpande, S. Giri, N. Satheeshkumar, Metode
LC MS/MS untuk estimasi simultan dari kombinasi anti-diabetes baru saxagliptin dan
dapagliflozin menggunakan polaritas beralih pendekatan: aplikasi untuk studi
farmakokinetik tikus vivo, Anal. Metode 11 (2019) 219–226.
[11] WA Zaghary, S. Mowaka, MS Hendy, Studi degradasi kinetik dapagliflozin ditambah
dengan pemisahan uhplc dengan adanya produk degradasi utama dan metformin,
Chromatographia 82 (2019) 777–789.
[12] P. Karuna, E. China, M. Basaveswara Rao, Metode spektrofotometri UV unik untuk
perhitungan dapagliflozin dalam bentuk sediaan curah dan farmasi, J. Chem.
Farmasi. Res. 7 (2015) 45–49.
[13] GV Mante, KR Gupta, AT Hemke, Estimasi dapagliflozin dari formulasi tabletnya dengan
UV-Spectrophotometry, Pharm. Metode 8 (2017) 102–107.
[14] R. Aswini, M. Eswarudu, PS Babu, Tinjauan Metode Analisis Pendugaan Dapagliflozin dan
Saxagliptin dalam Bentuk Bulk dan Sediaan Farmasi, IJRPC 8 (2018) 460–468 https://
www.ijrpc.com /files/5-7-18/09.pdf.
6
Jurnal Mikrokimia 154 (2020) 104560
[15] B. Jani, K. Shah, P. Kapupara, Pengembangan dan validasi metode turunan pertama
spektroskopi uv untuk estimasi simultan dapagliflozin dan metformin hidroklorida dalam
campuran sintetis, J. Bioequiv. 1 (2015) 102.
[16] MA Omar, HM Ahmed, MA Abdel Hamid, HA Batakoushy, Spektro baru
analisis fluorimetri dapagliflozin setelah derivatisasi dengan NBD-Cl dalam plasma
manusia menggunakan eksperimen desain faktorial, Luminescence 34 (2019) 576–584.
[17] S. Manasa, K. Dhanalakshmi, R. Nagarjuna, S. Sreenivasa, Pengembangan metode dan
validasi dapagliflozin dalam API oleh RP-HPLC dan spektroskopi UV, Int. J. Farmasi.
Sci. Obat Res. 6 (2014) 250–252.
[18] QC Ji, X. Xu, E. Ma, J. Liu, S. Basdeo, G. Liu, W. Mylott, DW Boulton, JX Shen, B. Stouffer,
Pemantauan reaksi selektif dari ion adisi asetat elektrospray negatif untuk bioanalisis
dapagliflozin dalam studi klinis, Anal.
Kimia 87 (2015) 3247–3254.
[19] M. Yunoos, DG Sankar, Sebuah stabilitas divalidasi menunjukkan kinerja tinggi metode
kromatografi cair untuk penentuan simultan metformin HCl dan dapagliflozin dalam
bentuk sediaan obat dan tablet massal, Asian J. Pharm. klinik Res. 8 (2015) 320–326.
[20] J. Debata, S. Kumar, SK Jha, A. Khan, Sebuah pengembangan metode rp-hplc baru dan
validasi dapagliflozin dalam bentuk sediaan curah dan tablet, Int. J. Pengembang Obat. Res.
9 (2017) 48–51.
[21] V. Kommineni, K. Chowdary, S. Prasad, Pengembangan stabilitas baru yang
menunjukkan metode RP-HPLC untuk estimasi simultan saxagliptin dan
dapagliflozin dan validasinya sesuai pedoman ICH, Indo Am. J. Farmasi. Sci. 4 (2017) 2920–293
[22] A. Urooj, PS Sundar, R. Vasanthi, MA Raja, KR Dutt, K. Rao, H. Ramana,
Pengembangan dan validasi metode RP-HPLC untuk estimasi simultan dapagliflozin
dan metformin dalam jumlah besar dan campuran sintetis, World J. Pharmacy Pharm.
Sci. 6 (2017) 2139–2150.
[23] RI El-Bagary, EF Elkady, BM Ayoub, metode Spektrofotometri berdasarkan
reaksi kompleksasi transfer muatan untuk penentuan saxagliptin dalam jumlah besar dan
sediaan farmasi, Int. J. Bioma. Sci. 8 (2012) 204.
[24] R. Kalaichelvi, E. Jayachandran, Metode spektroskopi tervalidasi untuk estimasi
Saxagliptinin murni dan dari formulasi tablet, Int. J. Farmasi. Farmasi. Sci. 3 (2011) 179–
180.
[25] N. Narendra, J. Govinda, Estimasi simultan saxagliptin hidroklorida dan metformin
hidroklorida dalam bahan farmasi aktif oleh RP-HPLC, Asian J.
Farmasi. Res. Perawatan Kesehatan 4 (2012) 70–77.
[26] HM Lotfy, D. Mohamed, MS Elshahed, penghentian spektrofotometri univariat Novel dari
bentuk sediaan padat yang baru-baru ini dirilis yang terdiri dari dapagliflozin dan
saxagliptin melalui spektrum respons terfaktor: penilaian konten rata-rata dan
keseragaman unit dosis tablet, Spectrochimica Acta Bagian A : Mol. Biomol.
Spektrosk. 222 (2019) 2–12.
[27] O. Abdel-Aziz, MF Ayad, MM Tadros, Metode spektrofluorimetri dan spektrofotometri
tervalidasi yang kompatibel untuk penentuan vildagliptin dan saxagliptin dengan
eksperimen desain faktorial, Spectrochimica Acta Part A 140 (2015) 229–240.
[28] MS Moneeb, Spektrofotometri dan metode spektrofluorimetri untuk penghentian
saxagliptin dan vildagliptin dalam jumlah besar dan persiapan farmasi , Bull. Fakultas
Farmasi., Universitas Kairo 51 (2013) 139–150.
[29] N. Bhagavanji, Pengembangan dan validasi metode lc penunjuk stabilitas untuk estimasi
simultan metformin dan saxagliptin dalam bentuk sediaan gabungan, VSRD Int. J.Tek.
Non-Teknologi. Res. 3 (2012) 1–19.
[30] S. Caglar, A. Alp, Sebuah metode kromatografi cair kinerja tinggi divalidasi untuk penentuan
saxagliptin dan metformin dalam jumlah besar, studi menunjukkan stabilitas, J. Anal.
Bioanal. Teknologi. S.12 (2014) 2.
[31] RP Cumar, M. Vasudevan, A. Deecaraman, Metode RP-HPLC yang divalidasi untuk si
estimasi multan metformin dan saxagliptin dalam tablet, Rasayan J. Chem. 5 (2012) 137–
141.
[32] T. Deepan, MD Dhanaraju, Stabilitas menunjukkan metode HPLC untuk penentuan
simultan dapagliflozin dan saxagliptin dalam bentuk sediaan massal dan tablet, Curr.
Masalah Farmasi Med. Sci. 31 (2018) 39–43.
[33] R. Demers, H. Gu, LJ Christopher, H. Su, L. Cojocaru, DW Boulton, M. Kirby, B. Stouffer,
WG Humphreys, ME Arnold, Kromatografi cair dan metode spektrometri massa
tandem untuk penentuan kuantitatif saxagliptin dan metabolit 5-monohidroksi aktif
farmakologis utama dalam plasma manusia: validasi metode dan mengatasi pengikatan
spesifik dan non-spesifik pada konsentrasi rendah , J. Chromatogr. B 889 (2012) 77–86.
[34] Jw Gao, Ym Yuan, Ys Lu, Mc Yao, Pengembangan UPLC-MS/MS yang cepat
metode untuk kuantifikasi saxagliptin dalam plasma tikus dan aplikasi untuk studi
kokinetik farmasi, Biomed. kromatografi 26 (2012) 1482–1487.
[35] S. Inturi, R. Inturi, I. Tagaram, Penentuan LC baru yang divalidasi dari saxagliptin dalam
bentuk sediaan curah dan farmasi murni, Int. J. Farmasi. Res. Dev. 3 (2011) 45–52.
[36] MA Mohammad, EF Elkady, MA Fouad, Pengembangan dan validasi re
metode kromatografi cair kolom fase terbalik untuk penentuan simultan dua gliptin baru
dalam campuran binernya dengan Metformin, Eur. J. Kimia 3 (2012) 152–155.
[37] PP Prakash, R. Kalkotwar, V. Vikas, B. Vijay, P. Nilesh, Metode RPHPLC baru untuk
penentuan Metformin HCl dan Saxagliptin dalam bentuk sediaan tablet, Int. J.
Farmasi. Biol. Sci. 2 (2012) 161–167.
[38] A. Prasanna, K. Priyanka, Pengembangan metode dan validasi simultan
penentuan metformin dan saxagliptin dalam bentuk sediaan farmasi oleh RP HPLC, Int.
J. Farmasi. Kimia Biol. Sci. 5 (2015) 381–387.
[39] PA Shah, JV Shah, M. Sanyal, PS Shrivastav, LC-MS/MS analisis metformin, saxagliptin
dan 5-hidroksi saxagliptin dalam plasma manusia dan studi farmakokinetiknya dengan
formulasi dosis tetap pada subyek India yang sehat, Biomed .
kromatografi 31 (2017) e3809.
[40] P. Srinivasa Rao, D. Rama Chandran, K. Murali, S. Srinivasu, Stabilitas menunjukkan
Machine Translated by Google
HM Ahmad, dkk.
metode hplc fase terbalik isokratik dengan detektor pda untuk estimasi sax agliptin dalam
obat massal dan dalam formulasinya, Int. J. Ilmu Farmasi. 3 (2013) 333–342.
[41] AMA Al-Alamein, MKA El-Rahman, EM Abdel-Moety, EM Fawaz, Hijau
Pendekatan densitometri HPTLC untuk penentuan simultan dan pengarsipan pro pengotor
ebastine dan fenilefrin hidroklorida, Microchem. J. 147 (2019)
1097-1102.
[42] MA Basha, MKA El-Rahman, LI Bebawy, AA Mustafa, Stabilitas TLC yang divalidasi
menunjukkan metode untuk penentuan kuantitatif beberapa obat hewan,
mikrokimia. J. 146 (2019) 157-163.
[43] MI Gadallah, HRH Ali, HF Askal, GA Saleh, Inovatif HPTLC-densitometric
metode untuk pemantauan terapeutik meropenem dan metronidazol pada pasien akut
pasien pankreas, Microchem. J. 146 (2019) 940–947.
[44] MI Gadallah, HRH Ali, HF Askal, GA Saleh, Facile HPTLC-densitometric de penghentian
ertapenem dan parasetamol dalam farmasi dan plasma kelinci
dengan wawasan farmakokinetik, Microchem. J.150 (2019) 104093.
[45] AMI Mohamed, MA Omar, SM Derayea, MA Hammad, AA Mohamed,
Metode kromatografi lapis tipis yang inovatif dikombinasikan dengan deteksi fluoresensi
untuk penentuan febuxostat yang spesifik: aplikasi dalam cairan biologis,
Bakat 176 (2018) 318–328.
[46] MR Rezk, HH Monir, HM Marzouk, Penentuan baru antivirus baru
kombinasi; sofosbuvir dan velpatasvir dengan metode kroma tografi lapis tipis kinerja
tinggi ; aplikasi untuk sampel manusia nyata, Microchem. J. 146 (2019)
828–834.
[47] RE Saraya, M. Elhenawee, H. Saleh, Pengembangan sangat sensitif tinggi--
kinerja metode kromatografi lapis tipis untuk penyaringan dan simultan
penentuan sofosbuvir, daclatasvir, dan ledipasvir dalam bentuk murni dan
formulasi farmasi mereka yang berbeda, J. Sep. Sci. 41 (2018) 3553–3560.
[48] MN Abo-Zeid, SM El-Gizawy, NN Atia, SR El-Shaboury, Efisien HPTLC-dual
metode spektrodensitometrik panjang gelombang untuk penentuan fosbuvir dan
daclatasvir secara simultan: analisis biologi dan farmasi, J. Pharm. Bioma.
anal 156 (2018) 358–365.
[49] SM El-Gizawy, SR El-Shaboury, NN Atia, MN Abo-Zeid, Baru, sederhana dan
Jurnal Mikrokimia 154 (2020) 104560
metode HPTLC sensitif untuk penentuan simultan anti-hepatitis C jadi fosbuvir dan
ledipasvir dalam plasma kelinci, J. Chromatogr. B 1092 (2018) 432–439.
[50] AMI Mohamed, MA Omar, MA Hammad, AA Mohamed, Pengembangan dan
validasi metode TLC-densitometrik untuk penentuan simultan dua
campuran antihipertensi biner yang mengandung felodipine dalam kombinasi dosis tetap,
Bioma. kromatografi 30 (2016) 200–207.
[51] MH Abdel-Hay, MA Ragab, HM Ahmed, SM Mohyeldin, Deteksi array dioda
dan metode spektroskopi turunan untuk studi stabilitas oxprenolol dan siklo pentiazid dalam
cairan, J. Mol. liq. 231 (2017) 314–324.
[52] MM Mabrouk, SF Hammad, SF El-Malla, EA Elshenawy, metode fluoresensi HPLC misel hijau
untuk penentuan simultan metoprolol dan amlodipine
dalam bentuk sediaan gabungan mereka: aplikasi pada metoprolol dalam plasma manusia berduri,
mikrokimia. J. 147 (2019) 635–642.
[53] ES Elzanfaly, AS Saad, AEB Abd Elaleem, Spektrofotometri sederhana yang cerdas
metode untuk penentuan simultan campuran biner, J. Pharm. anal 2
(2012) 382–385.
[54] T. Murthy, J. Geethanjali, Pengembangan metode RP-HPLC yang divalidasi untuk estimasi
simultan metformin hidroklorida dan kalsium rosuvastatin di
formulasi massal dan internal, J. Chromatogr. September Teknologi 5 (2014) 1.
[55] SH Parmar, SV Luhar, SB Narkhede, Pengembangan dan validasi metode analisis troscopic
pertama turunan pertama dan kinerja tinggi kromatografi lapis tipis untuk estimasi simultan
dapagliflozin propanediol mono hydrate dan saxagliptin hydrochloride dalam campuran
sintetis, EJBPS 5 (2018 )
668–684.
[56] HMM Afnan E. Abdelrahman, Nourah Z. Alzoman, metode HPTLC untuk determinasi
metformin hidroklorida, Saxagliptin Hidroklorida, dan
Dapagliflozin dalam obat-obatan, Curr. anal Kimia 15 (2019).
[57] Pedoman IHT, Validasi prosedur analitis: teks dan metodologi Q2
(R1), Konferensi Internasional tentang Harmonisasi, Jenewa, Swiss, 2005, hlm.
11–12.
[58] Pedoman ICH, Pengujian stabilitas zat dan produk obat baru, Q1A (R2),
langkah saat ini, 4 (2003) 1–24.